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THE HUMORAL INMUNE RESPONSE ASOCIATED WITH FETAL AND NEONATAL

ALLOINMUNE THROMBOCITOPENIA

CONTENIDO TEÓRICO

Que es el FNAIT?
La trombocitopenia aloinmune fetal y neonatal (FNAIT), es una enfermedad que resulta
de la aloinmunización materna durante el embarazo contra antígenos plaquetarios
fetales HPA, heredados del padre y ausente en la madre. Estos aloanticuerpos IgG
maternos a continuación pueden atravesar la placenta y unirse a las plaquetas fetales
generando así un aclaramiento de las plaquetas dando como resultado trombocitopenia
fetal / neonatal. Esta condición puede llevar a un daño neurológico o una hemorragia
intracraneal, que en ocasiones puede ser fatal [1,3].
Uno de los antígenos responsables y más comunes de esta condición, es el HPA-1a y está
localizado en la subunidad ß3 de la integrina αIIß3. Hay varios polimorfismos debido a
cambios en un solo aminoácido, siendo estos HPA-1bb, el ya mencionado HPA-1a y el
HPA-1ab que causa la mayoría de casos de FNAIT [4]
Todavía no hay tratamiento ni prevención, pero para dar el salto hacia una posible
solución, el grupo de investigadores liderado por Tor B intenta centrarse en entender la
biología de la enfermedad con el fin de encontrar una estrategia para prevenir el FNAIT
por medio de la manipulación de la respuesta inmunitaria [4].

En base a esto, este grupo se centrará en la relación FNAIT con la respuesta inmunitaria
por parte de los linfocitos T. Con el fin de establecer dicha relación, van a abordar
diferentes puntos.

1-Se pueden aislar linfocitos TCD4+ anti HPA-1 a a partir de mujeres las cuales han
tenido bebes con FNAIT?

Para determinar si las células T específicas de HPA-1a están presentes en mujeres


aloinmunizadas HPA-1a, estimulan PBMC de una mujer HPA-1a-negativa que
recientemente ha dado a luz a un niño con trombocitopenia grave, con un péptido que
contiene el epítopo HPA-1a (modificado done en el residuo 33 de la integrina hay una
leucina, L33). Las células cultivadas se marcan a continuación con colorante CFSE y se
estimulan de nuevo en cultivos paralelos con el péptido L33 o Lol P1 y se analizan en
busca de células en proliferación. Esto lleva a una identificación de una población de
células que proliferaran extensamente en el cultivo estimulado con el péptido L33.
Y por medio de la técnica de ELISPOT, determinan que cuando estimulan las células con
HPA-1 a, ven que hay secreción de citocinas (IFN- γ), pero con el péptido control no hay
[4].
2-Están los linfocitos T específicos de HPA-1 a, restringidos por el alelo HLA-
DRB3*01:01

Lo siguiente que determinan es que hay una fuerte asociación entre FNAIT y
DRB3*01:01 en mujeres HPA-1 a aloinmunizadas. Esto sugiere la idea de si los linfociotos
específicos frente a HPA-1 a están restringidos por HLADRB3*.
Para determinar eso las células T clonales se estimulan con diferentes cantidades de
péptidos B-LCLs del HLA de clase II y se determina la secreción de IFN- γ. Esta secreción
de interferón gamma por los linfocitos T solo se observa en células STEINLIN
estimuladas con péptido L33 con la variante alélica HLA-DRB3 * 0101. Por el contrario
con los demás péptidos control no se dió esa respuesta. Con lo cual el alelo
HLADRB*01:01 es especifico en FNAIT [4]

3-Pueden los linfocitos T específicos de HPA-1 a “ver” la L33?

Ellos determinan que la unión HPA-1 a al alelo HLA-DRB3*01:01 es dependiente de la


alogenicidad de la L33. Para determinar como es posible que los linfocitos T reconozcan
y se unan a la L33, hacen cambios en un aminoácido en el péptido HPA-1 a, cambiando
la leucina 33 por isoleucina (I33) o valina (V33). De esta forma cuando activan a los
linfocitos T con estos péptidos modificados en un aminoácido y les añaden una droga
que inhibe la secreción de citocianas, observan que los linfocitos T CD4 cuando son
estimulados con péptidos HPA-1ª-L33 había producción de INF- γ. Y cuando cambiaban
la L33 por I33 o V33, seguía habiendo secreción, mientras que con otros cambios por
ortos aminoácidos, no había secreción.
Con esto se llego a la conclusión de que la leucina alogénica esta embebida en el péptido
y no es directamente reconocida por las células T. En vez de eso, la leucina aumenta la
unión del péptido HPA-1a a la molécula HLA-DRB3*01:01, haciendo el péptido
reconocible por las células T [4].

4-Conclusiones

 Las células T CD4+ HPA-1a especificas pueden ser aisladas a partir de mujeres
que han dado a luz niños con FNAIT.
 El reconocimiento antigénico por las células T está restringido por HLA-
DRB3*01:01, lo que representa una forma de aloreconocimiento indirecto.
 La leucina alogenica que define al péptido HPA-1a no es reconocida
directamente por la mayoría de los linfocitos específicos para HPA-1a, sino que
estas células T reconocen residuos no alogenicos anclados al MHC por la leucina
alogenica.
 Las respuestas de los linfocitos T HPA-1ª específicos son diversas

5-Cometario crítico

En primer lugar indicar que personalemnte no tenía constancia de la implicación tan


directa del sistema inmunitario en patologías fetales durante el embarazo, es más no
sabía que algo tan común como la trombocitopenia podría desarrollarse durante las
etapas fetales. Con lo cual ya partimos de la base de que con esta ponencia estamos
adquiriendo nuevas ideas y conocimientos, lo que fomenta aún más el interés de los
alumnos por el ambito de la inmunología.

En segundo lugar, pese a ser un campo nuevo para todos el ponente fue claro y directo
en la explicación de los diferentes apartados que abarca su trabajo.

Uno de los aspectos que me hubiese gustado saber o ampliar sobre el tema, es si el
sistema inmunitario innato puede ter alguna implicación en la patología de forma
indirecta y si se hay secreción de otras citocinas diferentes al INF- γ visto por medio de
la técnica de ELISPOST que identifique la presencia de linfocitos TCD8+.
Y partiendo de la base de que el reconocimiento de las células T está restringido por
HLA-DRB3*01:01 y que la leucina aumenta la unión del péptido HPA-1ª a la molécula del
MHC. ¿Un cambio conformacional en esa leucina disminuiría la unión o afectaría a la
restricción de las células T? Quizás sean preguntas, que por la razón que sea, no tengan
respuesta y debido a eso, desde mi modesta posición no me atreví a preguntarle al
ponente.

BIBLIOGRAFÍA

(1). Wienzek-Lischka S1,2, König IR et al, HLA-DRB3*01:01 is a predictor of immunization


against human platelet antigen-1a but not of the severity of fetal and neonatal
alloimmune thrombocytopenia; 2017 Mar;57(3):533-540. doi: 10.1111/trf.13950. Epub
2016 Dec 26.

(2). Kroll H, Yates J, Santoso S. Immunization against a lowfrequency human platelet


alloantigen in fetal alloimmune thrombocytopenia is not a single event: characterization
by the combined use of reference DNA and novel allele-specific cell lines expressing
recombinant antigens. Transfusion 2005;45:353-8.

(3). Ghevaert C, Campbell K, Walton J, et al. Management and outcome of 200 cases of
fetomaternal alloimmune thrombocytopenia. Transfusion 2007;47:901-10.

(4). Ahlen MT1, Husebekk A et al, T-cell responses associated with neonatal alloimmune
thrombocytopenia: isolation of HPA-1a-specific, HLA-DRB3*0101-restricted CD4+ T cells
;2009 Apr 16;113(16):3838-44. doi: 10.1182/blood-2008-09-178475. Epub 2009 Jan 9.
THE EFFICIENCY OF T CELLS RECOGNITION OF CANCER CELLS

Las nuevas estrategias que están surgiendo para combatir el cáncer son las vacunas
terapéuticas. Estas pueden consistir en células tumorales enteras o lisados tumorales,
pero la identificación de antígenos asociados a tumores (TAA) en la última década ha
hecho posible el uso de proteínas o péptidos específicos como vacunas contra el cáncer.
En este sentido los linfocitos T CD8+ tienen un papel íntegramente específico puesto
que dichas vacunas con péptidos derivados de tumores, pueden aumentar la intensidad
de respuesta de los linfocitos citotóxicos [1,2].

Los análogos de péptidos heterocíticos se crean por sustituciones en los residuos de


anclaje, lo que da como resultado una mayor asociación del péptido con el complejo
principal de histocompatibilidad (MHC) [4]. A su vez, son más inmunogénicos que sus
los péptidos nativos debido a una unión más estable en la superficie de las células
presentadoras de antígenos (CPA) [1]. La vacunación con péptidos heterocliticos genera
una mayor respuesta por parte de las células T, en comparación con los péptidos
normales. Sin embargo, la presencia a nivel tumoral de células T específicas de los
antígenos asociados a tumores, a menudo no se correlaciona con respuestas clínicas
favorables. Esto es ampliamente estudiado en enfermedades neoplásicas como el
melanoma.

Para analizar y comparar las respuestas de células T en pacientes con melanoma a nivel
de una sola célula, ellos han generado y examinado un gran número de clones de
linfocitos T citotóxicos (CTL) derivados de linfocitos con respuestas T antitumorales o
bien derivados de linfocitos T citotóxicos que han respondido después de la vacunación.
En cada clon se analizó la expresión de la cadena variable beta del receptor de células T,
RE, y la capacidad de lisar las células del melanoma.

El grupo de investigadores liderado por Tor, van a abordar este tema desde diferentes
puntos de vista, tratando de dar respuesta a diferentes preguntas.

1-Los CTL específicos de antígenos asociados a tumores son eficientes a la hora de


reconocer células cancerígenas? Para abordar esta parte del trabajo, aislaron linfocitos
T CD8+ específicos de antígenos tumorales de melanoma utilizando tetrámeros
péptidos-MHC y analizaron la eficacia de muerte de células tumorales. Determinaron
que las respuestas eran mayores por parte de aquellos linfocitos inducidos tras la
vacunación con los péptidos G209-2M-tet y M26-tet [1].

2-Las respuestas de las células T específicas de antígenos asociados a melanoma son


eficaces? Para ello incubaron PMBC de los pacientes con células de melanoma y
anticuerpos anti-CD107. Posteriormente incubaron con anticuerpos anti-CD8+ y anti-
tetrámero. Y analizaron el porcentaje de linfocitos T CD8+ por citometría de flujo.
Además los linfocitos T que han degranulado pueden detectarse con Ac anti-CD107. Con
esto determinaron que dos clones de linfocitos T tenían respuestas eficaces frente a dos
líneas tumorales de melanoma pero los clones restantes, su respuesta era baja [1].
3-Porque la mayoría de células T específicas de antígenos tienen fallos a la hora de
degranularse en respuesta a las células de melanoma? Una de las hypotesis que se
barajaron fue que las densidades más elevadas de complejos de péptido-MHC podrían
resultar en una activación de células T con una eficacia de reconocimiento demasiado
baja para reconocer y eliminar las células de melanoma [1].

4-Los linfocitos T generados y activados a través de las vacunas con péptidos


heterocliticos lisan las células de melanoma? Determinaron que los linfocitos específicos
de antígenos de melanoma activados por dichas vacunas, tenían diferentes potenicales
citotóxicos, indicando que es importante para la eficacia clínica tanto la cantidad como
la calidad de los linfocitos activados por vacunas [1].

5-Puede la eficacia de reconocimiento intermedia o baja de los CTL interferir con su


capacidad de eliminación de células tumorales? En este caso se demostró que los CTL
específicos de antígenos tumorales con una eficacia de reconocimiento baja pueden
inhibir la lisis tumoral de una manera antiígeno-específica [1].

De estos datos podemos sacar en claro que:


 Los clones derivados linfocitos T endógenos que responden al tumor eliminan
eficazmente las células tumorales.
 Muchos de los clones de linfocitos T inducidos por vacunas no lisan las células
cancerígenas.
 La inducción de CTL específicos de antígenos tumorales con una eficacia de
reconocimiento baja por medio de vacunas, reduce la calidad de respuesta
inmunitaria antitumoral.
 Las estrategias de vacunación deberían centrarse en expandir de forma
selectiva a CTL específicos de antígenos tumorales con una eficacia de
reconocimiento alta.

Preguntas:

Una de las preguntas que se realizaron es si los péptidos asociados a melanoma y que
son presentados por el HLA-A2, implicaría un factor de riesgo para los pacientes que
presentan ese alelo de MHC. Y la conclusión a la que se llego es que no lo presentaría.

También se indagó en si era posible analizar la respuesta linfocitaria antes y después de


la vacunación.

Comentario crítico:

Por lo que a mi respecta, es un trabajo muy interesante en el campo de la oncología.


También me resulto curioso a la par que novedoso el hecho de intentar usar vacunación
para el tratamiento del cáncer puesto que en las clases de las asignaturas que hemos
cursado y que han coincidido con la semana de este seminario, teníamos entendido que
elaborarlas es muy complicado ya que a día de hoy no se tiene conocimiento sobre
cuales son los mejores antígenos tumorales para elaborar estas vacunas y en caso de
conseguirlos, el otro problema que quedaría por resolver sería como se administrarían
a los pacientes.

BIBLIOGRAFÍA

(1). Stuge TB1, Holmes SP,et al. (2004). Diversity and recognition efficiency of T cell
responses to cancer. PLoS Med.

(2). Jonuleit H, Giesecke-Tuettenberg A, Tuting T, Thurner-Schuler B, Stuge TB, et al.


(2001) A comparison of two types of dendritic cell as adjuvants for the induction of
melanoma-specific T-cell responses in humans following intranodal injection. Int J
Cancer 93: 243–251.

(3). Lee P, Wang F, Kuniyoshi J, Rubio V, Stuge T, et al. (2001) Effects of interleukin-12
on the immune response to a multipeptide vaccine for resected metastatic melanoma.
J Clin Oncol 19: 3836–3847.

(4). Ruppert J, Sidney J, Celis E, Kubo RT, Grey HM, et al. (1993) Prominent role of
secondary anchor residues in peptide binding to HLA-A2.1 molecules. Cell 74: 929–937.