UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DE PERNAMBUCO

DEPARTAMENTO DE AGRONOMIA

CULTURA DE TECIDOS VEGETAIS

Dra. Jacqueline Pereira – PNPD

Dra. Jacqueline Pereira – PNPD
CULTURA DE TECIDOS VEGETAIS

Definição: conjunto de metodologias que permitem o crescimento

e a multiplicação de células, tecidos, órgãos ou partes de órgãos de
uma planta (explante) sobre um meio nutritivo em condições
assépticas.

Esta técnica baseia-se, principalmente:

• Totipotência
• Meio nutritivo
• Reguladores de crescimento
CULTURA DE TECIDOS VEGETAIS

Década de 1950 - primeiros trabalhos de cultura de tecidos

realizados no Brasil
Instituto Biológico de São Paulo
Universidade de São Paulo (USP)
Entre 1975 e 1980 - novos laboratórios foram criados
Universidade de Campinas (Unicamp)

Instituto Agronômico de Campinas (IAC)

Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuária (Embrapa)

CULTURA DE TECIDOS VEGETAIS

Atualmente - o País conta com vários laboratórios distribuídos

em universidades, institutos de pesquisa e em empresas privadas.
ETAPAS DA CULTURA DE TECIDOS
ETAPAS DA CULTURA DE TECIDOS VEGETAIS

Cultivo in vitro
ETAPAS
1) Seleção e obtenção do explante

Células
Gemas Raízes Folhas
isoladas

Embriões
Protoplastos Semente Antera
zigóticos

A escolha do explante dependerá:

• Objetivos desejados
• Disponibilidade e capacidade de resposta do material vegetal
ETAPAS DA CULTURA DE TECIDOS VEGETAIS

Cultivo in vitro
ETAPAS
1) Seleção e obtenção do explante
Os explantes são uma mistura de células em variados estados
fisiológicos, bioquímicos e de desenvolvimento

Explante
Expostas ao cultivo in vitro
Respostas variadas
Capacidade de responder ao estímulo in vitro - COMPETÊNCIA
ETAPAS DA CULTURA DE TECIDOS VEGETAIS

Cultivo in vitro
ETAPAS
1) Seleção e obtenção do explante
ETAPAS DA CULTURA DE TECIDOS VEGETAIS

Cultivo in vitro
ETAPAS
1) Desinfestação do explante

Esterilização do explante

Solução de hipoclorito de cálcio 2%

Solução de hipoclorito de sódio 0,5-1%

(5 – 20 minutos)

Lavados com água destilada autoclavada

A concentração e o tempo variam com o tipo e idade do tecido

ETAPAS DA CULTURA DE TECIDOS VEGETAIS

Cultivo in vitro
ETAPAS
1) Preparo do meio de cultivo

Sais minerais (macro e micronutrientes)

Vitaminas
Reguladores do crescimento

Cultivo e subcultivos
ETAPAS DA CULTURA DE TECIDOS VEGETAIS

Cultivo in vitro
ETAPAS
1) Condições de cultivo adequadas

Assepsia Recipiente

Luminosidade Temperatura
ETAPAS DA CULTURA DE TECIDOS VEGETAIS

Cultivo in vitro
ETAPAS
2) Regeneração
Embriogênese
Organogênese Micropropagação
somática
Células somáticas Tecidos
Órgãos ou para formação do meristemáticos
brotos embrião

Via direta ou indireta

ETAPAS DA CULTURA DE TECIDOS VEGETAIS

Cultivo in vitro
ETAPAS
2) Regeneração

Via direta Via indireta

Formação e proliferação
de calos

Calos: grupo ou massa de células,

com crescimento desordenado que
pode apresentar certo grau de
diferenciação
ETAPAS DA CULTURA DE TECIDOS VEGETAIS

Cultivo in vitro
ETAPAS
2) Regeneração
Organogênese
ETAPAS DA CULTURA DE TECIDOS VEGETAIS

Cultivo in vitro
ETAPAS
2) Regeneração

Embriogênese
somática
ETAPAS DA CULTURA DE TECIDOS VEGETAIS

Cultivo in vitro
ETAPAS
2) Regeneração

Organogênese Embriogênese
somática

É necessário um período para desdiferenciar e obter

competência para a via embriogênica para iniciar a cultura
celular
ETAPAS DA CULTURA DE TECIDOS VEGETAIS

Cultivo in vitro
ETAPAS
2. 1.) Aclimatação

Organogênese Embriogênese
somática

Vias direta e indireta – requer a fase de aclimatação após a

produção da plântula

Aclimatação – exposição das plântulas ao ambiente externo

• Umidade relativa mais baixa
• Variações nas condições de temperatura
e luminosidade
• Crescimento sustentável da plântula
ETAPAS DA CULTURA DE TECIDOS VEGETAIS

Cultivo in vitro
ETAPAS
2) Regeneração
Micropropagação

Explante: Tecido meristemático

Vantagens:
• Não tem a fase de calo
• Economia de tempo
• Elimina a variação somaclonal (variação genética - associada a
longos períodos de cultura de calos)
ETAPAS DA CULTURA DE TECIDOS VEGETAIS

Cultivo in vitro
ETAPAS
3) Transplante para condições de campo
APLICAÇÕES DA CULTURA DE TECIDOS VEGETAIS
APLICAÇÕES DA CULTURA DE TECIDOS VEGETAIS

• Produção em grande escala, pequeno espaço, durante o ano todo

• Propagação de espécies de difícil propagação por sementes
• Produção clonal de plantas, alta qualidade fitossanitária
• Conservação de germoplasma
• Recuperação de plantas livres de doenças através de cultura de
meristema
• Manipulação genética
• Estudos de desenvolvimento
APLICAÇÕES DA CULTURA DE TECIDOS VEGETAIS

Dentre todas as aplicações da cultura de tecidos de plantas, as de

maior impacto foram:
• Melhoramento genético de plantas
• Recuperação de genótipos livres de vírus e outros agentes
fitopatogênicos
MICROPROPAGAÇÃO COMERCIAL DE PLANTAS
APLICAÇÕES DA CULTURA DE TECIDOS VEGETAIS

Micropropagação comercial de plantas

O método baseia-se na produção de plantas:
• Uniformes e sadias
• Velocidade muito maior do que os métodos convencionais
• Capacidade da manutenção de quantidades consideráveis de
plantas/ m2
• Laboratórios que se dedicam à multiplicação in vitro, em
larga escala, de plantas de importância econômica são
denominados biofábricas
CULTURA DE TECIDOS VEGETAIS

CETENE - Centro de Tecnologias Estratégicas do Nordeste

(criado em 2005)

A Biofábrica Governador Miguel Arraes

Missão: desenvolver e produzir vegetais em larga escala com
interesse econômico e estratégico para a conservação da
biodiversidade da região NE e aumento da produtividade de
produtores rurais
CULTURA DE TECIDOS VEGETAIS

• A principal cultura vegetal: Cana-de-açúcar

• Disponibilidade para produção:
 10 variedades de cana-de-açúcar
 frutíferas (banana)
 oleaginosas
 florestais
• Capacidade de produção: ~ 1.000.000mudas/ano
BIOFÁBRICAS
FUSÃO DE PROTOPLASTOS
APLICAÇÕES DA CULTURA DE TECIDOS VEGETAIS

Isolamento e fusão de protoplastos

O que é protoplasto?
Célula vegetal individualizada,
desprovida das paredes celulares.
Ação de enzimas pectocelulolíticas-
digerem os componentes das
paredes celulares
APLICAÇÕES DA CULTURA DE TECIDOS VEGETAIS

Isolamento e fusão de protoplastos

Fusão de protoplastos:
• Choques de corrente
elétrica
• Eletrofusão, quer seja
mediado por um
agente químico, PEG
APLICAÇÕES DA CULTURA DE TECIDOS VEGETAIS

Protoplastos
Nessa condição, as células podem ser manipuladas de várias
formas, com aplicações em diversas áreas da pesquisa em
vegetais

Melhoramento de plantas

Seleção torna-se mais simples, pela facilidade de

impor uma pressão seletiva mais homogênea

Selecionar em meio de cultura, linhagens de

células tolerantes a herbicidas, patógenos ou
outros estresses
APLICAÇÕES DA CULTURA DE TECIDOS VEGETAIS

Fusão de protoplastos

Melhoramento de plantas

Fusão de protoplastos interespecíficos

Essa técnica supera as barreiras

pré e pós-zigóticas
APLICAÇÕES DA CULTURA DE TECIDOS VEGETAIS

Fusão de protoplastos

PRÉ-ZIGÓTICAS
Isolamento ecológico ou Habitat
Isolamento sazonal ou temporal
Isolamento sexual
Isolamento mecânico
Isolamento gamético
PÓS-ZIGÓTICAS
Inviabilidade do híbrido
Esterelidade do híbrido
Degeneração do híbrido

Pré-zigótico – antes da fecundação

Pós-zigótico – após a fecundação
RESGATE DE EMBRIÕES RAROS
APLICAÇÕES DA CULTURA DE TECIDOS VEGETAIS

Resgate de Embriões Raros

Problema para os melhoristas

Domesticação
Perda de genes que conferiam tolerância e resistência a estresses
bióticos e abióticos
Fonte de resistência?
Difícil dentro da espécie
Espécies selvagens ou silvestres
Espécies interespecífica
APLICAÇÕES DA CULTURA DE TECIDOS VEGETAIS

Resgate de Embriões Raros

• A técnica de resgate de embriões em meio de cultura permite

que estes se desenvolvam normalmente

• Possibilita a obtenção de híbridos interespecíficos,

intraespecíficos, intergenéricos

• Facilitando a busca do melhorista por genes de interesse

APLICAÇÕES DA CULTURA DE TECIDOS VEGETAIS

Resgate de Embriões Raros

Meio artificial utilizado substitui o endosperma
Função: nutrir o embrião, é necessário que todas as exigências
nutricionais sejam bem conhecidas.

Composição e concentração do meio: Depende do estádio de

desenvolvimento do embrião

Embriões muito jovens - suplementação do meio com

reguladores de crescimento, antioxidantes, vitaminas, além de
outras substâncias necessárias ao desenvolvimento
APLICAÇÕES DA CULTURA DE TECIDOS VEGETAIS

Resgate de Embriões Raros

APLICAÇÕES DA CULTURA DE TECIDOS VEGETAIS

Resgate de Embriões Raros

Cultivo de embriões Fertilização artificial

• O óvulo fecundado é, então, cultivado artificialmente dando

origem ao embrião

• De modo geral, o que se observa com mais frequência é o cultivo

do óvulo fecundado em associação ao ovário ou parte dele

• O tecido do ovário é responsável pela produção e fornecimento

em quantidade adequada de várias substâncias essenciais para o
desenvolvimento do embrião
PRODUÇÃO DE DUPLO-HAPLOIDES
APLICAÇÕES DA CULTURA DE TECIDOS VEGETAIS

Duplo-haploides

Programa de Melhoramento

Atingir a homozigose

Longo período – sete a nove gerações

Como acelerar esse processo?

APLICAÇÕES DA CULTURA DE TECIDOS VEGETAIS

Duplo-haploides

Como acelerar esse processo?

Produção de plantas haploides

seguidas da duplicação dos cromossomos

Processo denominado Haplodiploidização

APLICAÇÕES DA CULTURA DE TECIDOS VEGETAIS

Duplo-haploides

Haplodiploidização
Permite ganho de tempo fantástico para o melhoramento,
facilitando enormemente a obtenção de novas cultivares

• Células gametofíticas
• São estimuladas para formação de um embrião
• Indução da regeneração da planta
• Plantas regeneradas requerem duplicação cromossômica

Forma natural ou por indução com colchicina (anti-mitótico)

 MELHORAMENTO TRADICIONAL MELHORAMENTO POR
HAPLODIPLOIDIZAÇÃO
Ge Linhagem 1 x Linhagem 2 Linhagem 1 x Linhagem 2

Ga

Ge

metas AB Ab aB ab
1nótipos da F2 AABB AaBB aaBB
AABb AaBb aaBb
Aabb Aabb aabb

G
eração F1
Duplicação espontânea
ou induzida por colchicina

AABB AAbb aaBB aabb

Plantas duplo-haploides com
F1 F2 F3 F4 F5 F6 F7 F8 F9 100% de homozigose
Gerações
A B

Figura - Comparação entre processos de produção de linhagens homozigotas.

A - Autofecundações; B - Haplodiploidização de micrósporos.
APLICAÇÕES DA CULTURA DE TECIDOS VEGETAIS

Piramidização
de genes de
resistência
PRODUÇÃO DE SEMENTES SINTÉTICAS
 APLICAÇÕES DA CULTURA DE TECIDOS VEGETAIS

Produção de sementes sintéticas

Embriões zigóticos – fertilização dos gametas

Embriões somáticos - células somáticas
• Ausência da recombinação genética
proporcionada pela união dos gametas
• Ausência do endosperma.
 APLICAÇÕES DA CULTURA DE TECIDOS VEGETAIS

Produção de sementes sintéticas

Sementes sintéticas
• Embriogênese somática direta ou indireta
• No processo de fabricação de sementes
sintéticas, os embriões somáticos são
encapsulados em hidrogel
 APLICAÇÕES DA CULTURA DE TECIDOS VEGETAIS

Produção de sementes sintéticas

CONSERVAÇÃO E INTERCÂMBIO DE
GERMOPLASMA
APLICAÇÕES DA CULTURA DE TECIDOS VEGETAIS

Conservação e intercâmbio de germoplasma

As técnicas de cultura de tecidos de plantas in vitro podem
contribuir em todas as etapas do processo de conservação de
germoplasma
• Coleta • Avaliação
• Indexação para doenças • Armazenamento
• Quarentena • Distribuição
• Multiplicação
• Caracterização
TRANSGENIA
APLICAÇÕES DA CULTURA DE TECIDOS VEGETAIS
Transgenia
CONSIDERAÇÕES FINAIS

A cultura de tecidos é uma ferramenta que oferece soluções

originais para os programas de melhoramento vegetal, soluções
estas podm resultar na otimização do tempo e na qualidade das
cultivares a serem lançadas por esse programa
Jacqueline Wanessa de Lima Pereira
jacquelinewlp@gmail.com