Professional Documents
Culture Documents
Continuada a Distância
Curso de
Toxicologia Laboratorial
Aluno:
MÓDULO I
Atenção: O material deste módulo está disponível apenas como parâmetro de estudos para
este Programa de Educação Continuada. É proibida qualquer forma de comercialização do
mesmo. Os créditos do conteúdo aqui contido são dados aos seus respectivos autores
descritos na Bibliografia Consultada.
SUMÁRIO
2
Este material deve ser utilizado apenas como parâmetro de estudo deste Programa. Os créditos deste conteúdo são dados aos seus respectivos autores
MÓDULO I
1 – Introdução
1.3 – Tipos e efeitos de ação tóxica (ou órgão alvo, onde atuam);
3
Este material deve ser utilizado apenas como parâmetro de estudo deste Programa. Os créditos deste conteúdo são dados aos seus respectivos autores
1.10 – Glossário.
MÓDULO II
2. Circuitos;
2.1 – Amplificadores Operacionais;
2.2 – Sinais Analógicos e digitais dos instrumentos;
2.3 – Sinais e Ruídos;
2.4 – Métodos espectrométricos;
2.5 – Medidas espectroquímicas e os aspectos quantitativos;
2.6 – Características dos Instrumentos Ópticos;
2.7 – Espectrometria de Absorção Atômica e Fluorescência Atômica;
2.7.1 – Aplicações da espectroscopia de absorção atômica com fontes de plasma;
2.8 – Espectrometria de Massa Atômica;
2.8.1 – Métodos de ionização;
4
Este material deve ser utilizado apenas como parâmetro de estudo deste Programa. Os créditos deste conteúdo são dados aos seus respectivos autores
2.8.2 – Sistemas de detecção e analisadores de massas;
2.9 – Questões para estudo;
2.10 – Glossário;
MÓDULO III
5
Este material deve ser utilizado apenas como parâmetro de estudo deste Programa. Os créditos deste conteúdo são dados aos seus respectivos autores
3.4 - Espectrometria no Infravermelho;
3.4.1 – Equipamentos para medidas de absorção infravermelha;
3.4.2 – A espectrometria no infravermelho e suas aplicações;
3.5 - Espectroscopia de Ressonância Magnética Nuclear (RMN);
3.5.1 - Ressonância Magnética Nuclear de onda contínua;
3.5.2 - Ressonância Magnética Nuclear por Transformada de Fourier;
3.5.3 – Aplicações de Ressonância Magnética Nuclear;
3.6 - Espectroscopia de Massa Molecular;
3.6.1 – Métodos de ionização em espectrometria de massa molecular;
3.7 - Caracterização por Espectroscopia e Microscopia de superfícies;
3.8 - Questões para estudo;
3.9 – Glossário;
6
Este material deve ser utilizado apenas como parâmetro de estudo deste Programa. Os créditos deste conteúdo são dados aos seus respectivos autores
MÓDULO IV
7
Este material deve ser utilizado apenas como parâmetro de estudo deste Programa. Os créditos deste conteúdo são dados aos seus respectivos autores
Quadro 13 – Variáveis que afetam a eficiência de uma coluna cromatográfica;
Quadro 14 – Símbolos das relações e grandezas utilizadas na cromatografia;
Quadro 15 – Exemplos de fases estacionárias em cromatografia gás-líquido;
Quadro 16 – Exemplos de fase móvel em cromatografia;
MÓDULO I
8
Este material deve ser utilizado apenas como parâmetro de estudo deste Programa. Os créditos deste conteúdo são dados aos seus respectivos autores
Testes Toxicológicos
1 – Introdução
Um efeito adverso pode ser definido como uma alteração indesejável ou nociva
após exposição a substâncias tóxicas ou potencialmente tóxicas, que podem ser
exemplificadas como: variação no peso corpóreo, alteração anatomopatológicas, entre
outros. Também pode o organismo responder a variação externa mantendo a função
normal (homeostasia), permitindo que o organismo se adapte por meio de modificações
9
Este material deve ser utilizado apenas como parâmetro de estudo deste Programa. Os créditos deste conteúdo são dados aos seus respectivos autores
bioquímicas, mecanismos fisiológicos e outros em caso de exposição sem manifestações
toxicológicas. Porém, saber distinguir entre efeito adverso (efeito patológico) e adaptação
(alteração fisiológica) é muito difícil, então, sempre é realizada a análise de cada caso em
particular. A verificação da dose administrada ou da concentração em que um organismo
vivo é submetido é uma das formas de avaliação de exposição toxicológica.
• Muito Tóxica: substâncias com DL50 para ratos menores do que 25 mg/kg;
• Nociva: substâncias com DL50 para ratos entre 200 e 2000 mg/kg;
10
Este material deve ser utilizado apenas como parâmetro de estudo deste Programa. Os créditos deste conteúdo são dados aos seus respectivos autores
Classe Categoria de Toxicidade Provável DL oral/ humanos
11
Este material deve ser utilizado apenas como parâmetro de estudo deste Programa. Os créditos deste conteúdo são dados aos seus respectivos autores
Fatores relacionados com o organismo: espécie, fatores genéticos, linhagem;
fatores imunológicos, dieta; estado nutricional, estado hormonal, estado emocional,
estado patológico, idade, peso corpóreo, sexo.
Dose externa
Quantidade absorvida
Efeito
12
Este material deve ser utilizado apenas como parâmetro de estudo deste Programa. Os créditos deste conteúdo são dados aos seus respectivos autores
Origem Natural: Animal (vitamina A), Vegetal (glicosídeos cianogênicos),
Mineral (Pb, Cd, Ni).
1.3 - Tipos e efeitos de ação tóxica (ou órgão alvo, onde atuam):
13
Este material deve ser utilizado apenas como parâmetro de estudo deste Programa. Os créditos deste conteúdo são dados aos seus respectivos autores
substâncias químicas, pois podem ser uma via a mais de toxicidade. O conhecimento da
toxicidade das substâncias químicas se obtém por meio de experimentos em laboratório,
utilizando geralmente animais. Os métodos são empregados com todo rigor científico com
a finalidade de fornecer informações relativas aos efeitos tóxicos e principalmente para
avaliar riscos que podem ser extrapolados ao homem.
14
Este material deve ser utilizado apenas como parâmetro de estudo deste Programa. Os créditos deste conteúdo são dados aos seus respectivos autores
Estes testes devem ser realizados para cada nova substância a ser utilizada ou
produzida em larga escala, em estudos onde se procura determinar o agente tóxico, entre
outros. Porém, de acordo com o uso da substância, seu efeito tóxico produzido por
estruturas análogas à substância química, bem como do efeito tóxico produzido pela
substância em si, pode ser definido quais testes serão realizados. Os estudos podem
variar de um país para outro, mas inclui geralmente os tópicos a seguir:
• Informações preliminares;
• Toxicidade aguda;
• Mutagênese e carcinogênese;
• Reprodução e teratogênese;
• Toxicocinética;
• Sensibilização cutânea;
• Ecotoxicidade;
15
Este material deve ser utilizado apenas como parâmetro de estudo deste Programa. Os créditos deste conteúdo são dados aos seus respectivos autores
O objetivo das informações preliminares é conhecer a substância que será
submetida aos estudos de toxicidade. Já que a toxicidade está ligada a sua estrutura
química é necessário que a substância em estudo seja quimicamente caracterizada. Se
houver impurezas, as mesmas devem ser conhecidas quantitativamente e
qualitativamente, pois podem alterar a toxicidade da substância em estudo.
Principalmente, porque o efeito tóxico em muitos casos é ocasionado devido às
impurezas e não à substância em teste.
16
Este material deve ser utilizado apenas como parâmetro de estudo deste Programa. Os créditos deste conteúdo são dados aos seus respectivos autores
receberam baixas doses não se observando mortes, se fossem doses intermediárias
parte do grupo morreria e se em altas doses todos os animais do grupo morreriam. A
curva sigmoide apresentada na figura 3 se torna linear entre 16% e 84%, e então é
possível obter o ponto médio que é a DL50.
Figura 2 Figura 3
17
Este material deve ser utilizado apenas como parâmetro de estudo deste Programa. Os créditos deste conteúdo são dados aos seus respectivos autores
sensíveis e a determinação dos efeitos serem ou não reversíveis, passam a serem
conhecidos.
Estes testes são realizados para se obterem informações sobre a toxicidade das
substâncias químicas após exposições repetidas. A importância deste teste se dá porque,
às vezes, é o primeiro e o único teste com doses repetidas a ser realizado para
determinadas substâncias químicas. Outro fator importante é o exame dos efeitos após o
período de tratamento e se a determinação deste efeito é devido a um acúmulo da
18
Este material deve ser utilizado apenas como parâmetro de estudo deste Programa. Os créditos deste conteúdo são dados aos seus respectivos autores
substância ou não. Outro aspecto importante é o de estabelecer se os efeitos tóxicos são
reversíveis, determinando-se assim se o período de observação pós-tratamento é
necessário ou não.
19
Este material deve ser utilizado apenas como parâmetro de estudo deste Programa. Os créditos deste conteúdo são dados aos seus respectivos autores
O período de exposição em um estudo de toxicidade crônica é de 2 anos ou
quase toda a vida do animal (ex.: camundongo vive de 2 a 3 anos). Como no teste
subcrônico, este também não procura letalidade e utiliza 3 níveis de dose pela via de
administração de acordo com a via de uso prescrita.
• Verificar os efeitos tóxicos que não são relacionados aos estudos de toxicidade
subcrônica;
20
Este material deve ser utilizado apenas como parâmetro de estudo deste Programa. Os créditos deste conteúdo são dados aos seus respectivos autores
do tratamento.
Os exames clínicos devem ser realizados duas vezes ao dia, evitando-se assim
perdas por autofagia, após a morte dos animais. Dados como peso corpóreo, consumo de
ração e sinais clínicos precisam ser anotados rigorosamente todas as semanas durante
as 13 primeiras semanas do ensaio para se obter resultados conforme os verificados no
início do tratamento e os da progressão dos efeitos tóxicos.
21
Este material deve ser utilizado apenas como parâmetro de estudo deste Programa. Os créditos deste conteúdo são dados aos seus respectivos autores
Vários testes in vitro e in vivo foram desenvolvidos para avaliar-se a capacidade
mutagênica das substâncias químicas. Existe a necessidade de se quantificar o perigo de
indução ao material genético e por consequência a transmissão hereditária destas
mutações.
O teste desenvolvido por Ames em 1975 é um dos mais utilizados, pois neste
teste é possível avaliar-se mutações pontuais em cepas mutantes de SalmoneIa
typhimurium que precisam de uma enzima, a fosforibosil ATP sintetase, necessária para a
síntese de histidina. Como algumas substâncias químicas são mutagênicas somente após
a biotransformação. Este teste foi modificado introduzindo-se no meio de reação,
composto por uma suspensão de microssomo hepático de ratos.
Portanto, os testes de mutagênese fazem parte dos testes de triagem para prever
o potencial carcinogênico das substâncias; mas eles apenas avaliam as substâncias que
produzem câncer por mecanismos genotóxicos (interagem diretamente com o material
genético).
22
Este material deve ser utilizado apenas como parâmetro de estudo deste Programa. Os créditos deste conteúdo são dados aos seus respectivos autores
Deste modo, os testes de mutagênese não são suficientes para indicar o potencial
carcinogênico de uma substância. Pois, as evidências primárias que podem apontar o
potencial carcinogênico das substâncias químicas são de origem epidemiológica ou
experimental em roedores. Sendo que, esses efeitos precisam ser observados em pelo
menos, duas espécies de animais de laboratório, com uma duração máxima de 130
semanas em ratos, 120 semanas em camundongos e 130 semanas em hamsters. No
mínimo, 2 doses da substância são utilizadas e a maior dose é a dose máxima tolerada
(DMT), definida como sendo aquela que não causa uma perda de peso superior a 10% e
não induz mortalidade ou sinais clínicos de toxicidade no animal. Como parâmetro se
utiliza a menor dose correspondendo à metade da DMT.
• Poucos experimentos;
23
Este material deve ser utilizado apenas como parâmetro de estudo deste Programa. Os créditos deste conteúdo são dados aos seus respectivos autores
1.4.6 - Testes de Teratogenicidade
24
Este material deve ser utilizado apenas como parâmetro de estudo deste Programa. Os créditos deste conteúdo são dados aos seus respectivos autores
1.4.7 - Estudos de toxicocinética
25
Este material deve ser utilizado apenas como parâmetro de estudo deste Programa. Os créditos deste conteúdo são dados aos seus respectivos autores
1.4.8 - Efeitos locais sobre a pele e os olhos
Em 1944, Draize propôs o teste que é conhecido por seu nome e é o empregado
até hoje, para avaliação de irritação causada por substâncias química sobre a pele e os
olhos. Os dados avaliados para a pele são: eritema, escara, edema e corrosão. E no caso
dos olhos, observam-se alterações da conjuntiva, córnea, íris e cristalino. São três os
tipos de testes de irritação: irritação local ou aguda, resultante da resposta de uma
aplicação única ou exposição a um agente tóxico; irritação cumulativa (exposição repetida
à substância); e irritação induzida fotoquimicamente (uma irritação primária resultante de
luz induzindo modificações moleculares na pele exposta).
Se uma irritação persistir por mais de 14 dias após a exposição é tida como não
reversível. O fato que uma simples dose de uma substância química poder causar uma
lesão reversível ou permanente é avaliada no teste de irritação primária que tem como
objetivo avaliar o potencial de risco de uma dose da substância em estudo.
26
Este material deve ser utilizado apenas como parâmetro de estudo deste Programa. Os créditos deste conteúdo são dados aos seus respectivos autores
então ser a causa de um dano.
27
Este material deve ser utilizado apenas como parâmetro de estudo deste Programa. Os créditos deste conteúdo são dados aos seus respectivos autores
possibilitam seu reconhecimento por suas cores, suas solubilidades, ponto de fusão ou
ebulição em vários solventes, entre outros materiais. No caso de análises quantitativas, as
medidas titulométricas ou gavimétricas são utilizadas para determinar a quantidade do
analito. Estes métodos foram muito utilizados nos primeiros anos da química e são
aplicados até os dias de hoje.
28
Este material deve ser utilizado apenas como parâmetro de estudo deste Programa. Os créditos deste conteúdo são dados aos seus respectivos autores
• Imunoensaios ou ELISA:
Teste analítico que utiliza anticorpos. Características: reagem com uma grande
variedade de compostos natural-artificiais, biomoléculas, células e vírus; tem excelente
especificidade que permite detectar quantidades mínimas do analito; ligação não
covalente/covalente forte que resiste aos processos e geração de sinal; alta precisão e
exatidão; permite automatização; permite a execução de testes rápidos; pode ser aplicado
nas áreas de alimento, no ramo farmacêutico, forense, militar, medicina e veterinária. A
geração de sinais pode ocorrer conforme descrito abaixo:
29
Este material deve ser utilizado apenas como parâmetro de estudo deste Programa. Os créditos deste conteúdo são dados aos seus respectivos autores
Propriedades Características Métodos Instrumentais
• Espectrometria de Massas:
30
Este material deve ser utilizado apenas como parâmetro de estudo deste Programa. Os créditos deste conteúdo são dados aos seus respectivos autores
A espectrometria de massa é uma técnica analítica muito usada para identificar
compostos desconhecidos, quantificar materiais conhecidos e elucidar as propriedades
químicas e estruturais de moléculas e biomoléculas. A detecção de compostos por meio
desta ferramenta é viável para quantidades pequenas como as de 10-15g e também para
um composto de massa de 1000 Dalton. É um método utilizado para fornecer informação
tanto por químicos, como físicos, bioquímicos, toxicologistas e biologistas, entre outros.
Dentre os tipos de espectrometria de massa podemos destacar o de ionização por
electrospray que favorece novas possibilidades na análise de compostos com elevada
massa molecular, incluindo proteínas, nucleotídeos e polímeros sintéticos, sendo,
portanto uma técnica amplamente utilizada em estudos biológicos, bioquímicos,
farmacêuticos e médicos.
• Cromatografia:
31
Este material deve ser utilizado apenas como parâmetro de estudo deste Programa. Os créditos deste conteúdo são dados aos seus respectivos autores
tipo de cromatografia mais utilizada atualmente em laboratórios de pesquisas e de
análises por sua versatilidade, sensibilidade, resultados quantitativos, por analisar
espécies não-voláteis e termolábeis, e por sua automatização.
outros
21%
dipirona
30%
antidepressivo
benzodiazepínico
6%
26%
barbitúrico
17%
Para que uma informação possa ser interpretada, manipulada é necessário que a
conversão da informação contida nas características químicas ou físicas do analito passe
por um instrumento para sua análise. Portanto, este analito deverá receber um impulso na
forma de energia elétrica, eletromagnética, mecânica ou nuclear, e estes impulsos
auxiliam na obtenção de uma resposta do analito em estudo (alguns exemplos no quadro
32
Este material deve ser utilizado apenas como parâmetro de estudo deste Programa. Os créditos deste conteúdo são dados aos seus respectivos autores
3). Existem vários dispositivos que podem converter uma informação de uma forma à
outra, em geral os dados gerados são analisados em forma gráfica ou numérica.
33
Este material deve ser utilizado apenas como parâmetro de estudo deste Programa. Os créditos deste conteúdo são dados aos seus respectivos autores
Os dispositivos que fazem a conversão de informações não elétricas para
elétricas são denominados transdutor (exemplos: fotomultiplicadores, fotodetectores
eletrônicos, entre outros) e o sensor faz parte dos dispositivos utilizados para monitorar
substâncias químicas específicas de modo contínuo e reversível (exemplo: eletrodos íon-
seletivo, sensores de fibra ótica, entre outros).
A definição por um método analítico requer que alguns itens sejam pensados e
realizados antes, como: levantamento bibliográfico (Há algum método descrito na
literatura? Quais as propriedades físico-químicas do analito? Que conhecimento existe
sobre as substâncias relacionadas?); tempo necessário para realizar as análises;
quantidade de amostra disponível e necessária (sensibilidade do método); intervalos de
concentração do analito (amplitude do método); impurezas que a amostra poderá conter e
causar interferência nas análises (seletividade do método); propriedades física e química
da matriz da amostra e quantas amostras serão analisadas. A quantidade de amostras a
serem analisadas tem peso econômico no desenvolvimento do protocolo de estudo, pois
34
Este material deve ser utilizado apenas como parâmetro de estudo deste Programa. Os créditos deste conteúdo são dados aos seus respectivos autores
se a quantidade de amostras for grande o método requererá que cada amostra tenha um
tempo mínimo de análise. Portanto, tirando os trabalhos preliminares, e se forem poucas
amostras, a opção por um método mais simples, porém que requer mais tempo de análise
para cada amostra, e pouco ou nenhum trabalho preliminar, pode ser a melhor escolha.
Depois de verificar todas as variáveis que fazem parte de uma escolha acertada acerca
do método analítico, verificando as características e eficiência dos vários instrumentos
que estarão inseridos nos trabalhos desenvolvidos neste método, alguns pontos
importantes devem ser analisados tendo em vista uma abordagem adequada à eficiência
e aos resultados esperados do método analítico escolhido.
35
Este material deve ser utilizado apenas como parâmetro de estudo deste Programa. Os créditos deste conteúdo são dados aos seus respectivos autores
Tempo de extração.
Variação do pH da solução
Espectrofotometria
Temperatura
Temperatura
36
Este material deve ser utilizado apenas como parâmetro de estudo deste Programa. Os créditos deste conteúdo são dados aos seus respectivos autores
massas para detectar vários tipos de substâncias químicas orgânicas e inorgânicas. Por
exemplo, ao desenvolver uma metodologia analítica para identificar lesão em DNA
causada por substâncias mutagênicas, estes equipamentos mostrarão resultados
precisos acerca do objeto de estudo, de acordo com o protocolo de estudo desenvolvido
para a identificação, nesse caso, da lesão em DNA.
37
Este material deve ser utilizado apenas como parâmetro de estudo deste Programa. Os créditos deste conteúdo são dados aos seus respectivos autores
+ Salmonella typhimurium
+ +
Várias doses
triplicatas
48h
37ºC
revertentes
revertentes espontâneos
espontâneos +
induzidos
38
Este material deve ser utilizado apenas como parâmetro de estudo deste Programa. Os créditos deste conteúdo são dados aos seus respectivos autores
de dano oxidativo em DNA. Para se obter esta curva, quatro amostras de DNA foram
preparadas com concentrações diferentes e quatro amostras de branco (padrão) foram
injetadas no HPLC/detecção eletroquímica. Cada amostra tem um dado numérico
correspondente que é calculado por meio de uma análise estatística denominada como
teste t-student, que compara as amostras (DNA e padrão) para a determinação da
quantificação e determinação da fração molar de 8-oxodGuo presente em cada amostra,
gerando a curva de calibração, onde o R2 preferencialmente, deve ficar entre 0,99 e 1,00
para que a curva esteja dentro dos padrões considerados como excelentes.
concentração teórica
LD = DPa x 10
39
Este material deve ser utilizado apenas como parâmetro de estudo deste Programa. Os créditos deste conteúdo são dados aos seus respectivos autores
IC
Curva 8-oxo-dGuo
120000
100000
80000
área
60000
y = 98425x - 1084,4
40000
R2 = 0,9965
20000
0
0,25 0,50 1
pmol
DPR = DP x 100
40
Este material deve ser utilizado apenas como parâmetro de estudo deste Programa. Os créditos deste conteúdo são dados aos seus respectivos autores
CMD
1.10 - Glossário
41
Este material deve ser utilizado apenas como parâmetro de estudo deste Programa. Os créditos deste conteúdo são dados aos seus respectivos autores
Absorção - diz-se que um material foi absorvido somente quando tenha
alcançado entrada no fluxo sanguíneo e consequentemente poder ser carregado para
todas as partes do corpo. A absorção necessita que a substância passe por meio da pele,
membrana mucosa, ou por meio dos alvéolos pulmonares (sáculos de ar dos pulmões).
Amostra (branco) – amostra de uma matriz biológica na qual nenhum analito foi
adicionado, utilizada para avaliar a especificidade do método bioanalítico.
42
Este material deve ser utilizado apenas como parâmetro de estudo deste Programa. Os créditos deste conteúdo são dados aos seus respectivos autores
Especificidade – habilidade do método bioanalítico de medir e diferenciar o
analito de componentes que possam estar presentes na amostra, tais como metabólitos,
impurezas, compostos de degradação ou componentes da matriz.
43
Este material deve ser utilizado apenas como parâmetro de estudo deste Programa. Os créditos deste conteúdo são dados aos seus respectivos autores
Matriz biológica – material distinto de origem biológica, que pode ser amostrado
e processado de modo reprodutível.
44
Este material deve ser utilizado apenas como parâmetro de estudo deste Programa. Os créditos deste conteúdo são dados aos seus respectivos autores
Toxicidade Aguda - este termo será empregado no senso médico para significar
“de curta duração”. Quando aplicado para materiais que podem ser inalados ou
absorvidos por meio da pele, será referido como uma simples exposição de duração
medida em segundos, minutos ou horas. Quando aplicado a materiais que são ingeridos,
será referida comumente como uma pequena quantidade ou dose.
45
Este material deve ser utilizado apenas como parâmetro de estudo deste Programa. Os créditos deste conteúdo são dados aos seus respectivos autores