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Universidad Nacional Autónoma de México Fecha de entrega

06/09/2018
Facultad de Estudios Superiores Zaragoza
Actividad: Endocrinología del embarazo Asesor
Responsable:
Grupo: 1503 BLOQUE 1 EQUIPO 5 PRACTICA 5 Carolina Sauer
Ramirez
Lab: L-404 Modulo: Biología Celular y de
los tejidos II

Resumen

la determinación cualitativa de la hormona gonadotropina coriónica humana, es el


ensayo mundialmente conocido como prueba de embarazo, los resultados de
estas pruebas contribuyen significativamente a la toma de decisiones
diagnosticas. La gonadotropina coriónica es una hormona glicoproteica, con un
peso molecular de aproximadamente 37.000 daltons, producido por las células
trofoblásticas de la placenta durante la gestación. Se distinguen dos unidades de
la glicoproteína denominadas alfa y beta, siendo la unidad alfa idéntica a la de la
hormona luteinizante LH y la subunidad beta se diferencia de la LH por la
presencia de 30 aminoácidos en el carboxi terminal inexistentes en la LH. La hCG
es secretada de 6 a 8 días luego la concepción, aumentando rápidamente hasta
un pico de 50.000 a 200.000 mUI/ml en la 6º a 8º semana. Para esta
determinación cualitativa de HCG se requirió de una muestra de orina de un
paciente anónimo el cual se encontraba en el 1er trimestre de gestación con
diagnostico confirmado de embarazo. Se realizaron dos inmunoensayos, el primer
ensayo se realizó por medio de una tira reactiva comercial colocando una gota de
orina en el punto de aplicación y después de 10 minutos se observaron dos
bandas de color azul, indicando un test positivo para la presencia de
gonadotropina coriónica humana por arriba de la sensibilidad de la tira reactiva. El
segundo inmunoensayo se realizó por el método de aglutinación directa con
partículas de látex las cuales contenían anticuerpos específicos al antígeno
gonadotropina coriónica humana, se colocó una gota de orina del donador y una

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gota de orina de un donador masculino sano a manera de test negativo, en


distintas partes de la placa de observación, se colocó una gota del reactivo de
látex con anticuerpo y se dejó en reacción por 10 minutos, después este tiempo se
observó de manera considerable, la precipitación de las partículas de látex en la
placa de observación en la muestra de orina del paciente anónimo, en la placa de
observación del donador masculino se no observó aglutinación, con este resultado
se confirma la presencia de gonadotropina coriónica humana en la muestra del
donador anónimo, por arriba de los niveles de sensibilidad del método empleado.

Marco Teorico:

Las mediciones de hCG tienen muchas otras aplicaciones clínicas. Se utilizan para
examinar el suero materno prenatal en busca del síndrome de Down y en el
tratamiento de las complicaciones relacionadas con el embarazo, incluido el aborto
espontáneo, el embarazo ectópico, la enfermedad trofoblástica gestacional
benigna (mola hidatidiforme) y el embarazo molar 3, 4. La hCG también es un
importante marcador tumoral sérico, particularmente para cánceres testiculares y
otros cánceres de células germinales 1, 2, 3, 4. Además, la medición de hCG es
importante en la medicina deportiva. La hormona se encuentra en la lista de
sustancias prohibidas de la Agencia Mundial Antidopaje (AMA) (http://www.wada-
ama.org/Documents/World_Anti-Doping_Program/WADP-Prohibited-
list/2014/WADA-prohibited-list-2014-EN.pdf) porque puede ser abusado por atletas

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masculinos, ya sea para enmascarar el efecto de los esteroides anabólicos, o para


aumentar la producción de testosterona.

Las mediciones de hCG generalmente han sido útiles para satisfacer las
necesidades de médicos y pacientes en un amplio espectro de aplicaciones, tal
como se resume en la Tabla 1. Sin embargo, existe la necesidad de una medición,
descripción e informe más precisos de los resultados de hCG a fin de minimizar el
riesgo de error analítico o mala interpretación clínica que conduzca a un resultado
adverso para el paciente. Las causas continuas de confusión incluyen la falta de
claridad en la nomenclatura, particularmente el uso continuado del término
"βhCG". Esta terminología se utilizó originalmente para diferenciar los
radioinmunoensayos específicos de hCG (RIA) de hCG RIA precoz que
reaccionaban de forma cruzada con la hormona luteinizante (LH), pero se puede
interpretar erróneamente que significa que solo se está midiendo la subunidad de
hCGβ libre. Clínicamente, la falta de claridad sobre qué isoformas se deben medir
en determinadas condiciones clínicas también puede causar confusión.
Analíticamente, una falta de conocimiento de interferencias clínicamente
relevantes (por ejemplo, altas dosis de enganche en presencia de un marcado
exceso de antígeno o la presencia de anticuerpos heterófilos), y la falta de
conocimiento sobre la mejor manera de medir las isoformas más clínicamente
relevantes de la hCG, también puede ser problemático. Abordar estos problemas

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requiere la adopción universal de una nomenclatura inequívoca, orientación


basada en la evidencia sobre qué variantes de hCG se deben medir en diferentes
aplicaciones clínicas, y conocimiento de cómo seleccionar anticuerpos y optimizar
los métodos para que cumplan con estos requisitos. En esta revisión, que se
centra en la medición de hCG en el embarazo, pero también aborda su uso en
oncología, describimos cómo resultado de tres importantes talleres internacionales
Abordar estos problemas requiere la adopción universal de una nomenclatura
inequívoca, orientación basada en la evidencia sobre qué variantes de hCG se
deben medir en diferentes aplicaciones clínicas, y conocimiento de cómo
seleccionar anticuerpos y optimizar los métodos para que cumplan con estos
requisitos. En esta revisión, que se centra en la medición de hCG en el embarazo,
pero también aborda su uso en oncología, describimos cómo resultado de tres
importantes talleres internacionales Abordar estos problemas requiere la adopción
universal de una nomenclatura inequívoca, orientación basada en la evidencia
sobre qué variantes de hCG se deben medir en diferentes aplicaciones clínicas, y
conocimiento de cómo seleccionar anticuerpos y optimizar los métodos para que
cumplan con estos requisitos. En esta revisión, que se centra en la medición de
hCG en el embarazo, pero también aborda su uso en oncología, describimos
cómo resultado de tres importantes talleres internacionales 6, 7, 8, 9, 10 ayudará a
reducir el riesgo futuro de daño al paciente debido a resultados de hCG erróneos o
malinterpretados.

Estructura de hCG y variantes relacionadas

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Lo que se mide como 'hCG' es en realidad una mezcla compleja de variantes de


glicoproteínas heterogéneas estrechamente relacionadas. La hCG intacta
bioactiva en sí misma es un heterodímero que consiste en subunidades α y β no
unidas covalentemente (hCGα y hCGβ). La subunidad α, codificada por un solo
gen, es común a todas las hormonas glucoproteicas. Los genes hCGβ se han
desarrollado a partir de un gen ancestral de la subunidad β de LH humana (hLHβ)
a través de duplicaciones y mutaciones génicas. hCGβ confiere especificidad
molecular, diferenciando hCG de LH, hormona folículo estimulante (FSH) y
hormona estimulante de tiroides (TSH) 12, 13, 14. Genómica, bioquímica e
inmunológicamente, estas cuatro hormonas son miembros de una familia de
glicoproteínas que comparte la homología estructural con la superfamilia del factor
de crecimiento del nudo de cistina. Dos bucles de lámina β retorcidos (Ł1 + 3)
sobresalen de un lado del nudo de cistina central (ck) de cada subunidad y un
único bucle de segundo (Ł2) sobresale del lado opuesto (casilla 1, figura I, figura
II). hCGβ difiere de hLHβ ya que incorpora un péptido carboxilo terminal extendido
(hCGβCTP, residuos de aminoácidos 112 - 145) [12]. Las variantes metabólicas
incluyen hCG mellado (hCGn), hCGβ mellado (hCGβn), fragmento central de
hCGβ (hCGβcf) y variantes truncadas de hCGβCTP (-CTPhCG y -CTPhCGβ)

PRINCÍPIO DEL MÉTODO (tira reactiva)

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El hCG presente en la muestra se conecta al conjugado anticuerpo monoclonal–


colorante haciendo un complejo antígeno anticuerpo. Ese fluye por el área
absorbente

de la tira-prueba / placa-prueba yéndose conectar al anticuerpo anti-hCG en el


área de la reacción positiva (T), determinado el surgimiento de una banda colorida
rosa-claro si la concentración de hCG en la muestra es mayor que 25 mUI/ml.

En la ausencia de hCG no habrá la aparición de la banda colorida en el área T. La


mezcla de la reacción continua a fluir alcanzando el área control (C). El conjugado
no conectado al antígeno se une a los reactivos de esta área produciendo una
banda colorida rosa-claro, mostrando que los reactivos están funcionando
correctamente.

Determinación cualitativa de la hormona gonadotropina coriónica humana (hCG)

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PRINCIPIO DEL MÉTODO (aglutinación partículas de látex)

La prueba de hCG-Látex es una técnica de aglutinación en porta para la detección


directa cualitativa de la hCG en orina. Las partículas de látex recubiertas con
anticuerpo monoclonal anti-hCG (Nota 1) son aglutinadas por moléculas de hCG
presentes en la muestra del paciente.

SIGNIFICADO CLÍNICO

La hCG es una hormona secretada por la placenta de la mujer embarazada que


aparece relativamente pronto en sangre y orina después de la implantación del
embrión fecundado. Puede ser detectada en orina a partir del tercer día de la
pérdida del periodo menstrual y su concentración sigue aumentando hasta
alcanzar niveles muy altos después de las 10 semanas de gestación.
PROCEDIMIENTO

1. Atemperar los reactivos y las muestras a temperatura ambiente. La sensibilidad


del ensayo disminuye a temperaturas bajas.

2. Depositar 100 µL de la muestra a ensayar y una gota de cada uno de los


controles Positivo y Negativo, sobre círculos distintos de un porta.

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3. Mezclar vigorosamente o con el agitador vortex el reactivo de hCGlátex antes


de usar. Depositar una gota (50 µL) junto a cada una de las gotas anteriores.

4. Mezclar las gotas con un palillo, procurando extender la mezcla por toda la
superficie interior del círculo. Emplear palillos distintos para cada muestra.

5. Situar el porta sobre un agitador rotatorio a 80–100 r.p.m. durante 2 minutos.

LECTURA E INTERPRETACIÓN

Examinar macroscópicamente la presencia o ausencia de aglutinación


inmediatamente después de retirar el porta del agitador. La presencia de
aglutinación indica una concentración de hCG igual o superior a 200 UI/L.

LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO

- Las hormonas pituitarias como la FSH y la LH presentan reacción cruzada con la


hCG cuando los niveles de concentración de éstas son muy elevados.

- Un resultado negativo no excluye la existencia de un embarazo. Se recomienda


repetir la prueba unos días más tarde.

- La orina de pacientes con enfermedades trofoblásticas tales como carcinoma o


quiste hidatiforme podrían causar resultados falsamente positivos. [3]

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Objetivos.

1. Determinar a importancia de los cambios hormonales en el embarazo.

2. Conocer la técnica de aglutinación para pruebas de embarazo.

3. A partir de la técnica de aglutinación comprobar la presencia de hCG

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Material, reactivos y equipo:

-Estereoscopio
-Prueba de embarazo
-Kit de reactivos para determinación de hCG
-Muestra de orina (primer trimestre de embarazo)
-
Resultados:

Fig 1. Prueba: Inhibición de la aglutinación de partículas de látex.

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Fig 2. Prueba: Inmunoensayo cromatográfico.

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Análisis de Resultados

En la práctica se realizaron dos pruebas sencillas para la determinación de hCG


en una prueba de embarazo , la primera la inhibición de la aglutinación de
partículas de látex y en segunda el ensayo inmunocromatográfico. La presencia
de gonadotropina en el plasma materno y su excreción en la orina son la base de
los estudios del embarazo debido a que esta hormona alcanza su nivel máximo
en el primer trimestre del embarazo.

En la inhibición de aglutinación se mezcló la orina con los anticuerpos frente a la


hCG y para la prueba positiva no se presentó aglutinación al añadir las partículas
de látex recubiertas de hCG dado que la hormona reaccionó con el anticuerpo ,
mientras que en la prueba negativa el anticuerpo reacciona con las particulas de
latex produciendo la aglutinación.

En el caso del inmunoensayo cromatográfico se llevó a cabo mediante una tira


reactiva ( la cual consta de 3 anticuerpos Ac1, Ac2 y Ac3 ) que al sumergir en la
orina , esta migra por acción capilar para reaccionar con Ac1 formando un
complejo el cual fue arrastrado al Ac2 formando una nueva unión apareciendo una
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línea de color, y el anticuerpo Ac1 que no se unió a la hCG migró hasta Ac3
formando la segunda línea. Es importante señalar que la hCG no es la única
hormona presente en el embarazo existen otras que tienen igual importancia.

Se pueden encontrar otros tipos de hormonas durante el embarazo, secretadas


por la placenta se encuentran la lactógeno placentario (hLP) o
somatomamotropina coriónica humana (hCS) concentración alta a partir de la 5ª
semana de gestación hasta final del embarazo, su función principal alterar
disponibilidad de energía como, lipólisis materna y metabolismo ácidos grasos
para ahorrar glucosa, resistencia a la insulina en la madre para ahorrar glucosa
para el feto y estimulación el crecimiento y desarrollo de las mamas. También se
encuentran la progesterona teniendo inhibición en músculo liso del útero para
impedir expulsión prematura y estrógenos teniendo funciones en el metabolismo y
crecimiento de la glándula mamaria, crecimiento del útero y alto flujo sanguíneo.

Conclusión

Las pruebas realizadas son importantes, rápidas y sencillas, ya que se tiene


certeza de un resultado positivo o negativo de si se está embarazada, estas
pruebas se realizan de los tres a los seis meses del embarazo ya que es donde se
puede encontrar la hormona hCG, la cual es la que está presente en el embarazo.
Se realiza entre este tiempo ya que a los tres meses llega a su máximo nivel y a
los seis meses que su concentración es baja.

Se realizaron dos métodos para la determinación cualitativa gonadotropina


coriónica, inhibición de la aglutinación y el inmunoensayo cromatográfico. En la
primer prueba se observó la diferencia física de las orinas de una mujer
embarazada de 6 meses y una mujer no embarazada, al agregar una gota de
solución de anticuerpos y partículas de látex que en el caso de No embarazo al no

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tener hCG en la orina, el anticuerpo reacciona con las partículas de látex cubiertas
con hCG la cual producirá una aglutinación y en el caso Embarazo es cuando
podemos encontrar en la orina hCG, pues esta reaccionara con el anticuerpo y no
se producirá aglutinación al añadir las partículas de látex recubiertas con hCG.

En el segundo proceso es mediante una tira reactiva para el diagnóstico precoz


del embarazo, se utilizan dos líneas una de prueba que esta combinación del
anticuerpo monoclonal del hCG para su detección y de control que se compone
por anticuerpos policlonales y partículas coloidales. Al tener las dos marcadas es

Conclusion:

Referencias.

1.Fuentes Arderiu 51 / 261 X. Codex Del Laboratorio Clínico: Indicaciones e


Interpretación De Los Exámenes De Laboratorio. Madrid: Elsevier; 2003.

2.González de Buitrago J. Tecnología y métodos del laboratorio clínico.


Barcelona: Salvat; 1992.

3. Silverthorn, DE. Fisiología humana. Un Médica Panamericana; 2008.

4. Costanzo LS. Fisiología. Barcelona, España: Wolters Kluwer/Lippincott Williams


& Wilkins; 2007.

5. Cunningham FG, Williams Obstetricia. 21ª Edición. España: Editorial Médica


panamericana, 202.

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