UNIVERSIDAD AUTONOMA METROPOLITANA

IZTAPALAPA
DIVISION DE CIENCIAS BIOLOGICAS

Y DE LA SALUD

PRODUCCIONDEINOCULOS PARA REACTORES ANAEROBIOS

TESIS
PARA OBTENER EL GRADO DE

MAESTRIA EN BIOTECNOLOGIA
P R E S E N T A :

MARIA DEL CARMEN FAJARDO ORTIZ

TUTOR MONROY H. M. en C. OSCAR CO-TUTOR: DR. JEAN PIERRE GUYOT JURADO GLORIA MORENO R. M. en C. M. en C. FLORINARAMIREZ V. M. en C. RAFAEL CAMPOS M.

MEXICO, D. F.

MAYO

DE

1997

DEDICATORIA

Dedico esta tesisa: Mi mamá

a Enrique

a mis hijas, Alicia y Daniela.

Y

a todos mis hermanos

AGRADECIMIENTOS

Agradezco al Dr. Jean Pierre Guyot y al M. en C. Oscar Monroy H por permitirme realizar esta tesis bajo su dirección y asesoria. AIcomiteevaluador: la M. en C.FlorinaRamírez, M. enC.Gloria Moreno y al M. en C. Rafael Campos, por el tiempo que dedicaron en revisar esta tesis. De igualmanera a Florina,MónicaMéraz,Margarita,Bety, Zenia, Jacobo, Paco, Oscar por apoyo incondicional. su Acela,

DE .ESTA TESIS LLEVO SE A CABO EL EN LABORATRIO MICROBIOLOGIA AMBIENTAL DEL DEPARTAMENTO DE BIOTECNOLOGIA DE LA UNIVERSIDAD AUTONOMA METROPOLITANA -1ZTAPALAPA.

........ 3..... . .. ........ .. ......... 1... ... .... .. 7 7 8 9 12 12 4....... ...... ..... ..... ... ........FORMACION DE AGREGADOS REACTORES UASB EN . .. ... .. . ... ......... . ........ .... ... .. .. . .. ..................................... ... . .. ......... .......... .. ..... ..... .. . .. ............ ACETOGENESIS........ ..... . . . . 6 ..... ........... . ........ ..JUSTIFICACION.... COMPOSICION INORGANICA BACTERIAS SULFATOREDUCTORAS. . ... .. ...... . .... . .... . ..... . . ........ . ...... . . COMPETENCIA APOR ELACETATO 3..... . ...... ........ ... 5..... .... ..... ..... .. ... ..... .. .......... .............. ....... . ......... ....... ........ . . ... ............ .. . ... .. ... .... ........ . ... ............ . ..... .......... ... ... ... . ............... .... .. ....... METANOGENESIS. ...... ................. ............ ........ FlSlCOQUlMlCOS MlCROBlLOGlCOS .... . . . .. .... . .. ...... ..... ........ .......INDICE INTRODUCCION...... . ... ..... . . ....... ..... ..... 1 1. . .. . . MICROBIOLOGIA DELA DIGESTION ANAEROBIA ... ... .. . ............... ...... ..... .. .. . ........ ... .. .. REVISION BIBILIOGRAFICA 3 3....... ..... . ..... ..... ..... ....... ... ..................... . .. ESTUDIO DE LA ALIMENTACION DE LOS LODOS ACTIVADOS CON ACETATO SOBRE SU TRANSFORMACIONN LODOS EN INOCULO.. .. .......... ..... .... .. ..... .. ... ....... .....3.. ... .. ....... .. .. ...... . .... ..........0BJETIVOS .. ..... ....... ........ .... i 2. ......... . .. ....1.............. . 4 4 4 5 HABITAT.... .. . .... . .......... ..... ......... .. . .. 13 5 . ..... ... ..... ... 3.. . ...... .. ..... ...... . ......... .. .. ........ .... .. BlOQUlMlCA DE LA DIGESTION ANAEROBIA . ... ... ...... . ...... . .. ..... .......... .2.. . ......... .. ..... ... ....... .. .. .................. ... ..... ... . ....... . ... ... . ....... ..... . .... . ....... ... .. ....... ... .... ........ ...... ...... .. 4 MATERIALES Y METODOS.. 2 . .... .. ... ........ .... . ..... 3 HlDROLlSlS Y FERMENTACION............ . ......... . . ... .. . .. ... . . . .. .. ... . ..... . ....... . . ................1 ESTUDIO DE LA TEMPERATURA SOBRE LA TRANSFORMACION .... ...... . ..... 24 . COMPETENCIA POR EL HIDROGENO ....2..... .. . .. ... . 4.. .... ............ ...... . ...... DE LODOS ACTIVADOS EN INOCULOS ANAEROBIOS 17 5. ..... ..... . .......... . ... ......... ....... . . ........... .2..... . ... ........ .. .... . . ....... ....... ..... . ... ........ . .... ... ....... . .... ....... .. .. 13 13 16 . ........... . ..... .. METODOS...... . . .... ... ... .. . RESULTADOS...... ..... .... .... DISEÑO EXPERIMENTAL 6 7 MORFOLOGIA...... . . . .. ...... ....... ...... . . . ... ..... . . ..... ...

...... 55 62 7 ... PRODUCCION DE INOCULOS ANAEROBIOS EN ................... ..... ......... ... .. 40 6 .. ... . ... ........... .... .. .... .......4 ARRANQUE DE UN REACTOR UASB ALIMENTADO CON .. .. ......... .... . . . . ... . . .. . ............. . . ...... .. ... .... . . . ..... .. ... . .. ...... CONCLUSIONES GENERALES .. . .......... .... ... ..... .. .. ........ VINAZAS DE CAÑA... .... .... .. .. .. .. BIBLIOGRAFIA...... . .... ..... ... . ... ..3. 5 8 ANEXO .. ............... .... . ... . ... .. REACTORES UASB AGITADOS 29 5.... . .... .. . ..... ... . .... ..... .... .......5...... ..

Guyot (1989. del 1 .Duranteestafaselabiomasasufrecambiospara adaptarse al agua residual.1986.Ni. Carvalho que se puedereducir el tiempodearranquesisecuentacon mismotipodeaguaresidualatratar.1993) sugiere proporcionar acondicionamiento un un lodoadaptado al en lacomposición del aguapueden ocasionar la desintegración del gránulo con una subsecuente pérdida de biomasaen el El arranque de estos reactores anaerobios esta influenciado por diversos factores como son: la composición química comoson del agua residual. etc). JUSTlFlCAClON El arranque de reactores biológicos es un punto importante para el buen funcionamiento de los digestores. a/. la temperatura. se sugiere utilizar un inóculo con buenas características de sedimentación y actividad metanogénica. Co. como el tiempo de retención hidráulica el diseño del reactor y juegan también un papel muy importanteen el arranque y estabilización proceso. P. Debido a la tasa tan lenta de generación de la biomasa en los procesos anaerobios. IVL. produciéndose un periodo de inestabilidad. 1994. así como de factores ambientales el pH.Fe)entreotros.Cambios reactor et.estiércoldecerdo. 1991) coinciden en En casodecontarcon un lodoconbaja actividad metanogénica. Diversos autores (Noyola. Generalmente este inóculo proviene de otro reactor anaerobio. contenido de SSV. Adebowale 1990. estiércoldevaca. previo al inóculo conel fin de activarlo.sedimentosdelagunasyIodosdelagunas anaerobias. calidad la del inóculo (actividad Los especifica. (1987) proponen a los Iodos activados como una buena fuente para obtener inóculo para los reactores anaerobios.1994). Wu et al.Noyola. Otras fuentes de inóculo pueden ser Iodos de fosa séptica. los nutrientes(N. granulación. Pero en lugares que no cuentanconestetipodeprocesosesnecesarioencontrarunafuentedeinóculo alternativo que tenga las características necesarias. parámetros de operación.INTRODUCCION 1.(Field. ya que cuentan con bacterias metanogénicas y son fáciles de obtener.

CARACTERIZAR CAMBIOS LOS MICROBIOLOGICOS Y FlSlCOQUlMlCOS QUE OCURREN EN LA ADAPTACION DE LODOS ACTIVADOS A LODOS ANAEROBIOS. CARACTERIZAR LOS CAMBIOS MICROBIOLOGICOS Y FlSlCOQUlMlCOS DURANTE EL ARRANQUE DE UN REACTOR 2 .2 OBJETIVOS . OBTENCION DE UN INOCULO ANAEROBIO CON BUENAS CARACTERISTICAS DE SEDIMENTABILIDAD Y ACTIVIDADESPECIFICAAPARTIRDEUNLODOCON BAJAS ACTIVIDADES METANOGENICAS. COMPARAR EL EFECTO DE LA ALIMENTACION EN LA PRODUCCION DE IN6CULOS ANAEROBIOS A PARTIR DE LODOS ACTIVADOS.

REVISION BlBLlOGRAFlCA 3.1 Esquema de la digestion anaerobia (García.3.I).1 BlOQUlMlCA DELA DIGESTION ANEROBIA La tranformación de la materia orgánica en condiciones anaerobias se lleva a cabo por un sistema microbiológico mixto. e involucra tres etapas: 1) hidrólisis y fermentación.. 2) acetogénesis y 3) metanogénesis (Figura 3 .l991) 3 . Bacterias hidrolaicas w HlDROLlSlS Y 1 Mon6rneros ACIDOGENESIS . 1 Bacterias fermentativas BHA 1 ~ COZ +HZ0 t " _ ~ . Tal proceso recibe el nombre de digestión anaerobia. ~ ~ NO% i I BMA s04z- " " Baderias n#rato-reductoras -+ NOZNZO+NZ NH4+ - Bacterias Sulfatcmductoras BSR Baderias fermentativas -* I ~ BSR r--- ~-~ " SO4ZBSR Bacterias metanogenicas acBtodaslicas BMA METANOGENESIS FIGURA 3.

proteínas y lípidos) por medio de enzimas extracelulares a polimeros solubles como azúcares. butírico en en este procesoson anaerobias estrictas hidrógeno y COS. Bacillus. Entre las estudiadas se encuentran: Clostridium formicoaceticum.acetato. las especies más Methanobrevibacter arboriphiljcus.. Methanosarcina maze¡. de a partir dióxido de de carbono e La metano1 y metilaminas bacterias por metanogénicas. Las bacterias metanogénicas hidrogenotróficas encargan de consumir el 4 . Acetobacterium wodii. ACETOGENESIS Durante esta etapa el etanol y los A G V son degradados hasta acetato e hidrógeno por un grupo de bacterias acetogénicas productoras obligadas (obligate hydrogen producing bacterias metonogénicas que acetogens). produccción de metano a partir de acetato se lleva a cabo por bacterias metanogénicas acetoclásticas (BMA. Pelobacter y Acetobacterium. las especiesmás frecuentes son: Methanosarcina tbermofila. son: y aminoácidos y grasas. Así como la conversión de metanogénicas hidrogenofílicas COZ e H2 a metanoporbacterias representativas son: (BMH).HlDROLlSlS Y FERMENTACION Las bacterias hidrolizan inicialmente los polímeros (carbohidratos. Acetobacterium wieringae. Methanosaeta soehngenii y Methanosaeta concilii. Enterobacter. propiónico. Clostridium aceticum. las cuales existen en utilizan hidrógeno de hidrógeno OHPA sintrofía con las especies más (BMH). Las principales bacterias involucradas o facultativas y pertenecen a una variedad de géneros como son: Clostridium.Estos productos son utilizadosporbacteriasfermentadoras transformados en acidos grasos volátiles (AGV): acético. Bacteroides. Methanospirillum hungatei y Methanobacterium se formicicurn. METANOGENESIS La metanogénesis es la producción metano de hidrógeno. Methanosarcina barker.así como en alcohol y ácidos dicarboxílicos.

1986). a/. Presentan coenzimas y la F-430.F-420 la propiedades características: coenzima la Lasbacteriasmetanogénicas Familias (Cuadro3. en lugar grasos como glicerol y ácidos específicas tales como la CoM.1) de ésteres de el resto de las eubacterias. de se clasificandentrode amilias Cuadro 3. con base en el hidrógeno. 3. Su pared celularnocontienemureína y su membrana citoplasmáticaestá constituida fundamentalmente de hidrocarburos isoprenoides. las bacterias metanogénicas tienen una posiciónfilogenéticaespecialpertenecenalreinodelasArcheobacteriae(Woese.2 MICROBIOLOGIA DE LAS BACTERIAS METANOGENICAS de los ácidos grasos en acético e hidrógeno. 1977). Esta relación de sintrofía . las cuales les confieren F-420 le proporciona fluorescencia las a 3 Ordenesqueincluyena 7 bacterias a una longitud onda de 420 nm (Gorris et.1 CLASlFlCAClON DE BACTERIAS METANOGENICAS (Garcia 1990) Ordenes Methanobacteriales Methanobacteriaceae Methanococcales Methanomicrobiales Methanothetmaceae Methanococcaceae Methanomicrobiaceae Methanocorpusculaceae Methanoplanaceae Methanosarcinaceae 5 .H2 producido por las OHPA. se En base a estudios bioquímicos y genéricos. manteniendo la presión parcial de dicho gas a niveles bajos y así proporcionar las condiciones necesarias para la conversión conoce comotransferencia de hidrógeno entre especies.

en los cuales constituyen aproximadamente el pH al cual pueden desarrollarse se encuentra entre temperatura y salinidadcomolasfuentestermales (Setter et a/. 1983) mglKg de ELEMENTO N seco peso P S Ca K Mg Fe Ni co Mo Zn Mtl 65000 15000 1O000 4000 1O000 3000 1800 1O0 75 60 60 20 10 cu 6 .2) 10% de la microflora total. fosfóro y azufre en concentracionesnormales.1987.8 y pueden ser mesófilos (3040°C) o termófilos (4565°C). COMPOSICION INORGANICA DE BACTERIAS METANOGENICAS Las bacterias metanogénicas contienenlos compuestos esenciales nitrógeno. fosas sépticasasí como en los digestores. Garcia 1990). lagos.2 COMPOSICION ELEMENTAL DE LAS BACTERIAS METANOGENICAS (Scherrer. estan presentes en concentraciones más altas que en otros microorganismos comolas eubacterias.mientrasquealgunosmicronutrientescomoel níquel. Joneset a / . hierro y cobalto. (Cuadro 3.1981. por ejemplo en sedimentos de pantanos.5 y 7. También son parte de la flora intestinal de rumiantes e insectos como las termitas.HABITAT Las bacterias metanogénicas se encuentran en ambientes naturales carentes de oxígeno. El 6. Pueden encontrarse en ambientes extremos de alta y los cañonestermalesmarinos CUADRO 3.

7 .5 KJ/mol) que las bacterias metanogenicas las cuales producen el sulfato como aceptor de electrectrones . La morfología colonial o reporta quelas colonias pueden ser blancas grises. esféricaso filamentosas.MORFOLOGIA DE LAS BACTERIAS METANOGENICAS Las bacterias metanogénicas presentan gran una diversidad formas de (cocos.0 KJ/mol) y acetato (-39.0 pm de largo. queoxidandemaneracompleta su sustrato.peroen presencia de las sulfatos estos compuestos pueden ser oxidados directamente por las BSR sin producir hidrógeno. Las BSR son bacterias anaerobias estrictas. En presencia de sulfato las bacterias acetogénicas y metanogénicas compiten con las BSR por sustratos como son acetato. COMPETENCIA POR EL HIDROGENO. BACTERIAS SULFATOREDUCTORAS En presencia de sulfato.8 a 7. Pueden ser Gram positivos o Gram negativos y miden entre 0.5 y 0. sustrato. que del género Desulfosarcina sp. propionatoy butirato entre otros como sustratos. propionato y otros ácidos. como la oxidación completa de compuestos aromáticos. sulfito o tiosulfato. propionato y butirato por bacterias acetogénicas. bacilos largos y espirales). que utilizan acetato. Pueden utilizar una variedad de compuestos orgánicos. disminuyendo así la cantidad indispensable de hidrógeno para las bacterias metanogénicas hidrogenotróficas. el Las BSR producen más energía libre durante el consumo de hidrógeno (-38.7 KJ/mol para el hidrógeno y de -28. como formato.8 pm de ancho y de 0. En ausencia de sulfatosel hidrógeno es obtenido de laoxidación de compuestos como son el lactato. Las BSR se clasifican dos grupos: en a) bacterias Las b)Lasbacterias oxidan manera de incompleta su del tipo Desulfovibrio sp. las bacterias sulfatoreductoras (BSR) son capaces de utilizar algunos de los intermediarios de los procesos anaerobios. hidrógeno.2 KJ/mol parael acetato. sarcinas. como la oxidacióndel lactato en acetato y COZ. -32.

temperatura.donde transformado a metano. BSR yBM. 8 .En la parte superiorseencuentraelsedimentador. 1996. como la son concentración de acetato. Monroy et al. pueden coexistir en el acetatoescompletamente reactoresoperando en presencia de sulfatos. El influente atravieza la camadeIodos. habla Se de factores que influyen en dicha competencia. 3. 1991. pH y presencia de compuestos tóxicos (Visser 1 995). establecido para el tratamiento anaerobio de varios desechos líquidos (Lettinga La alimentación de estos reactores se hace por la parte inferior.COMPETENCIA POR EL ACETATO. con lo que aún no queda claro si existe o no una competencia porel acetato.UpflowAnaerobicSludgeBlanket(Fig3. Macarie 1996). concentración de sulfato.2)es Lettinga et al. tipo de inóculo. b) Una cámarade Iodos en la parte baja. tipo de sustrato.3 FORMACION DEAGREGADOS EN REACTORES UASB ElreactorUASB. el cualevita la pérdida de Iodos y favorece la evacuación del gas. propiedades de inmovilización. de un proceso bien 1983. Sin embargo Visser (1995) encontrar0 una dominancia de las BSR sobre las BM. Este reactor cuenta con cuatro partes principales: a) Un separador gas-líquido-sólido. c) Sistema hidráulico distribución de la alimentación y evacuación. Seha demostradoqueambosgrupos bacterianos.

5 a 5 l m de diámetro) (Mahoney et al. del reactor.2 Reactor UASB Las eficiencias de remoción de estos reactores son debidas la formación de un lecho a de Iodos granulares con buenas características de sedimentación. Estos Iodos cuentan buenas con actividades metanogénicas y permiten alcanzar bajos tiempos de retención hidraúlica 9 . 1982) En este tipo de reactores los microorganismos son retenidos dentro del reactor. La agregación de microorganismos si. favoreciéndose así un alto grado retención de dentro (Lettinga et a/. entre la biomasa la realizan los propios formando conglomerados esféricos de poblaciones heterogéneas de microorganismos sintróficos (de 0. por la capacidad de sedimentación de la biomasa que forma Iodos granulares.n biogas salina Bomba Figura 3. 1987).

4) Multiplicación de la célula y desarrollo del gránulo. Schmidt et. 1986. Guiot et a/. no es clara. una capa intermedia en dondesepresentaungran número de bacterias en forma bacilos parecidas de y otras cocos y a Methanobrevibacter. Alibhani et a / . por convección o por un movimiento activo (por medio de flagelos). La procedencia del glicocalix desecho celular.(1986) proponen que los gránulos maduros tienen una estructura en tres: Un núcleo compuesto de bacterias en forma de filamentos parecidosa Mefhanothrix. 1987. Aunque el proceso de granulación no es claro Schmidt (1996) lo explica basándose en el mecanismo de formación de biopelículas y propone cuatro etapas en el proceso de granulación. de 3) Una adhesiónde las células con el sustrato por apéndices celulares por ataque del o sustrato por la misma célula. una posible explicación el cual juega un papel importante en la estructura y función de los gránulos (Schimdt et al. y una capa externa donde los microorganismos predominantes .Aunque el fenómeno de granulación es ampliamente aceptado aún no ha sido posible unificar criterios en torno al mecanismo y condiciones que favorecen esta forma de agregación debido en gran parte.Losgránuloscuentancon 1996). al mismo tiempo quelos protege contra depredadoresy cambios en la composicón del agua residual. Las condicones de operación y tipo de agua residual influyen en la composición mineral y en granulación. 1996). 2) Una adsorción al sustrato por fuerzas fisicoquímicas. Wu et a/. a la gran diversidad de sustratos y formas de operar los reactores (Alibhai et al. esquesea de gránulosfavoreceuna relación sintrófica entre los organismos presentes en este. (1991). a/. como serian las interacciones electrostáticas y fuerzas van der Waals. 1) Transporte de una célula a la superficie de un soporte inerte o a otra célula ya sea por difusión (movimiento Browniano). Sesugierequelaformación un polimeroextracelular(glicocalix).

8)y composición del agua residual. Según Hulshoff-Pol et al.son del tipo acidogénico. Perogránulos en Methanosaeta. temperatura.5-7. c) La carga orgánica suministrada los granos. pH (óptimo entre 6. (1989). y algunas metanogénicas delos géneros Methanococcus y Methanosarcina y otros filamentosos como Methanothrix y Methanospirillurn. sedimentabilidad y naturaleza de la fracción inerte. existen diversos factores que granulación. b) Inóculo: el lodo debe contar con buenaactividad específica. entrelos que estan: a) Factores ambientales como: la disponibilidad de nutrientes. con jovenes se ha encontrado que lo cual se sugiere a estos el centro formado esta de dos microorganismos como Methanosarcina y las cavidades que forman estas Methanosarcinas son ocupadas por los precursores dela granulación (Schmidt 1996). a afectan el proceso de 11 .

4. MATERIALES Y METODOS
4 . 1 DISEÑO EXPERIMENTAL

EnestatesisseestudiólaprácticadeproducirIodosanaerobios activados de purga. Se estudiaron Iodos, dos uno tratamiento parque del industrial

a partirdeIodos de

procedente de la planta de

tratamiento de aguasnegras (UNAM) y otrodeaguasindustriales,delaplanta organización e interacciones de la tesis.

la en Toluca (EPCCA). La figura 4.1 muestra

LODOS ACTIVADOS UNAM
LL

.ODOS ANAEROBIOS

LODOS ACTIVADOS EPCCA

J.
5.2
EFECTO DE LA

J.
5.3

J.
OPERACION DE UN REACTOR UASB CON EFLUENTE DE LEVADURAS

5.1

EFECTO DE LA

EFECTO DE LA AGlTAClON EN LA PRODUCCION DE INOCULOS

rEMPERATURA EN ALIMENTACION EN Lp

LA PRODUCCION
DE INOCULOS

PRODUCCION DE INOCULOS

J.
5.4

J.
OPERACION DE UN WACTOR UASB CON LACTOSA

ARRANQUE DE UN REACTOR UASB CON VINAZAS

Figura 4.1 Diagrama de la organización de la tesis

12

4.2 METODOS

Para caracterizarlos Iodos en sus diferentes etapas de adaptación se les hicieron los siguientes análisis: FlSlCOQUíMlCOS

Es y a) lndice Volumétrico de Lodos (IVL). una medida del grado de compactación
sedimentabilidad, en dondese detrmina el volumen ocupado porun gramo de lodo. b) Sólidos sedimentables todas sus formas. en Se emplea para determinar fracción independiente de sedimentables. la c) pH de entraday salida d) Alcalinidad a4.3de entraday salida e) Demanda Químicade Oxígeno de entrada y salida.

MICROBIOLOGICOS
a) Actividades específicas con 10 mmol de acetato, propionato o butirato como fuente de carbono (Guyot, 1989) y el medio mineral reportado por Balch et al., 1979. Para determinar la actividad de acetogénicas en e lodo. l b) Cuentas bacterianas por el método del número mas probable (NMP) de acuerdo a el Garcia et al., 1982; para cuantificar las bacterias presentes en lodo. Preparación delos medios de cultivo. Procedimiento. Unavez preparado el mediodecultivo(Anexo
1) masunvolumen

los diferentes tipos

de bacterias metanogénicas

y

adicional de agua destilada se puso a hervir

bajo una corriente de nitrógeno, hasta el

cambio de coloración de azul a rosa y al aforo deseado. Se dejó enfriar el medio bajo una corriente de nitrógeno en una cubeta de hielo, una vez frio se agregó la cisteina y se dejó reducir unos minutos más. Se colocó adhesiva, se introduodentro las botellas.Dentrode un tapón de hule y se selló con cinta junto conlas de la cámaraanaerobiaMarcaMcCoy

botellas serológicas de57.37ml y tubos de Hungate, tapones y sellosde aluminio para la cámaraseadicionaron16 ml de medio acadabotella serológica y 5 ml a cada tubo Hungate, se tapan y se sacan de la cámara. Fuera de la

13

cámara se procedió a cambiar la atmósfera a las botellas y tubos por Nz-CO2 (80-20%) durante 2 minutos aproximadamente. Finalmente esterilizaron las botellas y tubos se Determinación de la actividad específica. Doce horas previas inicio la al de prueba,
los Iodos colocaron se dentro

de la

precámara de la cámara anaerobia bajo un vacío de 20 mm Hg, para que se agote el sustrato residual y liberar el metano del inóculo. El dia que se inició el experimento se introdujo a la cámara las botellas con medio y una pipeta despuntada de 5 ml. Una vez adentro se destaparon las botellas y se les agregaron 4 ml de Iodos a cada botella colocándoles su tapón y sello de aluminio. Fuera de la cámara y bajo una corriente de 0.2 0.4 nitrógeno se les agregaron ml de sulfuro de sodio y ml de una solución del ácido a probar, inmediatamente se tomó una alicuota 0.5 de colocaron en vialesquecontenian sobrenadante se separa en otro vial. Estas muestras de forma invertida y con agitación ligera. La actividad metanogénica se midio mediante la producción de metano, tomando una muestra de gas al tiempo cero y e inyectandola inmediatamente al cromatógrafo gases.Lasmuestrassubsecuentessetomaronaintervalosde primeras 12 horas. Para las cuentas bacterianas previamente se maceró dentro la cámara anaerobia el de inóculo, con la ayuda de un mecerador de tejidos. Unavez macerado el inoculo se De dilución inocularon se hicieron las diluciones en el rango de I O ' a cada
de

ml de cada botella

y se

50 pI de ácidofosfórico,

se centrifugarony

el

se conservaron en congelación

para ser analizadas por cromatografía de gases. Las botellas fueron incubadas a 35OC

2 horasdurantelas

5

tubos con un volumen de 0.2 ml, empleando en éSta operación jeringas estériles de 1 ml. Los tubos Ise incubaron a 35OC de forma invertida durante un mes Para el caso de las bacterias hidrogenótrofas se alimentaron cada tercer día cambiando determina la presencia de metano gases. la atmósfera de con una mezcla de Hz-CO2 durante 2 minutos. Al finalizar el periodo de incubación se en las diferentes diluciones por cromatografía

14

3 Medio .mineral de Balch (1979) y como fuente de carbono una mezcla de acetato de sodioglucosa y en una relación 1:1.b) Alimentación de reactores -CAPITULO 5.2 agua más 3gll de acetato de sodio.1 agua residual dela planta de tratamiento de Ciudad Universitaria. -CAPITULO 5. -CAPITULO 5.4 Vinazas diluidas con agua neutralizadas con bicarbonato y de sodio 15 . -CAPITULO 5.

5 RESULTADOS 16 .

ENTRE LAS CUALES DESTACAN LAS BACTERIAS.5.1 ESTUDIO DEL EFECTO DE LA TEMPERATURA SOBRE LA TRANSFORMACION DE LODOS ACTIVADOS EN INOCULOS ANAEROBIOS HIPOTESIS LOS LODOS ACTIVADOS ESTAN FORMADOS POR DIVERSIDAD UNA DE FORMAS BIOLOGICAS. EN EL NUCLEO DE LOS FLOCULOS EXISTEN ALGUNAS BACTERIAS ANAEROBIAS QUE BAJO LAS CONDICIONES OPTIMAS TEMPERATURA DE PUEDEN DESARROLLARSE PREFERENTEMENTEY MOJORAR SU ACTIVIDAD OBJETIVO CARACTERIZAR CAMBIOS LOS MICROBIOLoGICOS Y FlSlCOQUíMlCOS QUE OCURREN EN LA ADAPTACION DE LODOS ACTIVADOS A LODOS ANAEROBIOS 17 .

A los 5. SSF. un lote fue incubado a 35OC. el IVL. ambos condiciones anóxicasy se les realizaron los siguientes análisis: AI tiempo inicial (T=O) se determinaron los sólidos suspendidos totales (SST). 18 .INTRODUCCION En el proceso de Iodos activados. solidos suspendidos volátiles (SSV). 30. potencial de óxido-reducción y el NMP de bacterias anaerobias (Cuadro 5. AI finalizar el expérimento a los (93 días) se determinó el IVL y la cuenta bacteriana. En el inóculo se encuentran también bacteriasanaerobiasquesonresponsablesdeunapartedeladegradación materia orgánica. 15. 45 días se tomaron muestras de Iodos con objeto de seguir aumento el de la actividadmetanoghica (Fig 5. La misma metodología siguio durante las cuatro alimentaciones. y se alimentaron de nuevo los lotes.1). Se siguio consumo del sustrato por el comatografíadegases. cada 10-12 días o hasta que el sustrato desapareciera. actividad metanogénicay NMP.1). Se formaron dos lotes de 4 I cada uno. el fue incubado a temperatura ambiente. En el momentoquedesaparece el sustratosemidieron los se SST. levaduras y protozoarios. SSV. IVL. la materia orgánica coloidaly suspendida se adhiere a los flóculosendonde es lentamentesolubilizada y degradadaLosflóculosestan los que se encuentran formados aglomerados por de microorganismos entre principalmente hongos. A partir de los 61 días ambos lotesfueron alimentados con acetatode sodio (3g/l). de la METODOLOGIA Inóculo:Lodosactivadosprocedentesde otro lote un planta de tratamiento aerobio(Ciudad lotes se mantuvieron en Universitaria). A los 30 días de incubación se analizaronlos SST.

Como se puede observar no degradación hubo probados a ninguna de de los ácidos las temperaturas estudiadas. Los conteos bacterianos (CUADRO 5. Bajo las condiciones de adaptación.2 muestran las actividades de los Iodos a diferentes tiempos de incubación y con las dos temperaturas probadas (25 y35OC).1 y 5. por el contrario a los 45 días se observa una acumulación de acético. 19 .RESULTADOS Las figuras 5. esto posiblementese debido a la actividad acetogénica y la ausencia de metanogénesis de los Iodos.1) muestran un incremento de bacterias metanogénicas hidrogenofílicas. las poblaciones de bacterias utilizadoras de propionato no aumentaron en ningunalas de temperaturas probadas.1.1.1~106).1.3~104 en a 7. siendo mayor ellote incubado a35OC (de 2. Las utilizadoras de butirato sólo incrementan su número a 35OC Indicando con esto que no estaban presentes enlos reactores debido a queno se generaron los ácidos propiónico ni butirico.

Figura. Propionato (O) y Butirato (A) 20 . 5. Acetato (o).1 Cinéticas realizadas durantelos primeros 60 dias de operaci6n en el lote incubado a 25’C a) Tiempo cero b)5 días c) 15 días d)30 días y e) 45 días.1.

2 Cinéticasrealizadasdurante los primeros 60 díasdeoperacibnenelloteincubado Tiempo cero b)5 dias c) 15 dias d)30 días y e) 45 dias. 5.P. C d i i 4. a) 21 . 2! :j E 10. P "I I z 8. e 6 .1. B . Propionato (O) y Butirato (A) a 35°C. Acetato (o). Figura.

Lodos.1. 5. S S V (O) e IVL (o). 5.1. pero a partir delos 25 días se pierde biomasa y se incrementa IVL (Fig.3).3 Comparación de los sólidos e lndice Volumetrico de incubado a 35°C. a) Lote incubado a 25"C.1 EVOLUCION DE LAS POBLACIONES BACTERIANAS Con respecto ala evolución de SSV se observa que a35OC se tiene unrápido el incremento. El IVL baja muy poco.3) I Qc del margen que debe tener el IVL de Iodos activados Id /- _- Fig.CUADRO 5. A 25OC no hay aumento de SST y después de 81 días hay pérdida de biomasa. 5. b) Lote 22 .1. SST (+).1. todavia dentro (Fig.

son 30 veces bajas mas que lo que concluye se que a 35OC ya que se logra una las esperadas (0. A los 30 días en ambos lotes se mejoró el.En Iodos activadosfrescos no fue posible determinar el IVL ya que los granos son muy esponjosos y con mala sedimentabilidad. después de que fueron alimentados.2 23 .1. CONCLUSION La temperatura de adaptación definitivamente es mejor duplicación de los sólidos de 5 a 17 g/len 25 días. en los dos últimos Esto se explica que ya la temperatura de 35OC es la óptima para los procesos anaerobios. siendo de 138 ml/g para el lote incubado a temperatura ambiente y de 72 ml/g para el incubado a 35OC.d). (O) Lote incubado a 25°C y (A) Lote incubado a 35°C. por incubación.1.4 Comportamiento de las actividades especificasde ambos lotes una vez que fueron alimentados. Sin embargo se debe decir que las actividades obtenidas gCH4/DQO/gSSV. 5. " I -1 110 Fig. ya que las cuentas bacterianas son iguales en ambas temperaturas.02 se requiere mayor tiempo de a 0. Pero no se observó el mismo efecto en las cuentas bacterianas. en la figura 5. A partir de los 61 días se agregó acetato. tiende a incrementarseconeltiempo parece estabilizado el lote incubado a 35OC a 25OC el cual a diferenciadelloteincubado muestreos.4 se observa que la actividad específica con acetato.

2 ESTUDIO EFECTO DEL DE LA ALIMENTACION LODOS DE ACTIVADOS CON ACETATO SOBRE SU TRANSFORMACION EN LODOS INOCULO. HIPOTESIS SE ESPERA QUE EL LOTE ALIMENTADO ACETATO CON TENGA MAYOR EL LOTE QUE ACTIVIDAD METANOGENICA Y MEJOR SEDIMENTABILIDAD QUE NO ES ALIMENTADO.5. 24 . OBJETIVO COMPARAR EL EFECTO DE LA ALIMENTACION EN LA PRODUCCION DE INOCULOS ANAEROBIOS A PARTIR DE LODOS ACTIVADOS.

2.d.55 mg DQ0IgSSV.04 mmol Acet./gSSV.d y con producción un consumo lento del acetato.d.2.1). en el momento que desapareceel sustrato se alimenta de nuevo el lote.1 Comportamiento de lote durantelas cuatro alimentaciones con una actividad específica promedio de 0. En el lote alimentado se siguióel consumo de acetato por cromatografia de gases. Esta la fermentación de los productos de la lisis bacteriana 25 T Figura 5.55 mg (la alimentación).040 mmoldeacetato/gSSV. A ambos lotes se les analizaron cada 15 días las actividades especificas. La composición microbiana se analizó inicio y final del experimento. los SSV y e l IVL. 25 .2.METODOLOGIA En este experimento se partió también de Iodos activados procedentes de piloto de Ciudad Universitaria de la la planta UNAM y se formaron dos lotes de 4 I cada uno. Ambos lotes fueron incubados a 35% durante 2 meses. con y sin alimentación (acetato de sodio 3911). al RESULTADOS Durante las cuatro alimentaciones se puede observar conunaactividadespecíficapromediode producción se puede deber a (Figura 5.d 6 2. 0. una intermedia acetato de DQO/gSSV.

podriadeberse. 5. 26 .2)En medición se observa una baja tendencia hacia el consumo de acetato pero no sucede lo mismo con el propionato y butirato.2.2. Las actividades metanogénicasdel lodo a los O. que consiste en un cultivo por lote sin alimentación. Las mediciones de actividad específicas realizadas en el lote alimentado muestran que a los tiempos O y 15 días de incubación hay un aumento en la concentración de acetato (que es un comportamiento parecido al del reactor durante el primer lote alimentado) la tercera mientrasque el propionato y butirato no sonconsumidos(Fig5.la actividad del lodo se muestra constante y baja (2.3 muestra el segundo proceso para producir Iodos inóculos. a una lisis celular (Figura. muestran un comportamiento parecido al lote alimentado (Figura. Tres primeras actividades y b) Cuarta medición de a) actividad a los 50 días.2a).3a). Este aumento en la concentración acetato aparece de que repetidamente en el experimentode lote alimentado. (o) Propionato y (A) Butirato. (O) Acetato.2.2.2 Actividades en el lote alimentado.5 mM/d o 39 mgDQO/gSSV.d). 15 y 30 días de incubación.Se puede concluir que en el sistema de lote alimentado para producir Iodos inóculo a partir de Iodos activados. indicando que existe una producción de acetato durante los primero días de incubación. La figura 5. 5. ya que el inóculono es capaz de consumir el sustrato en 6 horas Figura 5.2. Después de 50 días de adaptación se midió la actividad y se observó queen 6 horas el lodo no se ha adaptado por completo.como ya se mencionó.

Se observó que no hubo degradación de acetato las 6 horas de prueba. en Figura 5.4 Contenido de s6lidos e lndice Volumktrico durante la experimentacih.3. Actividades en el lote sin alimentar a) Tres primeras actividadesy b) Cuarta rnedici6n a los 50 días. El lote alimentado muestra un aumento constante en el contenido de SSV.2. Figura 5. (O) Acetato.2.La figura 5. mientras que el lote sin alimentar presenta variaciones tanto en el contenido de SST como de SSV . (o) Propionato y (A) Butirato.3b muestra la actividad metanogénica a los 50 días.SSV(o )elVL(A). SST(O).b).b). observandose al final que en el lote alimentado el contenido de SSV es mayor conrespecto al lote sinalimentar(Figura5.Conformepasa el tiempode incubación el IVL en estos lotes disminuyen hasta 92 ml/g para el lote alimentado y de 109 ml/g para el lote sin alimentar (Figura 5.4a. a) Lote sin alimentar y b) Lote alimentado.2.4a. 27 .2.2.

En el lote sin alimentar la mayor parte de la población cuantificada está constituida de bacterias BMH mientras que las OHPA-P y OHPA-B apenas contribuyen con población. CONCLUSIONES Con la metodologia probada se consigue mejorar las características microbiológicas y físicas de los Iodos activados.5 Evolucidn de las poblaciones microbianas en ambos lotes estudiados.2.5 se puede observar que en el lote alimentado predominan las bacterias utilizadoras de hidrogeno mientras que los otros grupos bacterianos apenas contribuyen con un 1.6% del total de la BMH BMA OHPA-P OHPA-8 Figura 5. un 3. si en un Con los resultados obtenidos se puede concluir que lodo activado fresco requiere de por lo menos 15 días para consumir el sustrato. ya que la cantidad y actividad de los microorganismos anaerobios presentes son muy bajas. 28 .5% del total de la poblacion cuantificada. aunque faltaria buscar otras alternativas. para mejorar los resultados obtenidos en estos experimentos. y BMA.2. así como probar estos inóculos reactores UASB y evaluar se mejora el tiempo de arranque.En la figura 5.

ESPERA UNA DE SE ACTIVIDAD Y SEDIMENTABILIDAD SE MEJOREN AGlTACldN Y COMO QUE LA OBJETIVO OBTENCIONDEUN IN6CULO ANAEROBIOCONBUENASCARACTERISTICAS DE SEDIMENTABILIDAD Y ACTIVIDAD ESPECíFICA A PARTIR DE UN LODO CON BAJAS ACTIVIDADES METANOGENICAS 29 .5.3 PRODUCCION DE INOCULOS ANAEROBIOS EN REACTORES UASB AGITADOS HIPOTESIS AL ADAPTAR LODOS UN EN REACTOR UASB CON SUSTRATO MEZCLA ACETATO:GLUCOSA.

compactación (IVL) y actividad metanogénica(k).3. 1986) I ACTIVIDAD TIPO DE LODO METANOGENICA CONCENTRACION TlPlCP D E SSV EN EL LODO (gn) i Lodo granular Biopelícula de Filtro anaerobio Lodos activados digeridos Estiercol digerido Lodo fosa sbptica Laguna anaerobia Estiércol fresco de puerco Sedimento de laguna ESPECIFICA 0. 1987) que pueden desarrollarse hasta convertirse en Iodos anaerobios de alta actividad metanogénica específica (IgDQO/gSSV.1 Actividad metanogénica específica concentración de diversos y tipos de Iodos (Field..4 a 1.yaquecuentan con unabuena actividad especifica así como alto contenido de SSV.1 muestra diversas fuentes de inóculo en donde se puede ver que los Iodos activados digeridos y los Iodos anaerobios de lagunas de baja CARGA tienen valores bajos de SSV y de característicascomoinóculoes Cuando no secuentacon condiciones anaerobias.5 a 1.2 a 0. un un lodogranularesposibleadaptarIodosactivadosa I pequeños microambientes en é se encuentran Wu anaerobios (GuyoT. et al. En la tabla 5.5 k (gCH4DQO/g SSV.02 30 30 a 140 0. 1993.02 0.07 0. El lodo que presenta las mejores el lodogranular.d) con 40 alta sedimentabilidad(Im/h) y compactación (IVL) menor de ml/g. que ya k. TABLA 5.002 a 0.02 a 0.03 a 0.01 a 0.08 0. Las fuentes de inóculo pueden seleccionarse mediante pruebas de actividad así como por el contenido de SSV.001 20 a 50 30 .d) 70 a 120 ND 15 a 40 20 a 80 10 a 50 0.02 0.INTRODUCCION Para un buen funcionamiento del sistema UASB se debe contar con un inóculo con buena sedimentabilidad (Im/h).3.2 0.

que fue modificada cada vez que los reactores llegaron a 35OC en cuarto una estabilidad en el porcentaje de eliminación de la DQO.Para lograr este tipo de lodo es necesario suministrar una fuente de carbono que permita que se desarrollen todas las poblaciones implicadas la digestión anaerobia en (bacterias acidogénicas. con un agitador de impulsores girando a 1 RPM para mantener a los Iodos en suspensión dado que la baja producción de gas que se espera de éllos en el periodo de operación. Se montaron dos reactores UASB 4. Por otro lado se debe crecer el inóculo bajo una presión selectiva para obligar a las bacterias a que resistan el arrastredelasvelocidadesascendentes del medio. temperatura operación de de La de fue obscuro. METODOLOGIA. (1979) y una mezcla de glucosa-acetato de sodio ( I : ? ) como fuente carbono.05 gDQ0IgSSV. actividad metanogénica acetoclástica y se hicieron observaciones en microscopia de epiflorescenciaa420nm.66. no será suficiente para suspenderlos (Figura. 2.25 I (RI) y 3. Los reactores se inocularon con 3. Laalimentación se realizó conun medio sintético formado por el medio mineral de Balch et al. SSF.3.77 y 7.1). Este reactor operó a un TRH de 2 días.5 I de volumen de trabajo.64. la carga inicial de ambos reactores fue de 0.d. A los 187 y 213díasdeoperaciónserealizaronlas y capa inferior). 5.47 Kg DQO/m3/d (Bv).IVL. SSV.d. Los análisis realizados fueronlos siguientes: a)Cadavezque hubo cambiodecargaseanalizaron los SST. tales cargas volumétricas 1.de y esta manera aquellas poblaciones que no desarrollen características de adhesión sedimentabilidad serán arrastradas fuera del reactor. acetogénicas y metanogénicas) y que a la vez permita un (Mefanosaeta sp) responsables de dar amplio desarrollo de las bacterias filamentosas estructura a los conglomerados anaerobios.44.4. actividades a dos niveles del lecho de Iodos (capa superior 31 . fueron 0.39 Kg DQO/m3.52 I (R2) de Iodos procedentes de un reactor UASB tratando aguas residuales de la UAM-I con una actividad específica de 0.

DE MEDIO Figura 5. ~~~~ ~ ~ ~ ~ BOMBA MEDIO DE ALIMENTACION ESTERIL SALIDAINFLUENTE PERISTALTICA .1. 32 .b) Análisis de los reactores: DQO total y soluble (entrada y salida). potencial redox. . salida) y Iodos. Etapa 2. ~. a partir de este dia se usó AGITADOR TAPON DE HULE SALIDA BIOGAS EFLUENTE BIOMASA L ~ .3. pH (entrada. (DQO 294. con sistema de agitaci6n para sdlidosen suspensi6n. Reactor UASB. Después de 185 días de operación el lodo del reactor 2 se usó como inóculo para un nuevo reactor que operó con lactosa solamente un reactor.

Seprobóotrametodologiaparaproducirinoculos.3.6 mVg y una acetoclástica de 0.2. 5.) En la Fig. DQOE(O).08 de de g/l.39 _.3 se muestran los resultados obtenidos durante el tiempo de operación.6 I 100 TIEMPO (dlasl 'ig. se muestra el comportamiento de los digestores a lo largo del tiempo. con actividad especifica IVL de 54. un pH promedio de 5. Se procedió adaptar los Iodos aumentando paulatinamente la concentración de DQO.d y agua residual de una fábrica de levaduras con una DQO de 6 g/l. Como puede se observareficiencia remoción inherente la de es con la carga 33 . que consistió en adaptarIodos activados de una planta de tratamiento de una zona industrial en Toluca (EPCCA).038gDQO/gSSV. SSF de 9 g/l y SSV de 7 g/l. DQOs Reactor 1 (A) DQOs Reactor 2(. el aumento paulatino en la concentración DQO de alimentada el comportamiento idéntico de y las los dos eficiencias obtenidas. 5.:"l-{ i 150 50 % 1 d9.5. un contenido SSV 21.3. SST de 16 g/l.59. Se aprecia reactores. BV-7. RESULTADOS En la Fig. puede Se observar .2 Comportamiento de la eficiencia remoci6n de laDQO a diferentes cargas de volum6tricas.

34 . Evoluci6n de los SSV con las diferentes cargas volum6tricas probadas. 5.3 Comportamiento dela eficiencia de remoci6n de laDQO a diferentes cargas volumetricas.7%).d Fig. El análisis de los Iodos nos muestra que a medida que se consume sustrato la biomasa se incrementa en ambos reactores (Fig. Reactor 1 (O).3. Reactor 2(A). Reactor 1 (O).volumétrica. de 2.5.4.66 KgDQO/m3.3.4).obteniéndoseunamáximaeficienciaaunacarga (R1= 97. 5. Fig. R2= 97.9%. Reactor 2 (A).3.

7KgDQO/m3.260 gDQO Ac./gSSV.d superior./gSSV en la capa inferior del reactor 2). embargo sin actividadconunaBvde4.307 gDQO Ac.LaFig.5. la cualseincrementa en función de la Bv./gSSV. Fig 5.5muestra la actividadespecíficade los Iodos. se esperaria una mayor actividad en la capa superior con respecto a la capa inferior./gSSV se consiguió la máxima en la capa inferior para el reactor 1 y 0.yaque las actividadesespecíficas en ambascapas en la capa presentarón comportamiento un irregular.d(0.537 gDQO Ac.d en la capa superior. 0. 0. Reactor 2 capa inferior (+). Si el lodo que se encuentra en la capa inferior recibe el efluente con mayor concentración de materia orgánica que la capa superior. Reactor 1 capa superior (O).39 Kg DQO/m3d se observa una caida en la actividad del lodo en ambas capas 0.5 Evolucidn de las actividades especificas con las diferentes cargas volumktricas probadas.419 gDQO Ac./gSSV.den la capa inferior./gSSV.3. Reactor 1 capa inferior (A). Reactor 2 capa superior (X). 35 .3.d en la capa superior y O. Los resultados obtenidos muestranqueesto no ocurre.184 gDQO Ac.399gDQOAc. Mientras que en el momento que se incrementa la Bv a 7.

El lndice Volumétrico de Lodos (IVL) se encuentra en intervalo reportado por Lettinga el et al.6 Comportamiento del lndice volum6trico de Iodos a las diferetnes cargas volumbtricas probadas.el valor que se obtiene fue medido en del el seno del líquido y es posible que dentro grano se tengan valores más bajos. 5. Aunque la literatura reporta un Eh de -300 mV dentro del gránulo (Kennedy.7 se muestra el comportamiento del pH de los Iodos el cual se mantuvo la La en el intervalo reportado para que se lleve a cabo metanogénesis (6. Fig.5-7. 5 DQO/m3. aunque queda dentro del intervalo mencionado.8 muestra el comportamiento del potencial redox. (1980) 20-40ml/g para un lodo floculento. figura 5. 1983).d a medida que se aumenta la carga se pierde la compactación. La figura 5. 36 .6 muestra que después de Kg una mejoría del IVL con 6 ~ 0 .2).3. Reactor 2 (A). Reactor1 (O). En la Figura 5.

~~ + ~ + ~ + ~~~ .9) este reactor presentó una rápida estabilización al agua residual a partir del primer indica las quecaracterísticas inóculo del producido satisfactorias para disminuir tiempo de arranque de este tipo de reactores.3 7 25 7.7. Reactor 2 (A).3. I Fig.2 I I . 5.~~~ ~.Reactor 1(0).7 Comportamiento del pH con las diferentes cargas volurnétricas probadas.8 Comportamiento del potencial redox con las diferentes cargas volurnétricx probadas. 5. Bv lKgD00lm3 dl Fig.3. Reactor 1 (O).3. Conestelodoseprocedióainocular un reactor UASB el cual fue alimentadocon día de operación. Como muestra la figura (5. el 37 . o "-r-+~ . lo que nos en este experimento son lactosa con una DQO de 2gA. Reactor 2 (A).

10 Arranque y operación de un reactorUASB alimentado con agua residual deuna fabrica de levaduras 38 . 1 50 Fig.3.3. esas p "10 0 TIEMPO (diad ~.ENTRADA . 5 3. J O I 2 4 6 8 1 0 12 1 4 TIEMPO (dlasl Fig.10muestra los resultados obtenidos durante el arranque de un reactor UASB inoculado con lodo adaptado con agua residual de una fabrica de levaduras alimentado con agua residual de la misma levadura. + .9 Arranque de un reactor UASB alimentado con lactosa.1 % al final del tiempo de 14oM l N a 0 loar. Como se puede observar operación. 5. La figura 5. y el lodo se va adaptando paulatinamente logrando eficiencias del 71. * SPLIDA " 4 ~ -0.

537 Los inóculos producidos con las diferentes metodologias requieren del mismo tiempo (1 para lograr una buena eficiencia de remoción de la DQO requerida 50 días) para una carga volumétrica de 4.3. CUADRO 5. gDQO/gSSV. el Una observación microscópio al de bacteriasdeltipo los Iodos indicó gran nos una presencia de Mefhanosaeta spp. El cuadro 5.5-1.15 2.A. Como se puede una cantidad de SSV (28gA) y unaactividad metanogénica comparablecon la reportadad por Noyola (1994). 1996).2 40 Hulshoff Pol (1983) grAnulos Noyola (1994) gránulos Ramírez (1 996) L.2. La presencia de gránulos tan pequeiios puede ser debida a la erosión producida por la agitación mecánica así como a la alta producción de biogas.o 0. En este estudio 20 70-120 35.3.CONCLUSIONES El inóculo producido mediante este proceso presentó gránulos de aproximadamente 1 mm de diámetro.4 28 0. 39 .5 0.8-1 .d 0.77 KgDQO/m3'd. Comparación de inóculos ssv (gll) Lettinga (1980) gránulos De Zeeuw (1981) Act.2. muestra las características lodo del producido observar el lodo producidopresenta en este estudio comparado con los valores de otros Iodos reportados en la literatura. formando centros agregaci'ón de cavidades formadas por Methanosarcinas (Schmith. cual arrastraba las partículas desgastandolas. de forma irregular y de color negro. lascuales juegan un papel impotante en el o colononizando las proceso de granulación.19 0.

5. DEBE DEL EL CUAL CONTAR BUENAS CON CARACTERISTICAS DE SEDIMENTACION Y ACTIVIDAD POR LO QUE SE ESPERA QUE LOS LODOS INOCULO PRODUCIDOS EN EL LABORATORIO REDUZCAN EL TIEMPO DE ARRANQUEY ESTABlLlZAClON DE LOS REACTORES UASB OBJETIVO DETERMINAR EL TIEMPO DE ARRANQUE DE UN REACTOR UASB ALIMENTADO CON VINAZAS E INOCULADO CON LODOS PRODUCIDOS EN UN SISTEMA LOTES POR 40 .4 ARRANQUE DE UN REACTOR UASB ALIMENTADO CON VINAZAS DE CAÑA HIPOTESIS EL ARRANQUE Y ESTABlLlZAClON DE LOS REACTORES UASB DEPENDE ENTRE OTRAS COSASINOCULO.

disminuyendo el así impacto al ambiente. 1991).4.4.3x I O 9 m3 de CH4 por año. 41 .INTRODUCCION Las vinazas son la fracción pesada obtenida en el proceso de destilación de alcohol Tienen contenido un elevado (Durán et a/. excepto pH y temperatura Dadas las caracteristícas delas vinazas. CUADRO 5. que los se usa junto con el bagazo para lograr la autonomía energética que tienen ingenios azucareros y alcoholeros (Souza.1. 1991). et Las vinazas pueden ser tratadaspor medio de digestión anaerobia. En Brasil. las vinazas producen 1. 1991). caramelizada de sólidos suspendidos y puede ver en la tabla5. 1989 y Durán al.1. su tratamiento por vía biológica y fisicoquímica ha sido impracticable. CARACTERISTICAS DE VINAZAS Promedio de materia orgánica altamente de sales. por lo que tradicionalmente estos efluentes se descargan en los cuerpos receptores después de un proceso de enfriamiento (de 90°C a 35°C ) causando un impacto ecológico muy negativo (Vibhash. especialmente K' y SO4= como se Todos los valores estan en gll..

14 8.56 0. 1983).8 CUADRO 5.80 Cu* 1.60 1. 1986).40 so4= 5.0 2. pretratamiento.2.64 Zn* 2. pH de 3. CAWCTERIZACION DE VINAZAS STT STF SlV SST SSF SSV N . Se sugiere un efecto inhibitorio en el tratamiento de estos tipos de efluentes.1990)McCarty (1964) reporta un efecto altamente inhibitorio a concentraciones mayores de 12 g/l de potasio. los cuales son utilizados por las bacterias sulfatoreductorasquecompitenpor los sustratosde las bacteriasmetanogénicasy producen sulfur0 de hidrógeno que es inhibitorio la digestión anaerobia. se mesofílicas (Craveiroet al .16 Ni* 0.5 65. San Luis Potosi.57 Pb* 0. El reactor un fue inoculado con 500 ml de Iodos anaerobios adaptados mediante un procedimiento reportado por Guyot (1990) a partir de Iodos activados de purga.N H ~ NTKt 89.3 litros.23 S= N ~ + K+ 0.4.4.23 42 . con un DQOt 127.04 P-PO4 0. por la presencia de altasconcentracionesdepotasio(RodriguezyMonroy.12 1. con un contenido de SSV de 9 g/l lo cual nos dió una concentración dentro del reactor tiempo de retención de 48 horas.80 Mn* 6.Los filtros También se anaerobios puedenconsiderados una opción ser como buena han obtenido eficiencias 58-78% del (Carrondo han tratado efluentes reactores estos con UASBcondiciones en de et al. de METODOLOGIA En este trabajo se empleó un reactor UASB con volumen útil de 2.0 3.. cuya caracterización se muestra en la tabla 5..7 DQOs 122.76 pH 4.20 Unidades= g/¡. 'rng/l Li 0.2. La alimentación se realizó con vinazas del ingenio azucarero de Tambaca.18 1. .9 g/l. así como la presencia de sulfatos. diluida con el fin de disminuir la cantidad de potasio y neutralizarhasta valores cercanos a 7 con bicarbonato.9 24.

4.1 y 5.4. sólidos totales y volátiles es de 64. actividad de metano cromatografía por RESULTADOS La tabla 5.d.SSF. azúcares de los Iodospor (1956).7% (Fig 6.SSV). potencial redox.d. se obtuvo una estabilidad del reactora partir deldia 69.Los análisis realizados durante la operación del reactor fueronlos siguientes: Sólidos (SST. IVL. conteos de los grupos bacterianos por el método del número más probable (NMP).muestran los resultados obtenidos durante el tiempo de operación. PUESTA EN MARCHA DEL REACTOR.8 yel de salida es8. DQO (entrada y salida). El medio es complementado con 100rng/l de bicarbonato para dar un pH de 6.4.4.3. Se alcanzó una eficiencia promedio de 64.5 I/l.1). proteínas de los Iodos el por método específica según Guyot (1989) producción y gases. El pH de los Iodos se mantiene en 6.64% respectivamente y la producción de metano es de 2.5 Kg DQO/ms.2).7.3y figuras 5. El reactor se operó 103 días durante los cuales se observaron diversos eventos que influyeron en la operación y en los resultados. . Esta estabilización se caracterizópor una serie de etapas que influyeron en el comportamiento de los parámetros medidos. pH. de Sedmarck (1 976).2. 73.46% y 83. elmétodo de Dubois de alcalinidad (entrada ysalida). En esta etapa se diluyelavinaza alimenta a hasta una D Q O total de 3 g/! con laque se una carga volumétrica = 1. ETAPA O.5 (figura 5. La eficiencia promedio para la remoción de DQO. El potencialredox se encuentra lejos del reportado para la metanogenésis alcanzando al final de esta etapa un valor de -45 mV .

11 ETAPA 3 5023 2994 2.25 0.CUADRO 5.25 ETAPA 1 302 1 2028 1.5 65 0.5 31 0.5 40.3 RESULTADOS OBTENIDOS DURANTE OPERACION DEL LA REACTOR UASB ALIMENTADO CON VINAZAS DE CANA ~~ ~ ETAPA O DQOE(rngll) DQOs(mg/l) Bv IKaDQO/m3.50 ETAPA 4 5071 2400 2.14 I T' C I 35 I 35 I 35 1 25 I 35 44 .64 I CHdgDQOr 0.5 53 N% I CHdgDQO 0.46 0.7 0.d) 304 1 1063 1.47 0.4 64 0.46 ETAPA 2 4761 1691 2.

ETAPA 8 A o nd n I A ~xoa3n I T B 8 T - .66 $1 F ..

eE P 8 B A t . 4 0 m L .

mientras que el de los Iodos se mantiene en 6.7 El pH también se ve afectado pues decae hasta 6.8 gDQOll lo que corresponde a una Cv= 2. El potencial redox presenta fluctuaciones en las lecturas obteniendoun valor promedio de -85mV al finalizar esta etapa. disminuyendo a 25.57% los SV. La alcalinidad se mejora a la salida y aumenta hasta 103. La capacidad de remoción de sólidos se mejora ligeramente de 35. En esta etapa se suspendió la adición de bicarbonato la alimentación a partir del a día 19 de operación.d y se reanudó la adición de mg/l de NaHC03.4 g 100 se DQO/m3.65% a 37. El potencial redox que en la etapa anterior habia registrado un valor -85 se de mV. no se en la alcalinidad.38% (516ml CH..5.Laremocióndesólidos se muy ve afectada durante esta etapa. El potencial redox bajó a -90 mV peroaúnseencuentralejosdelóptimo.78% 51.ETAPA 1.7. eleva bruscamente a -22 mV al inicio de esta etapa para registrar un valor de -58 mV al finalizar la misma.65% para sólidos totales de y 42. ETAPA 3. En esta etapa se aumentó la SOa 4.La producción gas de no se incrementa con la nueva carga obteniéndose en promedio un litro de b i o g h con un contenido de metano de 47.1. Sedisminuyó la temperaturade350Ca 25OC durante8díasyseobervaun %.7%.07% a para sólidos 47 . ETAPA 2. a pesar de que observóunavariación la eficiencia decayó hasta un 31.Aunque el pHdel mediobajóa 5.52 mg NaHC03/1. Durante esta etapa obtuvo una remoción de DQO del 64.2 en el lecho de Iodos.57% los ST y 19. los La capacidad de remoción de sólidos no recupera valores obtenidos durante la etapa O. efecto negativo en la eficiencia de remoción que disminuye hasta 40.).

ANALISIS DE LODOS CONTEOS BACTERIANOS. ya que los etapa.9. estas son mas del90%deltotal de las 48 .4.65%). La figura 5.53 Vd. El pH de los Iodos se mantiene en 6.registrándose en promedio 1. porlo que es indispensable conocer las proporcionesde ambos grupos en nuestro reactor.volátiles. mientrasquelaalcalinidadtambién valores en lasalidaa se ve beneficiadayaquemejora sus 121 mg de NaHC03.I6 I/d de biogas con un bajo contendio de metano (37. La producción de biogás va en incrementoobteniéndose al final 2. El biogas igual las anteriores al que etapas presenta grandes fluctuaciones en las lecturas. esta etapa marcó la estabilidad del valores de remoción se mantuvieron estables durante esta toda proceso. Aquí podemos constatarlainfluencia importante de la temperatura y lanecesidad decontrolar este parámetro. mientrasquealfinaldelexperimento poblaciones cuantificadas. como se puede observar las bacterias metanogénicas en el inóculo representan el 60%de las poblaciones cuantificadas. ETAPA 4. Durante esta etapa se operó a 35°C y se aumentó la cantidad de NaHC03 en la alimentación a 200 mg/l. obteniéndose una remoción promedio de 53%. En aguas residuales que contienen altas concentraciones bacterias que metanogénicas las sean desplazas de sulfatos es posible por las bacterias sulfatoreductoras.3 muestra proporciones las respecto a de bacterias metanogénicas con las sulfatoreductoras. as¡ como el potencialredox el cual registra un valor de -123 mV al finalizar esta etapa.

99~10'~ Etapa 3 1.33~10'~ Etapa 4 2.Fig.25~10'~ ND 1.33~10" SULFATOREDUCTORAS ACETATO 4.23~10' 1.74~10' 1.5.86~10" 1.4.9~10~ 1.92~10" 5.33~10'~ 1.3 CONTEOS BACTERIANOS (No.72~10' ND 6. DE BACTERlASlg SSV) METANOGENICAS Etapa O ACETATO HIDROGENO PROPIONIC0 Etapa 1 9. Porcentajes de las poblaciones cuantificadas en el reactor.39~10' 4.3.7'1~10~ 4.87~10' 9.64XlO' 4.95~10~ 1.0~10' 4.4.72~10' HIDROGENO LACTATO 8.9~10' ND PROPIONIC0 ND 49 .28~10' ND 5. TABLA 5.

4. propionato de 1 90 a 67.3 que la cantidad de bacterias metanogénicas es constantepartir a de específica la etapa 1. sin implicar necesariamente un incremento en el número de individuos. siendo mayor la cantidad de azúcares (750 mgIgSSV) que de proteínas (175 mg/gSSV) posiblemente debido a la naturaleza del agua residual (figura.4.5 y butirato de 189. A partir de la etapa 2 se observa un incremento de lasactividades.d acético. Observamos en la figura 5.3 a 94.5).4).AZUCARES Y PROTEINAS. . para 631.2 gDQO/gSSV.3 gDQO/gSSV. / Figura 5.obteniéndoseal final unaactividadde2026. 5.9 gDQO/gSSV.4 Contenido de azúcares y proteinas en los Iodos ACTIVIDADES ESPECIFICAS. La actividad específica de la microflora presenta una pérdida durante la etapa para los sustratos probados (acetato de 92.d para butírico (figura5.4.4.d).1 a 61. .d propiónico para y 3106. Los análisis de azúcares y proteínas los Iodos muestranun incremento durante en el período de operación. Esto parece indicar que hay un aumento de las actividades microbianas.4.6 gDQO/gSSV. 50 . entonces la actividad no está relacionada con el perfil de evolución de la cantidad de estas.

3 222.4.9 631.1 189.Este fenómeno desacoplamiento de entre el metabolismo energético de las bacterias y su crecimiento celular.4.5 94. al. al (1988).2 3106. estudiar los Iodos granulares alimentados con ácidos grasos volátiles. embargo la cinética de degradación del butirato parece similar a la del acetato.3 Etapa 3 2026.3 246. 5.d) SUSTRATO Adtico Butírico ' ProDibnico Etapa O Etapa 1 Etapa 2 90.1 180. lo que concuerda con las observaciones previas de Guyot Sin et.4 ACTIVIDADES ESPECIFICAS (mg DQO/gSSV. Acetico (A). Propionico (x) Butirico (O) 51 .1 2500 f Figura. fue observado anteriormente por Guyot et.5 Actividades especificas realizadas a diferentes tiempos de la operación del reactor.0 61.6 92. al También observamos que la actividad específica de las bacterias que degradan el propionatoesinferiora la actividaddelasbacteriasacetoclásticasydelas utilizadoras de butirato. (1988).4 67. lo que nos hace pensar que una acumulación de ácidos grasos volatiles en eldigestor será la etapa limitante para degradación del propionato la TABLA 5.

SST / ssv . Al final del experimento se observa un incremento en el contenido de SSV (30911) obtiéndose un IVL de 40.08%. i f 15 _ " o & " O 20 l .4. / -~ 40 50 m la7 120 TIEWO (dtss) Figura 5.6 Evolucidn delos solidos durante el tiempo de operacidn IVL El IVL empieza en 40 mVg. en la siguiente atapa (la 4) los SSV presentan un porcentaje parecido ala etapa 2 (figura 5.aunque en la etapa3seobservaun decremento de SSV a 35.47 ml/g el cual es un valor 5. se durantetodo el periododeoperación. Los sólidos suspendidos volatiles (SSV) mantienen en un intervalo de 61-73%.7) característico deun lodo floculento (figura 52 .4.4. en la etapa 2 y 3 cuando los SSV bajan a 5 g/¡ el IVL se incrementa a 80 ml/g.6).ssv.

pero a una cargavolumétrica inferior Cv 2.I Figura 5. es semejante a la reportada por Guyot et a/.d)para efluentes sintéticos Sin sulfato. En caso del ácido propiónico.3) (93. la actividad obtenida al final es el 53 .5% de BSR).4. Por otro lado la actividad acetoclástica obtenida al final del experimento.54 Kg DQO/ m3 d . lo cualconcuerdaconlosresultadosobtenidospor Durán et al 1991 (96% de BM y 4% de BSR).4.d.5%de BM y 6.7 Kg DQO/m3 d (Moreno. Debido a la concentración de sulfatos presentes en las vinazas se sugiere que hay un efectocompetitivoporlautilizacióndesustratosentrelasbacteriasmetanogénicas quelacantidaddesulfatorreductoras es inferior alasmetanogénicas y las sulfatoreductoras.E n nuestro experimento se logró alcanzar una eficiencia del 53%. de bacterias sulfatorreductoras. La actividad que se obtuvo con acetato es de 2026 y para el butirato es de 3106 mgDQO/gSSV. Con lo que podemos concluirquela concentración de sulfatosinvolucrados enla DQO utilizada en el proceso (clg) no favoreciómanera de significativa el crecimiento presentandose una coexistencia entre ambos grupos.1990).7 Evolución del lndice Volumetrico de Lodos CONCLUSIONES Con sistemas UASB se obtuvo una eficiencia del 52% con una carga orgánica de 5. (1988) (2148 mgDQO/gSSV. pero los resultados obtenidos en este experimento nos muestran (figura 5.

d. (1988) 1035 Los de operación y bicarbonatospresentesenelefluente se ve afectadade manera importante tienen un efecto importante sobre la eficiencia del proceso. ya que en el momento que se modificacualquiera de elloslaeficiencia (Cuadro 5.la cual es inferior a la reportada por Guyot mgDQ0lgSSV. 54 .2).d. paremetrostemperatura et a/.de 631 mgDQO/gSSV.4.

CONCLUSIONES GENERALES 55 .5.

2~10' . Se observó que la alimentación también fovorece el indice volumétrico de Iodos de 120 a 92 mllg para el lotealimentadoy109 mllg para el lote sin alimentar. La diferencia cuantificadas. de Así mismo al momento en que se controla la temperatura a 35°C y se alimentan los SSV se puede deber al crecimineto de las bacterias fermentativas. Se puede concluir entonces que la temperatura y alimentación en conjunto juegan un papelimportante en el acondicionamiento de Iodosactivadospara inoculos anaerobios.8~10' para el lote incubado a 25°C y 4. valor que se encuentra dentro del reportado por Noyola (1994) para gránulos. así como en su actividad la cual se encuentra lejos de lo reportado por Field (1986) para Iodos en el aumento de los activados digeridos (0. 15. El inóculo producido con esta metodología permitió reducir tiempo de arranque de un reactor UASB alimentado con el así la obtenciónde y sus características microbiológicas 56 .6~10'para el lote incubado a 35"C. pero sin llegaraobtener los valores reportados por Lettinga.08 a 0.02-0.537 gDQO/gSSV. La conclusión que se obtiene de este experimento que la temperatura por si sola no es mejora las características microbiológicas y físicas los Iodos activados.Con los resultados obtenidos en el presente estudio se logro comprobar o rechazar A algunas de las hipótesis planteadas. Con respecto al contenido de sólidos e indice volumétrico de Iodos. el inóculo presentaba ya buenas características. continuación se concluye sobre dichas hipótesis: La temperatura permite rápida una duplicación los de SSV sin observarse una diferencia significativa en las poblaciones bacterianas metanogénicas y acetogénicas.d).43 ml/g. Bajo condiciones de agitación y cambio paulatino de carga volumétrica se consiguió mejorar las actividad específica del inóculo de 0.39 gll de SSV y un IVL de 35. 4. mejorandose fisicoquímicas. 20-40 mI/g para Iodos floculentos (1980).d.2 gCH4DQO/gSSV.las cuales fueron no Iodos activados se observa que en el lote alimentado se obtuvo un mayor número de 0l2 bacterias 1.82~1 con respecto a un lote sin alimentar 7.

5. los datos reportados por Moreno(1990). muestran la que cantidad 2. Con este tipo de porel efluentes se sugiereun efecto inhibitorio de lasbacteriasmetanogénicas de bacterias sulfatoreductoras H2S Sin embargo los resultados obtenidos nos es mucho menorquelas metanogénicas (Fig 6.9). Además presentóunamayorproporciónde bacterias metanogénicas con respecto a las sulfatoreductoras.lactosa (Fig. . E n el reactor UASB alimentado con vinazas se consiguió una eficiencia de remoción de la DQO del 53% con una carga volumétricade producido las porsulfatoreductoras. Asipodemos concluir el que inóculo utilizado el en reactor UASB alimentado con de estabilización. ya que presentó buenas eficiencias desdeel primer dia de operación (Cuervo 1995)OtraformadeadaptarIodos recirculandoelefluente continuo.d. en reactores agitados con un (agua residual de la los inoculosobtenidoscon se hizomedianteun proceso por lote delevaduras.54 KgDQO/m3. con una carga volumétrica de 4. 150 días. parecido al lo cual concuerda con efluentes de levaduras permitió alcanzar un tiempo corto reportadopor Mendoza y Garcia (1992).77 KgDQO/m3.d. a los 30 días se pudo iniciar laoperación en efluentesintético y en sistema en lote conunefluenteindustrial fabricación de levaduras) se llega a la conclusión de que ambas estrategias requieren mismo del tiempo alcanzar eficiencias para las de remoción de la DQO. AI comparar las estrategias de producción de inoculos.3) con l cual podemos concluir que no se presento competencia o por los sustratos entre ambos grupos bacterianos sinomas bien una coexistencia.

6. BlBLlOGRAFlA 58 .

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ANEXO 62 .

7H20 Resarzurina (O. %) 1 NaHC03 Extracto de levadura Peptona de caseina Cisteina Aforar a un litro con agua para 1 litro de medio 40 ml 40 ml 10 ml 10 ml 10 ml 1 ml 1 ml 2g l g l g 0.5 g SOLUCIONES a) Solución mineral 1 K2HP04 b) Solución mineral 2 g/l 6 c) Solución de vitaminas mg/l Biotina fólico Acido Piridoxina HCI HCI Tiamina Riboflavina 5 nicotinicoAcido 7 - 2 5 10 5 63 .MEDIOS DE CULTIVO a) Medio de cultivo para actividadesy cuentas bacterianas (Balchet a/. 1979) . Solución mineral 1 Solución mineral 2 Solución de vitaminas Solución de oligoelementos Solución NiCh (5mg/l) Solución FeS04.

01 AIK(S04)z 0.1 CaC12.01 H3603 Na2Mo04.1 Coso4 o CoC12 o. ajustarel pH con KOH a6.5 g de sulfuro de sodio Dentro de 12oOc.2H20 o.1 ZnS04 0.5.01 posteriormente se sacaron las botellas de la cámara y se esterilizarón por 15 minutos a 64 .7H20 o. la cámara anaerobia y se disolvieron en 100 ml de agua reducida. Se pesaron 2. se vació solución esta 0. g/l MgS04.7H20 3 MnS04. Se preparan soluciones madre 0.1 C~S04.2H20 0.01 Conservar en refrigeración e)Soluciones madre deAGV.5H20 0. en botellas serológicas.5 NaCl FeS04. f)Solución de sulfuro de sodio.5 g de ácido nitrilotriácetico agua destilada.5M de cada ácido a probar.1 5 d) Solución de oligoelementos Disolver 1.2H20 0. en después agregar los siguientes minerales.5 lipóico pantoténico DL-ácido 5 B12 Vitamina p-aminobenzoico Acido Acido o.

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