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TÍTULO

 Coloración Gram

INTRODUCCIÓN

Las tinciones son técnicas que se utilizan en los laboratorios para reconocer los
diferentes microorganismos. Durante los últimos siglos han ayudado al diagnóstico
de diferentes enfermedades infecciosas.

Existen varias técnicas, entre ellas, la más utilizada para reconocer bacterias, es la
Coloración Gram que fue desarrollada por el científico danés Hans Christian Gram
en 1884.

Esta tinción nos permite clasificar a las bacterias en dos grandes grupos: Bacterias
Gram positivas y Bacterias Gram negativas. Ello es importante porque nos puede
ayudar a diagnosticar alguna enfermedad causada por algún agente infeccioso.

En el presente informe se mencionará los pasos para realizar en una Coloración


Gram, así también se clasificará las diferentes bacterias mostradas en el
laboratorio de microbiología, de acuerdo con esta tinción.
MARCO TEÓRICO

COLORACIÓN GRAM

Las tinciones son técnicas que permiten observar microorganismos en función de la


capacidad de los mismos para retener o no determinadas sustancias colorantes, lo que
depende de la carga de la célula y del colorante.

La tinción Gram es la más utilizada en los laboratorios, esta permite diferenciar dos
grandes grupos de bacterias: Bacterias grampositivas y bacterias gramnegativas. Fue
desarrollada por el científico danés Hans Christian Gram en 1884.

Esta técnica se basa en las propiedades estructurales de la pared celular de ambos tipos
de bacterias, no siendo una reacción específica.

Las bacterias grampositivas poseen como componente estructural al peptidoglucano en


un 90%, es por ello y debido a su gruesa pared, impiden la entrada del decolorante y la
salida de cristal violeta; mientras que, en las gramnegativas, los lípidos de la pared (más
abundantes que en las células Gram positivas) se disuelven por este tratamiento, lo que
permite el escape del complejo cristal violeta.

PARED CELULAR DE LAS BACTERIAS GRAMNEGATIVAS

PARED CELULAR DE LAS BACTERIAS GRAMPOSITIVAS


Después de la decoloración las células Gram positivas son todavía púrpuras, pero las
Gram negativas son incoloras. Para poner de manifiesto las células Gram negativas se
utiliza una coloración de contraste. Habitualmente es un colorante de color rojo, como la
safranina. Después de la coloración de contraste las células Gram negativas son rosadas,
mientras que las Gram positivas permanecen púrpuras

PASOS

1. Se coloca la muestra en la lámina portaobjetos de vidrio y se fija (mediante


calentamiento o tratamiento con alcohol)

2. Después de la fijación se coloca un colorante primario cristal violeta, el cual tiene


afinidad con el peptidoglicano de la pared bacteriana. Esto por una duración de 2
min aprox.
3. Luego se elimina el cristal violeta y se colocaLugol para gram, el cual sirve como
mordiente e impide la salida del cristal violeta por la formación de un complejo
cristal violeta-yodo que satura los espacios del peptidoglicano de la pared
bacteriana.

4. En seguida, se coloca una mezcla de alcohol-acetona, la cual deshidrata la pared


bacteriana y cierra los poros de la misma, también destruye la membrana externa
de las bacterias Gram negativas debido a que ésta es soluble a la acción de
solventes orgánicos, como la mezcla de alcoholacetona. Las bacterias Gram
positivas, al contener una gran cantidad de peptidoglicano, retienen con mayor
fuerza este complejo, mientras que las Gram negativas no lo pueden retener por
tener menos cantidad de peptidoglicano

5. Por último, se coloca safranina, la cual funciona como un colorante secundario o


de contratinción y sirve para teñir las bacterias que no pudieron retener el
complejo cristal violeta-yodo.

El grado en el que un microorganismo conserva elcolorante depende del


microorganismo, de las condiciones del cultivo y de las habilidades tintoriales del
microscopista.

OBJETIVOS

 Conocer y describir el método de tinción Gram.


 Reconocer las bacterias Gram positivas y Gram negativas.

MÉTODOS Y/O PROCEDIMIENTOS

Con la técnica de tinción Gram se preparó las muestras, se llevó al microscopio y se


observó lo siguiente.
OBSERVACIONES

 BACILOS GRAM POSITIVO (Aumento a 100x)

Diplobacilos

Streptobacillus

BIBLIOGRAFÍA

1. http://www.medigraphic.com/pdfs/invdis/ir-2014/ir141b.pdf
2. http://www.revistareduca.es/index.php/biologia/article/view/963/996
3. Microbiología de Murray - 7ma edición

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