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- El grado de dilución,
- Una tabla estadística, y
- Una comprobación visual.
Son las necesidades e informaciones para averiguar el número más probable de
la cantidad de células / bacterias en un cultivo o en una dilución respectiva.
McGrady ha desarrollado tablas estadísticas, por ejemplo, para tres o cinco
pruebas paralelas que sirven para encontrar el NMP de la cantidad de bacterias
por mililitro. Es necesaria una secuencia de diluciones del cultivo en investigación
hasta que resulten pruebas que no contengan bacterias.
Los Thiobacillus Ferrooxidans utilizan la oxidación de Fe2+ a Fe3+ como fuente
de energía para su metabolismo. Esta oxidación se muestra en un cambio del
color de la solución nutriente y se comprueba, de este modo, el límite de la
concentración para la dilución de un cultivo.
La determinación del “título de gérmenes” se realiza rutinariamente de igual
forma como el método para el NMP, con una secuencia de diluciones; pero el
resultado lleva una gran desviación estándar. Unas tres o cinco pruebas (tubos)
para cada dilución permiten reducir este error notablemente. Así con tres
diferentes grados de diluciones se encuentra el NMP (tabla de McGrady) de
bacterias por mililitro en la solución del cultivo, o sea, la población respectiva. La
influencia de la casualidad que juega el rol decisivo en el “título de gérmenes” no
domina tanto el método del número más probable.
El procedimiento como se encuentra el NMP para la población de bacterias/ ml
para los cultivos del género Thiobacillus, se muestra en la descripción siguiente:
- Se prepara una secuencia de diluciones de solución del cultivo con la solución
nutriente de 9K (sin FeSO4);
- De cada dilución se prepara cinco tubos con solución nutriente de 9K (10.0 g
FeSO4 . 7H2O/ litro en vez de 44.22 g/l); pH 2.5;
- Se incuba los tubos con las diferentes diluciones hasta que muestran por
coloración el desarrollo de bacterias (hasta el límite de la dilución). Temperatura
30-35°C;
- Se evalúa el crecimiento de Thiobacillus Ferrooxidans por medio de la oxidación
de Fe2+ a Fe3+. Es decir, el cambio del color de la solución nutriente a amarillo
o marrón (efecto de concentración).
- Los resultados en los límites de las diluciones que se reciben después de la
incubación se utilizan para la búsqueda del NMP según las tablas respectivas de
McGrady.
Un ejemplo:
- Cinco tubos paralelos de cada dilución (1:106 = 10-6 del cultivo original, 1:107
= 10-7 del cultivo original, 1:108 = 10-8 del cultivo original).
- Incubados durante un tiempo con 35°C muestran los resultados siguientes:
- 5 tubos positivos de la dilución 10-6 5 - 2 tubos positivos de la dilución 10-7 2
- 0 tubos positivos de la dilución 10-8 0
El agrupamiento de los números de los resultados es 5 2 0. Con este número
compuesto se entra en la tabla correspondiente de McGrady y se encuentra el
número más probable.
5.0
La interpretación: