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Titulo: “Del gen a la función: nuevas perspectivas en la biología de insectos”.

Lugar y Fecha: Universidad Nacional de La Plata (Argentina), 18-29 de


Noviembre de 2002.

Director: Jorge Ronderos. Universidad Nacional de La Plata.


Docentes:
Rolando Rivera-Pomar. Departmento de Biologia Molecular. Max Planck Institut.
Göttingen, Alemania.
Paulo Pimenta. Centro de Pesquisas René Rachou- CPqRR; Fundação Oswaldo
Cruz FIOCRUZ, Belo Horizonte , Brazil.
Fernando Noriega. Departamento de Bioquimica y Center for Insect Sciences.
Universidad de Arizona. USA.
Graciela Humberlan: Departmento de Biologia Molecular. Max Planck Institut.
Göttingen, Alemania.
Quesada Allue, Luis: Instituto de Investigaciones Bioquímicas. Universidad Nacional
de Buenos Aires
Objetivo del curso: Integrar dentro del estudio de insectos la biología, bioquímica,
biología molecular y el análisis de genomas y proteomas.

Estructura del curso: El curso esta dividido en 4 partes. La primera parte es una
introducción general a los estudios genómicos y proteómicos. Las 3 ultimas partes son
ejemplos específicos de la utilización de estas técnicas en las áreas de estudio de los
investigadores que dictan el curso. Cada jornada incluirá seminarios teóricos (4 horas
en la mañana – de 9 a13) y laboratorios (4 horas en la tarde – de 14-18).

Temario

I- Introducción a los estudios genómicos y proteómicos.

1- Métodos de estudio de genomas. La mosca de la fruta (Drosophila melanogaster)


como modelo. Producción de genotecas. Tipos de genotecas. Secuenciación:
métodos. Procesos automatizados. Generación de datos de secuencia de genomas
completos: mapeo cromosómico, clonado posicional, generación de ESTs (Expressed
Sequence Tags), secuenciación al azar y ensamblado (shotgun cloning).
2- Tratamiento de los datos: bancos de datos, comparación de secuencias y anotación
(identificación teórica de genes). El genoma de Drosophila y Anopheles gambiae.
3- Estudios postgenómicos: de la secuencia a la función del gen. El manejo de la
información genómica: bioinformática. Determinación de la función genética. Métodos
de estudio de la expresión genética de un organismo complejo: Chips de ADN (DNA
microarrays). Estudio funcional de los genomas. Redes de proteínas.
4- Patrones de expresión de proteínas: proteomics.

II- Nuevas perspectivas en el estudio de la biología del desarrollo en insectos.

1- Genética molecular del desarrollo embrionario de insectos. Drosophila


melanogaster como modelo de estudio del desarrollo en insectos. Factores
involucrados en la segmentación. Genes maternos y su función en el establecimiento
de la polaridad anteroposterior y dorsoventral del embrión. Eventos tempranos que
establecen el patrón de segmentación embrionario. Genes selectores. Información
posicional y polaridad. Determinación de los tagmas. La segmentación y la evolución
de los artrópodos. El concepto de homología a la luz de los nuevos descubrimientos
de la biología del desarrollo.
2- Procesos morfogenéticos. El fenotipo como la resultante de una red de
interacciones entre funciones. Formación de los apéndices. Determinación del ala.
Morfogénesis de la pupa. Organogénesis: concepto y redes genéticas que regulan
histogénesis y organogénesis. El sistema traqueal como modelo.
3- Como evolucionaron las alas de los insectos: apterigotas, paleopteros,
polineopteros y oligoneopteros: aparición y reducción secundarias de las alas. Como
evolucionaron los apéndices de los artrópodos: ejemplo de diversidad generada por la
misma vía genética. Evo-Devo: una síntesis de la evolución y la biología del desarrollo.

III- Nuevas perspectivas en el estudio de la fisiología de insectos.

1- Digestión en insectos. Estudio molecular de la digestión de proteínas en el intestino


de mosquitos. Análisis funcional de la expresión de genes de proteasas en Aedes.
Identificación de actividades enzimáticas. Caracterización de proteínas. Clonado de
genes. Estudios de expresión. Proyectos de EST. Microarrays. Estudios proteómicos
de la síntesis de proteasas. Estudio funcional integrado de la expresión de genes de
proteasas. Modelos de digestión.

2- Regulación endocrina del crecimiento y la reproducción en insectos: Hormonas


Juveniles y Ecdisteroides. Regulación de los tenores de Hormona Juvenil (JH). Estudio
de la síntesis de JH por la Corpora allata (CA) in vitro. Vías de síntesis de JH. Estudios
con precursores e inhibidores. Identificación de compuestos usando HPLC, GC y
espectrometría de masa. Regulación de la síntesis de HJs. Rol de péptidos
reguladores. Allatotropinas y allatostatinas. Purificación y caracterización de péptidos
reguladores. Regulación de la expresión de genes de allatotropinas y allatostatinas.
PCR, hibridizaciones in situ. Uso de genomas de Drosophila y Anopheles en el estudio
de regulación de JH. Análisis de genes en distintos grupo de insectos. Estudio
funcional integrado de la regulación de los tenores de JHs. Modelos de regulación.

IV- Nuevas perspectivas en el estudio de la relación vector-parásito y el control


de insectos vectores de enfermedades.

1- El impacto de los estudios genómicos en el desarrollo de nuevas tecnologías en


biología. Insectos transgénicos. Métodos de transgénesis en insectos. Manipulación
genética de vectores y nuevas alternativas para el control de Malaria y Dengue.
Desarrollo de mosquitos que no transmiten malaria. Introducción de genes en
Vectores, transformación de mosquitos. Construcción del gene “refractario” a la
malaria. Identificación de promotores con expresión especifica temporal y de tejido.
Identificación de moléculas que afecten el desarrollo del parásito en el vector.

2- Biología celular de la Interacción entre parásito y vector. Aspectos de la interacción


entre mosquitos y parásitos productores de malaria. Biología celular de la interacción
entre Leishmania y los insectos vectores.

Trabajos prácticos

1- Embriogénesis y Genética del desarrollo. Análisis de la morfología larvaria de


Drosophila melanogaster (Díptera) y Tribolium castaneum (Coleoptera). Preparación
de cutículas provenientes de insectos salvajes y mutantes. Identificación de los
defectos genéticos de segmentación en Drosophila sp. y Tribolium sp.. Observación
de los diferentes estadios embrionarios de Drosophila sp.
2- Detección de la expresión genética de genes maternos y de segmentación por
medio de hibridación in situ de ácidos nucleicos en embriones. Histoquímica de las
proteínas reguladoras. Observación de la variación del patrón de expresión genética
en diferentes mutantes. Epistasis: determinación de las redes de regulación.
3- Introducción teórica a las técnicas mas usadas: purificación de ácidos nucleicos
(ARN, ADN genómico y plasmídico); digestión con enzimas de restricción; Southern
blot, Northern blot. Clonado. Transcripción reversa y generación de ADNc.
Cuantificación de ácidos nucleicos. Transformación de células bacterianas y
eucariontes. Amplificación de genes de inmunidad por medio de la reacción de
polimerasa en cadena (PCR). Detección del producto amplificado en geles de agarosa.
Clonado en vectores plasmídicos.
4- Detección de secuencias genómicas en cromosomas por medio de la técnica de
FISH (Fluorescent in situ hybridisation).
5- Análisis de secuencias genómicas. Búsqueda de similitud en bancos de datos
(BLAST). Tipos de búsquedas.
6. Análisis funcional de la expresión de genes de proteasas en Aedes. Identificación de
actividades enzimáticas. Caracterización de proteínas. Clonado de genes. Estudios de
expresión.
7. Biología celular de las Interacciones entre parásito y vector. Análisis de la
morfología de larvas y adultos de insectos vectores (Aedes, Culex, Anopheles y
flebótomos). Disección y análisis de los órganos internos de mosquitos con
énfasis en el tracto digestivo, glándula salivar y ovario. Alimentación artificial de
mosquitos y flebótomos.

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