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UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA LA MOLINA

LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA
INFORME # 10

TÍTULO:

INTEGRANTES:
20131213 Ferrer Chávez, Ana
20121256 Jara Blas, Lucero
20131240 Rojas Guerra, Gonzalo
20140328 Velásquez Quispe, Laura
MESA:
NÚMERO 4

2016
1. INTRODUCCION:
Los agentes químicos se utilizan para el control del crecimiento microbiano tanto en
tejidos vivos como en objetos inanimados .Lamentablemente, son pocos los agentes
químicos que logran la esterilidad; la mayor parte de ellos solo reducen las
poblaciones microbianas a niveles seguros o eliminan las formas vegetativas de los
patógenos.
Los colorantes se utilizan ampliamente en bacteriología para tinción y como
indicadores. La incorporación de un colorante a un medio de cultivo con
frecuencia lo torna selectivo La acción bacteriostática de los
colorantes se debe a la modificación del potencial de óxido-reducción del medio, lo
que inhibe el desarrollo de los microorganismos .en general, son más activos contra
las bacterias gram positivas y algunos y algunos hongos.
Ciertos metales pesados o sus combinaciones químicas también ejercen un efecto
antibacteriano; los más activos son el mercurio, la plata y el cobre, y esto se debe a la
combinación de ion metálico con los grupos sulfhídricos de ciertas proteínas que se
desnaturalizan de la célula microbiana; estas se inactivan, precipitan y, finalmente,
producen la muerte.

2. OBJETIVOS:
 Comparar la susceptibilidad de algunos organismos ante diferentes factores
químicos, observando sus modificaciones en el crecimiento.
 Observar y determinar el efecto que causan agentes químicos como colorantes
, desinfectantes y metales pesados a diferentes bacterias

3. MARCO TEORICO
Factores químicos para el control de microorganismos
El fenol y sus derivados
El fenol se adhiere a superficies inertes y proporciona lo que se llama una desinfección
residual. Su acción se prolonga por varias horas. Los compuestos de fenol pueden
actuar como microbicidas o microbiostáticos dependiendo de la concentración que se
utilice. Los fenoles poseen efecto germicida pues dañan la membrana y desnaturalizan
las proteínas bacteriales. Uno de los derivados del fenol se llama cresol; éstos tienen
un efecto germicida superior al fenol. Los cresoles se usan en jabones líquidos (ej.
lysol es un jabón más un cresol). Otro derivado del fenol es el hexaclorofeno, el cual
se usa en jabones para las manos (en cirugía y hospitales). Un ejemplo de este último
es el Phisohex. El fenol y sus derivados por lo general no matan esporas.

Los alcoholes
Los alcoholes dañan la membrana, desnaturalizan las proteínas, disuelven lípidos y
deshidratan la célula. La concentración más efectiva de alcohol es el 70% y los más
utilizados son el alcohol etílico e isopropílico.

Halógenos
Los halógenos actúan sobre los microorganismos oxidando las proteínass y enzimas
esenciales. No matan las esporas. Los halógenos más comunmente usados son el
cloro y el iodo.
1. El cloro Es uno de los desinfectantes más usados y es microbicida contra la
mayoría de los microorganismos. Se usa para limpiar las aguas contaminadas y se
aplica en agua potable.
2. El iodo Se utiliza comúnmente como un antiséptico y es uno de los mejores que
hay para la piel. Se aplica principalmente como tintura de iodo. Es microbicida para la
mayoría de los organismos. El iodo también se emplea como iodóforo (compuesto de
iodo con otros agentes). Los iodóforos no manchan ni irritan, un ejemplo es el
betadine.

Metales pesados y sus compuestos


La acción antimicrobial de los metales pesados y sus compuestos se debe a la
combinación del ión metálico con proteínas y las enzimas del microorganismo,
dañando así el sistema.
1. Compuestos de mercurio Los más importantes de este grupo son los orgánicos
como: mercurocromo, metiolato y metafen. Todos estos se usan como antisépticos y
son principalmente microbiostáticos.
2. Compuestos de plata El más que se usa es el nitrato de plata en solución al 1% y
se usa en los ojos de los recién nacidos.
3. Compuestos de cobre El sulfato de cobre se usa para controlar el crecimiento de
algas en las piscinas.

Tintes
Algunos tintes se usan como agentes selectivos en medios de cultivos por su efecto
bacteriostático. Ejemplos de estos tintes son el cristal violeta (violeta geneciana), azul
de metileno, eosina, “carbol fuchsin”, verde brillante. Estos tintes inhiben las bacterias
Gram+. El modo de acción no está claro, pero se cree que intervienen en los procesos
de oxidación celular.

Jabones y detergentes
Un jabón es una sal de sodio o de potasio de un ácido graso. Los agentes que
reducen la tensión superficial del agua (surfactantes) y que se emplean principalmente
para la limpieza de superficies se llaman detergentes (el jabón es un ejemplo de un
detergente). Los detergentes se clasifican en catiónicos, aniónicos y no-iónicos. Los
detergentes catiónicos son mejores desinfectantes que los demás. Otro nombre con
que se conocen a los detergentes catiónicos son cuaternarios de amonio. Estos son
bacteriostáticos a bajas concentraciones y bactericidas a concentraciones mayores.
Ejemplos de estos compuestos son el Zephiran y el Roccal, que se usan como
antisépticos para la piel, además de usarse para el saneamiento de lecherías y plantas
elaboradoras de alimentos. Estos compuestos no matan esporas.

Acidos
Hay una serie de ácidos orgánicos que se usan como conservantes en muchos
alimentos como el ácido acético, ácido benzoico, ácido láctico, ácido propiónico y
ácido sórbico. El ácido baja el pH y esto desnaturaliza las proteínas. No matan las
esporas.

4. PROCEDIMIENTO

a. MATERIALES
Agar nutritivo en tubos Caldo nutritivo (Bacillus sp) Discos de papel filtro

Placas estériles Pinzas estériles


Asa de Kölle

Soluciones Colorantes:
Cristal Violeta Verde Malaquita Azul de Metileno

Soluciones Desinfectantes: Soluciones de metales pesados:


Fenol: 0.5%, 1% y 3% Sulfato de Cobre Cloruro de
Mercurio
5. MÉTODOS
a. Colocar dos asadas de uno de los cultivos bacterianos a los tubos con los medios
licuados, mezclar bien y verter el contenido de los tubos en las placas Petri. Dejar
enfriar
b. Después de la solidificación del medio dividir la superficie de la placa en seis
partes iguales con un plumón marcador.
c. En condiciones asépticas, coger un disco de papel de filtro con las pinzas y
sumerja ligeramente uno de sus bordes en una de las soluciones
antimicrobianas.
d. Una vez que el colorante ha impregnado en el disco colóquelo sobre el agar en
uno de los sectores marcados.
e. Repetir el procedimiento con cada uno de los agentes antimicrobianos y los
cultivos.
f. Incubar las placas a 37ºC por 24 horas. Observar los resultados.

6. RESULTADOS

Antiséptico o Desinfectante Concentración Bacillus sp


1/1000 Resistente
Cristal Violeta 1/5000 Resistente
1/10000 Resistente
1/1000 Resistente
Verde de Malaquita 1/5000 Resistente
1/10000 Resistente
0.5% Resistente
Fenol 1% Resistente
3% Resistente
0.5% Intermedio
Sulfato de Cobre 1% Sensible
3% Sensible
0.5% Intermedio
Cloruro de Hg 1% Sensible
3% Sensible
Sensible: El compuesto tuvo un efecto bactericida en la cepa.
Intermedio: El compuesto tuvo un efecto bacteriostático en la cepa.
Resistente: No hubo efecto alguno en la cepa.
7. DISCUCIONES
En nuestra muestra de Bacillus sp se encontró que es resistente a las tres
concentraciones de cristal violeta (1/1000, 1/5000 y 1/10000), esto se puede deber a
que no son suficientemente altas y se vuelve tolerante tanto para Gram (+) como para
Gram (-). Del mismo modo pudimos observar que frente a las tres concentraciones de
verde malaquita la cepa tampoco tuvo ninguna reacción, esto debido a la misma razón
que el otro colorante ya que solo en concentraciones altas inhiben a ambos tipos de
bacterias.
Con respecto al fenol el Bacillus sp se mostró resistente tambien a las tres
concentraciónes (0.5%, 1.0% y 3.0%), esto puede deberse a que los fenoles se utilizan
más como desinfectantes y tienen propiedades antibacterianas frente a streptococos,
estafilococos y Escherichia Coli desnaturalizando enzimas y proteinas.
Respecto al cloruro de mercurio al igual que con el sulfato de cobre observamos que a
mayor concentración se producia una mayor sensibilidad y por ende un halo de
inhibición mas grande. El mecanismo de acción se basa en la inactivación de las
reacciones enzimáticas, de ácidos nucleicos y desnaturalizacion de proteínas de las
células bacterianas.

8. CONCLUSIONES:

 En una placa Petri, los resultados no aparecieron claramente debido a la mala


manipulación del Agar licuado, por lo cual no se pudo observar notoriamente
algún halo de inhibición de Cu2SO4.
 Los colorantes básicos, las soluciones desinfectantes y los metales pesados
están en relación directa con la concentración de los materiales
 El mayor halo de inhibición de formo con el cloruro de mercurio

9. BIBLIOGRAFÍA:

 FERRER, Iván. NF. Identificación bioquímica de los bacilos Gram-negativos.


Capítulo 9.
 Madigan, M. 1998, Biologia de los Microorganismos. Octava Edicion. Editorial
Grafilles. España.
 Olivas, E. Alarcón, L. 2004. Manual de prácticas de Microbiología básica y
Microbiología de alimentos.Universidad Autónoma de Ciudad Juárez. Mexico.
 MAC FADIN, J. 2003. Pruebas bioquímicas para la identificación de bacterias
de importancia clínica. Tercera edición. Editorial Médica Panamericana. Buenos
Aires: Argentina.
 KONEMAN, E; Allen, S. 2008. Diagnóstico Microbiológico. Sexta edición.
Editorial Médica Panamericana. Buenos Aires: Argentina.
 CASADO, Concepción, et al. 2012. Medios de cultivo en un laboratorio de
Microbiologia.