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TIPOS DE VECTORES PARA CLONACIÓN Y EXPRESIÓN

Tipo de vector Esquema (con sus componentes principales) Descripción general Uso principal Tamaño del Ejemplos
inserto

Características: Los plásmidos se


-ADN circular utilizan
principalmente Vectores de
-Se encuentran naturalmente para clonación y expresión
en bacterias expresión de
● pRSET A
-Muy estable genes.
● pET32a
-Contiene sitios de clonación Existen diversas ● pRIBOTEX
múltiple (MCS) aplicaciones de Puede ● pSO2C1
estos vectores, transportar
Plásmidos -Posee secuencias que fragmentos de
algunas de ellas
permiten su replicación ADN Vectores de
son: fabricación
Natural Killers) autónoma en bacterias y relativamente clonación
de grandes
levaduras. grandes, de
cantidades de ● pBR322
-Origen de replicación (ORI) proteínas, unos 10,000 pb.
● pUC118
clonación de ADN ● pUC118
- Debe contener dos genes
eucariota en ● pUC18
que confieran resistencia a
diferentes antibióticos. plásmidos ● pUC19
bacterianos, ● PUC57
-Región promotora. extracción de
ADN plasmídico,
-Contiene un marcador
selectivo entre otras.

Tipo de vector Esquema (con sus componentes principales) Descripción general Uso principal Tamaño del Ejemplos
inserto
Los bacteriófagos son otro
Bacteriófagos tipo de vectores de
clonación. Dado que Son
principalmente -Fago λ o
(Los Kozaks) normalmente un fago
utilizados para la bacteriófago
tiene una molécula de ADN Por lo general,
clonación de lambda(20-25 kb).
lineal, una sola rotura los
generará dos fragmentos, pequeños bacteriófagos -Fago M13(7.2 kb).
que posteriormente se fragmentos de utilizados
unirán con ADN extraño ADN (10 kb). permiten Hace uso de
para generar una partícula También, insertos de 10 fagemidos.
de fago quimérico. permiten generar kb. Pero los
bibliotecas Molécula circular
fagos lambda,
“Cos” es la abreviación de genómicas con el de ADN de una sola
son utilizados
“cohesive y site”, por sus fin de clonar un hebra.
de una manera
palabras inglés. Que es genoma más fácil y La infección no es
una característica especial completo por eficiente para letal para las
del fago lambda que medio de varios generar librerías bacterias
necesita ser linearizado vectores los genómicas y de (bacteriofagos
para poder ser introducido cuales tienen la cDNA, filamentosos).
en la cabeza de los fagos, capacidad de permitiendo de
pero circular en la célula contener un gen 20-25 kb. -Fago T4.
anfitriona. Para lograr completo para
-Fago T7.
esto, tiene los sitios poder examinarlo
cohesivos (o pegajosos) en o secuenciar de -Fago ΦX174.
cada extremo. manera sencilla.
Cósmidos Los cósmidos son vectores -Clonar Puede medir 8 Vectores de
híbridos construidos fragmentos kb o menos; de clonación:
(DIA&GÉN) utilizando partes del grandes de DNA manera que es
cromosoma del fago eucariótico posible insertar ● pJB8
lambda y de DNA hasta 45kb de ● SV40
plasmídico. Contienen la -Permiten DNA. ● c2RB
secuencia “cos” del fago empaquetar ​in
lambda, necesaria para el vitro con una
empaquetamiento del gran eficiencia
DNA del fago dentro de su porque vienen de
cubierta proteica, y λ, la
secuencias plasmídicas de recuperación y el
replicación. El DNA de los trabajo en placa
cósmidos que contiene de petri es más
insertos de DNA se fácil gracias al
empaqueta en la cápside comportamiento
proteica de lambda para del plásmido.
formar partículas fágicas
infectivas. Una vez el
cósmido entra en la célula
huésped, se replica como
un plásmido.

Además presenta las


siguientes características:

1. Gen de resistencia a uno


ó más antibióticos

2. Origen de replicación
del plásmido

3. Una horquilla de
replicación (polilinker)
4. Una o dos secuencias
cos

Cromosoma artificial Un cromosoma artificial Son usados para 100.000 a Clonación


Bacteriano (BAC) bacteriano (BAC) es una genotecas 300.000 pares
(B.ee.t) molécula de ADN utilizada eucarióticas ya de bases 1. pCC1BAC
para clonar secuencias de que permiten la 2. pBeloBAC
ADN en las células clonación de 11
bacterianas (por ejemplo, segmentos muy
E. coli​). Los BAC se suelen largos (100.000 a 3. pUvBBAC
utilizar en la secuenciación 300.000 pb).
4. MCMV
del ADN.
BAC
Integra las características
Lineas Cre
del factor F, el cual es el
único factor de fertilidad 1. pLD53.SC2
de ​E. coli.

Su gran utilización se debe


a su notable capacidad,
gran capacidad y bajo
porcentaje de quimerismo.

Factor F: Plásmido con


replicación autónoma que
transfiere información
genética durante la
conjugación bacteriana.

OriS​: origen de replicación


del factor F

repE: control de la
replicación del plásmido
parA, B, C: control de la
replicación

CMr: cloranfenicol
acetil-transferasa (CAT)
(gen de resistencia a
cloranfenicol​)

LacZ’: con un polilinker en


su interior. Se usa para el
ensayo de
alfa-complementación​.

Forma parte de los Se simula un Los fragmentos ● pRML1


vectores de clonación de cromosoma de de DNA ● pRML2
alta capacidad (200 kb - levadura artificial superiores a 10​6 ● pAYE56
Cromosoma artificial 3,000 kb). que contiene una de pares de Vectores de
de levaduras (YAC) secuencia de base de largo clonación:
Provienen de una molécula ADN bacteriano pueden
(Los locus Adams) de ADN humano, y se para lograr clonarse en ● pYACneo
utilizan para clonar el ADN clonarlo dentro vectores YAC. ● pYAC3
en células de levadura. de la levadura ● pYAC4
(microorganismo Desde 1 kb a 1 ● pCGS966
Cuando las células de Mb. ● pCGS990
levadura crecen y se eucariota).
● pYAC2
dividen, se puede Son utilizados en ● pYAC55
amplificar el ADN del YAC, construcción de ● pYAC RC
para proceder al genotecas
aislamiento y utilizarse genómicas,
para el mapeo y (utilizado en
secuenciación. Proyecto
Pretende imitar las Genoma
características de un Humano).
cromosoma normal de una
levadura. Los YAC tienen un
origen de
Características: replicación
relajado en
● Origen de procariotas, por
replicación (ARS1) lo que en
● 2 secuencias bacterias provoca
teloméricas (TEL); una producción
permite la masiva del vector
independencia del (clonación), pero
cromosoma. tiene un solo
● Centrómero origen de
(CEN4); permite la replicación
correcta estricto de
segregación levaduras, por lo
cromosómica. que al ser
● 2 sitios de insertado en
restricción (EcoRI levaduras solo
y BamHI) una copia será
La levadura más estudiada producida por
y por tanto más utilizada célula
es la ​Sacharomyces
(expresión)​.
cervisiae.

Como ventajas: tiene


mayor número de
secuencias representadas,
menor número de errores
y discontinuidades en un
mapa físico.
Vectores virales Los vectores virales son el Los vectores 8 kb en su -Del virus murino
medio más eficiente para virales son mayoría de la leucemia
(Alelos) transferir genes, permiten principalmente (adenovirus, Moloney (Mo-ML
modificar específicamente utilizados retrovirus, V)
a una célula o a un tejido, durante la lentivirus).
para inducir la expresión terapia génica, -Del virus del
de genes terapéuticos gracias a su < 5kb para AAV sarcoma de Rous
especificidad (virus adeno
Vectores retrovirales. A) Se tienen la asociados)
muestra la estructura de capacidad de
un virus silvestre que llevar el material 40 kb en los de
contiene las secuencias de genético a la herpes virus
empaquetamiento (ψ) y célula indicada. simplex tipo 1
las secuencias de proteínas Pueden ser
Vectores retrovirales virales (gag, pol y env). utilizados para
estudios
Gag:​Codifica para las funcionales
proteínas estructurales biomoleculares y
componentes del gen, cumplira
fundamentales para la tambien con
formación de todas las usos más
estructuras del los específicos de
retrovirus.(p55, p24 cada célula
constituye la cápside y p17
forma la matriz)

pol:​Codifica para la
transcriptasa reversa p50
cuya función es la síntesis
del ADN de doble cadena
Vectores adenovirales
del provirus usando como
patrón la cadena singular
del ARN viral.
Integrasa p31 realiza la
inserción del ADN proviral
en el genoma de la célula
huésped y ribonucleasa
env:​Codifica para las
glicoproteínas de
envoltura (gp 160, gp 120 y
gp 41)
B) Para obtener un vector
retroviral se sustituyen las
unidades gag, pol y env
por un promotor y dos
genes reporteros: el que
confiere resistencia a la
neomicina y el de la
proteína verde
fluorescente (GFP), la
construcción queda
flanqueada por secuencias
de repetición (LTR). C)
Células eucariotas
transformadas con el
retrovirus y que expresan
el gene GFP