Qualidade Microbiológico

Curso de Controle de Qualidade Microbiológico
Profa. Juliana Possatto Fernandes Takahashi (M.Sc.)
IBAP Cursos - www.ibapcursos.com.br

Sumário
1 Introdução.............................................................................. 1
1.1 Classificação taxonômica.............................................................1
1.2 Nome científico...........................................................................1
2 Morfologia das bactérias........................................................5
2.1 Estruturas bacterianas.................................................................7
2.1.1 Pili de conjugação.........................................................7
2.1.2 Parede Celular..............................................................8
2.1.3 Cápsula ou Glicocálix....................................................8
2.1.4 Fímbrias ou Pili.............................................................9
2.1.5 Flagelo.........................................................................9
2.1.6 Filamento Axial.............................................................9
2.1.7 Taxia...........................................................................9
2.1.8 Cílios..........................................................................10
2.1.9 Endósporo..................................................................10
3 Fases de crescimento...........................................................10
3.1.1 Fase Lag (fase de adaptação)......................................10
3.1.2 Fase Log (fase exponencial)........................................11
3.1.3 Fase Estacionária........................................................11
3.1.4 Fase de Declínio.........................................................11
4 Divisão Bacteriana................................................................12
4.1 Fatores que afetam o crescimento bacteriano.............................15
5 Meios de cultura...................................................................15
6 Técnicas de semeadura........................................................16

7 Conservação de culturas......................................................17
8 Técnicas de coloração...........................................................17
8.1 Método da coloração de Gram...................................................18
8.2 Método de Ziehl-Neelsen...........................................................19
9 Biossegurança...................................................................... 20
9.1 Nível de biossegurança I...........................................................20
9.2 Nível de biossegurança II..........................................................21
9.3 Nível de biossegurança III.........................................................22
9.4 Nível de biossegurança IV.........................................................24
10 Fase pré analítica...............................................................25
11 Critérios de rejeição para amostras biológicas..................28
12 Amostras consideradas inadequadas na Microbiologia

28
13 Fase analítica..................................................................... 29
13.1 Temperatura.............................................................................30
13.2 Umidade...................................................................................31
13.3 Tempo.....................................................................................31
14 Fase pós analítica...............................................................33
15 Laudo................................................................................. 33
16 Indicadores de qualidade na Microbiologia.......................35
17 Controle de processos automatizados...............................36
18 Controle de qualidade interno...........................................38
19 Ensaios de proficiência......................................................41
20 Requisitos para o ensaio de proficiência...........................42


21 Controles alternativos........................................................47
22 Análise crítica dos resultados............................................48
23 Causas de falhas................................................................49
23.1 Participação..............................................................................49
23.2 Processo...................................................................................50
24 Planos de ação...................................................................51
25 Referências Bibliográficas...........................................................53

1 Introdução
1.1 Classificação taxonômica

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Divide-se em 7 níveis:
Reino
Divisão
Classe
Ordem
Família
Gênero
Espécie
1.2 Nome científico
Gênero (1ª maiúscula)
Espécie (1ª minúscula)
Ex: Pseudomonas aeruginosa, Candida albicans, Giardia lamblia.
Bactérias clássicas: se reproduzem assexuadamente por fissão
binária, não possuem núcleo típico como os Eucariontes. As paredes
células são rígidas (algumas exceções como micoplasmas);

Clamídias: são parasitas celulares obrigatórios q são capazes de se
reproduzir em certas células humanas e são encontradas em 2

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estágios;
Riquétsias: são parasitas celulares obrigatórios, em forma de
bacilo ou cocobacilo, que se reproduzem por fissão binária;
Micoplasmas: não possuem a parede rígida das bactérias e são
encontradas em grande variedade de formas, sendo mais comum
em forma de coco;
Fungos: eucariontes, de parede celular rígida, heterótrofos e
utilizam vários substratos orgânicos como nutrientes;
Protozoários: microrganismos de vários tamanhos e formas e
podem ser parasitas ou de vida livre. Eucariontes e podem ser
transmitidos por vetores;
Helmintos: vermes parasitas que pertencem ao Reino Animal. São
divididos em Trematódos, Cestodos e Nematodos (clinicamente
importantes);

Artrópodes: possuem esqueleto externo de quitina, segmentos
corporais, juntas nas patas e outras características. Grande

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importância como vetor de doenças.
Figura 1. Diferenças entre células procariontes e eucariontes.
Fonte:http://www.apoioescolar24horas.com.br/salaaula/estudos/biol
ogia/130_origem_vida/comparacao.htm

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Figura 2. Representação da célula eucarionte. Fonte: Madigan et
al., 2004.
Figura 3. Representação da célula procarionte. Fonte: Madigan et
al., 2004.

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Figura 4. Representação de tamanho em relação aos vírus,
procariontes e eucariontes. Fonte: Madigan et al., 2004.
2 Morfologia das bactérias
As bactérias podem ter morfologias variadas, como segue
abaixo:
 Cocos
 Cocobacilo
 Bacilo
 Espirilo
 Espiroqueta
 Vibrião

Os cocos são redondos podendo ser ovais, alongados ou
achatados em uma das extremidades. Quando algumas bactérias

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em forma de cocos se dividem, as células podem permanecer
unidas uma às outras surgindo cocos aos pares.
 Diplococos (pares)
 Estreptococos (cadeias)
 Estafilococos (cachos)
Menos frequentes e podendo se dividir em dois ou três planos
e permanecem unidos em 8 indivíduos temos a Sarcina.
Os Bacilos ao contrário dos cocos são poucos seus arranjos ou
agrupamentos:
 Diplobacilos (pares)
 Estreptobacilos (cadeias)
Alguns bacilos se assemelham aos cocos, e com isso são
chamados de cocobacilo, lembrando que sua maior parte são
Bacilos isolados. O termo Bacilos significa determinada forma e o
termo Bacillus significa o gênero escrito com letra Maiúscula e em
itálico.

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Figura 5. Ilustração de alguns tipos de arranjos de bactérias.
2.1 Estruturas bacterianas
2.1.1 Pili de conjugação
Utilizada na transferência de plasmídeos conjugativos.
Importante estrutura para a variabilidade genética das bactérias.
2.1.2 Parede Celular
Estrutura rígida presente na maioria das bactérias.

Funções: - manutenção da forma bacteriana; proteção osmótica da
bactéria
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Bactérias Gram-positivas - peptideoglicano (90%) - ácidos teicóicos
(parede) e lipoteicóicos (membrana citoplasmática)
Funções: - antígenos bacterianos - regulação das autolisinas -
ligação às células do hospedeiro
Bactérias Gram-negativas - espaço periplasmático - membrana
externa: impede a saída de proteínas periplasmáticas fosfolipídios.
2.1.3 Cápsula ou Glicocálix
Composição: polissacarídeos ou polipeptídios → Substâncias
poliméricas extracelulares
Funções:
- adesão celular (biofilme): receptores específicos
- aumento da capacidade invasiva: escapam da fagocitose
Ex: Streptococcus pneumoniae
- reservatório de água e nutrientes: proteção ao dessecamento.

2.1.4 Fímbrias ou Pili
Presente na maioria das bactérias Gram-negativas

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Funções: adesão às células do hospedeiro e outras superfícies
Ex: Neisseria gonorrhoeae, E. coli - fímbria F: conjugação.
2.1.5 Flagelo
A maioria dos bacilos possuem flagelos; cocos raramente.
Funções: - motilidade: rotação helicoidal (saca-rolha).
2.1.6 Filamento Axial
Propulsão em espiral → invasão de tecidos Ex: Treponema pallidum.
2.1.7 Taxia
Movimento direcionado por um sinal químico (quimiotaxia) ou físico
(fototaxia) - a favor ou contra as substâncias;
2.1.8 Cílios

São formados por tubulina e envoltos pela membrana
citoplasmática, apresentando movimento ondulante.

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2.1.9 Endósporo
São formas de resistência bacteriana formado por Gram-positivos,
como por exemplo, Bacillus subtilis. Consideradas estruturas de
resistência que podem ser altamente desidratadas e resistentes ao
calor, agentes químicos e radiação. Importante saber que não são
estruturas de reprodução.
3 Fases de crescimento
3.1.1 Fase Lag (fase de adaptação)
É o período que ocorre pouca ausência de divisão celular. Durante
esse tempo, as células se encontram em um estado de latência.
Esta população está passando por um período de intensa atividade
metabólica, principalmente síntese de enzimas e de moléculas
variadas.
3.1.2 Fase Log (fase exponencial)

A partir de um determinado momento, as células iniciam seu
processo de divisão entrando no período de crescimento. Durante

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esse período, a reprodução celular encontra-se extremamente ativa,
e o tempo de geração atinge um valor constante, é o período de
maior atividade metabólica da célula.
3.1.3 Fase Estacionária
Em determinado momento a velocidade de crescimento diminui, o
número de morte celular é equivalente ao número de células novas,
e a população se torna estável. A atividade metabólica de cada
célula também decresce nesse estágio, há pouco nutriente e
acúmulos de produtos de degradação.
3.1.4 Fase de Declínio
Em determinado momento, a população microbiana entra na fase de
morte celular, pois o número de células mortas excede o de células
novas. Essa fase continua até que a população tenha diminuído para

uma pequena fração do número de células da fase anterior, ou até
que tenha desaparecido totalmente. Não há nutriente.

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Figura 6. Fases de crescimento microbiano. Fonte:
http://essaseoutras.xpg.uol.com.br/fisiologia-e-crescimento-
bacteriano-resumo/
4 Divisão Bacteriana
É considerado o aumento do número de indivíduos e não do
tamanho celular;

Tempo de geração: intervalo de tempo p/ que cada microrganismo
se divida, ou p/ que a população em uma cultura duplique em

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número;
Brotamento: < nº de bactérias (forma um broto que quando
atinge o tamanho da célula parental se separa);
Fissão Binária:
(1) Alongamento da célula e a replicação do DNA
cromossomal;
(2) Início da invaginação da parede celular e da
membrana plasmática;
(3) Em um determinado momento, as duas seções da
parede celular se encontram;

(4) Produção de duas células individuais idênticas à célula
mãe;

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Figura 7. Esquema de fissão binária.
Fonte:http://www.ebah.com.br/content/ABAAAAx_EAA/microbiologi
a-geral?part=2
Fragmentação: filamentos fragmentam em células pequenas
cocóides ou em forma de bastão. Cada 1 delas dá origem a um
novo crescimento;
Formação de exósporo: desenvolvem septos nas terminações das
hifas e cada exósporo pode desenvolver um novo organismo.
Acontece nos actinomicetos;


4.1 Fatores que afetam o crescimento bacteriano
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Fatores físicos: pH, temperatura, pressão hidrostática, oxigênio,
umidade e pressão osmótica.
Fatores nutricionais: fontes de carbono, fontes de nitrogênio,
enxofre, fósforo, oligoelementos e vitaminas.
5 Meios de cultura
• Meio seletivo - Favorece o crescimento de alguns organismos,
mas suprime o crescimento de outros;
Ex: ágar Sabouraud.
• Meio diferencial - Possui um constituinte que causa uma
mudança observável no meio quando ocorre uma reação bioquímica
específica;
Ex: ágar Mac Conckey.
• Meio de enriquecimento - Contêm nutrientes especiais que
permitem o crescimento de um organismo específico que não deve
estar presente em número suficiente para permitir ser isolado e
identificado, mas não suprime outros microrganismos de crescerem;

Ex: Ágar BHI.

• Meios redutores - Meios com reagentes, como o tioglicolato de
sódio, que é capaz de se combinar com o oxigênio dissolvido

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eliminando este elemento do meio de cultura (específico para
microrganismos anaeróbicos).
•
6 Técnicas de semeadura
Quantificação direta:
- Contagem em placas;
- Filtração;
- Método do número mais provável (NMP);
- Contagem direta ao microscópio;
Quantificação indireta:
- Turbidimetria;
- Atividade metabólica;
- Peso seco;

7 Conservação de culturas
• Culturas podem ser refrigeradas (4 a 10ºC);

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• Mantidas em nitrogênio líquido (-196ºC);
• Em freezers (-70ºC a -120ºC);
• Desidratadas e fechadas a vácuo (Liofilização);
8 Técnicas de coloração
Colorações simples: usa um único corante, ñ distinguem organismos
ou estruturas através de diferentes reações de coloração.
Ex: azul de metileno, safranina, cristal violeta.
Colorações diferenciais: Usa-se 2 ou mais corantes que reagem de
maneira diferente a diversos tipos ou partes de bactérias permitindo
que essas sejam diferenciadas.
Ex: Gram e álcool ácido-resistente.
Colorações especiais: Identificam diversas estruturas especializadas.

Ex: Coloração para flagelos (aparecem escuros c/a prata ou
vermelhas com carbol-fucsina);

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Ex: Coloração para esporos de Schaeffer-Fulton (endósporos retêm
o verde-malaquita, células vegetativas coram safranina e aparecem
vermelhas);
8.1 Método da coloração de Gram
• Cobrir toda a lâmina com solução cristal violeta (corante roxo),
aguardar um minuto;
• Lavar rapidamente em água destilada;
• Cobrir a lâmina com solução de Iugol (mordente) por um
minuto;
• Lavar em água destilada;
• Inclinar a lâmina e gotejar álcool-acetona ou álcool
absoluto (cerca de 15 segundos).

• Lavar a lâmina rapidamente em água corrente;
• Cobrir com fucsina de gram e aguardar 30 segundos;
• Lavar a lâmina em água destilada e secar (sem esfregar);
• Colocar uma gota de óleo de imersão sobre a lâmina e
observar em objetiva de imersão (IOOX).
8.2 Método de Ziehl-Neelsen
• Lâmina fixada pelo calor;

• Cobrir o esfregaço com fucsina fenicada;
• Aquecer em chama até emitir vapores. A partir disto, iniciar a
contagem de cinco minutos; 14

• Lavar a lâmina em água, suavemente;
• Colocar álcool-ácido, até que não se desprenda mais corante
(cerca de dois minutos);

• Lavar a lâmina com água;
• Cobrir o esfregaço com azul-de-metileno (durante trinta
segundos);
• Lavar a lâmina com água;
• Deixar secar e observar ao microscópio com a objetiva de
imersão.
9 Biossegurança
9.1 Nível de biossegurança I
• É adequado ao trabalho que envolva agente com o menor
grau de risco para o pessoal do laboratório e para o meio ambiente;
• O trabalho é conduzido, em geral, em bancada. Os
equipamentos de contenção específicos não são exigidos;
• O pessoal de laboratório deverá ter treinamento específico nos
procedimentos realizados no laboratório;

• O laboratório deve ser desenhado de modo a permitir fácil
limpeza e descontaminação;
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• É recomendável que a superfície das bancadas seja
impermeável à água e resistente a ácidos, álcalis, solventes
orgânicos e a calor moderado;
• Os espaços entre as bancadas, cabines e equipamentos
devem ser suficientes de modo a permitir acesso fácil para limpeza;
• Cada laboratório deve possuir uma pia para lavagem das
mãos;
• São agentes biológicos que não demonstraram capacidade
comprovada para causar doenças no homem e animais sadios;
• Ex: Lactobacillus spp;
9.2 Nível de biossegurança II
• O pessoal de laboratório deve ter treinamento técnico
específico no manejo de agentes patogênicos e devem ser
supervisionados por cientistas competentes;

• O acesso ao laboratório deve ser limitado durante os
procedimentos operacionais;
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• Determinados procedimentos nos quais exista possibilidade de
formação de aerossóis infecciosos devem ser conduzidos em cabines
de segurança biológica ou outro equipamento de contenção física;
• Uma autoclave deve estar disponível para descontaminação
no interior ou próximo ao laboratório de modo a permitir a
descontaminação de todo material previamente ao seu descarte;
• Ex: Escherichia coli;
9.3 Nível de biossegurança III
• É aplicável aos locais onde forem desenvolvidos trabalhos com
agentes infecciosos Classe 3, que possam causar doenças sérias e
potencialmente letais, como resultado de exposição por inalação;
• O pessoal do laboratório deve ter treinamento específico no
manejo de agentes patogênicos e potencialmente letais;
• Todos os procedimentos que envolverem a manipulação de
material infeccioso devem ser conduzidos dentro de cabines de

segurança biológica ou outro dispositivo de contenção física. Os
manipuladores devem usar roupas de proteção individual;

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• O laboratório deverá ter instalações compatíveis para o NB-3.
• Para alguns casos, quando não existirem as condições
específicas para o NB-3, particularmente em instalações
laboratoriais sem área de acesso específica, ambientes selados ou
fluxo de ar unidirecional, as atividades de rotina e operações
repetitivas podem ser realizadas em laboratório com instalações NB-
2, acrescidas das práticas recomendadas para NB-3 e o uso de
equipamentos de contenção para NB-3;
• Devem ser usadas máscaras faciais apropriadas ou
respiradores nas salas onde são manipulados animais de
experimentação;
• Os sistemas convencionais de caixas só poderão ser usados
quando todo o pessoal utilizar dispositivos e roupas protetoras.
Esses dispositivos devem incluir roupa completa do tipo escafandro
e respiradores;

• As linhas de vácuo devem estar protegidas com filtro de ar
com elevada eficiência (filtros HEPA, High Efficiency Particulated Air)

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e coletores com líquido desinfetante;
• Ex: Mycobacterium tuberculosis
9.4 Nível de biossegurança IV
• Para agentes exóticos e perigosos que exponham o indivíduo a
um alto risco de contaminação de infecções que podem ser fatais,
além de apresentarem um potencial relevado de transmissão por
aerossóis;
• A equipe do laboratório deverá ter um treinamento específico
e completo direcionado para a manipulação de agentes infecciosos
extremamente perigosos e deverá ser capaz de entender as funções
da contenção primária e secundária, das práticas padrões
específicos, do equipamento de contenção e das características do
planejamento do laboratório;
• Os trabalhadores deverão ser supervisionados por cientistas
competentes, treinados e com vasta experiência no manuseio destes

agentes. O acesso ao laboratório deverá ser rigorosamente
controlado pelo diretor. A instalação deverá ser em um edifício

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separado ou em uma área controlada dentro do edifício, que seja
totalmente isolada de todas as outras;
• As manipulações com agentes de classe de risco 4, conduzidas
no laboratório, devem ser realizadas em cabine de segurança
biológica Classe III, ou cabines Classes I ou II, neste caso usadas
em associação com roupas de proteção pessoal com pressão
positiva, ventiladas por sistema de suporte de vida;
• Ex: Vírus Ebola;
10 Fase pré-analítica
• Suspeita clínica, escolha do teste microbiológico mais
adequado, a determinação do melhor sítio (evitando ao máximo a
contaminação por agentes da microbiota residente);
• Melhor momento clínico para a obtenção da amostra são
importantes para a acurácia dos testes. Evita o desperdício com
amostras não representativas do processo infeccioso;

• A suspeita do potencial agente etiológico influi na escolha do
melhor método de coleta e meio de transporte específico. Por

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exemplo, na suspeita de infecção por bactérias anaeróbias, o
material deve ser coletado através de punção do sítio clínico,
inoculação em meio apropriado e transporte imediato ao laboratório
de microbiologia;
• A coleta deve sempre ser realizada previamente à introdução
de terapia antimicrobiana ou de sua modificação;
• O volume de amostra interfere na sensibilidade dos testes
microbiológicos e deve ser suficiente para a execução dos diversos
procedimentos solicitados. Amostras insuficientes podem levar a
resultados falso-negativos;
• Informar claramente ao paciente os procedimentos
necessários à coleta da amostra microbiológica;
• Todas as informações sobre coleta, técnicas de assepsia e
transporte de amostras para o diagnóstico microbiológico devem ser
disponibilizadas pelos laboratórios de microbiologia clínica. São
fundamental que sejam utilizados frascos estéreis, com ou sem

meio de transporte, tampados, para evitar contaminação e
vazamentos;
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• A identificação do frasco de coleta nunca deve estar na tampa
ou sobre rótulos;
• A rapidez no transporte das amostras microbiológicas, assim
como na semeadura e execução dos procedimentos microbiológicos,
é fundamental para a manutenção da viabilidade dos
microrganismos;
• Algumas bactérias são especialmente sensíveis às condições
ambientais, incluindo Singela spp., Neisseria gonorrhoeae, N.
meningites, Haemophilus influenzae, Streptococcus pneumoniae e
anaeróbios;
• Comprometimento da eficácia do exame microbiológico:
informação incompleta, requisição inadequada, coleta e transporte
inadequados da amostra clínica, falhas técnicas no processamento
da amostra, demora na liberação do resultado e má interpretação
dos resultados;

• O treinamento específico e reciclagem periódica da equipe
responsável pela coleta das amostras microbiológicas devem ser

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incentivados;
• Toda amostra clínica é potencialmente infectante e deve ser
manuseada com cuidado, utilizando-se os equipamentos de
proteção individual (EPI) preconizados;
11 Critérios de rejeição para amostras biológicas
• A identificação incorreta da amostra;
• A quantidade de material insuficiente para o processamento
dos testes microbiológicos;
• O transporte inadequado em frasco não estéril, não
compatível com o sítio informado, /ou frascos fechados
inadequadamente;
• Amostra incompatível com os exames solicitados.
12 Amostras consideradas inadequadas na Microbiologia
• Material clínico recebido em solução de fixação (formalina);

• Ponta de cateter de Foley;
• Material conservado inadequadamente com relação à

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temperatura (urinas colhidas há mais de 24 horas, que ficaram
guardadas em geladeira, ou colhidas há mais de duas horas, sem
refrigeração);
• Frascos não estéreis;
• Presença de vazamentos, frascos quebrados ou sem tampa,
com contaminação na superfície externa;
• Mais de uma amostra de urina, fezes, escarram, ferida colhida
no mesmo dia e da mesma origem;
• Swab único com múltiplas requisições de testes
microbiológicos;
• Swab seco;
• Culturas para anaeróbios recebidas em condições não
apropriadas.
13 Fase analítica
• Troca de amostras;

• Vidrarias e recipientes mal lavados;
• Reagentes: contaminados, mal conservados, com validade

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vencida, erros no preparo dos reagentes, concentração errada;
• Equipamentos: não calibrados, erros no protocolo de
automação;
• Tipos de semeadura;
A incubação deve seguir alguns parâmetros determinados.
• Para bactérias não exigentes em secreções, urina, fezes, etc.
incubar em estufa em atmosfera ambiente;
• Para bactérias exigentes tais como: pneumococos, hemófilos e
Neisserias ou fastidiosos incubar em microaerofilia (modo a obter 3-
5% de CO2);
• Para Campylobacter é necessária tensão de 5 a 10% de CO2 e
restrição de O2 sendo conveniente o uso de geradores específicos;
• Para bactérias anaeróbias, incubar em sistema de anaerobiose
estrita;

13.1 Temperatura
• 36°C +/- 1°C é a temperatura para a grande maioria das

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bactérias da rotina, incluindo os anaeróbios e micobactérias;
• Fungos podem ser cultivados a 30°C ou 25 e 35°C;
• Temperatura a 42°C pode ser necessário para isolar espécies
de Campylobacter, Acinetobacter baumannii, e algumas espécies de
Pseudomonas;
13.2 Umidade
• Bactérias fastidiosas e exigentes (Neisserias patogênicas e
hemófilos) crescem melhor se forem incubadas num recipiente com
tensão de 5% de CO2 com um chumaço de algodão embebido em
água estéril;
13.3 Tempo
• 1° leitura é realizada com 18 a 24 horas de incubação;
• Para anaeróbios é recomendável a primeira leitura com 48 a
72 horas de incubação;

• Bactérias exigentes ou de crescimento lento o período de
incubação pode ser bastante prolongado: Micobactérias de 3 a 45

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dias; Nocardia, 4 a 7 dias; Brucella 3 a 7 dias (hemoculturas até 45
dias).
• Muitas vezes é impossível definir o significado clínico de um
isolado sem conhecer sua identificação;
• Todo crescimento deve ter evidências microbiológicas, clínicas
e epidemiológicas
• Conhecer os principais patógenos esperados para cada
material biológico;
• Os componentes da microbiota residente (Micrococcus,
Estafilococos coagulase negativo, etc) apresentam menor valor
como agentes infecciosos, sendo de fácil interpretação na maioria
dos casos. Porém, em condições específicas podem participar como
agentes patogênicos;
• Observar se a cultura é pura ou se existem diferentes tipos de
colônias, neste caso, se há predomínio de um tipo;

• As culturas puras apresentam maior valor para diagnóstico,
especialmente em sítios intensamente colonizados;

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• Detectar falhas nas condições de coleta e/ou processamento
laboratorial e uso de antimicrobianos;
• Caracterização de infecção por anaeróbios – cultura negativa
com bacterioscopia revelando microrganismos com características
morfológicas de anaeróbios;
• Quantificação – em culturas quantitativas os achados da
bacterioscopia direta devem coincidir com as contagens obtidas em
cultura (urocultura, BAL...)
14 Fase pós analítica
• Análise de consistência dos resultados;
• Liberação dos laudos;
• Transmissão e arquivamento dos resultados;
• Consultoria técnica;
• Armazenamento da amostra do paciente;

15 Laudo
• Do laboratório – nome, endereço completo, número do

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registro no conselho profissional, responsável técnico com seu
registro no conselho profissional;
• Do paciente – nome, número do registro no laboratório;
• Do médico solicitante – nome, número do registro no conselho
profissional;
• Da amostra do paciente – tipo, data, hora da coleta ou
recebimento, quando aplicável;
• Do resultado do exame – nome do microrganismo, resultado,
unidade, nome do método, unidade de referência, data da
liberação;
• Do responsável técnico – nome, número do registro no
conselho profissional, assinatura;
• Identificação errada do paciente;
• Transcrição de dados incorreta;
• Resultado ilegível;
• Unidades erradas;

• Não identificação de substâncias interferentes;
• Especificidade, sensibilidade e precisão dos testes não

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adequado;
• Erros na interpretação do resultado;
16 Indicadores de qualidade na Microbiologia
• Representatividade: representar o processo e demonstrá-lo de
forma clara;
• Simplicidade: deve ser de fácil obtenção e ter baixo custo;
• Disponibilidade: além do seu acesso fácil, deve também estar
disponível a tempo;
• Estabilidade: permitir a análise histórica e sua evolução;
• Rastreabilidade: ser possível verificar a origem dos dados que
o gerou;
• Adaptabilidade: ter capacidade de respostas às mudanças;
• Periodicidade dos indicadores = criticidade do processo,
desempenho e melhora contínua do processo;
• Implantar e implementar indicadores da qualidade = grande
desafio para os gestores;

• Necessidade de ampliar conhecimentos nessa área, as
definições e harmonização dos indicadores e as metas a serem

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alcançadas;
• Implantação da cultura na medição de indicadores como uma
ferramenta para a melhoria contínua na gestão dos processos no
laboratório;
• A identificação, a análise e a avaliação dos perigos e riscos
existentes, incluindo:
• Aqueles que impactam na segurança do paciente;
• A monitoração da ocorrência de erros, falhas, eventos
adversos (incluindo os do tipo near miss*) e sentinela, acidente e
incidente;
• A definição de ações de contenção e minimização dos riscos;
• A monitoração dos erros, falhas, acidentes e eventos adversos
por meio de indicadores;
• A avaliação qualitativa ou quantitativa da efetividade da
gestão do risco;

17 Controle de processos automatizados
• Melhoria na relação custo-benefício, precisão, confiabilidade,

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flexibilidade e menor tempo de resposta;
• Necessidade de automação na Microbiologia  aumento no
número de amostras recebidas;
• Investigações epidemiológicas, aumento do número de
microrganismos multirresistentes, novos mecanismos de resistência;
• A automação pode estar presente desde fase pré analítica até
pós analítica;
• O uso de código de barras permite rastrear as amostras
desde a recepção até a liberação do resultado;
• 50 a 70% do tempo gasto pela equipe técnica podem ser
substituído pela automação;
• A decisão da implantação de um sistema automatizado nos
laboratórios depende  tamanho do laboratório, volume de
amostras recebidas diariamente, orçamento disponível, espaço e
metas estabelecidas;

• O mercado apresenta vários tipos de equipamentos para
diversas análises microbiológicas;

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Verificação: é o processo que determina ou confirma o
desempenho esperado do teste antes da implementação na rotina
clínica.
Validação: é o processo de monitoração desse teste, procedimento
ou método, que garante a continuidade do desempenho esperado.
Ela pode ser alcançada por meio de:
• Controle interno da qualidade;

• Testes de proficiência;
• Calibração dos equipamentos;
18 Controle de qualidade interno
• O laboratório deve assegurar a qualidade de todos os insumos
e equipamentos utilizados no processamento na microbiologia;

• Fundamentado em POPs (Procedimento Operacional padrão) –
detalhamento de procedimentos de coleta, transporte, liberação de

14
laudos, critérios de rejeição, entre outros;
• Planilhas de controle de qualidade para todos os processos
executados no laboratório;
• Insumos: devem ser avaliados diariamente, a cada troca de
lote ou de marca;
• Meios de cultura: se fabricados deve ser realizado testes de
performance (pH, esterilidade, etc); se comprados o desempenho
com crescimento e inibição. Em ambas as verificação da validade;
• Cepas padrão: devem ser adquiridas cepas ATCCs ( American
Type Collection) para controle de insumos e processos. As cepas
devem ser armazenadas em freezer a -80°C e usadas no máximo
até a 5ª passagem;
• Bacterioscopia: desempenho dos corantes, tempo empregado
na coloração pelo colaborador e os laudos emitidos, utilizando
lâminas preparadas a partir de um pool de micro-organismos ou

obtidas de amostras clínicas. Em caso de divergências, os
treinamentos são obrigatórios.

14
• Discos de antibióticos: devem ser testados em cepas ATCCs e
analisadas com tabelas do CLSI. Os controles devem ser testados
nas trocas de lotes, troca de fabricante, novo antibiótico em rotina;
• Equipamentos: controle diário de temperatura anotado em
planilhas visíveis aos colaboradores. Qualquer alteração do valor do
intervalo aceitável deve ser comunicada ao supervisor;
• As autoclaves devem ser testadas semanalmente com cepas
de G.stearothermophilus e posterior cultivo em caldo à temperatura
de 55 a 60°C. A ausência de crescimento indica uma corrida estéril;
• As jarras de anaerobiose devem ser testadas a cada uso com
tiras indicadoras de azul de metileno;
• As cabines de segurança devem ser inspecionadas e
controladas pelo fabricante, semestral ou trimestralmente. As datas
em que foram praticados esses controles devem ser anotadas e
afixadas no equipamento, bem como as datas das próximas
revisões;

• Os equipamentos automatizados de identificação bacteriana e
de teste de suscetibilidade devem ser testados a cada novo lote de

14
cartões, placas ou painéis serem utilizados, empregando-se as
mesmas cepas padrão mencionadas anteriormente. As manutenções
preventivas devem ser realizadas e seus registros armazenados;
• Os equipamentos automatizados de hemocultura em geral não
necessitam de controle de qualidade porque o fabricante envia a
cada lote de frasco um certificado que deve ser armazenado;
19 Ensaios de proficiência
• Compõem a garantia da qualidade, ao lado de controle
interno, controle de processos e outras medidas de gestão;
• Monitoram integradamente processos e ambiente de melhoria
contínua;
• Objetivo: identificar desvios sistematizados do processo e
desvios que não são percebidos facilmente por outras ferramentas
de controle;

• Concentração na fase analítica: processamento, inicial da
amostra, realização do ensaio e interpretação de resultados;

14
• Regulamentação no Brasil: RDC 302/2005;
• Comparações interlaboratoriais --> múltiplos laboratórios
recebem amostras idênticas ou similares e realizam
simultaneamente suas análises.
• O provedor do programa compila todos os resultados e
disponibiliza para os participantes relatórios que permitem identificar
o nível de acerto e/ou de afastamento do resultado esperado;
• Comentários que ajudam na análise dos dados e na avaliação
de possíveis causas de desvios;
• Não pode ser utilizado como substituição a controles internos
e outras ferramentas de controle de processo;
• Estão vinculados a desvios sistêmicos, vícios do processo que
não são ou não foram percebidos pelas demais formas de controle;

20 Requisitos para o ensaio de proficiência
• Cobertura: para abranger o maior escopo possível, o

14
laboratório deve selecionar os programas conforme seu menu de
exames, modelos de programa e formas de inscrição disponíveis.
Existem programas modularizados e outros com inscrição por
pacote. Entretanto, há também programas específicos, como:
• Bacteriologia ambulatorial e hospitalar da ControlLab, cujo
formato difere para atender às demandas específicas do público do
laboratório.
• Frequência: esse requisito é composto pela quantidade de
rodadas anuais, quantidade de materiais distintos oferecidos a cada
rodada e quantidade de dosagens realizadas em cada material. A
análise de um único material em rodadas mensais difere da análise
de três materiais a cada trimestre, embora ambos somem 12
análises anuais. Enquanto o primeiro mantém um fluxo mais
frequente na rotina, o segundo dá mais subsídios para a
identificação. de desvios sistêmicos. De maneira análoga, a análise

repetida de um mesmo material permite avaliar imprecisão e, em
alguns casos, estimar a incerteza.

14
• A análise repetida é menos usual no segmento clínico, uma
vez que são adotados controles internos com maior eficiência para
esse fim.
• Informações disponíveis: o participante deve ter a sua
disposição informações do programa, instruções detalhadas sobre
armazenagem, manuseio e análise dos materiais, restrições e
características específicas do programa (que podem impactar no
manuseio, análise e na interpretação dos resultados), instruções
para registro de dados e resultados, prazos relacionados e descrição
do tratamento estatístico dos resultados, critérios e métodos de
avaliação de desempenho.
• Logística de distribuição: o modelo de distribuição e a
embalagem são fundamentais para garantir estabilidade e
segurança durante o transporte.
• Qualidade dos materiais: a matriz deve ser similar à analisada
na rotina, buscando-se sempre um equilíbrio com o risco à

segurança e à estabilidade do material. Os materiais precisam ser
homogêneos (não variar entre participantes) e estáveis. As

14
concentrações e os elementos analisados devem variar conforme a
rotina. O provedor deve abranger as cepas de maior relevância na
rotina, no que se refere à frequência de ocorrência, grau de
dificuldade e importância clínica, por exemplo. No caso de análises
quantitativas, é necessário abranger o intervalo de resultados que
ocorrem na rotina e, para os positivos e negativos, devem-se variar
os resultados de forma não previsível para o participante. O volume
fornecido para o participante deve ser compatível com sua
demanda.
• Tratamento de dados e modelo estatístico: o tratamento de
dados e modelos estatísticos adotados devem ser claramente
identificados. Algumas normas internacionais descrevem métodos
consolidados para esse fim, como a ISSO 13528 e o Protocolo
Harmonizado da IUPAC. Se nenhum modelo descrito na literatura se
aplicar, o provedor deve descrevê-lo e embasá-lo.

• Critérios de avaliação e de determinação de desempenho: a
própria ISO/IEC 17043, assim como as demais normas citadas para

14
o tratamento dos dados, apresenta modelos para a determinação de
desempenho. Enquanto para ensaios quantitativos comumente se
determinam critérios pautados no valor de tendência central obtido
pelos participantes (média ou mediana), para ensaios qualitativos, o
resultado aceito é comumente definido já no preparo de controle de
qualidade do material, mediante qualificação prévia da matéria-
prima e ensaios de controle (homogeneidade e estabilidade), e
validado pelo consenso com os participantes ou laboratórios de
referência.
• Relatórios e prazos: os relatórios devem ter todas as
informações necessárias à análise e interpretação de resultados
para o participante, abrangendo sua avaliação individual, um
resumo estatístico de todos os participantes e discussões técnicas
pertinentes.
• Política de sigilo: exceto se definido de maneira diferente por
alguma legislação do país, os dados individuais são comumente

disponibilizados apenas para o próprio. Para terceiros, apenas
quando autorizado pelo laboratório. Tal política é comumente

14
declarada pelo provedor na fase de contratação.
• Custo: esta característica tem relação direta com o modelo do
programa, dos ensaios relacionados, da qualidade do material
envolvido e com a estrutura operacional dedicada pelo provedor. O
custo deve ser ponderado diante do benefício que a ferramenta
agrega.
21 Controles alternativos
• Análises não contempladas por ensaio de proficiência;
• Complexidade da sua organização e a dificuldade de definir
resultados esperados (ou de referência) ajudam na compreensão de
porque eles não devem ser vistos como substitutos do ensaio de
proficiência;
• Comparação interlaboratorial: similar ao ensaio de proficiência,
na qual o laboratório troca amostras com laboratórios que adotam
metodologias similares. Deve-se definir o resultado de referência

com cautela (p.ex., algum laboratório com maior experiência) e
proceder discussões produtivas entre os participantes em caso de

14
discordância de resultados.
• Simples cego: introdução na rotina de material com resultado
esperado já determinado, como cepa controle, materiais de
pacientes já analisados, para comparação dos resultados diante do
previamente definido.
• Duplo cego: introdução simultânea na rotina de duas ou mais
amostras de uma mesma origem para comparação de
compatibilidade de resultados.
22 Análise crítica dos resultados
• Reproduzir exatamente a rotina ao analisar os itens do
programa;
• Ter pleno do conhecimento do programa utilizado;
• Análise em tempo hábil os relatórios do programa;

• Envolvimento da equipe no processo para a identificação de
causas de desvio e desenho de um plano de ação para corrigi-lo

14
(correção) e evitar sua repetição (ação corretiva);
• Ideal não existirem falhas nos ensaios de proficiência;
• Dois grupos para causa de falhas: participação e de processo;
23 Causas de falhas
23.1 Participação
• Armazenagem e manuseio impróprio do material;
• Falha na reconstituição ou diluição do material, ou uso de
fator matemático errado;
• Uso de pipetadores com calibração imprópria para
reconstituição ou diluição;
• Reporte em unidade ou formato diferente do solicitado pelo
provedor;
• Dados (p.ex., sistema analítico) informados errados ou
incompletos;

• Falha na transcrição dos resultados: digitação, troca de
resultado, etc;
14
• Propagação de erro por troca de informação com outro
participante;
23.2 Processo
• Inadequação do corante: precipitação, contaminação ou
performance;
• Ineficiência da sistemática de controle do corante:
periodicidade ou ausência;
• Ineficiência da sistemática de controle do meio: ausência de
controle de esterilidade ou de performance a cada lote diante da
capacidade de crescimento do microrganismo relevante e/ou de
inibição – meios seletivos;
• Ineficiência da sistemática de controle de reagentes e
soluções: ausência ou ineficiência do controle de esterilidade, da

positividade/negatividade a microrganismos específicos, da resposta
da absorbâncias da turvação, etc;

14
• Ineficiência da sistemática de controle de testes bioquímicos:
ausência ou ineficiência do controle de esterilidade e performance;
• Falha na preservação e no controle de microrganismos em
armazenagem, procedimento de reativação, manuseio, testes de
viabilidade, identificação, características primárias e pureza;
• Procedimento ineficiente de limpeza das lâminas (sujeira e
gordura);
• Má qualidade do esfregaço a respeito de espessura, forma e
comprimento;
• Fixação pelo calor: sub aquecimento com perda do esfregaço
ou superaquecimento provocando destruição das células;
• Descoloração excessiva: pode gerar falso Gram-negativo;
• Espessura do meio fora do padrão: pode gerar falsa
sensibilidade;
• Alça microbiológica fora da especificação de volume;

• Manutenção preventiva ineficiente, incompleta ou inexistente
do microscópio;
14
• Treinamento aquém do microscopista em alguma etapa do
processo ou na leitura;
24 Planos de ação
• Análise conjunta de todos os resultados reportados para o
ensaio que apresentou falha: no caso de um programa com
múltiplos materiais na rodada, mesmo para ensaios qualitativos, os
dados devem ser analisados de forma comparativa para avaliar
tendência;
• Análise de resultados passados: a análise conjunta de
resultados passados ajuda a verificar recorrência ou possíveis
indícios do início da falha a partir de comportamentos tendenciosos.
No caso de recorrência, aponta para a possibilidade de não se ter
agido sob a causa raiz ou de as ações corretivas não terem sido
efetivas;

• Definição da causa raiz: a análise da causa deve ser profunda
para garantir a eficácia das ações a serem definidas;

14
• Análise de impacto em resultados da rotina e ações
decorrentes: é importante que o laboratório avalie a propagação do
erro em resultados de paciente e avalie essas situações quanto às
suas possíveis consequências para o diagnóstico e tratamento;
• Definição de ações corretivas: as ações devem agir na causa
raiz para eliminá-la e evitar que ela volte a ocorrer. A definição das
ações deve incluir prazos e responsáveis (gravidade da falha e risco
de propagação);
• Controle e verificação de eficácia das ações: respeitar os
prazos estimados e da verificação da eficácia das ações. O não
cumprimento do planejado ou de identificação de ineficácia, é
fundamental determinar o possível impacto e traçar um novo plano
de ação. A verificação da eficácia pode ocorrer pela análise de novo
material do ensaio de proficiência ou aguardar uma nova rodada do
programa;

25 Referências Bibliográficas
Agência Nacional VISA. Módulo de Procedimentos Laboratoriais: da

14
Requisição do Exame à Análise Microbiológica. [acesso em 2016
nov 05]. Disponível em:
http://www.anvisa.gov.br/servicosaude/manuais/microbiologia/m
od_3_2004.pdf.
Kayser FH , Bienz KA, Eckert J, Zinkernagel RM. Medical
Microbiology.10th Ed., Ed.Thieme. 2005.
Madigan MT, Martinko JM, Bender KS, Buckley DH, Stahl DA.
Microbiologia de Brock. 14ª Ed. Artmed Editora. 2016.
Sociedade Brasileira de Patologia Clinica e Medicina Laboratorial.
Boas práticas em Microbiologia Clínica. [acesso em 2016 out 15].
Disponível em: file:///C:/Users/npq/Downloads/Microbiologia
%20(1).pdf.
Tortora GJ, Funke BR, Case CL. Microbiologia. 19 Ed.Art Med. 2003.
Trujillo LM, Castejón MJ, Yamamoto LSU, Oshiro M, Bastos LT,
Carvalho MDFH, Carvalho ML. Temporality of biological samples

and products at the Instituto Adolfo Lutz. Revista do Instituto
Adolfo Lutz (Impresso). 71(2):400-404, 2012.

14

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11 Critérios de rejeição para amostras biológicas..................28

12 Amostras consideradas inadequadas na Microbiologia

16 Indicadores de qualidade na Microbiologia.......................35

17 Controle de processos automatizados...............................36

18 Controle de qualidade interno...........................................38

20 Requisitos para o ensaio de proficiência...........................42

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22 Análise crítica dos resultados............................................48

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1.1 Classificação taxonômica

1.2 Nome científico

Gênero (1ª maiúscula)

Espécie (1ª minúscula)

Ex: Pseudomonas aeruginosa, Candida albicans, Giardia lamblia.

Bactérias clássicas: se reproduzem assexuadamente por fissão

binária, não possuem núcleo típico como os Eucariontes. As paredes

células são rígidas (algumas exceções como micoplasmas);

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reproduzir em certas células humanas e são encontradas em 2

Riquétsias: são parasitas celulares obrigatórios, em forma de

bacilo ou cocobacilo, que se reproduzem por fissão binária;

Micoplasmas: não possuem a parede rígida das bactérias e são

encontradas em grande variedade de formas, sendo mais comum

Fungos: eucariontes, de parede celular rígida, heterótrofos e

utilizam vários substratos orgânicos como nutrientes;

Protozoários: microrganismos de vários tamanhos e formas e

podem ser parasitas ou de vida livre. Eucariontes e podem ser

transmitidos por vetores;

Helmintos: vermes parasitas que pertencem ao Reino Animal. São

divididos em Trematódos, Cestodos e Nematodos (clinicamente

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corporais, juntas nas patas e outras características. Grande

Figura 1. Diferenças entre células procariontes e eucariontes.

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Figura 2. Representação da célula eucarionte. Fonte: Madigan et

Figura 3. Representação da célula procarionte. Fonte: Madigan et

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Figura 4. Representação de tamanho em relação aos vírus,

procariontes e eucariontes. Fonte: Madigan et al., 2004.

2 Morfologia das bactérias

As bactérias podem ter morfologias variadas, como segue

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achatados em uma das extremidades. Quando algumas bactérias

unidas uma às outras surgindo cocos aos pares.

Menos frequentes e podendo se dividir em dois ou três planos

e permanecem unidos em 8 indivíduos temos a Sarcina.

Os Bacilos ao contrário dos cocos são poucos seus arranjos ou