Manual de Bioquímica General

Agua

La vida en la tierra, desde su origen La naturaleza polar del agua da lugar a la

mismo, se ha desarrollado siempre con la atracción electrostática entre sus moléculas. El
ayuda del agua, que ha provisto a los hidrógeno de una molécula, en virtud de su
organismos desde los principios de su carga parcialmente positiva, es atraído hacia
evolución hasta la actualidad, de un ambiente el oxígeno de otra molécula que a su vez
en el que las moléculas que los constituyen posee una carga parcialmente negativa. De
se han multiplicado en número y complejidad. esta manera, cada hidrógeno de una molécula
En consecuencia, la fisiología de los seres puede ser compartido con los oxígenos de
vivos está íntimamente ligada desde sus otras moléculas, del mismo modo en que se
mismos niveles moleculares a las propiedades comparten los electrones de dos átomos,
de este solvente vital. cuándo estos forman una unión covalente, a
este tipo de interacción o atracción entre las
A causa de su ubicuidad es considerada, con
moléculas del agua se le llama puente de
frecuencia, un líquido inerte, meramente
hidrógeno, figura 1.2.
destinado a llenar espacios en los organismos
vivos. Pero en realidad, el agua es una
sustancia de gran reaccionabilidad, con
propiedades poco frecuentes, que la
diferencian mucho, tanto física como
químicamente, de la mayoría de los líquidos
corrientes. El agua posee, elevados puntos de
fusión, la temperatura de ebullición más alta,
el calor específico de vaporización más alto, el
calor de fusión y tensión superficial elevados.
Estas propiedades indican que en el agua las
fuerzas de atracción entre las moléculas y, por Figura 1.1 Estructura de la molécula de agua.3
tanto, su cohesión interna, son relativamente
elevadas.
E El hecho de que los puentes de hidrógeno son en
Los átomos de hidrógeno y oxígeno del agua
realidad protones que se comparten entre dos
se acomodan en una orientación no lineal
átomos de oxígeno, y de que el movimiento de
donde el enlace H-O-H forma un ángulo de
estos es más lento que el de los electrones en
104.5°, figura 1.1.
una unión covalente, es lo que hace que estas

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uniones sean más débiles que las covalentes (4.5
kcal/mol vs. 110 kcal/mol, respectivamente).
Debido a que en la molécula e agua el oxígeno
tiene situados sus orbitales electrónicos de modo
tetraédrico, cada molécula de agua solo puede
formar puentes de hidrógeno estables, con las
otras cuatro moléculas vecinas que se
encuentran en los vértices del tetraedro que
forman los orbitales del oxígeno.
A su vez, esta propiedad explica la extraordinaria
capacidad del agua para actuar como solvente de
los compuestos polares.
Los iones ya sean positivos o negativos de una
red cristalina son atraídos por las moléculas
dipolares del agua y se solubilizan. Una vez en
solución, tanto los iones con carga positiva como
los de carga negativa, son rodeados por capas
protectoras de moléculas de agua, de modo que
disminuye la interacción entre estos iones con
cargas opuestas.
Figura 1.2 Puentes de hidrógeno entre dos
moléculas de agua.3
Los ejemplos de los compuestos polares que
disuelven fácilmente en agua son moléculas
orgánicas pequeñas que contienen uno o más
átomos electronegativos (tales como oxígeno
o nitrógeno), incluyendo los alcoholes, las
aminas, y los ácidos carboxílicos.
La atracción entre los dipolos de estas
moléculas y del dipolo del agua hace que
tiendan a disolver. Las sustancias iónicas y
polares son referidas como hidrofílicas debido
a esta tendencia. Los hidrocarburos son no
polares. Consecuentemente, las moléculas no
polares no disuelven en agua y son referidas
como hidrofóbicas, los hidrocarburos en
particular tienden a secuestrarse desde un
ambiente acuoso. Un líquido no polar forma un
sistema de dos capas con el agua; un ejemplo
es una capa de petróleo. Es posible que una
sola molécula tenga porciones polares y no
polares. Las sustancias de este tipo se llaman
amfipáticas. Un compuesto tal como estos en
la presencia del agua tiende a formar las
estructuras llamadas las micelas, en las
cuales los grupos principales polares están en
contacto con el ambiente acuoso y las colas
no polares se aíslan del agua.
Otra de las propiedades extraordinarias del
agua que la hacen un medio ideal para los
organismos vivos es su capacidad calorífica
específica, (el número de calorías requeridas
para elevar la temperatura de 1 g de agua de
15° a 16° C) que es igual a 1.0 y es
notablemente alta entre los varios disolventes
con enlaces de hidrógeno.
Cuanto mayor sea el calor especifico de una
sustancia, menor será el cambio de
temperatura que resulte cuando dicha
sustancia absorba una cantidad dada de calor.
De este modo, las propiedades del agua la
hacen apropiada para mantener relativamente
2
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constante la temperatura de un organismo
vivo.
El calor de vaporización del agua es muy alto.
Expresado como el calor específico
vaporización (calorías absorbidas por un
gramo de agua vaporizada), el valor para el
agua es de 540 en su punto de ebullición e
incluso mayor a temperaturas más bajas. Este
alto valor resulta de gran utilidad para que los
organismos vivos mantengan constante su
temperatura ya que es posible disipar una
gran cantidad de calor por vaporización del
agua.
El alto calor de fusión del agua reviste
importancia en la estabilización del medio
biológico. Aunque en las formas superiores de
vida rara vez se congela el agua, el calor
desprendido por ésta al congelarse es un
factor importante para disminuir la caída de
temperatura de un cuerpo de agua durante el
invierno. Así, 1 g de agua al congelarse a 0°
C, debe ceder 80 veces tanto calor como el
que pierde al disminuir de 1 a 0° C
exactamente antes de congelarse.
El agua se expande al solidificarse, y por tanto
el hielo es menos denso que el agua. Solo
otras pocas sustancias se expanden al
congelarse. Si el hielo fuera más pesado que
el agua, se hundiría. Esto significa que los
océanos, lagos y corrientes de agua
congelarían del fondo hacia la superficie, y
una vez congelados, sería extremadamente
difícil que se fundieran. Obviamente, una
situación así no permitiría que dichos cuerpos
de agua constituyeran el hábitat de muchas
formas vivientes, como efectivamente sucede.
Lo que sucede en la realidad es que el agua
líquida, más caliente, se va al fondo de los
de
lagos y el hielo se mantiene sobre la
superficie, donde el calor proviene del medio
externo lo alcanza y lo funde. Otras
propiedades del agua tales como su alta
tensión superficial y su elevada constante
dieléctrica son muy importantes desde el
punto de vista de la biología.
Ionización del Agua.
Durante la interacción con puentes de
hidrógeno entre las moléculas de agua, existe
la tendencia a que algunas cedan totalmente
sus protones a las moléculas vecinas y que
éstas a su vez cedan sus protones a otras.
Cuando esto sucede, aparecen cargas reales
en las moléculas, una carga neta negativa en
aquellas que cedieron sus protones, y una
carga neta positiva en las que ganaron los
protones. De acuerdo con la teoría de J. N.
Brönsted y T. M. Lowry, en la que se
conceptúa a un ácido como una molécula que
es capaza de donar protones, y una base
como una molécula que es capaz de aceptar
protones, la ionización del agua, tal como se
describe arriba, da lugar a dos especies
iónicas de la molécula de agua: el ión hidronio,
H3O+ que funciona como un ácido, pues es
se capaz de donar un protón y el ión hidroxilo OH-
que es una base, pues es capaz de aceptar un
protón.
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2H2O H3O+ + OH- Como las concentraciones que se manejan

son tan pequeñas, aun expresadas,
matemáticamente como submúltiplos de 10
(potencias negativas de 10), su manejo puede
resultar "complicado" por lo que se utiliza el
logaritmo negativo de base 10 para
Experimentalmente se ha determinado que en expresarlo. Esto es lo que se conoce como "p"
un litro de agua pura a 25° C se mantiene una y referido a la concentración de H+ se
concentración promedio de 1.0X10-7 molar de denomina pH. El pH corresponde al logaritmo
iones hidroxilo. Aunque no existen realmente negativo de la concentración de
+
protones libres (H ) en el agua, para facilitar la hidrogeniones, o sea:
comprensión del proceso de ionización del
pH = -log [H+] o bien, pH = log 1/ [H+]
agua, consideraremos la disociación de ésta
en: Nótese que la "p" es minúscula, ya que se
trata de una sigla que indica potencial.
H2O H+ + OH-
Al producto de la concentración de los iones Si se considera que el valor de la
- -7
hidrógeno por la de los iones OH se le da concentración de protones es de 1x10 , se
tiene que:
Kw = (1.0X10-7) X (1.0X10-7) = 1.0X10-4.
-7 -7
pH = log 1/(1X10 ) =log1-Iog 1x10 = 0-(-7) = 7
La constante Kw, expresa el producto de las
concentraciones de iones H+ y OH- que, por Es a partir del agua que se define la escala de
definición, no cambia. pH, por lo cual se habla de soluciones ácidas
cuando tiene valores de concentración de
El nombre de producto iónico del agua, kw y
hidrogeniones mayores de 1x10-7 o pH
tiene entonces el siguiente valor.
menores de 7 y de soluciones alcalinas con
En consecuencia, cuando una solución es concentraciones de hidrogeniones menores de
ácida, la concentración de protones es 1x10-7 y pH mayores a 7.
relativamente alta; pero la concentración de
Como la máxima concentración posible de
hidroxilos disminuye en una cantidad igual,
hidrogeniones en solución acuosa es de 1.0
para que el producto de las concentraciones
M, el valor de pH mínimo es 0.0 ya que el log10
de H+ y de OH- se mantenga constante. En el
1 es 0. En el otro extremo, cuando la
caso de una solución alcalina, la situación se
concentración de H+ es la mínima (1x10-14) el
invierte, disminuyendo la concentración de
pH es de 14. El punto de neutralidad es de pH
protones y aumentando en forma correlativa la
= 7 o en concentración de H+ de 1 x 10-7. EI
concentración de hidroxilos.
rango de pH para indicar la acidez de una

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solución va del 0 al 7, mientras que el
correspondiente a la basicidad o alcalinidad de
una solución va del 7 al 14.
Ácidos y bases.
La ecuación para la disociación o ionización
de un ácido (HA) en disolución acuosa diluida
implica la transferencia de un protón desde el
ácido al agua, la cual puede actuar como
aceptor del protón y forma el ácido H3O+:
físicos, la cual esta corregida por la desviación
del sistema de conducta ideal provocada por
factores tales como la concentración y la
fuerza iónica. Cuanto más sea grande la Ka
mayor es la tendencia del ácido a disociarse;
es decir más fuerte es el ácido. La fuerza de
los ácidos generalmente se expresa en
función del valor de pKa en donde:
pKa = - logKa

Dado que pKa es el logaritmo negativo de Ka

HA + H2O H3O+ + A-
un valor numéricamente pequeño de pKa
Cada base conjugada posee una afinidad corresponde a un ácido fuerte y un valor
característica para su protón; los que numéricamente grande corresponde a un
muestran una afinidad elevada por el protón ácido débil.
son ácidos débiles y solo se disocian muy
Indicadores ácido-básicos.
ligeramente, los que muestran una afinidad
pequeña son ácidos fuertes y pierden iones El pH de una disolución puede determinarse

H+ con facilidad. mediante el empleo de colorantes indicadores,

la mayor parte de las cuales son ácidos
La tendencia de cualquier ácido a disociarse
débiles (se designan como HInd). Tales
viene dada por su constante de disociación:
indicadores se disocian de acuerdo con el
[H + ][A− ] equilibrio:
Ka =
[HA]
Hlnd H+ + Ind-
Constituye también una convención, en
bioquímica, emplear las constantes de Supongamos que la especie Hlnd es incolora y

disociación basadas en la medida analítica de que la especie Ind- es coloreada. La posición

las concentraciones de los reactivos y de los de equilibrio de esta disociación y por tanto, la

protones, en unas determinadas condiciones cantidad de luz absorbida por la especie Ind- a

experimentales, es decir, para una su longitud de onda característica, es

concentración total y fuerza iónica determinada por la concentración de

determinadas y especificando los demás hidrógeno del medio. En una disolución

solutos. Esta constante recibe el nombre de fuertemente ácida, el equilibrio se desplaza

constante de disociación aparente y se hacia la izquierda y se absorberá poca luz a la

designa por K' o constante de disociación longitud de onda del máximo de absorción de

termodinámica empleada por los químicos- Ind-. En una disolución básica, la especie Ind-

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se halla favorecida, ya que el exceso de iones El rasgo distintivo del sistema tampón del
OH- reacciona con los iones H+ para formar bicarbonato lo constituye que el CO2 sea el
-
agua, impulsando el equilibrio hacia Ind . En producto final de la combustión aerobia de las
este caso se absorberá mucha luz. moléculas combustibles en los vertebrados,
que se expulsa en último término por los
Tampones.
pulmones.
Los fluidos intracelulares y extracelulares de
los organismos vivos contienen pares
conjugados ácido-básicos, los cuales actúan
como tampones al pH normal de dichos fluido.

El tampón intracelular más importante es el

par conjugado ácido-básico H2PO4- / HPO42-
(pK' = 7,2). Los fosfatos orgánicos, tales como
la glucosa-6-fosfato y el ATP, contribuyen
también a la capacidad de tamponamiento en
la célula.

El principal tampón extracelular en la sangre y

en los fluidos intersticiales de los vertebrados
es el sistema tampón del bicarbonato.

Puesto que por la ley de Henry la solubilidad

de un gas en agua es proporcional a su
presión parcial, el pH de su sistema tampón
constituido por el bicarbonato es función de la
presión parcial del CO2 en la fase gaseosa
situada sobre la disolución tampón

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UNIVERSIDAD VERACRUZANA
LABORATORIO DE BIOQUÍMICA GENERAL
PRÁCTICA No. 1
PREPARACIÓN DE SOLUCIONES AMORTIGUADORAS

Tiempo de práctica: 2 Horas. Si se toman logaritmos negativos de ambos

Objetivos: términos, encontraremos:

Aprender el uso de la ecuación de Henderson- - log10[H+] = - log10Ka - log10 [HA]

Hassebalch.
[A]
Experimentar y entender cómo se comporta un
De manera semejante a la forma en que se
sistema amortiguador de pH.
define pH (pH = log10 1 / [H+] = - log10) por
definición pKa es:
Preguntas prelaboratorio:
1
1. ¿Qué es el pKa? pKa = log10 = −log10 Ka
Ka
2. ¿A partir de que parámetro podemos
Si se sustituyen pH y pKa por sus
calcular el pKa?
equivalentes en la ecuación reordenada de la
3. ¿Qué es una solución buffer?
disociación del ácido HA, tendremos:
4. ¿Para qué se utiliza una solución
[HA]
buffer? pH = pKa − log10
[A]
5. ¿En los organismos podemos
encontrar amortiguadores?
Finalmente, se puede cambiar el signo al
logaritmo en la ecuación invirtiendo la relación
Fundamento:
[HA] / [A], porque – log10 [HA] / [A] = + log10
Resulta muy útil poder relacionar el pH de la
[A-] / [HA] y entonces tenemos:
solución de un ácido débil con la constante de
[A− ]
disociación de este. pH = pK + log10
[HA]
K = [H+] [A-]
Esta es la ecuación de Henderson-
[HA]
Hasselbach, que establece la relación entre el
A fin de lograr esta relación se puede
pH de la solución acuosa de un ácido débil, su
reordenar la ecuación para la constante de
pK y las cantidades de la forma disociada y no
disociación del ácido HA:
disociada.
[HA]
[H + ] = K a
[A]
7
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Las soluciones buffer por otra parte contienen
un ácido débil y su base conjugada o una base
débil y su ácido conjugado en donde el pH es
igual o cercano a su valor de pKa, la ecuación
de Henderson-Hasselbach puede ser usada
para realizar los cálculos necesarios para su
20
preparación.
Material y procedimiento experimental:
Material de laboratorio:
2 Vasos de precipitados de 100 mL
2 Vasos de precipitados de 150 mL
1 Pipeta graduada de 10 mL
1 Pipeta graduada de 5 mL
1 Pipeta graduada de 1 mL
1 Matraz volumétrico de 100 mL
1. Escojer el buffer de tal modo que su pKa
esté muy próximo al pH al cual se va a
trabajar (generalmente, entre 6 y 8). Si se
espera que el pH va a descender durante el
proceso bioquímico, escójase el buffer cuyo
pKa sea algo menor que el pH inicial de
trabajo; si el pH va a aumentar, el pKa debe
ser algo mayor que el pH inicial.
2. Las sustancias que se van a emplear deben
ser hidrosolubles y con un alto grado de
pureza, a fin de evitar efectos o reacciones
espureas.
3. No deben usarse en la elaboración del
buffer, sustancias citotóxicas o que tengan
acción inhibidora de enzimas.
4. Deben ser sustancias química y

1 Bureta enzimáticamente estables.

5. Si las sustancias empleadas interactúan
1 Agitador magnético
con cationes o aniones o tienen efectos
Piceta
salinos, estos efectos deben ser mínimos y
Reactivos:
bien conocidos. Si forman complejos con
(Para su preparación véase la preparación de
iones, estos deben ser hidrosolubles.
soluciones).
6. No deben absorber luz en las regiones
Glicina 0.025 M pH 2.0
visibles y ultravioleta.
Lisina 0.025 M pH 2.0
7. Deben tener adecuada "capacidad buffer"
Ácido aspártico 0.025 M pH 2.0
en el rango de pH requerido. Para cubrir
NaOH 1 M
estos y otros requerimientos especiales,
Equipo: existe una gran diversidad de reguladores
Potenciómetro para uso en bioquímica, algunos no
a) Preparación de Soluciones Amortiguadoras: contienen cationes minerales.

La selección de una solución reguladora En esta práctica, cada grupo o alumno

adecuada para un determinado proceso recibirá un problema especial consistente en
bioquímico, debe ajustarse a los siguientes la preparación de una solución buffer, de pH y
criterios: concentración determinados y que llene
ciertos requisitos que se indicaran en cada

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 Manual de Bioquímica General

caso. Deberá: a) efectuar los cálculos  Determinación de la capacidad buffer. La

correspondientes para saber que sustancias capacidad buffer es la cantidad de base
debe emplear y que cantidad de cada una de fuerte requerida para alterar el pH de la
ellas. b) determinar la capacidad buffer de la disolución reguladora, en una unidad de
solución que prepara. pH:
db
Procedimiento: C. B =
dpH
 Al recibir su problema, estudie las
Siendo dpH el incremento de pH resultante de
condiciones que se piden y busque un
la adición de un volumen db de base.
buffer cuyo pKa sea adecuado y aplicando
la ecuación de Henderson-Hasselbach,  Ponga su disolución en un vaso, introduzca
calcule las cantidades que debe pesar de los electrodos del potenciómetro y disponga
ácido y base conjugada, para preparar 100 una bureta con disolución de NaOH 1 N y
ml de disolución. un agitador magnético, dentro del vaso.
 Pesar las cantidades que calculó o mida los Determine el pH inicial.
volúmenes adecuados y disuelva. Aforar 
Ponga el agitador en marcha sin que este
aproximadamente a 75 mL. golpee los electrodos, y agregue un
 Transfiera esta disolución a un vaso de volumen de NaOH 1 N medido
precipitados de 150 ml y verifique el pH en exactamente en la bureta (1 mL.
un potenciómetro previamente calibrado y Anote el pH resultante. Repita las adiciones de
ajustar a la temperatura a las condiciones base, en volúmenes iguales (1 ml) y anote los
de trabajo. Si el pH no es exactamente el valores de pH correspondientes, hasta obtener
pedido, ajústelo agregando el componente por lo menos cinco lecturas.
(ácido o base), que sea necesario para
subir o bajar el pH hasta el valor requerido.
 Aforar a 100 mL con agua destilada y
verifique nuevamente el pH.

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 Manual de Bioquímica General

Hoja de resultados:

Nombre:________________________________Grupo:________Fecha:___________
a) Preparación de soluciones amortiguadoras:
1. Problema N°__________ pH requerido ______ Concentración molar ________ Volumen final
___________mL.
2. Cálculos efectuados.
3. Cantidades por pesar o medir de A- y HA.
4. ¿Cuál es el pH de la solución inicial?
5. ¿Cuál es el pH final de la solución?
b) Determinación de pKa:

mL de NaOH pH
agregados obtenido
0.0

1.0

2.0

3.0

4.0

5.0

6. ¿Cuál es la capacidad buffer?

Discusión de resultados

Conclusión:

Cuestionario:

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 Manual de Bioquímica General

1. Indica el pKa de los siguientes ácidos:

a) Ácido pirúvico.
b) Ácido láctico.
c) Ácido benzoico.
d) Ácido oxálico.
e) Ácido succínico.
f) Ácido carbónico.
g) Ácido cítrico.
h) Ácido fosfórico.
2. Indique el nombre completo, pKa y peso molecular (o fórmula) de los siguientes
compuestos usados como reguladores de pH en bioquímica: TRIS; CAPS; MES;
TES y Tricina.

3. ¿Para qué valores de concentración de los componente de un buffer, tiene este la

máxima capacidad buffer?

4. ¿Por qué los aminoácidos actúan como reguladores del pH?

5. Define ¿qué es la capacidad buffer?

6. Identifica los ácidos y bases conjugadas de los siguientes pares de sustancias

a) (CH3)3NH+ / (CH3)3N
+
b) H3N-CH2COOH / +H3N-CH2COO-
+
c) H3N-CH2COO- / H2N-CH2-COO-
d) -OOC-CH2-COOH / -OOC-CH2-COO
e) -OOC-CH2-COOH / HOOC-CH2-COOH

7. ¿Cómo podrías preparar 1 litro de un buffer de fosfato 0.05 M. a pH 7.5 usando

K2HPO4 cristalino y una solución de HCl 1M?

Referencias bibliográficas:

Libro: apellidos autor; Nombre. (Año).Titulo. Editorial.Edición.País.Página consultada.

Página de internet: Autor o responsable.Título. Fecha de última actualización.Liga:
http://www.

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