Halder et al 

Tropical Journal of Pharmaceutical Research Juni 2012; 11 (3): 413-419 © Farmakoterapi Group, Fakultas Farmasi, Universitas 
Benin, Benin City, Nigeria 300.001. 
Semua hak 

dilindungi. 
Tersedia online di http://www.tjpr.org http://dx.doi.org/10.4314/tjpr.v11i3.10 Penelitian Pasal 

Antikanker Kegiatan kawista Linn (Rutaceae) Buah Ekstrak 

Manusia Kanker Payudara Sel Garis 
Debasish Pradhan1 *, GitanjaliTripathy1 dan Santosh Patanaik2 1 
Universitas Departemen Ilmu Farmasi, Utkal University, Orissa751004, 
2 
All India Institute of Medical Sciences, 
New Delhi-01, India 

Abstrak 
Tujuan: Untuk mengevaluasi aktivitas anti-kanker kawista Linn (Rutaceae) yang telah lama digunakan secara tradisional untuk 
berbagai penyakit menular dan ganas. Metode: Ekstrak buah kawista Linn diperoleh dengan maserasi 3 kali dengan metanol 
dan kemudian berkonsentrasi pada tekanan berkurang. Bioassay ekstrak itu dilakukan untuk menilai aktivitas antikanker. Baris 
sel kanker payudara, SKBR3 dan MDA MB435, digunakan untuk in-vitro proliferasi sel, uji viabilitas sel, dan analisis siklus sel 
ekstrak. Hasil: Bioassay dari ekstrak kawista Linn. menunjukkan bahwa sebagian kecil (fraksi 3) dari ekstrak etanol memiliki 
aktivitas antikanker terhadap SKBR3 dan sel-sel kanker payudara manusia MDA-MB435. Efektif dosis (ED 
50) 
dari kawista Linn. Fraksi 3 adalah 56,1 dan 30,6 mg / ml untuk SKBR3 dan MDA-MB435, 
masing-masing. Setelah 48 jam paparan, fraksi ini (100 ug / ml) secara signifikan mengurangi proliferasi sel di kedua baris sel 
kanker. Pada sel MDA-MB435, analisis siklus sel menunjukkan bahwa fraksi 3 diinduksi akumulasi sel-sel di G2 / fase M, tapi 
tidak ada perubahan signifikan dalam siklus sel terdeteksi pada sel SKBR3. Kesimpulan: Hasil penelitian menunjukkan bahwa 
fraksi ekstrak bisa menginduksi siklus sel tahanan. Namun, penyelidikan lebih lanjut diperlukan untuk menilai mekanisme 
molekuler dari kegiatan antikanker dari tanaman ini. 
Kata kunci: antivity antikanker, baris sel kanker payudara, kawista Linn. , G2 / M penangkapan 
Diterima: 8 Oktober 2011 Revisi diterima: 28 April 2012 
* Sesuai penulis: Email: deba_udps@yahoo.co.in; Telp: 9861137772 
Trop J Pharm Res, June2012; 11 (3): 413 
 
Pradhan et al 

PENDAHULUAN 
EKSPERIMEN 
Kanker payudara adalah salah satu keganasan yang paling umum pada wanita di seluruh dunia. Di India, 
bahan tanaman dan prosedur ekstraksi 
kanker  payudara  adalah  kedua  kanker  serviks  pada  frekuensi,  dengan  tingkat  kejadian  diperkirakan  dari  17,2  per 
100.000,  dan  telah  meningkat  di  semua  bagian negara selama dekade terakhir [1]. Meskipun terapi kanker payudara 
biasanya  multimodal,  obat  sitotoksik  masih  memainkan  peran  penting  dalam  meningkatkan  tingkat  kelangsungan 
hidup  dan  kualitas  hidup  [2].  Oleh  karena  itu,  pengembangan  dan  mencari  agen  antikanker  baru  dan  efektif  telah 
menjadi sangat penting [3]. 
Buah-buahan  matang  dari  kawista  Linn.  dikumpulkan  dari  hutan  bukit  Bhubaneswar  terletak  di  bagian  timur  India 
pada  bulan  Mei  dan  diidentifikasi  oleh  Dr  SK  Sahu,  ahli  taksonomi  di  Utkal  University,  Vanivihar,  Orissa,  India. 
Sebuah  spesimen  voucher  (no.  161)  diendapkan  di  herbarium  Departemen  Botani,  Utkal  University.  Buah 
dipotong-potong kecil dan pulp dipisahkan. Pulp naungan-kering, digiling dan bubuk (1,5 kg) dimaserasi 
Untuk saat ini, banyak agen sitotoksik termasuk produk alami yang diisolasi dari sumber tanaman telah diteliti untuk 
penemuan potensi obat-obatan baru antikanker [4]. Lebih tinggi 
Trop  J  Pharm  Res,  June2012;  11  (3):  414  tiga  kali  (untuk  setiap  7  hari)  dengan  15  L  etanol  95%  pada  suhu 
kamar [6]. Ekstrak terkonsentrasi pada tekanan rendah, pada 60 
tanaman  telah  lama  terbukti  sumber  yang  baik  dan  dapat  diandalkan  untuk pengembangan obat antikanker baru. Di 
India,  banyak  tanaman  telah  digunakan  dalam  pengobatan  tradisional  berbagai  penyakit  berbahaya  selama 
berabad-abad. 
Kawista  Linn,  syn.  Feronia Limonia (Rutaceae) adalah pohon gugur berukuran sedang berkembang di seluruh India. 
Buah  kayu,  kasar  dan  digunakan  sebagai  pengganti  Bael  di  diarrheoa  dan  disentri  [6,7].  Kulit  dan  daun  tanaman 
yang  digunakan  untuk  kondisi  vitiated  dari  vata  dan  pita  sedangkan  buah digunakan untuk mengobati tumor, asma, 
luka,  kelemahan  jantung  dan  hepatitis.  Buah  mengandung  flavonoid,  glikosida,  saponin  dan  tanin  [5].  Beberapa 
kumarin  [4,5]  dan  turunannya  tyramine  [6]  juga  telah  diisolasi  dari  buah  Limonia.  Daun  dilaporkan  memiliki 
aktivitas  hepatoprotektif  [8]  sedangkan  cangkang  buah  mengandung  senyawa  anti  jamur,  yaitu,  psoralene, 
xanthotoxin, 2, 6-dimethoxybenzoquinone dan osthenol [9]. 
Namun,  properti  antikanker  dari  tanaman  ini  belum  diselidiki.  Oleh  karena  itu,  ini  mendorong  kami  untuk 
menyelidiki  efek  penghambatan ekstrak buah tanaman ini terhadap pertumbuhan dua baris sel kanker payudara yang 
berbeda, SKBR3 dan MDA-MB435. 
0 
C menghasilkan hasil gabungan dari 80,5 g. 
Ekstrak  (35  g)  dilarutkan  dalam  air  suling  (100  ml)  dan 15 ml kolom solusi dikromatografi, kering dikemas dengan 
menggunakan kolom gelas (inner diameter 4 cm, panjang 60 cm), diseimbangkan dengan air (100 ml) dan disonikasi 
selama 15 menit dalam bak ultrasonik. Proses aliran rinci diilustrasikan pada Gambar 1. Suspensi disentrifugasi pada 
20.000 rpm (sekitar 42.000 g.) Selama 30 menit dan kemudian diterapkan ke Diaion 
® 
HP-20  kolom;  eluen  dikumpulkan  untuk  mendapatkan  fraksi  larut  air  (fraksi  1). 
Endapan  dilarutkan  dalam  metanol-air  (1:  1,  100  ml)  dan 90% metanol (150 ml) untuk mendapatkan fraksi 2 dan 3, 
masing-masing.  Setiap  supernatan  berulang  kali  diperlakukan  seperti  dijelaskan  di  atas.  Endapan  dilarutkan  dalam 
etil  asetat  untuk  mendapatkan  fraksi  4.  Komposisi  kimia  dari  masing-masing  fraksi  dipantau  pada  TLC 
menggunakan silika gel GF 
254 Alufolien (Merck) dan dikembangkan dengan kloroform / etanol 
(90:10,  v  /  v).  Phytosteryl  glukosida  digunakan  sebagai  referensi. Setelah mengembangkan mereka, TLC disemprot 
dengan asam anisaldehida-sulfat dan dipanaskan dalam oven pada 100 ° C selama 1-2 menit. 
 
Gambar 1: fraksinasi BIOAKTIVITAS-dipandu dari ekstrak buah acidissima Limonia dengan kromatografi kolom. 
Persiapan ekstrak untuk eksperimen antikanker 
Ekstrak  buah dilarutkan dalam dimethyl sulfoxide (DMSO, Sigma, St Louis, USA) kecuali untuk fraksi air (fraksi 1) 
yang  dilarutkan  dalam  air.  Untuk  semua  percobaan,  konsentrasi  akhir  dari  senyawa  yang  diuji  disusun  oleh 
menipiskan saham dengan medium kultur. 
Baris sel dan budaya 
Garis-garis  sel  kanker  payudara,  SKBR-3  (ATCC  No.  HTB-30)  dan  MDA-MB435  (ATCC  No.  HTB-129),  yang 
diperoleh  dari  Instansi  Ilmiah  Baru, Bangalore, India. SKBR-3 adalah sel kanker payudara manusia dengan ekspresi 
berlebihan  dari  HER2  /  neu  reseptor  dan  tanpa  reseptor  ER  sementara  sel  kanker  payudara  MDA-MB435  itu tidak 
memiliki kedua reseptor ER dan ekspresi HER2 / neu [7]. The 
Pradhan et al 
Trop J Pharm Res, June2012; 11 (3): 415 
 
Pradhan et al 
sel dikultur di DMEM (Promo sel, 
dengan ekstrak buah pada konsentrasi akhir dari Jerman) 
ditambah dengan 10% panas- 
60 dan 120 mg / ml. DMSO (1%) ditambahkan ke tidak 
aktif bovine serum janin (Promo Sel, 
kelompok kontrol. Setelah pengobatan dengan buah Jerman) 
dan 1%penisilin-streptomisin 
ekstrakselama 48 jam, sel-sel dikumpulkan dan (Promo Sel, 
Jerman). Sel-sel 
diinkubasidengan reagen seperti yang dijelaskan dalam 
diinkubasi pada 37 ° C dalamdilembabkan 
protokoldari Siklus TestTM Ditambah DNA suasana reagen 
kit dengan 5% CO 
 
2. 
(Becton Dickinson Immunocytometry System). Isi DNA dari sel-sel itu Proliferasi sel uji 
diukur dengan aliran cytometry [10]. Semua sampel dianalisis dalam waktu 3 jam dengan FACS Carlibur Proliferasi 
sel assay dilakukan dengan 
menggunakan sel software Quest. penyemaian total 1 × 10 
4 
sel per sumur di piring 96-baik. Setelah 36 jam inkubasi, berbagai 
konsentrasi analisis statistik dari ekstrak buah yang 
ditambahkan ke dalam sumur untuk mendapatkan konsentrasi akhir 1, 
Percobaan dilakukan dalam rangkap tiga. 10, 100 dan 500 
mg / ml, masing-masing. 
Kontroldata untuk proliferasi sel dan kelompok viabilitas 
dicampur dengan DMSO untuk mendapatkan 
tes dinyatakan sebagai mean ± konsentrasi akhir standar 1%. 
Doxorubicin digunakan sebagai kontrol positif. Sel-sel yang 
penyimpangan. regresiED. 
analisis 50 
nilai-nilai dihitung dengan Nilai p <0,05 diinkubasi untuk tambahan 48 jam, 50 ml MTT 
dianggap signifikan. [3- (4,5-dimethylthiazol-2-yl) 
-2,5-diphenyl tetrazolium bromide] (1 mg / ml, Sigma) di phosphate buffered saline (PBS) ditambahkan 

HASIL 
ke  masing-masing,  dan  diinkubasi  selama  4  jam  pada  37  °  C.  Media  telah  dihapus  dan  formazan  dilarutkan  dalam 
DMSO dan densitas optik diukur pada 590 mm menggunakan pembaca bioassay (Biorad, USA) [9]. 
Fraksi etanol mengungkapkan delapan band. Tiga band kuning-oranye denganR 
nilaif 0,12, 0,25 dan 0,30. Lima band yang ungu-biru denganR 
f 

nilai0,17, 0,38, 0,41, 0,56 dan 0,61. Referensiviolet biru 

selkelayakan uji 
senyawamuncul di R 
f 
nilai0,17. 
Sel-sel  dihentikan  dalam  piring  96-baik  pada  konsentrasi yang sama seperti yang digunakan untuk uji proliferasi sel 
dan kemudian diinkubasi selama 24 jam pada suhu 37 ° C dengan 5% CO 
2. 
Berbagai  konsentrasi  ekstrak  buah,  seperti  ditunjukkan  di  atas, 
ditambahkan  ke  masing-masing  dengan  baik,  dengan  DMSO  sebagai  kontrol.  Setelah  48  jam  inkubasi,  sel-sel 
trypsinized dan penghitungan sel yang layak dilakukan oleh 
penghambatan  pertumbuhan  oleh  ekstrak  buah pada sel kanker payudara manusia ditunjukkan pada Gambar 2. Pada 
48 jam, ED 
50 
nilai-nilaidari  fraksi  3  adalah  56,1  ±  3,8  dan  30,6  ±  1,5  mg  /  ml  untuk  SKBR3  dan 
MDA-MB435,  masing-masing.  Sejak  fraksi  3  ditemukan  memiliki  efek  pertumbuhan  penghambatan  pada  baris sel 
ini, fraksi ini digunakan untuk menyelidiki lebih lanjut efek dari ekstrak buah pada sel-sel ini. 
pencacahan sel yang dikecualikan pewarna biru tripan menggunakan haemositometer di. 
Pengaruh ekstrak terhadap viabilitas sel 
analisis siklus sel 
Hasil penelitian menunjukkan bahwa pada konsentrasi 100 mg / ml, kedua baris sel menunjukkan viabilitas rendah 
Untuk menentukan siklus sel, 1 × 10 
6 
sel  dihentikan  pada  setiap  hidangan  kultur  jaringan dan diperlakukan dengan 
buah ekstrak di 
akhir<50% dibandingkan dengan kelompok kontrol. Tidak ada penghambatan sel diamati pada 10 ug / ml. 
konsentrasi 80 dan 160 mg / ml untuk SKBR3. Untuk MDA-MB435, sel diperlakukan 
Trop J Pharm Res, June2012; 11 (3): 416 
 
siklus sel yang disebabkan oleh ekstrak 
SKBR3  diobati  dengan  fraksi  3  pada  konsentrasi akhir dari 160 mg / ml, ditunjukkan pada Gambar 3, menunjukkan 
sedikit  S  blok  fase  dengan  mengurangi  populasi  fase  S  12,9-7,2%.  Untuk  siklus  sel  perkembangan  MDA-MB435, 
hasilnya  menunjukkan  bahwa  sel-sel  MDA-MB435  yang  dirawat  (pada  konsentrasi  120  mg  /  ml)  meningkatkan 
populasi G2 / fase M 24,4-45,7% dibandingkan dengan kelompok kontrol (Gambar 4). 
2 (B) 
Gambar 2: efek hambat ekstrak acidissima Limonia pada SKBR3 (A) dan MDA-MB435 (B) kanker payudara baris sel. 

PEMBAHASAN 
Ekstrak  etanol  dari  buah  tanaman  itu  difraksinasi  dalam  kromatografi  kolom,  sesuai  dengan  polaritas  senyawa. 
Pelarut  eluting  dipindahkan  ke  kolom,  mulai  dari  air,  air-metanol  (1:  1),  metanol  dan  etil  asetat.  Mereka  menjadi 
sasaran uji MTT untuk kegiatan antiproliferatif. Fraksi larut air terdiri senyawa yang paling polar, yaitu, 
2 (A) 
Pradhan et al 
garam  anorganik,  gula,  asam  amino,  saponin;  fraksi  larut  air-metanol  mengandung  glikosida  sedangkan  fraksi  etil 
asetat  terdiri dari aglikon. Ekstrak metanol menunjukkan sitotoksisitas terhadap SKBR3 dan MDA- MB435 garis sel 
kanker  payudara.  Kegiatan  pertumbuhan  penghambatan  ini  dari  sel  diperlakukan  bertindak  dengan  cara  yang 
tergantung  dosis  yang  juga  dikonfirmasi  oleh  viabilitas  sel  dengan  tripan  assay  pengecualian  biru.  Pengamatan  ini 
menunjukkan bahwa beberapa komponen aktif ekstrak ini berada di fraksi metanol. 
Gambar  3:  Penghambatan  progresi  siklus  sel  di  lini  sel  kanker  payudara  dianalisis  dengan  sitometri:  (A)  analisis  siklus  sel  sel 
SKBR3  tanpa  ekstrak  tumbuhan  pada  48  h.  GO  /  G1  =  69,4%,  S  =  12,9%,  G2  /  M  =  15,1%;  (B)  analisis  siklus sel sel SKBR3 
setelah  pengobatan  dengan  ekstrak  tumbuhan  fraksi  3  selama  48  jam  pada  160  ug  /  ml:  GO  /  G1  = 66,2%, S = 7,2%, G2 / M = 
19,6% 
Trop J Pharm Res, June2012; 11 (3): 417 
 
Pradhan et al 
sel.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa  fraksi  3  mampu  menekan  proliferasi sel kanker payudara, terutama MDA-MB435, 
melalui siklus sel penyumbatan. 
Banyak  agen  antikanker  yang  berasal  dari  tanaman  yang  diresepkan  untuk  mengobati  kanker  menghambat 
pertumbuhan  sel  kanker  melalui  regulasi  siklus  sel,  termasuk  G2  /  M  akumulasi  [11]. Hal ini juga diketahui bahwa 
agen-agen  yang  mempengaruhi  G2  /  M  sel  fase  siklus  penangkapan  tindakan  dengan  menargetkan  tubulin  atau 
mengganggu  tubulin-mikrotubulus  keseimbangan  [12,13].  Temuan  kami  menunjukkan  bahwa ekstrak buah kawista 
menunjukkan  efek  antiproliferatif  pada  sel  kanker  payudara  MDA-MB435  melalui  siklus  penangkapan  G2 / M sel, 
dan  karena  itu  dapat  berinteraksi  dengan  tubulin  dalam  cara  yang  mirip  dengan  agen  kemoterapi  yang  diturunkan 
dari  tanaman  lainnya.  Namun,  kegiatan  antiproliferatif  dari tanaman ini mungkin mungkin tergantung pada jenis sel 
dan budaya kondisi. 

KESIMPULAN 
kawista  Linn.  fraksi  buah  3  menghambat  proliferasi  payudara  manusia  lini  sel  kanker  SKBR3  dan  MDA-MB435. 
Siklus  sel  melalui  G2  /  M  penyumbatan  memainkan  beberapa  peran  dalam  kegiatan  antiproliferatif  kawista 
Linn.-induced  di  MDA-MB435.  Namun,  kimia  dan  lainnya  penyelidikan  lebih  lanjut  pada  tingkat  molekul  yang 
diperlukan  untuk  mengidentifikasi  komponen-komponen  aktif  yang  menginduksi  penghambatan  pertumbuhan  dan 
untuk membangun hubungan yang mungkin antara kegiatan diamati dari ekstrak buah. 
Gambar 4: (A) analisis siklus sel sel MDA-MB435 
PENGAKUAN tanpa pengobatan dengan ekstrak tanaman. GO / 
G1 = 65,8%, S = 9,0%, G2 / M = 24,4%; (B) analisis siklus sel sel MDA-MB435 setelah pengobatan dengan ekstrak tumbuhan 
fraksi 3 di 120 ug / ml selama 48 jam: GO / G1 = 36,8%, S = 10,1%, G2 / M = 45,7% 
Para  penulis  khusus  mengucapkan  terima  kasih  kepada  Head,  Universitas  Departemen  Ilmu  Farmasi,  Utkal 
University, India atas dukungan yang konsisten untuk pekerjaan ini.pekerjaan ini 
Sel  SKBR3diperlakukan  dengan  ekstrak  buah  menurun  jumlahnya  pada  fase  S,  sedangkan  MDA-MB435  diobati 
dengan ekstrak sangat terakumulasi dalam G2 / fase M 
didukung  oleh  dana  dari  INSPIRE-DST,  Departemen  Ilmu  &  Teknologi,  New  Delhi  dan  Universitas  Grants 
Commission, New Delhi. 
Trop J Pharm Res, June2012; 11 (3): 418 
 
Pradhan et al 

PUSTAKA 
8. Saima Y, Das AK, Sarkar KK, Sen AK, Sur P. antitumor polisakarida pectic dari 
1. GLOBOCAN 2008 (Statistik Cepat): Jumlah kasus kanker payudara di India, dikutip [2012 Mei 222]. 
http://globocan.iarc.fr/factsheet.asp 2. Fargeot P, Bonneterre J, Roche H, Lortholary A, campone M, Praagh IV, Monnier A, 
Namer M, Schraub M, Barats JC, keuntungan Penyakit-bebas mingguan Epirubicin ditambah Tamoxifen dibandingkan 
Tamoxifen sendiri sebagai pengobatan adjuvant beroperasi, simpul-positif, pasien kanker payudara usia lanjut .. J Clin Oncol 
2004; 22: 4622-4630. 3. Cameron D, Bell R, Mengoptimalkan pengobatan untuk pasien dengan kanker payudara, Onkologi. 
2004; 31: 4-5. 4. Kirtikar KR, Basu BD. Tanaman Obat India. Dehradun, India, Internasional Distributor Buku 2005, Vol I, hlm 
478-79. 5. Rang HP, Dale MM, Ritter JM, Eds, Farmakologi, 
Edinburgh: Chuchill Livingstone. 1999. 6. Llango K, Chitra V. Penyembuhan Luka dan Anti-oksidan Kegiatan Buah Pulp dari 
kawista Linn (Rutaceae) pada Tikus. Trop J Pharm Res 2010; 37: 120-125. 7. Senthilkumar KL, Kumawat KB, Rajkumar M, 
Senthilkumar, aktivitas antidiare dari kulit kayu 
Feronia Limonia, Int J Biol Macromol, 2000; 27: 
333-335. 9. Rubinstein LV, Shoemaker RH, Paull KD, Simon RM, tosini S, Skehan P, Scudiero DA, Monks A, Boyd MR. 
Perbandingan in-vitro Data antikanker-obat-screening dihasilkan dengan uji tetrazolium versus uji protein terhadap panel 
beragam sel tumor manusia J. Natl. Kanker Inst 1990; 82: 111-116. 10. Hardman JG, Limbird JE, Molinoff PB, Ruddon RW, 
Gillman AG, Eds. Goodman & Gilman Ini Dasar Farmakologi dari Therapeutics, 9 
th 
Ed. New York: Mc Graw-Hill Companies, 1996; pp 461-486. 11. Tanaka Y, Fujiwara K, Tanaka H, Meheta K, 
Kohno I. paclitaxel menghambat ekspresi heat shock protein 27 di sel-sel kanker ovarium dan rahim. Int J Gynecol Oncol. 2004; 
14: 616-620. 12. Hadfield JA, Ducki S, Hirst N, McGown AT, Tubulin dan mikrotubulus sebagai target untuk obat antikanker. 
Prog Siklus Sel Res 2003; 44: 309-325 13. Schiff PB, Fant J, Horwiz SB. Promosi perakitan mikrotubulus in-vitro oleh Taxol. 
Nature 1997; 277: 655-657. 
ekstrak kawista Linn. Res J Pharm Biol Chem 2010; 1 (4): 

550-553. 
Trop J Pharm Res, June2012; 11 (3): 419