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Microscopio Óptico (Light Microscope)

Magnificación
La magnificación total de la muestra está dada por:

Magnificación Total   Magnificación del LenteObjetivo  Magnificación del LenteOcular 

El límite práctico de magnificación para un microscopio óptico es de 1300X. Aunque son posibles
mayores aumentos.

Resolución (r)
A medida que el microscopio aumenta su magnificación cada vez es más difícil mantener la claridad
de la imagen, la claridad de una imagen se llama resolución.

The resolution of an optical microscope is defined as the shortest distance between two points on a
specimen that can still be distinguished by the observer or camera system as separate entities. An
example of this important concept is presented in the figure below, where point sources of light from
a specimen appear as Airy diffraction patterns at the microscope intermediate image plane.

Resolution can be explained by the equation:


1.22
r 
NACon  NAObj

Where r is resolution (the smallest resolvable distance between two objects), NA is a general term for
the microscope numerical aperture, λ is the imaging wavelength, NAObj equals the objective numerical
aperture, and NACond is the condenser numerical aperture. This equations are based upon a number of
factors (including a variety of theoretical calculations made by optical physicists) to account for the
behavior of objectives and condensers, and should not be considered an absolute value of any one
general physical law, for example, for another specific microscope, the actual limit ca be calculated
with the following formula:

r
NACon  NAObj

In some instances, such as confocal and fluorescence microscopy, the resolution may actually exceed
the limits placed by any one of these equations. Other factors, such as low specimen contrast and
improper illumination may serve to lower resolution and, more often than not, the real-world maximum
value of r (about 0.25µm using a mid-spectrum wavelength of 550 nanometers) and a numerical
aperture of 1.35 to 1.40 are not realized in practice. (Es decir, en el mejor de los casos, un microscopio
óptico no puede distinguir dos puntos más cerca que 0.2 μm). La apertura numérica NA es una medida
de la capacidad de una lente para "capturar" la luz que viene del espécimen y usarlo para hacer la
imagen. Al igual que con la ampliación, está marcado en la lente. The following table provides a list
resolution (r) and numerical aperture (NA) values by objective magnification and correction.
Table 1 - Resolution and Numerical Aperture by Objective Correction

El límite de resolución o poder de resolución es una medida real de qué tan separados deben estar
dos puntos para que el microscopio los vea como separados. La resolución mejora a medida que el
poder de resolución se reduce.

Ejercicio 1:
En un microscopio un lente objetivo tipo Plan tiene una NA=0.7 y un lente condensador con NA=1.25,
si se considera luz roja de 400nm, ¿Cuál será su resolución?. Considere la ecuación con el factor 1.22λ.

Ejercicio 2:
¿Cuál es la Magnificación Total de un microscopio óptico si se usa una lente objetivo de 100X y un
lente ocular de 10X?.