You are on page 1of 13

Yamagata et al.

Jurnal ovarium Penelitian DOI 10,1186 /(2015) 08:49 s13048-015-0179-6

PENELITIAN Open Access

acidretinoat memiliki potensi untuk menekan


perkembangan endometriosis
Yoshiaki Yamagata1 *, Eiichi Takaki2, Masahiro Shinagawa1, Maki Okada1, Kosuke Jozaki1, Lifa lee1 ,
Shun Sato1, Ryo Maekawa1, Toshiaki Taketani1, Hiromi Asada1, Hiroshi Tamura1, Akira Nakai2 dan
Norihiro Sugino1
Abstrak
Latar Belakang: Meskipun endometriosis adalah estrogen umum penyakit tergantung melanda perempuan di usia
reproduksi, patogenesis belum sepenuhnya dijelaskan. Asam retinoat memiliki berbagai fungsi dalam sel sebagai
modulator biologis, dan metabolisme retinoid menyimpang tampaknya terlibat dalam lesi endometriosis. Dalam
rangka untuk mengevaluasi potensi semua-trans retinoic acid (ATRA) untuk terapi pengobatan, analisis
transcriptome dan pengukuran estradiol dalam sel endometrium berbudaya dan jaringan dilakukan. Metode: tingkat
ekspresi mRNA di ATRA-diperlakukan sel stroma endometrium (ESC) diisolasi dari kista endometriosis ovarium
(OEC) diselidiki. Produksi estradiol dalam jaringan OEC juga diselidiki. Hasil: Dalam budaya ESC yang terisolasi
dilengkapi dengan ATRA selama empat hari, total RNA yang diekstraksi diikuti dengan analisis transcriptome
menggunakan GeneChip. Empat puluh sembilan gen yang diregulasi dan empat gen yang turun-diatur oleh
pengobatan ATRA. Banyak gen diregulasi dikaitkan dengan regulasi negatif proliferasi sel. Selain itu, pengobatan
ATRA menurunkan ekspresi mRNA dari 17-beta-dehidrogenase 2 (HSD17B2) yang mengubah estradiol menjadi
estron secara dosis-tergantung, dan pengukuran ELISA menunjukkan bahwa produksi estradiol pada jaringan OEC
dihambat oleh perlakuan ATRA. Kesimpulan: Asam retinoat memiliki potensi untuk menekan perkembangan
endometriosis.
Pendahuluan Endometriosis adalah penyakit ginekologi yang umum yang mengena sekitar 10% dari wanita usia
reproduksi. Kondisi ini ditandai oleh lokalisasi ektopik jaringan endometrium-seperti di rongga panggul. Sebagai
hasil dari perkembangan penyakit, peradangan kronis diinduksi dalam rongga panggul, dan gejala seperti nyeri
panggul kronis dan infertilitas kemudian mempengaruhi kesehatan pasien. Meskipun banyak penelitian telah
dilakukan untuk menjelaskan patogenesis termasuk gin ori-, kehilangan kontrol proliferasi sel dan genesis steroido-
lokal, dll, tidak ada jawaban yang jelas telah diperoleh sejauh ini. Vitamin A memiliki beragam peran fisiologis
penting dalam perkembangan embrio, reproduksi, visi, pengembangan sel kekebalan tubuh, dan berbagai fungsi
saraf [1-8]. Vitamin A melakukan peran-peran ini melalui turunannya disebut retinoid. Setelah asam retinol dibawa
ke dalam sel
oleh retinol binding protein, yang merupakan pembawa prinsip dan spesifik dari retinol dalam darah, dan subse-
quently dikombinasikan dengan reseptor asam retinoat yang membentuk heterodimer dengan reseptor retinoid X di
promotor spesifik dan memodulasi transkripsi, berfungsi sebagai modulator mempengaruhi imunomodulator
biologis, anti inflamasi dan sel kegiatan pembangunan, dll All-trans retinoic acid (ATRA) adalah bentuk aktif dari
metabolit vitamin A dan dihasilkan dari konversi Bolic meta retinol.
Endometrium rahim adalah asam retinoat terkumpul lated jaringan, dan telah diakui sebagai diperlukan untuk
diferensiasi yang normal endometrium sel dan fungsi [9-12]. Studi terbaru menunjukkan kemungkinan bahwa aber-
metabolisme retinoid kata-kata kasar yang terlibat dalam ology pathophysi- endometriosis [13-18]. Studi kami
sebelumnya menunjukkan banyak lesi menyimpang metilasi DNA yang menyertai ekspresi mRNA abnormal pada *
Correspondence iso-: yymgt@yamaguchi-u.ac.jp
lated sel stroma endometrium yang berasal dari ovarium
1Jurusan Obstetri dan Ginekologi, Yamaguchi University Graduate School of Medicine, Minamikogushi 1-1-1, Ube 755-8505,
Jepang daftar lengkap informasi penulis tersedia pada akhir artikel
kistaendometrium (choESC) [19]. Gen ini, STRA6 dan gen HSD17B2 menunjukkan abnormal rendah
© 2015 Yamagata et al. Ini adalah sebuah artikel Open Access didistribusikan di bawah persyaratan Lisensi Creative Commons
Attribution (http://creativecommons.org/licenses/by/4.0), yang memungkinkan penggunaan tak terbatas, distribusi, dan
reproduksi dalam media apapun, asalkan karya asli adalah benar dikreditkan. Creative Commons Public Domain Dedication
pengabaian (http: // creativecommons.org/publicdomain/zero/1.0/) berlaku untuk data yang tersedia dalam artikel ini, kecuali
dinyatakan lain.
ekspresi dan tingkat tinggi metilasi DNA dalam kasus-kasus endometriosis ovarium. STRA6 adalah reseptor
permukaan sel penting untuk protein yang mengikat retinol dan diperlukan untuk penyerapan retinol ke dalam sel.
HSD17B2 mengkonversi diol estra- ke estron. Oleh karena itu, ekspresi rendah STRA6 dan HSD17B2 hasil dalam
tesis syn endogen ditingkatkan estradiol. Konsentrasi estradiol meningkat dalam jaringan endometriosis
mempromosikan ment mengembangkan- endometriosis. Selain itu, mengurangi tingkat ATRA yang diamati dalam
lesi endometriosis klinis dibandingkan dengan eutopik endometrium [18], dan ATRA memiliki efek penghambatan
pada mouse implan endometriosis dalam in vivo model yang endometriosis [20]. Mengumpulkan showns bukti
bahwa metabolisme asam retinoat yang menyimpang adalah sebuah faktor penting bagi perkembangan
endometriosis.
Dalam studi ini, kami meneliti efek dari ATRA pada ekspresi gen di choESC terisolasi dan berbudaya. Kami juga
mengevaluasi efek ATRA pada estradiol tion produc-, modulator kunci pengembangan endometriosis.
Bahan dan metode Protokol penelitian dan disetujui oleh Institutional Review Board dari Yamaguchi University
Graduate School of Medicine. Informed consent didapatkan dari peserta sebelum koleksi setiap sampel. Semua
percobaan yang melibatkan penanganan sel manusia azasi dan jaringan dilakukan sesuai dengan prinsip Deklarasi
Helsinki.
ESC isolasi, budaya dan RNA total isolasi ovarium kista endometriosis (OEC) diperoleh dari tiga mata pelajaran
(berusia 24 - 39 tahun) selama fase proliferatif. Tak satu pun dari subyek menggunakan terapi hormonal setiap
selama minimal 3 bulan sebelum operasi. ESC diisolasi seperti dilaporkan sebelumnya [19]. Secara singkat, OCE
dicuci dengan dimodifikasi Eagle menengah fenol Dulbecco merah bebas ini (DMEM) (Invitrogen, Paisley, UK)
mengandung Glutamax (Invitrogen), 50 mg / ml streptomisin (Invitrogen) dan 50 IU / ml penisilin (Invitrogen) dan
kemudian cincang kecil-kecil berukuran <1 mm3. Kemudian, tion diges- enzimatik jaringan cincang dengan 0,2%
kolagenase (Sigma, St Louis, MO, USA) dilakukan dalam tor incuba- gemetar selama dua jam pada suhu 37 ° C,
setelah sel-sel stroma endometrium dipisahkan menggunakan filtrasi melalui 70 mm nilon mesh. Filtrat dicuci tiga
kali. The choESC yang diunggulkan di 75 cm2 termos kultur jaringan dan tumbuh sampai pertemuan di fenol merah
bebas DMEM mengandung Glutamax, antibiotik dan 10% dekstran-dilapisi arang-dilucuti serum janin anak sapi
(Industri Biologi, Kibbutz Beit Haemek, Israel) pada 37 ° C di 95% udara dan 5% CO2. Homogenitas persiapan
ESC terisolasi adalah 98%, yang diverifikasi oleh immunocytochemistry menggunakan antibodi terhadap vimentin,
penanda spesifik
Yamagata et al. Jurnal ovarium Penelitian (2015) 8:49 Halaman 2 dari 7
sel stroma. Jika perlu, sel-sel disubkultur dalam labu kultur 75 cm2 jaringan lain.
Dalam rangka untuk menyelidiki perubahan transkripsi setelah perawatan ATRA di choESC berbudaya, ATRA
telah ditambahkan ke media pada konsentrasi akhir 10-7 M. Secara terpisah, 10-9, 10-8 dan 10-7 M dari ATRA
ditambahkan ke Media untuk analisis ekspresi HSD17B2-mRNA. DMSO ditambahkan ke media sebagai kontrol
kendaraan. Media itu berubah setiap hari, dan setelah empat hari inkubasi, sel-sel dipanen dan dibekukan pada-80 °
C sampai ekstraksi RNA.
RNA total diekstraksi menggunakan kit RNeasy dari QIAGEN (Valencia, CA, USA) sesuai dengan instruksi
pabrik.
Analisis transcriptome Dalam rangka untuk mengevaluasi integritas RNA, analisis fluidic mikro dilakukan
menggunakan Agilent 2100 Bioanalyzer dengan kit RNA6000 nano (nologies Agilent Tech-, Palo Alto, CA, USA).
Untuk lisis microarray ana-, kami hanya digunakan sampel RNA yang RNA integritas nomor (RIN) lebih besar dari
8,5. Ekspresi gen dianalisis menggunakan GeneChip® Manusia Gene 1.0 ST Array (Affymetrix, Santa Clara, CA,
USA) contain- ing 764.885 probe (dan mendukung 28.869 gen). Target cDNA dibuat dari 200 ng RNA total dengan
Ekspresi kit Ambion® WT (Ambion, Austin, TX, USA) dan kit Affymetrix® GeneChip® WT Terminal Pelabelan
(Affymetrix). Hibridisasi dengan sinar microar-, mencuci, pewarnaan dan pemindaian yang dilakukan menggunakan
sistem GeneChip® (Affymetrix) terdiri dari Scanner 3000 7G Workstation Fluidics 450 dan hibridisasi Oven 645.
data gambar yang dipindai diolah menggunakan Affymetrix® Ekspresi ConsoleTM Versi 1.1. Flip-perubahan untuk
setiap gen dievaluasi menggunakan Analisis Ekspresi Gen dengan Partek® Genomics Suite Program 6.5 software
(Partech, Münster, Jerman). Gen dengan tingkat ekspresi yang lebih besar dari 2- kali lipat atau kurang dari 0,5
diakui sebagai berbeda secara signifikan.
Kuantitatif RT-PCR antara gen diferensial dinyatakan dalam ATRA- diperlakukan choESC dibandingkan dengan sel
kontrol, kami fokus pada IRF8 itu, TNFSF13B, Wnt4, RARRES1, IGFBP3, PSMB9, RARRES3, IGFBP6,
CYP26B1, IDO1 dan gen RARE terkait dengan negatif proliferasi sel. Dalam rangka untuk memvalidasi hasil
analisis transcriptome, real-time RT-PCR dilakukan pada gen ini menggunakan sampel yang sama. The HSD17B2
ekspresi mRNA juga diperiksa.
Reaksi RT dilakukan dengan PrimeScript RT Guru Mix (TAKARA, Ohtsu, Jepang) menurut protokol pabrik.
Secara singkat, 0,5 mg total RNA
mengandung diinkubasi dengan 4 ml 5x PrimeScript RT Guru Mix
Glutamax (Invitrogen), 50 mg / ml strepto-
di 20 ml dari campuran reaksi pada suhu 37 ° C selama 15 menit, danulang
mycin( Invitrogen), 50 IU / ml penisilin (Invitrogen)
ayat transcriptase itu tidak aktif dengan memanaskan sampel
dan 10% dekstran-dilapisi arang-dilucuti janin anak
sapi pada 85 ° C selama 5 s. Komplementer DNA (cDNA) adalah
serum (Biological Industries) pada 37 ° C di 95%
udara dan segera digunakan untuk PCR. Semua reaksi PCR per-
5% CO2. ATRA ditambahkan ke media pada con-
akhir dibentuk menggunakan SYBR Premix Ex Taq (TAKARA) dan
centration dari 10-7 M. jaringan itu juga berbudaya
dalam instrumen LightCycler (Roche Applied Science, Basel,
media kontrol yang mengandung 0,01% dimetil
sulfoksida. Swiss). Secara singkat, 2 ml aliquot mengandung cDNA yang
Dua hari kemudian, media yang disedot, disentrifugasi
diperkuat dalam volume total 20 ml mengandung 4 ml 5x
dan dibekukan pada -20 ° C sampai assay estradiol.
The estra- SYBR premix Ex Taq dan 0,2 pM primer masing-masing. Sebagai
konsentrasi diol dalam media kultur diukur
pengendalian internal untuk RT-PCR, TATA box-binding protein
menggunakan estradiol manusia ELISA kit (Cusabio
Biotech, (TBP) cDNA juga diperkuat. The set primer spesifik,
Wuhan, Cina). kecuali untuk TBP, dirancang dengan
menggunakan program software Primer3 (frodo.wi.mit.edu), sedangkan primer untuk TBP adalah
analisis statistik disintesis menurut laporan
sebelumnya [21]. pri
Perbandinganantara kelompok-kelompok dilakukan
oleh urutan mer ANOVA dijelaskan pada Tabel 1. Shuttle PCR
diikutioleh perbandingan post hoc menggunakan
Turki-Kramer dilakukan di 40 siklus sebagai berikut: pre-inkubasi selama 10 s
uji beda jujur signifikan. Nilai P <0,05 adalah pada 95
° C, denaturasi selama 5 s pada 95 ° C dan anil / mantan
dianggap signifikan secara statistik. Ketegangan
statistik selama 20 s pada 60 ° C. Semua sampel dijalankan dalamdupli-
analisisdilakukan dengan menggunakan versi R 2.12.0
cate soft. Kurva leleh produk diperoleh
Program ware. setelah bersepeda dengan peningkatan
bertahap dalam suhu 55-95 ° C. Pada akhir 40 siklus, reaksi-produk
Hasil ucts dipisahkan secara elektroforesis pada
gelagarosa
analisistranscriptomedan kuantitatif RT-PCR dan
diwarnai dengan ethidium bromide untuk confirm- visual yang
Dari 28.869 gen manusia diidentifikasi dalam indeks
gen kita, asi produk PCR.
49 gen yang diregulasi dan hanya empat gen yang menurunkan regulasi di ATRA-diperlakukan kultur jaringan
choESC dibandingkan dan uji estradiol
ke choESC kontrol (Tabel 2). Budaya OEC dilakukan
seperti yang dilaporkan sebelumnya
Dalam rangka untuk menentukan relevansi biologis
dif- dengan modifikasi [22]. Secara singkat, ovarium endometrium
gen ferentially menyatakan, Gene Ontologi dan kista
dinding kegg telah pembedahan dari ovarium. tis-
Analisisjalurdilakukan. Signifikan sue terkait cincang
menjadi potongan-potongan kurang dari 1,5 mm dalammax-
halterdeteksi seperti yang digambarkan (Tabel 3, 4).
Diameter imum sig-, dan jaringan cincang (100 mg basah
nifikan gen sangat disajikan dalam berat ATRA-
diperlakukan) secara acak aliquoted keeksperimen
choESC terkait dengan respon seluler yang
disebabkan oleh kelompok. Inkubasi dilakukan dalam rangkap tiga di plastik
stimulasi ATRA berdasarkan proses biologis dan
piring budaya dengan1 ml fenol merah bebas DMEM
analisisfungsi molekul ontologi. Beberapa istilah
Tabel 1 Primer urutan digunakan untuk kuantitatif RT-PCR Gene ID Maju primer Terbalik primer Produk ukuran (bp)
TNFSF13B GGAGAAGGCAACTCCAGTCA GCAATCAGTTGCAAGCAGTC 92
IRF8 GTCTTCGACACCAGCCAGTT GGCCATATCCGGAAACTCTT 114
RARRES3 GTGAGCAGGAACTGTGAGCA CAAAAGAGCATCCAGCAACA 136
RARRES1 ACGGCTCATCGAGAAAAAGA GAAAGCCAAATCCCAGATGA 151
IGFBP3 GGGGTGTACACATTCCCAAC AGGCTGCCCATACTTATCCA 116
IGFBP6 GAATCCAGGCACCTCTACCA GGTAGAAGCCTCGATGGTCA 173
CYP26B1 ACACGGTGTCCAATTCCATT GCCTCCTGGTACACGTTGAT 172
IDO1 GGCAAAGGTCATGGAGATGT TCCAGTTTGCCAAGACACAG 127
PSMB9 ACCAACCGGGGACTTACC GTCAAACTCCACTGCCATGA 70
RARB GAAACAGGCCTTCTCAGTGC TTGCTGGGTCGTCTTTTTCT 137
Wnt4 GCTGTGACAGGACAGTGCAT GCCTCATTGTTGTGGAGGTT 169
TBP TGCACAGGAGCCAAGAGTGAA CACATCACAGCTCCCCACCA 132
HSD17B2 TGGAACTGTGGAGGTCACAA CCACTTGGAAAGCTCCAGTC 178
Yamagata et al. Jurnal ovarium Penelitian (2015) 08:49 Page 3 dari 7
Tabel 2 Hasil microarray GeneChip. Perubahan yang diamati pada tingkat mRNA di choESC ATRA-diperlakukan dibandingkan
dengan sel kontrol simbol Gene Lipat-perubahan P-nilai
RARB 7.77 0,0001
RARRES1 7.31 0,0089
DHRS3 6.09 0,0006
LXN 5,30 0,0016
ADH1C 4,21 0,0047
CD22 4,09 0,0210
IRF8 3,97 0,0168
RARRES3 3,83 0,0142
TNFSF10 3,68 0,0169
IDO1 3,51 0,0369
GBP4 3,43 0,0032
ALDH1A1 3,31 0,0260
LGALS9B 3,06 0,0022
ANO3 3,04 0,0092
LGALS9 2,98 0,0101
LGALS9C 2,91 0,0034
GALNT12 2,89 0,0317
IRF1 2,87 0,0007
IGFBP6 2,80 0,0001
SLCO4C1 2,79 0,0021
TRPC4 2,76 0,0121
IGFBP3 2,54 0,0135
MX2 2,45 0,0138
TNFSF13B 2,44 0,0173
CYP26B1 2.30 0,0066
GNG2 2,28 0,0108
LOC100287290 2,28 0,0006
PELO 2,23 0,0459
OAS2 2.20 0,0198
RTP4 2,19 0,0176
IFIT2 2,19 0,0459
C10orf54 2,17 0,0029
CFI 2,14 0,0255
SAMD9L 2,12 0,0342
ACSL5 2,12 0,0462
SAMD9 2.10 0,0025
TMEM140 2,08 0,0162
APOL6 2,08 0,0074
PLK2 2,06 0,0212
CEACAM1 2,06 0,0235
GNG2 2,04 0,0018
PARP14 2,03 0,0113
Yamagata et al. Jurnal ovarium Penelitian (2015) 8:49 Halaman 4 dari 7
Tabel 2 Hasil microarray GeneChip. Perubahan yang diamati pada tingkat mRNA di choESC ATRA-diperlakukan dibandingkan
dengan sel kontrol (Lanjutan)
Wnt4 2,02 0,0405
HS6ST1 2,02 0,0207
PSMB9 2,02 0,0122
PTPRJ 2,01 0,0001
ARHGAP20 2.00 0,0210
GRIA1 -2,41 0,0463
POPDC2 -2,56 0,0401
HAS2 -2,61 0,0323
FMO1 -3,32 0,0262
Tabel 3 kategori Gene ontologi menggunakan proses biologis ontologi. Atas 21 kategori hal dengan jumlah gen lebih dari tiga p
<0,01 tercantum Term Hitungan P-nilai
Respon untuk stimulus 29 0,0035
proses sistem kekebalan 20 p <0,001
regulasi negatif dari proses selular 20 p <0,001
regulasi negatif dari proses biologis 20 0,0010
perkembangan organ 17 0,0098
kekebalan respon 16 p <0,001
Peraturan proliferasi sel 12 0,0016
Pertahanan respon 11 p <0,001
Peraturan apoptosis 11 0,0060
Peraturan kematian sel terprogram 11 0,0065
Peraturan kematian sel 11 0,0066
regulasi negatif dari proliferasi sel 10 p <0,001
Response untuk lainnya organisme 8 p <0,001
respon untuk stimulus biotik 8 0,0029
Monocarboxylic proses asam metabolisme 7 0,0037
pembuluh darah morfogenesis 6 0,0039
regulasi positif dari respon stimulus 6 0,0063
Darah pembangunan kapal 6 0,0073
pengembangan pembuluh darah 6 0,0081
hormon proses metabolisme 5 0,0019
Peraturan kadar hormon 5 0,0067
regulasi positif dari protein kinase cascade 5 0,0095
Seluler hormon metabol Proses ic 4 0,0031
Respon untuk lipopolisakarida 4 0,0066
proses metabolisme sekunder 4 0,0071
Respon untuk molekul asal bakteri 4 0,0089
terkait dengan regulasi negatif proliferasi sel juga terdaftar. Dalam analisis kegg jalur, gen yang berhubungan
dengan metabolisme retinol yang ditemukan diregulasi (data tidak ditampilkan).
Dalam rangka untuk memvalidasi hasil microarray, kuantitatif RT-PCR dilakukan pada 11 gen yang dipilih.
MRNA dari semua gen yang sangat disajikan berikut
kategori ontologi Tabel 4 Gene menggunakan molekul fungsi ontologi. Tujuh puncak kategori hal dengan jumlah gen lebih count
dan p <0,05 tercantum Term Hitungan P-nilai tiga gen
aktivitas Catalytic 34 0,0426
Signal aktivitas transduser 19 0,0231
aktivitas transduser Molecular 19 0,0231
Karbohidrat mengikat 7 0,0076
aktivitas sitokin 6 0,0026
Gula mengikat 5 0,0152
asam karboksilat mengikat 4 0,0334
Yamagata et al. Jurnal ovarium Penelitian (2015) 8:49 Halaman 5 dari 7
Gambar. 1 Hasil RT-PCR kuantitatif dalam 11 gen yang dipilih terlibat dalam proliferasi sel negatif untuk validasi dari array
ekspresi mRNA. Nilai-nilai yang ditampilkan sebagai mean ± SEM dari tiga percobaan. * P <0,05 vskontrol
perlakuandengan ATRA, dan tujuh gen menunjukkan perbedaan tidak bisa signifi- (Gbr. 1).
HSD17B2-mRNA ekspresi Dalam budaya choESC pada pengobatan dengan ATRA, ekspresi HSD17B2-mRNA
meningkat dengan cara yang tergantung dosis-. Ada perbedaan yang signifikan pada konsentrasi 10-7 M (Gambar.
2).
Kadar estradiol pada jaringan endometriosis budaya endometriosis jaringan ATRA-diperlakukan diperoleh dari OEC
dikultur dengan 10-7 M ATRA. Tingkat estradiol dalam medium dengan ATRA lebih rendah daripada yang diamati
dalam media kontrol; Namun, tidak ada ferences dif- signifikan (Gambar. 3).
Diskusi Hubungan antara metabolisme retinol menyimpang dan endometriosis baru-baru ini dilaporkan. Pavone ME
et al. menunjukkan bahwa resistensi progesteron memiliki
pengaruh terhadap serapan retinol dan pertumbuhan-penekan tindakan asam retinoat dalam sel stroma endometrium
[14]. Para penulis ini juga digambarkan bahwa ekspresi gen abnormal yang terlibat dalam penyerapan retinol dan
metabolisme dalam pengaturan endometriosis, menunjukkan bahwa asam retinoat sinyal jalur menyimpang dapat
mempengaruhi kelangsungan hidup sel endometriosis [15]. Wieser F. et al. menunjukkan bahwa asam retinoat in
hibits pengembangan implan endometriosis in vivo [20]. Dalam kami studi in vitro diikuti dengan analisis
transcriptome menggunakan sel stroma endometrium yang terisolasi, gen diregulasi oleh perlakuan ATRA dikaitkan
dengan
Yamagata et al. Jurnal ovarium Penelitian (2015) 8:49 Halaman 6 dari 7
Gambar. 2 Pengaruh ATRA pada ekspresi HSD17B2-mRNA di choESC berbudaya. Sel diperoleh dari tiga orang yang berbeda,
dan sel-sel dari individu tertentu dikultur dalam rangkap tiga. Sel-sel diperlakukan dengan konsentrasi yang ditunjukkan dari
ATRA selama empat hari. Nilai-nilai yang ditampilkan sebagai mean ± SEM dari tiga percobaan. * P <0,05 vs kontrol, ATRA:
10-9 M, dan 10-8 M
Gambar 3 Pengaruh ATRA pada produksi estradiol dalam jaringan OEC berbudaya.. Jaringan diperoleh dari empat individu yang
berbeda, dan sel-sel dari individu tertentu dikultur dalam rangkap dua. Jaringan diobati dengan 10-7 M ATRA selama dua hari.
Nilai-nilai yang ditampilkan sebagai mean ± SEM dari empat percobaan

penekanan proliferasi sel. Kami juga melakukan studi proliferasi sel; Namun, ATRA tidak memiliki efek anti-
proliferasi yang signifikan pada choESC berbudaya hingga empat hari (data tidak ditampilkan). Fakta bahwa
lingkungan dalam budaya yang berbeda dari kondisi in vivo dan choESC berbudaya perlahan membagi
menunjukkan kemungkinan bahwa efek anti-proliferasi asam retinoat tidak dapat dideteksi. Wieser F. et al. juga
melaporkan tion observa- sama menunjukkan efek tidak langsung dari pertumbuhan sel inhib- ition [20]. Mereka
mendalilkan efek supresi asam retinoat pada IL-6 dan MCP-1 produksi, yang mengakibatkan diferensiasi makrofag
peritoneal.
Endometriosis adalah penyakit estrogen-dependent. Hal ini terkenal bahwa produksi steroid seks lokal dalam
jaringan triotic endome- diregulasi oleh aktivitas enzim katalitik yang tinggi, seperti bahwa karena aromatase [23-
26]. Lebih jauh, mengurangi konsentrasi asam retinoat yang diamati dalam lesi endometriosis [18], dan kami
sebelumnya melaporkan bahwa ekspresi HSD17B2 ditekan di choESC accom- dengan didampingi oleh metilasi
DNA menyimpang [19]. Hasil asam insufisiensi retinoic dalam berbagai cacat molekul dan fungsional, termasuk
kekurangan HSD17B2, yang mengarah ke estradiol kelebihan dalam jaringan endometriosis. Sekarang studi
didemonstrasikan efek langsung dari ATRA pada HSD17B2 expression sion di choESC. Sejak pengobatan ATRA
tidak mengubah status metilasi DNA dari gen HSD17B2 (data tidak ditunjukkan), ekspresi HSD17B2 menurun
mungkin karena modulasi negatif dari faktor transkripsi. Dalam analisis scriptome tran-, perubahan kali lipat dalam
ekspresi gen HSD17B2 setelah pengobatan dengan ATRA adalah 2,22; Namun, perbedaannya tidak signifikan (p =
0,24). Hal ini disebabkan keterbatasan penelitian kami yang dihasilkan dari kuantitas terbatas sampel yang tersedia.
Tidak jelas apakah peraturan up gen yang berhubungan dengan proliferasi sel negatif yang disebabkan oleh
pengobatan ATRA adalah karena fungsi langsung dari asam retinoat, mengurangi produksi estradiol atau jalur tidak
langsung lainnya.
Dalam rangka untuk menyelidiki efek dari asam retinoat pada steroidogenesis, produksi terutama estradiol, budaya
ian jaringan endometriosis ovar- dilakukan. Karena ekspresi HSD17B2 jauh lebih tinggi di sel epitel endometrium
dibandingkan sel stroma endometrium, sebuah kultur jaringan daripada kultur sel stroma endometrium dilakukan
dalam penelitian ini. Meskipun kelimpahan estradiol sedikit menurun dengan suplementasi ATRA, tidak ada
perbedaan yang signifikan secara statistik. Ada beberapa kemungkinan yang menjelaskan hasil ini. Asam OKI
Retin- hanya memiliki efek penekan yang lemah pada ekspresi gen HSD17B2, sehingga konversi tidak efektif
estradiol. Dalam pengaturan endometriosis, itu belum dijelaskan sepenuhnya apakah asam retinoat meregulasi atau
downregulates hormon steroid enzim sintesis bio seks. Wickenheisser JK et al. melaporkan bahwa ekspresi gen dari
STAR, CYP11A dan CYP17
dirangsang oleh ATRA di sel teka ovarium manusia [27]. Sintesis hormon steroid meningkat dengan retinoid pada
hewan pengerat di organ lain [28-30]. Pengamatan ini di- timate bahwa itu terlalu dini untuk menarik kesimpulan
dalam hal hubungan antara asam retinoat dan konsentrasi estradiol lokal pada pasien dengan osis endometri-. Selain
seks biosintesis hormon steroid, telah dilaporkan bahwa asam retinoat menurun estrogen dan progesteron terone
reseptor-mediated aktivasi transkripsi [31]. Dalam rangka untuk menjelaskan hubungan antara asam retinoat dan
keterlibatan hormonal menyimpang dalam patogenesis endometriosis, penelitian lebih lanjut diperlukan.
Singkatnya, ekspresi gen yang terkait dengan sel penekanan asi prolifer-, dll adalah diregulasi oleh ATRA
memperlakukan ment di sel stroma endometrium yang terisolasi berasal dari lesi endometriosis ovarium dalam
penelitian ini. Pengobatan ATRA juga memiliki potensi untuk menekan estradiol pro duksi. Hasil ini menunjukkan
potensi terapi asam retinoat untuk pengobatan endometriosis.
Bersaing kepentingan Para penulis menyatakan bahwa mereka tidak memiliki kepentingan bersaing.
Penulis kontribusi YY dilakukan studi dan disusun naskah. ET dan AN dilakukan analisis microarray dan analisis statistik. MS,
MO, KJ, LL, SS, RM, TT, HA dan HT berpartisipasi dalam desain penelitian dan membantu untuk memperbaiki sampel. NS
membantu menyusun naskah. Semua penulis membaca dan menyetujui naskah akhir.
Pengakuan Para penulis mengucapkan terima kasih kepada Brian Quinn untuk mengoreksi naskah. Karya ini didukung oleh
Hibah-in-Aid 25464560 untuk Riset Ilmiah dari try Kementerian Negara Pendidikan, Ilmu Pengetahuan dan Kebudayaan,
Jepang.
Rincian penulis 1Jurusan Obstetri dan Ginekologi, Yamaguchi University Graduate School of Medicine, Minamikogushi 1-1-1,
Ube 755-8505, Jepang. 2Department Biokimia dan Biologi Molekuler, Yamaguchi University Graduate School of Medicine,
Minamikogushi 1-1-1, Ube 755-8505, Jepang.
Menerima: 3 Juni 2015 Diterima: 17 Juli 2015
Referensi 1. Ross AC, Gardner EM. Fungsi dari vitamin A dalam pertumbuhan sel dan
diferensiasi, dan peran selama kehamilan dan menyusui. Adv Exp Med Biol. 1994; 352: 187-200. 2. Ross SA, McCaffery PJ,
Drager UC, De Luca LM. Retinoid dalamembrional.
pengembangan Physiol Rev 2000; 80: 1021-1054. 3. Clagett-Dame M, DeLuca HF. Peran vitamin A dalammamalia
reproduksidan perkembangan embrio. Annu Rev Nutr. 2002; 22: 347-81. 4. dehidrogenase Duester G. Alkohol sebagai
mediator penting dariasam retinoat
sintesisdari vitamin A dalam embrio tikus. J Nutr. 1998; 128: 459S-62S. 5. Crouch RK, Chader GJ, Wiggert B, Pepperberg
DR. Retinoid dan
proses visual.Photochem Photobiol. 1996; 64: 613-21. 6. Stephensen CB. Vitamin A, infeksi, dan fungsi kekebalan tubuh.
Annu Rev Nutr.
2001; 21: 167-92. 7. Drager UC. Signaling asam retinoat di otak berfungsi. Sci STKE.
2006; PE10. 8. Asam Maden M. retinoat dalam pengembangan, regenerasi dan
pemeliharaansistem saraf. Nat Rev Neurosci. 2007; 8: 755-65. 9. Zheng WL, Ong DE. Pola spasial dan temporal ekspresi
selular
protein pengikat retinol dan seluler retinoic acid protein pengikat dalam rahim tikus selama awal kehamilan. Biol Reprod. 1998;
58: 963-70.
Yamagata et al. Jurnal ovarium Penelitian (2015) 8:49 Halaman 7 dari 7
10. Zheng WL, Sierra-Rivera E, Luan J, Osteen KG, Ong DE.asam retinoat
Sintesisdan ekspresi seluler protein pengikat retinol dan seluler retinoic acid-binding protein tipe II yang bersamaan dengan
desidualisasi sel stroma tikus rahim. Endokrinologi. 2000; 141: 802-8. 11. Sidell N, Feng Y, Hao L, Wu J, Yu J, Kane MA, et al.
Asam retinoat adalah
kofaktor untuk regulasi translasi dari faktor pertumbuhan endotel vaskular pada sel stroma endometrium manusia. Mol
Endocrinol. 2010; 24: 148-60. 12. Wu J, Hansen JM, Hao L, Taylor RN, Sidell N. retinoat rangsangan asam dari
VEGF sekresi dari sel stroma endometrium manusia dimediasi oleh produksi spesies oksigen reaktif. J Physiol. 2011; 589: 863-
75. 13. Sawatsri S, Desai N, Batu JA, asam Sidell N. retinoat menekan produksi interleukin-6 dalam sel endometrium manusia.
Fertil Steril. 2000; 73: 1012-1019. 14. Pavone ME, Reierstad S, Sun H, Milad M, Bulun SE, Cheng YH.diubah
Serapan retinoiddan tindakan memberikan kontribusi ke sel hidup di endometriosis. J Clin Endocrinol Metab. 2010; 95: E300-9.
15. Pavone ME, Dyson M, Reirstad S, Pearson E, Ishikawa H, Cheng YH, et al.
Endometriosis mengungkapkan pola molekul konsisten dengan penurunan serapan retinoid, metabolisme dan tindakan. Hum
Reprod. 2011; 26: 2157-64. 16. Pierzchalski K, Taylor RN, Nezhat C, Jones JW, Napoli JL, Yang G, et al.
Biosintesis asam retinoat terganggu pada endometriosis manusia dan murine. Biol Reprod. 2014; 91: 84. 17. Sidell N, Han SW,
Parthasarathy Peraturan S. dan modulasiabnormal
respon imunpada endometriosis. Ann NY Acad Sci. 2002; 955: 159-73. 18. Sokalska A, Anderson M, Villanueva J, Ortega I,
Bruner-Tran KL, Osteen KG, et
al. Efek dari simvastatin pada sistem asam retinoat dalam sel stroma endometrium manusia primer dan dalam model chimeric
endometriosis manusia. J Clin Endocrinol Metab. 2013; 98: E463-71. 19. Yamagata Y, Nishino K, Takaki E, Sato S, Maekawa R,
Nakai A, et al. Genome-
lebar DNA metilasi profil di eutopik berbudaya dan sel stroma endometrium ektopik. PLoS One. 2014; 9, e83612. 20. Wieser F,
Wu J, Shen Z, Taylor RN, asam Sidell N. retinoat menekan pertumbuhan lesi, menghambat sekresi sitokin peritoneal, dan
mempromosikan diferensiasi makrofag dalam model tikus imunokompeten endometriosis. Fertil Steril. 2012; 97: 1430-7. 21.
Yamagata Y, Asada H, Tamura saya, Lee L, Maekawa R, Taniguchi K, et al.DNA
Methyltransferase ekspresidalam endometrium manusia: down-regulasi oleh progesteron dan estrogen. Hum Reprod. 2009; 24:
1126-1132. 22. Barbieri RL, Makris A, Randall RW, Daniels G, Kistner RW, Ryan KJ. Insulin
merangsang akumulasi androgen di incubations dari stroma ovarium diperoleh dari wanita dengan hiperandrogenisme. J Clin
Endocrinol Metab. 1986; 62: 904-10. 23. Kitawaki J, Noguchi T, Amatsu T, Maeda K, Tsukamoto K, Yamamoto T, et al.
Ekspresi aromatase sitokrom P450 protein dan utusan asam ribonukleat di endometriosis manusia dan jaringan adenomyotic
tetapi tidak dalam endometrium normal. Biol Reprod. 1997; 57: 514-9. 24. Burney RO, Giudice LC. Patogenesis dan
patofisiologi
endometriosis. Fertil Steril. 2012; 98: 511-9. 25. Bulun S, Zeitoun K, Takayama K, secara Sasano H. Molekuler untuk
mengobati
endometriosis dengan aromatase inhibitor. Hum Reprod Update. 2000; 6: 413-8. 26. Nothnick WB. Munculnya
menggunakan inhibitor aromatase untukendometriosis.
pengobatan Reprod Biol Endocrinol. 2011; 9: 87. 27. Wickenheisser JK, Nelson-Degrave VL, Hendricks KL, Legro RS,
Strauss-3 JF,
McAllister JM. Retinoid dan retinol berbeda-beda mengatur biosintesis steroid dalam sel teka ovarium terisolasi dari bersepeda
wanita normal dan wanita dengan sindrom ovarium polikistik. J Clin Endocrinol Metab. 2005; 90: 4858-65. 28. Munetsuna E,
Hojo Y, Hattori M, Ishii H, Kawato S, Ishida A, et al.retinoat
Asammerangsang 17beta-estradiol dan sintesis testosteron dalam budaya irisan tikus hippocampus. Endokrinologi. 2009; 150:
4260-9. 29. Lee HK, Yoo MS, Choi HS, Kwon HB, asam Soh J. retinoat up-mengatur
gen protein regulator akut steroidogenik. Mol Sel Endocrinol. 1999; 148: 1-10. 30. Lefevre A, Rogier E, Astraudo C,
Duquenne C, Finaz C. Peraturan oleh
retinoid hormon luteinizing / gonadotropin reseptor chorionic, kolesterol rantai samping belahan dada sitokrom P-450, 3 beta-
hidroksisteroid dehidrogenase / delta (5-4) -isomerase dan 17 alpha-hydroxylase / C17-20 lyase sitokrom P-450 utusan kadar
asam ribonukleat di garis sel K9 tikus Leydig. Mol Sel Endocrinol. 1994; 106: 31-9. 31. Kazmi SM, Plante RK, Visconti V, Lau
CY. Perbandingan N- (4-hidroksifenil)
retinamide dan semua-trans-retinoic acid dalam regulasi retinoid reseptor dimediasi ekspresi gen di lini sel kanker payudara
manusia. Kanker Res. 1996; 56: 1056-1062.

You might also like