You are on page 1of 17

Lipemia: penyebab, mekanisme interferensi, deteksi dan manajemen

Abstrak
Dalam pengaturan laboratorium klinis, gangguan dapat menjadi sumber signifikan kesalahan
laboratorium dengan potensi menyebabkan bahaya serius bagi pasien.
Setelah hemolisis, lipemia adalah gangguan endogen yang paling sering yang dapat mempengaruhi hasil
berbagai metode laboratorium oleh beberapa mekanisme.
Penyebab preanalitik yang paling umum dari sampel lipemik adalah waktu yang tidak mencukupi dari
pengambilan sampel darah setelah makan atau pemberian parenteral
emulsi lipid sintetis. Meskipun cara terbaik untuk mendeteksi tingkat lipemia adalah mengukur indeks
lipemik pada platform analitik, laboratorium
ahli harus menyadari masalah-masalahnya, seperti hasil positif palsu dan kurangnya standarisasi antara
produsen. Tidak seperti untuk gangguan lainnya,
lipemia dapat dihilangkan dan pengukuran dapat dilakukan dalam sampel yang jelas. Namun, protokol
untuk menghilangkan lipid dari sampel harus
dipilih dengan hati-hati, karena tergantung pada analit yang harus ditentukan. Investigasi gangguan
lipemia adalah kewajiban produsen
reagen laboratorium; Namun, beberapa temuan literatur melaporkan kurangnya verifikasi data yang
dideklarasikan. Apalagi, kriteria penerimaan
Saat ini digunakan oleh sebagian besar produsen tidak didasarkan pada variasi biologis dan perlu direvisi.
Prosedur tertulis untuk mendeteksi lipemia,
menghilangkan gangguan lipemia dan melaporkan hasil dari sampel lipemik harus tersedia bagi staf
laboratorium untuk menstandardisasi prosedur,
mengurangi kesalahan dan meningkatkan keselamatan pasien.

pengantar
Interferensi analitis adalah penyimpangan dari yang benar
nilai analit yang disebabkan oleh adanya beberapa
zat endogen atau eksogen (1). Dalam
pengaturan laboratorium klinis, gangguan bisa menjadi
sumber kesalahan laboratorium yang signifikan dengan potensi
menyebabkan bahaya serius bagi pasien (2). Tidak seperti
untuk hemolisis yang diakui sebagai salah satu dari
penyebab utama gangguan preanalytical (3), dalam
laporan literatur terbaru, lipemia sering diabaikan.
Keseluruhan frekuensi sampel lipemik
berkisar 0,5-2,5%, tergantung pada jenis
rumah sakit dan proporsi pasien rawat inap dan rawat jalan
sampel (4-6). Analisis kesalahan preanalytical
di laboratorium kami menunjukkan rendahnya frekuensi lipemik
sampel (kurang dari 0,5%) (5). Namun, dalam
unit rawat jalan, lipemia adalah penyebab utama
sampel yang tidak sesuai dengan frekuensi hampir
4 kali lipat lebih tinggi daripada di rumah sakit pasien (5). Meskipun
proporsi tertentu dari sampel lipemik
di laboratorium berasal dari berbagai patofisiologi
kondisi (mis. multiple myeloma,
diabetes mellitus, pankreatitis akut, gagal ginjal
atau hypothyreosis), beberapa faktor preanalitik secara signifikan
berkontribusi pada lipemia. Pengakuannya
dan manajemen masalah ini merupakan bidang utama
untuk perbaikan untuk meminimalkan laboratorium
kesalahan (7,8).
Artikel ini menyajikan ikhtisar tentang preanalytical
penyebab lipemia, mekanisme aksi, metode
deteksi, metode penghapusan dan penyelidikan lipemia
lipemia dalam studi gangguan.

Penyebab lipemia
Lipemia adalah kekeruhan dari sampel yang disebabkan oleh akumulasi
partikel lipoprotein. Sebagai lipoprotein
bervariasi dalam ukuran, tidak semua kelas berkontribusi sama
kekeruhan. Partikel terbesar, kilomikron,
dengan ukuran sampel 70-1000 nm, memiliki yang terbesar
berpotensi menyebabkan kekeruhan sampel. Akumulasi
partikel kecil, lipoprotein densitas tinggi
(HDL), low density lipoproteins (LDL) dan
lipoprotein densitas rendah yang sangat kecil (VLDL) tidak
hasil dengan sampel lipemik (Gambar 1) (9).
Penyebab preanalitik yang paling umum dari lipemia
adalah waktu pengambilan sampel darah yang tidak memadai setelah
makan. Di rumah sakit pengaturan proporsi tertentu
sampel lipemik tidak dapat dihindari, karena pasien
dirawat di layanan darurat di berbagai
waktu hari dan berbagai interval sejak mereka
makanan terakhir. Namun, pasien rawat jalan yang datang
laboratorium untuk pengujian laboratorium yang ditunjuk, seharusnya
dipersiapkan dengan benar dan berpuasa sebelum darah
contoh. Beberapa laboratorium menginstruksikan pasien mereka
bahwa mereka harus berpuasa hanya untuk tes-tes itu
nilai mana yang akan dipengaruhi oleh asupan makanan, seperti
glukosa, lipid atau kalsium. Namun, meski demikian
nilai-nilai parameter tertentu tidak akan diubah
setelah makan, lipemia postprandial sampel
bisa menjadi penyebab kesalahan laboratorium. Mungkin
contoh terbaik untuk fakta ini adalah waktu prothrombin
(PT), yang tidak dapat ditentukan oleh agregometri optik
dalam sampel lipemum, bahkan jika makanan itu sendiri
tidak menyebabkan perubahan nilai PT (10).
Hasil artikel yang baru-baru ini diterbitkan oleh Kackov
dan Simundic pada persiapan rawat jalan untuk darah
sampling, mengungkapkan hasil yang menarik (11). Kapan
ditanya apakah mereka berpuasa, 93% (140/150) dari
pasien yang disurvei dikonfirmasi. Namun, kapan
diminta untuk menjelaskan arti dari negara puasa,
hanya 58 dari 150 pasien yang mampu dengan benar
kenali negara puasa seperti yang didefinisikan di Kroasia
dengan rekomendasi nasional secepat 12 jam setelahnya
makanan terakhir (12,13). Sebagian besar dari 82 pasien
yang salah percaya bahwa persiapan mereka untuk
Kondisi puasa sudah memadai, percaya bahwa itu tepat
waktu yang harus berlalu sejak makan terakhir tidak
masalah. Selain itu, 5 pasien percaya bahwa setidaknya
10 jam harus berlalu dan 13 pasien percaya itu
setidaknya 8 jam harus berlalu sejak makanan terakhir sebelumnya
pengambilan sampel darah (11).
Ada heterogenitas besar dalam instruksi untuk
persiapan pasien untuk pengujian laboratorium.
Berdasarkan hasil artikel yang baru-baru ini diterbitkan
oleh Kelompok Kerja pada Fase Preanalitik di Indonesia
Federasi Kimia Klinis Eropa dan
Laboratorium Kedokteran (EFLM), waktu yang harus
lulus dari makanan terakhir bervariasi antar negara
(14). Rekomendasi Italia mengharuskan pasien itu
harus berpuasa setidaknya 8 jam, sementara Australia membutuhkan
hingga 10-16 jam cepat sebelum ke laboratorium
pengujian untuk status lipid. Oleh karena itu, Simundic di al.
mengusulkan bahwa upaya harus diletakkan dalam harmonisasi
instruksi tentang persiapan dan penyebaran pasien
dari informasi itu untuk keduanya, pasien
dan dokter (14). Pasien tidak diberi informasi dengan benar
tentang cara mempersiapkan pengujian laboratorium,
dokter umum dan perawat tidak menyediakan
informasi yang cukup dan biasanya sudah terlambat kapan
pasien datang ke laboratorium. Di rumah sakit pasien, lipemia juga bisa disebabkan
dengan mengambil sampel terlalu cepat setelah pemberian
emulsi lipid parenteral. Persiapan ini (Intralipid
®, Fresenius Kabi, Jerman dan Ivelip®, Baxter
Healthcare Corporation, Belgia) digunakan sebagai
total nutrisi parenteral untuk neonatus (15) atau pasien di unit perawatan intensif (16). Literatur terbaru
Temuan menggambarkan kasus-kasus lipemia, yang mengganggu
dengan analisis laboratorium, setelah penggunaan jangka panjang
Intralipid sebagai penangkal keracunan obat lipofilik
(17,18). Jika mungkin, untuk menghindari lipemia,
sampel harus diambil setidaknya 5-6 jam sesudahnya
administrasi Intralipid (19).

Mekanisme gangguan lipemia


Gangguan fisik dan kimia
Akumulasi lipoprotein dalam sampel pasien
dapat mengganggu analit diukur dengan fisik
dan interaksi kimia. Ini sangat penting
dalam metode elektroforetik. Bossuyt dkk.
telah menggambarkan gangguan lipemia dalam kapiler
elektroforesis protein serum (20). Saat menganalisis
sampel pasien dengan peningkatan konsentrasi
trigliserida, mereka mendeteksi abnormal
morfologi fraksi alfa-2-globulin. Mereka
juga telah direplikasi temuan itu ketika spiking asli
sampel dengan sampel yang mengandung konsentrasi tinggi
trigliserida. Tinggi puncak berkorelasi
dengan konsentrasi trigliserida yang disarankan
bahwa gangguan itu hadir dalam tergantung dosis
cara.
Lipemia juga bisa tidak secara khusus mengganggu dalam berbagai hal
immunoassays. Lipoprotein dapat mengganggu
reaksi antigen-antibodi dengan memblokir pengikatan
situs pada antibodi. Ini bisa terjadi bahkan ketika
antibodi terikat pada permukaan yang padat. Tergantung
pada sifat reaksi, interferensi
dapat menyebabkan keduanya, meningkat secara salah atau menurun secara palsu
hasil (21).
Interferensi dalam metode spektrofotometri
Mekanisme ini mungkin yang paling umum
cara di mana lipemia mempengaruhi hasil laboratorium
tes. Partikel lipoprotein dalam sampel dapat menyerap
cahaya. Jumlah cahaya yang diserap terbalik
sebanding dengan panjang gelombang dan menurun
dari 300 hingga 700 nm, tanpa penyerapan khusus
puncak di antara (22). Karena itu, metode itu
menggunakan gelombang yang lebih rendah lebih dipengaruhi oleh lipemia,
karena absorbansi adalah yang tertinggi
bagian dari spektrum. Banyak kimia klinis
metode (seperti alanin aminotranspherase, ALT; aspartat
aminotranspherase, AST; glukosa) gunakan reaksi
NAD (P) + ↔ NAD (P) H + H + sebagai reaksi indikator
untuk menentukan konsentrasi atau aktivitas
analit. Karena perubahan absorbansi adalah
diukur pada 340 nm, sebagian besar metode ini
sangat dipengaruhi oleh lipemia.
Arah dan besarnya gangguan lipemia
dalam metode spektrofotometri tergantung
pada panjang gelombang reaksi, arah
reaksinya (merupakan indikator pengukuran yang mengukur peningkatan
atau penurunan absorbansi) dan blanking dari
metode (23). Karena itu mungkin arah itu
dan tingkat interferensi akan berbeda
ketika membandingkan metode yang berbeda untuk hal yang sama
parameter. Ini telah dikonfirmasi dalam publikasi kami yang baru-baru ini diterbitkan
belajar (24). Kami telah menginvestigasi pengaruh
dari Intralipid diinduksi lipemia pada beberapa klinis
tes kimia menggunakan reagen dan platform analitik
dari tiga produsen (Cobas® 6000
<c501> oleh Roche, AU680 oleh Beckman Coulter dan
Sistem Vista Dimensi oleh Siemens). Untuk beberapa
parameter yang diuji, arah dan luasnya
gangguan lipemia serupa, misalnya semua
tiga pabrikan tidak menunjukkan pengaruh signifikan
pada konsentrasi CRP (C-reactive protein)
dan pengaruh negatif signifikan pada pengukuran
dari kreatinin. Namun, hasilnya berbeda
secara signifikan untuk pengukuran konsentrasi bilirubin.
Reagen Siemens (diazo-reaction) ditampilkan
positif kuat, pereaksi Roche (DPD - dichlorophenyldiazonium)
tetrafluoroborate) negatif kuat
bias, sementara metode Beckman Coulter (juga DPD)
hampir tidak terpengaruh oleh lipemia (24). Penulis lain
juga menemukan perbedaan luas lipemia
interferensi antara reagen berbeda untuk
penentuan bilirubin (25,26). Pengaruh lipemia
berbeda antara produsen bahkan jika
metodologi yang sama digunakan. Meany dkk. menyajikan
hasil pengaruh lipemia yang berbeda secara signifikan
pada konsentrasi salisilat dan asetaminofen
tekad oleh dua produsen (Roche Diagnostics
dan Stanbio Laboratories) menggunakan yang sama
metodologi enzimatik (27).

Non-homogenitas sampel
Untuk mendapatkan serum atau plasma untuk pengukuran analit,
darah perlu disentrifugasi. Setelah
sentrifugasi, partikel didistribusikan menurut
densitasnya: kilomikron dan partikel VLDL
memiliki kepadatan rendah dan oleh karena itu akan ditempatkan di
bagian atas tabung, membentuk lapisan yang berbeda. Konstituen
dalam plasma mendistribusikan antar lapisan
tergantung pada polaritas mereka: analytes hidrofobik
didistribusikan dalam fase lipid. Karena itu, analit
larut dalam fase berair (molekul kecil,
elektrolit) tidak akan ada di bagian atas
bagian dari tabung. Saat pengambilan sampel untuk pengukuran,
kebanyakan analisa mendapatkan sampel dari bagian atas
tabung, menggunakan sensor untuk mencegah jarum
dari pergi terlalu jauh ke dalam tabung. Ini bisa terjadi
dengan konsentrasi elektrolit yang menurun secara drastis
dan metabolit. Kebalikannya berlaku untuk kutub
zat (beberapa obat, seperti asam valproik atau
hormon steroid). Analit ini akan terakumulasi
di lapisan lipid atas, dan konsentrasi mereka
akan salah di bagian bawah
tabung.
Efek perpindahan volume
Mekanisme ini sangat mempengaruhi konsentrasi
elektrolit. Plasma normal terdiri dari sekitar
92% air dan 8% lemak. Dalam
sampel lipemik, proporsi fase lipid meningkat
dan bisa sampai 25%. Analitanya itu
tidak didistribusikan dalam fase lipid (yaitu elektrolit)
didistribusikan di bagian berair sampel,
yang sekarang hanya menyumbang 75% dari sampel.
Metode yang mengukur konsentrasi elektrolit
dalam total volume plasma (termasuk lipid
fase), seperti fotometri nyala atau potentiometri tidak langsung,
hasil dengan konsentrasi menurun secara palsu
elektrolit karena pengenceran tinggi
sebelum analisis. Mengalikan hasil yang diperoleh setelah
pengukuran ke volume plasma penuh, hasilnya
dengan kesalahan dalam konsentrasi elektrolit.
Efek ini terlihat pada sampel-sampel lipemik yang terlalu tinggi
(lebih dari 17 mmol / L trigliserida) (28). Metode itu
mengukur konsentrasi elektrolit saja
dalam fase air tanpa pengenceran (potensiometri langsung),
mengukur konsentrasi yang sesungguhnya dan apa adanya
tidak terpengaruh oleh lipemia. Hasil dari konsentrasi elektrolit
pengukuran serupa dengan menggunakan langsung
dan potentiometri tidak langsung, jika tidak ada gangguan
dari fase air dalam sampel, perbedaannya
antara metode berkorelasi dengan derajat
lipemia (29-31).
Deteksi lipemia
Deteksi visual
Deteksi visual lipemia pada sampel pasien
masih banyak digunakan pendekatan, terutama di laboratorium
dengan jumlah sampel rendah. Lipemia
dapat dideteksi secara visual jika konsentrasi
trigliserida dalam sampel pasien lebih dari 3,4 mmol / L
(32). Dalam sampel darah lengkap, deteksi visual
sangat keras dan dapat diamati dengan jauh lebih tinggi
konsentrasi trigliserida (lebih dari 11,3 mmol / L)
(32). Karena itu, lipemia dari sampel darah lengkap
sering tetap tidak terdeteksi. Ini baru-baru ini
ditunjukkan oleh Salvagno et al. dalam sebuah penelitian untuk
menentukan frekuensi lipemia dalam arteri darah lengkap
sampel yang diterima ke laboratorium untuk gas darah
analisis (33). Dengan mengukur indeks lipemik, mereka
telah menemukan 11% (52/478) sampel lipemik.
Lipemia pada sampel ini tidak terdeteksi secara visual
ketika sampel dianalisis, tetapi hanya dengan mengukur
Indeks L. Deteksi visual lipemia dalam serum
memberikan hasil yang sangat heterogen. Di dalam kita
studi tentang metode deteksi lipemia, kami punya
hanya menemukan tingkat kesepakatan yang moderat
antara 6 teknisi laboratorium dalam deteksi visual
lipemia (Koefisien tertimbang kappa, Κ =
0,70 (95% CI = 0,63-0,77) (34). Hasilnya mungkin
bahkan lebih buruk lagi, jika lebih banyak laboratorium
Staf terlibat dalam proses. Apalagi gelar sarjana
komparabilitas dengan deteksi otomatis
menggunakan indeks lipemik bahkan lebih rendah (Κ = 0,56, 95%
CI = 0,42-0,69), membuktikan bahwa pemeriksaan visual tidak memadai
metode untuk mendeteksi lipemia di
sampel (34).

beberapa kekurangan. Proporsi trigliserida


berbeda antara lipoprotein subclass dan rentang
antara sekitar 50% dalam partikel VLDL
hingga 85-90% dalam kilomikron. Jadi, tingkat
kekeruhan tidak berkorelasi baik dengan trigliserida
konsentrasi. Twomey dkk. mengkonfirmasi hal ini
sebuah eksperimen di mana mereka menunjukkan linear
perjanjian antara konsentrasi trigliserida
dan indeks lipemik ketika lipemia disimulasikan oleh
penambahan emulsi lipemik standar
(Ivelip) (r2 untuk Deming regression = 0,9994) (35).
Namun, ketika indeks lipemik berkorelasi dengan
konsentrasi trigliserida dalam sampel pasien, untuk
keduanya, sampel visual yang keruh dan tidak keruh,
perjanjian jauh lebih rendah (r2 = 0,2399 dan
0,7795, masing-masing).
Sebagian besar reagen untuk konsentrasi trigliserida
pengukuran menggunakan metode berbasis enzimatik
pada oksidasi gliserol menjadi dihidroksiaseton fosfat.
Konsentrasi trigliserida proporsional
ke tingkat oksidasi gliserol. Karena itu,
peningkatan jumlah gliserol dalam sampel akan
hasil dengan peningkatan konsentrasi trigliserida yang palsu.
Beberapa kasus pseudo-hypertriglyceridemia,
karena keduanya, eksogen atau endogen
akumulasi gliserol, telah dijelaskan
di dalam literatur. Speeckaert MM dkk. memiliki
melaporkan kasus pasien dengan trigliserida tinggi
konsentrasi (11,3 mmol / L) dan lipemik sangat rendah
indeks (36). Kesenjangan osmotik yang meningkat menyiratkan suatu
akumulasi molekul aktif osmotik dan
riwayat pasien mengungkapkan asupan bir yang berlebihan
mengandung banyak gliserol. Sebagai tambahan,
ada penyebab genetik akumulasi gliserol
seperti mutasi pada gen gliserol kinase yang menyebabkan
defisiensi gliserol kinase (37). Pada pasien dengan ini
gangguan, konsentrasi trigliserida tidak bisa
diukur secara akurat menggunakan metode berbasis gliserol.
Meskipun ada banyak bukti
bahwa pengukuran konsentrasi trigliserida adalah
bukan cara yang ideal untuk menilai lipemia, masih ada
beberapa aplikasi praktis yang bermanfaat. De Haene dkk.
telah menunjukkan pentingnya trigliserida
pengukuran konsentrasi dalam kombinasi dengan
indeks lipemik, sejak perhitungan trigliserida
rasio L-index mungkin membantu dalam membedakan antara
beberapa penyebab gangguan lipoprotein, kelainan
dalam metabolisme gliserol dan trigliserida
dan kesalahan preanalytical karena keadaan non-puasa
(38).
Deteksi otomatis - L-index
Saat ini, sebagian besar platform analitis menggunakan otomatis
deteksi dan penilaian tingkat
lipemia. Metode ini didasarkan pada pengenceran
sampel dalam salin atau buffer dan pengukuran
spektrum dalam berbagai panjang gelombang. Seperti yg disebutkan
sebelumnya, sampel lipemik menyerap cahaya
antara 300-700 nm. Meskipun tumpang tindih dengan
spektrum bilirubin dan hemoglobin untuk mengukur
Indeks ikterik dan hemolitik di bawah panjang gelombang
daerah, hanya sampel lipemik yang menyerap cahaya
sekitar 700 nm, dan karena itu panjang gelombang mereka
digunakan untuk menilai tingkat lipemia. Absorbansi
sebanding dengan jumlah lipid dalam
mencicipi. Ada heterogenitas yang masih besar antara
produsen dalam panjang gelombang yang digunakan, namun
hampir semuanya menggunakan kombinasi atau dua atau
lebih banyak panjang gelombang. Misalnya, pada seri AU
(mantan Olympus) Beckman Coulter menggunakan 660/800
nm, pada seri Cobas, Roche menggunakan 660/700 nm dan
pada platform Arsitek Abbott menggunakan beberapa panjang gelombang
(510/524; 572/604; 628/660 dan 524/804)
dalam perhitungan tingkat lipemia.
Keuntungan deteksi otomatis adalah biaya rendah,
kecepatan tinggi, peningkatan reproduktifitas dan pemendekan
turn-around-time. Namun, ada juga
beberapa kerugian.
Hasil positif palsu dapat terjadi di hadapan
kekeruhan sampel yang tidak disebabkan oleh akumulasi
lipid, tetapi oleh molekul lain. Ada
beberapa artikel yang menjelaskan L-index palsu
dengan nilai lipid rendah dalam kasus ketika paraprotein
hadir dalam sampel (39,40). Artikel-artikel ini
bahkan menekankan kegunaan klinis dari lipemia
pengukuran indeks dalam mendeteksi M-protein sebaliknya
pasien tanpa gejala. Selain itu, yang salah
hasil positif telah diamati di hadapan
dari pewarna kontras (pewarna Pasien Biru V digunakan selama
operasi kanker) (41). Dalam kasus seperti itu secara klinis tidak jelas
hasil, indeks lipid yang luar biasa tinggi yang tidak
sesuai dengan fitur klinis pasien, pemeriksaan visual sampel
Semoga membantu dalam menentukan asal kekeruhan.
Informasi lain tentang deteksi otomatis lipemia
adalah kurangnya standarisasi di antara manufaktur
dalam laporan nilai-nilai indeks-L. Terlampir
semi kuantitatif, sementara penggunaan lainnya hampir sepenuhnya
skala kualitatif. Tergantung pada platform
, Beckman Coulter mengungkapkan hadiah untuk Lindex
dari 0 hingga 5 (10), dan Siemens dari 1 hingga 6 (8),
sementara Abbott dan Roche menggunakan skala berkelanjutan
yang sesuai dengan konsentrasi Intralipid
di dalam film simulasi. Kedua pendekatan ini
memiliki kelebihan; skala semi kuantitatif
berkorelasi lebih baik dengan pemeriksaan visual
sampel, sedangkan skala kontinu memberikan kebebasan yang lebih baik
antara interferensi dan
efek pada hasil yang diukur. Karena ini
masalah, meskipun secara signifikan standardisasi intralaboratory
maksimal lipemia, L-index tidak bisa
dibandingkan antara produsen yang berbeda
platform dan peradaban membutuhkan harmonisasi
Di daerah ini.
Selain itu, reagen untuk menentukan indeks lipemik
adalah reagen laboratorium seperti yang lain, dan sebelum
pelaksanaan praktik rutin di laboratorium
akan divalidasi. Lembaga Standar Laboratorium Klinis
panduan CLSI C56-A (Hemolysis, Icterus,
dan Indeks Lipemia / Kekeruhan sebagai Indikator Gangguan
dalam Analisis Laboratorium Klinis) memberi
petunjuk jarak dari praktik ini (42). Sebuah internal
kontrol kualitas harus dilakukan setiap hari. Sejak
tidak ada sampel yang tersedia secara komersial, a
laboratorium harus berdiri standarnya sendiri
sampel lipemik pasien atau sampel berduri
dengan emulsi lipid sintetis.
Penghapusan lipemia
Dalam banyak kasus, lipemia dapat dihilangkan dari
sampel dan pengukuran bisa dilakukan secara jelas
sampel tanpa gangguan. Ada beberapa
cara menghilangkan lipid, dan ahli laboratorium
harus hati-hati memilih yang mana yang akan tergantung
pada tes yang harus diukur dalam
terpisah.
Sentrifugasi
Prosedur yang direkomendasikan untuk mengobati lipemik
sampel sentrifugasi menggunakan ultracentrifuge
yang sama efektif menghilangkan lipid dan memungkinkan pengukuran
jumlah besar analit (42,43). Namun,
karena biaya tinggi, peralatan ini tidak
tersedia di banyak laboratorium. Ultrasentrifuge
dapat diupgrade hingga 100.000–
2.000.000 x g. Dalam artikelnya yang baru-baru ini diterbitkan,
Dimeski dkk. telah membuktikan bahwa sentrifuge kecepatan tinggi
dengan kekuatan 10.000 x g bisa hampir sama efisiennya
sebagai ultracentrifuge dalam menghilangkan lapisan lipid (44).
Namun, sentrifugal menghasilkan kekuatan yang lebih rendah akan
hanya efisien dalam sampel jika lipemia
oleh oleh vaksin partikel yang lebih besar,
kilomikron. Jika lipemia disebabkan oleh akumulasi
partikel VLDL, proses kurang efektif
dan sentrifugasi harus diulang beberapa
kali untuk mendapatkan sampel yang jelas.
Setelah sentrifugasi, lapisan lipid di bagian atas
tabung dan pengukuran dilakukan di infranatant.
Oleh karena itu, pemetaan ini tidak dapat diterima
untuk pengukuran hormon, obat-obatan dan lainnya
zat hidrofobik, karena mereka akan didistribusikan
diompok lipid, dan pengukuran dalam
infranatant akan menyebabkan hasil yang salah dikurangi.
Ekstraksi
Lipid dapat diekstraksi menggunakan pelarut polar. Beberapa
laboratorium masih menggunakan protokol manual dengan polyethylene
glikol atau siklodekstrin (45), sementara ini
sekarang dalam kit yang tersedia secara komersial.
Berdasarkan laporan literatur, produk Lipoclear
(StatSpin®, Norwood, MA, USA) secara luas. Itu
reagen mengandung polimer non-ionik yang tidak beracun
yang menghubungkan lipid (46). Setelah sentrifugasi, ini
partikel diendapkan di bagian bawah
tabung, dan pengukuran dilakukan dalam supernatan yang jelas.
Meskipun ini sangat cepat dan efisien
cara menghilangkan lipid, yang tidakbul apapun
peralatan khusus, masih belum bisa digunakan untuk semua
parameter. Produsen sementara melaporkan itu saja
fosfat anorganik memiliki pemulihan rendah (47); lain
peneliti tidak dapat diterima
analit dalam studi verifikasi. Vermeer dkk.
ditemukanesu parameter untuk pemulihan lebih rendah dari 85%: GGT - gamma-glutamyltransferase,
CK-MB - creatine kinase MB isoenzim dan CRP
(Menggunakan pereaksi Beckman Coulter), dan karenanya
tidak dapat diukur dalam sampel setelah perawatan
dengan reagen Lipoclear (48). Pemulihan lebih rendah dari
85% juga dikonfirmasi untuk parameter yang sama
dalam artikel yang baru-baru ini diterbitkan oleh Saracevic di al.
(49). Studi ini juga mengungkapkan tidak dapat diterima
pemulihan tinggi untuk troponin T (124,7 dan 121,5% untuk
300 dan 500 mg / dL dari konsentrasi Intralipid tambahan),
menunjukkan bahwa Lipoclear tidak dapat digunakan untuk
membersihkan sampel ketika parameter ini harus
terukur. Alasan perbedaan tersebut antara
deklarasi dan verifikasi pabrikan
studi mungkin bahwa pabrikan telah
menguji efek penambahan Lipoclear ke dalam
sampel yang jelas, sementara dua penelitian yang disebutkan dilakukan
percobaan pemulihan dalam sampel lipemik.
Pengenceran sampel
Untuk analit yang didistribusikan dalam lapisan lipid, metode
yang menghilangkan fraksi lipid tidak dapat diterima. Di
kasus seperti itu, pengukuran bisa dilakukan dengan dilarutkan
sampel pasien. Sampel hanya dapat diencerkan
cukup untuk menghapus gangguan kekeruhan, tetapi
tidak terlalu banyak untuk memastikan konsentrasi analit
tetap berada dalam batas analitis
metode yang diuji (2 atau 3 kali lipat). Ini mungkin itu
pendekatan terbaik untuk pengukuran terapeutik
obat-obatan dalam sampel lipemik.
Pengujian interferensi
Pengujian interferensi adalah kewajiban produsen
reagen laboratorium. Pengaruh mencampuri
substansi dapat diuji dengan dua cara. Terbaik
pendekatan akan mencakup perbandingan yang diuji
metode dengan metode referensi, yaitu yang aktif
lipemia mana yang tidak memiliki pengaruh. Interferensi oleh lipemia
kemudian akan dinilai dengan membandingkan hasil
dan menghitung bias antara dua metode.
Namun, untuk sampel lipemik, bebas interferensi
metode tidak tersedia secara luas, oleh karena itu gangguan
lipemia harus diukur menggunakan yang berbeda
pendekatan. Ini termasuk spiking asli
sampel dengan beberapa interferen, untuk menciptakan lipemik
mencicipi. Interferensi ditambahkan dalam peningkatan
konsentrasi dan bias dihitung untuk
setiap. Hasilnya disajikan secara grafis
interferogram, dengan peningkatan konsentrasi
pada interferen yang ditambahkan pada sumbu x, dan bias dalam
dibandingkan dengan hasil asli pada sumbu y (Gambar
2) (50,51).
Pilihan interferen bermasalah untuk lipemik
sampel. Sampel lipemik pasien atau standar
solusi yang mengandung lipid dapat digunakan. Meskipun
penggunaan sampel pasien akan lebih baik meniru
lipemia pathophysiologically diinduksi, itu tidak ideal
karena heterogenitas sampel lipemik. Seperti itu
studi tidak dapat direplikasi, karena, meskipun
berbagi indeks atau konsentrasi lipem yang sama
trigliserida, komposisi lipoprotein
partikel berbeda dalam dua sampel lipemik. Oleh karena itu
saat ini direkomendasikan untuk menggunakan standar
larutan yang mengandung lipid yang diketahui konsentrasinya
dan komposisi (42,51).
Produk yang paling banyak digunakan adalah Intralipid (Fresenius
Kabi AB, Uppsala, Swedia). Ini adalah emulsi
digunakan untuk pemberian intravena sebagai sumber
kalori dan asam lemak esensial (19). Produk
dapat diperoleh sebagai campuran larutan 10% atau 20%
minyak kedelai, fosfolipid kuning telur dan gliserin.
Intralipid mengandung trigliserida linoleat,
asam oleat, palmitat, linolenat dan stearat. Masalah dengan Intralipid terletak pada ukuran partikelnya.
Intralipid
partikel berkisar dari 200 nm hingga 600 nm, dengan rata-rata
ukuran 345 nm dan lebih kecil dari chylomicrons besar
(hingga 1000 nm), dan lebih besar dari sedang
dan partikel VLDL besar (35-200 nm). Karena itu,
efek yang dibuat oleh penambahan Intralipid ke dalam
sampel tidak identik dengan patofisiologi
menginduksi lipemia pada sampel pasien. Ini
pertama kali diamati lebih dari dua dekade yang lalu, kapan
Nanji dkk. perbedaan yang diperoleh dalam konsentrasi analit
dalam sampel kontrol kualitas dibubuhi dengan Intralipid
dan serum pasien mengandung yang sama
konsentrasi trigliserida (52). Bronhorst et al.
melakukan metodologis lebih meyakinkan
percobaan pada tahun 2004 (53). Dia telah menggunakan pasien
sampel lipemik untuk menentukan konsentrasi
beberapa protein spesifik: alfa-1-antitripsin, seruloplasmin,
haptoglobin, prealbumin dan transferrin.
Luasnya lipemia ditentukan oleh
pengukuran L-index pada Modular Analytics P
800 analyzer (Roche). Sampel kemudian ultrasentrifugasi
untuk menghilangkan gangguan lipemia.
Konsentrasi seruloplasmin, prealbumin
dan transferin secara signifikan berbeda dalam
sampel dibersihkan, menunjukkan pengaruh kuat pasien
lipemia pada hasil tes ini. Namun,
ketika dia telah menciptakan sampel lipemik dari
indeks lipemik yang sama dengan menambahkan larutan Intralipid,
konsentrasi protein yang diukur tidak
berubah secara signifikan. Artikel ini sangat penting
dalam memahami gangguan Intralipid
studi tidak dapat selalu ditransfer ke
kondisi klinis dan tidak selalu berkorelasi
dengan lipemia pada sampel pasien. Namun, sejak itu
di rumah sakit klinis, terutama di perawatan intensif
dan unit neonatal, lipemia dari sampel kadang-kadang
berasal dari Intralipid yang diberikan intravena
solusi, studi spiking intralipid masih sangat
sumber informasi berharga tentang gangguan lipemia.
Seperti yang diusulkan oleh pedoman CLSI (42,51), produsen
harus melaporkan kepada pengguna mereka informasi terperinci
tentang studi gangguan: bahan
digunakan untuk simulasi sampel lipemik, interferen
konsentrasi, konsentrasi analit diukur
dan bias yang ditentukan. Jika tidak ada gangguan,
konsentrasi interferensi tertinggi yang teruji
harus diumumkan. Jika ada gangguan,
konsentrasi terendah interferen menyebabkan a
bias signifikan harus dilaporkan. Namun, disana
tidak ada konsensus tentang apa yang bias signifikan. Pabrikan
kadang-kadang menggunakan nilai 2 x standar deviasi
sebagai bias signifikan, mengacu pada fakta itu
interferensi signifikan jika lebih besar dari analitis
kesalahan instrumen. Selain itu, banyak
penelitian menggunakan koefisien variasi intraindividual
(CVw), atau 0,5 x CVw sebagai spesifikasi yang diinginkan untuk ketidaktepatan
(54). Menurut konsep kesalahan total,
bias yang diijinkan untuk gangguan dapat dihitung
seperti yang saya = CVW - (1.96 x CVa) - B; dimana CVa adalah analitis
koefisien variasi, dan B adalah bias dari
metode (55). Tergantung pada penggunaan klinis dari
uji laboratorium, manajer laboratorium bisa
pilih masing-masing konsep ini, karena masing-masing
mengakui kekhususan analit tertentu dan
memodifikasi kriteria yang sesuai. Kriteria penerimaan
untuk gangguan tidak akan sama untuk analit
dengan variasi biologis dan analitis yang berbeda
kinerja. Pertimbangan yang cermat dan
pendapat ahli diperlukan untuk menetapkan penerimaan
kriteria, seperti yang dilakukan dalam artikel oleh Steen et al.
(56). Grunbaum dkk. kriteria yang digunakan berdasarkan keduanya,
variasi analitik dan biologis (57). Secara analitis
perubahan signifikan harus selalu dibandingkan
kriteria yang relevan secara klinis. Oleh karena itu tidak dapat diterima
bahwa beberapa produsen menggunakan sewenang-wenang
nilai-nilai (10% atau 20%) untuk bias yang diijinkan untuk gangguan
untuk semua analit. Konsep nilai sewenang-wenang ini
telah digunakan di masa lalu (1,4), tetapi harus sekarang
ditinggalkan demi kriteria berdasarkan bukti.
Nilai cut-off yang sewenang-wenang membuat interpretasi
hasil dari beberapa penelitian sangat sulit. Saat mencoba
untuk memverifikasi klaim pabrikan untuk Roche
Tes Cobas 6000 tentang lipemia, Ji JZ dkk.
telah menggunakan kriteria penerimaan yang sama dengan
produsen (58). Kriteria itu adalah 10%. Mereka lakukan
tidak mengonfirmasi semua klaim produsen dengan beberapa
analit yang berlebihan, dan beberapa yang melemahkan lipemia
mempengaruhi. Namun, bukan hanya itu kriterianya
digunakan tidak memadai, penulis tidak melaporkan
konsentrasi analit yang diukur dan
nilai yang tepat dari bias yang diukur, yang membuatnya
hasil mereka tidak berlaku untuk pembaca lain.
Masalah-masalah ini juga ditangani oleh Szoke et al. dalam Surat mereka kepada editor yang
menekankan pentingnya
menggunakan kriteria berdasarkan bukti berdasarkan biologis
variasi (59). Karena itu, produsen seharusnya
merevisi stand mereka saat ini dalam mendeklarasikan data untuk interferensi.
Mereka harus melaporkan data dengan lebih detail,
dengan sebanyak mungkin informasi dan
dengan kriteria penerimaan yang disesuaikan untuk tes
berdasarkan variasi biologis.
Selain itu, data pabrikan tidak selalu dikonfirmasi
dalam praktik laboratorium. Ini ditunjukkan
di artikel kami yang disebutkan sebelumnya, di mana
kami telah menemukan klaim pabrikan itu
dikonfirmasi hanya untuk 11 dari 24 analit yang diuji
untuk Beckman Coulter, untuk 20/23 untuk Roche dan
16/22 untuk Siemens. Meski tampil itu Beckman
Coulter serius salah melaporkan data mereka tentang lipemia
gangguan, hasil ini menyesatkan
karena dua pabrikan lain biasanya digunakan
kriteria penerimaan yang lebih besar (24).
Singkatnya, gangguan lipemia, meski tidak di bawah
sorotan karena frekuensi rendah, adalah signifikan
sumber kesalahan laboratorium. Setiap laboratorium
harus sadar akan pengaruh lipemia itu
dapat memiliki hasil tes laboratorium. SEBUAH
verifikasi klaim produsen seharusnya
dilakukan di laboratorium menggunakan kriteria berdasarkan bukti
penerimaan. Selain itu, prosedur tertulis untuk
deteksi lipemia, menghilangkan gangguan lipemia
dan melaporkan hasil dari sampel lipemik
harus tersedia bagi staf laboratorium untuk
membakukan prosedur, mengurangi kesalahan dan meningkatkan
keamanan pasien. Kami mengusulkan flowchart untuk
pengelolaan sampel lipemik (Gambar 3).