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Aplicación de la técnica de análisis de


imagen digital para caracterización y
medición de elementos xilematicos de
especies forestales
Jedi Rosero Alvarado1; Pablo Perez Chaves2; Vanessa Moreano2; Andrea Vera Arabe2; Daigard
Ricardo Ortega Rodriguez2; Adrian Alonso Tapia Ghersi2; Juana Llacsahuanga Salazar2; Paola Coro-
nado Werner2; Claudia Zuñiga Carrillo2; Claudia Lozano Alvarez3; Moises Silveira Lobão4; Manuel
Chavesta Custodio5

INTRODUCCIÓN de información resultante ya que se optimiza la


visualización (GONZALEZ; WOODS, 1992).
La anatomía de la madera es la ciencia que Entre las aplicaciones más importantes en el área
estudia los diversos elementos que constituyen forestal se tienen estudios de actividad cambial
la estructura y organización del leño. Sus (crecimiento), forma y dimensiones de elementos
características estructurales son de fundamental leñosos, detección de defectos, fallas, calidad de
importancia para la determinación del posible piezas de madera y en el manejo forestal análisis
aprovechamiento tecnológico de la especie. de imágenes remotas (sensoriamiento remoto)
Las dimensiones, frecuencia y arreglo de estos aplicado a estudios de estratificación para
elementos presentan gran influencia sobre las inventarios forestales (TRENARD; GUINEAU,
propiedades físicas y mecánicas de la madera 1975; GROSSKOPF, 1976; HUBER, 1980;
(HAYGREEN; BOWYER, 1982; BURGER; VETTER; BOTOSSO, 1985; SILVA; TRUGILHO,
RICHTER, 1991). Técnicas convencionales 2003). La presente investigación tiene como
permiten describir características de las especies objetivo aplicar y validar la técnica de análisis
para un uso específico; sin embargo, en muchos de imágenes digitales de elementos leñosos en
casos estas actúan en forma destructiva, especies forestales mediante comparación y
imprecisa y lenta, por lo que es necesario optar correlación de resultados obtenidos con el método
por nuevas técnicas no destructivas, eficaces convencional brindando así una alternativa de
y rápidas reduciendo costos y tiempo en la análisis a los estudios en anatomía de la madera.
obtención de resultados (MACEDO et al., 1998;
EMBRAPA, 1997). El desarrollo o aplicación REVISIÓN DE LITERATURA
de un sistema de análisis de imágenes digitales
permite minimizar la intervención del operador, Sistemas de Análisis de Imágenes aplicados en
sistematizar el proceso, mejorando la precisión y estudios forestales
rapidez en la medición de elementos xilematicos. El desarrollo y adaptación de nuevos
El procesamiento de imágenes digitales busca procedimientos de sistematización de información
extraer información relevante para el análisis aplicados a estudios forestales permiten la
mediante la identificación de patrones y objetos obtención de resultados confiables y precisos.
de estudio, así como también, mejorar la calidad Yanosky y Robinove (1986) fueron los pioneros

1
jediros@gmail.com MSc. En Recursos Forestales, ESALQ/USP;
2
Alumnos Fac. de Ciencias Forestales, UNALM;
3
Bachiller en Ciencias Forestales UNALM
4
moiseslobao@hotmail.com Doctorando, ESALQ/USP;
5
mchavesta_539@hotmail.com, Docente, Laboratorio de Anatomía e Identificación de Maderas – UNALM.

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en la utilización de software de procesamiento MATERIALES Y MÉTODOS


de análisis de satélite (SIG) para caracterizar y
medir elementos anatómicos y ancho de anillos Selección de láminas histológicas
de crecimiento usando proyección en fondo Laminas histológicas (cortes transversal, tangencial
blanco. Posteriormente se desarrollaron sistemas y radial) y laminas de macerado (fibras y vasos)
más eficaces para medición de estos elementos fueron seleccionadas de diez especies forestales
en estudios de dendrocronología, determinando previamente preparadas en el Laboratorio de
también la densidad y ancho de los anillos anatomía e identificación de maderas de la
(Thetford et al., 1991; Amaral; Tomazello Filho, UNALM. El criterio de selección consistió en
1998; Rigozo; Nordemann, 2000; Rosot et al., separar láminas en buen estado sin rajaduras
2000, 2001, 2003). Moya et al. (2007) estudiaron ni presencia de hongos, preferentemente con
la variación de la estructura anatómica de Gmelina poco tiempo de haber sido montadas. Las
arbórea mediante el análisis de imágenes tomadas especies seleccionadas fueron Calycophyllum
con cámara digital acoplada a microscopio y spruceanum, “capirona”, Cariniana domestica
evaluadas en software SAIM e Image Tool v3.0, “cachimbo”, Cedrela odorata “cedro”, Cedrelinga
del mismo modo Bellini et al. (2008) utilizando catenaeformis “tornillo”, Ceiba pentandra
la misma metodología caracterizo la estructura “lupuna blanca”, Copaifera officinalis “copaiba”,
anatómica de astillas de madera de Eucalyptus Crepidospermum goudotianum “palo baston”,
grandis. Biging y Wensel (1984) fueron los Dipterix odorata “shihuahuaco”, Swietenia
pioneros en aplicar una técnica fotográfica (35 macrophylla “caoba” y Tetrochidium rubrivenium
mm a color) para análisis de tronco en coníferas, “col de monte”.
utilizando un microdensitómetro acoplado a un
proyector y determinando también los límites de Calibración del sistema de análisis de imagen.
anillos de crecimiento. Posteriormente análisis de Fue necesario calibrar el software Image Tool
imágenes de tronco fueron empleados por Tasissa v.3.0 mediante captura de imágenes de la reglilla
e Burkhart (1997) para estudiar las variaciones micrométrica Carl Zeiss Jena 5+100/100 mm a
verticales y laterales en el ancho de los anillos de diferentes aumentos 40x, 100x y 400x (Figura 1a).
crecimiento de arboles de Pinus taeda sometidas a Estas imágenes son reconocidas por el programa
diferentes intensidades de raleo. Para estudios del
permitiendo introducir la medida de la escala
sistema radicular de las plantas de forma simple,
en micrómetros (a un aumento determinado)
rápida y precisa se desarrolló un sistema integrado
generando un archivo con extensión “itc”.
para análisis de raíces y cobertura del suelo como
Cada vez que necesite realizar mediciones a un
producto del perfeccionamiento de diferentes
aumento determinado se deberá cargar el archivo
programas de análisis de rajaduras en discos y
con el aumento respectivo de la imagen. En casos
tablas, mediciones de elementos anatómicos de la
de caracterización macroscópica de la madera o
madera, evaluación de la densidad y movimiento
de anillos de crecimiento, donde no se necesite
de agua en la madera por medio de imágenes de
mayor aumento la calibración puede realizarse
rayos X a partir de imágenes patrones para las
con la captura de la imagen de una escala
diferentes densidades. (Embrapa, 1997). Rosot et
milimétrica como muestra la figura 1b.
al. (2000, 2001) probaron la viabilidad del uso
de imágenes de piezas de madera de Araucaria
angustifolia para estimación de áreas transversales. Captura y análisis de imágenes digitales
Tomazello Filho et al. (2008) evaluaron la calidad
de piezas de maderas de eucalipto determinando El sistema de análisis de imagen digital consta
la variación y rangos de densidad aparente de una cámara digital Canon Powershot S50
máxima, mínima y media a través del análisis de acoplada a microscopio óptico Olympus BH2
imágenes de las placas de rayos X en el software (figura 1c) para captura y análisis de elementos
CRAD e CERD. Vaz et al. (1996) establecieron la xilematicos utilizando el software Image Tool
metodología para evaluación de masa específica v3.0 propuesto por Moya et al. (2007) y Bellini
(g.cm-3) de muestras de madera a través de et al. (2008) (figura 1c). Fueron capturadas un
imágenes de tomografía computarizada donde total de 3 imágenes por sección (40x y 100x de
puede verificarse la variación de la densidad a lo aumento respectivamente) y 25 imágenes para
largo de una sección de un cuerpo de prueba. fibras (400x) por cada especie. Las variables a

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Figura 1. Sistema de Análisis de Imágenes digitales a) escalas micrométrica 100x para medición
de elementos xilematicos, b) escala milimétrica para medición de anillos de crecimiento, c)
sistema completo de análisis de imágenes y software para análisis de elementos xilematicos.

evaluar fueron diámetro y frecuencia de los Análisis estadístico


vasos, altura y ancho de radios, diámetro y Mediante el uso del paquete estadístico ASSISTAT
espesor de pared de fibra. Para la determinación 7.5 beta se realizó el análisis de variancia
del espesor de pared se utilizó la expresión (ANVA), bajo el delineamiento de experimento
EP = (L – DL)/2, donde L = ancho de fibras y al azar considerando los resultados de las dos
DL= diámetro del lumen siguiendo la norma técnicas de análisis de imágenes con la finalidad
IAWA committee (1989) para descripción de las de determinar posibles diferencias entre ellas.
características macro y microscópica de especies
tomando repeticiones de n=25. Fueron también
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
empleadas las mismas láminas con la misma
cantidad de repeticiones para cada variable La captura de imágenes en el sistema (figura 2)
en el sistema convencional de proyección de permitió observar con mayor detalle la estructura
imágenes en fondo blanco (Tomazello Filho, anatómica de las especies en las secciones
1985), que consiste en proyectar imágenes de transversal, tangencial y radial (figura 2a, b, c y
los cortes histológicos para análisis directo en e) así como también vasos, fibras y parénquima.
el microscopio con la finalidad de probar la Además gomas, tilósis, puntuaciones areoladas
viabilidad de la técnica comparando resultados (figura 2c), campo de cruzamiento, células
del análisis de imágenes con los de la técnica procumbentes, cristales de oxalato (figura 2e) y
convencional. finalmente diámetro, lumen y espesor de pared de

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fibras (figura 2f). Todas estas imágenes permitieron positivas y significativas (figura 3) en todas las
identificar, medir y analizar elementos anatómicos variables analizadas, diámetro de poros r2= 0.64,
en todas las especies en estudio. r= 0.79; frecuencia de poros r2= 0.95, r= 0.97;
altura de radios r2= 0.68, r= 0.82; ancho de radios
Mediciones con ambas técnicas fueron comparadas r2= 0.63, r= 0.79; diámetro de fibras r2= 0.59, r=
mediante análisis de regresión (coeficiente de 0.77 y espesor de pared r2= 0.56, r= 0.75. Puede
determinación “r2”), correlación (coef. Correl. observarse también que la frecuencia de poros
Pearson “r”) y análisis de variancia (ANVA) “test- presenta una concentración de datos separados
Tukey” de promedios para cada variable en del resto (figura 3) que también mantienen una
estudio. Los resultados del análisis de regresión y tendencia lineal, esta concentración corresponde a
correlación (tabla 1) mostraron tendencias lineales la especie Calycophyllum spruceanum “capirona”

Figura 2. Imágenes de elementos anatómicos tomados con el sistema de imágenes en las especies
de estudio. A. sección transversal de Tetrochidium rubrivenium “Col de monte”; B. sección
transversal de Cedrelinga catenaeformis “Tornillo”; C. sección tangencial de Tetrochidium
rubrivenium “Col de monte”; D. sección tangencial de Calycophyllum spruceanum “Capirona”;
E. sección radial de Copaifera officinalis “Copaiba”; F. elemento anatómico, fibra de Tetrochidium
rubrivenium “Col de monte”. Barra = 100µm.

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Tabla 1. Ecuaciones lineales de cada variable que presenta una mayor frecuencia de poros por
en estudio milímetro cuadrado. Ya en el alto y ancho de
radios pueden observarse datos fuera del promedio
Variable Ecuación lineal
considerados como “outliers” que no llegan a
Diámetro tangencial de y= 0.7585x + 7.453 influir significativamente en el análisis.
poros
Frecuencia de poros y= 0.9658x + 0.5027 El análisis de variancia de los datos en estudio
Altura de radios y= 0.9235x + 38.504 no mostro diferencias significativas (α= 0.05 y
p≥0.05) entre los promedios de cada variable
Ancho de radios y= 0.7431x + 10.907
(diámetro de poros p= 0.94; frecuencia de poros
Diámetro de fibra y= 0.8431x + 3.1551 p= 0.88; altura de radios p= 0.96; ancho de radios
Espesor de pared y= 0.6195x + 0.9540 p= 0.98; diámetro de fibras p= 0.75 y espesor
de pared p= 0.96) demostrando así no existir
Nivel de significancia α=0.05 diferencias en los valores tomados por ambas

Tabla 2. Parámetros anatómicos de las especies en estudio Software Image Tool v3.0

Especies DP (µm) FP (N°.mm-2) ALR (µm) ANR (µm) DF (µm) EP (µm)


Calycophyllum spruceanum 93.52 34 - 47 706.65 38.73 13.42 2.76
Cariniana domestica 170.94 2 - 5 297.22 19.56 17.4 1.87
Cedrela odorata 238.3 2 - 9 347.28 54.13 26.18 1.66
Cedrelinga catenaeformis 284.97 1 - 3 221.76 18.85 27.55 2.2
Ceiba pentandra 320.63 1-2 1460.81 139.32 33.97 2.61
Copaifera officinalis 190.5 3-6 629.47 45.57 27.22 3.44
Crepidospermum goudotianum 136 6-9 305.61 28.36 16.94 1.86
Dipterix odorata 177.58 3-5 312.79 23.28 11.59 5.04
Swietenia macrophylla 175.12 6 - 11 536.4 58.56 14.87 2.09
Tetrochidium rubrivenium 188.82 6-8 590.75 17.16 24.94 2.09

Donde: DP= diámetro de poros, FP= frecuencia de poros, ALR= altura de radios, ANR= ancho de radios,
DF=diámetro de fibras, EP= espesor de pared celular.

Tabla 3. Parámetros anatómicos de especies en estudio según bibliografía

Especies DP (µm) FP (N°.mm-2) ALR (µm) DF (µm) EP (µm)


Calycophyllum spruceanum 39-145 40 - 100 <1000 22 6
Cariniana domestica 105-236 2-8 270-424 22 4
Cedrela odorata 192-504 1-9 300-440 46 4
Cedrelinga catenaeformis 293-333 1-5 <1000 24 3
Ceiba pentandra ≥ 200 ≤5 >1000 36 4
Copaifera officinalis 100 - 200 3-8 309-691 18 2
Crepidospermum goudotianum 108 - 163 4 - 10 257 - 429 15 - 22 2–4
Dipterix odorata 119-238 3-9 249-427 13 2.5
Swietenia macrophylla 100 - 200 5 - 12 367-569 22 3
Tetrochidium rubrivenium 147,4 2 - 12 940 32,7 3,08

Fuente: ACEVEDO; KIKATA (1994), PORTAL (2008), KULJICH (2008), IAWA

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técnicas. Por otro lado los valores promedio de con literatura consultada presentada en la tabla
las variables analizadas mediante el sistema de 3, demostrando la viabilidad y precisión de la
análisis de imágenes y software Image Tool v3.0 técnica, encontrando los promedios dentro del
presentados en la tabla 2 fueron corroborados rango establecido por los autores consultados.

500 50

Frecuencia Proyector N.mm-2


Diámetro Tg Proyector (µm)

400 40

300 30

200 20

100 10

0 0
0 100 200 300 400 500
0 10 20 30 40 50
Diámetro Tg Image Tool (µm)
Frecuencia Image Tool N.mm-2
2500
300
Altura radio Proyector (µm)

Ancho radios Proyector (µm)

2000 250

1500 200

150
1000
100
500
50

0 0
0 500 1000 1500 2000 2500
0 50 100 150 200 250 300
Altura radio Image Tool (µm)
Ancho radios Image Tool (µm)
50
Diám. total de fibras Proyector (µm)

10
Espesor pared Proyector (µm)

40
48

30
6

20
4

10
2

0
0
0 10 20 30 40 50
0 2 4 6 8 10
Diám. total de fibras Image Tool (µm) Espesor pared Image Tool (µm)

Figura 3. Análisis de regresión de los datos tomados en ambas técnicas de análisis para
cada variable en estudio. Dispersión de datos siguiendo una tendencia lineal positiva.

CONCLUSIONES La aplicación de la técnica de análisis de imágenes


presenta un gran potencial para avances en
Los valores de las variables analizadas en el sistema estudios anatómicos dada su precisión y rapidez
de imagen digital no varían significativamente a en la obtención de resultados.
los obtenidos con el método convencional ni en
la literatura consultada.
RECOMENDACIONES
La técnica de análisis de imágenes y el software Se recomienda que las láminas histológicas
Image Tool v.3.0 demostraron ser una valiosa a utilizar sean permanentes recientemente
herramienta en la identificación y medición montadas o semi-permanentes teniendo como
precisa de elementos leñosos para estudios base glicerina y safranina (1:1) teniendo como
anatómicos de especies forestales. espesor entre 15 a 25 micras para evitar rasgaduras

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optimizando el análisis de las imágenes de los M. Avaliação das características dos anéis
elementos. En cuanto al programa de análisis de crescimento de Pinus taeda, através da
de imágenes (Image Tool v3.0) y el paquete microdensitometria de raios X. In: MEETING ON
estadístico (ASSISTAT v.7.5), se recomienda usar NUCLEAR APPLICATIONS, 4., 1997, Poços de
Windows 2003 y/o Windows XP, debido a que Calda. Programas e resumos... São Paulo: SBF,
en algunos casos el programa presenta problemas 1997. p. 202.
en versiones actuales de Windows (Windows
Vista). En la captura con el sistema se sugiere un AMARAL, A.C.B.; TOMAZELLO, F. M. Avaliação
número mínimo de 6 imágenes para cada variable das características dos anéis de crescimento de
a ser analizada pues esto facilitará conseguir 25 a Pinus taeda através de microdensitometria de
más datos de medidas de diversas secciones de la raios X. Revista Ciência e Tecnologia, v.11/12,
imagen. Al momento de tomar las fotografías de n.6, p.17-23, 1998.
fibras, se debe de tener cuidado la aglomeración
de elementos pues estas se encuentran en BELINI, U.L.; TOMAZELLO FILHO, M; CHAGAS,
diferentes planos de nitidez. De igual manera al M.P.; DOS SANTOS DIAS, C.T. Caracterização
momento de realizar la medición de esta variable, da estrutura anatômica, densidade básica e
se debe tener sumo cuidado con confundir las morfologia de cavacos da madeira de eucalyptus
paredes de cada fibra debido a que se encuentran grandis para a produção de painéis MDF. Revista.
superpuestas. En el caso que la muestra presente árvore, Viçosa-mg, v.32, n.4, p.707-713, 2008
elementos anatómicos como radios y poros muy
grandes, se recomienda que las mediciones sean BIGING, G. S.; WENSEL, L. C. A photographic
realizadas en las fotografías de menor aumento technique for use with stem analysis. Forest
(40x). Para el caso de medición de elementos Science, Bethesda, v. 30, p. 715-729, 1984.
individuales (vasos y fibras), se recomienda
enfocar el centro de la imagen, debido a que esta BURGER, L. M.; RICHTER, H.G. Anatomia da
se encuentra libre de distorsión y asegura un dato madeira. São Paulo.Nobel: 154 p, 1991.
más confiable.
EMPRESA BRASILEIRA DE PESQUISA
AGRADECIMIENTOS AGROPECUARIA - EMBRAPA. Estrategia
gerencial de EMBRAPA: macroprioridades 1997.
Un especial agradecimiento al Laboratorio de
Brasília. 27p. 1997.
Anatomía e Identificación de Maderas de la
Universidad Agraria La Molina, al profesor MSc.
Manuel Chavesta Custodio y al Técnico David GONZALES, R. C.; WOODS, R. E. Digital
Huaman por haber permitido desarrollar y aplicar image processing. Addison-Wesley. Publishing
la técnica además de capacitar a los alumnos Company, 1992.
practicantes y tesistas en el uso del sistema de
análisis de imágenes, ya que ellos han sido pieza GROSSKOPF, R. Musterbewertung mit. Video
clave en la realización de esta investigación. Systemen. VDI - Bericht, Nr. 265:59-64, 1976.

HUBER, F. An enzymatic method to facilitate


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