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ANALISIS QUIMICO 2 INGENIERÍA BIOTECNOLOGICA Ing.

Armando salinas Sánchez 11

UNIDAD # 2
FUNDAMENTOS DE ESPECTROSCOPIA
METODOS ESPECTROSCÓPICOS DE ANALISIS
Los métodos espectrométricos, opticométricos, o espectroscópicos, son un amplio grupo
de métodos analíticos que se basan en la espectroscopia atómica y molecular. La
espectroscopia es un término general para la ciencia que trata de las distintas interacciones
de la radiación con la materia. Históricamente, las interacciones de interés se producían
entre la radiación electromagnética y la materia, sin embargo, ahora el término
espectroscopia se ha ampliado para incluir las interacciones entre la materia y otras formas
de energía, por ejemplo, las ondas acústicas y los haces de partículas como iones o
electrones.
Los métodos espectrométricos más ampliamente utilizados son los relacionados con la
radiación electromagnética, que es un tipo de energía que toma varias formas, de las
cuales las más fácilmente reconocibles son la luz y el calor radiante. Sus manifestaciones
más difícilmente reconocibles incluyen los rayos gamma y los rayos X, así como las
radiaciones ultravioleta, de microondas y de radiofrecuencia.
Los métodos espectroscópicos de análisis se basan en la medición de la radiación
electromagnética emitida o absorbida por los analitos. Los métodos de emisión utilizan la
radiación emitida cuando un analito es excitado por energía térmica, eléctrica o energía
radiante. Los métodos de absorción se basan en la disminución de la potencia (o
atenuación) de un haz de radiación electromagnética como consecuencia de su interacción
con el analito.

CLASIFICACION
1. Métodos basados en la Absorción de radiación
- Colorimetría
- Espectrofotometría (visible, ultravioleta, absorción atómica)
- Resonancia magnética nuclear
2. Métodos basados en la Emisión de radiación
- Fotometría de flama
- Fluorescencia
- Métodos radioquímicos
- Rayos X
3. Métodos basados en la dispersión de la radiación
- Turbidimetría
- Espectroscopia Raman
- Nefelometría
4. Métodos basados en la refracción de radiación
- Refractometría
- Interferometría
5. Métodos basados en la Rotación de radiación
- Polarimetría
- Dispersión óptica rotatoria

IMPORTANCIA
Uno de los métodos fisicoquímicos más empleados en el análisis es el de la medida de la
absorción o emisión de la energía radiante. La gran difusión de esta técnica es
consecuencia de los factores siguientes:

1) El amplio intervalo de longitudes de onda o de frecuencia de energía radiante y sus


diferentes modos de interacción con la materia.
2) La existencia en el mercado de instrumentos de medida cada vez más precisos.
3) Las ventajas inherentes al método.
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 Generalmente el análisis es muy rápido, una vez que se ha establecido el método para
eliminar interferencias.
 El método es muy cómodo para medidas repetidas de un mismo constituyente, como
sucede en la rutina del análisis de control.
 Aplicable a la determinación exacta de cantidades de constituyentes mucho menores
que con los métodos gravimétricos o volumétricos.
 Métodos que permiten determinaciones de trazas o microcantidades de componentes
de interés en muestras diversas.
 Estos métodos suelen emplearse para determinar cuantitativamente pequeñas
cantidades de una sustancia.
 Con frecuencia es un método no destructivo de la muestra, lo que puede ser importante
cuando el constituyente es muy valioso. Como sucede en los programas de investigación
con ciertas sustancias bioquímicas o elementos transuránicos.

Los métodos espectrofotométricos tienen tal importancia que son los más utilizados en casi
todos los laboratorios industriales como elementos de investigación, control de calidad o de
enseñanza. Estos métodos presentan como se observa varias y preponderantes ventajas
en la solución de muchos problemas. Estas ventajas incluyen rapidez, sencillez,
especificidad y sensibilidad.

ENERGIA RADIANTE
La energía radiante se define como la energía transmitida en forma de radiación
electromagnética y se propaga en forma de ondas transversales, su vibración es
perpendicular a la dirección de su propagación. Puede ser emitida por sustancias bajo
condiciones de gran excitación, tales como las producidas por altas temperaturas o por
descargas eléctricas. Esta energía al entrar en contacto con la materia puede ser
absorbida, transmitida, reflejada y refractada por muchas sustancias en diferentes estados
de agregación (sólido, líquido, disolución y gas) a la radiación incidente a una longitud de
onda apropiada.
La luz y otras formas de energía radiante parecen tener naturaleza dual. La teoría
Ondulatoria es necesaria para explicar la difracción, la refracción y otros efectos ópticos,
pero en la actualidad se sabe que tanto la emisión como absorción de energía radiante se
efectúa mediante partículas discretas llamadas fotones o quantos, que son partículas muy
pequeñas con una masa de reposo nula; se desplazan en forma rectilínea, hasta ser
absorbidos por la materia.
La refracción es el cambio de dirección de un haz de energía radiante al pasar
oblicuamente de un medio a otro medio de diferente densidad y la difracción es la
modificación que experimentan todas las ondas en movimiento al pasar por los bordes
opacos, al atravesar estrechas hendiduras o agujeros o al ser reflejadas desde superficies
rayadas de la radiación electromagnéticas se explican por la naturaleza ondulatoria de la
luz. La energía radiante, al viajar por el espacio se considera como una perturbación
periódica con componentes eléctricos y magnéticos que pueden interaccionar con la
materia.
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Movimiento ondulatorio de la Luz


LA MATERIA
La materia está integrada por moléculas o átomos, y puede presentarse en distintos
estados físicos. Así, por ejemplo, las moléculas pueden estar muy separadas entre sí,
como en los gases, o bien formando aglomerados como en líquidos y sólidos. Las
moléculas de un sólido pueden ordenarse como cristales, tal como sucede con las sales
inorgánicas, o distribuirse desordenadamente, como en la madera. Cualquiera que sea su
disposición, las moléculas están en constante movimiento, no sólo de vibración, sino de
rotación y traslación.
En el caso de átomos individuales, los electrones que giran pueden pasar de un orbital a
otro, proceso que requiere un cambio de energía. Tanto la estructura química de las
moléculas como su ordenación, influyen en la forma en que dicha sustancia interacciona
con la energía.

PROPAGACION DE LA RADIACION ELECTROMAGNETICA


La radiación electromagnética es un tipo de energía que se transmite por el espacio a
enormes velocidades. Adopta muchas formas, siendo la más fácilmente reconocible la luz y
el calor radiante. Manifestaciones menos evidentes son los rayos X, luz ultravioleta,
microondas y las ondas de radio.
Para caracterizar a muchas de las propiedades de la radiación electromagnética, es
conveniente adjudicar una naturaleza ondulatoria a su propagación y describir estas ondas
con parámetros como velocidad, frecuencia, longitud de onda y amplitud. No obstante, en
contraste con otros fenómenos ondulatorios no requiere medio de apoyo para su
transmisión y pasa fácilmente por el vacío. Esto nos indica que la radiación presenta una
propiedad ondulatoria
El modelo ondulatorio para la radiación no explica completamente los fenómenos
asociados con la absorción o la emisión de energía radiante; para estos procesos es
necesario considerar la radiación electromagnética como un flujo de partículas discretas de
energía llamadas fotones o quantos. Esta propiedad es conocida como propiedad o
modelo corpuscular.
Resumiendo podemos decir que:
1. La radiación electromagnética presenta un comportamiento dual o de tipo doble. Es
decir, presenta un carácter ondulatorio y de naturaleza electromagnética. De acuerdo a la
teoría Ondulatoria la energía se propaga en el espacio a grandes velocidades y en forma
de onda.
2. Con diversos fines, resulta conveniente considerara a la radiación electromagnética
como un campo de fuerza eléctrico oscilatorio en el espacio, que está acompañado de un
campo de fuerza magnético dispuesto perpendicularmente. Entonces, las ondas por cual
es transportada la energía consisten en desplazamientos eléctricos y magnéticos que
ocurren en forma perpendicular en dirección de la propagación de la radiación.
3. La teoría corpuscular o energética señala que la radiación es netamente energética
porque puede ser transformada en otra forma de energía; calor y electricidad, luz,
magnetismo, etc. En vista que la naturaleza ondulatoria de la radiación electromagnética
no explica los fenómenos de la absorción y emisión.
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4. La energía radiante como pequeños paquetes de energía que toman el nombre de


fotones de propagación ondulatoria y puede caracterizarse por longitud de onda (),
frecuencia (), y energía, lo que demuestra que la energía radiante no es continua, sino
que es compuesta por "cuantos", elementos de energía.
5. La cantidad de energía que tiene cada fotón depende de la frecuencia de la radiación.
Esta energía varía ampliamente de un valor de frecuencia a otro; para fotones de una
misma frecuencia tienen la misma cantidad de energía.
6. La radiación electromagnética, cuyas ondas son todas de una longitud, se denomina
monocromática (un solo color) que significa que la radiación tiene una sola frecuencia, la
radiación monocromática polarizada en un plano, que es el tipo más simple de radiación;
polarizada en un plano significa que la oscilación tiene lugar en un plano del espacio, y
sólo en uno y la radiación constituida por ondas de diferentes longitudes de onda se llaman
policromáticas, es decir de varios colores.
7. Las ondas electromagnéticas se diferencian entre si por su longitud de onda y se
clasifican en largas, cortas, ultracortas.

PARAMETROS ONDULATORIOS
Cualquier región del espectro podrá ser identificada por su frecuencia, longitud de onda o
por su unidad de frecuencia.

FRECUENCIA ()
Se le define como el número de ondas u oscilaciones que pasan por un punto fijo en la
unidad de tiempo y se le suele indicar con la letra griega nu (v).
La unidad de frecuencia es el hertz (Hz). Una oscilación o ciclo por segundo es igual a un
HERTZ, por lo tanto, se dice que una frecuencia de 10 6 es igual a 10 6 Hz, o sea un
megahertz (MHz).

LONGITUD DE ONDA ()


La letra griega lambda () minúscula representa la longitud de onda. Se le define como la
distancia entre dos crestas adyacentes (o dos valles) de una onda. O también se la define
como la distancia en línea recta medida a lo largo de la línea de propagación entre dos
puntos que están en dos ondas adyacentes. A causa de lo cortas que son las longitudes de
onda, se expresan en unidades de dimensiones muy pequeñas, normalmente la micra (µ),
la milimicra (mµ) o el angstrom (Å). Así como otros tipos de unidades:

1 Å ángstrom = 0,1 mµ = 10 -4 µ = 10-7 mm = 10-8 cm = 10-10 m


10 4 Å = 103mµ = 1 µ = 10-3 mm = 10-4 cm = 10-6 m.
µm = micrómetro = 10 -6 metros = 10-4 cm = 1 micrón (µ)
nm = nanómetro = 10 -9 metros = 10-6 cm = 1 milimicrón (mµ) = 10 Ao
El nanómetro ha sustituido a la antigua unidad milimicrón (mµ) y el micrómetro ha sustituido
la antigua unidad micra (µ).

UNIDADES DE LONGITUD DE ONDA PARA ALGUNAS REGIONES ESPECTRALES

REGIÓN UNIDAD DEFINICIÓN

Rayos X Ángstrom Ao 10 -10


m

Ultravioleta / visible Nanómetro nm 10 -9


m

Infrarrojo Micrómetro m 10 -6
m
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UNIDAD DE FRECUENCIA ().


Se define como el número de ondas por centímetro Es el inverso de la longitud de onda,
se expresa en cm-1 (centímetros recíprocos) esta nomenclatura es muy usada en la región
del infrarrojo.
1 1
 - = ----- = --------
 cm

REGIONES ESPECTRALES
El espectro de energía radiante o espectro electromagnético es único y continuo y abarca
aproximadamente 20 órdenes de longitudes de onda (o energía). Las ondas
electromagnéticas suelen clasificarse en diferentes grupos, según sea su frecuencia,
aunque esta clasificación no permite establecer unos límites precisos para cada grupo.
Se denomina espectro electromagnético al conjunto de todos los tipos de ondas
electromagnéticas, este espectro electromagnético se divide en varias regiones que son:
1.- Ondas de radio, son las ondas electromagnéticas que se utilizan en
telecomunicaciones, incluye las ondas de radio y de televisión. Su rango de
frecuencia comprende desde unos pocos hercios hasta 1 x 10 9 Hz, distinguiéndose
en esta zona diferentes bandas.
2.- Microondas, se utilizan en sistemas de comunicaciones como el radar o la banda
UHF de televisión y también en los hornos de microondas. Su rango de frecuencias
comprende desde 1 x 10 10 Hz hasta 1 x 10 11 Hz.
3.- Infrarrojos, son las ondas electromagnéticas que emiten los cuerpos calientes.
Tienen diferentes aplicaciones en industria, medicina, etc. Comprenden la zona
incluida entre 1 x 10 11 Hz y 4 x 10 14 Hz.
4.- Luz visible, incluye una estrecha franja entre 4 x 10 14 y 8 x 10 14 Hz.
Corresponde a esta banda las frecuencias que corresponden a cada color.
5.- Ultravioleta, esta banda comprende el rango de frecuencias que va de 8 x 10 14
Hz hasta 1 x 10 17 Hz.
6.- Rayos X, comprende un gama de frecuencias que incluye desde 1.1 x 10 17 hasta
1.1 x 10 19 Hz, se usan en medicina.
7.- Rayos gamma, comprenden las frecuencias incluidas a partir de 1 x 10 19 Hz, son
producidos por numerosas sustancias radioactivas.
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ESPECTRO DE RADIACION ELECTROMAGNETICA

Para el caso de la identificación de las diferentes regiones del espectro se ha utilizado


unidades de longitud apropiadas, cuya magnitud esta acorde con el tamaño de la longitud
de onda, así por ejemplo para el visible usualmente se emplea el nanómetro (nm), eso no
impide el uso de unidades ángstrom (Å). Para el caso de la región del infrarrojo es más
frecuente el uso de unidades de frecuencia (cm -1).

ENERGIA DE LA RADIACION ELECTROMAGNETICA


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La energía de un fotón es variable y está en función de los parámetros frecuencia y de la


longitud de onda de la radiación. La relación que existe entre la energía de un fotón y su
frecuencia viene dada por:

E=.h (1)
Donde:
E = Energía del fotón
= Frecuencia
h = Constante de- Planck (6,626 x 10-27 erg.seg).

La velocidad de la luz (C) en el vacío cuando se desplaza es:


C
C=. Pero la frecuencia es:  = -----

Reemplazando en: E = h. 
Se tiene
C
E = ----- h (2 )

Donde:
C= 3 x 1010 cm./seg
 = longitud de onda

De estas relaciones matemáticas se puede llegar a las siguientes conclusiones:


“La energía es inversamente proporcional a la longitud de onda (), y directamente
proporcional a la frecuencia () “
En el vacío, la velocidad de la luz a la cual se propaga la radiación es independiente de la
longitud de onda y alcanza su valor máximo. Esta velocidad, representada por el símbolo
C, se ha determinado que vale tanto en el vacío o en el aire 3 x 10 10cm / seg.
Se demuestra claramente por los cálculos que las radiaciones de menor longitud poseen
mayor energía de ahí su poder de penetración y su capacidad de interacción con la
materia. Por ejemplo, calcular la energía de una radiación cuya longitud de onda es de 425
NM.

E = 3 x 1010 cm / seg x 6.625 x 10 -27 erg-seg/ fotón = 4.676 x 10 -12


erg /fotón
425 NM x 10 -7 cm
1 NM

Para una radiación con longitud de onda de 500 nm, se tiene:


E = 3 x 10 10 cm / seg x 6.625 x 10 -27 erg-seg/ fotón = 3.975 x 10 -12 erg / fotón
-7
500 NM x 10 cm
1 NM

Donde E es la energía en ergios/ fotón. La relación entre las diversas formas de expresar la
energía para una longitud de onda es la siguiente: 1 electrón voltio (e.v.) =1,602 x 10 -12
ergios = 23,066 calorías = 8,0 x 10 3 cm-1 = 1,25 x 10 -4 cm = 1,25 x 10 4 Å = 1,25 µ

INTERACCION DE LA ENERGIA RADIANTE CON LA MATERIA


Hay varios mecanismos de interacción entre la materia y la energía radiante. Algunos de
estos fenómenos surgen de la naturaleza ondulatoria de la energía radiante, entre ellos
tres que tienen particular importancia en análisis.
La difracción es la modificación que experimentan todas las ondas en movimiento al pasar
por los bordes de cuerpos opacos, al atravesar estrechas hendiduras o agujeros o al ser
reflejadas desde superficies rayadas.
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La refracción es el encorvamiento o cambio de dirección de un haz de energía radiante al


pasar oblicuamente de un medio a otro medio de diferente densidad. Este encorvamiento
es resultado de la ligera diferencia en la velocidad de la radiación electromagnética en los
medios y de la longitud de onda de la radiación.
La rotación óptica es el fenómeno por el cual el plano de polarización de la luz polarizada
gira durante el paso de la luz por un medio material. La composición cualitativa y
cuantitativa del medio determina la ocurrencia o no de esta rotación.
Los átomos, iones o moléculas pueden absorber radiaciones si la energía de los fotones es
la de las frecuencias naturales de valoración de los electrones y/o de los átomos en la
molécula. Se dice entonces que la materia que ha absorbido la energía ha pasado a un
estado excitado. La relación de la energía dada anteriormente muestra que la energía de
los fotones aumenta con la frecuencia (o decrece con la longitud de onda). Los fotones de
energía diferente, es decir, de energía radiante de distinta longitud de onda producen
efectos diferentes en el material absorbente.

1. Longitudes de onda muy cortas (rayos gamma y cósmicos) pueden dar lugar a
transformaciones nucleares. Las energías son del orden de millones de electrón
voltios (mev).
2. Los rayos X producen transiciones de los electrones en las capas internas del
átomo, la absorción de rayos X es, por tanto, independiente del estado de
combinación de los átomos. Se requieren energías de varios cientos o varios miles de
electrón voltios.
3. La absorción de radiaciones de las zonas ultravioletas y visible del espectro afecta
a los electrones de la capa externa (de valencia) de los átomos; de aquí que dependa
del estado de la combinación de átomos. Por ejemplo, el ión bicromato es
anaranjado, el ión cromato es amarillo, el cromo (III) verde solvatado en agua y
violeta en algunos complejos. Las energías son del orden de 1 a 25 ev (electrón
voltio).
4. La absorción en el infrarrojo próximo altera las vibraciones de las moléculas. Las
energías son del orden de 0,01 a 1 ev.
5. Cuando se absorbe energía en el infrarrojo lejano y en la región de las microondas
se producen alteraciones en la rotación de las moléculas, necesitándose energías
bajas del orden de 10 a 10 ev.

El PROCESO DE ABSORCIÓN
El paso de un haz de radiación a través de un medio transparente de un sólido, líquido, o
gas va acompañado de la absorción parcial de aquélla, y que también la absorción de
radiación es equivalente a una absorción de energía. Entonces cuando una molécula
absorbe un fotón, la energía de la molécula se incrementa y se dice que la molécula pasa a
un estado excitado. Si una molécula emite un fotón, su energía disminuye. El estado de
menor energía de una molécula se llama estado basal o fundamental.
Cuando un átomo, ión o molécula absorbe un fotón, la energía que recibe da como
resultado una alteración de su estado, se dice que entonces la especie está excitada
(estado de excitación), la excitación es un proceso en el cual una especie química absorbe
energía térmica, eléctrica o radiante y es promovida a un estado de energía superior. La
excitación puede consistir en alguno de los siguientes procesos:

A) CAMBIOS ELECTRÓNICOS
Los electrones en las moléculas, se encuentran girando en niveles de energía
bien definidos. En condiciones normales, la molécula no está excitada y los
electrones se encuentran en el orbital más bajo; se dice entonces que la molécula
se encuentra en su estado fundamental.
Si una molécula absorbe suficiente energía radiante, los electrones pasan del
orbital más bajo a otro de energía más elevada; en el nuevo estado tanto la
molécula como el electrón se encuentran excitados.
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Cuando los electrones pertenecen a un átomo, la longitud de onda de la radiación


está muy bien definida en una banda de frecuencias muy estrecha, pero cuando
los electrones pertenecen a una molécula, la energía necesaria para promover el
electrón a un estado excitado varía con el tipo de enlace molecular en que se
encuentre implicado. Así por ejemplo, los electrones de enlaces parafínicos
exigen más energía que los enlaces no saturados, tales como los aromáticos. Por
otra parte, a las energías electrónicas se añaden las de rotación y vibración.
Estos cambios consisten en el cambio de energía de los electrones
distribuidos alrededor de los átomos de la molécula, es la transición de un
electrón a un nivel energético superior provocado por la absorción de
radiación.
Los electrones en un átomo ocupan normalmente las orbitales electrónicas de
menor energía. En un átomo de litio, por ejemplo, dos electrones están
normalmente en la orbital 1s y uno en la orbital 2 s. este estado electrónico
normal de un átomo se designa como su estado fundamental.
Si se suministra a ese átomo exactamente la cantidad de energía apropiada, el
electrón 2 s puede trasladarse a una orbital 3 s. De igual manera, un electrón 1 s
puede ser trasladado a una orbital de energía más alta. Un átomo que tiene uno
más electrones en una orbital de energía más alta se dice está en un estado
excitado.

b.- CAMBIO VIBRACIONAL


Los átomos enlazados que constituyen una molécula vibran de la misma forma
que lo harían dos objetos más grandes. Una molécula puede imaginarse como
un conjunto de átomos unidos por muelles o enlaces químicos. Los átomos
pueden vibrar aproximándose o alejándose, o bien, flexionarse en ángulo recto,
la energía asociada con estos movimientos es la energía vibratoria.
Los cambios electrónicos examinados hasta ahora en conexión con átomos y
iones se producen cuando entra en interacción energía radiante con moléculas.
Pero, además, las moléculas exhiben movimientos de vibración, cada uno
de los cuales está asociado con una cantidad definida de energía.
Exactamente lo mismo que hay niveles de energía discretos asociados con el
movimiento de vibración dentro de la molécula, una molécula puede ser excitada
de un nivel de energía vibracional a otro más alto, por la absorción de un fotón
de la cantidad justa requerida de energía.
Por ello, las moléculas absorben preferencialmente fotones cuyas energías
corresponden a las diferencias en niveles de energía vibracionales dentro de
ellas. Una molécula excitada vibracionalmente, al igual que un átomo excitado
electrónicamente, vuelve de ordinario rápida y espontáneamente a su estado
normal fundamental, con pérdidas de energía.
La vibración molecular suele ir acompañada de un aumento en la rotación y por
ello, en la práctica, la energía absorbida corresponde a una combinación de
energía vibratoria y rotatoria.

c.- CAMBIO DE ROTACIÓN


Un tercer mecanismo por el cual puede ser absorbida energía radiante por la materia
implica los niveles de energía rotacional de una molécula absorbente. Por ejemplo,
en una molécula de metanol no sólo hay niveles de energía electrónica asociados
con todos los átomos, y movimientos y niveles de energía vibracionales entre cada
par de átomos adyacentes, sino que hay también rotaciones de las moléculas como
un todo. Las energías asociadas con estos movimientos están también cuantizadas,
esto es, sólo son posibles niveles de energía específicos para una molécula dada.
Una molécula absorbente puede ser excitada de un nivel de energía rotacional a otro
más alto, por absorción de un fotón que proporcione precisamente la cantidad de
energía necesaria para ello y una molécula puede volver a su estado normal
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fundamental, o a uno menos excitado, por emisión de un fotón de radiación


electromagnética.
No todas las clases de moléculas experimentan cambios rotacionales por la
absorción de fotones. Estas absorciones se encuentran con la mayor frecuencia en
moléculas que tienen dipolos eléctricos permanentes o momentos magnéticos
permanentes.
Las cantidades de energía asociadas con cambios de niveles de energía rotacional
son en general muy pequeñas comparadas con las transiciones electrónicas y
vibracionales. Se encuentran los espectros de absorción rotacional pura en las
regiones infrarrojas lejana y de microondas del espectro electromagnético.

ABSORCION DE LA RADIACION
Cada una de estas transiciones requiere una cantidad definida de energía; la probabilidad
de que ocurra una transición particular es máxima cuando el fotón absorbido proporciona
exactamente la cantidad de energía necesaria para la misma. En estas circunstancias, la
energía del fotón es transferida a la molécula promoviéndola a un estado de energía más
elevada o estado de excitación. La excitación de una especie M a su estado excitado M.

M + hv ------------>M 
Después de un tiempo muy breve, la especie excitada se relaja a su estado basal,
cediendo su energía a otros átomos o moléculas del medio, este proceso produce un ligero
aumento de temperatura en el sistema, y puede describirse con la ecuación

M ----------- M + calor (hv)

La cantidad de energía necesaria para cada uno de los tipos de transiciones varía
considerablemente entre ellos. En general, las transiciones electrónicas promueven a
los electrones a niveles superiores consumen cantidades de energía mayores que las
que precisan para provocar cambios vibracionales, y éstos a su vez, mayores que las
que producen alteraciones en los modos de rotación. Así, las absorciones que se
observan en las regiones de las microondas y del infrarrojo lejano son debidas a
desplazamientos en los niveles rotacionales, puesto que la energía de la radiación es
insuficiente para dar lugar a otros tipos de transición. En cambio, las variaciones de los
niveles vibracionales son responsables de las absorciones en las regiones infrarrojas y
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visible. Como que para cada nivel vibracional existen una serie de estados rotacionales, en
dichas regiones del espectro se observa la absorción de grupos de longitudes de onda
cuyas energías sólo difieren ligeramente entre sí. La absorción debida a la promoción de
un electrón a algún nivel de energía superior tiene lugar en las regiones del espectro
correspondientes al visible, al ultravioleta y a los rayos X.
Un ejemplo, de la interacción con la materia en lo que se refiere a la absorción de
radiación; es cuando pasa radiación de luz policromática (blanca) a través de un cuerpo
transparente que podría ser amarilla. El cuerpo dejará pasar la luz amarilla, absorbiendo las
demás radiaciones. En otros términos el cuerpo transparente o no rechaza el color amarillo,
razón por lo que el ojo humano percibe esa radiación cuya longitud de onda corresponde el
color amarillo. Para demostrar este hecho, si al cuerpo supuestamente amarillo se hace
incidir radiaciones policromáticas ausentes de la radiación amarilla, el cuerpo absorbe
estas radiaciones y aparece negro. Las frecuencias a colores que han sido absorbidas o
eliminadas por absorción o emisión son en realidad energía electromagnética que se ha
transferido a átomos o moléculas han pasado de un estado de mínima energía
(fundamental) a un estado de excitación o más alta energía.
Este proceso de excitación tiene un periodo de vida muy corto, más o menos de 10 -8 seg.
Al volver el átomo o moléculas a su estado basal, llamado proceso de Relajación, que es
un proceso en el que una especie excitada pierde su exceso de energía y regresa a un
estado de menor energía. (Estado de relajación), indudablemente tendrá que desprender
algún tipo de energía, en su defecto sería imposible el retorno de estado excitado al estado
basal. La energía absorbida por los átomos, iones o moléculas se disipa rápidamente
dentro del material absorbente, normalmente en forma de calor; pero a veces puede ser
emitida como energía radiante como luz, fluorescencia o fosforescencia, etc.

ESPECTROS DE ABSORCION
Espectro viene a ser una especie de imagen de la energía radiante absorbida o emitida por
un cuerpo, cuando interacciona con la materia. El espectro de absorción es una gráfica de
porcentaje de transmitancia, absorbancia, logaritmo de absorbancia o absortividad molar
de un analito en función de la longitud de onda o del número de onda y ocasionalmente de
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la frecuencia. El espectro de absorción es una gráfica que indica en que forma la


absorbancia depende de la longitud de onda.
Las curvas espectrales son características de la sustancia absorbente y, por tanto, estas
curvas pueden utilizarse para el análisis cualitativo del soluto. Algunas sustancias dan
espectros con muchos picos como los compuestos orgánicos y son mucho más
complicados que las inorgánicas.

ABSORCIÓN ATÓMICA
Al incidir radiación policromática visible y ultravioleta sobre una sustancia constituida por
partículas monoatómicas; únicamente son absorbidas algunas frecuencias de esa gama.
La relativa simplicidad de los espectros se debe al pequeño número de posibles estados de
energía de las partículas absorbentes. La excitación solo puede producirse mediante un
proceso electrónico en el que uno o más de los electrones del átomo se promocionan a un
nivel de energía superior. Por ejemplo; para el caso particular del Sodio, al estado
monoatómico, absorbe radiación correspondiente a 589,00, a 589,59 nm los electrones del
átomo de sodio pasa de un nivel 3s a 3p. Se reduce en un espectro con un pico fuerte de
absorción a esa longitud de onda. La radiación visible y ultravioleta tiene la energía
necesaria para producir transiciones únicamente de los electrones más externos o
llamados de valencia o electrones enlazantes. Por otra parte, las frecuencias de los rayos
X son varios órdenes de magnitud más energética y son capaces de interaccionar con los
electrones más próximos al núcleo de los átomos. Los picos de absorción correspondientes
a las transiciones electrónicas de estos electrones más internos se observan, por tanto, en
la región de los rayos X.

ABSORCIÓN MOLECULAR
Los espectros de absorción de las moléculas poliatómicas, especialmente en estado
condensado, son considerablemente más complejos que los espectros atómicos, ya que el
número de estados de energía de las moléculas es generalmente enorme si se compara
con el de los átomos aislados. La energía interna de una molécula en su forma total
corresponde a:
E total = E electrónica + E vibratoria + E rotatoria
La energía electrónica corresponde a los electrones de átomos que forman una molécula
que proviene de los estados energéticos de sus distintos electrones enlazantes.
La energía vibratoria corresponde típicamente a la molécula, esto es debido a la energía
total asociada al elevado número de vibraciones interatómicas presente en las especies
moleculares. En general, una molécula tiene muchos más niveles cuantizados de energía
vibracional que niveles electrónicos.
La energía rotatoria corresponde al giro de la molécula alrededor de su centro de
gravedad, para cada estado de energía electrónica normalmente corresponde al giro de la
molécula, alrededor de su centro de gravedad. Para cada estado de energía electrónica
normalmente corresponde varios estados vibracionales de la molécula a su vez para una
de estas corresponde numerosos estados rotatorios, el número de estados rotacionales es
mucho mayor que el número de estados vibracionales, as´, para cada estado de energía
electrónica de una molécula, generalmente existen varios estados vibracionales posibles y,
a su vez, para cada uno de estos estados vibracionales, son posibles numerosos estados
rotacionales. En consecuencia, el número de posibles niveles de energía para una
molécula es normalmente de unos órdenes de magnitud mayor que para una partícula
atómica.
La mecánica cuántica establece que la energía toma valores definidos que solo pueden ser
múltiplos enteros de una porción más pequeña o "paquete" de energía llamado cuanto. Los
cuantos de energía electrónica son de mayor magnitud que los de energía vibratoria, los de
energía rotatoria son menor que los de energía vibratoria.
E electrónica > E Vibratoria > E rotatoria
ANALISIS QUIMICO 2 INGENIERÍA BIOTECNOLOGICA Ing. Armando salinas Sánchez 23

La transición electrónica en un átomo es provocada por radiaciones que corresponden al


visible, ultravioleta o radiación X. Las transiciones vibratorias son provocadas por
radiaciones que corresponden a la infrarroja 1 a 15 m.
Las transiciones rotatorias son provocadas por radiaciones que corresponden al infrarrojo
lejano a 100 m. Los espectros moleculares se particularizan por bandas de absorción que
abarca un gran intervalo de longitudes de onda porque tiene un buen número de estados
vibratorios o rotatorios por cada estado electrónico.
La radiación visible o ultravioleta puede provocar formación de espectro constituidos por
niveles electrónicos, vibracionales o rotacionales. Es posible conseguir espectros
únicamente rotacionales mediante radiaciones cuya energía no supere 0,1 Kcal. /mol.
Asimismo, puede conseguirse espectros vibratorios pero también rotacionales con
radiaciones cuya energía no supere 5 Kcal. /mol. Los espectros electrónicos atómicos que
implícitamente son vibracionales y rotacionales, se producen con energías superiores a
5Kcal/mol.
CARATERISTICAS DE LOS ESPECTROS
Los espectros atómicos constan de una serie de líneas de resonancia, correspondiente
cada línea a una frecuencia o longitud de onda características. Los espectros moleculares
en el visible abarcan una amplia gama de frecuencias contenidas en una banda de
absorción. Esa gama de frecuencias que se encuentran casi juntas son difícilmente
detectadas por el instrumento apareciendo los espectros como curvas suavizadas.
Naturalmente que se hace referencia a la absorción electrónica que implica absorción
vibracional y rotacional. Los espectros moleculares vibracionales exentos de absorción
electrónica sólo muestran radiaciones cuyas longitudes de onda corresponden al infrarrojo,
cuya energía es incapaz de provocar excitación electrónica. El espectro que corresponde a
este tipo muestra un aspecto de dientes o picos de absorción de distancia estrecha una de
otra, cada una corresponde a niveles cuánticos vibratorios. Cuando se ha obtenido un
espectro vibracional con sus respectivos niveles vibracionales junto a cada uno puede
aparecer una serie de picos más pequeños cuando se trata de muestras en estado
gaseoso donde es posible conseguir que la molécula rote, caso contrario con muestras
líquidas o sólidas donde para la molécula.
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METODOS DE ABSORCION
Estos métodos que tiene como base la interacción de la materia con la energía radiante se
basan en la medición de las longitudes de onda o la intensidad o cantidad de la radiación
electromagnética que absorbe la muestra. Las longitudes de onda que absorbe la muestra
y la cantidad de radiación que absorbe la misma, permiten el análisis cualitativo y
cuantitativo respectivamente.
DETERMINACIÓN DEL ORDEN CUALITATIVO
Cuando se pasa a través de una sustancia radiación de una gamma de frecuencias que
son capaces de provocar excitación electrónica, vibración molecular o rotación molecular,
ocurre absorción en forma de bandas de longitudes de onda determinada.
En cada tipo de sustancias los átomos, iones o moléculas absorben con cierta preferencia
longitudes de onda de una determinada gama de frecuencia esto hace que los átomos,
iones, moléculas puedan identificarse mediante la longitud a que se da lugar la absorción.
DETERMINACIÓN DE ORDEN CUANTITATIVO
Cuando se hace pasar una radiación monocromática, el número de fotones absorbidos por la
muestra, es proporcional a la concentración sea de átomos, iones o moléculas. Esta propiedad
importante de interacción permite determinaciones cuantitativas de sustancias en una muestra
determinada con muy buena precisión y gran exactitud. La espectroscopia, en general, ofrece
grandes posibilidades analíticas. Todos los métodos se basan en la interacción de la radiación con
todos los componentes de los átomos y moléculas, así como en las ordenaciones moleculares de la
materia. En la figura se resumen los distintos campos analíticos, y sus respectivos rangos de
concentración óptimos para la aplicación de cada uno de ellos, el límite de sensibilidad de todos los
métodos puede ampliarse llevando la concentración al rango adecuado, o bien, utilizando técnicas
conjuntas.
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TABLA DE METODOS ANALITICOS


Método Intervalo Precisión selectividad rapidez costo Usos
aproximado Aproximado principales
MOL/L %
Gravimetrá 10-1-10-2 0.1 Pobre lenta bajo inorgánico
moderada
volumetría 10-1-10-4 0.1-1 Pobre moderada bajo Inorgánico
moderada orgánico
Potenciometría 10-1-10-6 2 buena rápida bajo inorgánico
Voltamperometria 10-3-10-10 2-5 Buena moderada moderado Inorgánico
orgánico
espectrofotometría 10-3-10-6 2 Buena Rápida Bajo Inorgánico
moderada moderada moderado orgánico
Espectroscopia 10-3-10-9 2-10 Buena rápida Moderado Inorgánico
atómica alto multielemento
Cromatografía 10-3-10-9 2-5 Buena Rápida Moderado Orgánico
moderada alto multicomponentes

En la tabla se comparan diversos métodos analíticos que se describen con respecto a


sensibilidad, precisión, selectividad, rapidez y costo.

INTRODUCCION A LA ESPECTROSCOPIA DE ABSORCION


Los principales métodos de absorción serán tratados en esta parte del análisis
espectroscópico.

TERMINOLOGIA UTILIZADA EN ESPECTROSCOPIA DE ABSORCION


La ASTM (American Society for Testing Materials) ha creado una nomenclatura
uniforme para el empleo de términos y símbolos en espectroscopia de absorción. En
tabla siguiente se enumeran en las dos primeras columnas las recomendaciones de la
ASTM, la columna tres contiene símbolos que se consideran en la bibliografía antigua.

SIMBOLOS Y TECNICAS UTILIZADAS EN LAS MEDIDAS DE


ABSORCIÓN
-----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
TECNICAS Y SIMB. DEFINICION OTROS NOMBRES Y SIMBOLOS
-----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
 Poder de radiación P, Po Energía de la Intensidad de la radiación saliente e incidente.

 Absorbancia, A Log Po/P Densidad óptica (D.O), Extinción (E)

 Transmitancia T P / Po Transmisión (T)

 Trayecto óptico L, d. b, en cm .
 Absortividad (a) A /bx c Coeficiente de extinción, Extinción específica
Absorción específica K

 Absortividad molar () A/ b x c Coeficiente de extinción molar.

-------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

CONCEPTOS BASICOS
La nomenclatura de conceptos establecidos por la ASTM (American Society for Testing
Materials) son:

a) ABSORBANCIA (A)
Es el logaritmo de base 10 del recíproco de la transmitancia expresado por:
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A = Log 101 = - Log 10 T = Log (Po)


T P
-*--------------------------
0.-
Cuando no se absorbe luz, P = P o y entonces A =0, cuando se absorbe 90% de la luz, 10 %
de ella se transmite y P = P o / 10, con esto se tiene A = 1. Cuando solo se transmite el 1%
de la luz, A = 2. A diferencia de la transmitancia, es directamente proporcional a la
concentración, es decir, la absorbancia de un medio aumenta cuando la atenuación del haz
se hace mayor.

La luz es
absorbida por
LUZ
LUZ las moléculas
contenidas en
la muestra

b) TRANSMITANCIA (T)
Como consecuencia de las interacciones entre los fotones y las partículas absorbentes, la
potencia del haz disminuye de Po a P. La transmitancia T de la solución, es la relación que
existe entre el poder de radiación transmitida (P) por una sustancia absorbente y el poder
de radiación que incide (Po) sobre la muestra; la transmitancia se expresa con frecuencia
como porcentaje

%T= P x 100 %
Po

También se le define como la fracción de la luz incidente que sale de la muestra, por lo
tanto, T varía de cero a uno. La transmitancia porcentual es simplemente 100T y varía
entre cero y 100 %

c) TRAYECTO OPTICO (B)


Se le representa por (b) se le llama también camino óptico y es la distancia que la luz
atraviesa por la solución contenida en una celda, es la distancia interior del recipiente que
contiene la solución, los lados de la celda deben ser paralelos y pulidos ópticamente. Se
producirá refracción si no es paralela.

d) PODER DE RADIACIÓN
Es la cantidad de energía transportada por un haz de energía radiante que alcanza un área
dada de un detector. Se tiene un haz incidente (Po) y otro saliente o emergente (P)..
La luz La luz
transmitida en transmitida en
LUZ
LUZ LUZ
LUZ el sistema es el sistema es
menor a la menor a la
inicial. inicial.
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e) ABSORTIVIDAD Y ABSORTIVIDAD MOLAR


Es la relación entre la absorbancia que presenta la sustancia absorbente y el producto de
la longitud de paso óptico por la concentración. Puesto que la absorbancia es una cantidad
adimensional, la absortividad debe tener unidades que señalan las unidades de b (trayecto
óptico) y C (concentración). Como se verá a continuación, la absorbancia es directamente
proporcional a la trayectoria de la radiación a través de la solución y a la concentración de
la especie que produce la absorción.
De acuerdo a la ley de Lambert Beer se tiene que:

A= a b c
A=  b c

Despejando de esta ecuación la absortividad se tiene lo siguiente:


A
a= ---------- = L g -1 cm -1 absortividad específica
bxC

A
 = ---------- = L mol -1 cm -1 absortividad molar
bxC

Donde a es una constante de proporcionalidad llamada absortividad. Resulta que el valor


de a depende de las unidades utilizadas para b y c. Puede tomar las denominaciones de
absortividad específica representada por "a" minúscula cuando la concentración de la
sustancia absorbente esta dada en gramos/litro, miligramos/ mililitro, o miligramos/ litro. Se
denomina absortividad molar (  ) cuando la concentración está dada en términos de
molaridad (moles/ litro).

LEYES FUNDAMENTALES DE LA FOTOMETRIA


El análisis espectroscópico cuantitativo se basa en la relación entre la cantidad de luz
absorbida y la cantidad de sustancia absorbente. Esta relación, susceptible de demostrarse
teóricamente, se observa de manera experimental en la mayoría de las situaciones
analíticas prácticas. La potencia radiante de un haz o rayo de radiación es proporcional al
número de fotones por unidad de tiempo; la absorción ocurre cuando un fotón choca con
una molécula y la lleva a un estado de excitación.
Cuando un haz de luz monocromática pasa a través de una solución que absorbe
radiación, parte del haz fundamentalmente se absorbe. La cantidad de luz absorbida se
encuentra bien definida y se ajusta a ciertas leyes físicas. Así, por ejemplo, si P o es el poder
de radiación de un haz monocromática que incide sobre una solución, y P es el poder de
radiación emergente se tiene el siguiente fenómeno que se representa mediante el
siguiente esquema:
ANALISIS QUIMICO 2 INGENIERÍA BIOTECNOLOGICA Ing. Armando salinas Sánchez 29

La intensidad del haz saliente es significativamente menor que la cantidad del haz que
incide sobre la solución en estudio debido a los siguientes factores:
 POR PÉRDIDAS, desplazándonos de izquierda a derecha, se produce la
primera pérdida por reflexión en las interfaces aire – vidrio. Como muestra la
figura en las dos interfases aire/pared de la cubeta, así como en las dos
interfases pared/disolución tienen lugar reflexiones. Esta pérdida se calcula
en función de la siguiente relación:
G-A 2
Pérdida % = [---------]
G-A

G = Indice de refracción vidrio 1,5


A = Indice de refracción del aire 1

Aproximadamente se pierde el 8.5% de un haz por fenómenos de reflexión


en su paso a través de una cubeta en cada uno de las dos interfaces
aire - vidrio.
 Se produce pérdidas de algunos fotones de haz a la presencia de pequeñas
partículas de polvo llamadas pérdidas por difracción. Además, la atenuación
del haz puede ocurrir como consecuencia de la dispersión causada por
moléculas grandes y, a veces, de la absorción por las paredes del recipiente.
Para compensar estos efectos, la potencia del haz transmitido por la
disolución del analito se compara, generalmente, con la potencia del haz
transmitido por una cubeta idéntica que sólo contiene disolvente.
 Desde el punto de vista analítico se produce pérdidas de potencia o
intensidad, debido a la absorción selectiva de fotones por la especie
absorbente.

Las leyes que gobiernan este proceso de absorción de radiación son denominadas leyes
fotométricas o también se llaman leyes cuantitativas de la absorción..

LEY LAMBERT – BOUGUER


Si en lugar de examinar el fenómeno en términos de la cantidad de luz transmitida, se
estudia la cantidad de luz absorbida, se obtiene una relación en forma distinta.
ANALISIS QUÍMICO 2 INGENIERIA BIOTECNOLOGICA Ing. Armando Salinas Sánchez 30

Supongamos que una solución de concentración unidad y de 1 cm. de trayecto óptico


absorbe el 50 % de la radiación de longitud de onda, que incide sobre ella. Entonces

P = 50 unidades
Po 100

Si se coloca detrás de la primera una segunda solución similar, de 1 cm. de espesor y que
absorbe también el 50 %, sólo 50 unidades de luz inciden sobre ella y, por tanto, emergen
25 unidades. Esta relación indica que a mayor trayecto óptico disminuye la potencia de
radiación transmitida.

Po = 100 50% absorción P1 = 50 50% absorción P2= 25

Haz incidente 1 cm 1 cm haz transmitido

Esta ley señala la relación que existe entre la absorción de radiación y la longitud de la
trayectoria a través del medio absorbente, establece el efecto “espesor” de la cubeta de la
muestra llamado también trayecto o recorrido óptico. Presenta dos enunciados:
 La relación entre la energía radiante incidente (Po) y la saliente o transmitida
(P), es una constante llamada transmitancia.

T=P= %T = P x 100 =
Po Po

 La cantidad de luz absorbida depende de la absortividad del líquido y de la


longitud del trayecto óptico (b) a través de la solución, en el supuesto de que la
longitud de onda y la concentración de la muestra permanezcan constantes.
Donde:
A = a. b = - log T = log Po A = absorbancia
P a = absortividad
b = trayecto óptico

DIAGRAMA DE LA LEY LAMBERT - BOUGUER


ANALISIS QUIMICO 2 INGENIERÍA BIOTECNOLOGICA Ing. Armando salinas Sánchez 31

Supongamos que T = P/Po = 0,50 por unidad de trayecto óptico


- Trayecto óptico 0 1 2 3.... n
- Transmitancia 1,0 0,50 0,25 0,125 (0,5)
Se considera que: b= 1 cm

LEY DE BEER
Consideremos un dispositivo óptico donde la radiación incidente, Po, es 100 unidades, la
emergente o transmitido, P1, es 50 y la concentración de la solución 0.1 g por 100 ml. Si se
coloca un segundo recipiente similar en el trayecto de la luz que emerge, la potencia de la
radiación, P1, que sale de este último, es 25 unidades.
ANALISIS QUÍMICO 2 INGENIERIA BIOTECNOLOGICA Ing. Armando Salinas Sánchez 32

Po = 100 0.1 g por 100ml P1 = 50 0.1g por 100 ml P2= 25

Haz incidente b b haz transmitido

Si se cambian ahora las condiciones, de tal modo que el primer recipiente contenga todo el
material absorbente, es decir, que su concentración sea 0.2 g por 100 ml, al medir la
potencia de la radiación que emerge se obtiene un valor de 25 unidades. En consecuencia,
para un trayecto óptico dado, la absorción vendrá dada por la concentración del material
absorbente, la absorbancia y la absortividad.

Po = 100 0.2 g por 100ml P1 = 25

Haz incidente b haz transmitido

En 1859, Beer formuló la relación entre la concentración de la especie absorbente y el


grado de absorción. Esta ley relaciona la concentración de la especie absorbente con la
radiación transmitida y la radiación incidente. Su enunciado es el siguiente: “la
transmitancia disminuye en progresión geométrica cuando aumenta la concentración
en progresión aritmética”.
Representación:
A = Log Po = Log 1 = - Log T
P T

A= a xc c = concentración

La potencia de radiación disminuye conforme aumenta la concentración, la cantidad de


energía disminuye cuando aumenta la concentración.

LEY LAMBERT - BEER


Las leyes de Bouguer - Lambert y de Beer se pueden combinar fácilmente para obtener un
expresión conveniente, al estudiar el efecto del cambio de concentración en la absorción,
podemos notar que la longitud de la trayectoria a través de la solución se mantendrá
constante. Se representa por:

A = a b c = Log Po = = Log 1 = -Log T


P T

Donde: A: Absorbancia
a: Absortividad del medio o líquido
b: trayecto óptico
c: concentración
Po = potencia de radiación incidente
P = potencia de radiación transmitida
ANALISIS QUIMICO 2 INGENIERÍA BIOTECNOLOGICA Ing. Armando salinas Sánchez 33

De acuerdo con la ley combinada Lambert - Beer llamada simplemente Ley Beer, se
expresa que: La absorbancia de una solución está relacionada linealmente con la
concentración de la especie absorbente (c) y con la longitud del trayecto óptico ( b)
de la radiación en el medio absorbente.
Esta Ley de Beer es fundamental en los métodos ópticos de análisis, ya que nos permite
calcular la concentración de una sustancia a partir de la medición de la radiación absorbida
por una disolución de la misma y establece que la absorbancia es proporcional a la
concentración de las especies absorbentes. Estas expresiones muestran que existe una
relación lineal entre la absorbancia y la concentración, de una solución dada, supuestas
constantes la longitud del trayecto óptico y la longitud de onda.

COMPROBACIÓN DE LA LEY BEER


No todas las sustancias absorbentes se ajustan a la Ley de Beer, debido a una serie de
factores, para ellos es necesario previamente realizar un estudio de comportamiento de las
sustancias frente a la radiación. Este consiste en preparar una serie de soluciones de
concentraciones conocida u determinado de ellas su absorbancia. Si la curva obtenida
presenta linealidad, la sustancia obedece a la ley de Beer en cualquier concentración.
Para verificar la conformidad con la ley de Beer se confecciona una gráfica de absorbancia
o Logaritmo de la transmitancia frente a la concentración o de porcentaje de la
transmitancia frente a la concentración. Una curva estándar de acuerdo con la ley
combinada Lambert – Beer, una gráfica de absorbancia contra concentración será una
línea recta de pendiente igual a b. La ley Beer sólo describe adecuadamente el
comportamiento de la absorción en soluciones diluidas, en este sentido es una ley límite. Si
bien la ley de Beer se mantiene a bajas concentraciones, es frecuente observar
desviaciones a concentraciones más elevadas. No obstante, esta ley es la piedra angular
de algunos campos de espectroscopia de absorción.
Las premisas de la Ley Beer son:
 El único mecanismo de interacción entre la radiación incidente y la sustancia
problema es el de absorción
 Se Utiliza radiación monocromática
 Las especies problemas ( moléculas o iones) actúen independientemente unos de
otros
 La absorción estudiada corresponde a un volumen de sección transversal uniforme

APLICACIÓN DE LA LEY DE BEER A MEZCLAS


ANALISIS QUÍMICO 2 INGENIERIA BIOTECNOLOGICA Ing. Armando Salinas Sánchez 34

La ley de Beer se aplica también a las soluciones que contienen más de un tipo de
sustancia absorbente. Siempre que existe interacción entre las diferentes especies, la
absorbancia total para un sistema de varios componentes está dada por:

A total = A1 + A2 + A3…. + An
=  1 b c1 2 b c2 3 b c3  n b cn

Donde los subíndices se refieren a los componentes absorbentes 1, 2,…. N

DESVIACIONES DE LA LEY DE BEER


La relación lineal entre absorbancia y longitud de trayectoria para una concentración fija de
sustancias absorbentes es una generalización para lo cual no se conocen excepciones.
Por el contrario, se encuentran frecuentemente desviaciones con relación a la
proporcionalidad directa entre absorbancia y concentración medidas cuando b es
constante.
Algunas de estas desviaciones son fundamentales y representan limitaciones reales de
esta ley; estas ocurren como consecuencia de la manera en que se mide la absorbancia
(desviaciones instrumentales) o como resultado de los cambios químicos asociados con las
variaciones de concentración (desviaciones químicas) o incompetencia del operario para
manejar los estándares en forma correcta (desviaciones personales).
Los errores al aplicar la Ley de Beer son:

Errores Químicos
Efectos debido a sistemas en equilibrio, debe remarcarse que el valor de la
concentración C que interviene en la Ley de Beer corresponde a la concentración de la
especie absorbente, como por ejemplo, equilibrios de dimerización, complejación, y
ácido base.
Efectos debido al disolvente, se elige un disolvente de modo que no absorba
apreciablemente en la longitud de onda de trabajo
Efecto debido a impurezas absorbentes presentes en los reactivos, los reactivos
químicos contienen sustancias a nivel de trazas que pueden causar absorbancia debido
a lo sensibles que son los métodos espectrofotométricos. Para ello se emplea la
determinación de un “ Blanco”
Efectos debido a interferentes en la muestra, la muestra puede presentar sustancias
que absorben radiación a la longitud de onda elegida, entones de deben eliminar o
disminuir estos tipos de errores.
Cuando un analito se disocia, se asocia, o reacciona con un disolvente para dar lugar
a un producto con un espectro de absorción diferente al del analito.
Por ejemplo: En el siguiente equilibrio:

2 CrO4 -2 + 2 H+ <------- 2 HCrO4 - <______- Cr2O7 -2 + H2O


El ion dicromato absorbe en la región visible a 450 nm. Al diluir una solución de
dicromato, el equilibrio se desplaza hacia la izquierda. El equilibrio puede ser
desplazado totalmente, distribuyendo prácticamente todo el cromo en el CrO 4 -2.

ERRORES INSTRUMENTALES
 El cumplimiento estricto de la ley de Beer se observa sólo cuando la radiación
utilizada es verdaderamente monocromática, esta observación constituye otra
manifestación del carácter límite de esta ley. Rara vez se puede utilizar en forma
práctica una radiación limitada a una sola longitud de onda.
 Son aquellos errores que provienen de la lectura y de la radiación parásita, otros
tipos son las reflexiones en la cubeta o la calibración inadecuada de la longitud de
onda. Se considera también la radiación no monocromática. La radiación parásita es
la radiación extraña que llega al detector y que no provienen de la muestra se da a
ANALISIS QUIMICO 2 INGENIERÍA BIOTECNOLOGICA Ing. Armando salinas Sánchez 35

valores elevados de absorbancia o bajas transmitancias. Otro error es el control de la


temperatura a temperatura ambiente de la muestra y de los patrones
 La radiación que emerge del monocromador suele estar contaminada con pequeñas
cantidades de radiación dispersa o parásita, la cual alcanza la rendija de salida como
resultado de dispersiones y reflexiones en varias superficies internas. La radiación
parásita, con frecuencia difiere sustancialmente en su longitud de onda de la radiación
principal y, además, puede no haber atravesado la muestra.

ERRORES PERSONALES
 Utilización y cuidado de las cubetas de absorción, las cubetas deben estar siempre
extremadamente limpias, sin presentar ralladuras, huellas ni adherencias.
 Competencia personal del operador en el preparado de soluciones, ajustes de pH,
tiempo de espera en el desarrollo del color, temperatura etc.
Pero, es muy frecuente encontrar desviaciones a la proporcionalidad directa entre
absorbancia y concentración (cuando b es constante). Algunas de estas desviaciones son
fundamentales y representan limitaciones reales de esta ley, estas ocurren como se ha
mencionado como consecuencia de la manera en que se mide la absorbancia
(desviaciones instrumentales) o como resultado de cambios químicos asociados con las
variaciones de concentración (desviaciones químicas).
Algunas gráficas de la Ley de Beer que no son lineales en todo el rango de concentración
pueden ser de los siguientes tipos:
1. La curva no parte del origen (curva A),
Parte del eje de las absorbancia, significa que la curva no pasa por el origen a una
concentración cero, ya que se produce una absorbancia, esto se debe a lo siguiente
factores:
* Existen impurezas que absorben radiación a la longitud de onda de trabajo.
* El reactivo colorante absorbe radiación
* Otros reactivos presentan color propio lo que implica una absorción de radiación.

2. La curva no es recta (curva B)


Esta curva se debe a:
 El instrumento no da respuestas lineales
 El sistema químico se altera con la concentración
 El monocromador no opera adecuadamente, puede haber mucha luz dispersada en
el instrumento
Una variedad de curva que corresponde a este tipo es aquella que significa que la ley se
cumple hasta un determinado rango de concentración, puede presentarse una desviación a
partir de otra concentración que puede ser negativo o positivo.
ANALISIS QUÍMICO 2 INGENIERIA BIOTECNOLOGICA Ing. Armando Salinas Sánchez 36

Desviación negativa
Se debe a:
* La luz incidente no es monocromática
* La cantidad de reactivo cromoforo agregado para formar la especie
coloreada no es suficiente para que reaccione con el componente
activo.
* A cambios químicos que se produce en el sistema.

Desviación positiva
Es una desviación rara, se da pocas veces y se presenta cuando la sustancia presenta
turbidez que absorbe la radiación; la solución problema debe ser transparente, limpia y
homogénea. Estas desviaciones son positivas o negativas según la curva que se obtiene
se desvié por encima o por debajo de la línea recta.
Otra curva irregular se puede presentar de la forma C y en este caso se debe a :

 El instrumento opera en malas condiciones


 Que es el sistema químico de las sustancias no se encuentra bajo control (variables
de pH, temperatura, tiempo de espera, etc.)
 Incompetencia personal.

ERROR FOTOMETRICO
Las mediciones de porcentajes de transmitancia obtenidas con la mayoría de los
fotómetros y espectrofotómetros están sujetas a incertidumbre a causa de errores al azar
(fluctuaciones) en el funcionamiento normal de estos instrumentos. La reproductividad de
los ajustes de control del instrumento, la constancia de la respuesta del detector y de la
intensidad de la energía radiante, la duplicabilidad en el llenado de la celda
espectrofotométrica y en su colocación en la cámara de la muestra, la estabilidad de todo
circuito eléctrico auxiliar y la facilidad para leer el medidor o la escala del porcentaje de
método analítico espectrofotométrico, por ello, una variación o incertidumbre entre
cualquiera de estos factores puede afectar al porcentaje de Transmitancia observado al
igual que a la concentración calculada de la especie absorbente.
ANALISIS QUIMICO 2 INGENIERÍA BIOTECNOLOGICA Ing. Armando salinas Sánchez 37

La mayoría de los instrumentos comerciales, la incertidumbre absoluta en el porcentaje de


transmitancia queda entre los límites aproximados de 0.2 a 1%. Este intervalo de serie de
mediciones con una solución estándar en que cada medición extrañe un reajuste completo
de todos los controles del instrumento y una nueva porción de la solución estándar, en que
cada medición entrañe un reajuste completo de todos los controles del instrumento y una
nueva porción de la solución estándar.
En la curva se puede apreciar la influencia que tiene el error cometido en la medida de
transmitancia sobre el error de concentración. Cuando la transmitancia es grande un error
del 1 % en su medida se refleja poco en la concentración, pero si la transmitancia es
pequeña, el error en la concentración será considerable. El error relativo en la
concentración viene dado por la relación:

Error relativo = Error en la medida de la concentración


Valor real de la concentración
La relación entre el porcentaje de error relativo y el error en la medida de la transmitancia,
puede obtenerse de la ley de Beer. El error en la medida de la transmitancia se llama error
fotométrico. Numéricamente se puede escribir que:
Error relativo (%) = dc /c
Error fotométrico (%) dT
Siendo " c " la concentración y " T " la transmitancia; teniendo en cuenta que:
A=abc
Absorbancia = A = log Po
P

Transmitancía T = P
Po

Si se recuerda por la Ley de Lambert - Beer que la concentración de la especie absorbente


está en relación directa y lineal con la absorbancia podemos concluir que estos porcentajes
de error en absorbancia son iguales al porcentaje de error en la concentración del
componente desconocido y que todo ello es resultado de la incertidumbre constante de 1
por 100 en la transmitancia.
Podemos llegar a las mismas conclusiones de manera más rigurosa por combinación de
las definiciones básicas de absorbancia y transmitancia con el siguiente resultado:
A = Log 1
T
Ó
1 1 1
A =- --------- In --- = 0,434 ln ---
2,303 T T

La diferenciación de esta ecuación con referencia a T, da:

dA = _ 0,434
dt T

0,434
dA = - ------ dT
T
Para valorar el error relativo en la absorbancia o de la concentración, es necesario dividir
cada miembro de la expresión anterior por la absorbancia (A) así:

dA = _ 0,434 dt= 0,434 dt


A TA t Log t
ANALISIS QUÍMICO 2 INGENIERIA BIOTECNOLOGICA Ing. Armando Salinas Sánchez 38

Esta ecuación muestra que el error relativo en la absorbancia (dA/ A) está gobernado por la
incertidumbre absoluta en la transmitancia observada (dT) al igual que por la recíproca de
un producto de términos (t y Log t) en que interviene la propia transmitancia. En esta
exposición seguiremos bajo el supuesto de que error absoluto en la Transmitancia es 0,01
de modo que el porcentaje de incertidumbre es el 1 por 100. Por consiguiente, el error
relativo en la absorbancia en porcentaje, puede calcularse a partir de la simple ecuación.
Error relativo en la absorbancia o concentración por 100= dA x 100 = 0,434 dT
A t log t

Donde:
DA/ A = Error relativo de la absorbancia o concentración
T = Transmitancia
t = Error fotométrico 1% (0.01)

Ahora valoraremos el error relativo en la absorbancia en porcentaje que surge de un error


de 1 por 100 en las lecturas de Transmitancia, de 1, 5, 10, 15 20, 30, 40, 50 60, 70, 80, 90,
y 95 por 100.
 Al nivel de 1 % de transmitancia
dA/A x 100 = 0.434 (0.01) = - 21.7 %
0.01 Log 0.01
 Al nivel de 5 % de transmitancia
dA x 100 = ________0,434_(0.01)_______ = -6,7 %
A (0,05) Log (0,05)

 Al nivel de 50 % de transmitancia
dA x 100 = ________0,434_(0.01)_______ = -2,9 %
A (0,50) Log (0,05)

 Al nivel de 95 % de Transmitancia

dA x 100 = ________0,434 (0.01)________ = -20,5 %


A (0,95) Log (0,05)

Tabulando estos valores calculados se tiene los siguientes resultados:

% dA/A
% transmitancia t

95
20.51
90
10.54
80
5.63
70
4.00
60
3.26
50
2.88
40
2.73
30
2.77
20
3.10
15
3.51
10
4.34
5
6.70
1
21.70
El hecho de que los signos de los errores estén invertidos no tiene importancia, pues solo
nos interesa la magnitud de estas incertidumbres. Es evidente que un error de 1 % en la
ANALISIS QUIMICO 2 INGENIERÍA BIOTECNOLOGICA Ing. Armando salinas Sánchez 39

Transmitancía puede ser positivo o negativo y por ende, la incertidumbre de la observancia


o la concentración tiene la misma probabilidad de llevar signo más o signo menos. En la
figura se presentan gráficamente los resultados de una serie de cálculos basados en la
ecuación rigurosa, del error relativo por 100 en la absorbancia o en la concentración en
función del porcentaje de Transmitancia. De estos resultados se obtienen tres importantes
conclusiones.
1. El error relativo en la absorbancia o la concentración es mínimo con 36.8 % o sea
con una absorbancia de 0.434.
2. El error es constante dentro de los límites razonables entre 20 y 60 % de
Transmitancia, aproximadamente, esto es con 0,7 a 0,2 unidades de absorbancia. Si la
muestra es demasiado diluida (es decir, t demasiado elevada) es necesario concentrar la
muestra por extracción, evaporación u otro método.
3. El error se vuelve extremadamente grande a cada extremo de la escala de
porcentaje de Transmitancia. Por consiguiente, para efectuar determinaciones
cuantitativas de máxima exactitud habrán de limitarse las lecturas de instrumento al
intervalo de absorbancia de 0,7 a 0,2 de unidad. Esta restricción puede satisfacerse
fácilmente por variaciones adecuadas en la longitud del trayecto óptico de la muestra y
el tamaño o volumen de la muestra tomada para el análisis. La manera inusual de
variación de este error surge del hecho de que los instrumentos miden transmitancia,
siendo así que las concentraciones son proporcionales a la absorbancia

4. Porcentaje de error relativo en la absorbancia o en la concentración calculada de la


especie absorbente en función del porcentaje de Transmitancia a causa de 1 por
100 del valor absoluto en el porcentaje de Transmitancia observado.