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Universidad Nacional Jorge Basadre Grohmann – Facultad de Ciencias – Laboratorio de Bioquímica

Investigación - Fermentación
Objetivos de laboratorio

Después de completar este tema de laboratorio, debería poder:


1. Describir la fermentación alcohólica, nombrando reactivos y productos.
2. Proponer hipótesis y hacer predicciones basadas en ellas.
3. Diseñar y ejecutar un experimento que pruebe los factores que influyen en la fermentación.
4. Practicar la comunicación científica analizando e interpretando los resultados experimentales.

Introducción
Este tema de laboratorio investiga la fermentación, un proceso celular que transfiere la energía en enlaces de
glucosa a enlaces en trifosfato de adenosina (ATP). La energía en ATP se puede usar para realizar trabajos
celulares. La fermentación es un proceso anaeróbico (sin oxígeno); la respiración celular es aeróbica
(utilizando oxígeno). Todos los organismos vivos, incluidas bacterias, protistas, plantas, y animales, producen
ATP en fermentación o respiración celular y luego usan ATP en su metabolismo.

La respiración celular es una secuencia de tres etapas metabólicas: la glucólisis en el citoplasma y el ciclo de
Krebs y la cadena de transporte de electrones en las mitocondrias (Figura 1). La fermentación involucra la
glucólisis, pero no involucra el ciclo de Krebs y la cadena de transporte de electrones, que se inhiben a bajos
niveles de oxígeno. Dos tipos comunes de fermentación son la fermentación alcohólica y la fermentación del
ácido láctico. La fermentación alcohólica comienza con la glucólisis, una serie de reacciones que rompen la
glucosa en dos moléculas de piruvato con un rendimiento neto de 2 ATP y 2 moléculas de NADH. En
ambientes anaeróbicos, en dos pasos, el piruvato (una molécula de 3 carbonos) se convierte en alcohol etílico
(etanol, una molécula de 2 carbonos) y CO2. En este proceso, las 2 moléculas de NADH se oxidan,
reponiendo el NAD+ utilizado en la glucólisis (Figura 1).

Figura 1. Etapas de la respiración y fermentación celular.

La respiración celular consiste en la glucólisis, el ciclo de Krebs y la cadena de transporte de electrones. La


glucólisis es también una etapa en la fermentación. En este ejercicio de laboratorio, investigará la fermentación
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alcohólica en una levadura (un hongo unicelular), Saccharomyces cerevisiae o levadura de panadería. Cuando
el oxígeno es bajo, algunos hongos, incluida la levadura y la mayoría de las plantas, pasan de la respiración
celular a la fermentación alcohólica. En este experimento de laboratorio, el dióxido de carbono (CO 2)
producido puede usarse como una indicación de la tasa relativa de fermentación que tiene lugar. La velocidad
de fermentación, una serie de reacciones enzimáticas, puede verse afectada por varios factores, por ejemplo,
concentración de levadura, concentración de glucosa o temperatura. En este ejercicio, investigará los efectos de
la concentración de levadura. Luego, su equipo diseñará y llevará a cabo una investigación independiente
basada en el examen de otras variables independientes (realizadas durante las semanas 10-12).

Fermentación alcohólica

Materiales
- Vernier Laq Quest
- Porta pipeta
- Vernier Sensor de presión de gas
- 3 Pipetas de vidrio de 5 ml o 10 ml
- 4 tubos de ensayo
- Aceite vegetal en botella cuentagotas
- Montaje de tapón de goma
- Marcador permanente
- Solución de glucosa al 5%
- Solución de levadura al 10 %
- Agua destilada

Hipótesis
Hipótesis sobre el efecto de diferentes concentraciones de levadura sobre la tasa de fermentación.

Predicción
Predecir los resultados del experimento en función de su hipótesis (si/entonces).

Aceite vegetal

levadura/glucosa

Figure 2
Procedimiento

1. Obtenga cuatro tubos de ensayo y etiquételos 1-4.


2. Agregue 5 ml de la solución de glucosa en los tubos de ensayo 1, 3 y 4.
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3. Agregue 5 ml de agua DI al tubo de ensayo 1, mezcle el agua y la solución de glucosa con cuidado,
pipeteando las soluciones dentro y fuera de la pipeta, luego coloque suficiente aceite vegetal para cubrir
completamente la superficie de la solución de fermentación como se muestra en la Figura 2. Tenga cuidado de
no obtener aceite en la pared interior del tubo de ensayo.
4. Incube el tubo de ensayo durante 10 minutos a temperatura ambiente.
5. Cuando la incubación haya finalizado, inserte el tapón de goma de un orificio en el tubo de ensayo. Nota:
Gire firmemente el tope para un ajuste hermético.
6. Conecte el Vernier LabQuest.
7. Estamos utilizando un sensor de gas, está configurado en kPa, registrará 900s, lo que equivale a 15 minutos.
Si no está leyendo kPa, vaya al botón del sensor y cambie las unidades de medida.
8. En la parte inferior izquierda hay un botón de media luna, este es el inicio y la parada. Cuando presionas la
media luna, la colección comenzará. Se mostrará como ejecución 1. Después de que se detenga la recopilación
de datos, haga clic en el gráfico para ver su gráfico.
9. En el análisis, haga clic en el ajuste de la curva. En Elegir ajuste, elija vista lineal. Registre la ecuación del
gráfico en la forma de y = mx + b, donde m es la pendiente de la tasa de fermentación. Escribe la pendiente en
tu mesa.
10. Mientras recopila sus datos para el tubo de ensayo 1, prepare el tubo de ensayo 2. Agite suavemente la
suspensión de levadura para mezclar la levadura que se deposita en el fondo. Con una pipeta, transfiere 5 ml de
levadura al tubo de ensayo 2. Sé amable con la levadura: ¡son organismos vivos! Agregue 5 ml de agua DI a la
levadura en el tubo de ensayo 2. Agregue aceite. Permita que el tubo se incube a temperatura ambiente durante
aproximadamente 10 minutos.
11. Repita los pasos de recopilación de datos para el tubo de ensayo 2.
12. Mientras recopila sus datos para el tubo de ensayo 2, prepare el tubo de ensayo 3. Agite suavemente la
suspensión de levadura para mezclar la levadura que se deposita en el fondo. Con una pipeta, transfiera 2 mL
de levadura y 3 mL de agua DI al tubo de ensayo 3. Agregue aceite. Deje que el tubo se incube a temperatura
ambiente durante aproximadamente 10 minutos.
13. Repita los pasos de recopilación de datos para el tubo de ensayo 3.
14. Mientras recopila sus datos para el tubo de ensayo 3, prepare el tubo de ensayo 4. Agite suavemente la
suspensión de levadura para mezclar la levadura que se deposita en el fondo. Con una pipeta, transfiera 5 ml de
levadura al tubo de ensayo 4. Agregue aceite. Deje que el tubo se incube a temperatura ambiente durante
aproximadamente 10 minutos.
15. Repita los pasos de recopilación de datos para el tubo de ensayo 4.

Tabla 1. Tasas de fermentación (kPa/s)

Solución de fermentación
Tubos H2O Solo Glucosa Solo Levadura Levadura/Glucosa Levadura/Glucosa
2a5 5a5
1 5 ml 5 ml 0 ml 0 ml 0 ml
2 5 ml 0 ml 5 ml 0 ml 0 ml
3 3 ml 0 ml 0 ml 2 ml + 5 ml 0 ml
4 0 ml 0 ml 0 ml 0 ml 5 ml + 5 ml

Incubar a temperatura ambiente por 10 minutos

Propuesta de investigación

Como comentamos al comienzo del trimestre, se le pedirá que escriba un informe de investigación científica
sobre una investigación independiente realizada durante las semanas 10-12. Su investigación independiente se
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basará en el laboratorio de fermentación realizado en la semana 9. El propósito de ir a la biblioteca y aprender
técnicas efectivas de búsqueda de literatura fue ayudarlo en el proceso de desarrollo de un experimento bien
diseñado. El objetivo de su grupo es diseñar un experimento simple para investigar algún factor que afecte la
fermentación alcohólica (basado en el experimento de fermentación realizado hoy).

A continuación, hay una lista de preguntas que lo ayudarán a preparar la propuesta.

Como grupo, entregará una propuesta escrita a máquina. Asegúrese de incluir lo siguiente:

1. Pregunta que se hace.


2. Explicación del razonamiento detrás de su elección de pregunta. Por ejemplo, si eliges investigar el almidón
como sustrato, deberías poder explicar que la levadura debe digerir primero el almidón antes que la glucosa
puede usarse en la fermentación alcohólica y el impacto que esto podría tener en el experimento.
3. Hipótesis
4. Predicción
5. Lista completa de materiales
6. Protocolo detallado

Posibles preguntas (¡puedes inventar el tuyo!):

1. ¿Serían otros sustratos tan efectivos como la glucosa en la fermentación alcohólica? Por ejemplo: Sacarosa
(azúcar de mesa), Almidón, Sacarina, Fructosa, Piruvato.
2. ¿Qué pH es óptimo para la fermentación alcohólica?
3. El fluoruro de sodio, comúnmente utilizado para prevenir la caries dental, inhibe una enzima en la glucólisis.
¿A qué concentración es más efectiva?
4. ¿La adición de MgSO4 mejoraría la glucólisis? MgSO4 proporciona Mg++, un cofactor necesario para activar
alguna enzima en la glucólisis.
5. ¿Una alta concentración de glucosa inhibe la fermentación?
6. La sal se usa a menudo como un conservante de alimentos para prevenir el crecimiento bacteriano y fúngico.
Pero la sal también es importante para mejorar el sabor del pan cuando se agrega en pequeñas cantidades. ¿A
qué concentración comienza la sal a inhibir la fermentación de la levadura?

Tendrás tres períodos de laboratorio para realizar tu experimento. Estarás presente y usa los tres períodos de
laboratorio, así que tenlo en cuenta al diseñar tu experimento, número de repeticiones, etc.