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MINISTERIO DE EDUCACIÓN

INSTITUTO DE CIENCIAS APLICADAS

EXTRACCIÓN DE ADN

BIOLOGÍA 12° CIENCIAS

HARITH BRAVO
JENNIFFER GRANDA
MICHELLE MANZELLA
PAOLA MONTENEGRO

Prof. JHONATAN EYSSERIC

MIERCOLES 18 DE JULIO DE 2018


Introducción

En la década de los cincuenta, el campo de la biología fue convulsionado por el


desarrollo del modelo de la estructura del ADN. James Watson y Francis Crick en
1953 demostraron que consiste en una doble hélice formada por dos cadenas.

El ADN es un ácido nucleico formado por nucleótidos. Cada nucleótido consta de


tres elementos: un azúcar: desoxirribosa en este caso (en el caso de ARN o ácido
ribonucleico, el azúcar que lo forma es una ribosa), un grupo fosfato y una base
nitrogenada. Si la molécula tiene sólo el azúcar unido a la base nitrogenada
entonces se denomina nucleósido.

El ADN no existe como molécula libre dentro de las células, solo se puede encontrar
en los cromosomas dentro del núcleo (en el caso de los eucariotas); asociado a
numerosas proteínas (histonas por ejemplo) y ARN. Debido a lo anterior, la
extracción de ADN es una técnica fundamental (y un paso esencial) para la mayoría
de las técnicas y análisis en Biología Molecular.

Dado lo expuesto anteriormente, para extraer los ácidos nucleicos del material
biológico es preciso provocar una lisis celular, inactivar las nucleasas celulares y
separar los ácidos nucleicos de los restos de células. El procedimiento de lisis
idóneo suele consistir en un equilibrio de técnicas y ha de ser suficientemente fuerte
para romper el material inicial complejo (un tejido, por ejemplo), pero
suficientemente suave para preservar el ácido nucleico diana.

Entre los procedimientos usuales de lisis figuran rotura mecánica (trituración, lisis
hipotónica); tratamiento químico (detergentes) y digestión enzimática (Proteinasa K).
En nuestro caso la lisis de la membrana celular la produciremos utilizando un
detergente convencional (Jabón líquido) y la lisis de la pared celular la produciremos
utilizando un método mecánico (licuar).

Una vez que se haya provocado la lisis celular y la inactivación de nucleasas, el


ADN es extraído mediante su precipitación en alcohol etílico o alcohol isopropílico.
El ADN normalmente es soluble en agua y etanol, por lo cual se utiliza NaCl para
causar la precipitación del ADN entre la interfase alcohol-solución acuosa. EL Na+
del NaCl permite a los ácidos nucleicos precipitar en alcohol dado que al ser un
catión este escuda las cargas negativas del ADN (grupos fosfatos), disminuyendo
su solubilidad en alcohol frío, y ocasionando que las fibras de ADN se acerquen
entre si y formen fibras blancas visibles a simple vista.

La extracción de ADN (ácido desoxirribonucleico) es un proceso vital con muchas


aplicaciones científicas. Sus usos incluyen secuenciación del ADN, la detección de
los virus y las bacterias, y la investigación de enfermedades y trastornos con base
genética. En el campo de la ciencia forense, es utilizado para la identificación de los
muertos y los vivos, así como el análisis de la escena de crimen.

A pesar de sus resultados sofisticados, la extracción de ADN es en realidad muy


simple, y las técnicas de extracción básicas funcionan igual de bien en un laboratorio
de investigación o en casa. La extracción de ADN comienza con la obtención de
una muestra de ADN. Dado que todos los organismos vivos contienen ADN, las
opciones disponibles para la muestra son prácticamente infinitas, y la elección por
lo general se relaciona directamente con el tema del objeto de estudio.
Objetivos
 El objetivo de este experimento es visualizar el ADN sin ayuda del
microscopio
 Extraer el ADN mediante un procedimiento simple.
 Comprender la importancia de cada uno de los reactivos empleados para la
obtención de ADN.

Materiales:

 Semillas de lentejas
 Cebolla( fresca)
 Espinaca(fresca)
 Ablandador de carne
 Alcohol al 95%(frío)
 Una licuadora
 Un colador
 Papel filtro o filtro de café
 Jabón vel liquido
 Sal (NaCl)
Procedimiento
1. Lo primero que hicimos fue preparar 3 vasos químicos donde vertimos 50ml
de agua y un puñado de NaCl.
2. En otros 3 vasos químicos colocamos media taza de lentejas, espinaca y
cebolla respectivamente.
3. En cada vaso químico vertimos la solución de NaCl y la dejamos reposar por
5 minutos.
4. Posterior a esto procesamos por separado cada solución en la licuadora por
20 segundos.
5. Utilizando el colador filtramos las soluciones en vasos químicos distintos.
6. Agregamos 2 cucharadas de detergente líquido y revolvimos suavemente sin
formar espuma.
7. Dejamos reposar las soluciones por 10 minutos.
8. Agregamos el ablandador de carne en cada solución y revolvimos
suavemente con ayuda del policial.
9. Trasvasamos las soluciones en tubos de ensayos.
10. Inmediatamente vertimos por las paredes de los tubos de ensayo el alcohol
frío.
11. El ADN precipito y pudimos retirarlo con ayuda del policial.

Observaciones:
Al entrar al laboratorio nos percatamos de que estaba sucio así que lo primero que
hicimos fue limpiar el área de trabajo antes de comenzar.

Colocamos en una probeta más de 50ml de agua para posteriormente colocarla en


un vaso químico y colocar un puñado de sal para diluirlo con un policial.

Mientras tanto vertimos lentejas en un vaso químico hasta que estuviera un poco
más de la mitad. También vertimos hojas de espinaca en otro vaso químico todo
esto mientras diluíamos 3 vasos químicos con NaCl.

Una vez teníamos la solución #1 y #2 (Lentejas y espinaca respectivamente) en


vasos químicos empezamos a pelar la cebolla que nos causó irritación en los ojos.
El vaso químico con sal diluida lo vertimos en la solución #1 y revolvemos para
posteriormente ser preparada en la licuadora.

El segundo vaso químico con NaCl diluido lo vertimos en la solución#2 y revolvemos


para procesarlo en la licuadora.

El último vaso químico con NaCl lo vertimos en la solución #3 de cebolla y


revolvemos para también procesarlo en la licuadora, Dejamos reposar las mientras
durante 5 minutos y luego las preparamos en la licuadora durante 20 segundos.

Al terminar este proceso procedimos a filtrarlas en un vaso químico con el colador,


en la solución #1 notamos que al terminarla de procesar tenía una textura espesa
color marrón.

Solución #1 Lentejas siendo licuadas

Al licuar la solución #2 notamos que tenía una textura viscosa y gelatinosa color
verde por su abundante cantidad de cloroplasto.
Solución #2 Espinacas siendo licuadas

Al licuar la solución #3 esta tenía un aspecto totalmente líquido color rosado.

Solución #3 Cebolla siendo licuada


Notamos que la solución #1 fue muy la más espesa por su enorme cantidad de
detritos

Residuos de lentejas

Agregamos el detergente líquido, revolvimos suavemente por 5 minutos evitando


formar espuma, dejamos reposar las soluciones por 10 minutos y luego agregamos
el ablandador de carne

Solución #2 cuando agregamos ablandador de carne


Trasvasamos las soluciones a tubos de ensayo donde verteremos el alcohol frío por
las paredes.

Solución #2 mientras vertíamos el alcohol

Finalmente dejamos reposar las muestras.

Resultados:
Una vez que dejamos reposar los tubos de ensayo con el alcohol frío obtuvimos los
siguientes resultados:

ADN precipitado
Residuos de cloroplasto
Al poco tiempo de haber agregado el alcohol a las muestras a las cuales se les
había añadido ablandador de carne, comenzaron a precipitar las fibras de ADN. El
ADN se evidencia en forma de fibras mucilaginosas blanquecinas que aparecen
flotando en el etanol. Inicialmente, cuando comenzaba la precipitación, se podría
observar una sustancia blanca casi transparente que se “desprendía” del líquido de
fondo.

En la imagen presentada
a la derecha podemos
apreciar con mayor
detenimiento el ADN
precipitado en el alcohol
frío.
Discusión

1. ¿Por qué se usó sal al momento de hacer la mezcla inicial?


R. El sodio es un ion cargado positivamente. En una solución de cloruro de
sodio, la molécula de cloruro de sodio se separa en iones de sodio e iones
de cloro. El ADN, por otro lado, tiene altas cargas negativas debido a sus
grupos fosfato. La carga altamente negativa de la molécula de ADN es
neutralizada por los iones de sodio positivos en la solución. Esta
neutralización de cargas negativas de ADN permite que se precipite en
alcohol. Sin la sal, el ADN permanece cargado negativamente (polar) y
estará en la parte acuosa de la solución (soluble en alcohol).

Interacción del sodio con el DNA

2. ¿Qué se quería lograr al usar la licuadora?


R. Permite que se rompan las paredes de las células, las membranas y
cubiertas ya la molécula de ADN se encuentra dentro de ellas, de esta forma
podemos separar la molécula y el jabón líquido actúa sobre los lípidos y
proteínas de forma que el ADN quede aislado y pueda mantenerse en total
integridad.
3. ¿Cuál es la función del ablandador de carne o jugo de piña?
R. El ablandador de carne contiene enzimas llamadas papaína (sacada del
jugo de papaya). Su función es separar a las proteínas del ADN, es decir,
purificar la muestra. Estas enzimas separan a las proteínas en componentes
más sencillos como polipéptidos y aminoácidos individuales, rompiendo los
enlaces peptídicos de las proteínas asociadas con el ADN presentes en la
muestra. Es decir, tienen propiedades peptolíticas.

4. ¿Cuál es la función del alcohol?


R. El etanol proporciona el medio en el cual el ADN será insoluble y formará
una masa mucilaginosa blanca observable a simple vista. Se utiliza un
alcohol al 95% para evitar en lo posible moléculas de agua que disuelvan las
moléculas de ADN (protegida con los iones sodio) y frío, para bajar aún más
la solubilidad.

5. ¿En cuál de las tres muestras se observó en mayor cantidad el


ADN?
R. En la solución #1 de lentejas ya que la cantidad de ADN va determinada
principalmente de la cantidad de material que se trabaja.
Conclusión

 A través de este laboratorio pudimos extraer el ADN de muestras de cebolla


mediante la aplicación cuidadosa de una serie de pasos estructurados. Cada
uno de los pasos tiene su propósito y al seguirlos obtuvimos al final una masa
mucilaginosa blanca flotando en la interfase etanol-filtrado, la cual representa
las fibras de ADN extraídas. Los resultados obtenidos evidencian la
efectividad del procedimiento realizado.
 Cada uno de los reactivos tiene una importancia especial en el proceso de
extracción del ADN. Ya sea de producir la lisis celular, emulsificar los
fosfolípidos, inactivar las nucleasas, separar el ADN de las histonas, permitir
la precipitación en alcohol, proveer el medio para la precipitación; cada
sustancia cumple con una tarea en el proceso mencionado. Mediante este
laboratorio y la elaboración de este informe, (con su consecuente
investigación) logramos comprender cuales son las funciones de cada uno
de los reactivos utilizados en este experimento.
 En dicho experimento realizado aprendimos como lograr ver la estructura de
ADN sin un microscopio con materiales del hogar, en el que fue interesante
que pudimos lograr ver la estructura junto con diversos colores y me causa
más dudas por averiguar de que si así luce el DNA en vegetales como luciría
hacer ese experimento con animales.
 El método que se trabajó para la extracción del ADN es útil para momentos
en la cual no se posee un microscopio, ya que nos deja ver el material
genético sin necesidad de un microscopio.