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PREINFORME BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

GRUPO 1-CAP-A
13/05/2019
MARTYN RONALDO PEÑA NOSSA

OBJETIVOS:

Extraer ADN a partir de tejidos vegetales y animales


Identificar de forma cualitativa el ADN extraído

MONTAJE EXPERIMENTAL:
MATERIALES: vaso de precipitados de 50 ml, tubo de ensayo tapa rosca,
champú, alcohol, pipeta pasteur, tubo de ensayo, solución de difenilamina,
baño maria, mortero, 50 ml de NaCl al 5%, gotas de SDS

PROCEDIMIENTO:

Extracción de ADN a partir de células animales

Colocar unos cinco cc de agua destilada en un vaso de plástico limpio, y tomar el


agua pero dejarla en la boca y moviéndola como haciendo buches para recoger la
mayor cantidad posible de células. Verter el agua contenida en su boca en un vaso
de precipitados de 50 ml, y luego en un tubo de ensayo tapa rosca. Agregar unas
6 gotas de champú, tapar el tubo. Mezclar por inversión varias veces y colocarlo
en la gradilla dejándolo reposar 15 minutos. Después de éste tiempo agregar 4 ml
de albohol isopropílico por las paredes del tubo lentamente y deje reposar.
Observar. Después de este tiempo con un agitador de vidrio realizar un
movimiento lento vertical en la superficie del tubo y observar. Con una pipeta
Pasteur y con cuidado retirar el ADN y colocarlo en un tubo de ensayo limpio.
Agregar 2 ml de solución de difenilamina e introducir el tubo en baño maría con
agua hirviendo hasta que cambie de coloración. Sacar el tubo y enfriarlo en agua
con hielo. Observar. ¿Por qué se produce el cambio de color en presencia del
reactivo con el ADN.

2. Extracción de ADN a partir de células vegetales

Pelar y cortar el material vegetal en pedazos pequeños y colocarlo en el mortero. Macerar


con 50 ml de NaCl al 5% (mantenido a una temperatura de 40oC) hasta que se forme una
pasta. Filtrar con gasa y recoger el filtrado en un vaso de precipitados de 100 ml. Vertir
en un tubo de ensayo 3 ml del filtrado y agregar 4 ml de alcohol isopropilico. Dejar reposar
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por 15 minutos y registrar los resultados. En otro tubo tomar otros 3 ml de filtrado y añadir
1 ml de champú o unas gotas de SDS . Mezclar lentamente por inversión. Dejarlo reposar
por 15 minutos. Adicionar lentamente en cada caso después por las paredes del tubo de
ensayo 4 ml de alcohol isopropílico para precipitar el ADN. Repetir el procedimiento que
realizó con el material animal y la varilla de vidrio con mucho cuidado. Observar y registrar
los resultados. De cada tubo retirar con pipeta Pasteur las hebras de ADN y colocarlas en
un tubo limpio. Agregar 3 ml de reactivo de di fenilamina, y seguir los mismos pasos que
con el material animal para el reconocimiento del ADN obtenido