UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA DE LA SELVA

FACULTAD DE RECURSOS NATURALES RENOVABLES DEPARTAMENTO ACADÉMICO DE CIENCIAS DE LOS RECURSOS NATURALES RENOVABLES

AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN DE FUNGI Y BACTERIAS EN ABONO ORGÁNICO BOCASHI

Tesis Para optar el título de:

INGENIERO EN RECURSOS NATURALES RENOVABLES MENCIÓN CONSERVACION DE SUELOS Y AGUA

MARIA GRIMANEZA RENGIFO ARVILDO
PROMOCIÓN 2008 - II Tingo María ± Perú 2010

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La investigación se desarrollo en el distrito de Daniel Alomía Robles, en el Sector Pendencia para la elaboración y toma de muestras del abono orgánico bocashi, para aislar e identificar la población fúngica y bacteriana se ejecuto en el Laboratorio de Microbiología General, de la Universidad Nacional Agraria de la Selva (UNAS); ubicado en el Distrito de Rupa Rupa, Provincia de Leoncio Prado, Departamento de Huánuco, cuyas coordenadas geográficas son las siguientes: Latitud sur 09° 09¶ 00¶¶ y Longitud Oeste: 75° 59¶ 00¶¶.con una precipitación promedio anual de 3 300 mm. Altitud: 660 m.s.n.m. Humedad relativa media de 84% y Temperatura media anual de 25 ºC. Para asilar e identificar los fungís y bacterias en primer lugar; se preparo el abono orgánico bocashi, al mes y medio se, procedió a extraer la muestra en frascos de vidrio esterilizados, para aislar fungís y bacterias en el laboratorio de microbiología general de la UNAS. Para el aislamiento de fungí y bacterias se uso 10 gr de la muestra del bocashi, Realizando diluciones, de la ultima fungís medio rosa de dilución sembrar para bacterias medio M77 y para

bengala+ Ceftrioxona y la identificación para bacterias por diferenciación bioquímica en el medio M77 y fungís con la técnica del microcultivo. Se logro aislar e identificar 04 géneros de fungís ( Trichoderma sp, Aspergillus sp, Fusarium sp, Rhizopus sp), de los cuales los dos últimos son géneros que presentan capacidad patogénica capaces de afectar a los vegetales. Así mismo se logro aislar e identificar
P l b cl v c hi, mic

02 géneros de bacterias gran negativas
i m l l , b c i ,f í .

(Pseudomonas sp, Rhizobium sp).

INDI E DE

DROS

Cuadro1. Fungís y Bacterias ................................ ................................ ............ 31

INDI E DE IGURAS

Figura 1. Muestra aislada en nivel de cultivo de Trichoderma sp ..................... 32 Figura 2. Muestra identificada de Trichoderma sp................................ ........... 32 Figura 3. Muestra aislada en nivel de cultivo de Aspergillus sp ....................... 34 Figura 4. Muestra identificada del Aspergillus sp ................................ ............. 34 Figura 5. Muestra aislada en nivel de cultivo de Fusarium sp .......................... 36 Figura 6. Muestra identificada de Fusarium ................................ ..................... 36 Figura 7. Muestra aislada en nivel de cultivo de Rhizopus sp .......................... 38 Figura 8. Muestra identificada de Rhizopus ................................ ..................... 38 Figura 9. Muestra Aislada en nivel de cultivo de Pseudomona sp ................... 39 Figura 11. Muestra Aislada en nivel de cultivo de Rhizobium sp ..................... 41 Figura 12. Muestra identificada de Rhizobium ................................ ................. 41 Figura 12. Enumeración de microorganismos de abono orgánico bocashi ...... 42

Dr. por su valioso apoyo en el laboratorio de fitopatología. por su valioso apoyo en el laboratorio de microbiología general y contribuir en el trabajo de investigación. por colaboración en estudio.AGRADE I IENTOS . Lorena Herrera . por su valioso apoyo como asesor del trabajo de investigación. Enzo Otarola .Sc Cesar S. . . . Jimmy Villacorta Jhony Chjutalli.Al Bach. Nelino Florida Rofner . Michel Abendaño Rubio. Lissette.A la Universidad Nacional Agraria de la Selva.Al Ing.Btcfnlgo. por haberme forjado como profesional. Richard Sias Rodríguez. . . López López por su valiosa colaboración en el trabajo de investigación. Marlon Mas. . Guillermo Luna.Al Tecn. su valiosa . por sus consejos y enseñanzas impartidas. Pier Rengifo.Al Mcblg. Edwin.A mis profesores de la Facultad de Recursos Naturales Renovables. Ángel Aguero. Carlos Tello. Patricia Reategui. . Maribeth Soto . Daniel Ríos.A todas aquellas personas que de una a otra manera colaboraron en la realización del presente trabajo de investigación.Al Bach.Al Señor Manuel Linares Gonzales por su apoyo brindado en el laboratorio de suelos .

de mi carrera A mis padres. por su confianza. Alexandra Xiomara. con el cariño de siempre. con el amor y cariño de siempre. . Linder y Yolanda. comprensión y cariño que siempre me han demostrado.DEDI ATORIA A DIOS. A mis hermanos: Carmen. por guiarme e iluminarme cada instante de mi vida en la culminación profesional. Saúl y Alejandro que en paz descanse. Carlos y Elías. . Jesús Alejandro. A mis sobrinos: Ángela Alexandra. José Manuel. mi eterno agradecimiento por los esfuerzos y sacrificios y por su gran apoyo incondicional moral y abnegado que hicieron posible mi formación profesional.

..........................3 División Zygomycota (Zigomicetes) .......... ............ .......... ....... 12 2........... General............. .................... 16 2..............................7................................................. 7 2........INDI E I...2 División Chytridiomycota (Quítridos) ...5....................... 6 2...........3............. Importancia de los microorganismos del suelo .................... ..2................. 12 2.............. Microorganismos del suelo ..................... ..6 Enumeración de Microorganismos: el número más probable (NMP) ............ Microorganismos del suelo: Bacterias ..2.......5..................4.5.......3....... 16 ........ . .......1........... 10 2..... .4.....1................................ Población microbiana del suelo . .............. Pseudomonas: ................... 13 2... ........................................ 5 2.... 9 2. ...... 2 1......................5 División Deuteromycota (Hongos imperfectos) ........... Clasificación de hongos............. ............................ 10 2................5 División Basidiomycota (Basidiomicetes) ..............1........................................... 5 2............. Los abonos orgánicos fermentados .................... Objetivos ....4..... Microorganismos del suelo: Hongos ..........4.......4............1.......4.....1.......... .. .................... . 3 2................5............................. Bacterias autóctonas (actinomicetos) ......... Específicos ....1.......... 11 2....................5... 4 2....................2.......... 12 2... . ............ Origen de los microorganismos eficientes .................... .. Abono orgánico bocashi .. .... 6 2........ 14 2...3 Bacterias fijadoras de nitrógeno ............1...3.....4 División Ascomycota (Ascomicetes) ..... 3 2....4........... ....................1........ 13 2........ ........4........... 12 2.....3......4............. 2 II..............................4...........................7 Bacterias encontradas en el abono orgánico bocashi ................... ..................5..4... ..... 15 2............. ...... Tipos de bacterias encontradas en el suelo .. ........ ...................4.....4.........4.................... 1 1......................1 Hongos como agente de descomposición .......... ............................................5 Hongos totales por dilución en placas .. 8 2..4 .. 2 1...........1 División Oomycota (Oomicetes) ...2... ............ .. REVISIÓN DE LITERATURA ......................4. INTRODUCCIÓN.3.............................4..............4. 14 2...........5........................

.....1. 45 REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS .....4........2..... . ........... 26 Identificación de bacterias y fungís .. ...... . ........................ ........... MATERIALES Y MÉTODOS .. VI.............. ........ 18 2......... 4....1................... .....1 Rhizopus ............................2................... 3...3...........8........1.......................................................... 39 Enumeración de Microorganismos ..........ANEXOS ................................... 24 3................ ........................3............3.......... ....................8... 3.......3.................. ...............................1..2...................................4 Fusarium ... 17 2................. 3.... . Materiales y equipos..................... 19 2.. 21 2........................... ...........................1.................................3.................................. ..........3 Trichoderma ................ 3...3.. ........... 25 3... 31 4............. VII.................3.................. .................3................ ............... . 24 Insumos y reactivos ................................ ..............8.......... 22 III.....2.................3......................... .................. Características climatológicos .. .................... ......... Identificación de fungís y bacterias en abono orgánico bocashi ...........................................1...........1......................................3....................................... ........................................................................ .........8 Fungís encontrados en el abono orgánico bocashi . CONCLUSIONES............ ..................................... 25 Preparación del bocashi .......................................1.......... ...5.................................. .........................................................................3.......3.................................................3............ 25 3............... 24 3.............. ..2.3. .... Aislamiento e identificación .. 31 Identificación de fungís . 25 Aislamiento de fungí y bacterias ............... ..................3.........................................7.......... 32 Identificación de bacterias ....... 42 4............................... ................................... ........ ........... Metodología .................... ...... .... Lugar de ejecución ................. .... 24 3.... 3...... 25 Equipos ... V............ IV.........................3... 18 2..................... 50 ...........1...3.. 25 Materiales ..1. .2 Aspergillus ........... ...... Insumos ..................... ............... 44 RECOMENDACIONES.....................1.........2 Rhizobium .... 4............8......2......... .............................. 3... .... 24 3.... .............................................. ........ 46 VIII............ . .. 27 RESULTADOS Y DISCUSIÓN ............................3....... Equipos -materiales de campo y laboratorio ... Preparación del Bocashi .... 24 3...4..... 25 3...3.............

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INTRODUCCI N En la agricultura el uso de insumos químicos (abonos y pesticidas). . El principal objetivo del uso del bocashi es mejorar las características físicas (porosidad. resultando todo esto en la obtención de una producción agrícola de bajo costo.1 I. En nuestra provincia y en el resto del país actualmente se viene utilizando el bocashi (término de origen japonés que fue implementada por primera vez hace 30 años en Japón). químicas y biológicas y en muchos casos la contaminación del recurso suelo afecta principalmente al componente biológico. más saludable para el productor y el consumidor y que no afecta al medio ambiente. mayor capacidad de retener el agua y reducción de la erosión) y propiedades químicas (menor pérdida y mayor disponibilidad de nutrientes) y biológicas del suelo (mejor equilibrio biológico y disminución de plagas y enfermedades). obtener los resultados esperados en la producción de alimento de calidad. económico y de fácil preparación . generando al suelo la perdida de su capacidad productiva causando alteraciones en sus propiedades físicas. el cual es la mezcla de la materia orgánica fermentada. no permitió.

bacterias y actinomicetos fijadores de nitrógeno y otros) que permiten la disponibilidad de nutrientes para el suelo .1. .2 Además de proporcionar nutrientes. . . General . el bo cashi contribuye a mejorar el suelo bioaumentando y activando microorganismos que actúan promoviendo la fermentación de la biomasa proporcionando rápidamente condiciones favorables para la actividad de otros microorganismos benéficos para el suelo y las plantas (hongos que forman micorrizas. E ecífic . etc.Determinar el numero de microorganismos presentes e n el abono orgánico bocashi.Aislar fungís y bacterias en abono orgánico bocashi.1. Obj iv 1. .1. con ello se contrasto la hipótesis que en el abono orgánico tipo bocashi existen bacterias y fungís benéficos.Identificar fungís y bacterias en abono orgánico bocash i. 1. En tal sentido se aíslo e identifico los microorganismos presentes en el abono orgánico bocashi. además de algunos microorganismos con capacidad patogénica 1.Aislar e Identificar bacterias y fungí presentes en el abono orgánico bocashi en el distrito de Daniel Alomía Robles. de esa manera se resolvió la interrogante sobre que tipo de fungí y bacterias están presentes en este abono orgánico.1.

2006) Bondades del Bocashi . del que deriva su nombre ³bo-ca-shi´. que significa fermentación.Causa menos daño que el uso directo de otros abonos. mejora las condiciones físicas y químicas. REVISI N DE ITERATURA 2..1. torta de soya. Tradicionalmente. de económico y fácil preparación. para la preparación del Bocashi.Es un abono de fácil preparación.Contribuye a mejorar el suelo activando microorganismos . previene enfermedades del suelo y lo suple de nutrientes para el desarrollo de los cult ivos (GIL et al. Japonés . Se trata de un abono orgánico fermentado parcialmente estable. . El cual en la antigüedad los japoneses utilizaban sus propios excrementos para elaborarlo y abonar sus arrozales. los agricultores japoneses usan materia orgánica como semolina de arroz. harina de pescado y suelo de los bosques como inoculante de microorganismos. Estos suelos contienen varios microorganismos benéficos que a celeran la preparación del abono. El Bo cashi ha sido utilizado por los agricultores japoneses como un mejorador del suelo que aumenta la diversidad microbiana. Ab no orgánico bocashi Es un biofertilizante de origen.3 II. .

Representa una alternativa más económica que el uso de otros Abono orgánico fermentado tipo bocashi La palabra bocashi es del idioma japonés y para el caso de la elaboración de los abonos orgánicos fermentados. y que producen un material parcialmente estable de lenta descomposición en condiciones favorables y que son capaces de fertilizar a las plantas y al mismo tiempo nutrir la tierra (RESTREPO 1996). mejorando la retención de agua. significa cocer al vapor los materiales del abono. . con condiciones controladas. 2.Puede ser hecho fácilmente por cualquier agricultor.Aumenta el contenido de la materia orgánica en el suelo. que existen en los propios residuos. en la cantidad necesaria y utiliza el material que está disponible en la zona. os abonos orgánicos fermentados La elaboración de los abonos orgánicos fermentados se puede entender como un proceso de semi-descomposición aeróbica (con presencia de oxígeno) de residuos orgánicos por medio de poblaciones de microorganismos.4 .2. aprovechando el calor que se genera con la fermentación aeróbica de los mismos. .Constituye una fuente de nutrientes para las plantas . . (RESTREPO 1996).

D.2000). bacterias ácido lácticas y levaduras en concentraciones mayores a 100 unidades formadores de colonias por mililitro de solución que se encuentra en estado de latencia y se conocen como EM -1 2. . competencia y antagonismo con patógenos. profesor de Horticultura de la universidad de Ryukyus en Okinawa. Ph. Origen de los microorganismos eficientes La tecnología en microorganismos eficaces fue desarrollada en Japón. . carbón.5 2. por los años ochenta por el Doctor Teruo Higa.2000) La base tecnológica de EM es la mezcla de diferentes tipos de microorganismos todo ellos benéficos que posen propiedades de fermentación. nitrógeno.3. Elementos esenciales para el crecimiento. tales como oxígeno. icroorganismos del suelo Los microorganismos del suelo juegan un papel muy importa nte en el manteniendo de la fertilidad de los suelos mineralizando.4 . azufre y . así como para lograr productos de alta calidad con bajo costo (MASAKI et al. todo lo cual ayuda a mantener un equil ibrio natural entre los microorganismos que conviven en el entorno. producción de sustancias bioactivas. trayendo efectos positivos sobre la salud y bienestar del ecosistema (MASAKI et al. Japón como una opción viable y sostenible para la producción agrícol a y animal dentro de los parámetros orgánicos y biológicos que procuran un manejo razonable de los recursos para no afectar al medio ambiente. Los microorganismos eficaces son una mezcla de bacterias fotosintéticas.

que pueden llegar entre 10 6-107 individuos por gramo de suelo representados por mas de 10 6 especies diferentes (SYLVIA et al. 2004). son los componentes más importantes de este.6 fósforo. Un suelo fértil es aquel que contiene una reserva adecuada de elementos nutritivos disponibles par a la . Población microbiana del suelo La mayoría de los suelos contienen entre 10 8- 1010 microorganismos por gramo de suelo (MADIGAN et al. 2. El suelo contiene una gran variedad de microorganismos: (ANDERSON e INGRAM. encontramos millones de microorganismos beneficiosos para los cultivos. En un solo gramo de tierra. Los actinomicetos y los fungís son los siguientes grupos mas abundantes.2. 1999).4.. las bacterias son los microorganismos mas números en los suelos que pueden llegar hasta 108 individuos por gramo de suelo y pueden esta r representados por mas de 104-106 especies diferentes.. algas y protozoarios. son reciclados por microorganismos del suelo. 1993). Constituyen su parte viva y son los responsables de la dinámica de transformación y desarrollo. La mayoría de los microorganismos que viven en el suelo juegan un papel indispensable en el mantenimiento de la vida sobre este planeta.1. Estos microorganismos beneficiosos que se encuentran en el suelo. hongos.4. Im ortancia de los microorganismos del suelo Los microorganismos del suelo. actinomicetos. son bacterias. 2.

levaduras. protozoos. es muy variable pero en los . Su número.4. icroorganismos del suelo: acterias Las bacterias son organismos unicelulares de un tamaño del orden de la micra. en los diversos suelos.2. Los microorganismos se hallan capacitados para acometer una extensa gama de reacciones metabólicas y adaptarse a muchos ambientes diferentes (MADIGAN. Al mismo tiempo. los productos de su metabolismo alteran la composición química del suelo donde habitan. bacterias.4. o una población microbiana que libere nutrientes que perm itan un buen desarrollo vegetal (GERMIDA. Existen varias clases de microorganismos: mohos. El suelo es uno de los ambientes donde un conjunto ingobernable de microorganismos compiten entre sí para obtener lo que todos ello necesitan: Nutrientes y energía. 2. Se han encontrado especies que viven a temperaturas compr endidas entre el punto de congelación y el punto de ebullición del agua. los propios microorganismos evolucionan en respuesta a la presión del ambiente (FENCHEL. 2000). algas. 2.1. 2003). Algunos han desarrollado ciclos de vida que incluyen una fase de latencia en respuesta a la falta de nutrientes. actinomicetos.3. icroorganismos Los ambientes capaces de albergar vida microbiana reflejan el amplio espectro de la evolución de estos organism os. en presencia y en ausencia de aire.7 planta. Más aún. en agua salada y en agua dulce. virus. 1993).

las heterótrofas.4. las primeras utilizan como fuente de carbono al dióxido de carbono y como fuente de nitrógeno a los nitratos y a los compuestos de amonio.8 suelos cultivados supera con mucho al de los otros seres vivos. En un gramo de suelo se ha calculado que viven de unos pocos centenares de millares a algunas decenas de millones de unidades y su actividad metabólica es tan grande que pueden desprender en una hora. existen zonas de hacinamiento junto a otras escasamente pobladas . El más conocido es la Ps.1. 2003). extraen ambos elementos del material orgánico existente en el suelo. (SCHLEGELl. que representan la gran mayoría.3. primero por encontrar un medio en el que crezcan todas al mismo tiempo. Las bacterias se pueden dividir en dos grandes grupos con respecto a su nutrición: autótrofas y heterótrofas. 2. y segundo porque las bacterias crecen en el suelo como colonias que si no se desintegran antes del recuento. (MADIGAN. 1993). La determinación del número de bacterias viables en el suelo es un arduo problema. proporcionan un número muy bajo (SCHLEGELl. que no existe. varios kilos de dióxido de carbono por hectárea. 1993). a través del proceso respiratorio. Ti os de bacterias encontradas en el suelo Pseudomonas : Metabolizan un amplio intervalo de compuestos incluyendo los pesticidas y los hidrocarburos. Putida . No están uniformement e distribuidas a lo largo del perfil edáfico y con frecuencia incluso en el mismo horizonte.

Thiobacillus ferrooxidans : su energía procede de la oxidación de sulfuros y hierro ferroso. que producen el tétanos. . pero son más próximos a los bacterias ya que carecen de membrana nuclear y por poseer hifas cuyo diámetro es mucho menor que cualquier tipo de hongo. .Los géneros Nostoc y Anabaena pueden fijar el N-atmosférico e incorporarlo a los aminoácidos (ALEXANDER. Acción óptima entre 30 y 35 °C (mesófilos). estos pueden soportar pH de hasta 1 (extremadamente ácidas). al precisar luz para la fotosíntesis.2. 1999). Pueden producir reducciones del C orgánico a metano. por ejemplo C.9 .4.Cianobacterias (anteriormente conocidas como algas verde azuladas): Viven en o cerca de la superficie del suelo. acterias autóctonas (actinomicetos) Los actinomicetos son organismos procarióticos que forman un grupo importante de bacterias con hifas productoras de micelios y por su morfología miceliar recuerdan a los hongos. 2. Y otros pueden fijar nitrógeno atmosférico . por lo que n o fotosintetizan y son saprofitos. tetani. por lo que su densidad poblacional tiene una relación directamente proporcional a la cantidad de materia orgánica presente en el perfil del suelo (SYLVIA et al. Algunos son patógenos para el hombre. .Nitrobacter: sólo son capaces de extraer energía de la oxidación de los nitritos a nitratos y son los responsables de la Nitratación. no poseen pigmentos fotosintéticos. Prefieren medios neutros o básicos y con un buen contenido de humedad . Participa en la nitratación.Clostridium: anaerobios.Nitrosomonas : aerobios. pocas exigencias en pH y temperatura.3. . 1998).

entre los más importantes en agricultura (SAWADA. Representan un biofertilizante ecológico y se dividen en dos grandes grupos: Las simbióticas. 2003) 2. los hongos son importantes como descomponedores en la red alimentaria del suelo. debido no a su mayor número. Conjuntamente con las bacterias. y las libres. 1993).4. En los suelos bien aireados y cultivados. Las hifas fungales efectúan la unión física de partículas de suelo creando agregados estables que ayudan a aumentar la infiltración del agua y la capacidad del suelo para retener el agua (SCHLEGELl. Dominan sobre todo.3 acterias fijadoras de nitrógeno Las bacterias fijadoras de nitrógeno que se desarrollan de forma natural en el suelo. se conocen desde hace más de un siglo. los hongos llegan a constituir la mayor parte del protoplasma de la microflora total. como el Azotobacter y el Azospirillum. . 1993).3.4. el ciclaje de nutrientes y la supresión de enfermedades. especificas de las leguminosas. en las capas orgánicas de los bosques y en los ambientes ácidos (SCHLEGELl. como el Rhizobium.10 2. Conviert en materia orgánica difícil de digerir en formas que otros organismos pueden utilizar.4. icroorganismos del suelo: ongos Los hongos realizan servicios importantes vinculados a la mecánica del agua. sino a su mayor diámetro y extensión de sus hifas. que viven en el suelo y no necesitan la planta para su reproducción.

11 2.1 ongos como agente de descom osición Los hongos son los principales agentes de descomposición de la materia orgánica en todos los ambientes ácidos. Los hongos participan en la formación del humus y contribuyen al reciclaje de nutrientes y a la estabilidad de agregados mediante la degradación d e residuos vegetales y animales (BAATH. grasas y compuestos de lignina. almidón. Los micelios fungosos se pueden observar fácilmente en los humus tipo mor y moder. Los hongos poseen una red de filamentos o hifas en el suelo y su micelio puede subdividirse en células individuales por medio de paredes transver sales o septos. hemicelulosa. pectinas. Una de las principales actividades de los hongos es la descomposición de la celulosa.4.4. 2000) .

5. de origen sexual y esporangiosporas no nadadoras. parasita peces vivos.4. Además de producir oosporas.3 División ygomycota ( igomicetes) Se caracterizan por formar zigosporas con gruesas paredes. los receptáculos que contienen las zoosporas pueden estar modificados. los oomicetes forman zoosporas que se mueven por medio de dos flagelos. La mayoría de los mohos acuáticos viven sobre materia orgánica muerta. de origen asexual. Se incluyen en la división los mohos acuáticos. aunque Saprolegnia parasítica. en ese caso. En algunos mildíus vellosos.4. En algunos sistemas de clasificación se colocan entre los protistas. produce masas de hifas sobre pan. son parásitos de plantas.4. los receptáculos se parecen a los conidios y funcionan como tales. 2. El moho negro del pan (Rhizopus nigricans).1 División Oomycota (Oomicetes) La división Oomicetes se compone de hongos que se parecen a las algas.5. por ejemplo en los géneros Phytophthora y Peronospora.5. en lugar de entre los hongos. fruta y .2 División Chytridiomycota (Quítridos) Los quitridiomicetes son considerados parientes cercanos de los oomicetes. Abarca desde organismos unicelulares hasta complejas masas de hifas que no están tabicadas por septos (micelios no septados).4. 2.5. Las royas blancas y los mildíus vellosos. Clasificación de hongos 2. pertenecientes al orden Peronosporales. las royas blancas y los mildíus vellosos.12 2.

5. . los ascomicetes tienen hifas bien desarrolladas.5. producen un número determinado de ascosporas en el interior de unas bolsas semejantes a vesículas. Tienen esporangiosporas sencillas dentro de unos receptáculos. cilíndricos u ovales. en cada basidio. La unión de los núcleos se da en las ascas jóvenes. denominadas ascas. Otros son parásitos de las moscas y de otros insectos. los cuales darán lugar a las ascosporas. Algunos ascomicetes tienen sólo una ascospora. Ciertas células se transforman en binucleadas poco antes de la formación de los sacos esporales. Los basidios pueden ser con forma de maza. tras la posterior división. suelen producirse ocho núcleos. en el interior de cada uno de estos receptáculos se desarrollan unas estructuras que llegan a independizarse y funcionar como conidios. cuyas estructuras reproductoras son basidios que se localizan en las puntas de las hifas.4 División Ascomycota (Ascomicetes) También llamados hongos con forma de saco.4.13 otros alimentos envejecidos.4. Esta división también comprende hongos parásitos de amebas. 2. otros pueden tener varios cientos (MAHON. Con la excepción de algunas levaduras y otros pocos organismos. nematodos y artrópod os. se formen cuatr o basidiosporas. 2. sobre unos salientes con forma de tallo. 1995). Lo normal es que. por lo general con un único núcleo en cada hifa.5 División asidiomycota ( asidiomicetes) La división Basidiomicetes comprende numerosos y variados tipos de hongos.

desempeñando una actividad importante en la mineralización del carbono orgánico. en general.14 2. su resistencia a la penicilina y estreptomicina permite usar estos antibióticos.5. Cuando se compara a los hon gos con las bacterias. Algunos revisten importancia económica porque se emplean para producir ciertos quesos y antibióticos (penicilina) ( MAHON. . estos tienen requerimientos nutricionales muy simples. División Deuteromycota ( ongos im erfectos) Son hongos sin ciclos sexuales conocidos.5 ongos totales or dilución en lacas Los hongos tienen hábitats muy diversos. sin embargo. En el aislamiento. Las enfermedades humanas más comunes causadas por este grupo son infecciones de la piel y de las membranas mucosas. agar-harina de maíz. cultivo y cuenta de la mayoría de los hongos se aprovechan ciertas características especiales de ellos. 2. etc) y otras sustancias naturales (RAMÍREZ et al. En la preparación de los medios de cultivo para hongos con frecuencia se prefiere usar mezclas de vegetales (agar -papa.4. 1995). pero su desarrollo es más lento. por lo que requieren mayor tiempo de incubación para su cultivo.6. 1992). los que al ser agregados a los medios de cultivo reducen el número de bacterias contaminantes . como su tolerancia a pH ácido y su preferencia por medios de cultivo con gran cantidad de azúcar fácilmente degradable. Además. la mayoría son terrestres y habitan en el suelo. Entre sus miembros se encuentran parásitos que enferman a las plantas y animales.

El estimado de densidad poblacional se obtiene del patrón de ocurrencia de ese atributo en diluciones y el uso de unas tablas. por ejemplo se puede determinar la densidad poblacional de organismos que pueden nodular leguminosas en una muestra de suelo usando el método de infección de plantas. se utilizará una variante de esta metodología para estimar la densidad total de bacterias presentes en una muestra. El atributo particular a utilizarse será la capacidad de microorganismos a formar colonias en medios sólidos de crecimiento (WONMACK. Cuantitativa de células individuales no es factible.15 2.6 Enumeración de icroorganismos: el número más robable (NMP) Una estrategia eficiente de estimación de densidades poblacionales especialmente cuando una evaluación . Algunas de las ventajas del NMP son: la capacidad de estimar tamaños poblacionales basados en atributos relacionados a un proceso (selectividad). un requisito important e de este método es la necesidad de poder reconocer un atributo particular de la población(es) en el medio de crecimiento a utilizarse. entre otros. provee una recuperación uniforme de las poblaciones microbianas de suelos diversificados. En este ejercicio. . 2000). La técnica se basa en la determinación de presencia o ausencia (pos o neg) en réplicas de diluciones consecutivas de atributos particulares de microorganismos presentes en muestras de suelo u otros ambientes. Por lo tanto. determina sólo organismos vivos y activos metabólicamente. y suele ser más rápido e igual de confiable que los métodos tradicionales de esparcimiento en platos de cultivo.

A pesar de su número no excesivamente alto tienen importancia ecológica (GRANT. Las principales sustancias estimuladoras producidas son de . Las Pseudomonas pueden crecer en un medio mineral con iones de amonio o nitrato y un solo compuesto orgánico que funciona como única fuente de carbono y energía. pero no establecen una relación simbiótica con la planta. ya que son versátiles en su metabolismo y pueden utilizar varios sustratos producidos por las mismas. Las bacterias Gram-negativas están representadas principalmente por el género Pseudomonas que coloniza una gran variedad de microambientes debido a su versatilidad nutricional. la de las Bacterias del Filo Proteobacteria. 1998). clase orden Pseudomonadales.7 acterias encontradas en el abono orgánico bocashi 2. Metabolizan un amplio intervalo de compuestos incluyendo los pesticidas y los hidrocarburos.7. Abundan en la superficie de las raíces. acelerar el crecimiento de las plantas especialmente en sus prime ros estadios. Pseudomonas : Pertenece al Reino Gammaproteobacteria. Putida (ALEXANDER. Pseudomonas en general pertenecen a un grup o llamado ³estimuladores del crecimiento vegetal (MECV)´ que poseen la propiedad de producir estas sustancias. inducir la iniciación radicular e incrementar la formación de raíces y pelos radiculares. cuyas principales ventajas son las de estimular la germinación de las semillas. familia Pseudomonadaceae género Pseudomonas.1. LONG 1999).16 2. El más conocido es la Ps. no por fermentación y su crecimiento es rápido. La ganancia energética es obtenida por respiración aeróbica.

Orden Rhizobiales. giberelinas y citoquininas. 1998). 1990).17 tipo hormonal como auxinas. La fijación de nitrógeno beneficia a la planta que crece en suelos pobres en ese elemento. Es un género de bacterias gram-negativas de perfil de suelo que fijan nitrógeno atmosférico.2 Rhizobium Pertenece al Dominio de las Bacterias. (SAWADA. Género Rhizobium . soy a. frejol. del Filo Proteobacteria. a las que aportan el nitrógeno necesario para que la planta viva y esta a cambio le da cobijo. 2. (ALEXANDER. Una de las interacciones mas interesantes y destacadas entre bacterias y plantas son la que se dan entre las leguminosas y las bacterias gran negativas fijadoras de nitrógeno. Familia Rhizobiaceae. La asociación Rhizobium ± leguminosas constituye una autentica simbiosis. mientras que para los rhizobios el nódulo es un ambiente que protege y nutre. Estos efectos se dan siempre que sea adecuada la concentración de organismos en el sistema radicular y en el suelo haya suficiente cantidad de materia orgánica. ya que claramente hay una participación de cada miembro. (BUCHANAN. 2003). Clase Proteobacteria alfa. Las leguminosas son un grupo amplio que incluye plantas de importancia económica como trébol. Pertenece a un grupo de bacterias fi jadoras de nitrógeno que se denominan colectivamente rizobio Viven en simbiosis con determinadas plantas (como por ejemplo las leguminosas) en su raíz.la Especie Rhizobium sp. pero también producen sustancias de otro tipo como aminoácidos y promotores específicos del crecimiento. .7.

. ampliamente usado como arrancador) para la producción casera de tempeh. degradando frutos y vegetales. Orden Mucorales. esponjoso.18 (MADIGAN et al. Las especies de Rhizopus producen esporos asexuales y sexuales. Las esporas producen un micelio blanquecino. Rhizopus de la familia de las Mucoraceae. Cigosporos negros se producen después de dos fusiones compatibles de micelios durante la reproducción sexual. 2004).1 Rhizopus Pertenece al Reino Fungí. 2. . del Género Rhizopus. Y hacen colonias que pueden ser genéticamente diferentes de sus padres. y el esporangióforo asoma entre rizpodes distintivos. uniendo a los granos de soja y creando una "torta" comestible de gra nos de soja parcialmente fermentados (COOK y BAKER 1989). de la División Zygomycota. la Clase Zygomicetes. Existe una gran diversidad de cepas de Fusarium spp. Es un género de mohos que incluyen especies cosmopolitas de hongos filamentosos hallados en el suelo. En la identificación de Fungís encontramos fungís no benéfico que se encuentra en el suelo alrededor del mundo y afecta muchas especies vegetales y animales y es difícil de controlar. el esporangio es soportado por una gran columela apofisada. de las cuales algunas son patogénicas y su gran . ungís encontrados en el abono orgánico bocashi 2. Los esporangiosporos asexuales se producen dentro de una estructura aguzada. Familia Mucoraciae.. el esporangio. y residuos. heces animales. En Rhizopus. son genéticamente idénticos a su padre.

éstas últimas compuestas de una sola célula redondeada. (COOK y BAKER 1989). El Aspergillus es un fungí filamentoso (compuesto de cadenas de células. de la clase Eurotiomycetes. capaces de sobrevivir en el agua y suelo alimentándose de materiales en descomposición. llamadas hifas). La mayoría de las especies son saprofitas y son unos miembros relativamente abundantes de la microbiota del suelo. La estructura microscópica del Aspergillus es única. Son patógenos facultativos. y es ubicuo. . Tienen hifas tabiculares y conidióforas cuya cabeza está localizada en el extremo de una hifa compuesta por una vesícula rodeada por una corona de fiálides en forma . Las esporas del hongo son fácilmente reconocibles al microscopio por su forma de media luna o de canoa. del género Aspergillus. 2.19 mayoría son saprófitas pueden ser utilizadas como controladores biológicos. el tipo de hongos opuesto a las levaduras. Son importantes agentes de contaminación en los laboratorios de microbiología (WORLD HEALTH ORGANIZATION 1999). El Aspergillus es un género de alrededor de 200 fungís (mohos). Orden Eurotiales. El hábitat natural del Aspergillus son el heno y el compostaje.2 Aspergillus Pertenecientes al Reino Fungí. al Filo Ascomycota. Familia Trichocomaceae. Los hongos se pueden clasificar en dos formas morfológ icas básicas: las levaduras y las hifas.

De las fiálides se desprenden las esporas (conidios). la amilasa de Aspergiluus fue etiquetada con la tinta fluorescente inisothiocyanat (FITC). La segunda. (COOK J. que la amilasa del Aspergillus penetra desde la solución del suelo en el sistema de transporte de agua de la planta. La primera es que el incremento en la actividad de la amilasa en el suelo induce un aumento de la amilasa del árbol. y es transportada hacia las partes superiores del árbol. Con el fin de excluir la posibilidad de una inducción de la enzima genética de amilasa por una alta actividad de amilasa en el suelo. las células de Hüle. 1989) El género Aspergillus ocupa el ámbito terrestre desde h ace 450 millones de años y utiliza el aire para la dispersión de sus esporas.20 de botella directamente insertadas sobre la vesícula. . por su extraordinaria capacidad y versatilidad para degradar gran parte (DE HOOG. 1995). El Aspergillus spp es un fungí termotolerante. lo cual interviene en la regulación de poblaciones patógenas a través de la producción de antibióticos (DE HOOG. 1995) Existe escasa información en la literatura sobre el hecho de que las macromoléculas extracelulares son capaces de penetrar a través de las paredes de las células de las raíces hacia los tejidos de éstas. (DE HOOG. Los Aspergillus. son elementos clave en la formación y mantenimiento de los ecosistemas edáficos. La aparición de amilasa en las agujas y hojas es registrada por PAGE y la decoloración. BAKER. Los resultados experimentales admiten dos explicaciones. por ejemplo. 1995). Otras estructuras se encuentran en ciertas especies y no en otras.

del género Trichoderma. Estas especies son fáciles de aislar. Las especies de Trichoderma han sido investigadas como agentes de control biológico de enfermedades fúngicas por cerca de 70 años (HJELJORD y TRONSMO. . de cultivar y de propagar en diversos sustratos y la mayoría presentan un buen micoparasitismo (BENÍTEZ. para la protección de plantas frente al ataque de fitopatògenos causantes de enfermedades de importancia económica. Rhizopus. y muchos géneros más. Trichoderma es un fungí de gran importancia a nivel agrícola gracias a las diversas ventajas que ofrece como agente de control biológico. Pythium. El Trichoderma es el enemigo natural de muchas enfermedades entre ellas. La particularidad de las cepas de Trichoderma es que están potencializadas para el control de patógenos resistentes a los fungicidas de uso común (CERVANTES. 2008). El éxito de las cepas de . Mucor. Colletotrichum. las que pertenecen a los géneros Rhyzoctonia. Orden Hypocreaceae.3 Trichoderma Pertenece al Reino Fungí. División Ascomycota. 2004). Botrytis. la Subdivisión Hypocreales. Phytophthora. Algunas especies del género Trichoderma son muy comunes en diversos suelos. principalmente en suelos ácidos y ricos en materia orgánica. Fusarium. además ayuda a reducir la incidencia de nematodos. como es el caso d e los cultivos hortícolas(BASTOS. Clase Sordariomycetes. Familia Pezizomycotina.21 2. pero es solo recientemente que las cepas han comenzado a ser comercialmente aprovechables. 1998). 1996).

fuerte agresividad contra. 2001). Familia Hypocreaceae. 1996). 1989). capacidad para modificar la rizósfera. De las especies más importantes económicamente tenemos a Fusarium oxysporum que ataca a un sin número de cultivos de clima templado y tropical incluyendo café.4 usarium Perteneciente a la División Ascomycota. produce una desintegración o pudrición de parte o todo el sistema radicular de la planta (Agrios. 2.. competencia.22 Trichoderma es debido a su alta capacidad reproductiva. micoparasitismo e hidrólisis enzimática. las cuales degradan quitina. Es un fungí que se encuentra en el suelo alrededor del mundo y afecta muchas especies vegetales y animales y es difícil de controlar. de las cuales algunas son patogénicas y su gran mayoría son saprófitas pueden ser utilizadas como controladores biológicos(COOK Y BAKER. eficiencia en la utilización de nutrientes. Orden Hypocreales. género Fusarium. La Fusariosis ha sido reportada en semilleros y viveros de café .Trichoderma spp. habilidad para sobrevivir bajo condiciones ambientales desfavorables. la Clase Euascomycetes. La Fusariosis o Marchitez Vascular del cafeto "Root rot". 1988). Existe una gran diversidad de cepas de Fusarium spp. La Fusariosis o marchitez vascular es la principal enfermedad causada por este patógeno (GONSALVEZ Y FERREIRA. . componente presente en los huevos de los nematodos (BASTOS. es un hongo que sobrevive al calor solar y posee mecanismos de antibiosis. los cuales son útiles en actividades de control biológico. Es un fungí que posee acción enzimática a través de las quitin asas.

Son patógenos facultativos. 1997). La principal toxina producida por estas especies de Fusarium son fumonisinas y trichothecenos. Cuando los daños son severos Fusarium oxysporum puede destruir el sistema radical en más de 90% (TRON CONI et al. La mayoría de las especies son saprofitas y son unos miembros relativamente abundantes de la microbiota del suelo.23 causando daño irreversible que puede causar pérdidas de plantas hasta el 50% (PROCAFE. Fusarium es un extenso género de fungís filamentosos ampliamente distribuido en el suelo y en asociación con plantas. Son importantes agentes de contaminación en los laboratorios de microbiologí a (WORLD HEALTH ORGANIZATION 1999). Algunas especies producen micotoxinas en los cereales y que pueden afectar a la salud de personas y animales si estas entran en la cadena alimentaria. capaces de sobrevivir en el agua y suelo alimentándose de materiales en descomposición. 1997). . Las esporas del hongo son fácilmente reconocibles al microscopio por su forma de media luna o de canoa.

3. 1. Lugar de ejecución La investigación se desarrollo en el distrito de Daniel Alomía Robles.1. Departamento de Huánuco.1.3. cuyas coordenadas geográficas son las siguientes: Latitud sur 09° 09¶ 00¶¶ y Longitud Oeste: 75° 59¶ 00¶¶.3. la ciudad de Tingo María se encuentra en la formación vegetal de bosque muy húmedo premontano sub tropical (bmh . 5 sacos de tierra o . Insumos ocashi  5 Sacos de gallinaza.2. ubicado en el Distrito de Rupa Rupa.24 III. Preparación del 3.3.PST).1.n.s. Características climatológicos Ecológicamente de acuerdo a la clasificación de las zonas de vida y el diagrama bioclimático de HOLDRIDGE. MATERIALES Y MÉTODOS 3. Materiales y equipos 3.5 sacos de carbón. Provincia de Leoncio Prado.m. Humedad relativa media de 84% y Temperatura media anual de 25 ºC. Con una precipitación promedio de anual 3 300 mm. para aislar e identificar la población fúngica y bacteriana en el Laboratorio de Microbiología General. Altitud: 660 m. en el Sector Pendencia para la elaboración y toma de muestras del abono orgánico bocashi. 3.1. de la Universidad Nacional Agraria de la Selva (UNAS).

prueba de de citrato. hierro. tierra negra. 3.1. Equipos materiales de campo y laboratorio 3. esmalte transparente de uñas.4. cámara fotográfica digital. estufa.3. prueba de indol. Equipos  Balanza analítica. prueba de ureasa. cloruro de sodio. varilla de vidrio. medio M77 .1. gallinaza cascarilla de arroz. El contenido ideal de agua en la mezcla debe ser de 50 . ansa. carbón. placas petr y. prueba de voges pros medio kauer.3.3. Insumos y reactivos  Agar. congó.2. laminas y laminillas. baño María . 3. 8 litros de melaza de caña. pinza. medio LIA.3. machete.3. Metodología 3.1 Preparación del bocashi Hacer capas de la melaza. sulfato de potasio. Aislamiento e identificación 3. es cuando exprime un puñado de la mezcla.E activado.3. una forma efectiva de saber el punto.3.rojo de metilo. espátula. vaso de precipitación. papel filtro. 3.55 %.2. TSI.25 aserrín.2. . frasco de vidrio esterilizado. matraz. Materiales  Tubos de ensayo. algodón. pipeta de 10 ml. autoclave. medio agar rosa de Bengala de Martin. 5 litros de M. palana. libreta de campo.3. antibiótico ceftrioxona. caldo de peptona. mechero. rojo manitol. 3. 3 sacos de cascarilla de arroz. gradilla. embudo. extracto sulfato de de levadura. reactivo Kovac.4.

de la ultima dilución( 10 4). .Pesar 10 g de la muestra del bocashi.25 ml en placas con medio M 77 Y luego llevar a incubación a temperatura de ambiente. pero cuando usted empuja el terrón con su dedo debe romperse fácilmente (C. por un periodo de 48-72 horas. 3. procedimos a extraer la muestra en frascos de vidrio esterilizados. el calor de la fermentación es bajo.4.Al mes y medio de haber preparado el bocashi . . Observar desarrollo de las colonias microbianas y anotar características resaltantes de cada colonia. . adicionar 1 en caldo peptonado y filtrar. . el calor de la fermentación es muy fuerte que resulta en un ³bocashi quemado´. sacar 1 ml para las diluciones 10 . el día 15 guardar en costales la mezcla.102. que resulta en un ³bocashi putrefacto´. DIVISORIA.A. sembrar por diseminación en superficie en inoculo de 0. para aislar fungís y bacterias en el laboratorio de microbiología. 2009) . sólo si esta fría.Si el BOCASHI tiene mucha agua.26 esta forma un terrón. . 103.El primer día dejar a una altura de 1 metro (si la cantidad lo permite) y cubrir con mantas. Aislamiento de fungí y bacterias a) Para aislar bacterias .104.C..Si el BOCASHI tiene poca agua.2.El segundo día después de voltear dejar a 50 centímetros de altura la mezcla y a partir del cuarto día dejar a una altura de 30 centímetros.

caldo VP medio citrato. a) Para la identificación de bacterias Se utilizaron los medios: caldo de peptona. caldo RMVP. agregamos reactivos de confirmación a los tubos que corresponda y observar el cambio de color. Dejamos encubar a temperatura ambiente por un periodo de 8 días luego observa los resultados.Pesar 10 g de la muestra del bocashi. rojo de metilo. medio TSI.4. medio LIA.104. medio U reasa. De todas las colonias crecidas en el medio rosa de bengala se hizo un micro cultivo de cada colonia. sembrar por profundidad un inoculo muestra luego se adicionó el agar rosa de bengala + antibiótico (Ceftriozona de 1 gr). adicionar en caldo 1 peptonado y filtrar. De toda las colonias que se aislaron en el medio 77 se cogió una sola colonia con el ansa de siembra. sembrar en todos con medios de cultivo diferenciales. 103. . de la de 1ml de la ultima dilución( 10 4).27 b) Para aislar fungís .3 Identificación de bacterias y fungís Después de realizar el aislamiento de las placas con sus respectivos medio procedimos a la identificación tanto para bacterias como fungís. sacar 1 ml para las diluciones 10 ..102. 3. dejar encubar a 37 °C por 24 o 48 hrs leer los resultados.

si da color rojo es positivo a rojo de metilo. luego procedemos a elegir una colonia de la muestra aislada por cada placa . Al otro tubo con caldo MRVP se agrego 2 a 3 gotas de K OH al 4% luego se añadió gotas de reactivo alfa naftol se espera entre 10 a 20 min. Una coloración rosado nos indica positivo a VP coloración amarillo nos indica negativo a VP.28 Para la prueba de Indol. Prueba de voges proskauer (VP). luego se utilizó placas petri con medio agar de saboroud + antibiótico (ceftrioxona de 1 gr). los materiales que utilizamos. una placa petry conteniendo un soporte de vidrio en forma de u con un porta y cubre objeto todo esterilizado un día antes(esto es la placa del micro cultivó). si da color anaranjado es negativo a rojo de metilo. para observar con una tabla de pruebas bioquímicas la especie o genero de cada microorganismo. LIA. Luego para las otras pruebas de citrato TSI. b) Para la identificación de fungís Se realizó micro cultivos. Urea. anillo anaranjado negativo al indol. se agrega 3 o mas gotas del reactivo de kovac al tubo con caldo peptona. para hacer cubitos divididos 20x20x10 mm que cada cubito se colocara sobre el porta dentro de la placa del micro cultivó. S i da en anillo rojo es positivo a indol (metabolitos proteicos). se observaron el viraje de color de cada prueba.( El espesor del medio depositado dentro de la placa de micro cultivó no debe ser mayor de 10 ml). Para la prueba de rojo de metilo(RM). Se agrego 2 a 3 gotas de colorante rojo de metilo a uno de los tubos con caldo MRVP.

Pasado los 10 días de incubación retirar suavemente c on ayuda de una pinza el cubre de la placa de micro cultivó y colocarlo sobre un porta limpio y esterilizado y se coloca 3 a 4 gotas de azul de AMANN luego con papel secante.29 de micro cultivó. dejamos en incubación por un periodo de 8a 10 días a temperatura ambiente y diariamente verificar si el algodón esta húmedo.. se adiciono en caldo peptonado y filtrar.102.se sembró por estrías en medio LMA(Medio levadura manitol agar ). . añadimos un cubre limpio y sellamos con el esmalte trasparente de uñas y llevamos al microscopio .104. Se sometió a una coloración gram el crecimiento de cada dilución observar en el microscopio con el objetivo de 100x +aceite de cedro y observar si es gram -positiva o negativa. se absorbe el exceso de colorante sellamos los lados laterales con esmalte de uñas transparente. Se encubo a temperatura ambiente por un periodo de 48 a 72 horas se observo los 1 resultados. c) Aislamiento de Rhizobium Se Peso 10 g de la muestra del bocashi. 103. con la ayuda de un ansa micológica. tomamos un inoculo y lo trasladamos sobre el cubito del medio de saboroud que se ha colocado en el porta dentro de la placa del microco cultivo colocamos el cubre sobre el cubito y colocamos un algodón húmedo. retiramos el porta de la placa de micro cultivó y agregamos 3 gotas de azul de AMANN. dilución. sacar 1 ml para las diluciones 10 . el cubito sacamos del medio y llevamos aun recipiente con solución sulfocromica.

de la 1 ultima dilución( 10 4). g de la muestra del bocashi. M.O/g de muestra= #de colonias x inoculo de siembra x factor de dilución .. 103. sembrar por profundidad un inoculo de 1ml utilizando el medio de play count + manitol (1%). adicionar en caldo sacar 1 ml para las diluciones 10 . dejamos encubar a temperatura ambiente de (26°C a 29°C) por 24 48 horas y realizamos el recuento de colonias utilizando el equipo para contar las colonias.30 d) Enumeración de Microorganismos a partir de materia orgánica (abono bocashi) Pesar 10 peptonado y filtrar. aplicamos la formula de enumeración de microorganismos por gramo.102.104.

del genero Rhizobium sp. RESULTADOS Y DISCUSI N 4. en fungís del genero Trichoderma sp. hongos. algas. 1993) . Identificación de fungís y bacterias en abono orgánico bocashi Cuadro1. sp.31 IV. benéficos para el suelo y encont ramos microorganismos fungís con capacidad patogénica del genero Fusarium. Rhizopus sp. Los microorganismos que se encuentran en el suelo son bacterias. Aspergillus sp. Un suelo fértil es aquel que contiene una reserva adecuada de elementos nutritivos disponibles para la planta o una población microbiana que libere nutrientes que perm itan un buen desarrollo vegetal (GERMIDA.1. ungís y acterias Bacterias Pseudomona spp Rhizobium sp Fungís Trichoderma sp Aspergillus sp Fusarium sp Rhizopus sp Capacidad Patogénica del genero No No Si Si Según el cuadro N°1 En el bocashi encontramos bacterias de genero pseudomona sp.

Muestra identi i ada de Trichoderma sp La fi a ° amos muest a aislada en ni el de ulti o la ongos con forma de sacos.1. Identi i a i n de ungís a.1. orden ypocreaceae. a ni el de culti o una característica notoria es la presencia del color erde en la placa petry proveniente del abono orgánico bocashi. Aislamiento e identificación de Trichoderma sp Taxonomía de la especie ivel de cultivo Figura 1. sub di isi n familia Pezizomycotina. i ocreales.32 . genero richoderma. sordariomycetes. richoderma es un fungí de gran importancia a nivel agrícola gracias a las ¥ ¢¡ £¢¡ ¤   fi ura °2 muestra al fungí ue ertenece a la di isi n A t llamados clase . Muestra aislada en ni el de ulti o de Trichoderma sp ivel microscópico Figura 2.

como es el caso de los cultivos hortícolas (BASTOS. principalmente en suelos fértiles y ricos en materia orgánica (BENÍTEZ. Para realizar el cultivo e identificar el género se hizo mediante la metodología según (BANRRENTT. Son muy comunes en diversos suelos. para la protección de plantas frente al ataque de fitopatógenos causantes de enfermedades de importancia económica. 2004). en el medio rosa de bengala. ha sido utilizado por los agricultores japoneses como un mejorador del suelo que aumenta la diversidad microbiana. . El Trichoderma es uno de los microorganismos que se encuentra en el bocashi. 1998). 1996). mejora las condiciones físicas y químicas y previene enfermedades.33 diversas ventajas que ofrece como agente de control biológico.

el hábitat natural del A    " ! El ill      de la clase E ti t . Aun aumento de microscópico. familia Trichocom aceae.34 b. de la orden Eurotiales. Aislamiento e identificación Aspergillus sp Taxonomía de la especie Nivel de ivel cultivo cultivo uestra aislada en nivel de cultivo de A Nivel microscopio x) Figura . A es un fungí filamentoso compuesto de cadenas de ill son el heno y el     °4 muestra al fungí ue pertenece a la ¦ ¦ ©¨ ¦ §  § ill ivisión A t fungís a igura 3. x en mas vistoso en nivel #( &% # ' $ células. Muestra identi i ada del Aspergillus sp La figura figura °3 observamos muestra aislada en nivel de cultivo y la parte de tener forma de saco producen un n úmero determinado de ascosporas nivel de cultivo se desarrollan en el medio rosa de bengala obteniendo un color blanco a pardo en la placa petry. llamadas hifas. .

y es transportada hacia las partes superiores del árbol. 1995). . El aspergillus presenta macromoléculas extracelulares que son capaces de penetrar a través de las paredes de las células de las raíces hacia los tejidos de estas. La aparición de amilasa en las agujas y hojas lo hace a un más benéfico para el suelo y planta (DE HOOG. son elementos clave en la formación y mantenimiento de los ecosistemas edáficos.35 compostaje. 1995). por su extraordinaria capacidad y versatilidad para degradar gran parte de restos orgánicos vegetales (DE HOOG. La amilasa del aspergillus penetra desde la solución del suelo en el sistema de transporte de agua de la planta. Los Aspergillus.

genero i . 29 64)98 747047601 )7 47601 l 53 . a nivel de cultivo una 4 10 210) 3 figura N°6 muestra al fungí ue pertenece a la división A t llamados 53 . familia .36 c. botellas. clase Euascomycetes. uestra identificada de usarium La figura N° observamos muestra aislada en nivel de cultivo y la fungís H con forma de sacos. orden característica notoria es la presencia del color verde petróleo a pardo en la placa petry proveniente del abono orgánico bocashi. uestra aislada en nivel de cultivo de usarium sp Nivel microscopio x) igura 6. Aislamiento e identificación de Fusarium sp Nivel de cultivo igura .

Encontrada tiene capacidad patogénica. .37 Fusarium es un fungí con capacidad patogénica que se encuentra en el suelo alrededor del mundo y afecta muchas especies vegetales y animales y es difícil de controlar. 1999). café. En el caso del bocashi se encuentra este género pero no podemos determinar si la especie. Según (COOK Y BAKER 1989) ser utilizadas como mayormente ataca a cultivos tropicales y templados como cacao. de las cuales algunas son patogénicas y su gran mayoría son saprófitas descomponen la materia orgánica pueden controladores biológicos. Existe una gran diversidad de cepas de Fusarium sp. llega a causar pudrición a la raíz y son facultativos capaces de vivir en el suelo y el agua (WORLD HEALTH ORGANIZATION.

Muestra identi icada de R i opus La figura N° observamos muestra aislada en nivel de cultivo y la ue se caracteriza por formar zigosporas de la clase ygomicetes. F . Aislamiento e identificación Rhizopus sp Nivel cultivo uestra aislada en nivel de cultivo de Rhi Muestra microscopio x) Figura 8.38 d. de la orden E figura N°8 muestra al fungí ue pertenece a la ivisión Zygomycot D DC A B B @ fungís igura .

2. Identi icaci n de bacterias Después del aislamiento utilizamos las diferentes pruebas bioquímicas para identificación de bacterias.1. Aun aumento de x es más vistoso en nivel microscópico. 4.39 Mucorales. Muestra Aislada en nivel de cultivo de Pseudomona sp Nivel de microscopio Figura G H . familia Mucoraciae. 992). Aislamiento e identificación de Pseudomona spp Nivel de ultivo Figura 9. Muestra identificada de Pseudomona sp . a. Es un género de microorganismo ue presenta capacidad patogénica ue incluye especies filamentosas hallado en el suelo degradando frutos y vegetales K BAYASI S. A nivel de cultivo se desarrollan en el medio rosa de bengala obteniendo un color crema en la placa petry.

familia Pseudomonadaceae. (GRANT. A pesar de su número no excesivamente alto tienen importancia ecológica (GRANT. Las principales sustancias estimuladoras producidas de tipo hormonal como giberelinas. . Pseudomonas que coloniza una gran variedad de microambientes debido a su versatilidad nutricional. El bocashi es un estimulador orgánico que presenta pseudomonas. clase Grammproteobacteria. LONG 1999). color característico blanquecino.Las Pseudomonas que tiene un alto nivel de importancia ecológica. género Pseudomona A nivel de cultivo se desarrollan en el medio M77. LONG 1999). abundan en la superficie de las raíces y en general pertenecen a un grupo llamado Estimuladores del crecimiento vegetal poseen la propiedad de producir estas sustancias aceleradoras del crecimiento.40 La figura N°9 observamos muestra aislada en nivel de cultivo y la figura N°10 muestra la bacteria que pertenece al Filo Proteobacteria.

41 b. familia hizobiaceae. Muestra identi icada de R i obium La figura N°11 observamos muestra aislada en nivel de cultivo y la figura N°12 muestra la bacteria que pertenece al Filo Proteobacteria la clase proteobacteria alfa. orden hizobiales. Muestra Aislada en ni el de culti o de R i obium sp Nivel microscopio Figura 12. El bocashi es un abono que contiene mucho composición. Se sembró por estrías en el medio LMA Medio levadura manitol agar). Aislamiento e identificación R i obium sp Nivel de ultivo Figura 11. hizobium en su na de las interacciones mas interesantes y destacadas entre bacterias y plantas son la que se dan entre las leguminosas y las bacterias .

2004). frejol. 4. soya. La asociación Rhizobium ± leguminosas constituye una autentica simbiosis. Las leguminosas son un grupo amplio que incluye plantas de importancia económica como trébol.O/g de suelo M.O/g de muestra=1230 x105 M..42 gran negativas fijadoras de nitrógeno. La fijación de nitrógeno beneficia a la planta que crece en suelos pobres en ese elemento.O/g de suelo Los microorganismos del suelo juegan un papel muy importante en el mantenimiento de la fertilidad de los suelos mineralizando. La mayoría de los microorganismos que viven en el suelo son indispensables en el . Enumeración de Microorganismos Figura 12.1. (MADIGAN et al.O/g de muestra=7666x105 M.O/ g de suelo M.O/g de muestra=10573x10 5 M. ya que claramente hay una participación de cada miembro. Enumeración de microorganismos de abono orgánico bocashi M.3. mientras que para los rhizobios el nódulo es un ambiente que protege y nutre.

Las bacterias son los microrganismos mas números y están representados por mas de 10 4106 especies diferentes.. . La mayoría de los suelos contienen entre 10 81010 microorganismos por gramo de suelo (MADIGAN et al. hasta 1230 x105 M. El suelo contiene una g ran variedad de microorganismos (ANDERSON e INGRAM. los fungís son los siguientes individuos por gramo de suelo representados por mas de 10 especies diferentes (SYLVIA et al. 2004).43 mantenimiento de la vida sobre este planeta.O/g de suelo. 1993). En el caso del bocashi se encuentra la presencia de microorganismos con una población de individ uos que esta en el rango indicado por los autores de 6 10573x105 M. 1999).O/ g de suelo.

Se logro aislar 04 géneros de fungís en las evaluaciones realizadas del trabajo de investigación. Se logro aislar e identificar 02 géneros de bacterias que corresponden de acuerdo a la tinción gram negativa( Pseudomona sp.O/ g de suelo hasta. de 10573x10 5 M.O/g de suelo. de los cuales dos son benéficos para el suelo y dos son géneros que presentan capacidad patogénica capaces de afectar a los vegetales. 2. se identificaron 04 de géneros de fungís ( Trichoderma sp. Fusarium sp. Rhizobium sp). . CONCLUSIONES En base a los objetivos y los resultados enco ntrados en la investigación concluimos de la siguiente manera: 1.44 V. Se determino el número de microorganismos presentes en el abono orgánico bocashi cuyo rango permisible es 1230 x105 M. Aspergillus sp. 3. Rhizopus sp).

2. RECOMENDACIONES 1. .45 VI. Tener mucho cuidado con la manipulación de materiales a utilizar. como también prevenir la contaminación de las muestras. Realizar trabajos similares utilizando otros tipos de pruebas para la identificación tanto de Fungís y Bacterias.

3rd. E. E. GIBBONS. Tropical soil biology and fertility. United ofKingdom. LIMÓN M. St. 2ed.A. hongos Benéficos 260p. BAKER. . C. BASTOS.Mexico. 1998. COOK J.1993.1998. S. Growth rates of bacterial communities in soils at varying pH: a comparison of the thymidine and leucine incorporation techniques. pI21-128. H. 539 p. INGRAM. Academic Press. .A.(1996).Libros y Editores S. RE ERENCIAS I LIOGRÁFICAS ALEXANDER. 7: 249-260. a hand book methods. 803 p.B. and N. 1995 Atlas of clinical fungi.L. 2000. Angel 2008.62p AGRIOS.2ed. ANDERSON. BAATH. Inc. Williams and Wilkins. Microb. R.M.: New York. AND CODÓN A. Paul. Minnesota. Ed.46 VII. Maryland 197A 1 246 p. RINCÓN A. BUCHANAN. The American Phytopathological Society..Mycoparasitic nature of t he antagonisms between Trichoderma viride and Fitopatologia Brasileria p50 -54 BENÍTEZ T. 1988. 2004. Division of plant and soil sciences west Virginia University Margontowm. Traducido por José Peña Cabriales. R. Ecol. Guarro J. International. International Microbiology. N. De Hoog GS. The nature and practice ofbiological control ofplant pathogens. Plant pathology. F.N.Introduccion a la microbiología del suelo. BANRRETT. M. 316-327p. 1990. E.Escuela familiar agraria Campomar. Biocontrol mechanism of Trichoderma strains. Bergy's manual of determinative bacteriology. C. CERVANTES. Baltimore. 1989.. M. K. Baarn: Centraaalbureau voor Schimmelcultures. Virginia p 900. G. 8a edition.C.

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ANEXOS .50 VIII.

Recogiendo muestra del abono orgánico bocashi Figura 14.Muestras puestas en frascos esterilizado para llevar a laboratorio .51 Figura 13.

Traslanadando al baño María el medio de cultivo preparado .52 Figura15. Filtrando el abono bocashi para las diluciones y sembrar Figura16.

Enumeración de bacterias encontando .53 Figura 17. Sembrando del medio de cultivo Figura 18.

Observando en el microscopio la muestra identificada .54 Figura19.

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