You are on page 1of 8

PRACTICA N° 10

ACCIÓN ENZIMÁTICA

I.INTRODUCCIÓN:

Las células son sistemas abiertos y, como tales, intercambian constantemente materia, energía
e información con el exterior. El metabolismo celular es el conjunto de reacciones de
degradación y síntesis a través de las cuales las células intercambian materia y energía con el
medio, permitiendo el mantenimiento del sistema. Para hacer posibles estos procesos a
temperaturas compatibles con los tejidos vivos, la velocidad de reacción de estos procesos es
modificada por los catalizadores biológicos o enzimas.

El término cinética enzimática implica el estudio de la velocidad de una reacción catalizada por
una enzima y los efectos que pueden tener factores como los inhibidores. Uno de los
principales estudios que se realizan en una enzima es medir el efecto en la velocidad de la
reacción cuando se modifican las concentraciones del sustrato y se mantienen constantes la
concentración de enzima, el pH, la fuerza iónica del medio, la temperatura, entre otros.

Se evalúa la influencia de estos factores en la reacción catalizada por enzimas con la finalidad
de determinar los intermediarios en una reacción y el papel que juegan en la reacción
enzimática, es decir, para predecir mecanismos de reacción. Es esencial entender estos
mecanismos para desarrollar nuevas herramientas moleculares, por ejemplo, para combatir
enfermedades en las que se conoce a la enzima que la produce. También es usual medir la
actividad enzimática con diferentes sustratos para entender su especificidad o bien, medir la
actividad de la enzima de diferentes tejidos u organismos para entender cómo las diferencias
en actividad están relacionadas con la función y/o la fisiología del organismo del que proceden.

II. OBJETIVO:
 Conocer el mecanismo de acción enzimática estudiando dos de las enzimas
del hígado de pollo: la catalasa y la succinato deshidrogenasa

 Conocer cómo actúan las enzimas reconociendo específicamente a su


sustrato para obtener los productos de la reacción
III.MARCO TEORICO:
Los enzimas son biomoléculas especializadas en la catálisis de las reacciones químicas que
tienen lugar en la célula. Son muy eficaces como catalizadores ya que son capaces de aumentar
la velocidad de las reacciones químicas mucho más que cualquier catalizador artificial conocido,
y además son altamente específicos ya que cada uno de ellos induce la transformación de un
sólo tipo de sustancia y no de otras que se puedan encontrar en el medio de reacción.

FACTORES QUE AFECTAN A LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA

Diferentes factores ambientales pueden afectar a la actividad enzimática .Destacaremos dos: el


pH y la temperatura.

EFECTO DEL pH:

El pH es otro factor que influye en la actividad enzimática, debido a que el pH influye en la


ionización de los grupos funcionales de los aminoácidos que forman la proteína enzimática.
Cada enzima realiza su acción dentro de un determinado intervalo de pH, dentro de este
intervalo habrá un pH óptimo donde la actividad enzimática será máxima. Por debajo del pH
mínimo o por encima del pH máximo el enzima se inactiva ya que se desnaturaliza. En la
mayoría de las enzimas el pH óptimo está próximo a la neutralidad, aunque hay excepciones

La mayoría de los enzimas presentan un pH óptimo para el cual su actividad es máxima; por
encima o por debajo de ese pH la actividad disminuye bruscamente. Este efecto se debe a que,
al ser los enzimas de naturaleza proteica, al igual queotras proteínas, se desnaturalizan y pierden
su actividad si el pH varía más allá de unos límites estrechos. De ahí la conocida importancia
biológica de los sistemas tampón

En la mayor parte de los casos el pH óptimo está próximo a la neutralidad, en consonancia con
el pH intracelular, pero existen enzimas con pH óptimo muy diverso según sea el pH del medio
en el que habitualmente actúan (los enzimas proteolíticos del jugo gástrico tienen pHs óptimos
próximos a 2 ya que este es el pH de dicho jugo). Por último existen algunos enzimas a los que
el pH no afecta en absoluto.

EFECTO DE LA TEMPERATURA:

Al igual que ocurre con la mayoría de las reacciones químicas, la velocidad de las reacciones
catalizadas por enzimas se incrementa con la temperatura. La variación de la actividad
enzimática con la temperatura es diferente de unos enzimas a otros en función de la barrera de
energía de activación de la reacción catalizada. Sin embargo, a diferencia de lo que ocurre en
otras reacciones químicas, en las reacciones catalizadas por enzimas se produce un brusco
descenso de la actividad cuando se alcanza una temperatura crítica. Este efecto no es más que
un reflejo de la desnaturalización térmica del enzima cuando se alcanza dicha temperatura. La
Temperatura influye en la actividad enzimática. En general por cada 10ºC que aumente la
temperatura la velocidad de la reacción aumenta de 2 a 4 veces. Esta regla se cumple hasta que
la temperatura alcanza un valor máximo (T° óptima)donde la actividad es máxima. Esto se debe
a que al aumentar la T° aumenta el movimiento de las moléculas y, por tanto aumenta la
probabilidad de encuentro entre el S y el E.Si la T° aumenta por encima de la T° óptima,
disminuye e incluso cesa la actividad enzimática debido a que la enzima se desnaturaliza. Cada
enzima posee una T°óptima, en las enzimas humanas suele estar alrededor de 37ºC. Los
animales poiquilotermos debido a que carecen de mecanismos para regular la Tª corporal, se
ven obligados a hibernar en la estación fría pues la actividad de sus enzimas debido a las bajas
temperaturas es muy baja

INHIBIDORES:

Son compuestos químicos que se unen al enzima, en distintos puntos del mismo y disminuyen o
incluso impiden su actividad. Estos compuestos pueden ser de distintos tipos: iones, moléculas
orgánicas y a veces el producto final de la reacción. A la acción que realizan se la denomina
inhibición. La inhibición puede ser:·Inhibición irreversible: Cuando el inhibidor impide
permanentemente la actividad enzimática, bien porque se une de forma permanente con
grupos funcionales importantes del centro activo o bien porque altera su estructura. A estos
inhibidores se les denomina venenos y a la inhibición que realizan se la denomina
envenenamiento del enzima. Ej. La penicilina que inhibe las enzimas que sintetizan la pared
bacteriana. El ión cianuro actúa sobre la citocromo oxidasa (enzima respiratorio).·Inhibición
reversible: El inhibidor se une al enzima de forma temporal mediante enlaces débiles e impide el
normal funcionamiento del mismo, pero no la inutiliza permanentemente. Puede ser de dos
tipos:

Competitiva: El inhibidor es similar al sustrato y se puede unir al centro activo del enzima
impidiendo que lo haga el sustrato. Es decir ambos, inhibidor y sustrato compiten por unirse al
centro activo del enzima. La acción suele anularse aumentando la concentración del sustrato.

No competitiva: El inhibidor no compite con el sustrato, puede actuar de 2 formas:-Sobre el


enzima, uniéndose a el en un lugar diferente al centro activo y modificando su estructura lo que
dificulta que el enzima se pueda unir con el sustrato.-Sobre el complejo E-S uniéndose a él y
dificultando su desintegración y por lo tanto la formación de los productos.
IV- MATERIALES:

Gradilla Mechero de alcohol Mortero con pilón

Hígado de pollo Tubos de Agua oxigenada


prueba
dx150/13x100

Dióxido de Manganeso Azul de metileno Aceite


V. PROCEDIMIENTO:

A) Comparación de la Actividad Catalítica entre un Catalizador Químico (MnO2) y un


Catalizador Biológico (enzima Catalasa)

MnO2 + 2 H2O2→ 2 H2O + O2+ MnO2

Catalasa + 2 H2O2→2 H2O + O2+ Catalasa

PREPARACION:

1. En un mortero preparar un homogenizado de hígado con la solución salina de NaCl 0,9%


2. Rotular los tubos del 1 al 3.
3. Colocar en cada tubo 2 mL de Peróxido de hidrógeno (H2O2).
4. Agregar al:
tubo 1: ½cucharadita de hígado de pollo entero
tubo 2: ½ cucharadita de hígado de pollo triturado
tubo 3: 2 g dióxido de manganeso (MnO2)

B). Actividad de la Enzima Succinato Deshidrogenasa (SDH) o Deshidrogenasa Succínica

1. En un mortero preparar un homogenizado de hígado con la solución de NaCl 0,


2. Disponer de 2 tubos de 13x100 mm y roturarlos (tubo 1 y tubo 2)
3. Colocar en cada tubo 1 mL de succinato y luego 1 mL de buffer fosfato
4. Añadir 2 gotas de azul de metileno, agitar y anotar el color observado.
5. Al tubo1 incorporar 0,5mL de aceite por las paredes y dejar en la gradilla- NO MOVER
6. Al tubo 2 agregar 1mL de homogenizado de hígado e inmediatamente incorporar
0,5mL de aceite por las paredes- NO MOVER
7. Hacer el seguimiento de la decoloración de los tubos por 20min.
8. Interpretar los resultados comparando ambos tubos.
VIII. CUESTIONARIO:

1. Defina qué es un catalizador

Un catalizador puede definirse como una sustancia capaz de hacer que un


sistema químico alcance más rápidamente su estado de equilibrio, sin alterar
las propiedades de dicho equilibrio ni consumirse durante el proceso.
La idea de catalizador proviene de la de catálisis, un proceso que supone la
aceleración de un evento o reacción natural. Así, la catálisis implica la
alteración (tanto natural como artificial) de un proceso y la aplicación de
velocidad sobre el mismo para llegar a su resolución más rápidamente. El
proceso de catálisis puede darse en muchos aspectos en la naturaleza y ser
el resultado natural de la acción de diferentes entes o elementos.

2. ¿ Qué se entiende por el sitio activo de una enzima?

El sitio o centro activo es la zona de la enzima en la que se une


el sustrato para ser catalizado. La reacción específica que
una enzima controla depende de un área de su estructura terciaria. Dicha
área se llama el sitio activo y en ella ocurren las actividades con
otras moléculas. Debido a esto, el sitio activo puede sostener solamente
ciertas moléculas. Las moléculas del sustrato se unen al sitio activo, donde
tiene lugar la catálisis. La estructura tridimensional de éste es lo que
determina la especificidad de las enzimas. En el sitio activo sólo puede
entrar un determinado sustrato. Dentro del centro activo hay ciertos
aminoácidos que intervienen en la unión del sustrato a la enzima y se
denominan residuos de unión, mientras que los que participan de forma
activa en la transformación química del sustrato se conocen como residuos
catalíticos.

3. ¿Qué tipo de enzima es la catalasa y cuál es su importancia en el


metabolismo?

La Catalasa es una enzima lítica que se encuentra dentro de los


Peroxisomas, se encuentra en la célula animal y vegetal y tiene como
función degradar al Peróxido de Hidrógeno (H2O2) sustancias tóxicas
para la célula en Agua y O2 molecular.
Es decir que la función de esta enzima en los tejidos es necesaria porque
durante el metabolismo celular, se forma una molécula tóxica que es el
peróxido de hidrógeno, H2O2 (agua oxigenada).
Esta enzima, la catalasa, lo descompone en agua y oxígeno, por lo que se
soluciona el problema.
La Catalasa es una enzima presente en muchos tipos de células. Su
función es proteger a las células del efecto tóxico del peróxido de
hidrógeno (agua oxigenada) producido en distintas reacciones redox
Cataliza la reacción: 2 H2O2 -----------> 2 H20 + O2

4.¿Qué es laenzima deshidrogenasa succínica, qué reacción cataliza y por


qué se relaciona con el síndrome de KearnsSayre?

 La enzima succinato deshidrogenasa (SDH), succinato coenzima Q


reductasa o complejo II mitocondrial (número EC1.3.5.1) es un complejo
proteico ligado a la membrana interna mitocondrial que interviene en
el ciclo de Krebs y en la cadena de transporte de electrones, y que
contiene FAD (flavín-adenín-dinucleótido) unido covalentemente.

La enzima succinato deshidrogenasa es la única enzima del ciclo de Krebs


que no se encuentra en la matriz mitocondrial, sino que en la membrana
mitocondrial interna, con el sitio de unión del sustrato accesible desde la
matriz. Es además la única en el ciclo asociada a un grupo prostético
flavínico (FAD) mediante el cual los equivalentes de reducción del
succinato son transferidos a la ubiquinona, componente de la cadena de
transporte de electrones. En general la función bioquímica del FAD es
oxidar alcanos a alquenos, mientras que el NAD+ oxida alcoholes a
aldehídos o cetonas. El malonato es un fuerte inhibidor competitivo de la
enzima.
 Síndrome de Kearns-Sayre.

El síndrome de Kearns-Sayre es una enfermedad mitocondrial poco


frecuente caracterizada por oftalmoplejía externa crónica progresiva y
retinopatía pigmentaria de inicio antes de los 20 años de edad, que se
asocia a un grupo heterogéneo de manifestaciones clínicas, entre las que
se incluyen alteraciones de la conducción cardiaca, debilidad muscular,
neuropatía periférica, diabetes mellitus, síndrome de baja talla y sordera
neuro-sensorial.
IX.BIBLIOGRAFIA
>http://misdeberes.es/tarea/121728

>http://www.100ciaquimica.net/temas/tema6/punto6.htm

>http://www.aepmi.org/publico/patologias.php

>https://cajalesygalileos.wordpress.com/2012/12/13/los-lisosomas-y-la-autofagia-
scitable/

>http://elprofedebiolo.blogspot.com/2010/02/organelas.html

>http://es.wikipedia.org/wiki/Lisosoma

>http://recursos.cnice.mec.es/biosfera/alumno/2bachillerato/La_celula/contenidos11.htm

>http://www.lookfordiagnosis.com/mesh_info.php?term=Lisosomas&lang=2

>http://es.slideshare.net/sathycrlovehandel/cloroplastos-y-otro-plastidios

You might also like