Tráfico vesicular

Biología celular – 2005-06

El transporte a lo largo de la ruta de secreción es vesicular, con diferentes tipos de vesículas que se forman en los diferentes compartimentos y que son direccionadas de manera eficiente hacia el compartimento de destino.

Lodish (2000) Molecular Cell Biology, f. 17-50, p. 734

Tráfico vesicular

Las etapas en un paso de transporte mediado por vesículas (tráfico vesicular) : 1. ‘Sorting’ o clasificación del material a ser transportado 2. Vesiculación (‘budding’), mediante el reclutamiento de proteínas citosólicas que recubrirán la vesícula formada 3. Desprendimiento de las proteínas de la cubierta 4. Direccionamiento / transporte de la vesícula, a un destino especificado por las proteínas de direccionamiento. 5. Reconocimiento de la membrana diana. 6. Fusión de las membranas y liberación del contenido del orgánulo

Lodish 2003, table 17-1

TCB 8 : 2-10 (tcb8-01-02) Lodish (2000) Molecular Cell Biology.Componentes de las vesículas vesiculación Caveolina transcitosis ?. señalización? Tráfico vesicular en la ruta de secreción Caveolin CCV : ‘Clathrin coated vesicles vesiculación COPI COPII Farquhar and Palade (1998) The Golgi apparatus : 100 years of progress and controversy. fig 17-51 .

fig. TCB 7: 99-102.Cubiertas de clatrina. bar 230 nm Distribución de las diferentes cubiertas en la via de secreción CCV vesiculación COPI COPII . 17-52 Robinson (1997) Coats and vesicle budding. COP I y COPII vesiculación Figure 17-35 Lodish (2000) Molecular Cell Biology.

Nature (elec publis Oct 2004) . con una similaridad de un 60%. proteína heterodimérica formada por 3 cadenas pesadas (1675 AA. Con un diámetro entre 50 y 100 nm El elemento básico es la clatrina. en una estructura denominada triskelion. 180 Kda. codificada por HC17) y tres ligeras (35-40 Kda). Grigorieff. Existen dos tipos de cadenas ligeras. Harrison. vesiculación La polimerización de clatrina es dependiente de concentración (conc crítica) Fotin. Walz (2004) ‘Molecular model for a complete clathrin lattice from electron cryomicroscopy. Cheng. Kirchausen.Vesículas recubiertas de clatrina Polimerizacion clatrina (web) Descubierta a partir de aislamiento de vesículas recubiertas (‘coated pits’) en oocitos de Aedes aegypti. alfa y beta.

vesiculación Steer y Hanover (1991) Intracellular transport of proteins. Steer y Hanover (1991) Intracellular transport of proteins. Cambridge Univ Press. Cambridge Univ Press. p. 61 ¿cómo se encuentra la clatrina en la célula? vesiculación En la célula la autopolimerización de la clatrina está limitada pues el pool de triskelions soluble está secuestrado por hsp70 (chaperona citosólica). p. en un mecanismo análogo al de respuesta a las proteínas mal plegadas del RER. 72 Uncoating 70 Kda ATPase .

reconocen el cargo . la subunidad micra2 de AP2 se une a : TyrXXhidrof / LL Los adaptadores : .reclutan proteínas auxiliares Rolbinson y Bonifacino (2001) Adaptor related proteins COCB 13:444-453 (cocb13-04-13) TGN Rolbinson y Bonifacino (2001) Adaptor related proteins COCB 13:444-453 (cocb13-04-13) GGA : Golgi-localized γ ear containing.La clatrina se une a las membranas mediante unas proteínas : adaptadores Entre la red de clatrina y la membrana de la vesícula hay un espacio de 20 nm en el que se encuentran las partículas de proteínas adaptadoras. ARF binding protein vesiculación . ‘Mickey mouse’ structures Se han descrito 4 complejos de adaptadores diferentes vesiculación Los adaptadores reconocen las regiones de membrana que contienen receptores con la señal de transporte . Por ejemplo. de 350 Kda.reclutan clatrina .

Miembros de la familia de proteínas Stoned B vesiculación Rolbinson y Bonifacino (2001) Adaptor related proteins COCB 13:444-453 (cocb13-04-13) .

f. Lodish (2000) Molecular Cell Biology. incapaz de endocitar via ‘coated pits’. La hidrólisis de GTP regula la contracción de la dinamina. se une al coated pit y polimeriza. Identificada en Drosophila como shibire. p. Cambridge Univ Press. 17-55. de 900 AA.vesiculación Purified clathrin triskelion reacted with HA-II Steer y Hanover (1991) Intracellular transport of proteins. vesiculación Terminales nerviosos incubados con GTPgammaS. Se aisló a partir de shibirets. Citosólica. Anti-dinamina. p. Los mutantes dinamina GTP.forman largos ‘cuellos’ que no se separan de la membrana. 737 Takel et al (1995) Nature 374 : 186 . 66 Dinamina Proteína GTPasa asociada a los ‘coated pits’.

Unión de triskelions. Separación de la vesícula. Pérdida de la cubierta proteica Lodish (2000) Molecular Cell Biology. polimerización vesiculación 3. 737 . f. p.vesiculación Modelo de formación de ‘coated pits’ 1. recubierta 6. Unión de dinamina. contracción 5. Reconocimiento de la membrana (y de los receptores) por los adaptadores 2.54. Crecimiento de la malla de triskelions 4. 17.

p20. delta. ATP. 738 Sistema de transporte intra-Golgi libre de células vesiculación Lodish (2000) Molecular Cell Biology. ARF1) y que polimerizan sobre la vesícula con unas funciones similares a las de los adaptadores y la clatrina. épsilon. Recubiertas por unos complejos citosólicos que denominó coatómero (alfa. 739 . f. gamma.Vesículas COPI Aisladas por Rothman et al en ensayos ‘in vitro’ de transporte intraGolgi ( Golgi. p. etc…). f. soluciones tampon. purificadas de Golgi de hepatocitos de rata incubado con citosol y ATP Lodish (2000) Molecular Cell Biology. reconociendo la región citosólica de receptores y deformando la membrana para formar la vesícula. 17-56. vesiculación Vesículas COPI. beta. Implicadas en el transporte retrógrado dentro del complejo de Golgi y entre éste y el RER. 17-57. p.

. β’ y ε reconoce la secuencia KKXX in vivo ARF ADP-ribosilation factor.ARF1-yeast vs ARF1-hum es 77% identico. ARF2-yeast vs ARF5-hum es 69% identico . N-term myristoilated Coatomer 70 kDa complex comprised of seven units (α. por ej clatrina-AP1 en TGN. Se han descrito tres en levaduras. ARF1.En levaduras ARF1 y ARF2 son identicos en un 96%. smGTP-BP : ARF-GDP (citosólica) ARF-GTP (unida a membrana) vesiculación La unión de ARF a la membrana se produce por el ácido miristílico de N-ter en una región de 17 residuos amfipáticos.es letal . β.arf2. Se conoce muy poco 3. δ. en membrana plasmática / endosomas Jackson y Casanova (2000) Turning on ARF: the Sec7 family of guanine-nucleotide exchange factors. son intercambiables.clase III.clase I. β. δ y ξ respectivamente. ARF6. (tcb10-2-11. SEC27.Se han diferenciado tres clases de ARF en mamíferos : 1. clatrina-AP3 en endosomas y COPI en Golgi 2. 2 y 3. en Saccharomyces cerevisiae El subcomplejo α. Ensamblaje de vesículas en Golgi-ER-endosomas. SEC21. β’. χ. y el doble mutante arf1. χ.pdf) . ε y ξ) RET1. β’. TCB 10 : 60-67. RET2 Y RET3 codifican las subunidades (α. y seis en células de mamífero.pdf) Arf1p 20kDa smGTP-BP.clase II.Componentes citosólicos de las vesículas COPI vesiculación Wieland y Harter (1999) COCB 11:440-446 (cocb11-4-05. ARF4 y 5. SEC26.

vesiculación Jackson y Casanova (2000) TCB 10 : 60-67 (tcb10-2-11.pdf) .Papel de ARF-GTP en el ensamblaje de COPI y en la selección del cargo vesiculación Wieland y Harter (1999) COCB 11:440-446 (cocb11-4-05.pdf) Chavrier y Gould (1999) COCB 11 : 466-475(cocb11-4-09.pdf) Modelo de la acción de ARF en el ensamblaje de las cubiertas COPI ARF precisa de GEF específicas. Todas ellas (sec7 family of GEF) contienen un dominio Sec7 (200 AA).

liberando el coatómero. ARF-GTP se activa (une GTP) 2. 740 6. 17-58. p. 17-58. Separación de la vesícula (requiere Fatty-Acil-CoA) (?) vesiculación Lodish (2000) Molecular Cell Biology. 740 . ARF hidroliza GTP. p. ARF-GTP se une a su receptor en la membrana del Golgi 3. ‘Budding’ 5. f. Reclutamiento de coatómero 4. f.Modelo de formación de las vesículas COPI 1. vesiculación La vesícula queda descubierta Lodish (2000) Molecular Cell Biology.

Células de levadura que expresan mutantes ts de componentes de COPI presentan fenotipo sec clase B (retención ER) ¿está COPI implicada en la salida de ER a Golgi? 2. produciendo un fenotipo sec clase B vesiculación Lodish. Mutantes ts de COP alfa/ beta no reciclan las proteínas del RER escapadas… con el tiempo el RER se queda sin proteínas propias. reconocida por COP alfa / beta. lo que impide la salida de las de nueva síntesis. Receptor KDEL. recuperación de proteínas del RER. 2003 . tiene señal KKXX en dominio citoplasmático.Positive and negative feedback mechanisms control the guanine nucleotide bound by ADPribosylation factor (ARF) vesiculación Roth (1999) Lipid regulators of membrane traffic through the Golgi complex TCB 9 : 174-179 Evidencias de la implicación de las vesículas COPI en el transporte retrógrado en el Complejo de Golgi y entre éste y el RER 1.

Sec23 complex Sec13 complex . en los que la distancia ER . Las proteínas del RER reclutadas en las vesículas COPII contienen una señal diacídica (Asp-X-Glu).Vesículas COPII Aisladas a partir de un extracto del RER incubado con citosol. similar a ARF-type GTP-BP Formado por Sec23p y Sec24p. una proteína fibrosa que interacciona con los dos complejos previos (Sec23/24 y Sec13/31) actuando a modo de ‘scaffold’ de la vesícula. Formado por Sec13p y Sec31p. La unión de Sar1-GTP a la membrana recluta el complejo formado por Sec23 / Sec24. Posteriormente se une Sec16. … Mutantes de COPII son sec de clase B Sec12 cataliza la activación de Sar1 (homóloga a ARF) intercambiando GDP por GTP. se ha observado la fusión de varias vesículas COPII formando el ‘compartimento intermedio ER-Golgi’. Sec24p es necesaria para la unión del complejo Sec13 a la membrana. ATP. Sec23p es la proteína activadora GTPasa de Sar1p. seguido de la unión de Sec13 / Sec31. vesiculación Componentes citosólicos de las vesículas COPII Sar1p vesiculación 24 kDa smGTP-BP. GTP. Estas vesículas (CI) son transportadas por MT hasta el Golgi. En otros casos.Golgi era mayor. Experimentos con proteínas quiméricas VSV-G-GFP muestran que las vesículas COPII migran hasta 1 micra para fusionarse con el Golgi.

Secuencia de reclutamiento de los componentes citosólicos de COPII en una membrana del RER vesiculación GEF Kuehn y Scheckman (1997) COPII and secretory cargo capture into transport vesicles COCB 9 :477-483 Desprendimiento / direccionamiento / reconocimiento Todas las vesículas formadas (CCV. COPI Y COPII) pierden las cubiertas poco después de formarse. Estas proteínas son comunes a todos los tipos de vesículas. . pero en ellas permanecen un conjunto de proteínas implicadas en el direccionamiento y reconocimiento de la membrana diana : hipótesis SNARE.

γ-SNAP. reconoce a la SNARE-v complementaria y asegura el reconocimiento de la membrana aceptora. 5. Es el receptor vesicular. Receptor de la membrana diana. 3. familia ras (Rab = ‘ras from brain’. NSF.Elementos de direccionamiento de vesículas y reconocimiento de membranas 1. queda descubierto cuando la vesícula pierde la cubierta. Proteína de fusión. Proteína smGTP-BP. 200 AA. 4. característico de cada membrana donadora. Implicada en la activación de los mecanismos que aseguran el transporte de la vesícula y el reconocimiento de la membrana diana. ubícua. Más de 30 conocidas en mamíferos. Receptor de la membranan de la vesícula. 2. ATPasa 6. Rab. N-etilamide sensitive factor. proteína soluble. smGTPase. ‘Soluble NSF Attached Protein’ direccionamiento / reconocimiento direccionamiento / reconocimiento . SNAP-25. SNARE-t. SNARE-v.

Modelo de ciclo funcional de las proteínas Rab direccionamiento / reconocimiento Chavrier y Goud (1999) The role of ARF and GTPases in membrane transport COCB 11 : 466 direccionamiento / reconocimiento .

Fusión ectoplásmica. En general se diferencian dos tipos : 1. en la que son las caras de las membranas que se encuentran en contacto con el medio extracelular las que se fusionan (fertilización. Fusión endoplásmica. Gran parecido entre las estructuras de las proteínas fusogénicas celulares y las que permiten la entrada de virus (p ej hemaglutinina) 2. formación de sincitios. entrada de virus a las células.direccionamiento / reconocimiento Chavrier y Goud (1999) The role of ARF and GTPases in membrane transport COCB 11 : 466 La fusión de membranas El proceso de fusión de membranas es muy común en multitud de procesos celulares. Lípidos que inhiben la fusión viral también inhiben la fusión de membranas en general. etc…) Todos los procesos de fusión de membranas son similares 1. . fusión 2. en la que las caras citosólicas de las membranas se fusionan.

pdf) . then opens to first form a pore than then radially expands to mix lipids between protein subunits’ Zimmerberg (2001) How can proteolipids be central players in membrane fusion? TCB 11 : 233 (tcb11-06-11. It has a specific geometry that differentially packs lipids’ fusión Connexon like structure : ‘this proteinaceous fusion pore is initially closed.pdf) Un modelo de fusión mediante proteínas : subunidad VO de la ATPasa vacuolar fusión Modelo de rotación de la subunidad VO. Zimmerberg (2001) How can proteolipids be central players in membrane fusion? TCB 11 : 233 (tcb11-06-11.Dos hipotéticas estructuras del sitio inicial de fusión de membranas Stalk : ‘is the minimal lipidic structure that merges the contacting leaflets of the fusing bilayers. Las subunidades de una membrana intercambian con las de la otra membrana y como consecuencia las membranas se fusionan.

edit.pdf) Proteína G Membrana Nucleocápside Genoma fusión Ciclo vital de un virus recubierto (VSV) en una célula eucariota De Alberts. 3rd. Molecular Biology of the Cell.Pero al final… el intermediario es siempre un lípido. pues las dos láminas de las membranas se tienen que mezclar… fusión Zimmerberg (2001) How can proteolipids be central players in membrane fusion? TCB 11 : 233 (tcb11-06-11. .

p. 744 . N-ter) fusión Lodish (2000) Molecular Cell Biology f.5 en la hemaglutinina de influenza-v Lodish (2000) Molecular Cell Biology.0 a 5.Tinción negativa de virus influenza Hemaglutinina de Influenza-v En el Golgi furina corta formando dos subunidades HA1 y HA2 (péptido de fusión. fusión Cambios conformacionales inducidos por un cambio de pH de 7. 6-13 y f. f. p. 17-60. 17-27.

p. f. 745 Entrada del virus HIV a CD4+ fusión HIV entry Inhibidores unión Inhibidores co-receptor Inhibidores de fusion .fusión Para la fusión de membranas inducida por HA-influenza es necesaria la participación de entre 9 y 12 moléculas. 17-61. Lodish (2000) Molecular Cell Biology.

pdf) . SNARES only? COCB 11 : 447-452 (tcb11-4-06.membrana? fusión Mayer (1999) Intracellular membrane fusion.…¿y como se explica la fusión vesícula . SNARES only? COCB 11 : 447-452 (tcb11-4-06.pdf) Dos modelos alternativos para las fases finales de la fusión de vesículas A) SNARE driven fusion / B) SNARE function as an intermediate stage fusión Calmodulin Protein phosp1 Mayer (1999) Intracellular membrane fusion.

SNAP en la interacción SNARE direccionamiento / reconocimiento Hay y Scheller (1997) SNARE and NSF in targeted membrane fusion COCB 9 : 505-512 direccionamiento / reconocimiento .Modelos de acción de NSF .

reciclaje direccionamiento / reconocimiento …¿y el reciclaje de todos los componentes a las mebranas de destino? … esta será otra historia .

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