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Universidad de Guadalajara- C.U.C.B.

A
Laboratorio de Cultivo de Tejidos (Departamento de Producción Agrícola)

MEDIO DE CULTIVO MS

Sales mg/litro

NH4NO3 1650
KNO3 1900
CaCl2 . 2H2O 440
MgSO4. 7H2O 370
KH2PO4 170
Na2 EDTA 37.3
FeSO4. 7H2O 27.8
H3BO3 6.2
MnSO4. H2O 22.3
ZnSO . 7H2O 8.6
KI 0.83
Na2 MoO4. 2H2O 0.25
CuSO4. 5H2O 0.025
CoCl2. 6H2O 0.025

Murashige, T. and F. Skoog. 1962. A revised medium for rapid growth and bio-assays with tobacco tissue
cultures. Physiol. Plant. 15: 473-497

PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO 1


Universidad de Guadalajara- C.U.C.B.A
Laboratorio de Cultivo de Tejidos (Departamento de Producción Agrícola)

SOLUCION STOCK DE MACRONUTRIENTES MS (Murashige y Skoog, 1962)

COMPUESTO PARA AFORAR PARA AFORAR BALANZA


A 500 ml A 1 litro
NH4NO3 82.5 g 165 g GRANATARIA
KNO3 95.0 g 190 g GRANATARIA
MgSO4·7H2O 18.5 g 37 g GRANATARIA
KH2PO4 8.5 g 17 g GRANATARIA

NH4NO3 Nitrato de Amonio


KNO3 Nitrato de Potasio
MgSO4·7H2O Sulfato de Magnesio Heptahidratado
KH2PO4 Fosfato de Potasio Monobásico

NOTA: esterilizar la solución en autoclave.


Disolver uno a uno los compuestos, agregar el siguiente hasta que se haya
disuelto el anterior (en el mismo orden marcado en la tabla).
Almacenar a temperatura ambiente.

SOLUCION STOCK DE MACRONUTRIENTES LOG (Modificación al MS)

COMPUESTO PARA AFORAR PARA AFORAR BALANZA


A 500 ml A 1 litro
NH4NO3 20 g 40 g GRANATARIA
KNO3 95.0 g 190 g GRANATARIA
MgSO4·7H2O 18.5 g 37 g GRANATARIA
KH2PO4 8.5 g 17 g GRANATARIA

* En el medio LOG solo se modifica la fuente de nitrógeno en comparación al MS.

PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO 2


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Laboratorio de Cultivo de Tejidos (Departamento de Producción Agrícola)

SOLUCION STOCK DE MICRONUTRIENTES MS

COMPUESTO PARA AFORAR PARA AFORAR BALANZA


A 500 ml A 1 LITRO
H3BO3 620 mg 1.24 g ANALITICA
MnSO4·H2O 2.23 g 4.46 g ANALITICA
ZnSO4·7H2O 860 mg 1.720 g ANALITICA
KI 83 mg 166 mg ANALITICA
Na2MoO4·2H2O 25 mg 50 mg ANALITICA
CuSO4·5H2O 2.5 mg 5 mg ANALITICA
CoCl2·6H2O 2.5 mg 5 mg ANALITICA

H3BO3 Acido Bórico


MnSO4·H2O Sulfato de Manganeso Monohidratado
ZnSO4·7H2O Sulfato de Zinc Heptahidratado
KI Yoduro de Potasio
Na2MoO4·2H2O Molibdato de Sodio Dihidratado
CuSO4·5H2O Sulfato de Cobre Pentahidratado
CoCl2·6H2O Cloruro de Cobalto Hexahidratado

NOTA: Esterilizar la solución en autoclave.


Disolver uno a uno los compuestos, agregar el siguiente hasta que se haya
disuelto el anterior.
Almacenar a temperatura ambiente.

PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO 3


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Laboratorio de Cultivo de Tejidos (Departamento de Producción Agrícola)

SOLUCION STOCK VITAMINAS L2 (Phillips y Collins, 1979)

COMPUESTO PARA AFORAR PARA AFORAR BALANZA


A 500 ml A 1 litro
TIAMINA 100mg 200 mg ANALITICA
PIRIDOXINA 25 mg 50 mg ANALITICA
INOSITOL 12.5 g 25 g GRANATARIA

NOTA: La solución stock de vitaminas no se esteriliza, sólo se guardan en


refrigeración para uso inmediato o se congelan para almacenar por más
tiempo.

SOLUCION STOCK DE CLORURO DE CALCIO

PARA AFORAR PARA AFORAR


COMPUESTO BALANZA
A 500 ml A 1 litro
CaCl2·2H2O 10 g 20 g GRANATARIA

CaCl2·2H2O Cloruro de Calcio Dihidratado

SOLUCION STOCK DE Fe·EDTA

PARA AFORAR PARA AFORAR


COMPUESTO BALANZA
A 500 ml A 1 litro
FeSO4·7H2O 1.392 g 2.784 g GRANATARIA
Na2·EDTA 1.862 g 3.73 g GRANATARIA

FeSO4·7H2O Sulfato Ferroso Heptahidratado


Na2·EDTA Etilendinitrilotetraacetato de Sodio

NOTA: la solución stock de Cloruro de Calcio y Fe·EDTA se esterilizan en


autoclave.
La solución de Fe·EDTA debe almacenarse en refrigeración a 4ºC y en frasco
color ámbar, porque se degrada con la luz.
La solución de Cloruro de Calcio se almacena a temperatura ambiente.

PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO 4


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Laboratorio de Cultivo de Tejidos (Departamento de Producción Agrícola)

PREPARACION DE CONCENTRADO DE MEDIO DE CULTIVO MS

PARA PARA PARA


SOLUCION STOCKAFORAR A AFORAR A AFORAR A
1 LITRO 20 LITROS 50 LITROS
MACRONUTRIENTES 10 ml 200 ml 500 ml
MICRONUTRIENTES 5 ml 100 ml 250 ml
CaCl2·2H2O 22 ml 440 ml 1100 ml
Fe·EDTA 10 ml 200 ml 500 ml
VITAMINAS L2 10 ml 200 ml 500 ml
SACAROSA 30 gr 600 gr 1.5 kg

PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO 5


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Laboratorio de Cultivo de Tejidos (Departamento de Producción Agrícola)

PREPARACION DE REGULADORES DE CRECIMIENTO

2,4-D (Acido 2,4-diclorofenoxiacético)

La solución se prepara en una relación peso/volumen de 1mg/1ml. El 2,4-D se


prepara agregando NaOH 1N (Hidróxido de sodio 1 normal) ó etanol absoluto, gota
a gota hasta que la solución esté totalmente transparente. Posteriormente se afora
con agua bidestilada al volumen deseado en un matraz volumétrico. La solución
debe almacenarse a 4ºC, en un recipiente color ámbar, ya que se degrada con la luz.

BA (Bencilaminopurina)

La solución se prepara en una relación peso/volumen de 1mg/1ml. El BA se prepara


agregando NaOH 1N (Hidróxido de sodio 1 normal) ó HCl (Acido clorhídrico 1
normal) gota a gota hasta que la solución esté totalmente transparente.
Posteriormente se afora con agua bidestilada al volumen deseado en un matraz
volumétrico. La solución debe almacenarse a 4ºC, en un recipiente color ámbar, ya
que se degrada con la luz.

PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO 6


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Laboratorio de Cultivo de Tejidos (Departamento de Producción Agrícola)

PREPARACION DEL MEDIO DE CULTIVO


PARA __________________________
EN _______________________spp.

PARA
COMPONENTES AFORAR A
1 LITRO
MACRONUTRIENTES 10 ml
MICRONUTRIENTES 5 ml
CaCl2 22 ml
Fe·EDTA 10 ml
VITAMINAS L2 10 ml
SACAROSA 30 gr
AGAR ____ gr
Auxina__________ ______ mg
Cito´s___________ ______mg
pH 5.8 ± 0.05

NOTA: el pH se ajusta agregando NaOH 1N para subirlo o HCl 1N para


bajarlo.
El agar se adiciona después de haber medido el pH y se debe disolver en el
medio de cultivo, de preferencia en un horno de microondas antes de ser
vaciado en los contenedores.
El medio de cultivo se esteriliza en autoclave a una temperatura de 121ºC y a
una presión de 1.3 kg/cm2 durante 15 minutos.
El medio de cultivo se puede preparar en grandes cantidades, incluyendo los
reguladores de crecimiento, excepto el agar y se almacena en congelación. Al
momento de preparar el medio de cultivo se mide el pH y se agrega el agar.

PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO 7

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