You are on page 1of 12

ARTÍCULO ESPECIAL

Evaluación nacional del diagnóstico
de la resistencia a la proteína C activada
Coordinadores:
Guadalupe Montiel-Manzano,1 Aurora de la Peña-Díaz,2 Abraham Majluf-Cruz3

Participantes:
Gabriela Cesarman-Maus,4 Norma Corona-de la Peña,3 Donají Cruz-Cruz,5 Elizabeth Gaminio,6
Carlos Martínez-Murillo,7 Teresa Mayagoitia,8 Enrique Miranda-Peralta,6 Teresita Poblete,9
Sandra Quintana-Martínez,7 Raúl Ramírez,10 Daniel Razo,11 Adriana Ruiz de Chávez-Ochoa,3
Aurelia Virginia Reyes-Núñez,5 Rosario Salazar,8 Guadalupe Virginia Vicencio-Santiago,12 Rosario Villa4
1
Laboratorio de Coagulación Especial, Hospital de Especialidades, CMN SXXI, IMSS, México, D. F.
2 Laboratorio de Farmacología, INCICh, México, D. F.
3 Unidad de Investigación Médica en Trombosis, Hemostasis y Aterogénesis, HGR Gabriel Mancera, IMSS, México, D.F.
4 Departamento de Hemato-Oncología. INCMNSZ, México, D. F. 5 Laboratorios Clínicos de Puebla, Puebla, Pue.
6 Laboratorio de Hematología. HGM, México, D. F. 7 Banco Central de Sangre, CMN SXXI, IMSS, México, D. F.
8 Laboratorio de Hematología. HU UANL, Monterrey, N. L. 9 Laboratorio de Coagulación. HC CMN SXXI, IMSS, México, D. F.
10 Laboratorio de coagulación, Laboratorios Carpermor, México, D. F. 11 Laboratorio de Coagulación, Hospital ABC, México, D. F.
12 Hospital de Enfermedades del Corazón y del Tórax No. 34, IMSS, Monterrey, N. L.

Por el Comité Mexicano de Trombosis y Hemostasia. Agrupación Mexicana para el Estudio de la Hematología, A. C.

National evaluation about the RESUMEN
diagnosis of activated protein C resistance
La trombofilia o estado protrombótico aparece cuando la acti-
ABSTRACT vación de los mecanismos hemostáticos supera la capacidad
anticoagulante fisiológica, favoreciendo la aparición de trom-
Thrombophilia or prothrombotic state appears when activa- bosis. La trombosis es la causa de muerte más común a nivel
tion of blood hemostatic mechanisms overcomes the physio- mundial y debido a su gran morbimortalidad asociada, debe
logical anticoagulant capacity allowing a thrombotic event. insistirse en la identificación oportuna de un estado trombofí-
Thrombosis is the leading worldwide mortality cause and lico. El estudio de la trombofilia permite identificar individuos
due to its high associated morbidity and mortality, it should con riesgo para sufrir una trombosis. Esta reunión se conci-
be insisted in the opportune identification of a thrombo- bió con la intención de analizar el estado actual del diagnósti-
philic state. The study of thrombophilia identifies individu- co de la trombofilia en México y para sentar las bases para un
als at high risk for thrombosis. This meeting was conceived consenso nacional acerca del diagnóstico de trombofilia, así
first to analyze the current status of the diagnosis of throm- como para establecer un centro de referencia y control de cali-
bophilia in Mexico and second to create the base for a na- dad de problemas trombofílicos. Ya que la búsqueda intencio-
tional consensus for thrombophilia screening and for the es- nada de la resistencia a la proteína C activada (RPCA) y de
tablishment of a national center for laboratory reference and la mutación Leiden del FV, parece ser una prioridad tanto en la
quality control for thrombophilia. Since searching of acti- atención clínica como en los programas de salud pública en
vated protein C resistance (APCR) and FV Leiden seem to nuestro país, se decidió abordar inicialmente estos dos pro-
have priority either in the clinical setting and in public blemas como modelo para analizar el estado actual del diag-
health services, it was decided to start with these two abnor- nóstico de la trombofilia en el laboratorio clínico. Aunque se
malities as a model to analyze the current status of thrombo- conocen en la actualidad múltiples anormalidades trombofíli-
philia diagnosis in the clinical laboratory. At this time, se- cas, sin duda, la más importante es la RPCA, la cual se en-

358 de Investigación
Revista Clínica
Montiel-Manzano G, et/ al.
Vol.Evaluación
55, Núm. nacional
3 / Mayo-Junio, 2003 / deppla358-369
del diagnóstico resistencia a la proteína C activada. Rev Invest Clin 2003; 55 (3): 358-369
Versión completa de este artículo disponible en internet: www.imbiomed.com.mx

RPCA hereditaria aparece. Protein C. zación del recurso disponible en nuestro país para un diagnós- The conclusions of this national reunion pretend to opti. primera causa de muerte con 66. La primaria aparece cuando los mecanismos an. La vated FV to be inactivated by activated protein C.6 secundaria.000 mueren du- Un trombo es la formación de un coágulo en el lu.2 mientras que la de tromboembolia pulmonar por su morbimortalidad asociada y costos de todos es de 139/100. la formación mismo país. Así.000 habitantes.1 La trombosis venosa profunda es de 159/100. las trombosis son tan frecuentes y de- ca. When activated PC is added to plasma from pa. la enfermedad coronaria isquémica es la y que pueden beneficiarse de una profilaxis oportu. Procoagu. APCR remains the most important cause of thrombo. na. tico más amplio y económico de los pacientes con trombosis. rante la primera hora del evento agudo). Resistencia a la C resistance. Los acuerdos de esta reunión pretenden lograr la optimi- index: aPTT post-activated PC / aPTT pre-activated PC. accounting for as much as 20% to 60% of all venous sistente a la degradación por la PC activada. mize the available resources in our country in order to allow a wide and less-expensive diagnosis of patients with throm- bosis. et al. lo que ocasiona que una Arg sea reem- at the nucleotide 1691 of the FV gen inducing an Arg506Glu plazada por Glu en el aminoácido de la posición 506. casos son fatales y en 30% de los afectados se en- La trombofilia o estado protrombótico aparece cuentra una trombofilia primaria. la PCA y la producción de trombina no disminuye. La incidencia de trombo es siempre un fenómeno patológico. APCR is a consequence of the resistance of acti. thrombin production is not RPCA. se calcula que en los Estados más frecuentes durante 1994. (750.5 Veintiséis por ciento de los pacien- travascular de trombina y favoreciendo la aparición tes hospitalizados sin profilaxis antitrombótica desa- de trombosis. Key words. brovasculares” e “infarto cerebral” (excluyendo los Montiel-Manzano G.000 casos anuales. por una mutación lant activity of activated FV increases the risk of thrombosis. Proteína C. La prueba funcional para medirla evalúa el tiempo de inhibited. za una incidencia de hasta 33% con una mortalidad condicionando un incremento de la generación in. INTRODUCCIÓN nosa. puntual que cambia una adenina por guanina en el nucleótido Hereditary APCR is almost always due to a point mutation 1691 en el gen del FV. casi siempre. anualmente se presentan 300.000 habi- trombosis constituye un grave problema de salud tantes. Cuando se agrega PCA al 100-fold. Trombosis. FV Leiden.2 En este mismo país se describen anualmente 1. éste resiste el efecto de tients with FV Leiden.4. Cerca de 70% de estos tipos que de ella derivan.088 Unidos de Norteamérica mueren anualmente casi un nuevos casos bajo los rubros “enfermedades cere- millón de personas debido a trombosis arterial o ve. The functional tromboplastina parcialmente activada (TTPa) en una muestra test evaluates the partially activated thromboplastin time antes y después de agregar PCA y se informa como un índice (aPTT) in a plasma sample before and after adding activa. Heterocygous carriers of FV Leiden have a tadores heterocigotos de esta mutación es 5-10 veces mayor thrombotic risk 5 to 10 times higher than general population que en la población normal. Esto es la fect of activated PC. la detección de trombofilia antes o des. 55 (3): 358-369 359 . vantes que nos permiten conjeturar acerca de su im- tes que tienen un incremento del riesgo trombótico pacto. frecuencia y mortalidad. hereditaria o adquirida. Aunque el mecanismo de 250. La actividad pro- thrombosis.500. 125. proteína C activada (RPCA). de enfermedad vascular cerebral isquémica y 350.000 casos de infarto agudo de miocardio Impacto de la trombofilia en la medicina moderna. La RPCA wever. Rev Invest Clin 2003. Thrombosis.000 son fatales y. En México. de sensibilidad estandarizado: TTPa post-PCA/TTPa pre- ted PC. cercana a 10%. mutación substitution in FV molecule. coagulante del FVa incrementa el riesgo de trombosis. de éstos. Trombofilia. Thrombophilia.7 se registraron 2. La trombofilia puede ser primaria o rrollan trombosis o tromboembolia grave. aguda o cróni. This phenomenon is called APCR. Evaluación nacional del diagnóstico de la resistencia a la proteína C activada. y otros gar y tiempo inadecuados. 3 En ese generación es exactamente el mismo.veral thrombophilic abnormalities have been described ho.000 casos del coágulo es una respuesta homeostática de altísi. tromboembolia en los pacientes hospitalizados alcan- cos supera la capacidad anticoagulante fisiológica. plasma de pacientes con el FV Leiden. vastadoras como en otros países y aunque carece- ticoagulantes naturales del organismo fallan. cuentra en 20% a 60% de las trombosis venosas. En el mos de estadísticas tan precisas con respecto a su laboratorio. el riesgo en sujetos homocigotos while the risk for the homocygote state is increased 50 to se incrementa en 50 a 100 veces. Por otra parte. this last resists the anticoagulant ef. Por otra parte. Activated protein Palabras clave.000 fallecen en menos de cinco años. The result is reported as a standardized sensibility PCA.000 mo valor biológico. This mutation is better known conocida como FV Leiden. Therefore. FV Leiden. El riesgo trombótico para los por- as FV Leiden. mientras que la formación del casos de tromboembolia pulmonar. aparece como consecuencia de que el FV activado (FVa) es re- philia. solamente en el Instituto Mexicano La trombosis es la causa de muerte mundial más del Seguro Social y de acuerdo con los diagnósticos común. la cuando la activación de los mecanismos hemostáti. tenemos algunos datos rele- pués de una trombosis permite identificar a pacien. Por ejemplo.

pro- ron en individuos menores de 54 años.18 La frecuen- geno. La PS ac- de un estado trombofílico y el establecimiento de túa como su cofactor. activar al F-V y al F-VIII y plaquetas y se nea tiene un papel central en múltiples enfermeda. PC y PS y con más frecuencia en tados especiales como la ingesta de anovulatorios los menores de 45 años. se han descrito ta de 17. Éstos son sión clínica. El riesgo PC activada (PCA). medicamentos.apartados “hemorragia intracerebral y otras hemo. alteraciones fibrinolíticas y anormalidades mo.5%.15 La actividad procoagulante del de la PC depende de una proteasa anticoagulante. proteína S la población normal. la PC es trombosis.130 hospitalizaciones que representan 11. deben estar presentes múltiples factores sólo datos de un año. tual adenina por guanina en el nucleótido 1691 en el embarazo. la frecuencia de trombosis durante el embarazo y da por Glu en el aminoácido de la posición 506. por una mutación pun- cian con factores de riesgo circunstanciales (cirugía.9.7 que la presencia de una sola anomalía genética como sin tomar en cuenta gastos por incapacidad laboral factor responsable de la trombofilia es poco proba- temporal y permanente. Por otra parte. disminuir las recu. cientes trombofílicos. casi siempre. ble. frecuencias alélicas de 1% a 8. simultáneamente. taria aparece.10 El tromboembolismo venoso Existen dos tipos de RPCA: hereditaria y adquiri- se desarrolla en 60% a 80% de los pacientes con defi. mutaciones en los genes de la AT-III.16 cofactor II de la heparina o de F-XII. métodos diagnósticos y decisiones folípidos de membrana y forman un complejo que de- terapéuticas que permitan establecer un tratamien. El F-V Leiden es sas de trombofilia como la deficiencia congénita del responsable de más de 90% de los casos de RPCA. etc. la F-Va incrementa el riesgo de trombosis. inmovilización). etc.13.14 La RPCA aparece como consecuencia de que mas anticoagulantes en el ser humano a la par con el F-V activado (F-Va) es resistente a la inhibición el sistema de la antitrombina III (AT-III). La transición de la trom- a la familia del paciente. Por esta patología. Casi 50% de los pacientes orales. des. pero existen muchas otras condiciones asociadas con Resistencia a la trombosis con el mismo impacto. Esta última aparece en relación con algunos es- ciencia de AT-III.11 Existen otras cau. se registraron maria y que producen un número importante de 8. que cuando no están unidas a la membrana.2 bina de anticoagulante a procoagulante resulta de su El estudio de la trombofilia primaria permite iden. infecciones. Evaluación nacional del diagnóstico de la resistencia a la proteína C activada. el riesgo en sujetos homocigo- (PS) y AT-III se identifican en 10% a 15% de los pa.17. se insiste en la identificación oportuna activada por trombina y trombomodulina. PC activada (RPCA) y F-V Leiden Efectos de la trombofilia La PC es una proteína de 56 KDa dependiente de la vitamina K. grada al F-Va y al F-VIIIa. La RPCA heredi- sufre eventos recurrentes. lo que ocasiona que Arg sea reemplaza- III. es decir. en trombina y fibrinógeno que inducen trombofilia pri- edad productiva. mucho más eficientemente to antitrombótico adecuado. de trombosis (eventos vasculares cerebrales). 55 (3): 358-369 . et al. establecer el tiempo de tratamiento anti. Existe cada vez más evidencia que indica cama con un costo cercano a 26 millones de pesos. PC. En la deficiencia de AT. embarazo. mutación Leiden del F-V es 5-10 veces mayor que en teínas anticoagulantes plasmáticas. gen del F-V. El sistema en 20% a 60% de los casos con trombosis veno- de la proteína C (PC) es uno de los principales siste. Estas trombosis se aso. nógeno. la cual inhibe a los cofactores de trombótico para los portadores heterocigotos de la la coagulación Va y VIIIa. Rev Invest Clin 2003. El sistema por la PC activada. sa. incremento en En caucásicos existe un polimorfismo del F-V con la concentración plasmática del F-VIII y del fibrinó. La trombina pierde su capacidad de romper fibri- una trombosis. ya que para que la trombofilia tenga una expre- métodos auxiliares de diagnóstico. leculares de la trombomodulina y del inhibidor de la rragias intracraneales”). mu- puerperio es entre 31% y 44%. Es un anticoagulante que por hidróli- Ante la alta frecuencia y morbimortalidad de la sis inactiva al F-Va y al F-VIIIa. en una institución y de un tipo trombofílicos. PC.13.173 días/ trombosis. fisioterapia. la trombina tiene una función anticoa- trombótico que evite eventos recurrentes y estudiar gulante al activar a la PC. tación conocida como F-V Leiden. tos se incrementa en 50-100 veces. unión a la trombomodulina en la membrana endote- tificar a individuos con riesgo genético para sufrir lial. Quince por ciento de los casos ocurrie. El sistema de la coagulación sanguí.32%. La PCA y la PS se unen a fos- criterios clínicos. vía del factor tisular. PS. con una letalidad inmedia. vaso intacto. En el rrencias.12 se encuentra y los sistemas anticoagulantes naturales. cia de F-V Leiden en caucásicos americanos es de 360 Montiel-Manzano G. convierte en el activador de la PC.8 Los defectos en las pro. da. A su vez. Sus mecanismos reguladores son la fibrinólisis El fenómeno denominado RPCA.

5. manera que la deficiencia de PC no afecta la prueba. 0. enfermedad debido al alto índice de falsos positivos de la prueba funcional. el aumen. tra entre dos secuencias conocidas. la mezcla de re- Entre las técnicas de biología molecular.23 La prue. Rev Invest Clin 2003.25 TE. Estos oligonucleótidos son secuencias com- de RPCA puede utilizarse para el escrutinio de los plementarias a la región específica del ADN pacientes y la prueba molecular para confirmar la blanco que se desea amplificar. Evaluación nacional del diagnóstico de la resistencia a la proteína C activada.19 En el mis- mo estudio europeo se encontró una amplia variación sencilla en la distribución entre grupos étnicos. el ADN molde se desnaturaliza calentándolo a 94 ºC.22. Final- ción con y sin la adición de PCA. las proteínas aso- jul. orgánicos (fenol/cloroformo) a pH neutro se separan to en la concentración de F-VIII con un genotipo las proteínas (fase orgánica) del ADN (fase acuosa). usados como primers o iniciadores para una serie de sibilidad en 95%.45% en asiáticos americanos. et al. muestran que para amplificar un segmento de ADN que se encuen- la prueba funcional tiene una sensibilidad de 95%. Como se muestra pero su especificidad es de sólo 74%.0 mantiene la sen. es una de las que mayor aplicación 55 °C).27 El ADN purificado (ADN molde) es el que se utiliza para la PCR. Para obtener el ADN a partir de san- vos. 55 (3): 358-369 361 . no la afectan los mente. Esto es la RPCA. el TTPa. Procedimiento general Se ha diseñado una prueba funcional basada en el tiempo de veneno de víbora de Rusell que tiene mejor El primer paso es obtener el ADN mediante su ex- sensibilidad y especificidad que la prueba basada en tracción y purificación a partir de células (sangre.3%. permitiendo la hibridización de los oligonu- ha encontrado en la medicina. con 4% de portadores homocigotos para F-V Leiden. La comparación entre la prueba funcional para RPCA y la mutación Leiden del F-V.). desde 0% para un subgrupo de italianos a un índice de portado- res de 14% en población griega. de tal Figura 1. Esta prueba consta de tres pa- INTRODUCCIÓN A LA PCR sos.19 En un estudio europeo se encontró que la frecuencia de portadores es de 4.4%. células hemáticas se desintegran con soluciones hi- ba basada en factor tisular con fosfolípidos-sílica potónicas y detergentes. la prueba funcional no puede utilizarse para pa. dos oligonucleótidos sintéticos son del límite de corte a un índice de 2. normal se asocia con una seudo-RPCA si se evalúa El ADN se precipita con etanol y se disuelve con por la prueba funcional. acción que contiene los dos oligonucleótidos hasta la ción en cadena de la polimerasa (PCR. mientras que es menor en otros grupos étni- cos: 2. temperatura de hibridación óptima (por ejemplo glas en inglés). se acepta que un índice menor de 2. gre anticoagulada las membranas plasmáticas de las cientes con terapia anticoagulante oral.26 La PCR se utiliza cleótidos con sus secuencias complementarias en el Montiel-Manzano G. pero la especificidad se incrementa reacciones catalizadas por la enzima Taq ADN poli- a 87%. ciadas al ADN se degradan con proteinasa K. biopsia. 1.2% en hispanoamericanos. Dependiendo de la estandarización de cada laboratorio.21 Además del problema con falsos positi. por medio de extracción con solventes anticoagulantes orales. por sus si. En el segundo. La disminución en la figura 1.24 Adicionalmente. éste resiste el efecto de la PCA y la pro- ducción de trombina no disminuye. Después. que compara los índices de tiempos de coagula. etc. Los tres pasos que componen un ciclo de PCR.19 Cuando se agrega PCA al plasma de pacientes con F-V Leiden. La adición de PCA preformada sustituye la PC endógena.2% en nati- vos americanos.2% en afroameri- canos. La prueba funcional para medirla evalúa el tiempo de tromboplastina parcialmente activada (TTPa) en una muestra antes y después de agregar PCA y se informa como un índice de sensibilidad estandariza- do: TTPa post-PCA / TTPa pre-PCA. 1. En el primero. la reac.1 indica RPCA.20 La prueba funcional para la determinación merasa.

Principios de la detección de la moral o viral en un paciente. debido a una doble plificación seguida por un análisis de restricción reacción de PCR. ya que permite la detección de una célula blanco (por ejem. 55 (3): 358-369 . En algunas de estas pruebas sarrollado variantes de la PCR que tienen ventajas y se requiere adicionalmente de un análisis de RFLPs desventajas (Cuadro 1). tumoral) entre alrededor de un millón de células de coagulación se han descrito como inductoras de normales (como punto de referencia.Cuadro 1. y la PCR-nidada la cual. Se han de. restricción). Requiere muestras bien conservadas. No siempre es posible realizarla. Para su detección se amplifica con ejemplo. de los genes que codifican para factores de dos oligos el exón 10 del F-V. Debido a que FV Tromboembolismo venoso los productos de un ciclo de amplificación sirven como molde para el siguiente. se han es- tre un máximo de 100 células normales). en donde se parte del ARN para conver. PC Tromboembolismo venoso pite 30 a 35 veces. Entre las más usadas está (polimorfismo en la longitud de los fragmentos de la RT-PCR. PC o en el F-V. me. Diversas mutaciones de las proteínas del sistema plo. aproximadamente. dCTP y Infarto agudo de miocardio dTTP). Mutaciones específicas en los genes logía se puede detectar hasta una célula tumoral en. trombofilia. AT-III. PCR Cuantitativa Permite estimar la carga tumoral o viral.25 en la detección de ácidos nucleicos sitio de restricción de la enzima Mnl I. RT-PCR in situ Permite estudiar la expresión de genes en cortes de tejido. el cual permite detectar fácilmente mu- tirlo en cADN con ayuda de la enzima reversotrans. Evaluación nacional del diagnóstico de la resistencia a la proteína C activada. de la protrombina. desnaturalización-hibridización-extensión se re.28 El análisis del producto de la PCR se reali. PCR Múltiple Permite analizar varias secuencias en una reacción (económica). El ciclo. Gen Padecimiento diante la incorporación de los cuatro desoxirribonu- FII Tromboembolismo venoso cleótidos trifosfato (dNTPs: dATP. forenses incluyendo el DNA extraído a partir de ca- sa. tación en punto que altera el codón 506 cambiando nóstico de mutaciones y desórdenes genéticos. tudiado mediante PCR. Por medio de procedentes de organismos patógenos en nuestras una digestión del producto amplificado con esta enzi- 362 Montiel-Manzano G. Variante Ventaja Desventaja RT-PCR Permite evaluar la expresión de genes (ARN).31 y el análisis de mutaciones en transiluminador de luz UV de onda corta. Características de las variantes de la PCR. oncogenes y genes supresores de tumores. Complicada y costosa. ADN molde. permite aumentar la especificidad (Cuadro 2). Requiere de muestras frescas o en buen estado de conservación. mediante cito. Más costosa.30. En el último paso. mutación Leiden del F-V por RFLP-PCR Aplicaciones de la PCR La mutación Leiden del F-V está asociada a la forma hereditaria de la RPCA y consiste en una mu- La PCR tiene una aplicación extensa en el diag. taciones puntuales de estos genes mediante una am- criptasa. La mutación afecta un la coagulación. y sensibilidad de la prueba. clínicas. Rev Invest Clin 2003. PCR Secuenciación Permite conocer la secuencia de bases de un ADN determinado. PCR Nidada Altamente específica. por una Arg por Glu. et al. en cada ciclo sucesivo se duplica exponencialmente la cantidad del ADN blanco. La PCR cuantitativa es de gran utilidad ya que puede estimar la carga tu. la enzima Taq ADN Cuadro 2. Es complicada y costosa. sintetiza el ADN a 72 ºC como una extensión de los oligonucleótidos (que actúan como iniciadores). dGTP.28 Variantes de la PCR Aplicaciones de la PCR en el estudio de genes involucrados en trombofilia La PCR es una técnica de alta sensibilidad. Algunos genes trombofílicos analizados mediante PCR. teñido con bromuro de etidio y se observa en un bello o esperma. formado por los tres pasos anterio. AT-III Trombosis res.29 en la identificación genética de muestras za en electroforesis en gel de poliacrilamida o agaro.

Los patrones de digestión correspondientes deben coincidir con los esperados. En el estado hete. ya I11: 5’ TCT CTT gAA ggA AAT gCC CCA TTA 3’ que el alelo mutado (modificado en el sitio de reco- nocimiento de la enzima). 4 µL de ADN. Agregar 2 µL del ADN purificado correspondiente Homocigoto Heterocigoto Homocigoto y mezclar con la pipeta. di- gerir con 4 a 8 µL del producto de amplificación en Muestreo y muestra un volumen final de 20 µL con 5 a 10 U de enzima Mnl I con el amortiguador(es) acompañante(s) du. cigoto se obtienen de personas sanas y de pacientes 2. respectivamente. Los productos de amplificación se pue. las muestras están listas ción de los patrones esperados requiere de la repetición para el análisis de restricción y se pueden guardar de uno o más pasos.05 mg/mL. Evaluación nacional del diagnóstico de la resistencia a la proteína C activada. La cuantificación del ADN se hace b) 5 µL 2 mM dNTPs (A. Rev Invest Clin 2003. ción se recomienda repetir la amplificación o agregar dos a -20 ºC. 5. Cualquier desvia- Al terminar la PCR. mediante el cociente: OD260/OD280 y debe encontrar- c) 5 µL 1mM iniciadores. Es importante incluir en la amplificación y en la di- 20 seg a 72 ºC. Interpretación 3. de digestión que se interpretan como se indica: acción y colocarlos sobre hielo.32 En el estado homocigoto normal.C. mezclan a una concentración final de 1 µM. del amplicón derivado del alelo normal produce frag- cigoto (por cada serie de amplificaciones).T). concentrarse a 0. E10: 5’ ggg CTA ATA ggA CTA CTT CTA ATC 3’ rocigoto. repetir la digestión con 20 U de enzima o aumentar el rrimiento electroforético en geles de poliacrilamida tiempo de digestión a 4 h o hasta 24 horas. Preparar un número adecuado de microtubos: un tubo para la muestra del paciente. En Los iniciadores se preparan con agua-DEPC y se el homocigoto para la mutación. rrimiento en geles de 4. Se utilizan dos iniciadores: Mnl I reconoce el sitio de restricción y corta la se- cuencia de ambos alelos normales. al 4.G. 20 seg a 61 ºC. la enzima sólo corta al alelo normal.0 mL de sangre periférica anticoa- rante 2 h o hasta 24 h a 37 ºC. Tomar de 0. b) 35 ciclos: 15 seg a 94 ºC. El control homocigoto normal y el control hetero- gún otro método para purificación de ADN. mentos de 118 y 43 pb.5-1. gulada de preferencia con EDTA aunque puede utili- Montiel-Manzano G. Colocar los tubos en el termociclador e iniciar el programa en las condiciones siguientes: Fragmentos 118 pb 161 pb 161 pb 43 pb 118 pb 43 pb a) pre-ciclo: 1 min a 95 ºC. Se guar- paz de romper a cualquiera de los dos alelos. La digestión con Mnl I amplificaciones). 55 (3): 358-369 363 . Sólo se aceptan tres patrones 4. terocigoto.5% y tinción con bromuro de etidio. Los controles deben diluirse o d) 0. la enzima con bromuro de etidio. se entre 1.ma se pueden distinguir el estado homocigoto nor. En caso de tener una digestión parcial den analizar antes de la digestión.2 µL Taq ADN polimerasa (~1U). dan en alícuotas de 100 µL a -20 oC. dos prolongados. et al. Extraer el ADN de la sangre periférica anticoagu- lada empleando cualquier equipo comercial o al. e) aforar a 50 µL con agua bidestilada estéril. Distribuir a cada tubo 48 µL de la mezcla de re. Después. normal para la mutación 6.7 y 1. con la mutación.8. Método Controles 1. el heterocigoto y el homocigoto para la muta. gestión un control homocigoto normal y un control he- c) post-ciclo: 2 min a 72 ºC.5% de poliacrilamida y tinción ción. no puede ser digerido. Se recomienda ción): utilizar una técnica de extracción que permita la pu- rificación del ADN y preservarlo a –20 °C por perio- a) 5 µL 10x PCR (15 mM MgCl2). mediante un co. El análisis del patrón de digestión se realiza por co- mal. un tubo para Los productos de amplificación específicos tienen el control homocigoto normal (por cada serie de un peso molecular de 161 pb. la enzima es inca. Preparar la mezcla de reacción (por amplifica. Si no hay producto de amplifica- por periodos cortos a 4 ºC o por periodos prolonga. un tubo para el control hetero.

lias con deficiencia de PS y F-V Leiden. valor predictivo positivo es 1:500 para mujeres em- Las muestras pueden ser almacenadas durante una barazadas portadoras sólo de F-V Leiden. dad para pruebas trombofílicas. bolismo es de 0. Por zables y se deben rechazar.7% entre Fase preanalítica mujeres sin historia de abortos.1. de trombosis deben evaluarse estas mutaciones.12 se han cuando se combina con el uso de anticonceptivos descrito varias modificaciones al procedimiento ori- orales incrementa el riesgo relativo para eventos ginal. neral y de la RPCA en particular en el laboratorio. 72% de los miembros desarrollan trombosis comparado con sólo CONTROL DE CALIDAD DE 19% con sólo uno de los defectos. PS o AT-III cedimiento de las pruebas. Las muestras pueden ser mutación G20210A del gen de la protrombina.38 El riesgo relati.44 El enviadas a temperatura ambiente durante 48 horas.33 Se estima que la mutación. pero es más alto preanalíticas: la centrifugación.000/año para heterocigotos porta.9 back sobre la RPCA y trombosis familiar. En México se ha descrito que Por todo lo expuesto anteriormente.8 el cual se incrementa hasta 7.zarse citrato o heparina. el riesgo se incrementa en 2 y 15 por 10. además.34 Los sujetos con tuación actual del escrutinio de la trombofilia en ge- F-V Leiden tienen un riesgo alto de trombosis veno. Para sujetos mayores de 50 pretendió. F-V LEIDEN Y TROMBOFILIA cos de F-V Leiden deben también evaluarse.000 so presente para un diagnóstico más amplio y econó- por año para normales y portadores heterocigotos.46 Al realizar la 364 Montiel-Manzano G.4-4. dad tanto en la atención clínica como en los progra- po normal y 6/10.40 El riesgo relativo Esta prueba debe realizarse bajo un estricto con- para sujetos con F-V Leiden e hiperhomocistinemia trol de calidad para asegurar la precisión de las de- incrementa hasta 20 veces para cualquier forma de terminaciones y su utilidad en el diagnóstico de la tromboembolismo venoso. den y mutación G20210A de la protrombina.000/año para genoti. La técnica de laboratorio original para anticonceptivos orales y que no tienen la mutación investigar el fenotipo de la RPCA es una modifica- Leiden del F-V el riesgo relativo de tromboembolis. pero es de semana a temperaturas entre 2° y 8 °C. el almacenamiento y para aquellas con una combinación de F-V Leiden y la concentración del anticoagulante. Finalmente. a respectivamente.36 La mutación homocigota está la par con las consideraciones que se muestran en asociada con la aparición temprana de tromboembo. mas de salud pública de nuestro país.37 La mutación ho. se han dejado sentadas las bases para lismo (edad media 29 ± 11 años). ción del TTPa. En todas se debe tener precaución al manejar tromboembólicos hasta 34. Rev Invest Clin 2003. Tampoco son utilizables esta razón.36 tudio de la trombofilia en el laboratorio y para la ge- El F-V Leiden eleva el riesgo de trombosis cuando neración de un centro de referencia y control de cali- se asocia con otros estados trombofílicos. la incidencia de tromboem- En todo paciente joven con trombosis se debe in. este trabajo.10%.39. Entre parientes con mutación. Esta reunión nacional se concibió con la intención bosis. quienes tienen una incidencia anual de el F-V Leiden produce casi 45% de las formas de 0. en toda mujer embarazada con historia muestras expuestas al calor. de F-V Leiden es 8% entre mujeres con una historia de abortos recurrentes comparado con 3. era necesario las frecuencias de F-V Leiden y RPCA en mestizos es contar en nuestro país con un diagnóstico de la si- de 3. et al.43 En mujeres emba- razadas el riesgo relativo de tromboembolismo es de La prueba es sensible a ciertas circunstancias 9. La reunión dores de F-V Leiden. respectivamente.45 trombofilia heredada. Muestras 1:22 para aquellas con una combinación de F-V Lei- que no cumplan con estas condiciones no son utili. En fami. comparado con otras causas de de llenar este vacío en la información acerca del pro- trombofilia como deficiencias de PC.3 para portadoras de F-V Leiden.41 En mujeres que utilizan trombofilia. LA TÉCNICA PARA DETERMINAR RPCA vo para tromboembolismo recurrente en personas con F-V Leiden es de 2. mico de los pacientes con trombosis.7 veces. la organización de un consenso nacional para el es- mocigota incrementa el riesgo de TVP 80 veces. lograr la optimización del recur- años. Después de la publicación de Dalh- mo venoso es de 3.45% comparado con los parientes sin vestigar la causa de su trombofilia. ya que la búsqueda inten- (mediana de edad para la primera trombosis. Evaluación nacional del diagnóstico de la resistencia a la proteína C activada. 44 años).42 La prevalencia las muestras en todas las fases del procedimiento. 40 cionada de las alteraciones trombofílicas en especial años). sa profunda (mediana de edad para la primera trom.88% y 39%. 55 (3): 358-369 .35 El riesgo de trombosis venosa profunda en del F-V Leiden y de la RPCA parece ser una priori- menores de 30 años es de 1/10. Los parientes en primer grado de portadores sintomáti- RPCA.

y 8% de CV minuidos. el componente anticoagulante del F-V Generalmente.9). 46 En algunos casos.47 la prueba se prac. el embarazo y el gulante lúpico. degradación de los reactivos o alguna otra causa. coagulantes orales. lo que puede ser importante al establecer con. También influyen en la sensibilidad de la RPCA contiene fosfolípidos y sílica como activado. ción. por lo que es sensible a la presencia de anticoa. heparina y anti- raro en pacientes con trombofilia debe tenerse cuida. el reactivo pués de cierto tiempo. se ob. el TTPa se prolongará ligeramente y al interprueba (información de las casas comerciales). do en la interpretación de resultados. al menos hasta que los reacti- considera normal. Al ser esta 3 ± 0. desaparezca. et al. Rev Invest Clin 2003. Debi. Al repetir la prueba en plasma fresco Fase analítica de los mismos pacientes. IX. des. Es importante men. XI y XII. tados obtenidos para plasmas control en diferentes miento. foto-ópticos). lo que se lación problema/control.48 Ya que este anticoagulante no es tratamiento con anticonceptivos. adición de plasma deficiente en F-V permite obtener mente prolongado (6%) si se empleaba la última con. Cuando la prueba no se practique TTPa + PCA están cerca de 130 seg. En un estudio. cionalmente.4. los resultados de la prueba al emplear.47 Adi. gún algunos autores. Estas en el estudio (mecánicos. resultados más confiables. nas con RPCA portaban el F-V Leiden y que la activi- Por lo tanto. tendían ser más específicas para detectar la muta- cionar que la mayoría de los datos de RPCA reporta. si el F-V y F-VIII están dis. Los valores del TTPa regularmente se 15 min para eliminar las plaquetas y separar el plas.2% y al 3. V. no siempre son si la línea presenta una pendiente. tes fechas para investigar si hubo algún problema do a esto. Por ejemplo. el TTPa también se posible que esta variación se deba a diferencias en la prolongará. IL y seg. es importante asegurar que al utilizar dad de este factor era más resistente a la PCA que la muestras congeladas los valores de TTPa sean simi. La influen- interpretaciones no descartan la posibilidad de que cia de estas variables a menudo depende de los ciertos pacientes tengan RPCA adquirida y que.500 g durante gue el TTPa. Por esta razón algunos fabri- dera anormal. se- ma debe congelarse. ya que el TTPa puede resultar más prolon. Los ciclos de comercial para determinar TTPa usado en la prue- congelación y descongelación afectan los resultados ba es muy sensible a la presencia de plaquetas resi- de la prueba. el reactivo para duales. en proporción al tiempo de almacenamiento. cambios de otras variables. aun con TTPa normal. La prueba es sensible al cambio de los reactivos se plasma almacenado son dignos de crédito si el utilizados y de los aparatos de medición empleados TTPa es idéntico al obtenido en plasma fresco. La servó que el TTPa + PCA se encontraba sólo ligera. seguras.4. mientras que los de ma rápidamente. se calcula el cociente TTPa + PCA/TTPa. Se considera que el coeficiente de factores I. prueba las concentraciones altas de F-VIII. debe tener un valor normal de tabilidad de los factores de coagulación.8%. y. X. dos han sido evaluados en muestras congeladas. Se considera que las muestras de plasma fechas. Los de 38 a 40 seg es normal al igual que otro de 30 a 32 más importantes son fabricados por Stago. se consi. Evaluación nacional del diagnóstico de la resistencia a la proteína C activada. se Se espera que la adición de PCA al plasma prolon- recomienda hacerla por duplicado a 2. Es adicionar el PCA al sistema. 55 (3): 358-369 365 . un TTPa terminar la RPCA disponibles comercialmente. centración. la grafica obtenida indicará que existe deriva congelado. la pre- res. 12 resultaron anormales. el cual. sultados obtenidos por estos tres métodos. por ejemplo. 78/40 seg = 1. Un factor a considerar es la es.prueba con citrato de sodio al 3. II. aunque este parámetro debe establecerse en prueba una modificación del TTPa depende de los cada laboratorio. vos se estandaricen mejor. por lo tanto. VIII. proteína normal. especialmente Cuando se confirmó que la mayoría de las perso- si el TTPa se encuentra anormalmente prolongado. se idearon nuevas técnicas que pre- lares a los de plasmas frescos. Por lo tanto. Por lo que hace a la centrifugación. el plas. encuentran entre 30 y 40 seg. Dade-Behring existiendo un CV de 17% entre los re- clusiones. reactivo para el TTPa. sencia de anticoagulante lúpico. En la actualidad existen varios equipos para de- gado que el del plasma fresco. pero el cociente será inferior a 2 (por actividad del reactivo PCA o en la inestabilidad del ejemplo. el TTPa puede prolongarse anormalmente debido a inestabilidad del material o del calibrador. Si en lugar de 40 seg se obtiene un cantes recomiendan reportar los resultados como la re- TTPa de 32 seg el resultado será de 2. se elabora una gráfica con los resul- también puede deteriorarse durante el almacena. ticó en 24 plasmas congelados y se obtuvieron resul- tados normales. La actividad variación (CV) interprueba debe ser menor al 5%. Es de F-V y F-VII disminuye en plasmas congelados y el preciso evaluar los resultados obtenidos en diferen- fibrinógeno y el F-II también pueden alterarse. Estas pruebas se basan en la prolongación del Montiel-Manzano G. En realidad. Posteriormente el mismo día de la obtención de la muestra.

Más 5. diciones de trabajo de los diferentes participantes. Conocer si se hacen estudios familiares que auxi- tarde se demostró que el cociente de sensibilidad de lien en el diagnóstico del enfermo en estudio o PCA (CSPCA) es menos sensible en condiciones de al. ¿Qué concentración de citrato de sodio se emplea 100 voluntarios normales obteniendo el CSPCA y como anticoagulante? el CSNPCA y establecieron un criterio para diag. ciente de F-V. los participantes CSPCA = TTPa sin PCA respondieron a preguntas directas y concretas y se elaboró un cuestionario. 4. en una sesión vespertina. puntos de controversia se discutieron y analizaron ro de calcio y de PCA. Estas pruebas tienen en Después de una sesión matutina de trabajo en don- común que en el tiempo de coagulación no intervie. rencia de la heparina y del anticoagulante lúpico. o ambos sistemas? 366 Montiel-Manzano G. METODOLOGÍA DE LA REUNIÓN lación del factor Xa y el tiempo de coagulación con veneno de víbora de Russell. 7. 4. Conocer los criterios que utilizan para elegir un punto de corte y poder establecer si el resultado Fase postanalítica de la prueba que emplea es positiva o negativa. ¿Emplea pipetas de precisión en el laboratorio? darizar el CSPCA de la mezcla de plasmas norma. Evaluación nacional del diagnóstico de la resistencia a la proteína C activada. el tipo de prueba que emplea en el laboratorio. Conocer si el resultado positivo se confirma con Se sugieren diversas maneras de expresar la pro. del diagnóstico fueron: tivador. electromecánico les. ¿Centrifuga una o dos veces la muestra? 6. TTPa + PCA Para alcanzar estos objetivos. Conocer el interés en cuanto a sensibilidad y espe- afectan el cociente de PCA. La dinámica de la reunión Dos autores informaron que el CSPCA depende permitió participar a todos los asistentes y al surgir de factores como la concentración de citrato. el F-II y cificidad que cada participante desea obtener con la PS. 8. blecidas en las que el plasma del paciente se predilu. como el F-VIII. al diluir el plasma problema con plasma defi. una mesa redonda ye con plasma deficiente de F-V. trombóticos tanto en territorio venoso como arterial.49 La dilución del plasma previene la interfe. Hacer un diagnóstico sobre las situaciones y con- Así. pruebas posteriores más específicas. el tiempo de coagu. de se analizaron y discutieron diferentes aspectos teó- ne la presencia del F-VIII. ¿La muestra se analiza inmediatamente o conge- la? Estos investigadores practicaron la prueba a 3. se inició. Esta propuesta se que contempló los siguientes objetivos: basa en que una dilución suficientemente elevada de la muestra normalizaría el resto de los factores que 1. cloru.84 Fase analítica Estos mismos autores sugieren la utilización de este criterio en todos los laboratorios para estan.50 Una posible solución al problema es el empleo del cociente de sensibilidad ajustado de PCA Fase preanalítica (CSNPCA): 1. et al.tiempo de protrombina por PCA. ¿La muestra se obtiene en la fase aguda del even- CSNPCA = CSPCA del paciente to trombótico? CSPCA de una mezcla de plasmas normales 2. 55 (3): 358-369 . Si se emplea el CSNPCA: < 0. propuso informar los resultados en segundos. ¿Estudia pacientes bajo tratamiento con anticoa- 1 Si se emplea el CSPCA: < 2.1 gulante? 2. con el interés longación del TTPa por la PCA. ¿Se hacen ajustes al volumen de anticoagulante nosticar RPCA considerando los siguientes valores dependiendo del hematócrito? de referencia: 5.25. ¿Qué equipo emplea: foto-óptico. 3. permitan identificar grupos de riesgo de la enfer- macenamiento y se utilizó el cálculo siguiente: medad trombótica. orientó a modificar las pruebas ya esta. 2. se conserva el fenotipo a PCA. ricos sobre las causas y prevalencia de la RPCA en di- El conocimiento de que la RPCA está relacionada ferentes poblaciones y su expresión como eventos con el F-V. Los reactivos para el establecimiento de la PCA (congelada o liofilizada) y del tipo de ac. Rev Invest Clin 2003. así como de la presentación en el momento. Originalmente se de discernir entre las diferentes causas posibles.

8% 3. Treinta por ciento hace referencia a los resultados normales que se publican en las ins- Los resultados generales se muestran en el cuadro trucciones de operación del reactivo.¿Siempre emplea el mismo equipo o puede inter.¿Cómo informa los resultados? estudió una población sana (donadores de banco de 13. este caso. Rev Invest Clin 2003. Análisis de resultados Sólo uno de los participantes informa el resultado es- tandarizado.¿Hace estudios que confirmen la mutación Leiden? parámetros normales aunque no aclararon con qué 15. ya que emplean el reactivo más específico para 10. Evaluación nacional del diagnóstico de la resistencia a la proteína C activada.8% 3. (sin aclarar el criterio de decisión). 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1 No No No No No Sí Sí Sí No No 2 Inm Post Post Post Inm Inm Inm Post Inm Post 3 3.2% 3. nuestro país. Todos los CONCLUSIONES participantes emplean la prueba modificada. PDFV: plasma deficiente en FV. FO: foto-ópticos. algu. la medicina. Cuarenta por ciento confirma la efecto de los fosfolípidos de las plaquetas en el resul. Montiel-Manzano G. estudió una población sana (donadores de sangre) y mendaciones para obtener una muestra en las mejo.8% 3.¿Hace estudios a familiares? criterio establecieron el corte de positividad. Mec: mecánico.¿Determina con el método clásico o modificado uno u otro. 1.8% 3. consideró normal la percentil 95 en donde colocó el res condiciones preanalíticas. Ignora- ron los resultados que podrían considerarse positivos RESULTADOS DEL y no los incluyeron en el análisis para establecer ANÁLISIS DE LA INFORMACIÓN punto de corte. IL: International Laboratories.¿Estableció el criterio de corte? sangre o personal del laboratorio) para establecer los 14. Sesenta por ciento de los participantes 12.8% 3. Los resultados se expresan en segundos (PDF-V) o ambos métodos? cuando se utiliza el reactivo de reactivo de Stago y en cociente cuando se utiliza el reactivo de Chromogenix. Diez por ciento 3. Chro: Chromogenics. 55 (3): 358-369 367 . lo que expresa su interés por conocer la presencia de muta. 9.8% 3. tudios familiares y 10% sólo en algunas ocasiones nos laboratorios no pueden ejercer un estricto con. la determinación de la RPCA es una tes centra su interés únicamente en identificar las prueba que se realiza en muy pocos centros en RPCA primarias debidas a la presencia de F-V Lei. Post: posteriormente. Resultados del escrutinio metodológico acerca de la realización de la prueba diagnóstica de la RPCA. Un laboratorio emplea reactivos con dife- cambiar diferentes equipos? rente sensibilidad. pero no aclaró en qué casos utiliza 11. ¿Qué reactivo emplea? den.8% 3. et al. mutación Leiden por análisis de ADN. Coc: cociente. Cuarenta por ciento de los participan. 20% hace es- tado de la prueba. Por su forma de operación. A pesar de su gran impacto en múltiples áreas de ción Leiden.Cuadro 3. trol preanalítico porque las muestras llegan a su centro referidas de otros laboratorios. Sólo uno no conocía el corte de positividad.8% 3. Los participantes conocían y practicaban las reco.8% 4 No Sí No No No No No Sí No Si 5 2 2 2 2 2 2 2 1 2 2 6 Sí No No Sí No No No Sí No No 7 Sí Sí Sí Sí Sí Sí Sí Sí Sí Sí 8 Mec Mec FO Mec FO Mec/FO Mec FO FO Ambos 9 Stago Stago Stago Stago Stago IL IL Stago IL Stago Stago IL IL IL Chro Chro Chro Chro Chro Chro 10 No No No No No Sí No No No No 11 PDFV Ambos Ambos PDFV PDFV Ambos PDFV PDFV Ambos Ambos 12 Seg Coc Coc Seg Coc Seg Seg Coc Coc Seg 13 No Sí Sí Sí No Sí Sí No Sí Sí 14 Sí No Sí No Sí Sí No No No Sí 15 Sí No No No No No No No Sí Sí Inm: inmediatamente.

Dahlbäck B. Bertina RM. ten para un mejor trabajo diagnóstico en nuestro Cate JW. J Am Coll Cardiol 1996. Current status of thrombosis: a multidiscipli. Thromb Haemost 1992. Ayala-Sánchez. Blood 3. Incidence of venous 26. 43: 1678-83. 1993. se ha propuesto el establecimiento de den. Highly specific functional test for factor V Leiden: a modi- 3. Koster T. Edson R. 230: 1350-4. un centro nacional de referencia y control de cali. REFERENCIAS 21. A. Cox M. diagnostic criteria. Ku D-H. poor anticoagulant response to activated protein C: prediction 4. Chibbar R. Br Med Arnheim N. Faloona F. Crit Care Med 1982. Vela-Ojeda J. molecular biological testing for factor V R506Q in 370 pa- tients. et al. Carlsson M. Evatt B. 28: mostasis 1997. Cancer Res Ther Cont 1999. clínico. Laffen M. Lancet 1994. McGlennen RC. Price DT. se han establecido las bases for thromboembolic disease: as clinical perspective. 72: 880-6. Ehrlich G. Por último. De Stefano V. Thromb Haemost 1994. Dicho consenso se venous thromboembolism with single point-mutation at Arg- realizó en el mes de febrero de 2002. Factor V Leiden and other coagulation factor muta- bolia y el uso de las heparinas no fraccionadas y de bajo peso tions affecting thrombotic risk. World distribution of factor V Lei- 6. Marchand 1): S1-S5. Gross JS. Miletich JP. es necesario estable. diagnosis. Bergqvist D. et al. Blood 1993. Neufeld RR. Scharf S. Med 1997. Malm J. Familial thombophilia due to a previously unrecognized mechanism characterized by para el diagnóstico global de la trombofilia. ACC/AHA Guidelines for the management of patients with fied tissue factor assay for activated protein C resistance. Gladson CL. 20. Lindblad B. Con base en los dos puntos previos. González-Llaven J. tance: a critical evaluation of the test and the development of nary medical issue and major American health problem. Mullis KB. Erlich HA. Buring JE. Stafford DW. Con base en el gran impacto que tiene la trombofi. Fareed J. Sweeney JD. Venous thrombosis due to poor anticoagulant timizar el desarrollo de las pruebas en México. Science 1985. Fernandez JA. 342: 1503-6. Am J Clin Pathol 1997. Analysis of the clinical 9. se puede infe. response to activated protein C: Leiden thrombophilia study. Rosendaal FR. 122: 325-9. Horn GT.Be. 1996. Comparison mizar los recursos diagnósticos disponibles en of functional testing for resistance to activated protein C and nuestro país. molecular. Clin Chem 1997. Thromboembolic para determinar la RPCA. 5. Wasserman LM. Ann Intern para realizar un consenso nacional para optimi. Laboratory diagnosis of APC-resis- 2. Arch Pathol Lab Med 1998. Rosas-Cabral A. quences and restriction site analysis for diagnosis of sickle cell 6. Beck KH. Akhtar M. 302: 709-11. 28. Büller H. de Ronde H. Key NS. bolism. 23. Mack DH. tribution of factor V Leiden in 4047 men and women: implica- tras desde y hacia los centros de diagnóstico de tions for venous thromboembolism screening. High risk of the critically ill for venous thromboem. 87: 3531-44. Lobow LS. Arch Intern Med 1988. Griffin JH. Laurell M. Mannucci P. Esmon CT. Vandenbroucke analíticas y postanalíticas más adecuadas para op. Poiesz B. Blair A. 1. 22. Alder H. Trombofilia. Association of idiopathic país en el área de trombofilia. Martínez M. Whole blood scree- ning test for factor V Leiden using a Russell viper venom time- based assay. 10: 448-50. Science 1987. 90: 1004-8. Rev Invest Clin 2003. Griffin JH. rir que las mismas conclusiones pueden tomarse 12. 25. Ridker PM. Con base en las discusiones generadas durante y 15. 18. can population. Anticoagulant protein C pathway defective in majority of thrombophilic pa- realizan estos estudios con la intención de deter. Majluf-Cruz A. 68: 7-13. Bick RL. 82: 1989-93. Blin N. Dorfman DM. 55 (3): 358-369 . la República Mexicana. Autop. Rev Invest Clin 2000. tromboem. Bertina RM. Pajaro R. Svensson PJ. The fre. Rees DC. Rodstein M. Evaluación nacional del diagnóstico de la resistencia a la proteína C activada. tients. Montes MA. 127: 895-903. 1976. 346: 1133-4. JP. Longtine JA. analítica y 11. Nucleic Acids Res Seguro Social: Reporte anual de morbimotalidad 1994. Dahlbäck B. No existe consenso acerca de la mejor técnica 10. Thromb Haemost 1988. 29. Cade JF. Las diferencias entre disease-critical evaluation of laboratory investigation. Clegg JB. The regulation of natural anticoagulant pathways. 14. 506 of factor V. Fox EA. Am J Clin Pathol 1998. Roelse J. Rodriguez E. 109: 387-91. Br J Med 1998. Arkel YS. yond the year 2000. Factor V Leiden Mutation and the risks luego de la reunión. 108: 427-33. Nilsson IM. Briet E. King TC. Clin Appl Thromb Hemost 1997. 10: 73-80. Kwok S. 3(Suppl 24. cer un consenso real entre los laboratorios que 13. Finazzi G. of a cofactor to activated protein C. 148: 173-6. minar cuáles son las actividades preanalíticas. Inherited thrombophilia: postanalítica son muy grandes. Identification of human immuno- 368 Montiel-Manzano G. Mertens K. 8. 59: 18-22. Saiki RK. Scharrer I. 5. Hach V. 277: 1305-7. Kamiyama M. ciency in 141 unrelated young patients with venous thrombosis. thromboembolism verified by necropsy over 30 years. Pathogenesis clinical syndromes. 52: 529-45. Tuddenham E. con el propósito de opti. 27: 290-304. Friedman-Kien A. Lancet 1995. con el propósito de establecer las normas 17. Hennekens CH. Bertina R. and management. Voorberg J. Ethnic dis- dad para trombofilia mediante el envío de mues. Mullis KB. A general method for isolation of high 7. 317: 520-3. van Mourik JA. Proc Natl Acad Sci USA lia en la medicina moderna. Berends F. 4. Dirección de Prestaciones Médicas del Instituto Mexicano del molecular weight DNA from eukariotes. 3: 2303-8. Lancet 1993. JAMA 1997. zar el diagnóstico trombofílico en el laboratorio 16. 235: 1348-52. Lobato-Mendizábal E.2. Sternby NH. Gerber I. Assessing thrombotic risk. 19. Wideman C. Blair D. 27. Sninski JJ. relevance of the type of chimeric DNA in CML in one mexi- quency of type I heterozygous protein S and protein C defi. Enzimatic amplification of b-globin genomic se- J 1991. Hae- acute myocardial infarction. anemia. los centros en las fases preanalítica. Koopman R. Detection of the factor V Leiden mutation: development of a sy studies of the elderly institutionalized patients: review of testing algorithm combining a coagulation assay and molecular 234 autopsies. Ridker PM. 343: 1535-6. de Ronde H. 1328-428.

Dr. Marlar RA. D. Increased risk of venous thrombosis in oral. Bertina Fax: 5639-4688 RM. the F-V: Q506 allele. Reitsma PH. Prins MH. Ridker PM. Effects of normalization of 39. Miletich JP. México. High 48. 42. thrombosis. Nature 1988. Ann Intern Med 1998. Rosendaal FR. Li H. Scharf RE. Am J Hematol 1999. 72: 166-76. Evaluación nacional del diagnóstico de la resistencia a la proteína C activada. 79: 564-6. 38. Horellou MH. 03100. 1690-4. Rev Invest Clin 2003. Circulation 1995. Another protein S functional assay is sensitive factor V Leiden. 108: 434-49. son JE. Fink L. Ruiz. resistance. Price DT. Blood 1995. J Virol 1987. 478-82. 47. Garcia de Frutos P. MR. tance to activated protein C as an additional genetic risk factor 50. Koster T. Sardella C. Vandenbroucke JP. Lancet 1994. Goldgaber SX. Linkage between inherited resistance to nancy and the puerperium. Apartado Postal 12-1100 Circulation 1997. Briet E. Stampfer MJ. to resistance to activated protein C. Argüelles A. Hennekens CH. Thromb Haemost 1997. Hill JA. 37. Miletich JP. 40. 44. et al. Ridker PM. Halbmayer M. Chantarangkul V. Miletich JP. 85: 3518-23. von Beroldingen CH. Erlich HA. Lind-paint. Mannucci P. van der Meer J. protein C. Gerhardt A. Selhub J. Lancet 1994. Prothrombin and factor V sperm and diploid cells. Trossaert M. 343: Ann Hematol 1996. González-Estrada S. Laboratory diagnosis of resistance to activated study. 34. 49. Primary thrombophilia in Mexico: a prospective 46. Deschamps A. 92: 2800-2. Reimpresos: lism in patients with an Arg 506→aGln mutation in the gene for factor V (Factor V Leiden). 35. Conard J. 45. Zoller B. 1453-7. results by means of pooled normal plasma. Simioni P. Reitsma PH. ted protein C resistance in stored plasma. Gyllensten UB. Henkens CMA. 85: 1504-8. Zöller B. Struve S. Roseendal FR. Hennekens CH. contraceptive users who are carriers of factor V Leiden muta- cation and oligomer cleavage detection. Dahlbach B. Hamulyac K. Reitsma PH. Vandenbroucke JP. 128: 1000-3. Dahlback B. The evaluation of hereditary hypercoagulability. Buller HR. Rosendaal FR. Sandmann W. Stampfer MJ. Fisher M.net. A laboratory approach to the ECM. and risks of future venous thromboembolism. Lensing AWA. 332: 543-6. Nature 1988. Bertina RM. 31. van Pampus 33. Ridker PM. Sensabaugh GF. Lancet 1994. Zotz RB. 342: 374- activated protein C and factor V gene mutation in venous 80. Blood 1995. Cui X. 344. Saiki RK. Scudeller A. Wolf M. N Engl J Med 1997. Evaluation of activa- ted protein C. 1288-92. Samama MM. Prandoni P. Ruiz-Argüelles GJ. patients with factor V Leiden mutation and venous thrombosis. recurrent pregnancy loss. Hillarp A. Am J Clin Pathol incidence of venous thromboembolism in family members of 1997. Prins MH. Resistance to activa. Middeldorp S. Abraham Majluf Cruz 41. Tripodi A. Factor V Leiden and recurrent idiopathic 1988. 95: 1777-82. Elalamy I. 343: 1536-8. Influence of risk of thrombosis in patients homozygous for factor V Leiden lupus anticoagulant on a commercially available kit for APC- (APC-resistance). Thromb Haemost 1994. 72: 643-51. mutations in women with a history of thrombosis during preg- 32. venous thromboembolism. 336: 399- 403. Malinow Unidad de Investigación en Epidemiología Clínica. 36. Frahchi F. 61: tion. Resis. 60: 1-5. Erlich HA. F. 128: 15-20. The risk of recurrent venous thromboembo. Boyer-Neumann C. zation of the APC resistance test. Meyer D. Interrelation of hyperhomocyst(e)inemia. et al. Risk of thrombosis in patients homozygous for Mannucci PM. Koster T. Negri B. Bender HG. deficiency virus sequences by using in vitro enzimatic amplifi. Dahlbäck B. HGR Gabriel Mancera factor V Leiden. Schon R. Faioni EM. Ann Intern Med 1998. Amplification and analysis of DNA sequences in single human Pillny M. New Engl J Med 2000. Zoller B. Correo electrónico: amajlufc@prodigy. 43. Koopman MMW. 86: 4700-2. Thromb Haemost ner K. Buring JE. Man- 30. and venous thrombosis. Bertina RM. Higuchi R. Berntsdotter A. Blood 1995. Arnheim N. 74: 643-51.mx Montiel-Manzano G. 55 (3): 358-369 369 . Adcock DM. Beckmann MW. Garcés-Eisele J. Ariyo AA. Standardi- in hereditary deficiency of protein S. Factor V Leiden mutation as a risk factor for DNA typing l from single hairs. Rose S. Thromb Haemost 1994. Haushofer A. 335: 414-17.