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REACCION DEL AZUL DE PRUSIA PARA DEPOSITOS DE HIERRO EN LAMINAS DE MEDULA OSEA.

Reactivos. 1- Disuelva 4 gm de ferrocianuro de potasio en 20 ml. de agua destilada. Prepare esta solución justo antes de usarla. 2- Acido clorhídrico concentrado. 3- 0.1% safranina en agua. Coloración.1. Añada ácido clorhídrico ( 6 ml. ) a la solución de ferrocianuro de potasio recientemente preparada hasta que esta se torne brevemente turbia. Filtre la solución a través de papel de filtro Whatman N°42. 2. Coloque la solución en un vaso de Coplin junto con las láminas a ser teñidas. 3. Lave con agua corriente por 3 ó 4 minutos en otro vaso de Coplin (Este paso es muy Importante.) 4. Coloque las láminas dentro de la solución de safranina por 1 minuto. 5. Lave con agua corriente y séquelas con cuidado. 6. Examine con aceite de inmersión.

COLORACION DE PEROXIDASA Reactivos. 1- Bencidina Hidroclórhídrica. 2- Alcohol etílico absoluto. 3- Acetato de sodio. 4- Sulfato de zinc. 6- Peróxido de Hidrógeno. 6- Formol de 37°

9. de alcohol absoluto. de formol al 37%. Conservar y usar a temperatura ambiente.3 gm de Bencidina Hidroclórhídrica a 20 ml. Añada 80 ml.0. al 3% y 0. Use laminas frescas o aquellas que hayan sido conservadas en obscuridad un tiempo rio mayor a 3 semanas. más de etanol al 30%.6 ml. 5. Hidróxido de sodio 5 N.1. 131. 3.. Agregar O2 gm. de hidróxido de sodio saturado se diluye a 500 ml. Soluciones. Safranina. Sulfato de zinc: 3. 8. Fijar exactamente por 1 minuto en formol etanol al 10% a temperatura ambiente. El Ph final debe estar entre 6. Fijadora: l0% formol etanol. 2. 4. Alcohol etílico al 30%.5.8%. de H2 02.N.3 ml. de etanol al 30% Calcular bajo agua caliente hasta diluir totalmente la bencidina. Agregar 1 ml. de hidróxido de sodio 5. Solución Incubadora: Añadir 0.Safranina.7.Hidróxido de sodio saturado. 1. con agua destilada. Luego lave las láminas en agua corriente por 30 a 60 segundos. filtrar y conservar en botella color ámbar a temperatura ambiente Procedimiento. . de agua destilada. Mezclar por agitación. 2. Añadir l0 ml.0 . Añadir 1 gm de acetato de sodio. Añada 0. de sulfato de zinc al 3.8 grn en 100 ml. mezclar. Mezclar.7 ml.Acetato cresyl violeta.

Seque las láminas y examine la porción más delgada de la extensión con objetivo de inmersión.3. 5.Sudan Black 0. 2.3 gm. Alcohol absoluto 100 ml. Disolver y añadir: Fosfato disódico 0. COLORACION PARA LIPIDOS (SUDAN BLACK B ) METODO DE STOREY Reactivos.Solución de trabajo Stock de buffer 40 ml. Filtrar al vacío: y Esta solución pierde su actividad en 2 a 3 semas. Agua destilada de 100 ml.3 gm. Stock de sudan 60 ml. 6. 5. 4. Lave brevemente por 5 a 10 segundos en agua corriente.Alcohol absoluto al 70%. 4.1.Formol al 40%. 3.Buffer. Colorear con Wright en la forma convencional. . Solución Stock. Lave rápidamente y examine con objetivo de Inmersión. Coloree por un minuto en la solución incubadora en un vaso de Koplin a temperatura ambiente. Fenol 16 gm. Alcohol absoluto 30 ml.

Solución de ácido peryódico. 2.75 grn. Las láminas pueden ser contrastadas con coloración de giemsa. Reactivos. 3. Estabilidad 3 meses en botella arnbar. Cristales de ácido peryódico 5 gm Agua destilada 500rnl.Sumerja las láminas en la solución de sudan Black de 10 a 60 minuto. 1. El colar azul de los eritrocitos puede ser eliminado por inmersión durante 30 segundos en solución acuosa de fosfato monopotásico.Reactivo de Schiff. 1. Glicerina libre de ácido 25 ml. Las láminas pueden ser examinadas con lentes de inmersión o montadas en bálsamo. Método de Contraste con Giemsa: Alcohol metílico libre de acetona 75 ml.Procedimiento.Lave con agua. 4. COLORACION DE PAS. Colorante de giemsa 0.Lavar en otra jarra de Koplin que contenga 70% de alcohol de 5 a 10 minutos. 2.Fijar las láminas manteniéndolas de 5 a 10 minutos en un vaso de Koplin que contenga formol el 40%. Agitar a través de papel # 4 La solución de trabajo se Obtiene: 1 parte sal Stock (giemsa) 4 partes de alcohol metílico. Coloque en baño maria a 60ºC. .

Coloque las láminas en un vaso de Coplin que contenga reactivo de shiff por 30 minutos.Solución de fusceina básica 5 gm. Procedimiento. Reactivos. Filtrar cuando la solución este fría.Fast Red violet salt LB. Agua destilada caliente 500ml.Secar e Investigar con lente de Inmersión. saturarla con burbujeo do SO2 por una hora. 5. 4. 2.37% formol 6.Dé coloración de contraste con hematoxilina de Harris. 2.Dimetilforrnanide. 8.2 amino . 3.Lavar con agua corriente.Las láminas secas se fijan en una so solución de formol al 10% y alcohol absoluto por 10 minutos. 5.1.Lave las láminas 5 veces con agua.3 propanodiol (KODAK).1. (SIGMA).Sumerja las láminas en la solución de ácido peryódico por 10 minutos. 10.2 metil ² 1.Lavar brevemente las láminas en agua corriente. 9.Repetir el paso 2. 7. . FOSFATASA ALCALINA EN LEUCOCITOS (KAPLOW). 3.Metanol absoluto. de carbón activado por unos 30 segundos e inmediatamente filtrarlas a través de papel Whatman. #1. 4.Montar en bálsamo si se desea. 6.La solución colocada en un frasco cónico es extraída con 2 gm.Naftol AS-BI fosfato sal sódica (SIGMA).

Procedimiento de Coloración.1 HCL y diluir a 1. Soluciones.Hematoxilina en polvo. Stock añadir 50 ml. 1. Agregar 0.7 ) a 250 ml. propanodiol ( Ph 9. Conservar en frasco ámbar a temperatura ambiente.. de acetona absoluta. de sulfato de aluminio y potasio.Colorante de Contraste.7. de sol. Evite usar EDTA. 2. de H2 O destilada. Trabajo: 0.Use extensiones frescas de sangre periférica o mdu1a ósea. Acetona al 60% a Ph 4.3 propanodiol en agua destilada y diluirá 1. de H2 O destilada.000 ml. Sol.. Conservar y usar temperatura ambiente.2 gm de yodato de sodio.05 M.000 ml. del buffer de ácido cítrico a 32 ml. .03 M y cetrato de sodio. Conservar en refrigeración pero usar a temperatura ambiente.0 gm de hematoxilina a 500 ml.0. 2. 3. 1. 0-2 M. caliente hasta le ebullición y añada otros 500 ml.) Conservar en refrigeradora.03 M de cetrato de sodio y luego añada agitando lentamente 300 ml.Fijadora. de 0.5 a 9.1 N ácido Hidroclórico. 9.Lavar con agua corriente de 30 a 60 segundos. propanodiol (disolver 21 granos de a amino 1.Sol. 3. 50gm. 8. 10-Sulfato de aluminio y potasio. de 0. Mezclar bien y filtrar.Yodato de Sodio.2 con buffer cetrato 0. Añada 1.Fije las 1amiinas de menas de 24 horas en acetona buffer 60% por 30 segundos a temperatura ambiente.Hematoxilina de Mayer. Si emplea sangre venosa use sangre heparinizada. stock. Añadir 168 ml. con agua destilada.Buffer.

Naftol AS-TR fosfato (Sal sódica). Añada 60 ml. 8. 10. 2. de Fast Red violet Salt C. Las laminas deben ser teñidas el mismo día de extraídas.Lavar cuidadosamente en agua corriente por 30 60 segundos.Usar la solución de contraste por 5 a 8 minutos (Hematoxilina de Mayer). 3 H2L. 7.Deje secar las extensiones. sin embargo estas pueden mantener el 90% de su actividad por 2 ó 3 semanas.Lave con agua corriente por 1 ó 2 minutos. 7.Yodato de sodio.Acetato de sodio.2 ó 0.dos en un Erlemeyer de 125 ml limpio y seco. .B.3 ml.1. 5. 6. 3.Use aceite de lrnnersi6n y lente 100 x para observar éstas láminas. Incuba las láminas en la mezcla anterior por exactamente 10 minutos a temperatura ambiente. de buffer de trabajo.4. 6. Agitar y filtrar un frasco de Coplin. 4.Dirnetilformamide. Agregar 40 gm. 8.Seque las láminas en el medio ambiente.Fast Red violet Sal C. FOSFATASA ÁCIDA EN LOS LEUCOCJTOS. Use la solución inmediatamente.Sulfato de aluminio y Potasio. de naftol AS-BI fosfato 0.Hematoxilina Cl.B. de dímetilformamide coloca . 5. Reactivos.Ácido acético glacial. 9.Sumerja las láminas frescas y fijadas en la mezcla siguiente 5 ml.

R.03M citrato de sodio 2 H2C (4. de 0. 3. de Dímetilformamide en un Erlemeyer de 125 ml.3m1. 3.8 ml. Añada Fast Red violet Sal .Colorante de Centraste. de agua)..2 a 0. H2O. . Añadir 168 ml.03 M de acido cítrico a 32 ml.0. . B) 0. 1. 10. Procedimiento.Use extensiones frescas (de menos de 24 horas de extraídas).fijadora.03M Acido cítrico H2 O (3.6 y de acetato de sodio para 1.Acetona al 60% con Ph 4.1 M Acido acético (5.0. H2 0. Mezcle 200 ml. Lavar en agua corriente por 10 a 20 segundos.000 ml.03M de cetrato de sodio y añada lentamente al mismo tiempo que agite 300 ml. Conservar en refrigeración.03 M. Coloque las láminas que se desee colorear en el vaso de Coplin e incubar en un baño maría a 37ºC por dos horas. de capacidad.5 con acido cítrico y cetrato de sodio 0. Disuelva aproximadamente 5 mg.A) 0. de la solución A con 800 ml. de H2 0).Buffer. Soluciones.1 M Acido de sodio (13. de le solución B. De acetona pura. (5 mg) Agite y filtre en un vaso de Coplin.4)g)/ 500 ml.Fijar las extensiones por inmersión. 2. De acido acético glacial para 1.2 a 4.1. de naftol AS-TR fosfato en 0. de 0.Acetona Pura. en buffer de acetona citrato por 5 segundos a temperatura ambiente. 2.15 g)/ 500 ml. Conservar y usar a temperatura ambiente.9.L.000 ml. 11.Incube las láminas en solución fresca preparada de la siguiente manera.Hematoxilina de Mayer.

IDENTIFICACION DE MONOCITOS Y MONOBLASTOS USANDO NAFTOL ASD ACETATO Y SU INHIBICION CON FLOURURO DE SODIO. 0.Lave con agua corriente por 2 minutos.Fast Blue. 3 ml. acetato. c.Mezcla de incubación. a.Formol al 40%.1 M Na2 HPO4 6. b.Floururo de sodio 75 mg. naftol ASD acetato.Fije las laminas en vapor de formol por 10 minutos. de naftol AS.Solución ASD acetato. 240 mg. 2. 5.80 gm. 4. Procedimientos. 1. 100 ml de buffer fosfato. . 200 mg. / 500 ml. de Fast Blue B.En un vaso de Coplin que contenga hematoxilina de Harris y coloree el contraste por 4 minutos. Reactivos.D. 6.B Sal. 3. Usar 40 ml.4. 16 mg. propilenoglycol. 2 ml. lave cuidadosamente y seque al medio ambiente 2.Examinar con aceite de inrnersión. 5. 5 ml. 8.Dejar secar las láminas. 1. 7.Lave con agua corriente por 30 a 60 segundos.Buffer fosfato. acetona.

8. Los blastos de origen mieloide muestran positividad a la coloración de Sudan Black.Seque el aire y examine con lente de inmersión. 3. 3. LEUCEMIA MONOCITICA. peroxidasa y esterasa (cloroacetato) 2. lavadas y secas e incube una en cada vaso de Coplin por 70 minutos a temperatura ambiente.Añadir 75 mg. Sudan Black.Luego de la incubación deposite las dos láminas en un vaso de Coplin marcado ³Agua´. Algunos blastos pueden presentar gránulos aislados particularmente con coloración de Sudan Black. Filtrar a un vaso de Coplin marcada con ³Floururo de Sodio´.Mezclar con agitador magnético por 3 ó 4 minutos. 5.Positividad a peroxidasa. 1.Corno coloración de contraste use hematoxilina de Harris por 10 minutos y lave como en 6. 4.50 ml de la mezcla incubadora se filtra a través del papel Whatman # 1. de Naf a los restantes 50 ml de solución incubadora. . Positiva a coloración de acetato esterasa. Negativa a la peroxidasa y al sudan Black. a un vaso de Coplin marcada: ³Buffer´. 6. cloroesterasa (Cloroacetato) y esterasa acetato. Cambie el agua varias veces o mejor aún deje correr el agua delicadamente dentro del vaso. LEUCEMIA MIELOIDE AGUDA. LEUCEMIA MIELO MONOCITICA. 7.Tome dos Láminas fijadas.