UNIVERSIDAD NACIONAL AUTONOMA DE MEXICO FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES CUAUTITLAN DEPARTAMENTO DE CIENCIAS BIOLOGICAS SECCION CIENCIAS DE LA SALUD HUMANA

QUIMICO FARMACEUTICO BIOLOGO

MANUAL DE LABORATORIO DE ANALISIS BIOQUÍMICO CLINICOS I

AUTORES: Q.F.B. MARTHA PATRICIA CAMPOS PEON Q.F.B. RENE DAMIAN SANTOS M en C GLORIA LETICIA ARELLANO MARTNEZ Q.F.B. MA. DE LOURDES GALVAN RUIZ Q.F.B. BEATRIZ LUCIA GONZALEZ MALDONADO Q.F.B. OMAR ASAF RUIZ CAZARES

AGOSTO DE 2008

ÍNDICE Pág
Presentación Reglamento de Laboratorio Practica No. 1. Toma de muestra de sangre venosa Practica No. 2. Citometría hemática Practica No. 3. Grupos sanguíneos y pruebas cruzadas Practica No. 4. Pruebas de coagulación Practica No. 5. Química sanguínea I y glucosa posprandial Practica No. 6. Química sanguínea II Practica No. 7. Urianálisis Referencias 2 3 5 14 25 33 43 51 59 70

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PRESENTACION
En este manual se presenta la información necesaria para realizar adecuadamente las prácticas de la asignatura de Análisis Bioquímico Clínicos I, además de formar parte del material de consulta para los estudiantes y aplicar a los estudiantes que se encuentren cursando la asignatura de Análisis Bioquímico Clínico I y a los profesores que participen en esta asignatura. El manual fue elaborado por los profesores que participan en la asignatura. El manual consta de 7 prácticas, que están organizadas en 10 puntos, que a continuación se resumen, para mejor comprensión del manual. 1. Marco teórico. En el se da un panorama de la importancia del estudio e incluye una sección denominada información complementaria, que comprende una serie de preguntas o temas que el alumno debe responder previo a la realización de la práctica. 2. Objetivo u objetivos de la práctica. 3. Materiales. Este punto incluye un listado del material requerido por equipo de trabajo y por grupo, los reactivos necesarios para la práctica, así como la muestra biológica requerida para la misma. 4. Métodos. En este apartado se desglosan las determinaciones que se realizarán durante la sesión experimental. Cada determinación incluye su fundamento, el significado clínico y el procedimiento a seguir. 5. Disposición de residuos. Se índica la forma de desechar los residuos generados durante la práctica. 6. Diagrama de flujo. Consiste de una hoja en blanco en la que el alumno plasmara en forma de diagrama la secuencia a seguir en la sesión experimental. 7. Resultados. En algunas prácticas este punto viene desglosado por cálculos aritméticos y una tabla de resultados, en la cual se deben incluir el valor de referencia y la interpretación de los resultados. 8. Discusión. Este apartado se incluyo con el fin de que alumno plasme en el mismo manual su análisis y discusión de resultados, evitando el manejo de otras libretas. 9. Conclusiones. Tiene la misma intención del punto 8. 10. Referencias consultadas. Es un punto en el cual el alumno deberá anotar las referencias que empleo para realizar su discusión y elaborar sus conclusiones. Se ha incluido también en el manual, el reglamento del laboratorio, que se ha ubicado al inicio del manual, con la finalidad de que el alumno lo tenga siempre a la mano y recuerde cuales son los lineamientos que debe seguir en el laboratorio, para un mejor desarrollo de las prácticas. Los Profesores de la Asignatura

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5) En todo momento deberá mostrarse una conducta adecuada en el área de trabajo. b) Ingerir alimentos y/o bebidas.UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES CUAUTITLÁN DEPARTAMENTO DE CIENCIAS BIOLÓGICAS CODIGO: DOC-CB-FESCDEX-01-00 N de REVISIÓN: o REGLAMENTO GENERAL PARA LOS LABORATORIOS 1) Este reglamento aplicará para personal académico. h) Sentarse sobre las mesas de trabajo. alumnos y laboratoristas. material que no corresponda a la 3 . 6) Queda prohibido en los laboratorios: a) Tirar basura fuera del cesto. c) Fumar. 4) Por seguridad. 3) La tolerancia para el inicio de la sesión de laboratorio será hasta de 10 minutos a partir de la hora señalada. e) La entrada a los inter-laboratorios a toda persona ajena a los mismos. j) Utilizar las gavetas para guardar asignatura. 2) Para todo trabajo realizado en el laboratorio deberá utilizarse bata blanca con manga larga. d) Recibir visitas. g) Salir del laboratorio en el horario asignado para la sesión experimental. i) Mover el mobiliario de su lugar. f) Realizar reuniones o convivios en los laboratorios. no deben cerrarse las puertas del laboratorio con llave durante las prácticas.

entendiendo por residuo peligroso: elementos. reactivas.7) Los residuos peligrosos deben depositarse en los contenedores destinados para tal fin. 3º de la Ley General del Equilibrio y Protección del Ambiente). reproductores de sonido o cualquier medio electrónico de entretenimiento. es requisito indispensable que el alumno llene debidamente el vale de material (FPE-CBDEX-01-09/CSH-a) y lo entregue a la persona responsable. explosivas. tóxicas. 12) Es obligación de todos mantener limpio y ordenado el lugar de trabajo y todo el laboratorio. 9) El acceso al laboratorio se permitirá únicamente cuando esté presente un profesor. 8) Dentro del laboratorio no se permite el uso de teléfonos celulares. sustancias. para solicitar material y equipo. deberá programarse con el responsable del laboratorio en un horario que no interfiera con aquel destinado para el desarrollo de las prácticas. 11) El alumno deberá revisar el material y/o equipo al momento de recibirlo indicando cualquier anomalía (faltante o material dañado) y será devuelto en las condiciones en que se recibió. desechos o mezclas de ellos que en cualquier estado físico representan un riesgo para el ambiente. se hará acreedor a las sanciones establecidas en cada laboratorio. por sus características corrosivas. 10) El uso del laboratorio para trabajo extraordinario. la salud o los recursos naturales. compuestos. 4 . dejando como depósito la credencial vigente de la UNAM. de no hacerlo. inflamables o biológico-infecciosas (Art.

utilización y regulación homeostática. El 45% restante de la sangre se compone de elementos celulares eritroides. por lo que se debe tener conocimiento sobre: La distribución y concentración de cada metabolito en los diferentes tipos de líquidos orgánicos. vena no visible. La producción. hospitalizado) Selección del material Posición de la toma Selección del sitio de punción Punción venosa (preferentemente con sistema de punción al vació) Eliminación de punzo cortantes 5 . 1. plaquetarios y leucocitarios.1 MARCO TEÓRICO El volumen total de sangre en un adulto es 7 a 8% de su peso corporal. edad. Para que una muestra tenga significado biológico. Existen diferentes técnicas de extracción de muestra sanguínea Punción venosa Punción capilar Punción arterial Para tomar la decisión de cuándo usar cada una de estas técnicas se debe considerar los siguientes factores: Edad del paciente Condiciones del paciente Tipo de pruebas a realizar La técnica de venopuncion. contempla desde: Condiciones inherentes del paciente (peso.PRACTICA No. como esta descrita en la estandarización. debe ser representativa y homogénea. Debe recordarse que una muestra de sangre nos va a reflejar el perfil biológico del paciente del momento en que se ha efectuado la extracción. Estado biológico del metabolito a estudiar (si está libre o conjugado). 1 TOMA DE MUESTRA DE SANGRE VENOSA Patricia Campos P. siendo el 55% la porción líquida llamada plasma cuya composición corresponde fundamentalmente 90 % agua y el 10 % diferentes metabolitos.

además no debe estar más de un minuto en lugar de punción. se inhibe la cascada de la coagulación obteniendo. La aplicación del torniquete es recomendada para el caso de venas profundas. es necesario considerar que se ubique 10 cm.1. 1. mientras que si está cerca de la zona de punción hay posibilidad de generar un hematoma. provoca aumento de un 15% de desviación en valores de coagulación y de un 10% en el hematocrito. Cuando la sangre se obtiene agregando algún anticoagulante. ya sea por sustracción del calcio del plasma o por neutralización de la trombina. La sangre desfibrinada es aquella desprovista de factores de la coagulación. En cambio. Para su colocación. La venopunción es la más utilizada en el laboratorio clínico ya que es un método sencillo para la obtención de sangre. Se ha demostrado que la utilización del torniquete durante un tiempo mayor a 1 minuto. si se permite que la muestra coagule. por encima del lugar de punción. se obtendrá coágulo y el sobrenadante se llama suero. En casos en los cuales resulta difícil localizar la vena. elementos formes separados del sobrenadante que se conoce como plasma. mediante el masaje o por combinación de ambos procedimientos. su modo de acción.Las venas más comúnmente utilizadas son las del área ante cubital (vena basílica. después de la centrifugación. fácil manejo y comodidad para el paciente. esta suele hacerse en la vena media cefálica que corre por el interior del brazo y es visible en el pliegue del codo. Los anticoagulantes son sustancias que impiden la coagulación sanguínea. poco visibles y poco palpables. su concentración y proporción en que se usa para esta función. debido a su accesibilidad. Se puede realizar de una manera accesible en la mayoría de los pacientes ambulatorios o de consulta externa y en algunos pacientes hospitalizados. ¿Cual es la diferencia entre suero y plasma? Considere su composición y la metodología para su obtención ¿Que es la hemólisis? Mencione algunas recomendaciones para evitarla ¿Que se obtiene de la técnica para la sangre desfibrinada después de la centrifugación? Indique como se observa una muestra sanguínea lipémica y cual es la razón 6 . si se coloca más alto no hay presión. Debe sujetarse con medio nudo para que pueda quitarse jalando el extremo libre. cefálica y cubital media).1 Información Complementaria Indique ejemplos de anticoagulantes. puede hacerse resaltar diciendo al paciente que cierre y abra la mano.

1 Muestra Biológica Se utilizarán tres muestras de sangre venosa: 3 ml y 10 ml obtenidos con jeringa.3.1.3 Material por grupo Aplicador de madera Aguja para tubo al vacío Tubo al vacío con gel separador Torundas de algodón con alcohol al 70 % Gasas Cuadros de papel parafilm Balanza granataria de dos platos Frasco con agua corriente y una jeringa Centrifuga Espectrofotómetro con gradilla y 10 celdas limpias Contenedor para punzocortantes Vaso de precipitado de 250 mL Gradilla Pisetas con agua destilada Recipiente para desechos (RPBI) Micropipetas 5 a 40 l Pipeta graduada de 1 mL (1/100) con propipeta Baño de incubación a 37º C con gradilla y termómetro Brazos artificiales con solución cada uno con jeringa Tubo al vacío con Aguja 1. 7 ml obtenidos con tubo al vacío. El alumno conocerá la importancia e influencia de la buena toma de muestra sanguínea a través de los conocimientos y practica adquiridos para poder llevar a cabo un correcto diagnóstico y una toma de decisiones terapéuticas adecuada.3. 1.3 MATERIAL 1. 1.3.3.2 OBJETIVOS El alumno adquirirá los conocimientos necesarios a para poder realizar una venopunción El alumno desarrollara la habilidad práctica por medio de la técnica de la venopunción para poder obtener una muestra de sangre venosa con calidad e integridad.4 Reactivos por grupo EDTA al 5% Alcohol al 70% Agua destilada Hipoclorito de sodio Benzal 7 .2 Material por equipo 1 4 4 3 8 1 1 Gradilla Tapón para tubo de ensaye 13 x 100 Pipetas pasteur Bulbo para pipeta Pasteur Tubo de ensaye 13 x 100 Tapa o base para caja petri Tubo de ensaye 15x150 con tapón de rosca 10 1 1 1 6 1 Perlas de vidrio Propipeta Adaptador para tubos al vacío Piseta con agua destilada Gasas Tubo 12x75 con 1 ml de EDTA 5% 1.

e) Sujetar la parte posterior del brazo del paciente a nivel del codo.4 METODOS 1. pues algunos por el efecto de la punción se desmayan y es necesario considerar este riesgo. que afecta la relación sangre anticoagulante y por lo tanto la calidad de la muestra). g) Retirar la ligadura en cuanto la sangre empiece a fluir (si es necesario). jalar ligeramente la piel sobre la vena. Colocarlo en el adaptador). h) Dejar llenar el tubo hasta el volumen preestablecido (frecuente error preanalítico. Insertar el siguiente tubo en el caso de toma múltiple. k) Cuando se finaliza la toma. primero se debe retirar el tubo y posteriormente la 8 . no debe estar de pie o sentado en bancos altos. b. (Romper el sello de seguridad de la aguja sin quitar el protector de la misma en presencia del paciente. c. b) Localizar la vena con el dedo índice y/o medio. Dejar secar al aire. c) Limpiar la zona con alcohol isopropílico al 70% de manera circular del centro hacia fuera.1 Técnica de venopunción por vacío Para la extracción de sangre el paciente estará sentado y deberá apoyar bien el brazo en una superficie plana. La técnica de venopunción que se esquematiza a continuación es la indicada para el sistema al vacío: a) Preparar el material. f) Punción en ángulo de 45º insertando primero la aguja con el bisel hacia arriba colocándola paralela al trayecto de la vena y posteriormente insertar el tubo (respetando el orden de la toma).1 e) Quitar el tapón de plástico de la jeringa cuidando que el bisel de aguja se encuentre hacia arriba colocarla en ángulo de 45º y paralela al trayecto de la vena. aguja. d y e del procedimiento 1. l) Presione el sitio de la venopunción con una torunda con alcohol y coloque un apósito adhesivo elástico. i) j) Mezclar suavemente los tubos con anticoagulantes o aditivos. avanzar la aguja y perforar la pared de la vena.4.4.1. Seguir los pasos a. d) Solo si es necesario aplicar un torniquete. evitar utilizar el pulgar. 1.4.2 Técnica de venopunción con jeringa. f) Perforar la piel a lo largo de la cara lateral de la vena.

Mientras se llenan los tubos sucesivamente. se coloca en forma inclinada (mayor superficie de contacto) en el baño de incubación a 37º C durante 10 minutos. evitando la formación de burbujas y se centrifuga a 2.4. y se centrifuga a 2. El tubo se retira de la centrifuga y se separa el suero con pipeta Pasteur. se separa ligeramente de las paredes con un aplicador de madera. vaciándolo en otro tubo.5 Obtención de sangre desfibrinada La muestra de sangre venosa obtenida con jeringa se vacía en un tubo con tapón de rosca que contenga al menos el mismo número de perlas de vidrio que mililitros de sangre se vaya a desfibrinar. que se elegirá dependiendo de las determinaciones que se realizarán a la muestra. A continuación se aplica un movimiento de inversión 9 . se quita el torniquete.g) Al subir espontáneamente la sangre (se observa una ligera gota en la cubeta de la aguja) jalar ligeramente el émbolo con movimiento constante. El tubo se saca de la centrifuga y se separa cuidadosamente el plasma con una pipeta Pasteur. invertir con suavidad los tubos con aditivos que ya se han llenado 1. EDTA al 5 % (tubo de tapón lila) o citrato sódico al 3. El suero también puede obtenerse tomando la muestra con jeringa y depositándola en un tubo de ensayo sin anticoagulante.4.10 min.8 % (tubo de tapón azul). vaciándolo en otro tubo de ensayo.10 min. h) Cuando se tiene suficiente cantidad de sangre. 1. 1.3 Obtención de Plasma La sangre obtenida por punción venosa con jeringa (3 ml) se vacía inmediatamente en el tubo con la cantidad adecuada de anticoagulante. El coagulo (observe la retracción si se presenta). i) Para el manejo de la muestra obtenida con jeringa se retira la aguja de la jeringa y la sangre se vacía lentamente por la pared de los diferentes tubos a usar con y/o sin anticoagulante. el cual puede contener dos diferentes anticoagulantes. El plasma también se puede obtener por el método de tubo al vacío. Es importante recordar quitar la aguja para vaciar el contenido de la jeringa.4.500 rpm/5 .500 rpm/ 5 . se retira la aguja rápidamente y se aplica una torunda por último un apósito adhesivo elástico.4 Obtención de Suero La muestra de sangre obtenida con tubo al vacío de tapón rojo. Se mezcla por inversión lenta con el anticoagulante.

Al cabo de 2-3 minutos se observará que el ruido que las perlas hacían al chocar contra las paredes del tubo. deja de oírse.10 min. 10 . atrapándolas. Los punzocortantes como agujas y lancetas así como tubos rotos contaminados deben depositarse en el contenedor rojo rígido. Posteriormente se separan con mucho cuidado la sangre líquida en un tubo de ensaye que se lleva a centrifugar y las perlas de vidrio en la tapa o base de una caja Petri las cuales se lavan con agua destilada separando la fibrina que se adhirió a ellas. 1. Los tubos de vidrio que contengan las muestras serán colocados en agua con cloro durante 24 h. La eliminación de residuos se hace usualmente en instalaciones incineradoras apropiadas. se deposita sobre ellas. eso se debe a que la fibrina que se va formando en el proceso de la coagulación.5.2 Eliminación de muestras biológicas Los tubos para extracción de sangre contaminados o llenos tienen que recogerse en recipientes apropiados para residuos de material potencialmente infeccioso que en este caso son bolsas rojas. En este caso la eliminación de aguja de toma múltiple. Con una adecuada eliminación se disminuyen los eventos de punción accidental tanto para el paciente y trabajador de salud. pues esto puede ser un factor de riesgo para el personal técnico y de intendencia. como para el personal de intendencia. lo cual permite que el laboratorio seleccione el más adecuado a su flujo de trabajo y material utilizado. La sangre líquida se centrifuga a 2.1 Eliminación de punzocortantes La eliminación de punzocortantes adecuada es parte importante de la toma de muestra. está de acuerdo a normas nacionales (NOM-087-ECOL-SSA1-2002) y las políticas de buenas prácticas establecidas en cada laboratorio. En los contenedores existen diferentes capacidades. Se debe tomar en consideración las instrucciones de utilización recomendadas por los fabricantes y cuidar no sobrellenar el contenedor. 1.500 rpm/5 .suave del tubo constante. A partir de ese momento se prosigue el movimiento rotatorio durante 10 minutos.5.5 DISPOSICIÓN DE RESIDUOS 1.

6 DIAGRAMA DE FLUJO 11 .1.

2 Tabla de Resultados Datos Paciente Puncionó Técnica(c/s Muestra Observaciones anticoagulante) obtenida 12 .7 RESULTADOS 1.1 Cálculos 1.7.7.1.

9 CONCLUSIONES 1.8 DISCUSIÓN 1.1.10 REFERENCIAS CONSULTADAS 13 .

Se encuentra alterada en procesos inflamatorios y se usa para monitorear el tratamiento de ciertas enfermedades. valor de hematocrito y concentración de hemoglobina se calculan los índices eritrocíticos (índices de Wintrobe). mide la sedimentación de los eritrocitos en un periodo de 1 hora. Datos que facilitan el diagnóstico y la clasificación de las anemias. El recuento de reticulocitos permite evaluar la actividad eritropoyética de la médula ósea. 2 CITOMETRÍA HEMÁTICA 2. El método de cianometahemoglobina para la determinación de hemoglobina y el microhematocrito que permite medir el volumen de los eritrocitos centrifugados.1 MARCO TEÓRICO. Los resultados obtenidos con estos procedimientos se usan en el diagnóstico para la identificación de afecciones que incluyen: anemias. se usan como parte del control de calidad y como métodos de apoyo de análisis de varios laboratorios. que aportan datos importantes sobre el tamaño. se hace utilizando tinciones supravitales.PRÁCTICA No. la presente práctica está diseñada para introducir al estudiante en los procedimientos de laboratorio manuales que puede ser necesario utilizar cuando existen recuentos que exceden la linealidad de un instrumento o éste presenta un desperfecto. así como. y además son útiles para el pronóstico y vigilancia terapéutica de diversos padecimientos. leucocito o plaqueta que ayudan a detectar anormalidades cuantitativas. trastornos hereditarios de los leucocitos. Aunque existe la tendencia a la automatización en la citometría hemática. leucemias. 14 . El hemocitómetro permite realizar recuentos de cualquier tipo de célula sanguínea: eritrocito. infecciones. la concentración de hemoglobina y el peso de hemoglobina de un eritrocito promedio. La velocidad de sedimentación globular (VSG). que al hacer un frotis sanguíneo. que es dependiente de las sustancias contenidas en el plasma y la capacidad de las células para sedimentar. teñirlo con colorante de Wright y observarlo al microscopio permite identificar las alteraciones morfológicas o en el caso de los leucocitos el tipo celular que predomina. Empleando los resultados del recuento eritrocitario.

1. El alumno aprenderá a identificar la morfología de las diferentes células sanguíneas con fines diagnósticos. 3ml de reactivo Contador de Hayem cada uno Pipeta Pasteur con punta larga con bulbo Microscopio 2.8 utilizado para calcular la concentración de hemoglobina y sus unidades.3.2 OBJETIVOS El alumno aplicará los conocimientos adquiridos en la parte teórica. Sangre venosa completa obtenida por sistema de vacío con EDTA.3 MATERIALES 2. succión 3ml de reactivo de Turck.2 Material por equipo Gradilla Tubo de Wintrobe Tubo de ensaye 13 x 100 Hemocitómetro Tubo de ensaye 12 x 75 Adaptador para tubos al vacío Pipeta de Salhi con manguera de Tubos de ensaye 12x75 con 3 ml de SSF.3.1 Muestra biológica. El alumno interpretará los resultados obtenidos en el laboratorio a fin de establecer la presencia o no de anemia.3. 2.¿Cuáles son las instrucciones que se dan a un paciente a quien se le realizará una citometria hemática? .3 Material Por Grupo Tubo capilar Aguja para tubo al vacío Tubo al vacío de tapón lila Torundas de algodón con alcohol al 70 % Gasas Tubo al vacío con tapón lila Cuadros de papel parafilm Microcentrífuga Lector de hematocrito Espectrofotómetros con vaso de precipitado de 500 ml Celdas /2 gradillas Pipeta graduada de 5 ml c/propipeta Gradillas de Sedimentaciòn Pisetas de agua destilada Vasos de pp de 250 ml Viales limpios c/2 -3 ml de EDTA al 5% Vortex Recipiente c bolsa roja para desechos Contenedor para punzocortantes Frascos torunderos c/torundas y alcohol 15 . para realizar una citometria hemática. .Justificar matemáticamente y señalar c/u de los factores a considerar en la obtención del factor 36. 2.2. 2.1 Información complementaria.

alteraciones en los órganos que la sintetizan y disminución en la producción o destrucción excesiva de los eritrocitos. La disminución de hemoglobina indica anemia.8 para obtener la concentración de hemoglobina en g/dl.3.2Cuenta de eritrocitos: Método del hemocitómetro Fundamento.1 Hemoglobina: Método de la cianometahemoglobina Fundamento. y conservar a los eritrocitos en un ambiente isotónico. por el conteo de las cinco cuadrículas secundarias del hemocitómetro y por el volumen de la cámara.4 MÉTODOS 2. Multiplicar la absorbancia obtenida por 36. compuesto de bicloruro de mercurio. Procedimiento.4. Las células contadas en el objetivo 40X corresponderán a los eritrocitos después de un tratamiento con el diluyente de Hayem. Secar el exceso de sangre con una gasa limpia. Para la determinación de hemoglobina se utiliza el reactivo de Drabkin. Incubar 3 minutos a temperatura ambiente. Homogenizar la preparación en un vórtex. el ferricianuro de potasio la reduce a metahemoglobina. Leer a 540 nm antes de 5 minutos.4 Reactivos Reactivo de Drabkin (Hemoglobina) Etanol 70% Líquido de Turck Reactivo de Hayem Cloruro de sodio 0. depositar la muestra en el tubo con el reactivo de Drabkin. Colocar 5 ml de reactivo de Drabkin en un tubo 13x100 Llenar la pipeta de Sahli hasta la marca de 20 con ayuda una boquilla. que permite la lisis de los leucocitos. El número de células por mm3 estará determinado por un factor de dilución en la pipeta de Thoma para eritrocitos. Significado clínico.(cedidos por el KCN) formando cianometahemoglobina que tiene una absorbancia máxima a 540 nm. el cual contiene un detergente que permite la lisis de los eritrocitos y. por lo tanto la liberación de la hemoglobina. Posteriormente.9% (SSF) Benzal Hipoclorito de sodio Reactivo de Wright Buffer de fosfatos para tinción de Wright Azul de cresilo brillante 2. sulfato de sodio y cloruro de sodio. 16 . que se estabiliza por la unión con los iones CN.2. 2. que puede deberse a deficiencia en las sustancias que intervienen en su formación. Tapar el tubo con papel parafilm. Sin dejar caer alguna gota de sangre. El valor de referencia de la hemoglobina para mujeres es de 12 a 16 g/dl y para hombres de 14 a 18 g/dl. enjuagando la pipeta con un poco del reactivo.4.

Significado clínico. El valor de referencia para hombres es de 4,0 – 6,2 x 106 células / mm3, el de mujeres es de 4,0 – 6,2 x 106 células / mm3. El aumento de eritrocitos se observa en la hemoconcentración, en afecciones del bazo. Su disminución se manifiesta en las anemias, cuyo origen puede ser la pérdida excesiva de sangre, destrucción acelerada o producción inadecuada de eritrocitos. Procedimiento. Llenar la pipeta de Thoma para eritrocitos (roja) con sangre hasta la marca de 0.5 con ayuda una boquilla. Secar el exceso de sangre con una gasa limpia. Sin dejar caer alguna gota de sangre, llenar con el líquido diluyente de Hayem hasta la marca de 101 sin pasar de la marca. Tapar los extremos de la pipeta con papel parafilm. Mezclar el contenido en el agitador para pipetas de Thoma durante 1 min. Desechar las primeras 3 gotas y se llena el hematocitómetro. Contar las células con el objetivo 40X en las cinco cuadrículas secundarias con la ayuda de un contador mecánico. Calcular el número de eritrocitos/mm3 multiplicando el valor obtenido por 10000. 2.4.3 Hematocrito: Método del Microhematocrito Fundamento. El hematocrito expresa en porcentaje (%) el volumen que ocupan los eritrocitos en una muestra sanguínea centrifugada en velocidad y tiempo constante. Significado clínico. El valor de referencia es de 37 a 47% en mujeres y 42 a 52% en hombres. Su aumento indica policitemia (aumento del número de eritrocitos); su disminución se presenta durante la anemia, hipovolemia y durante el embarazo. Procedimiento. Llenar un capilar de 75 mm hasta ¾ partes por capilaridad con la sangre previamente homogenizada. Sellar el extremo vacío del tubo con un encendedor. Colocar el tubo capilar sellado en la microcentrífuga con la parte sellada hacia el lado opuesto al centro de la centrífuga. - Centrifugar 5 minutos (10.000 rpm) o 10 minutos (5.000). Calcular el microhematocrito con ayuda del lector de microhematocrito o de acuerdo a la siguiente fórmula: Hto= Vol. de eritrocitos (mm) / Vol Total de sangre (mm) x100 Reportar en %.

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2.4.4 Índices de Wintrobe: VCM, HCM, CHCM Fundamento. Se trata de indicadores obtenidos mediante cálculos aritméticos, que involucran los valores de hemoglobina, número de eritrocitos/mm3 y hematocrito, y que permiten la clasificación morfológica de las anemias. Significado clínico. Los valores de referencia son: VCM = 80 – 100 fl; un valor < 80 fl indica anemia microcítica; mientras que por arriba de 100 fl indica anemia macrocítica. Esta relacionada con la anisocitosis. HCM = 26 a 34 pg y CHCM = 32 – 36 g/dl; valores menores al de referencia indican anemia hipocrómica; mientras que valores por arriba del límite de referencia indican anemia hipercrómica. Procedimiento. Para obtener los índices de Wintrobe es necesario tener los valores de hemoglobina, número de eritrocitos/mm3 y hematocrito, utilizando las siguientes fórmulas. Volumen Corpuscular Medio (VCM) = Hto / No. eritrocitos X 10 = [fl] (femtolitros) Hemoglobina Corpuscular media (HCM) = Hb / No eritrocitos. X 10 = [pg] (picogramos) Concentración de HCM (CHCM) = Hb / Hto X 100 = [g/dl] 2.4.5 Cuenta de Reticulocitos: Tinción supravital Fundamento. Los reticulocitos son eritrocitos inmaduros que contienen restos de rRNA (ácido ribonucleico ribosomal). Cuando son sometidos a colorantes llamados supravitales, como el azul de cresilo brillante, este precipita sobre los restos de rRNA permitiendo observarlo en forma de “cuentas de rosario”, que los eritrocitos maduros no contienen. Significado clínico. El valor de referencia es de 5 a 20 reticulocitos/1.000 eritrocitos o 0,5 a 2,0 %. Cuando se presenta la destrucción acelerada de eritrocitos (anemia hemolítica, sangrado excesivo, hemorragia), el número de eritrocitos aumenta. Procedimiento. Colocar en un tubo 12x75, 5 gotas de colorante azul de cresilo brillante Adicionar 5 gotas de sangre homogenizada. Mezclar sin agitar ni generar burbujas. Incubar 15 minutos a temperatura ambiente, Con esta preparación realizar un frotis y dejarlo secar al aire. Observar con el objetivo de 100X, buscando una zona de la extensión donde el número de eritrocitos sea aproximadamente 100, contando el número de reticulocitos presentes. Repetir el conteo en al menos en tres campos distintos. Expresar el número de 18

reticulocitos observados por cada mil eritrocitos o en tanto por ciento.

2.4.6 Cuenta de leucocitos: Método del hemocitómetro Fundamento. El número de células por mm3 estará determinado por un factor de dilución en la pipeta para glóbulos blancos, por el conteo de las cuatro cuadrículas primarias del hemocitometro y por el volumen de la cámara. Las células contadas en el objetivo 10X corresponderán a los leucocitos después de un tratamiento con el diluyente de “Turck”, compuesto de ácido acético glacial, que lisa a los eritrocitos, y azul de metileno (colorante de contraste) que permite observar fácilmente a los leucocitos. La fuerte agitación es importante para este cometido. Significado clínico. El valor de referencia es 5.000 a 10.000 leucocitos/mm3. Los leucocitos son células de la defensa (inmunidad) que incrementan en procesos inflamatorios o infecciosos. Su disminución se observa durante la inmunosupresión (por el usos de fármacos), inmunodeficiencia (algunos virus pueden ocasionarla) o en la leucopoyesis alterada. Procedimiento. Llenar la pipeta de Thoma para leucocitos (blanca) con sangre hasta la marca de 0.5 con ayuda de una boquilla. Secar el exceso de sangre con una gasa limpia. Sin dejar caer alguna gota de sangre, llenar con el líquido diluyente de Turck hasta la marca de 11 sin pasar de la marca. Tapar los extremos de la pipeta con papel parafilm. Mezclar el contenido en el agitador para pipetas de Thoma durante 1 min. Desechar las primeras 3 gotas y se llena el hematocitómetro. Contar las células con el objetivo 10X en las cuatro cuadrículas primarias con la ayuda de un contador mecánico. Calcular el número de leucocitos/mm3 multiplicando el valor obtenido por 50.

2.4.7 Cuenta diferencial de leucocitos: tinción de Wright Fundamento. La extensión de la sangre sobre un portaobjetos (frotis) permite apreciar mejor la morfología de las células sanguíneas. El conteo diferencial es posible gracias a la tinción de Wright, cuyo colorante está compuesto de azul de metileno (que tiñe de color azul las partes ácidas de las células) y eosina (que tiñe las partes alcalinas) disueltos en metanol (que permite la fijación de las células), adicionando a la preparación buffer de fosfatos (que rehidrata a las células después de la exposición al metanol). De esta manera, es posible realizar la cuenta diferencial de las poblaciones leucocitarias, además de observar la morfología y características de tinción de los 19

la monocitosis Neutrófilos en banda = 0 a 5 %. es hipocrómico si se tiñó débilmente. pues se trata de células que controlan la respuesta alérgica. Como se mencionó.eritrocitos y plaquetas.  Anisocromía: diferentes características de tinción. Sin tirar el colorante agregar el buffer de fosfatos durante 15 minutos. Linfocitos = 20 a 40%. cuyas observaciones deben relacionarse a lo determinado por los índices de Wintrobe. Procedimiento. la neutropenia se presenta en la depresión de la médula ósea. Secar al aire. Eosinófilos = 0 a 4%. 20 . la basofilia se manifiesta cuando los eosinófilos aumentan. la neutrofilia se observa durante procesos inflamatorios agudos e infecciosos. Colocar una gota de sangre perfectamente homogenizada en un portaobjetos. No mantiene relación con los índices de Wintrobe. la linfocitosis se manifiesta en alteraciones virales y en respuesta a procesos infecciosos. Esta característica se relaciona con el VCM. siendo un microcito si su tamaño es menor 7 m. la eosinofilia se presenta principalmente en respuesta a cuadros alérgicos y durante las parasitosis. Significado clínico. en el frotis sanguíneo también se observan las plaquetas (forma y tamaño) y los eritrocitos. normocrómico si tiene una coloración normal e hipercrómico si su tinción es intensa. Cubrir el frotis completamente con colorante de Wright durante 7 minutos (cuidar que no se seque el colorante). Hacer la extensión de sangre con un movimiento suave y firme con la ayuda de otro portaobjetos. El valor de referencia relativo y las alteraciones comunes de las células leucocitarias son las siguientes: Neutrófilos segmentados = 45 a 60%. la linfopenia se observa en procesos similares a la neutropenia.  Poiquilocitosis: cambios permanentes en la forma del eritrocito. Monocitos = 0 a 7%. normocito si va de 7 a 8 m y macrocito si es mayor a 8 m. inmunodeficiencia o inmunosupresión. su número se observa incrementado cuando los neutrófilos segmentados disminuyen por reaccionar ante el agente infeccioso. Basófilos = 0 a 1%. Esta característica se relaciona con el HCM y CHCM. de acuerdo a lo siguiente:  Anisocitosis: diferentes tamaños del eritrocito.

Si la VSG está aumentada se demuestra la presencia de inflamación o destrucción celular.8 Velocidad de sedimentación globular: Método de Wintrobe Fundamento. 100 células leucocitarias con ayuda de un contador mecánico. hepatitis.- Decantar y enjuagar con agua destilada. Con la ayuda de la pipeta Pasteur llenar el tubo de Wintrobe hasta la marca de 10 ó 1 con sangre previamente homogenizada. embarazo. agujas. Significado clínico. infecciones crónicas y agudas.4. Al mismo tiempo que se recorre el frotis observar la morfología de eritrocitos y plaquetas. algodón e incluso los mismos guantes. menstruación. 2. 21 . torundas. se desecharán en el bote de la basura si no están contaminados con muestra biológica. papel y demás material desechable contaminado con sangre se depositarán en la bolsa roja de residuos peligrosos biológico-infecciosos (RPBI). Procedimiento. Los guantes. El valor de referencia para hombres es 0 a 15 mm/h y para mujeres es 0 a 20 mm/h. Colocar el tubo de Wintrobe en la gradilla de sedimentación cuidando que esté perfectamente bien nivelada. fiebre reumática. Las agujas se desecharán en el contenedor rojo de punzocortantes. Hacer la lectura de los milímetros (mm) sedimentados en una hora. infarto al miocardio. Dejar reposar durante una hora evitando cualquier movimiento. Los empaques de jeringas.5 DISPOSICIÓN DE RESIDUOS Los tubos con sangre y muestra biológica se depositarán en los contenedores dispuestos para cada fin. Contar al microscopio en el objetivo de 100X. 2. guantes. La velocidad de sedimentación globular (VSG) está determinada por la propiedad de sedimentación de las células sanguíneas por influencia de la gravedad y depende de las características del plasma y su relación con las células. artritis reumatoide. como en el caso de lupus eritematoso generalizado.

6 DIAGRAMA DE FLUJO 22 .2.

7 RESULTADOS 2. Neutrófilos banda Linfocitos Monocitos Basófilos Eosinófilos Resultado Valor de Referencia Observaciones en 23 .1 Tabla Datos del Paciente Nombre______________________________________ Edad______ Sexo____ Determinación Hemoglobina Hematocrito VSG Eritrocitos HCM VCM CMHC Reticulocitos Leucocitos Neutrófilos segmen.1 Cálculos 2.7.7.2.

8 DISCUSIÓN 2.2.10 REFERENCIAS 24 .9 CONCLUSIONES 2.

PRÁCTICA No. Estos diversos antígenos forman a los grupos sanguíneos que son biomoléculas presentes al nacimiento. La 25 . será detectada por una reacción antígeno-anticuerpo observándose en forma de aglutinación.1 MARCO TEÓRICO Las células sanguíneas contienen moléculas en la superficie de la membrana que difieren de un individuo a otro. son una secuencia de 5 a 7 carbohidratos y se encuentran en la membrana de los eritrocitos como glicolípidos o en líquidos corporales como glicoproteínas. que provocan una respuesta inmune más severa. Kidd. es decir. en el banco de sangre se emplean las pruebas cruzadas. Las sustancias que se encuentran en los eritrocitos y que son responsables de la incompatibilidad sanguínea. MN y Lewis. la identificación de este antígeno describe un individuo Rh positivo. exclusión de paternidad. Si existe alguna incompatibilidad sanguínea. aunque existen otros 43 antígenos más que lo componen. en el estudio de estados hemolíticos inmunológicos. Lo constituyen los tipos A. Su papel fisiológico de la lipoproteína es el transporte de iones con gasto de ATP. Dichas pruebas someten el plasma del receptor con eritrocitos del donador y viceversa. primate donde se descubrió al inocular sus eritrocitos en conejos) es una lipoproteína transmembranal cuya sección reaccionante es el antígeno D. El sistema ABO fue el primer grupo sanguíneo que se describió. Los carbohidratos del sistema ABO sirven de transportadores de iones para los eritrocitos. 3. se han llamado antígenos eritrocitarios y han sido descritos alrededor de 23 grupos diferentes. 3 GRUPOS SANGUÍNEOS Y PRUEBAS CRUZADAS Omar Ruiz C. Pero existen variantes como el antígeno Bombay y el antígeno de Lewis. Duffy. El factor Rh (de Macaccus rhessus. violaciones o en antropología física (origen o migración étnica. AB y O. Los sistemas ABO y Rh son los más estudiados debido a que son los más inmunogénicos. medicina forense. B. tomando gran importancia para el caso de transfusiones. homicidio. Otros grupos sanguíneos que han tomado importancia en el banco de sangre son el sistema Kell. mezcla racial). Debido a la presencia de otros grupos sanguíneos. Lutheran. El Rh está involucrado en la anemia hemolítica del recién nacido. cumplen con las leyes mendelianas y son detectadas porque reaccionan específicamente con un anticuerpo. Los grupos sanguíneos se estudian principalmente en los casos de transfusión o trasplantes.

1 Muestra biológica Sangre venosa completa obtenida por sistema al vacío con EDTA Suspensión de eritrocitos A al 5% Suspensión de eritrocitos B al 5% 3.2 OBJETIVOS El alumno conocerá la importancia de los grupos sanguíneos en el banco de sangre através del estudio de incompatibilidades. ¿Cuál es la secuencia de carbohidratos de los diferentes antígenos del sistema ABO? Describe el proceso de preparación de 2 ml de suspensión de eritrocitos al 5%.3.reacción de aglutinación es utilizada también en la determinación de los grupos sanguíneos.3 Aplicadores de madera Agujas 21G x Centrífuga Tubos al vacío con EDTA Lancetas Baño maría a 37°C con 2 gradillas. El alumno analizará la compatibilidad de dos muestras para una transfusión a través de las pruebas cruzadas.3.2 Material por equipo 1 8 2 2 1 1 Placa de porcelana Tubos de ensaye de 12 x 50 Tubos de ensaye de 13 x 75 Pipetas Pasteur Adaptador para sistema la vacío Gradilla Material por grupo Balanza de doble plato 1 frascos con agua Vasos de precipitados de 500 ml Contenedor para punzocortantes Contenedores para biológicos infecciosos 1 1 1 1 2 Bulbo para pipeta Pasteur Pipeta graduada 1/100 de 1 ml Pipeta graduada 1/10 de 5 ml Vaso de precipitados de 100 ml Tapones de goma para tubos de 13 x 75 3. El alumno determinará los grupos sanguíneos ABO y Rh de una muestra de sangre a través de reacciones de aglutinación. 3.3 MATERIALES 3.1 Información complementaria ¿Qué es la eritroblastosis fetal o anemia hemolítica del recién nacido? Investiga cuál es la utilidad del suero de Coombs y la albúmina en la práctica.3. 1 tubo y un 26 . 3. El alumno conocerá la utilidad del suero de Coombs con diferentes pruebas. Investiga los requisitos que debe cumplir el donante y otros análisis que se realizan a la unidad de sangre donada.1. 3.

Colocar al tubo B 5 gotas de suspensión de eritrocitos B. Mezclar bien con un aplicador de madera y rotar la placa por 2 minutos Observar si existe o no aglutinación en menos de 2 minutos (se debe observar 3. Procedimiento. “B”. Incubar 15 minutos a 37°C. La presencia de aglutinación indica la presencia de anticuerpos anti-A (si aglutina el tubo A) o anticuerpos anti-B (si aglutina el tubo B). grupo sanguíneo “B” si sólo aglutina en el tubo A. Procedimiento Colocar al tubo A 5 gotas de suspensión de eritrocitos A. Identifica los anticuerpos anti-A o Anti-B (también llamados isoaglutininas) presentes en el suero o plasma de la muestra. “O” si aglutina en ambos y “AB” si no se encuentra aglutinación en alguno de los tubos.termómetro Algodón 3. Colocar una gota de suero anti-B en otro extremo de la placa. Colocar una gota de suero anti-A en un extremo de la placa.2 Tipificación Inversa Fundamento. Una aglutinación positiva indica la presencia del antígeno. Significado clínico.3. El grupo sanguíneo será “A” si sólo aglutina en el tubo B. los cuales reaccionan específicamente con eritrocitos conocidos “A” o “B”. Agregar una gota de sangre completa próximo a cada gota de suero.4 Suero Suero Suero Suero Reactivos hemotipificador Anti-A hemotipificador Anti-B hemotipificador Anti-D de Coombs Jeringa Solución salina fisiológica (SSF) Albúmina al 22% Alcohol etílico al 70% 3. ya sea “A”. ambos (“AB”) o no aglutinación (“O”).4 MÉTODOS 3. La tipificación clásica utiliza la reacción de aglutinación para observar si existen los antígenos A y/o B en los eritrocitos. Agregar 5 gotas de suero o plasma problema a cada tubo. así mismo.4. 27 . centrifugar a 2. reaccionarán específicamente con anticuerpos anti-A o anti-B que harán que aglutinar produciendo una prueba positiva. Si existe alguno de ellos.1 Tipificación Clásica Fundamento.000 rpm por 1 minuto.4. el antígeno indica el grupo sanguíneo a la que pertenece la muestra. Significado clínico.

El Rh está compuesto por varios determinantes antígénicos (C. Significado clínico. Agregar una gota de sangre completa próximo a la gota de suero. Observar si existe o no aglutinación en menos de 5 minutos. La aglutinación positiva indica una sangre Rh positiva. 3. Estas pruebas determinan si existe compatibilidad sanguínea entre el donante y el receptor a través de enfrentar sus sueros y eritrocitos en una prueba in vitro. Significado clínico. Procedimiento. Si existe aglutinación en el tubo con anti-D. Esta prueba se aplica cuando el Rh es negativo o dudoso en la prueba de Antígeno D.000 rpm 1 minuto y observar si existe aglutinación moviendo el botón.4. la sangre es Rh 3. Procedimiento.4 Detección del factor Du (solo si el Rh es negativo o dudoso) Fundamento. E. El tubo con albúmina es el control negativo y no debe existir aglutinación. Colocar una gota de suero anti-D en un extremo de la placa.5 Pruebas cruzadas Fundamento. presentan aglutinación. c. e) siendo el D el que da una mejor reacción.4. Para facilitar la aglutinación se agrega suero de Coombs para detectar estos antígenos ya que reaccionan débilmente. De esta manera se descartan anticuerpos irregulares y de otros grupos 28 . Colocar a cada tubo 1 gota de suspensión al 5% de eritrocitos problema. D. Si ambos tubos no negativa. en el caso contrario se deberá hacer la prueba de Du para asegurar que sea Rh negativa.- Observar si existe o no aglutinación moviendo un poco el fondo del tubo. la sangre es de la variedad Du y es Rh positiva. d. Lavar 3 veces con SSF Después de decantar agregar a cada tubo 2 gotas de suero de Coombs Centrifugar a 2. 3. Mezclar bien con un aplicador de madera y rotar la placa por 2 minutos.3 Antígeno D (Rh) Fundamento. El antígeno D da una fuerte reacción de aglutinación con anticuerpos anti-D determinando así el factor Rh como positivo. A un tubo colocar una gota de suero anti-D y al otro una gota de albúmina Incubar ambos tubos a 37°C durante 15 minutos.4.

Colocar 2 gotas de suero o plasma del receptor y 2 gotas de suspensión de eritrocito del donador (Prueba Mayor). Los sobrenadantes resultados de los lavados con SSF se decantarán en un vaso con hipoclorito de sodio. Mezclar y centrifugar a 1. Observar aglutinación.000 rpm. a 37°C. Observar si existe aglutinación. Significado clínico. Procedimiento 1 (medio salino) Colocar 2 gotas de suero o plasma del receptor y 2 gotas de suspensión de eritrocitos del donador (Prueba Mayor).sanguíneos diferentes al ABO y Rh que pudieran reaccionar al momento de la transfusión. lavar 4 veces con SSF. Los Guantes. Decantar. Si no hay aglutinación o es dudosa. Las agujas y lancetas usadas de desecharán en el contenedor rojo de punzocortantes. Centrifugar a 1. Colocar 2 gotas de suero o plasma del donador y 2 gotas de suspensión de eritrocitos del receptor (Prueba Menor). Procedimiento 2 (medio proteico). Si sólo existe aglutinación en el tubo de la Prueba Mayor. mezclar y agregar 2 gotas de suero de Coombs.5 DISPOSICIÓN DE RESIDUOS Los tubos con sangre y muestra biológica se depositarán en los contenedores dispuestos para cada fin. torundas.000 rpm por 1 minuto. 29 . NOTA: los tubos en medio salino y medio proteico pueden realizarse simultáneamente 3. de lo contrario incubar 15 min. papel y demás material desechable contaminado con sangre se depositarán en la bolsa roja de residuos biopeligrosos. hay un 25% de incompatibilidad. 1 min. Observar si hay aglutinación. Mezclar y centrifugar a 1. Después de agregar el suero de Coombs y no observar aglutinación en ambos tubos hay compatibilidad del 100%. Agregar 2 gotas de albúmina y seguir los pasos del 3 al 8 del procedimiento de medio salino. Colocar 2 gotas de suero o plasma del donador y 2 gotas de suspensión de eritrocitos del receptor (Prueba Menor). existe un 75% de incompatibilidad. La aglutinación en ambos tubos indica 100% de incompatibilidad. por otro lado si sólo aglutina el tubo de la Prueba Menor.000 rpm por 1 minuto.

envolturas y demás material no contaminado se desechan en el contenedor de basura municipal 3.6 DIAGRAMA DE FLUJO 30 . guantes. servitoallas.Torundas.

7. Prueba Mayor Pm. Prueba Menor Grupo sanguíneo Donador Grupo sanguíneo Receptor % Compatibilidad % Incompatibilidad 31 .3. B ó ninguno -O-) (+) Aglutinó (-) No aglutinó Tipificación Inversa Suspensión de eritrocitos Aglutinación Isoaglutinina presente (anti-A.7 RESULTADOS Datos del Paciente Nombre______________________________________Edad______ Sexo____ 3.1 Tablas Tipificación Clásica y Antígeno D Suero hemotipificador Aglutinación Antígeno presente (A. anti-B) (+) Aglutinó (-) No aglutinó Eritrocitos A Eritrocitos B Anti-A Anti-B Anti-D Determinación del Factor Du. (Antígeno D negativo o dudoso) Aglutinación Muestra con albúmina Muestra con suero de Coombs (+) Aglutinó (-) No aglutinó Grupo sanguíneo Factor Rh Pruebas Cruzadas Proceso Centrifugación 1000 rpm/ 1 min Medio PM salino Pm Medio PM proteico Pm (+) Aglutinó (-) No aglutinó Incubación a 37°C y centrifugación Lavado con SSF y suero de Coombs PM.

8 DISCUSIÓN 3.10 REFERENCIAS 32 .3.9 CONCLUSIONES 3.

que sella con eficacia los vasos rotos.04 ml de anticoagulante para 1 ml de sangre. Siendo de gran utilidad la realización de diversas pruebas en el laboratorio que ayuden a la identificación correcta de la alteración en cualquiera de los tres sistemas antes mencionados. la vía extrínseca y la vía común. El EDTA al 5% sólo se recomienda para realizar conteo plaquetario ya que actúa inhibiendo el proceso de agregación. Por lo que las hemorragias son consecuencia de anomalías en la fase vascular. La protrombina es una proteína que se sintetiza en el hígado y es dependiente de la vitamina K. También se hará la evaluación cuantitativa de las plaquetas. que mediante la participación de la trombina logra gelificarse produciendo redes que recubre elementos celulares de la sangre y finaliza con la formación de un coágulo. 4 PRUEBAS DE COAGULACIÓN Lourdes Galván R. 3) Transformación de fibrinógeno en fibrina. 33 . La dosificación en que se utiliza es 1 parte de anticoagulante para 9 partes de sangre.1 MARCO TEÓRICO La hemostasia es el término que se aplica al conjunto de fenómenos que detienen o combaten el sangrado de un vaso sanguíneo lesionado.PRÁCTICA No. plaquetaria y/o en los factores de la coagulación. El proceso de la coagulación se verifica en tres fases: 1) Aparición de actividad tromboplastínica.8 % es el anticoagulante recomendado para pruebas de coagulación ya que conserva a los factores que participan en este proceso. En la presente práctica se realizarán pruebas que apoyan a la evaluación de la hemostasia: el tiempo de sangrado valora integralmente a la coagulación. 4. La dosificación en la que se utiliza es 0. sin embargo no es útil para pruebas de coagulación ya que inactiva algunos factores lábiles. En estas tres fases intervienen 16 factores de la coagulación que se activan en “cascada” formando: la vía intrínseca.02-0. el tiempo de coagulación del plasma y el tiempo de tromboplastina parcial activada evalúan el sistema intrínseco mientras que el tiempo de protrombina lo hace con el sistema extrínseco. El citrato trisódico al 3. La tromboplastina es una sustancia celular que se encuentra en plaquetas y tejidos transformando la: 2) Protrombina en trombina siendo necesaria la presencia de calcio. el cual provoca una serie de modificaciones físicas y bioquímicas de las sustancias participantes hasta llegar a la transformación de la sangre líquida en un trombo o coágulo sólido.

4. aplicará la técnica adecuada para obtener resultados confiables que reflejen el estado de salud o enfermedad del paciente respecto a la hemostasia. hematoma y púrpura.3 Material por grupo Baños para incubación con gradilla Termómetros Gradillas Tubos de ensaye 15x150 Pipeta graduada de 1 ml (1/100) Pipetas graduadas de 1 ml (1/10) Pipetas graduadas de 5 ml Pipetas graduadas de 10 ml Propipetas Centrífuga (16 tubos) Balanza Frascos con agua y una jeringa Torundas Tubos capilares Lancetas Cuadros de parafilm para tubo 12x75 Cuadros de papel seda (5x5cm) Cuadros de papel filtro (2x5cm) Jeringas de 10ml c/aguja (21x32mm) Contenedor para punzocortantes Contenedor para desechos 34 .3. .Define petequia. 3. 4.1 Información complementaria .2 Material por equipo 1 Gradilla 15 Tubos de ensaye (12x75) 6 Tubos de ensaye (13x100) 2 Pipetas Pasteur 2 Pipetas de vidrio de 1 ml (1/10) 1 Pipeta salhi con manguera y boquilla 1 Cámara de Neubauer 1 Caja Petri c/algodón (cámara húmeda) 1 Frasco con 10 ml de SSF (0.4.1. mediante el conocimiento de los fundamentos de cada método.Señala los cuidados que se deben tener al realizar pruebas de coagulación.3 MATERIALES 4. .2 OBJETIVO El alumno conocerá y seleccionará la muestra útil para realizar cada una de las pruebas de coagulación indicadas para esta práctica y.Esquematiza la cascada de coagulación completa.9%) 1 Propipeta 1 Tapón de hule para tubo 13x100 1 Contador 1 Cronómetro 1 Microscopio 1 Marcador indeleble 4.1 Muestras biológicas     Sangre venosa anticoagulada con EDTA obtenida con jeringa Sangre venosa anticoagulada con citrato trisódico obtenida con jeringa Plasma rico en plaquetas (PRP) obtenido de la muestra citratada Plasma pobre en plaquetas (PPP) obtenido de la muestra citratada 4.3.

8 % Cloruro cálcico (0.El resto de la muestra sanguínea se centrifuga a 3.4. -Vaciar los 6ml restantes en el tubo con citrato trisódico.000-450. .500 rpm/10 min y separar con una pipeta Pasteur 1ml del plasma rico en plaquetas (PRP).4. taparlo y mezclar bien por inversión. Etanol al 70% Determinaciones de TTPA Determinaciones de TP 4. -Utilizar los primeros 3 ml para la prueba de Tiempo de coagulación (Ver procedimiento) -Vaciar 1ml en el tubo con EDTA tapar y mezclar por inversión. Significado clínico: (Valor de referencia: 150. Esta muestra se utiliza para tiempo de protrombina y tiempo de tromboplastina parcial activada.4 MÉTODOS Recomendaciones -Identificar perfectamente el material y los reactivos a utilizar.4.1 Extracción de sangre y procedimiento de separación de muestras -Colocar el torniquete poco apretado y mantenerlo el menor tiempo.000 plaquetas/mm3) a) Trombocitopenia.3.8 % para 6ml de sangre.2 Conteo plaquetario Fundamento. -Rotular en forma clara cada uno de los tubos de ensaye y revisar la jeringa a emplear. -Dosificar en un tubo 12x75 la cantidad necesaria de EDTA al 5% para 1ml de sangre.000 rpm/15 min y separar en tubo 13x100 todo el plasma pobre en plaquetas (PPP). -Obtener 10 ml de sangre. Al momento de la punción deberá causar el mínimo daño a los tejidos para evitar que la sangre se contamine con tromboplastina tisular. Se emplea sangre anticoagulada (con EDTA) la cual se diluye en Oxalato de amonio al 1% que lisa el resto de las células sanguíneas para permitir el recuento de plaquetas en el hemocitómetro. trombopenia o plaquetopenia: 35 . Utilizar esta muestra para el conteo plaquetario. El PRP se utiliza para el tiempo de coagulación del plasma. Centrifugar a 1. 4. -Dosificar en un tubo 13x100 la cantidad necesaria de citrato trisódico al 3.025M) Oxalato de amonio al 1% 4. vaciarlo en tubo 13x100.4 Reactivos Solución de EDTA al 5% Citrato trisódico al 3.

por debajo de 130. Púrpura trombótica trombocitopénica. Sepsis bacteriana. -Tapar el tubo con papel parafilm y mezclar. al ponerse en contacto con una superficie de vidrio. Es el tiempo que tarda en formarse el coágulo en una muestra de sangre sin anticoagulante. -Observar al microscopio (10x). buscar la cuadrícula central. anemia mielocítica ii) Trombopoyesis ineficaz: Trombopenias hereditaria. enfermedad de Crohn.02 ml de sangre con pipeta de Sahli. causas: i) Primarias: Trombocitemia esencial u otros síndromes mieloproliferativos. Déficit de ácido fólico o de vitamina B 12 iii) Aumento de la destrucción de las plaquetas: Púrpura trombcitopénica idiopática. ii) Secundarios: esplenectomía.98 ml de oxalato de amonio al 1 % frío. nocturna. neoplasias malignas.3 Tiempo de coagulación Fundamento. en casos de afibrinogenemia. causas: i) Disminución de la trombopoyesis: pancitopenia.000/mm3. -Cambiar el objetivo a (40x) con baja intensidad de luz contar las plaquetas observadas. CALCULO = # de plaquetas contadas x FACTOR = # de plaquetas/ mm3 4. -Refrigerar 15 min.4. agregar 0. b) Trombocitosis: *Aumento en la concentración de plaquetas.*Disminución en la concentración de las plaquetas. Hiperesplenismo. Valor de referencia 5 -10 min. Hemoglobinuria paroxistica Coagulación intravascular diseminada. por encima de 450. en fibrinolisis excesiva y en terapias con 36 . Se encuentran tiempos alargados en déficit de factores de la vía intrínseca por ejemplo hemofilia.000/mm3. -Limpiar la base de la cámara. -Llenar cámara de Neubauer y colocarla dentro de la cámara húmeda durante 5 min. colitis ulcerosa. NOTA: Las plaquetas se observan en forma ligeramente alargada o circular y presentan refringencia. infecciones que cursan con una formación de depósitos purulentos. Significado clínico. Procedimiento: -En un tubo (12x75) que contiene 1. Esta prueba permite la detección de trastornos en la vía intrínseca o la vía común de la coagulación.

-Finalmente se reporta el tiempo del tubo 3 que es el menos manipulado. su única ventaja.4 Tiempo de coagulación de plasma (Test de Howell): Fundamento. cuidar que los tubos tengan el mismo volumen para que la prueba sea válida. *** -Detener el cronómetro y registrar el tiempo. -Ahora se revisará el tubo 2 de la misma forma y una vez coagulado éste revisar el tubo 3. comenzando por el tubo 1.4. Reportar el promedio de los 3 37 .2 ml de CaCl 2 (0. *** -Observar la aparición de los primeros filamentos de fibrina en las paredes del tubo. es que no se precisa realizarlo inmediatamente después de la extracción de la muestra. sacar el tubo 1 y revisarlo inclinando suavemente. Significado clínico.heparina. revisar aproximadamente a los 40 seg. -Incubarlos a 37° C en posición vertical. regresarlo a incubar. -Trabajar cada uno de los tubos de la siguiente manera: -Adicionar 0. -Mezclar. resultados. seguir revisando cada 30seg y conforme transcurre el tiempo disminuirlo a 15seg manteniéndolo el menor tiempo fuera de incubación hasta detectar la coagulación. 4.2 ml de PRP incubar a 37 ° C por 3 min. cronometrar e incubar. momento en el que se activa el cronómetro.025M) a 37° C. Debido a esto último la prueba se utiliza en el control de tratamientos heparínicos. Procedimiento -Marcar tres tubos de ensaye 12x75 y depositar en cada tubo: -0. Procedimiento -Rotular previamente 3 tubos de ensaye 13x100: del 1 al 3 -Vaciar en cada tubo 1ml de la sangre extraída. Continuar *** *** -Fuera del baño inclinar el tubo suavemente y cerca de una fuente de luz. esto indica el punto final de la prueba. Valor de referencia: 90-130segundos. -A los 4 min. Mide el tiempo que tarda en coagularse un plasma rico en plaquetas (PRP) cuando se vuelve a recalcificar. La utilidad e interpretación de la prueba son similares a las del tiempo de coagulación.

Continuar *** 4. -Trabajar cada uno de los tubos de la siguiente manera: -Agregar 0.1 ml de PPP e incubar a 37° C por 2 min. celite o ácido elágico. Significado clínico. mezclar. cronometrar. Es el tiempo que transcurre desde la lesión a un grupo de capilares hasta la formación del trombo blanco plaquetario. Tiempos prolongados se presentan ante déficit de factores de la vía intrínseca y para el control de tratamientos con anticoagulantes. Se determina efectuando una 38 . de las terapias con heparina. a los 8 seg.4.4. en concreto. Esta prueba sirve para explorar la vía intrínseca y la vía común. Continuar *** 4.025M) a 37° C. cuando se pone en contacto con un exceso de calcio y de tromboplastina hística obtenida a partir de extracto de cerebro o pulmón de conejo o humano. mezclar e incubar 2 min. . obtenidos a partir de cerebro de conejo y se conoce como cefalina. Significado clínico. Es el tiempo que tarda en coagular un PPP en presencia de un sustituto del f3p que consiste en una suspensión de fosfolípidos.Agregar 0. Valores de referencia: 30-42 seg. -Trabajar cada uno de los tubos de la siguiente manera: -Agregar 0.2 ml de reactivo de TP mezclar. Fundamento. pero además contiene una sustancia activadora de los factores de contacto que puede ser: caolín. cronometrar. Procedimiento -Marcar tres tubos de ensaye 12x75 y depositar en cada tubo: -0.5 Tiempo de tromboplastina parcial activada (TTPA).1ml de reactivo de TTPa.4. Tiempo de protrombina está alargado en pacientes con déficit de factores de la vía extrínseca. a los 25 seg. incubar y leer aprox.7 Tiempo de sangrado con la técnica de Duke Fundamento. Fundamento. Valores de referencia: 11-15 seg.4. Esta prueba sirve para explorar a la vía extrínseca y la vía común.1 ml de PPP e incubar a 37 ° C por 2 min. incubar y leer aprox. a 37° C.1 ml de CaCl2 (0. en pacientes sometidos a terapias con dicumarinas y en pacientes que sufren algunos trastornos hepáticos. polvo de vidrio. Procedimiento -Marcar tres tubos de ensaye 12x75 y depositar en cada tubo: -0.6 Tiempo de protrombina (TP) o Tiempo de Quick. Es el tiempo que tarda en coagular un PPP.

El tiempo de sangrado está alargado en las púrpuras vasculares.5 DISPOSICIÓN DE RESIDUOS Las agujas y lancetas se depositarán en contenedor para punzocortantes. 4. Las jeringas con tapón. -Al aparecer la primera gota de sangre cronometrar. Significado clínico. -Limpiar con una torunda con alcohol (70 %). Registrar el tiempo. Los tubos con muestras biológicas se desechan en contenedores con hipoclorito de sodio al 6 %. -La muestra deja de tomarse cuando cesa la hemorragia. guantes. -Hacer una incisión o herida de aprox. “sin tocar la piel” cada 15 ó 30 segundos. dejarla que caiga sobre el papel filtro o absorberla con éste. en las trombocitopenias. en la enfermedad de von Willebrand y en los sujetos que han tomado acetilsalicílico. en las trombopatías congénitas. 39 .pequeña herida estandarizada (3 mm de profundidad) y midiendo el tiempo que tarda en cesar el sangrado.El lóbulo de la oreja debe estar caliente ya sea frotándolo o aplicando compresa de agua caliente. -Detener el cronómetro. Dejar secar. .3 min. 3 mm de profundidad con una lanceta estéril. torundas y papel filtro con sangre desechar en contenedor para residuos biológicos. que el laboratorista designará para tal fin. Valor de referencia: 1 . Procedimiento.

6 DIAGRAMA DE FLUJO 40 .4.

4.2 Tabla de Resultados Datos del Paciente Nombre______________________________________Edad______ Sexo____ Determinación Tiempo de sangrado Tiempo de coagulación TCP TP TTPa Conteo plaquetario Resultado Valores de referencia Interpretación 41 .7.7.1 Cálculos 4.7 RESULTADOS 4.

9 CONCLUSIONES 4.4.8 DISCUSIÓN 4.10 REFERENCIAS CONSULTADAS 42 .

permiten la evaluación del funcionamiento renal. por ejemplo. 2 rebanadas de pan tostado con mermelada en el desayuno. esta prueba requiere un mínimo de 4 tomas de muestra (en ayuno y 1 cada media hora u hora). Existe la alternativa de la glucosa posprandial. que requiere 2 tomas de muestra (en ayuno y dos horas después de la ingesta de alimentos ricos en carbohidratos). Asimismo. La glucosa en ayuno es la prueba principal para el diagnóstico y seguimiento de la diabetes mellitus. 5. enzimas y electrolitos.PRÁCTICA No. urea. que pueden incluir lípidos. Actualmente. con la finalidad de que no afecta a la muestra la presencia de quilomicrones formados después de la comida y que los analitos no se alteren por un ayuno prolongado. que además permite distinguir entre diabetes e intolerancia a la glucosa. sin embargo. creatinina y ácido úrico. 43 . proteínas. que consiste en la precipitación de cristales de ácido úrico en las articulaciones. teniendo el inconveniente de que el desayuno que toma el paciente no está estandarizado por los laboratorios. producto de la degradación de la creatina a partir del metabolismo muscular. la química sanguínea se realiza en los laboratorios como un perfil de hasta 30 analitos. las muestras ictéricas y hemolíticas pueden alterar la determinación. A su vez. De esta manera se ha propuesto la realización de la curva de tolerancia oral a la glucosa. 5. En un principio comprendía las determinaciones de glucosa en ayuno. provocando inflamación y dolor. QUÍMICA SANGUÍNEA I Y GLUCOSA POSPRANDIAL Beatriz González M. aunque debe realizarse en dos ocasiones con 2 semanas de diferencia. comida y cena. Para realizar estas pruebas es necesario realizar un ayuno de 8 a 10 horas.1 MARCO TEÓRICO La química sanguínea está compuesta por una serie de pruebas de rutina que ayudan a evaluar el estado general del paciente y permite saber si se requiere alguna determinación más especializada. La urea es un producto de desecho formado a partir del metabolismo de las proteínas y junto con la creatinina. el ácido úrico es un producto de desecho del metabolismo de las purinas (adenina y guanina) que se utiliza en el diagnóstico del síndrome gotoso. Para esta prueba es necesario que el paciente lleve tres días antes una dieta de entre 150 g y 250 g de carbohidratos.

Plasma obtenido con tubo al vacío de tapón lavanda. El alumno conocerá el fundamento y la técnica de las determinaciones.Defina cada uno de los siguientes conceptos: Solución patrón.Explique la utilidad de la ley de Lambert-Beer en la realización de la práctica. una rebanada de pan tostado con mermelada. Solución blanco. un plato con cereal azucarado en leche y un plátano.3. 5.3.1 Muestra biológica Suero obtenido en tubo al vacío de tapón rojo. .¿Qué factores además del ayuno pueden afectar a las determinaciones? 5.3 Material por grupo Recipiente para desecho RPBI Pipetas graduadas de 5 ml Pipetas graduadas de 1 ml Pisetas con agua destilada Centrífuga Balanza Micropipeta de 5 a 40 ul Micropipeta de 5 a 50 ul Baño de agua Contenedor para punzocortantes Termómetro Tubo al vacío de tapón rojo o dorado Tubo al vacío de tapón lila Aguja verde para tubo al vacío Algodón para torundas Aplicador de madera Papel parafilm Gasas Espectrofotómetro UV-Visible Celdas para espectrofotómetro Vaso de precipitado de 250 ml Agitador vórtex 44 .5.2 OBJETIVOS El alumno conocerá la importancia del rango UV-Visible del espectro electromagnético en las determinaciones de Química Clínica. 5. para que con base a sus resultados valore el estado clínico del paciente. Solución control .1.Indique las longitudes de onda que conforman el rango UV-Visible en el espectro electromagnético.1 Información complementaria .3.3 MATERIALES 5. a través de la realización de las mismas. Nota: El desayuno que el paciente tomará inmediatamente después de la primera toma de muestra es el siguiente: 250mL de jugo de naranja natural. .2 Material por equipo 1 gradilla 1 adaptador para tubos al vacío 1 tapón para tubo de ensaye 13x100 1 propipeta 15 tubos 12x75 1 pipeta graduado de 1 ml (1/100) 3 tubo de ensaye 13x100 5 puntas amarillas para micropipeta 2 pipetas pasteur con bulbo 1 cronómetro 5.

La realización de glucosa posprandial apoya al diagnóstico de estados prediabéticos y de diabetes mellitus. Síndrome de Cushing). que son tratados bajo las misma condiciones de incubación y lectura de longitud de onda. Para la descripción de 45 . por efecto del tratamiento erróneo de diabetes.4 Reactivos Kit para determinación de: glucosa creatinina urea ácido úrico Alcohol para las torundas Agua destilada Hipoclorito de sodio 5. posterior a la ingesta prolongada de etanol. El valor de referencia de la glucosa posprandial es hasta 140 mg/dl. tiroideas.5. POD Peroxidasa Significado clínico.4 MÉTODOS 5.1 Glucosa: método enzimático colorimétrico Fundamento D-glucosa + O2 + H2O2 H2O2 + 4-aminoantipirina + fenol POD GOD Ácido glucónico + H2O2 4-(p-benzoquinona-iminofenazona) + 2H2O quinonimina roja ( = 505 nm) GOD: glucosa oxidasa. puede existir hiperglucemia en alteraciones hipofisiarias (acromegalia. El valor de referencia de la glucosa en ayuno es de 60 – 100 mg/dl. La hipoglucemia se presenta en ayunos prolongados. patrón y muestra. Generalmente siguen el siguiente esquema: Blanco Patrón Muestra RT (ml) Patrón (l) Muestra (l) que indica el uso de soluciones blanco.4. traumatismos.3. Procedimiento La técnica de las determinaciones que se realizarán en la presente y siguiente prácticas son diferentes de acuerdo al fabricante de los reactivos utilizados. La determinación de glucosa apoya al diagnóstico y seguimiento de la diabetes mellitus. cuando hay insulinoma o enfermedades crónicas hepáticas.

4. catabolismo incrementado de las proteínas (fiebre. ingesta alta de líquidos y en el embarazo.3 Urea Fundamento: método colorimétrico Urea + H2O NH4+ + salicilatos + hipoclorito Fundamento: método de la ureasa-UV Urea + H2O Ureasa Ureasa CO2 + 2NH4+ indofenol (570 nm) CO2 + 2NH4+ GLDH NH4+ + -cetoglutarato + NADH (340 nm) + H+ GLDH: glutamato deshidrogenasa NAD+ + glutamato Significado clínico.4 Ácido úrico Fundamento Uricasa Ácido úrico + O2 + H2O POD Alantoína + H2O2 + CO2 quinonimina roja ( = 505 nm) + H2O H2O2 + 4-aminoantipirina + DCBS DCBS: dicloro bencensulfónico 46 . estrés y quemaduras) -renal: enfermedad renal crónica.6 a 1. 5.4 mg/dl. 5. shock. El valor de referencia es de 10 a 45 mg/dl.2 Creatinina: método de Jaffé Fundamento Creatinina + ácido pícrico Medio alcalino Picrato de creatinina Significado clínico. disminución del volumen sanguíneo. La creatinina es el mejor indicador de la función renal. hipertiroidismo y durante el puerperio. 5.4. verificando su vigencia.7 a 1. La hiperuremia (azoemia) puede clasificarse en: -prerrenal: deshidratación. El valor de referencia para mujeres es de 0. deshidratación. fallo cardiaco.4. catabolismo incrementado de las proteínas -postrenal: obstrucción del tracto urinario La hipouremia se manifiesta en alteraciones hepáticas.las técnicas es necesario consultar el manual de uso (inserto) de los reactivos a utilizar. Aumenta en sangre cuando hay alteraciones glomerulares. mala nutrición.1 mg/dl y para hombres es de 0. necrosis o atrofia del músculo esquelético.

síndrome de Lesh Nyhan y preeclamsia. . síndrome de Fanconi (defectos de la resorción tubular). insuficiencia renal. En caso de que se presenten algodones empapados en sangre deben depositarse en la bolsa roja. . litiasis renal.Los guantes de látex y las servitoallas deben depositarse en la bolsa de basura municipal. .Las agujas deben depositarse en el contenedor rojo para punzocortantes. La hipouricemia se manifiesta cuando hay dieta baja en purinas.Significado clínico.5 a 7. enfermedad hepática.5 mg/dl.Los algodones manchados ligeramente de sangre se depositan en la bolsa de basura municipal. 47 . tratamiento excesivo con alopurinol. El valor de referencia es de 2.Los tubos con coágulos de sangre y muestras biológicas deben depositarse en el recipiente con cloro que dispondrá el laboratorista para tal fin. la hiperuricemia secundaria se presenta en insuficiencia renal. 5.5 DISPOSICIÓN DE RESIDUOS . La hiperuricemia primaria se observan cuando hay defectos enzimáticos hereditarios. en gota.

6 DIAGRAMA DE FLUJO 48 .5.

5.7.7.2 Tabla de Resultados Datos del Paciente Nombre______________________________________Edad______ Sexo____ Determinación Glucosa en ayuno Glucosa posprandial Creatinina Urea Ácido úrico Resultado Valor de referencia Observaciones 49 .1 Cálculos 5.7 RESULTADOS 5.

9 CONCLUSIONES 5.8 DISCUSIÓN 5.10 REFERENCIAS 50 .5.

Creatinina y Ácido Úrico. proteínas de fase aguda. alcohol. Urea. hormonas. De esta manera observamos que: a) proteínas totales. colesterol y bilirrubina a través de la bilis. g) Inmunológica: Fagocitosis (células de Kupffer). 6. tales como albúmina. secreción de IgA. que se encuentra en el cuadrante superior derecho del organismo. triglicéridos y lípidos totales evalúan la capacidad de síntesis y metabolismo hepático. Se estima que lleva a cabo más de 500 actividades diferentes entre las que se encuentran: a) Metabolismo de carbohidratos. bilirrubina. Debido a la diversidad de funciones de este órgano. 6. aminoácidos y proteínas. está dividido en dos lóbulos desiguales unidos por el ligamento falciforme y tiene una irrigación de 1500 ml de sangre por minuto. esteroides. de las que se realizaron Glucosa. los tres primeros además apoyan a demostrar el estado nutricional del paciente o la posibilidad de que se presente síndrome nefrótico. vitaminas b) Almacenamiento de glucógeno. 51 . por lo tanto el diagnóstico debe realizarse considerando todos los datos clínicos y de laboratorio. vitaminas c) Síntesis de proteínas. lípidos. mientras que los últimos determinan el riesgo aterogénico e hipertensión. En la presente práctica se determinarán analitos que están relacionados con el hígado.PRÁCTICA No. hierro. entre otras d) Biotransformación de toxinas. producción de factores del complemento. lípidos. además de formar parte del sistema fagocítico mononuclear. QUÍMICA SANGUÍNEA II René Damián S. fármacos. los perfiles de esta pueden abarcar hasta 30 determinaciones. relación A/G. aminoácidos y proteínas.1 MARCO TEÓRICO Como se explicó en la Química Sanguínea I. bilirrubina. otras hormonas e) Hematológica debido a la producción de factores de coagulación y de eritrocitos en el feto f) Excreción de ácidos biliares. albúmina. colesterol. no hay un analito único que permita evaluar su funcionamiento general. cobre. Los analitos que se determinarán durante la práctica pueden alterarse debido a patologías no relacionadas con el hígado.

conjuntamente indican el origen de la ictericia.2 Material por equipo 1 gradilla 5 tapones para tubo de ensaye 13x100 18 tubos 12x75 5 tubos de ensaye 13x100 1 pipetas pasteur con bulbo 1 adaptador para tubos al vacío 6. 6.3 MATERIALES 6. para que obtenga resultados confiables.b) bilirrubinas directa. indirecta y total son pruebas que valoran la biotransformación y excreción hepática.3 Material por grupo Tubo al vacío de tapón rojo o dorado Aguja verde para tubo al vacío Algodón para torundas Aplicador de madera Gasas Espectrofotómetro UV-Visible Vaso de precipitado de 250 ml Agitador vórtex Mechero Bunsen Tripie Tela de asbesto Pinzas para tubo de ensaye Micropipeta de 5 a 40 ul Micropipeta de 5 a 50 ul Baño de agua Termómetro Papel parafilm Centrífuga Recipiente para desechos (RPBI) Contenedor para punzocortantes Pisetas con agua destilada Pipetas graduadas de 1 ml Pipetas graduadas de 2 ml Pipetas graduadas de 5 ml 1 1 5 5 1 propipeta pipeta graduado de 1 ml (1/100) puntas amarillas para micropipeta puntas azules para micropipeta cronómetro 52 .1. El alumno conocerá la importancia clínica de las determinaciones y con base a sus resultados valore el estado clínico del paciente.3.3. 6.Investigue el metabolismo completo (formación a eliminación) de las bilirrubinas.1 Información complementaria .3. -¿Cuál es la estabilidad y condiciones de almacenamiento de cada uno de los analitos que se evaluarán? -¿Cuál es el tiempo máximo de ayuno para realizar las determinaciones? ¿Por qué? 6. a través de la realización de las mismas.2 OBJETIVOS El alumno conocerá el fundamento y la técnica de las determinaciones.1 Muestra biológica Suero obtenido en tubo de tapón rojo o dorado 6.

triglicéridos .6. síndrome nefrótico.1 Proteínas totales: método del Biuret Fundamento Proteínas + Cu2+ Medio alcalino Complejo azul violeta ( = 560 nm) Significado clínico.proteínas totales . 6. El valor de referencia es 3.4. hepatopatías. La relación A/G se define como el cociente de la albúmina entre las globulinas (proteínas totales menos la albúmina). La hiperalbuminemia se manifiesta durante la deshidratación.3. donde puede apoyar a determinar la gravedad y pronóstico de enfermos crónicos. El valor de referencia es 6.5 – 4. hemorragias. 6.colesterol .1 – 7.albúmina .3 Colesterol: método enzimático colorimétrico Fundamento Ésteres de colesterol + H2O COx CEH Colesterol + ácido graso Colesterol + O2 Colest-4-en-3-ona + H2O2 53 .4. La albúmina es el principal indicador nutricio-proteico.4 Reactivos Kit para determinación de . Con estas determinaciones es posible determinar la cantidad de globulinas. también se observa en alteraciones renales y gastrointestinales. La hipoproteinemia se observa en inanición o mala absorción (desnutrición). La hipoalbuminemia se presenta en alteraciones hepáticas.bilirrubinas 6.lípidos totales . La hiperproteinemia puede presentarse durante la deshidratación o diarrea grave. considerando que la suma de estas con la albúmina es igual a las proteínas totales.8 g/dl.4 MÉTODOS Alcohol para las torundas Agua destilada Hipoclorito de sodio NOTA: Para conocer el procedimiento para todas las técnicas utilizadas en esta práctica es necesario consultar el manual de uso (inserto) de los reactivos disponibles en el laboratorio.2 Albúmina: método de verde bromocresol Fundamento Albúmina + Verde de bromocresol (VBC) Medio alcalino Complejo albúmina-VBC ( = 600 nm) Significado clínico. 6.9 g/dl.4.

5 Lípidos totales: método de ácido fosfórico vainillina Fundamento Lípidos + H2SO4 Cetonas + ácido fosfórico-vainillina Cetonas  complejo rosa ( = 505 nm) Significado clínico.4. El interés en su estudio se debe a su conexión entre hiperlipemia y aterosclerosis.4. 6.4. POD: Peroxidasa Significado clínico. COx: Colesterol oxidasa. La determinación de colesterol en forma aislada tiene utilidad diagnóstica limitada. El valor de referencia es 60 – 200 mg/dl. El valor de referencia es 50 – 150 mg/dl. Su medición es importante en el diagnóstico y manejo de hiperlipidemias. con pacientes hipertensos y obesos.H2O2 + 4-aminoantipirina + fenol POD quinonimina roja ( = 505 nm) + 2H2O CEH: Colesterol éster hidrolasa. diabetes mellitus y disfunciones endocrinas.6 Bilirrubinas: método de Van den Bergh Fundamento Bilirrubina directa + ácido sulfanílico diazotado Bilirrubina total + desarrollador + ácido sulfanílico diazotado azobilirrubina azobilirrubina ( = 530 nm) 54 . El valor de referencia es 450 – 850 mg/dl.4 Triglicéridos: método enzimático colorimétrico Fundamento Triglicéridos Lipoprotein lipasa glicerol + ácidos grasos glicerol-1-P + ADP H2O2 + Dihidroxiacetona fosfato POD Glicerol + ATP GPO GK Glicerol-1-P + O2 2 H2O2 + 4-aminofenazona + clorofenol quinonimina roja ( = 505 nm) GK: Glicerolcinasa. La hipertrigliceridemia es un factor riesgo en enfermedades ateroscleróticas. La hipocolesterolemia puede relacionarse con alteraciones en la síntesis de hormonas esteroideas. que pueden ser de origen genético o estar relacionadas con nefrosis. 6. La hipercolesterolemia se ha relacionado con la formación de placas ateroscleróticas. en los cuales se incrementa el riesgo de enfermedad cardiaca coronaria. POD: Peroxidasa Significado clínico. GPO: glicerol fosfato oxidasa. 6. diabetes y enfermedad cardiaca.

vírica o tóxica. Bilirrubina indirecta hasta 0. Bilirrubina total hasta 1. Defecto fisiológico Producción excesiva de bilirrubina Ejemplos de etiología Ictericia hemolítica 6. .5 DISPOSICIÓN DE RESIDUOS .Significado clínico.Los tubos con coágulos de sangre y muestras biológicas deben depositarse en el recipiente con cloro que dispondrá el laboratorista para tal fin. . 55 .0 mg/dl.2 mg/dl. La determinación de bilirrubinas apoya a la evaluación y clasificación de la ictericia (hiperbilirrubinemia): Ictericia Prehepática no conjugada Hepática conjugada Hepática conjugada: Hepatocanalicular: obstructiva Posthepática conjugada: Obstrucción mecánica del árbol biliar parecida a no Transporte defectuoso de la bilirrubina Deficiencia de la glururoniltransferasa Hepatocelular: lesión del parénquima Síndrome de Gilbert Síndrome de Crigler-Najjar Hepatitis cirrosis la Cirrosis hepatitis Carcinoma del páncreas o del colédoco. En caso de que se presenten algodones empapados en sangre deben depositarse en la bolsa roja. Los valores de referencia son: Bilirrubina directa hasta 0.8 mg/dl. .Los guantes de látex y las servitoallas deben depositarse en la bolsa de basura municipal. coledocolitiasis biliar primaria.Los algodones manchados ligeramente de sangre se depositan en la bolsa de basura municipal.Las agujas deben depositarse en el contenedor rojo para punzocortantes.

6 DIAGRAMA DE FLUJO 56 .6.

7.2 Tabla de resultados Datos del Paciente Nombre______________________________________Edad______ Sexo____ Determinación Proteínas totales Albúmina Relación A/G Colesterol Triglicéridos Lípidos totales Bilirrubina directa Bilirrubina indirecta Bilirrubina total Resultado Valor de referencia Observaciones 57 .6.7 RESULTADOS 6.7.1 Cálculos 6.

6.10 REFERENCIAS CONSULTADAS 58 .8 DISCUSIÓN 6.9 CONCLUSIONES 6.

7. Después de la formación en el riñón. La calidad del urianálisis comienza con una adecuada recolección de la muestra de orina.500 mL en 24 horas.1 MARCO TEÓRICO La orina es un filtrado del plasma sanguíneo que prácticamente no contiene proteínas.PRACTICA No.1. lo que constituye un indicador importante del estado de salud. Como la orina contiene sustancias orgánicas e inorgánicas que favorecen la reproducción bacteriana. El análisis de rutina de la orina conocido también como urianálisis o examen general de orina. La formación de orina comprende los complejos procesos de filtración de la sangre. la cual debe realizarse (previa asepsia de genitales) en un recipiente limpio y seco de preferencia desechable. sin embargo la muestra más recomendada es la primera orina de la mañana. Para realizar el urianálisis se pueden utilizar muestras emitidas a cualquier hora del día. En promedio un adulto joven elimina entre 800 a 1. porque es más concentrada y es más probable que revele anormalidades. de ser posible dentro de los 30 minutos después de colectada. 7 URIANÁLISIS Leticia Arellano M. reabsorción de sustancias esenciales incluyendo el agua y secreción tubular de ciertas sustancias. Algunos padecimientos renales o extra-renales modifican las características físicas y químicas de la orina.1 Información complementaria ¿Qué indicaciones se le deben de dar a un al paciente que se le realizará un urianálisis? ¿Cuál es la composición de la orina? ¿Qué son y en donde se forman los cilindros? 59 . se recomienda realizar el urianálisis en orina fresca. incluye una serie de pruebas de detección que permiten descubrir algunos de los padecimientos arriba mencionados. 7. la orina pasa por el uréter hacia la vejiga en donde es almacenada temporalmente antes de ser excretada a través de la uretra.

3.2 Material por equipo de trabajo 3 Tubos de ensaye 13x100 mm 1 Gradilla para tubos de ensaye 1 Pipeta Pasteur 1 Bomba de succión para pipeta Pasteur 1 Microscopio óptico compuesto 7. el conocimiento del fundamento de las determinaciones realizadas y la identificación al microscopio de las estructuras presentes en la orina centrifugada.3. a fin de descartar alguna enfermedad. Análisis físico de la orina Fundamento La determinación se basa en la observación macroscópica de la muestra de orina a fin de detectar alguna alteración en su aspecto o color. oliguria. Sin embargo existen muchos factores patológicos y no patológicos que pueden alterar el color y aspecto normal de la orina. Balanza granataria Piseta con agua destilada 7. poliuria.4 METODOS - Portaobjetos Cubreobjetos Papel seda para limpiar lentes del microscopio Homogenizar y permitir que la muestra de orina a este a temperatura ambiente antes de realizar el estudio. OBJETIVO El alumno interpretará los resultados emitidos de un urianálisis.4.3. 7. hematuria y cetonuria? 7. Significado Clínico En la mayoría de los casos es escasa la información que aporta está determinación. relacionando la importancia de la adecuada recolección de la muestra de orina.- ¿Qué significa: anuria. 60 .4 Reactivos Tira reactiva para análisis de orina.1.3.2.3 MATERIALES 7. 7. Rotular dos tubos 13x100 mm (tubo 1 y tubo 2). debida a la presencia de pigmentos urocrómicos (urobilina y uroeritrina). 7. debido a que la orina normal habitualmente es clara y presenta una amplia gama de colores. Trasvasar aproximadamente 6 mL de orina a cada tubo.3 Material por grupo Centrífuga con capacidad para tubos de ensaye 13x100 mm y 2000-3000 rpm.1 Muestra biológica 50 mL de orina recién emitida 7.

células epiteliales. En cuanto a la turbidez de la orina. Fundamento pH. Se basa en la determinación enzimática con glucosa oxidasa. empleado en la química sanguínea 1. del indicador azul de tetrabromofenol en presencia de proteínas. que sigue las mismas reacciones que el método enzimático colorimétrico para glucosa. rojo de metilo y azul de bromotimol que cubren la escala de pH que va del 5 al 9. Se basa en el cambio de color (de amarillo a azul). El nitrito en presencia de una sulfanilamida genera un sal de diazonio que al reaccionar con una tetrahidrobenzoquinolina produce un colorante azoico de color rojo. Nitritos. Proteínas. característico de la alcaptonuria. Anotar resultados. 61 .La orina es muy pálida o incolora entre otras cosas debido a un elevado consumo de líquidos o a estados patológicos como la diabetes mellitus. Sangre oculta. puede ser debida a la presencia de cristales. La orina de color castaño a negro puede deberse a la excreción de ácido homogenístico. Glucosa. La tira reactiva contiene nitroprusiato de sodio que en medio alcalino forma un complejo color castaño con el ácido diacético. 7. La causa más común del color rojo de la orina es la presencia de eritrocitos (hematuria). Se basa en la actividad tipo peroxidasa de la hemoglobina que cataliza la oxidación del indicador tetrametilbencidina por la acción de peróxido de hidrógeno. Procedimiento Se puede emplear cualquiera de los dos tubos. y la orina es de color castaño-amarillento a verde-amarillento. moco o grasa. bacterias. leucocitos.4. Cetona. Los pacientes que tienen ictericia obstructiva excretan pigmentos biliares como la bilirrubina. Observar el aspecto (presencia o no de turbidez) y color de la orina. Utiliza dos indicadores. aunque también puede deberse a la presencia de hemoglobina libre o mioglobina.2 Análisis químico de la orina El análisis químico de la orina empleando tiras reactivas es un método sensible y rápido que ayuda a identificar alteraciones en la composición de la orina. La tira reactiva es una banda de plástico con pequeños cuadros de papel impregnados con los reactivos necesarios para identificar diferentes analitos en una misma tira.

Klebsiella). enfermedades como la diabetes mellitus y en la eclampsia entre otros. Algunas de las causas que producen 62 . Lo anterior sucede en casos de ingesta baja de hidratos de carbono. Significado Clínico pH. Gravedad específica. En condiciones normales existe una mínima cantidad de proteínas de bajo peso molecular en la orina (< 20 mg/dL). La principal causa de glucosuria es un elevado nivel de glucosa en sangre. Puede presentarse hematuria en enfermedades renales o lesiones del tractor urinario inferior. Se denomina así porque es sangre que no se aprecia a simple vista (microhematuria) y el color de la muestra no resulta afectado. Se basa en la reacción que se lleva a cabo entre el urobilinógeno y el dimetilaminibenzaldehido.035. Cetona. coli. El pH de la orina es ligeramente ácido alrededor de 6. Se basa en el cambio de pKa de algunos polielectrólitos. Se basa en la reacción de acoplamiento de la bilirrubina con una sal de diazonio. reacciona con el indicador bromosulfoftaleína produciendo un color morado. La presencia de cantidades significativas de glucosa en la orina se llama glucosuria. ya que puede cambiar de ácida a básica.003 – 1. cifra que se conoce como el umbral renal de la glucosa.- Gravedad específica. por factores tales como la dieta. Constituye un índice del material disuelto en la orina. - Bilirrubina. - Leucocitos. el exceso se excreta en la orina. Cuando la capacidad de los tejidos para utilizar los cuerpos cetónicos es superada. Nitritos. con lo que se mide la concentración iónica de la orina. No existiendo un intervalo normal. La prueba detecta la presencia estearasa leucocitria. Proteínas. Glucosa. Los cuerpos cetónicos se forman durante el catabolismo de los ácidos grasos. El intervalo normal varía de 1. E. ya que por lo general la glucosa aparece en la orina cuando el nivel de glucosa en sangre supera los 160-180 mg/dL. La presencia de una concentración elevada de proteínas en la orina puede constituir un índice de enfermedad renal. lo cual esta relacionado con el peso específico. Citrobacter. La determinación de nitritos por tira reactiva es un método rápido e indirecto para el diagnóstico de bacteriuria e identifica la presencia de bacterias que reducen el nitrato de la orina a nitrito (Ej. esta enzima hidroliza el éster del ácido indoxilocarbónico que a su vez. generando un complejo color amarillo castaño. Sangre oculta. - Urobilinógeno.

Anotar resultados. se 63 . 1 y una tira reactiva para urianalisis. existen una pequeña cantidad de urobilinógeno en la orina (1 unidad Erlich / 100 mL de orina) y su elevación puede indicar daño hepático. El valor de esta prueba depende de una muestra adecuada y del conocimiento de la persona que realiza el estudio. en función de la intensidad del color generado. los resultados se reportan como negativo (-) o positivo (+) y en caso de ser positivo puede reportarse con +. Sumergir la parte reactiva de la tira en el tubo y retirar inmediatamente. La tira reactiva dará positiva. Normalmente en la orina no existen cantidades detectables de bilirrubina. teniendo cuidado de retirar el exceso de orina sobre papel absorbente. Procedimiento Emplear el tubo No. Las tira reactiva debe mantenerse en el envase original con el desecante y Nota: extraerla hasta el momento de emplearla cuidando de no tocar las bandas reactivas con los dedos y tapar el frasco inmediatamente después de extraer la tira. Sin embargo en algunos casos patológicos y no patológicos.4. Significado Clínico En condiciones normales la orina es transparente prácticamente no contiene partículas en suspensión. ++. Leer los resultados para cada parámetro en el tiempo indicado en la etiqueta del frasco y comparando los resultados con la escala de colores indicada en la etiqueta. glucosuria y eclampsia. Bilirrubina. +++ o ++++. La presencia de bilirrubina en orina se debe a la presencia de ictericia por aumento de bilirrubina conjugada.3 Análisis del sedimento de la orina El examen del sedimento urinario es una herramienta diagnóstica valiosa para la detección y evaluación de trastornos renales y del tracto urinario. A diferencia de la bilirrubina. Leucocitos. Urobilinógeno. Debido a que se trata de una determinación semicuantitativa. proteinuria. En condiciones normales los leucocitos no son detectables por tira reactiva. lo cual se puede deber a la presencia de procesos infecciosos o inflamatorios del tracto urinario. El tiempo de lectura no debe exceder de dos minutos.aumento del peso específico son las siguientes: deshidratación. solo si existe una cantidad abundante de leucocitos. 7.

Cristales de uratos de sodio. Como la formación de cristales depende del pH de la orina. Entre los cristales más importantes se encuentran los de tirosina. Cilindros. cilindros. con un apéndice en forma de cola y provienen de vías urinarias altas. Eritrocitos: Se pueden encontrar de 2-3 por campo y en gran número indican sangrado de vías urinarias.pueden encontrar estructuras tan diversas como células. cilindros de células epiteliales y cilindros cilindros grasos. Se presentan en casos como la gota. Cristales. enfermedades febriles o nefritis. cilindros granulosos. más pequeñas que las pavimentosos. cilindros leucocitarios. Provienen de las vías urinarias y pueden ser: Células epiteliales pavimentosas. Leucocitos. Cristales de orina ácida: Cristales de ácido úrico. son células grandes de núcleo pequeño y provienen de vías urinarias bajas o epitelio vaginal. pero aparecen dejándola reposar un tiempo. Células. Células Epiteliales. Los cilindros son precipitados de proteína que pueden o no agrupar células o algún otro material y se forman en los túbulos contorneados. Cristales de orina alcalina: 64 . Es normal encontrar de 1-2 por campo. Aparece en pacientes que presentan cistinuria sistémica. cristales y cuerpos extraños generados por algún medicamento. Por lo general no se encuentran cristales en la orina recién emitid. cilindros eritrocitarios. pero se incrementan en casos como infección o inflamación de vías urinarias. en general se clasifican como: cristales de orina ácida y cristales de orina básica. En función de la composición del cilindro. Cristales de cistina. Células epiteliales piriformes. La presencia de abundantes cristales en la orina resulta importante en el caso de sospecha de cálculos renales o trastornos s. razón por la que adquieren su nombre y forma. leucina o sulfamida. se pueden encontrar cilindros hialinos. Cristales de oxalato de calcio. Carecen de significado clínico. Pueden aparecer después de la ingesta de alimentos ricos en oxalatos y en diabetes mellitus o en alguna enfermedad renal crónica.

moderados o abundantes. Con ayuda de una pipeta Pasteur colocar una gota de sedimento resuspendido y cubrirla con un cubreobjetos. 2 con papel parafilm y centrifugar a 2500 rpm durante 5 minutos. Los guantes desechables así como el papel secante empleado para retirar el exceso de orina. Carecen de significado clónico. Cambar al objetivo de 40x y revisar 15 campos. En el caso de que las estructuras sean muy abundantes.5 DISPOSICION DE RESIDUOS La muestra de orina será desechada en el inodoro. El contenedor para la recolección de la muestra de orina deberá sumergirse durante 15 minutos en un recipiente con una solución de hipoclorito de sodio y posteriormente desecharse en el bote de la basura. 65 . Después de centrifugar. Cristales de fosfato amorfo. teniendo cuidado de bajar la palanca después de desecharla. decantar el sobrenadante. Procedimiento Tapar el tubo No. Se reportará escasos. Anotar resultados. La tira reactiva empleada en el análisis químico deberá tirarse en el contenedor con bolsa roja de riesgo biológico. deberán colocarse en el bote de la basura del laboratorio.5 mL del mismo para resuspender el sedimento.Cristales de fosfato triple. dejando aproximadamente 0. Pueden estar presentes en caso de cálculos renales. Enfocar en el microscopio primero con el objetivo de 4x y después con el de 10x (seco débil) para enfocar la imagen. Reportar tipo y número de estructuras encontradas por campo. Cristales de fosfato de calcio. 7. pero también pueden aparecer en algunos procesos patológicos como cistitis crónica o cálculos renales. Nota: Traer para el día se la práctica un atlas de sedimento urinario o laminillas de color para ayudar a identificar las estructuras encontradas. Se llegan a encontrar en orinas normales.

6 DIAGRAMA DE FLUJO 66 .7.

7.7 RESULTADOS Datos del Paciente Nombre______________________________________Edad______ Sexo____ Análisis Físico Determinación Color Aspecto Análisis Químico Determinación Glucosa Proteínas Sangre Cetona Bilirrubina Gravedad específica pH Urobilinógeno Nitrito Leucocitos Análisis de sedimento Resultado Eritrocitos Leucocitos Otras estructuras Valor de Referencia Observaciones Resultado Valor de Referencia Observaciones Resultado Valor de Referencia Observaciones 67 .

10 REFERENCIAS CONSULTADAS 68 .9 CONCLUSIONES 7.8 DISCUSIÓN 7.7.

Mosby. NORMA OFICIAL MEXICANA NOM-003-SSA2-1993 10. Ed. Reverté México 1302 p.A. (1970) Gradwohl.S. Análisis de orina. Ed. Cap.REFERENCIAS 1. Cientifica y Tecnicas. Bernard. Shirlyn B. Clinical Diagnosis and Management by Laboratory Methods. México. 9. métodos e interpretación. Médica Panamericana. 20th Ed. Inmunología de memoria. John D. 1. Sister Laurine . Ed. España 1509 p. Médica Panamericana. 2ª Ed Manual Moderno. Prado. Gradwohl’s clinical laboratory methods and diagnosis. 226 p. Oscar. USA 3. p. Rutherford Birchard Hayes. pp. 9ª Ed. (2001) Henry. U. 7. Argentina. (1993) Henry. Ed. 4.B. (2006) Rojas Espinoza. (2000) Mckenzie. 351-367. México. 2 y 3.p. John Bernard. 7ª Ed. W. Atlas color. Ed. Saunders Co. Medicina Transfusional. 8. México. p. 2. Alfredo. 3. 5. Hematologia clinica. (1999) Radillo González. 6. Análisis clínicos. Diagnostico y tratamiento clinicos por el laboratorio. Ed. p. (1986) Bauer. (1987) Graff. NORMA OFICIAL MEXICANA NOM-087-ECOL-SSA1-2002 69 . 873 p.

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