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E.M.B. Agar.

Este medio (también denominado E.A.M.) es utilizado para el aislamiento selectivo de bacilos Gram negativos de rápido
desarrollo y escasas exigencias nutricionales. Permite el desarrollo de todas las especies de la familia Enterobacteriaceae.

Fundamento
Este medio combina las fórmulas de Holt-Harris y Teague con la de Levine, para obtener un mejor rendimiento en el
aislamiento selectivo de enterobacterias y otras especies de bacilos Gram negativos. La diferenciación entre organismos
capaces de utilizar la lactosa y/o sacarosa, y aquellos que son incapaces de hacerlo, está dada por los indicadores eosina y
azul de metileno; éstos ejercen un efecto inhibitorio sobre muchas bacterias Gram positivas. Muchas cepas de Escherichia
coli y Citrobacter spp. presentan un característico brillo metálico. Las cepas que utilizan la lactosa poseen centro oscuro con
periferia azulada o rosada, mientras que las que no lo hacen son incoloras. Este medio permite el crecimiento de Candida
spp. como colonias rosadas y puntiformes; la siembra en profundidad permite el desarrollo de clamidosporas en C. albicans.
Enterococcus spp. crece en este medio como colonias puntiformes y transparentes, mientras que Acinetobacter spp. y otras
bacterias oxidativas pueden dar colonias de color azul lavanda; esto puede ocurrir aunque las cepas no sean capaces de
acidificar a partir de lactosa al 0.5% y ello se debe a la incorporación de azul de metileno a sus membranas. En este medio
se obtiene además, un buen desarrollo de especies de Salmonella y Shigella.

Fórmula (en gramos por litro) Instrucciones


Peptona 10.0
Lactosa 5.0 Suspender 36 g del polvo en un litro de agua
Sacarosa 5.0 destilada. Reposar 5 minutos; mezclar,
calentando a ebullición durante 1 o 2 minutos
Fosfato dipotásico 2.0
hasta su disolución. Esterilizar en autoclave a no
Agar 13.5 más de 121°C durante 15 minutos. Enfriar a 45°C
Eosina 0.4 y distribuir agitando suavemente.
Azul de metileno 0.065
pH final: 7.2 ± 0.2

Siembra
En superficie, por estriado a partir de un inóculo poco denso, para obtener colonias aisladas.
En profundidad, para favorecer el desarrollo de clamidosporas.

Incubación
De 24 a 48 horas a 35-37 °C, en aerobiosis.

Resultados

Microorganismos Tipo de Colonia


Escherichia coli ATCC 25922 Verdosas con brillo metálico y centro negro azulado
Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 Mucosas, rosa púrpura, confluentes
Proteus mirabilis ATCC 43071 Incoloras
Enterococcus faecalis ATCC 29212 Incoloras, pequeñas, puntiformes
Shigella flexneri ATCC 12022 Incoloras
Salmonella typhimurium ATCC 14028 Incoloras

Características del medio:


Placas preparadas: color púrpura.

La esterilización del medio de cultivo reduce el azul de metileno al color naranja. El color púrpura se restaura por agitación.
La presencia de un precipitado en el medio esterilizado es normal y no debe ser removido, ya que es parte esencial del
mismo.

Almacenamiento:
Medio deshidratado: a 10-35 ºC.
Medio preparado: a 2-8 ºC.

Presentación
x 100g :Código: B02-101-05 x 500g :Código: B02-101-06 6 x 50 ml: B04-101-84

Mac Conkey Agar.


Este medio se utiliza para el aislamiento de bacilos Gram negativos de fácil desarrollo, aerobios y anaerobios facultativos.
Permite diferenciar bacterias que utilizan o no, lactosa en muestras clínicas, de agua y alimentos. Todas las especies de la
familia Enterobacteriaceae desarrollan en el mismo.

Fundamento
En el medio de cultivo, las peptonas, aportan los nutrientes necesarios para el desarrollo bacteriano, la lactosa es el hidrato
de carbono fermentable, y la mezcla de sales biliares y el cristal violeta son los agentes selectivos que inhiben el desarrollo
de gran parte de la flora Gram positiva.
Por fermentación de la lactosa, disminuye el pH alrededor de la colonia. Esto produce un viraje del color del indicador de pH
(rojo neutro), la absorción en las colonias, y la precipitación de las sales biliares.
Los microorganismos no fermentadores de lactosa producen colonias incoloras.

Fórmula (en gramos por litro) Instrucciones


Peptona 17.0
Pluripeptona 3.0
Lactosa 10.0 Suspender 50 g del polvo por litro de agua destilada.
Mezcla de sales biliares 1.5 Reposar 5 minutos y mezclar hasta uniformar.
Calentar suavemente y hervir 1 a 2 minutos hasta
Cloruro de sodio 5.0 disolver. Esterilizar en autoclave a 121°C durante 15
Agar 13.5 minutos.
Rojo neutro 0.03
Cristal violeta 0.001
pH final: 7.1 ± 0.2

Siembra
- Sembrar en superficie.
- Utilizando la técnica de Pour Plate: sembrar 1 ml de muestra y agregar aproximadamente 15 ml de medio de cultivo
fundido y enfriado a 45-50 ºC.

Incubación
Durante 18-48 horas, a 35-37 ºC, en atmósfera aeróbica

Resultados

Microorganismos Colonias
Escherichia coli ATCC 25922 Rojas con halo turbio
Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 Rosadas mucosas
Salmonella typhimurium ATCC 14028 Incoloras, transparentes
Shigella flexneri ATCC 12022 Incoloras, transparentes
Proteus mirabilis ATCC 43071 Incoloras, transparentes
Enterococcus faecalis ATCC 29212 Diminutas, incoloras, opacas

Características del medio


Medio preparado: rojo púrpura

Almacenamiento:
Medio deshidratado: a 10-35 ºC.
Medio preparado: a 2-8 ºC.

Presentación
x 100g :Código: B02-114-05 x 500g :Código: B02-114-06

Manitol Salado Agar.


Medio de cultivo selectivo y diferencial, utilizado para el aislamiento y diferenciación de estafilococos.
Es recomendado para el aislamiento de estafilococos patogénicos a partir de muestras clínicas, alimentos, productos
cosméticos y otros materiales de importancia sanitaria.
También, este medio puede utilizarse para el cultivo de especies halófilas de Vibrio, si no se dispone de medios apropiados
(TCBS Medio, Medio Marino, etc.), aunque algunas especies pueden no desarrollar.
Fundamento
Se trata de un medio altamente selectivo debido a su alta concentración salina. Los estafilococos coagulasa positiva
hidrolizan el manitol acidificando el medio; las colonias aparecen rodeadas de una zona amarilla brillante. Los estafilococos
coagulasa negativos, presentan colonias rodeadas de una zona roja o púrpura. Las colonias sospechosas, se repicarán en un
medio sin exceso de cloruro de sodio para efectuarles, posteriormente, la prueba de la coagulasa.
En el medio de cultivo, el extracto de carne y la pluripeptona, constituyen la fuente de carbono, nitrógeno, vitaminas y
minerales, el manitol es el hidrato de carbono fermentable, el cloruro de sodio (que se encuentra en alta concentración) es
el agente selectivo que inhibe el desarrollo de la flora acompañante, y el rojo fenol es el indicador de pH.
Las bacterias que crecen en un medio con alta concentración de sal y fermentan el manitol, producen ácidos, con lo que se
modifica el pH del medio y vira el indicador de pH del color rojo al amarillo.
Los estafilococos crecen en altas concentraciones de sal, y pueden o no fermentar el manitol.
Los estafilococos coagulasa positiva fermentan el manitol y se visualizan como colonias amarillas rodeadas de una zona del
mismo color.
Los estafilococos que no fermentan el manitol, se visualizan como colonias rojas, rodeadas de una zona del mismo color o
púrpura.

Fórmula (en gramos por litro) Instrucciones


Extracto de carne 1.0
Pluripeptona 10.0
Suspender 111 g de polvo por litro de agua destilada.
d-Manitol 10.0 Reposar 5 minutos y mezclar calentando a ebullición
Cloruro de sodio 75.0 durante 1 o 2 minutos. Distribuir y esterilizar en
autoclave a 118-121°C durante 15 minutos.
Agar 15.0
Rojo de fenol 0.025
pH final: 7.4 ± 0.2

Siembra
Sembrar en superficie un inóculo denso de la muestra.

Incubación
De rutina: durante 18-24 horas a 35-37 °C, en aerobiosis.
La American Public Health Association (A.P.H.A) recomienda la incubación durante 3 días a 32 °C, en aerobiosis.

Resultados

Microorganismos Crecimiento Características de las colonias


Staphylococcus aureus ATCC 25923 Excelente Amarilla
Staphylococcus epidermidis ATCC 14990 Bueno Roja
Escherichia coli ATCC 25922 Inhibido Inhibido
Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 Inhibido Inhibido

Características del medio


Medio preparado: rojo

Almacenamiento:
Medio deshidratado: a 10-35 ºC.
Medio preparado: a 2-8 ºC.

Presentación
x 100g :Código: B02-118-05 x 500g :Código: B02-118-06

Salmonella Shigella Agar.


Medio de cultivo utilizado para el aislamiento de Salmonella spp. y de algunas especies de Shigella spp. a partir de heces,
alimentos y otros materiales en los cuales se sospeche su presencia.

Fundamento
Es un medio de cultivo selectivo y diferencial.
La selectividad, esta dada por la sales biliares y el verde brillante, que inhiben el desarrollo de bacterias Gram positivas, de
la mayoría de los coliformes y el desarrollo invasor del Proteus spp.
Es diferencial debido a la fermentación de la lactosa, y a la formación de ácido sulfhídrico a partir del tiosulfato de sodio.
Los pocos microorganismos fermentadores de lactosa capaces de desarrollar, acidifican el medio haciendo virar al rojo el
indicador de pH, obteniéndose colonias rosadas o rojas sobre un fondo rojizo.
Salmonella, Shigella y otros microorganismos no fermentadores de lactosa, crecen bien en el medio de cultivo, y producen
colonias transparentes.
La producción de ácido sulfhídrico se evidencia como colonias con centro negro debido a la formación de sulfuro de hierro.
Para aumentar la selectividad, se recomienda incubar previamente la muestra en Selenito caldo (B02-120-05).

Fórmula (en gramos por litro) Instrucciones


Pluripeptona 5.0
Extracto de carne 5.0
Lactosa 10.0
Suspender 60 g del polvo por litro de agua destilada.
Mezcla de sales biliares 8.5
Reposar 5 minutos y mezclar hasta homogeneizar.
Citrato de sodio 8.5 Calentar a ebullición durante 2 o 3 minutos. NO
Tiosulfato de sodio 8.5 ESTERILIZAR EN AUTOCLAVE. Enfriar a 45-50°C y
distribuir unos 20 ml por placa. Secar la superficie del
Citrato férrico 1.0
medio unos minutos en la estufa.
Agar 13.5
Verde brillante 0.00033
Rojo neutro 0.025
pH final: 7.0 ± 0.2

Siembra
Sembrar por estriado la superficie del medio de cultivo.
Recomendaciones, se aconseja sembrar en forma conjunta una placa de agar E.M.B. (B02-101-05) o de agar Mac Conkey
(B02-114-05).

Incubación
Durante24-48 horas a 35-37 °C, en aerobiosis.

Resultados

Microorganismos Colonias
Salmonella typhimurium ATCC 14028 Transparentes, centro negro
Shigella flexneri Incoloras
Shigella sonnei Incoloras
Proteus mirabilis ATCC 43071 Transparentes, centro negro
Escherichia coli ATCC 25922 Rosadas a rojas
Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 Rosadas cremosas y mucosas
Enterococcus faecalis ATCC 29212 Incoloras, de muy escaso crecimiento

Características del medio


Medio preparado: rojo naranja.

Almacenamiento:
Medio deshidratado: a 10-35 ºC.

Presentación
x 100g :Código: B02-138-05 X 500g :Código: B02-138-06

Sangre Agar Base


Medio para propósitos generales, para el aislamiento y cultivo de numerosos microorganismos.
Con la adición de sangre, el medio es útil tanto para el aislamiento y cultivo de microorganismos aerobios y anaerobios
nutricionalmente exigentes a partir de una gran variedad de muestras, como para la observación de reacciones de
hemólisis.
También, este medio de cultivo, puede utilizarse como medio base para preparar el medio agar chocolate.

Fundamento
La infusión de músculo de corazón y la peptona, otorgan al medio un alto valor nutritivo, que permite el crecimiento de una
gran variedad de microorganismos, aún de aquellos nutricionalmente exigentes. El cloruro de sodio mantiene el balance
osmótico.
El agregado de sangre al medio de cultivo, en concentración final de 5-10 %, aporta nutrientes para el crecimiento
bacteriano, y permite detectar hemólisis.

Fórmula (en gramos por litro)


Infusión de músculo de corazón 375.0
Peptona 10.0
Cloruro de sodio 5.0
Agar 15.0
pH final: 7.3 ± 0.2

Instrucciones
Suspender 40 g del polvo en un litro de agua destilada. Dejar reposar 5 minutos y mezclar perfectamente hasta obtener una
suspensión homogénea. Calentar con agitación frecuente y hervir 1 minuto. Esterilizar 20 minutos a 121°C. Enfriar a 45-
50°C agregar sangre desfibrinada al 5%. Homogeneizar y distribuir en placas.

Preparación de la placa de Agar Sangre: añadir en forma aséptica un 5% de sangre estéril desfibrinada a temperatura
ambiente, el agar debe estar a 45°C.

Preparación de Agar Chocolate: después de añadir la sangre y agitando frecuentemente se mantiene el medio de cultivo a
80°C por 10 minutos hasta que adquiera un color pardo chocolatado.

Siembra
Por inoculación directa del material en estudio, sobre la superficie del medio de cultivo.

Incubación
El tiempo, temperatura y atmósfera de incubación, dependerán del microorganismo que se quiera aislar.

Resultados

Microorganismos Crecimiento Hemólisis


E. coli ATCC 25922 Abundante --
S. aureus ATCC 25923 Abundante Beta
S. pyogenes ATCC 19615 Abundante Beta
S. pneumoniae ATCC 6305 Abundante Alfa
S. pneumoniae ATCC 49619 Abundante Alfa

Limitaciones
-Las reacciones hemolíticas de muchos microorganismos son diferentes al usar sangre de caballo respecto a la sangre de
carnero, tal es el caso de algunas cepas de estreptococos grupo D, que producen beta hemólisis en el agar suplementado
con sangre de caballo pero no en agar suplementado con sangre de carnero, y son mal clasificados como Estreptococos
Grupo A al usar sangre de caballo.

Características del medio


Medio preparado: ámbar.
Medio preparado con 5% de sangre de carnero: rojo cereza.

Almacenamiento
Medio deshidratado: a 10-35 ºC.
Medio preparado: a 2-8 ºC.

Presentación
x 100g :Código: B02-149-05 x 500g :Código: B02-149-06 6 x 50 ml: B04-149-84

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