Tinción de Papanicolaou

La tinción de Papanicolaou es un examen basado en la coloración de smears* en general (vaginal, cervical, prostático) o para fluídos corporales (peritoneal, pleural, gástrico, urinario, espinal,etc) Colorantes empleados: Existen varias soluciones de Papanicolaous, pero todas son variantes de los siguientes colorantes Hematoxilina de Harris (EA50, EA65,EA36) Naranja G Eosina Resultado de las tinciones celulares: núcleos---------------------------------------en azul células acidófilas--------------------------rojo a naranja células basófilas---------------------------verde o azul verdoso células o fragmentos de tejido impregnados de sangre----naranja o naranja verdoso Como prueba para la detección del cáncer cervico-uterino, se toma una muestra de células del epitelio del cuello uterino y se extienden en una lámina de vidrio que es la que se colorea con Papanicolaou.

Tinción negativa--------------------------resultados normales Tinción positiva---------------------------resultados alterados Una tinción positiva puede ser índice de: • Inflamación ( por diferentes causas) • Signos tempranos de cáncer (displasia) • Signos de cáncer más avanzado que se extiende más allá del cuello • Cáncer avanzado La tinción de Papanicolaou es una prueba fiable. Requiere de experiencia en la interpretación de los resultados, pero en los smears cervicales, el porcentaje de aciertos es muy elevado. Esta prueba ha ayudado a disminuir drásticamente el número de mujeres que mueren por causa de cáncer cervical. En nuestro país el Programa de detección de cáncer cervico-uterino con las pruebas citológicas periódicas ha ayudado extraordinariamente a reducir esta enfermedad. Otros métodos computarizados, utilizados en conjunción con el Papanicolaou, ayudan a la fiabilidad de la prueba, pero aumentan el costo de su utilización.

para América Latina. Coilocitos. para los pacientes que tienen células precancerosas. con una vacuola central. que afirman que es más segura que el Papanicolaou y menos costosa. Algunos tipos de ese virus. con núcleo rechazado a la periferia. se denomina "Tamizaje y tratamiento" y utiliza la inspección visual con ácido acético. para detectar células anormales en el cuello del útero y luego suministra tratamiento inmediato con crioterapia. con apoyo de otras organizaciones. Kit de tinción PAS para la detección de aldehído y mucosustancia Principio . citoplasma claro. (célula grande. Los estudios fueron realizados por la Alianza para la Prevención del Cáncer Cervicouterino. desde hace tiempo. como es el caso del cervix. se saben están relacionados con las lesiones precancerosas de las mucosas cubiertas por epitelios estratificados planos. de bordes irregulares. que generalmente es de glucógeno) que se les denominó. del cúal es miembro la OPS. cuyo significado se desconocia y que hoy se sabe están infectadas por papilomavirus en diferentes tipos. Qué son los Coilocitos? Con la tinción de Papanicolaou en los smears y también en los cortes histologicos con HE aparecen células con determinadas caracteristicas.Células normales Células cancerosas En la actualidad la Organización Panamericana de la Salud (OPS) está proponiedo la utilización de otra prueba.

2. 2 x Neo-Clear® o xileno Montar con Neo-Mount® o Entellan® Nuevo Cubrir con Entellan® Nuevo los preparados humedecidos con xileno. Serie creciente de alcoholes. Agua corriente del grifo. Reactivo de Schiff 15 min. Con polisacáridos no substituidos. que oxida los 1. Enjuagar en agua destilada. Combinando la tinción PAS con azul alcián pueden identificarse además mucosustancias ácidas (glucosaminoglicanos). fluente 3 min. acuoso 500 ml Solución 2: Reactivo de Schiff 500 ml Preparación 1. mucopolisacáridos neutros. la tinción PAS da una reacción de color específica. o con Neo-Mount® y cubreobjetos los preparados humedecidos con Neo-Clear®. Merck art.2-glicoles formándose grupos aldehído. El valor del pH es aprox. Técnica Tinción PAS Etapa Tiempo Desparafinar en forma típica los cortes y rehidratar. Ácido peryódico 5 min. Solución de ácido acético al 3% Mezclar cuidadosamente 485 ml de agua destilada con 15 ml de ácido acético del 100%.5 %. Agua corriente del grifo. nro. revolviendo. 2.01646. Con el reactivo de Schiff. fluente 3 min. Agua corriente del grifo. Solución 1: Ácido peryódico 0. Solución de azul alcián al 1% Se disuelven. Solución de hematoxilina modificada según Gill III 2 min. En la tinción PAS se trata el material con ácido peryódico. fluente 3 min. glucolípidos y fosfolípidos. 1.La tinción PAS (periodic acid-Schiff) es uno de los métodos químicos mâs empleados en histología. Resultado Núcleos azul . 5 g de azul alcián 8 GX Certistain® en 500 ml de ácido acético al 3%.5. Material Como material de partida se emplean cortes de tejido fijado en formalina e incluido en parafina o bien extensiones celulares. mucoproteínas y glucoproteínas. los aldehídos reaccionan dando un color rojo luminoso. Enjuagar en agua destilada. Cortes parafínicos de 3-5 μm de espesor Reactivos Componentes en el kit de tinción PAS. Enjuagar en agua destilada.

glucógeno. Si se utiliza un aparato automático de tinción. Solución de azul alcián 5 min. Serie creciente de alcoholes. deben tenerse en cuenta las instrucciones de empleo del fabricante del aparato y del software. Agua corriente del grifo. o con Neo-Mount® y cubreobjetos los preparados humedecidos con Neo-Clear®. fluente 3 min. Deben usarse instrumentos adecuados para la toma de muestras y en la preparación. Diagnóstico Los diagnósticos deberán ser establecidos solamente por personas autorizadas y cualificadas. Enjuagar en agua destilada. Resultado Núcleos azul Mucosustancias ácidas azul claro Polisacáridos. Deben seguirse las indicaciones de empleo del histoprocesamiento y las instrucciones de empleo del fabricante del aparato y del software. Solución de hematoxilina modificada según Gill III 20 segundos Agua corriente del grifo. Preparación de las muestras Todas las muestras deben tratarse de acuerdo con el estado de la tecnología. mucopolisacáridos neutros. . colágeno púrpura Tinción azul alcián PAS Etapa Tiempo Desparafinar en forma típica los cortes y rehidratar. 2 x Neo-Clear® o xileno Montar con Neo-Mount® o Entellan® Nuevo Cubrir con Entellan® Nuevo los preparados humedecidos con xileno. Enjuagar en agua destilada. mucopolisacáridos neutros púrpura Nota técnica El microscopio usado debería corresponder a los requisitos de un laboratorio de diagnóstico médico. glucolípidos. fluente 3 min. Todas las muestras deben estar rotuladas inequívocamente. fluente 3 min. Enjuagar en agua destilada. fosfolípidos. mucoproteínas y glucoproteínas. Seguir las indicaciones de empleo del fijador. fluente 3 min. y deben seguirse las instrucciones del fabricante para la aplicación/el empleo. Agua corriente del grifo. Deberán emplearse terminologías vigentes.Polisacáridos. Ácido peryódico 10 min. membrana basal. Agua corriente del grifo. Reactivo de Schiff 15 min.

además de aceptar la devolución de productos usados o caducados a través del servicio de retrologística.Hematoxilina de Weigert 5 10º-Deshidratar.Deberán elegirse y realizarse ensayos ulteriores según métodos reconocidos. 1º-Desparafinado. 3º. 4º.Lavar en H2O destilada. Tricromico de Masson Es una técnica para la coloración de fibras colágenas y elásticas. Indicaciones para la eliminación de residuos Las soluciones usadas y las soluciones caducadas deben eliminarse como desechos especiales. el contenido almacenado entre +15°C y +25°C es utilizable hasta la fecha de caducidad indicada. Alcohol absoluto-5min.Verde luz 5-7 min. Los frascos deben mantenerse siempre bien cerrados. Notas sobre el empleo Para evitar errores.Ácido fosfomolíbdico 5 min. tejido conjuntivo de verde. Se observan tres colores distintos. ofrece también ayuda técnica para soluciones locales de eliminación de residuos. . Deben cumplirse las directivas nacionales sobre seguridad en el trabajo y aseguramiento de la calidad. Alcohol 70º-5min. 2º. 9º. núcleos azul negro y citoplasma y fibras musculares rosa. eritrocitos de rojizo. Alcohol 96º-5min. 7º. a 60º. Estabilidad Después de abrir el frasco por primera vez.Hidratación. Solamente para uso profesional. Sumergimos en xilol durante 10 o 15 min. debiéndose cumplir las directivas locales de eliminación de residuos. Almacenamiento El kit de tinción debe almacenarse entre +15°C y +25°C Las soluciones pueden usarse hasta la fecha de caducidad indicada. tejido muscular de verde pardo. Deben emplearse microscopios equipados de acuerdo con el estándar. Protección contra infecciones Debe observarse a toda costa una protección eficaz contra infecciones de acuerdo con las directivas de laboratorio.Ácido fosfomolíbdico 5 min. Estufa durante 30 min. la tinción debería ser realizada por personal especializado. Merck. 8º.

1 Análisis de resultados 4. diseñados para dar resistencia. al igual que otros colorantes tricrómicos. 1 cc de ácido acético glacial. 11º.Montaje. 9 cc de fucsina ácida al 1% en solución acuosa. Se emplean tres colorantes para diferenciar el núcleo celular. Las secciones entonces se tratan con ácido fosfotúngstico y/o fosfomolíbdico. El grosor de corte óptimo de las muestras es de entre 4 y 6 micras. el músculo y el colágeno se unirán a los tintes ácidos.2 Variantes 5 Véase también 6 Bibliografía 7 Enlaces externos [editar] Fundamento Primeramente. se tiñen las secciones con un tinte ácido tal como escarlata de Biebrich. el citoplasma y las fibras de colágeno. El tricrómico de Masson. que es el tinte del colágeno. [editar] Tejido control y diana Cualquier tejido con componente conjuntivo. si se va a teñir con verde luz): . Probablemente.min. 6º. aunque en menor intensidad. Alcohol de 70º Alcohol de 96º. es una tinción especial que permite visualizar claramente las fibras de colágeno tipo I que forman fibras gruesas o haces. Cualquier fijador es válido.Lavar con agua corriente 10 min. Los ácidos fosfotúngsticos y fosfomolíbdicos tienen numerosos grupos ácidos que probablemente actúen como medio de unión entre el colágeno y el azul de la anilina. los ácidos fosfotúngsticos y fosfomolíbdicos permiten que la escarlata de Biebrich difunda del colágeno pero no del citoplasma. Todos los elementos acidófilos del tejido tales como el citoplasma. 5º. Contenido [ocultar] 1 Fundamento 2 Tejido control y diana 3 Reactivos 4 Procedimiento 4. Solución acuosa de ácido fosfomolíbdico (utilizar ácido fosfotúngstico en la misma proporción. [editar] Reactivos Solución de hematoxilina férrica de Weigert. el pH de la solución fosfotúngstico/fosfomolíbdico también aumente la coloración y ayude al colágeno en la difusión o el retiro de los colorantes. en especial con contenido en fibras colágenas. Ya que el citoplasma es mucho menos permeable que el colágeno. también evidencia. si bien es de elección la solución de Bouin.Fucsina de Ponceau 5 min. puede servir como control o ser un tejido diana. las fibras reticulares. Xilol. Solución de escarlata de Biebrich – fucsina ácida: 90 cc de escarlata de Biebrich al 1% en agua destilada.

Definición de Tinción de mallory . Lavar en agua destilada. 2 cc de ácido acético glacial.5 g de azul de anilina. los glóbulos rojos y el tejido muscular. [editar] Procedimiento Desparafinar e hidratar hasta el agua destilada de manera habitual. Solución diferenciadora: solución acuosa de ácido acético glacial al 1%. el tejido conjuntivo se teñirá de dicho color. [editar] Análisis de resultados Fibras de colágeno = Azul. Diferenciar en la solución de ácido acético al 1% durante 3-5 minutos. Deshidratar. 200 cc de agua destilada. el tiempo de las soluciones. ácido pícrico). 98 cc de agua destilada. Teñir con hematoxilina férrica durante 10 minutos. etc. [editar] Variantes La técnica presenta multitud de variantes. En material fijado en soluciones de formaldehído o alcohólicas se recomienda hacer un mordentaje previo con líquido de Bouin durante 1 hora a 56-60 ºC o toda la noche a temperatura ambiente. 99 cc de agua destilada. o en la solución acuosa de ácido fosfotúngstico al 5% durante 15 minutos si se desea teñir con verde luz. Núcleo celular = Lila. Lavar en agua destilada.5 g de ácido fosfomolíbdico. 1 cc de ácido acético glacial. Por tanto. aclarar y montar. Teñir con solución de azul de anilina 15 minutos o con solución de verde luz 5 minutos. Solución de verde luz al 2% (alternativa al azul): 2 g de verde luz SF amarillento. marrón. Estructuras oxidadas + Citoplasma = Rojo. Teñir con la solución de escarlata-fucsina ácida durante 2-5 minutos. Lavar en agua corriente durante 10 minutos. Se teñirán de rojo la queratina. pero las principales modificaciones hacen referencia al uso de un diferenciador después de la hematoxilina (por ejemplo. Solución de azul de anilina: 2. Enfriar y lavar en agua destilada hasta que desaparezca el color amarillo. la temperatura. Lavar en agua destilada. Tratar con la solución de ácido fosfomolíbdico-fosfotúngstico durante 10-15 minutos si se va a colorear con la solución de azul de anilina.

específicamente en el citosol. el ciclo de Krebs supone la tercera. es decir. catabólica y anabólica al mismo tiempo. los carbonos de estas macromoléculas dan lugar a moléculas de acetil-CoA de dos carbonos. ej. desaminación oxidativa).el ciclo de Krebs se realiza en el citoplasma. en la cual el poder reductor (NADH y FADH2) generado se emplea para la síntesis de ATP según la teoría del acomplamiento quimiosmótico.solución de azul-naranja G de anilina y ácido fosfotungstico. como ciertos aminoácidos. neuroglia y fibras musculares aparecen en rojo y las fibrillas de elastina en naranja. En organismos aeróbicos. es decir.Una técnica para el estudio del tejido conjuntico. se realiza en la mitocondria. Los cortes se tiñen con fucsina ácida. e incluye las vías catabólicas de aminoácidos (p. El ciclo de Krebs (también llamado ciclo del ácido cítrico o ciclo de los ácidos tricarboxílicos) es una ruta metabólica. También llamada tinción tricrómica de Mallory microfotografía Ciclo de Krebs Esquema didáctico del ciclo del ácido cítrico. que forma parte de la respiración celular en todas las células aeróbicas. La tercera etapa es la fosforilación oxidativa. la beta oxidación de ácidos grasos y la glucólisis. Las fibras de colágeno aparecen en azul.En procariotas. liberando energía en forma utilizable (poder reductor y GTP). . de las cuales. El ciclo de Krebs también proporciona precursores para muchas biomoléculas. En la primera etapa.En células eucariontas. una sucesión de reacciones químicas. El metabolismo oxidativo de glúcidos. el ciclo de Krebs es parte de la vía catabólica que realiza la oxidación de glúcidos. ácidos grasos y aminoácidos hasta producir CO2. Por ello se considera una vía anfibólica. la fibroglia. grasas y proteínas frecuentemente se divide en tres etapas.

[editar] Reacciones del ciclo de Krebs El ciclo de Krebs tiene lugar en la matriz mitocondrial en eucariota . la administración al tejido de piruvato y oxaloacetato provocaba la acumulación de citrato en el músculo. Este esquema inicial. en cantidad desproporcionada respecto a las cantidades añadidas. Con base en estas observaciones experimentales Hans Krebs propuso una ruta cíclica y su secuencia de reacciones. observó que las células tratadas con malonato acumulaban citrato. lo cual sugería que citrato y α-cetoglutarato eran precursores del succinato. succinato y αcetoglutarato. lograba bloquear la oxidación del piruvato. En tercer lugar. dio lugar al ciclo de Krebs tal y como hoy lo conocemos.Contenido[editar] Historia El ciclo Krebs recibe su nombre en honor a su descubridor Sir Hans Adolf Krebs. lo que indicaba su participación en la vía. En segundo lugar. empleando malonato (inhibidor de la succinato deshidrogenasa). Además. con ciertas modificaciones. quien propuso los elementos clave del consumo de O2. lo que indicaba que son precursores del citrato.

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Las reacciones son: . El FADH2 cede sus dos hidrógenos a la ubiquinona (coenzima Q). por lo que el balance neto del ciclo es: Acetil-CoA + 3 NAD+ + FAD + GDP + Pi + 2 H2O → CoA-SH + 3 (NADH + H+) + FADH2 + GTP + 2 CO2 Los dos carbonos del Acetil-CoA son oxidados a CO2. El FADH2 de la succinato deshidrogenasa. El ácido cítrico (6 carbonos) o citrato se regenera en cada ciclo por condensación de un acetil-CoA (2 carbonos) con una molécula de oxaloacetato (4 carbonos).El acetil-CoA (Acetil Coenzima A) es el principal precursor del ciclo. y la energía que estaba acumulada es liberada en forma de energía química: GTP y poder reductor (electrones de alto potencial): NADH y FADH2. al no poder desprenderse de la enzima. NADH y FADH2 son coenzimas (moléculas que se unen a enzimas) capaces de acumular la energía en forma de poder reductor para su conversión en energía química en la fosforilación oxidativa. El citrato produce en cada ciclo una molécula de oxaloacetato y dos CO2. que se reduce a ubiquinol (QH2) y abandona la enzima. debe oxidarse nuevamente in situ.

1. deshidrogenasa 5. Aconitasa 2.Molécula Enzima I. Succinato VII. 8. α-cetoglutarato V. Aconitasa II. Malato IX. Isocitrato IV. Oxaloacetato ensa ción 10. Succinil-CoA VI. αdeshidrogenasa 6. deshidrogenasa 4. deshidrogenasa Tipo de reacción Deshidratación Hidratación Oxidación Descarboxilación Descarboxilación oxidativa Hidrólisis Oxidación Reactivos/ Coenzimas H2O NAD+ Productos/ Coenzima H2O NADH + H+ NAD+ + CoA-SH GDP + Pi FAD H2O NAD+ NADH + H+ + CO2 GTP + CoA-SH FADH2 VIII. Citrato sintasa Oxidación NADH + H+ . sintetasa 7. 3. Fumarato Hidratasa Adición (H2O) 9. deshidrogenasa CondX. Isocitrato III.

5 moléculas de ATP (3 x 2. El acetil-CoA reacciona con una molécula de oxaloacetato (4 carbonos) para formar citrato (6 carbonos). se incluye el complejo de la piruvato deshidrogenasa que sintetiza el acetil-CoA necesario para la primera reacción del ciclo a partir de piruvato. 3 NADH +3H+. originará 2.5 = 7. El mecanismo que se realiza es una inhibición competitiva por producto (por NADH) de las enzimas que emplean NAD+ como sustrato. Por tanto. mientras que el FADH2 dará lugar a 1. 6 NADH + 6H + . los complejos piruvato deshidrogenasa y citrato sintasa. que catalizan las tres primeras reacciones del ciclo de Krebs. 2CO2. el citrato se convierte de nuevo en oxaloacetato. por lo que por cada molécula de glucosa en el ciclo de Krebs se produce: 4CO2. total 32 ATP. antes de comenzar la tercera reacción. 7. Las reacciones que forman intermediarios del ciclo se conocen como reacciones anapleróticas. En eucariotas. Cada molécula de glucosa produce (vía glucólisis) dos moléculas de piruvato. dichos átomos de carbono se liberan en forma de CO2 El ciclo consume netamente 1 acetil-CoA y produce 2 CO2. mediante una reacción de condensación. Cada NADH. 2 FADH2.5 + 1. el piruvato se desplaza al interior de la mitocondria (gracias a un transportador específico de membrana . 1 FADH2. Algunas enzimas son también reguladas negativamente cuando el nivel de poder reductor de la célula es elevado. El rendimiento de un ciclo es (por cada molécula de piruvato): 1 ATP. se substraen 2 átomos de carbono del citrato (6C) para dar oxalacetato (4C). [editar] Principales vías que convergen en el ciclo de Krebs La mayoría de las vías catabólicas convergen en el ciclo de Krebs.NOTA: El cis-aconitato es un intermedio de reacción muy inestable que rápidamente se transforma en citrato. Durante estas reacciones. que a su vez producen dos acetil-CoA. Esta regulación frena este ciclo degradativo cuando el nivel energético de la célula es bueno.5). Así se regulan. También las enzimas citrato sintasa. 2 GTP. produciendo un oxaloacetato y dos CO2. entre otros. A través de una serie de reacciones. isocitrato deshidrogenasa y α-cetoglutarato deshidrogenasa. [editar] Regulación Muchas de las enzimas del ciclo de Krebs son reguladas por retroalimentación negativa. El ciclo de Krebs constituye la segunda etapa del catabolismo de carbohidratos. Entre estas enzimas. que es un producto de la vía y un indicador del nivel energético de la célula. son inhibidas por altas concentraciones de ATP. como muestra el diagrama.5 ATP. La glucólisis rompe la glucosa (6 carbonos) generando dos moléculas de piruvato (3 carbonos). También consume 3 NAD+ y 1 FAD. [editar] Visión simplificada y rendimiento del proceso El paso final es la oxidación del ciclo de Krebs. procedente de la glucólisis o del catabolismo de aminoácidos. produciendo 3 NADH + 3 H+ y 1 FADH2.5 + 1 GTP = 10 ATP por cada acetil-CoA que ingresa en el ciclo de Krebs. cuando se oxide en la cadena respiratoria. por unión alostérica del ATP.

si es la lanzadera de malato-aspartato son 32 y si es la de glicerol 3 fosfato. donde pueden ser empleados para la síntesis de proteínas o ser degradados para producir energía en el ciclo de Krebs. el ciclo de Krebs no utiliza directamente O2. por la gluconeogénesis (ruta anabólica). que es utilizado para la síntesis de ATP mediante la enzima ATP sintetasa. Esto genera un gradiente electroquímico de H+. los ácidos grasos son degradados en la matriz mitocondrial mediante sucesivos ciclos de beta oxidación que liberan unidades de acetil-CoA. Los electrones son transferidos a moléculas de O2. En muy diversos tejidos. Este proceso extrae la energía en forma de electrones de alto potencial de las moléculas (Cofactores reducidos) que son el NADH y FADH2. En el catabolismo de proteínas. la energía obtenida mediante el metabolismo oxidativo. es decir. En el hígado. De este modo. El ciclo de Krebs siempre es seguido por la fosforilación oxidativa. son 30. En ocasiones. los triglicéridos son hidrolizados liberando ácidos grasos y glicerol. principalmente. Para su entrada al ciclo deben eliminarse sus grupos amino (terminales y laterales) por acción de enzimas aminotransferasas y desaminasas. que puede emplearse para la síntesis de glucosa en la gluconeogénesis hepática. el ciclo de Krebs puede rendir propionil-CoA (3 carbonos). En la matriz mitocondrial. En el catabolismo de lípidos. regenerando NAD+ y FAD. especialmente en músculo cardíaco. Pero esta transferencia se realiza a través de una cadena transportadora de electrones capaz de aprovechar la energía potencial de los electrones para bombear protones al espacio intermembrana de la mitocondria. que pueden incorporarse al ciclo de Krebs. equivale a 30/32 moléculas de ATP dependiendo del tipo de lanzadera para introducir el poder reductor dentro de la mitocondria. glucólisis seguida del ciclo de Krebs. produce acetil-CoA que entra en el ciclo de Krebs. rindiendo H2O. [ocultar] 1 Historia 2 Reacciones del ciclo de Krebs 2. el glicerol puede ser convertido en glucosa vía dihidroxiacetona fosfato y gliceraldehído-3-fosfato. pero lo requiere al estar acoplado a la fosforilación oxidativa. Por cada molécula de glucosa.1 Visión simplificada y rendimiento del proceso 3 Regulación 4 Principales vías que convergen en el ciclo de Krebs 5 Véase también 6 Enlaces externos .interna). Estos aminoácidos penetran en las células. los enlaces peptídicos de las proteínas son degradados por acción de enzimas proteasas en el tubo digestivo liberando sus constituyentes aminoacídicos. gracias a lo cual el ciclo de Krebs puede continuar.