UNIVERSIDAD DEL VALLE DE MÉXICO

LICENCIATURA EN QUÍMICO FARMACÉUTICO

BIOTECNÓLOGO

MATERIA CLAVE
MICROBIOLOGIA

PRACTICA No. 3 DURACIÓN

APROXIMADA
Tinción de Gram

OBJETIVO DE LA PRÁCTICA
1. Identificar y diferenciar las bacterias según la respuesta tinto real al Gram

2. Establecer la importancia que tiene esta tinción para la caracterización e

identificación de las bacterias

INTRODUCCIÓN TEÓRICA DE LA PRÁCTICA

La tinción de Gram es un tipo de tinción diferencial empleada en microbiología para la

visualización de bacterias realizada por el bacteriólogo Danés Christian Gram.
Las bacterias Gram positivas se visualizan de color violeta y las Gram negativas de color
rosa.
Una posible Teoría del mecanismo de tinción es: el colorante básico entra al
microorganismo, donde forma con el yodo una laca insoluble en agua. El alcohol o la
acetona empleados para aclarar, deshidratan las paredes de los microorganismos Gram
positivos, tratados con mordiente y forma una barrera que la laca no puede atravesar. En
las células Gram negativas, los lípidos de la pared se disuelven por este tratamiento, lo
que permite el escape del complejo de cristal violeta con yodo.
Las 2 bacterias son permeables al cristal violeta; pero las gram positivas consisten
esencialmente en la formación dentro de la célula una cantidad apreciable de complejo
de yodo y colorante difícil de eliminar con el disolvente. A diferencia de las Gram
negativas seria prácticamente impermeable al cristal violeta
 MÉTODO (S)
1. Realizar frotis de las cepas como la tinción simple y realizar una con una mezcla
de cepas

2. En otro portaobjetos hacer un extendido con raspado de mucosa oral

3. Teñir los frotis con cristal violeta 1 min

4. Lavar al chorro del agua

5. Agregar lugol 1 min

6. Lavar con agua corriente

7. Quitar el exceso con alcohol-acetona

8. Lavar, secar y observar

 SUBSTANCIAS, MATERIAL Y EQUIPO
MATERIAL

• 2 portaobjetos

• Asa de nicromo

• Mechero Bunsen

• Microscopio

• Hisopo de algodón estéril

REACTIVOS
PREGUNTA/CUESTIONARIO A RESOLVER ANTES DE LA PRÁCTICA
• Aceite de inmersión
1. Explica la teoría completa de la tinción de Gram
• Lugol
Es un tipo de tinción diferencial empleado en la microbiología para la visualización
de bacterias sobre todo en muestras clínicas. Se utiliza tanto para referirse a la
SOLUCIONES
morfología
• Cristal celular bacteriana, considerándose batería Gram positiva a las
violeta
bacterias que se visualizan de color violeta y a las Gram negativas que se
• Alcohol-acetona
visualizan de color rosa

• Define
2. que es un mordiente
Safranina

CEPAS • Es una sustancia que adiciona a la fibra y es absorbida por ella pudiendo
• Gram (+)
consecutivamente atraer al colorante

• Gram
• (-)
es cualquier sustancia que forme compuestos insolubles con colorantes y
determine su fijación a las bacterias.

3. Cuáles son las fuentes más comunes de la tinción de Gram

• pH inadecuado

• tiempo de tinción incorrecto

• temperatura suficiente

• impureza de reactivos de tinción

4. En base a la pared celular Gram (+) y Gram (-) que acción ejerce el alcohol en ella

Es empleado para aclarar, deshidrata las paredes de los microorganismos gram

positivas, tratados con mordiente, y forma una barrera que la laca no puede atravesar.
En las células gram negativas, los lípidos de la pared (más abundantes que en las
células gram |positivas) se disuelven por este tratamiento, lo que permite el escape
del complejo de cristal violeta con yodo.
 BIBLIOGRAFÍA BÁSICA
• http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/SeminarioTinciones.htm

• http://www.revistaciencias.com/publicaciones/EElpZEVkykPMncqxmd.php

RESULTADOS

Gram (+) Gram(-) mezcla +,- mucosa oral

CONCLUSIONES DEL ESTUDIANTE

La tinción de gram es un método al que se necesita mucha paciencia, seguir al pie de la
letra que colorante sigue y muy importante el tiempo que se lleva en cada uno

ESTUDIANTE (S) GRUPO FECHA

Cynthia Alejandra Higareda Sandoval