Integrantes del grupo: Llorente, Lucía Parsons, Ágata Suarez, Tamara

Informe de laboratorio Nº1 INMUNODIFUSIÓN
Objetivo:
Detectar la formación de complejos inmunes constituidos cuando el antígeno y el anticuerpo difunden y se unen en un punto medio (punto de equivalencia) donde se observa una banda de precipitado.

Fundamento: Cuando un anitcuerpo bivalente se pone en contacto con un antígeno
polivalente soluble contra el cual es específico, se forman complejos Antígeno-Anticuerpo que precipitan dando lugar a una reacción visible. INMUNODIFUSIÓN EN GEL DE AGAROSA EN PLACAS DE PETRI

Materiales
.Placa de Petri limpia y desengrasada .Pipetas de plástico de 5 ml .Propipetas .Pipetas Pasteur .Tips .Frasco Elenmeyer .Cámara húmeda .Agar al 2% .Buffer Fosfato Salino (PBS 1 %) .Reactivos (sueros y antígenos) Muestras: Se utilizó suero puro bovino, y diluciones de 1/2, 1/4, 1/8, 1/16, 1/32 de este mismo y un antisuero bovino.

Metodología:
1) Preparación del Agar al 3 %: la solución de Agar se preparó sobre la base de 3 gramos de Agar en polvo cada 100 ml de PBS ( Buffer Fosfato Salino).Una vez preparado se lleva a horno microondas hasta que se licue completamente. 2) Preparación del gel la placa de Petri: se coloca sobre la placa5 ml de agar utilizando una pipeta, distribuyendo el mismo homogéneamente el volumen en la placa, dejando reposar hasta su completa solidificación. 1

1:16 . partiendo de la muestra de suero puro. para el presente trabajo se utilizan diluciones 1:2 . partiendo desde el punto de referencia marcado en la placa y en sentido horario. y el suero patrón.3) Perforación del Gel: se realiza según el modelo siguiente A: Patrón B: Dilución 1:2 C: Dilución 1:4 D: Dilución 1:8 E: Dilución 1:16 F: Dilución 1:32 G: Antisuero Bovino El modelo es utilizado a modo de plantilla para realizar la perforación del Gel. las cantidad de diluciones a realizar son acordes al número de perforaciones que posea el modelo seleccionado. 7) Lectura de los resultados: 2 . 4) Preparación de los Reactivos: se realiza una dilución seriada en base 2 del suero. sembrando por último en el orificio central 5 µl del antígeno. 1:32 . 5) Siembra de las muestras: antes de comenzar la siembra es conveniente realizar una marca en la placa a modo de referencia para poder identificar luego el número de dilución (ó muestra) que se encuentra en cada hoyo. extrayendo Agar por aspiración. 1:8 . usando como diluyente el PBS ( Buffer Fosfato Salino). 6) Incubación en Cámara Húmeda: la placa sembrada se lleva a incubación en cámara húmeda por un lapso de 48 horas.que se perfora usando a modo de sacabocados una pipeta Pasteur. 1:4 . por orificio.Se siembra con micropipeta 5 µl de cada dilución.

b) Realizar una dilución 1:2 a partir de un suero puro. Procedimiento Muestras: Colorante en representación del suero. con el fin de ser utilizado en distintas pruebas semi cuantitativas. efectuar cinco diluciones en base 2 (Volumen necesario: 3 ml). A partir de esta primera dilución. efectuar cinco diluciones en base 10 (Volumen necesario: 9 ml). a) b) 3 . A partir de esta dilución (1:2). Materiales necesarios:  Colorante (en representación del suero)  Agua destilada (en representación de solución salina o medio de cultivo)  Pipetas  Propipetas de tres vías con válvulas  Tubos  Gradillas  Vaso descartador Metodología: a) Realizar una dilución 1:10 a partir del suero puro.DILUCIONES Objetivo: Disminuir la concentración de un soluto en una solución.

Para realizar la técnica de diagnóstico de aglutinación debo realizar cinco diluciones seriadas en base 2. que reaccionara con el anticuerpo del paciente 3. Esquematice como se realizará la dilución. 4 .Cuestionario: 1.002 ml de conjugado y 2. 2. Tengo 2 ml de suero de un bovino sospechoso de estar infectado con Leptospira. La dilución de trabajo es 1:1500. ¿Cómo procedería para obtener el título de anticuerpos anti-toxoplasma en un suero felino. por inmunofluorescencia? Sabiendo que un felino infectado presenta un título mayor de 1:256. Defina el concepto de título.998 ml de diluyente. Titulo: es la inversa de la máxima dilución en que la muestra da positivo. Quiero preparar 3 ml ¿Cómo podría realizar esa dilución utilizando la menor cantidad de conjugado posible? Se debe utilizar 0. Sobre la impronta se coloca el suero de felino del cual se sospecha la presencia de anticuerpos específicos. Se preparan improntas de Ag en este caso de Toxoplasma gondii sobre un porta. Si la reacción es positiva habrá formación de complejos inmunes. Para la técnica de ELISA necesito realizar la dilución del anticuerpo conjugado con peroxidasa. Estos complejos se evidenciaran por medio de una Ig anti-felino marcada. El volumen final de cada dilución es de 200 microlitos por dilución.

Cuestionario 5 .