Analisis Instrumental ИиФерИх

ANALISIS INSTRUMENTAL
Instrumentos usados en análisis instrumental.
Las técnicas son de dos tipos:
• Ópticas
• Electroanaliticas.
Ópticas: absorción, fluorescencia molecular, IR, absorción y emisión atómica,
quimioluminiscentes.
El instrumento, cualquiera sea la técnica , consta generalmente de cinco
componentes:
• Fuente de energía radiante (FER)
• Selector de banda (SB)
• Cubeta (donde se coloca la muestra)
• Detector (registra la señal)
• Registrador
Consideraciones generales de cada dispositivo:
Fuente de energía radiante.
Para cualquier técnica la FER debe generar una radiación que sea lo
suficientemente potente para ser detectada y medible fácilmente. Además esa
FER debe ser estable y la potencia Po , potencia incidente, debe ser constante
durante un determinado tiempo. Es decir, durante el tiempo de duración del
análisis. Generalmente las FER están conectadas a una fuente reguladora de
potencia. Dentro de las FER hay de dos clases:
• Continuas
• De línea
Las FER continuas son aquellas que emiten radiación en forma continua en un
todas las longitudes de onda de la región espectral. Es decir son aquellas que
presentan un espectro de emisión que es una banda que va generalmente
desde la zona del UV (aproximadamente 190- 350 nm) hasta 800nm (visible). A
mayor longitud de onda esta el IR.
La emisión debe ser en un amplio rango de longitudes de onda. Suelen usarse
en técnicas que involucran moléculas como absorción, fluorescencia y
fosforescencia molecular.
Fuente de energía radiante continua usada en el UV
En esta región el equipo viene con lámparas de Hidrogeno, de Deuterio, estas
emiten radiación en la región del UV.
Conformación de estas lámparas.
Constan de un tubo de vidrio al vacío que en su interior tiene H
2
o D
2
a baja
presión que cuando se produce una descarga eléctrica los electrones de esa
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descarga colisionan con las moléculas del gas y provocan la excitación hacia
niveles energéticos superiores de los electrones del gas. Cuando esos
electrones vuelven a su estado fundamental lo hacen emitiendo radiación
continua en la zona del UV. Tienen espectro continuo en la zona del UV
Dentro de la zona del UV hay también lámparas de argon (Ar) , lámparas de
xenón (Xe), lámparas de mercurio a alta y a baja presión. Estas también se
usan en el UV pero son mas intensas que las anteriores.
Particularmente la de Xe se utiliza en fluorescencia molecular.
En la zona del visible se usa generalmente la lámpara de filamento de
tungsteno o wolframio, este tipo de lámparas son como las que de los faros de
auto. Es un tubo de vidrio al vacío con un filamento de tungsteno (wolframio)
adentro. Cuando se hace una descarga eléctrica circula corriente que genera
un calentamiento en el filamento de tungsteno y ese calentamiento provoca una
emisión de radiación en la zona del visible en la zona del IR cercano. Alcanzan
temperaturas de 3700K
Hoy en día estas lámparas tienen en su interior una cierta cantidad de algún
halógeno, generalmente I
2
gaseoso, con el objeto de aumentar la vida útil de la
lámparas, dado que las descargas pueden fundir o gastar el filamento. Esta
aumenta porque el I
2
al ponerse en contacto con el tungsteno en estado
gaseoso se une a este (I
2
W), y lo vuelve a unir al resto del filamento, por eso
duran muchísimo más.
Eso además hace que el máximo de emisión se desplace hacia la zona del
visible .
El IR se divide en tres regiones: cercano, medio y lejano.
• En el cercano se puede usar la lámpara de Tg (Tungsteno)
• En el medio y en el lejano las lámparas son de sólidos inertes que se
calientan a temperaturas entre 1500 y 2000 K.
Fuentes de línea
Las FER de línea se caracterizan porque emiten un número limitado de bandas
muy estrechas de radiación y cada una de esas bandas de radiación abarca un
intervalo muy pequeño de longitudes de onda. Se dice que emiten líneas, un
rango muy chiquito de longitudes de onda. En los gráficos se ven líneas
(bandas muy estrechas). Este tipo de fuente se utiliza en las técnicas que
involucran átomos (absorción atómica, en emisión atómica no se usa FER)
La mas usada es la lámpara de cátodo hueco, otra es la lámpara de descarga
sin electrodos.
LASER
Hay un tercer tipo de fuente, ni continúa ni de líneas, que es el láser. El láser es
una fuente de energía radiante muy intensa, que emite radiación en un ancho
de banda muy estrecho pero en forma continua. Son fuentes que presentan
una elevada resolución y suelen usarse mucho en la técnica Raman, absorción
molecular e IR
2
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Conformación de una fuente láser
Medio activo, componente principal de la fuente, puede ser de un cristal sólido
(generalmente rubí), un semiconductor (generalmente arseniato de galio),
colorantes orgánicos o esta formado de un gas, generalmente argon.
El tubo es bombardeado por una fuente externa que excita a los electrones
hacia niveles superiores, cuando vuelven hacia el estado fundamental emiten
energía. Los espejos reflejan la radiación emitida , generando cascadas de
electrones y esto hace que la intensidad de la radiación emitida sea mayor. El
haz que emerge de esa fuente es una radiación muy potente.
Cualquier tipo de las fuentes antes vistas forman parte del primer dispositivo de
un instrumento , según la técnica se usan diferentes lámparas.
Selector de banda
Dentro de los SB tenemos los filtros y los monocromadores
• Filtros: de absorción y de interferencia
• Monocromadores: los de redes y los de prismas
Función del SB: aislar un rango de longitudes de onda lo mas estrecho
posible, es decir que esa radiación que emerge (Po) tiene que ser lo mas
monocromática posible para que solamente emita un rango muy chiquito de
longitud de onda (ley de Lambert-Beer, el rango es λ + Δλ). La luz salida de la
FER es policromática, se la hace lo menos ancha posible.
Los instrumentos mas sencillos usan filtros
Ancho de banda efectivo: esta relacionado con la resolución (por ejemplo
50nm es mucho). Hoy en día algunos instrumentos tienen un ancho de banda
de 0,1 nm . Los filtros por lo general tienen anchos de banda relativamente
grandes, sobre todo los filtros de absorción. El ancho de banda efectivo da una
idea sobre la calidad del SB.
Hay dos clases de SB: filtros y monocromadores
Conformación de los filtros de absorción.
Son dos vidrios coloreados que tienen la finalidad de absorber la radiación y un
vidrio central, en un soporte plástico. La radiación que no fue seleccionada es
transmitida generando el ancho de banda seleccionado, generalmente se usa
en la región del visible. El ancho de banda de estos filtros va de 20 a 250 nm
Filtros de interferencia (posteriores): se usan tanto en la región del UV como
en la región del visible, en algunos casos en la región del IR y proporcionan
anchos de banda más estrechos que los anteriores. Tienen la característica de
generar un ancho de banda efectivo en función de la interferencia óptica.
Generalmente como material dieléctrico F
2
Ca o F
2
Mg
Una radiación incidente coincide con la radiación siguiente que incide en el
material dieléctrico, se suman, se ponen en fase y así sucesivamente de tal
manera que la emergente es estrecha y muy intensa. Interferencia óptica
constructiva. Las restantes radiaciones pasan, se pierden. Hoy en día son los
más usados.
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Monocromadores: se tienen los de redes y los de prisma. Tienen diferentes
resoluciones
Los instrumentos que tiene monocromadores permiten hacer un barrido
espectral, por lo tanto se puede hacer un curva espectrometrica.
Conformación de los monocromadores
Constan de una rendija de entrada por donde penetra un haz de radiación
policromatica, es la encargada de seleccionar. Además tiene dos espejos o
lentes colimadores que tienen la función de generar, producir, un haz de
radiación paralelo, tiene además un sistema dispersivo que puede ser una red
de reflexión o un prisma que tiene la función e dispersar a la radiación en sus
longitudes de onda individuales. Hoy en dia la mayoría usan redes de
difracción, los prismas son mas caros. Tiene tambien una ventana o rendija de
salida que selecciona o aisla el ancho de banda deseado.
Redes de Reflexion
El haz incide en el espejo colimador, que genera haces paralelos que inciden
en el sistema dispersivo (por ejemplo una red de reflexión. El Angulo de
incidencia es distinto al Angulo inicial) cuando la radiación incide en la red se
produce un fenómeno de difracción (fenómeno que genera la dispersión de la
radiación) y esa radiación va contra el segundo espejo y sale por la rendija de
salida, siendo lo mas estrecha posible. La cantidad de dientes de la red varia la
aliad, van desde 300 a 2500 dientes.
Prismas
En los instrumentos que tiene prisma también hay una rendija de entrada, una
lente colimadora , pero el fenómeno de dispersión ocurre por un proceso de
refracción (desvío de la dirección). Luego pasa por una lente focalizadora
(movil) hacia la ventana de salida. Hoy en día los instrumentos tienen redes. El
material del prisma varia según el uso, los prismas de cuarzo se usan en el UV
y de vidrio se usan en el visible, lo cual constituye una limitación.
Cubetas
Hay de muchos tipos y formas, según la región de trabajo (redondas,
cuadradas, de flujo, etc.)
En el UV generalmente las cubetas son de cuarzo o sílice fundido, en la región
del visible pueden ser de vidrio o plástico.
En el IR son de un vidrio especial o cubetas que tienen una ventana de NaCl
cristalino. Se seleccionan según región. Las cubetas no deben tener
imperfecciones y deben estar limpias.
Detectores
Dispositivos que tienen la función de detectar la energía radiante que les llegue
y traducirla en una señal que sea fácilmente medible, esta señal generalmente
es eléctrica. Deben tener ciertas características: deben ser estables e un
amplio intervalo de longitudes de onda, una elevada sensibilidad en la región
de trabajo, además deben presentar una elevada relación señal-ruido
(R=señal/ruido). La señal eléctrica que se genera en el detector debe ser
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proporcional a la potencia de radiación que llega al detector. Tienen que dar
una respuesta rápida.
Dentro de los detectores hay dos grupos
• Fotoeléctricos: de tipo A y B
• Térmicos
Fotoeléctricos.
Son los que se utilizan en el UV , en el visible y en el IR cercano
Térmicos: se respuesta se basa en el poder calorífico que brinda la radiación
(esto se vera mas adelante),se utilizan generalmente en la zona del IR.
Dentro de los fotoeléctricos se tienen dos tipos, en general los fotoeléctricos, el
A y el B se basan en que tiene una superficie que tiene la capacidad de
absorber la radiación electromagnetica, esta absorción genera la emisión de e-
y entonces da lugar a una fotocorriente
En el primer grupo, llamado A la absorción de energía radiante provoca la
emisión de electrones y genera una fotocorriente desde la banda de
conducción hasta la banda de valencia y eso también genera una fotocorriente.
Grupo A – tres tipos de detectores característicos.
• Celda fotovoltaicas
• Fototubos de vacío
• Tubos fotomultiplicadores
Grupo B
• Fotodiodos
• Fotodiodos dispuestos linealmente
Celda fotovoltaica: generalmente se utilizan en instrumentos muy sencillos
que se usan para mediciones directas (de campo), en la región del visible y
esta formado por un tubo de vidrio que en su interior tiene un electrodo de Cu,
sobre la superficie de ese electrodo se deposita un material semiconductor,
generalmente selenio, y a su vez se lo recubre con un baño de Ag o Au.
Cuando incide la radiación que proviene de la fuente de energía radiante, se
produce una promoción, una excitación de los electrones del material
semiconductor, se genera una corriente de e-, esta corriente es recolectada por
el electrodo y es la que se mide, es proporcional a la cantidad de radiación que
incidió.
Fototubos de vacío: de los equipos más viejos. Ver fotocopia. Es un tubo de
vidrio al que se le ha hecho vacío y que en su interior tiene un cátodo
semicilíndrico y un alambre que actúa como ánodo, ese cátodo esta recubierto
por un material fotosensible que cuando llega la radiación se genera una
emisión de electrones que se dirigen al catodo generando una foto corriente y
esa fotocorriente es proporcional a la radiación incidente.
Esa fotocorriente es muy débil, estos instrumentos necesitan tener un
amplificador.
Tubos fotomultiplicadores: también se los llama PMT. Están formados por un
tubo de vidrio al vacío que contiene un cátodo recubierto con un material
fotosensible y un ánodo. La diferencia con el tubo al vacío es que entre el
ánodo y el cátodo hay un conjunto de 9 o 10 plaquitas recubiertas por un
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material fotosensible que se denominan dinodos que tienen la función de emitir
o amplificar la emisión de electrones. Esos dinodos están colocados de manera
tal que uno presenta potenciales menos negativos que el que precede, lo cual
intensifica la señal haciendo innecesario el uso de amplificadores.
Grupos B
Los otros dos tipos de detectores se basan en que cuando absorben la
radiación electromagnética provocan la promoción de electrones de la capa de
conducción a la banda de valencia, generando huecos positivos y e- que dan
lugar a una fotocorriente.
Fotodiodos: están formados por unos dispositivos que esta recubierto por un
material semiconductor. Este dispositivo esta colocado sobre una placa de
vidrio o de cuarzo y todo el conjunto esta dentro de un recipiente al vacío.
Generalmente como el material semiconductor se suele utilizar silicio o
germanio , cualquiera de los dos tienen cuatro electrones en la capa de
valencia , quiere decir que cuando se van a fabricar el detector , el fotodiodo,
colocan ese material semiconductor y a su vez le agregan como impurezas en
algunos casos Galio y en otros casos Arsénico, con el objeto de aumentar la
capacidad conductora del material. Cuando se le agrega (dopaje) As, estamos
frente a un semiconductor tipo n, cuando se le agrega Galio es de tipo p.
Este tipo de material semiconductor tiene la característica de que cuando incide
radiación electromagnética provoca la promoción de estos electrones que
adquieren la energía suficiente como para romper el enlace que los mantiene
en una estructura rígida y pasan a la banda de conducción, se generan huecos
positivos y negativos por aumento de temperatura. La respuesta es muy rápida
,más que los anteriores (nanosegundos). En algunos casos se requiere
amplificador.
Fotodiodos dispuestos linealmente: consiste en una serie de fotodiodos tipo
n-p (200- 250 hasta 3000-3500 fotodiodos). Este tipo de detector se utiliza en
instrumentos que se llaman “arreglo de diodos”. Con este tipo de detector se
puede hacer un barrido espectral muy rápidamente , en aproximadamente 0, 1
segundos de distintas longitudes de onda. Este tipo de instrumentos, por tener
este tipo de detector , no usan SB de tipo monocromadores, sino que tiene
espejos como sistema dispersivo. Es el único instrumento que la radicación
policromatica incide sobre la muestra.
Registrador
Es uno dispositivo que decodifica la señal que llega y permite su lectura,
pueden ser analógicos, digitales, incorporados o no.
Esquemas
Existen diferentes tipos de instrumentos:
I-Simple haz
II-doble haz (b) en el espacio
III doble haz temporal (c)
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Simple Haz:
Es el mas sencillo. La conformación esa una FER, SB, Cubeta, Detector,
Registrador. Se dice simple haz porque de la FER, llega a la muestra
solamente un haz de radiación.
Este tipo de instrumento se calibra con blanco (de reactivo o agua destilada) El
0%T es automático, luego se pone la cubeta y se lleva a 100%T.
No conviene usarlo para hacer barrido espectral porque no hay forma de
compensar las fluctuaciones de la FER. Cuando se calibra habría que hacerlo
con el blanco para cada longitud de onda, es poco practico.
Son instrumentos sencillos, se usan para mediciones puntuales, no para hacer
curva espectrometricas
Doble Haz:
Se caracterizan en que cuando la radiación emergente del SB se divide en dos
haces, de tal manera que una parte de la radiación pasa a través de una
cubeta de referencia y la otra parte a la través de la muestra. Hay dos cubetas
(una de referencia donde va el blanco y otra con la muestra)
Hay dos tipos
Doble haz en el espacio: la radiación se divide en dos y de manera
simultanea atraviesan la muestra y la cubeta de referencia, cada una llega a su
detector, cuyas señales convergen a un amplificador del tal manera que se
compensan para formar una sola señal que llega al registrador.
Doble haz temporal: a la salida de la FER hay una espejo rotatorio que hace
que la radiación pase a través de la cubeta de referencia y de la muestra
alternativamente, las señales van llegan a un único detector, se amplifica y
registra. La cuña óptica disminuye la potencia de la radiación que pasa través
de la cubeta de referencia para tener una intensidad semejante a la que
proviene de la muestra. Sino existiese la cuña, la radiación de la FER que pasa
por la cubeta no perdería potencia. En cambio si disminuye la potencia e la
muestra entonces la cuña achica la diferencia entre las intensidades de las
señales.
Ventajas del instrumento de doble haz:
• Las posibles fluctuaciones generadas por el ruido del instrumento
pueden ser compensadas ya que existen dos haces. Estas fluctuaciones
se deben mayoritariamente a cambios de voltaje en la FER
• Permite hacer un barrido espectral
Arreglo de diodos
Hay un tercer grupo de instrumentos llamados instrumento multicanal o arreglo
de diodos.
Son instrumentos que tienen una conformación óptica muy sencilla pero tienen
la característica de que pueden o permiten detectar en forma simultanea
lectura en toda la región del espectro.
Registra lecturas en todas las longitudes de onda, permitiendo obtener mucha
información rápidamente.
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Esta formad por una FER seguida por la cubeta de la muestra, luego un SB fijo
y el detector que en este caso son diodos supuestos linealmente (muchos
diodos n-p soportados por un chip)
La radiación que incide sobre la muestra es policromatica, una vez que la
atraviesa el SB dispersa la radiación en sus diferentes longitudes de onda que
llegan a los diodos. Es tan rápido el proceso que la radiación policromatica no
alcanza a destruir la muestra (en caso de que la muestra sea plausible de ser
destruida por la radiación).
Procesos luminiscentes
• Fluorescencia molecular
• Fosforescencia molecular
• Quimioluminiscencia
Son técnicas de emisión. Las primeras dos también se conocen como tecnicas
fotoluminiscentes. Son técnicas donde las moléculas son excitadas por la
acción de una fuente de energía radiante.
En la quimiluminicencia las moléculas son excitadas a través de una reacción
química.
En ambos casos la excitación genera la señal analitica.
Son tecnicas mas selectivas, ya que no todas las moleculas tiene propiedades
luminiscentes.
Fundamento de la tecnica
Al aplicar radiación se excita a las moléculas de tal forma que los electrones
saltan a estados de energía superiores
Cuando una molécula es excitada absorbe energía, que le permite a los
electrones absorber energía. Los electrones tratan siempre de deshacerse de
ese exceso de energía volviendo al estado fundamental. Esta energía en
exceso se puede perder en diferentes procesos:
• Radiantes: se pierden o absorben en forma de foton , hν. Es lo que se
mide
• No radiante: generalmente se da por pérdida, transferencia o disipación
de calor al medio
Procesos no radiantes
Relajación vibracional. Este proceso que se debe a choques entre moléculas
excitadas y el solvente, ocurre entre estados vibracionales de un mismo nivel
electrónico.
Conversión interna: es un proceso intramolecular, ocurre cuando dos niveles
electrónicos están muy próximos y generan un solapamiento de los niveles
vibracionales, es decir, vibran juntos y se va perdiendo parte de esa energía
hasta llegar a un nivel menor de energía
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Pre-disociacion: se debe a que la energía involucrada en el proceso de
conversión interna puede, en algunos casos, provocar una predisociación de la
molecular. Romper algún enlace y entonces el analito pasa a ser otro
compuesto.
Disociacion: ocurre cuando la energía es muy alta y rompe los enlaces de la
molecula, con lo cual no tiene lugar el proceso de absorción.
Estos procesos ocurren muy rápido (de 10
-5
a 10
-9
segundos)
La longitud de onda aplicada en estas tecnicas, que es la que produce la
absorción depende de los factores anteriores.
A longitud de onda bajas (UV) puede ocurrir que las moléculas sufran un
proceso de disociación molecular. Se rompen enlaces y esa molécula original
ya no es la misma.
Fluorescencia molecular
En caso de producirse relajación vibracional y conversión interna, una vez que
todos los electrones están en el nivel vibracional mas bajo del nivel electrónico
excitado, vuelven a su estado fundamental emitiendo energía (fotones) .
A este proceso radiante se lo llama fluorescencia molecular. Se puede definir
fluorescencia molecular como la diferencia de energía desde el nivel vibracional
mas bajo del estado excitado hacia cualquier nivel vibracional del estado
fundamental.
La molecula se excita en el UV y emite en el visible, de la ecuación E:hν/λ se
deduce que a menor longitud de onda mayor energia y viceversa. Entonces si
la molecula absorbe en el UV y emite en el visible, es porque hay perdida de
energia por estos procesos no radiantes.
La fluorescencia es un proceso también muy rápido (10
-6
a 10
-10
segundos)
Una de las características de la fluorescencia molecular, desde el punto de
vista del proceso, es que la fluorescencia ocurre entre niveles electrónicos de
igual multiplicidad (singulete, por el principio de Pauli, electrones con spines
apareados).
Fosforescencia molecular
Existe otro proceso no radiante que se llama cruce entre sistemas
Cruce entre sistemas: este proceso no radiante suele darse cuando por algún
motivo (por ejemplo un solapamiento entre diferentes niveles vibracionales de
estados electrónicos excitados singulete-triplete) los electrones pasan de un
estado excitado , singulete, a un estado excitado, triplete, que se forma con
energía transitoria, inestable, donde los electrones tienen los spines
desapareados, no siguen el principio de Pauli.
Pero aun en este estado triplete puede haber un exceso de energía que se
pierde por relajación vibracional de manera que los electrones queden en el
nivel vibracional mas bajo de ese estado triplete y de allí vuelvan al
fundamental emitiendo energía.
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Este proceso se denomina fosforescencia y en general toma un poco mas de
tiempo que la fluorescencia (de 10
-4
a 10 segundos)
La principal diferencia con la fluorescencia es que la fosforescencia ocurre
entre niveles electrónicos de diferente multiplicidad (triplete)
Conversion externa
Puede darse otro proceso no radiante que es el proceso de conversión externa.
Ese proceso involucra la transferencia de energía entre las moléculas que son
excitadas y las moléculas del solvente. Ese proceso provoca una disminución
en la intensidad de fluorescencia y se conoce con el nombre de QUENCHING
La disminución en la intesidad tambien puede deberse a la disociación y
predisociación.
Ambas técnicas requieren una longitud de onda de excitación y necesitan una
longitud de onda de emisión.
Es decir, se necesitan dos selectores de banda.. Las longitudes de onda tienen
la relacion λ
exciatacion
< λ
emision
, es decir, que la longitud de onda de emisión sea
mayor que la de absorción.
ν
λ
Λ ·
c(luz)
E=h h ,a mayor longitud de onda menor ΔE
Teoricamente toda molecula que absorbe energia puede ser luminiscente, para
estimar o determinar esto existe un parametro “rendimiento cuantico” que esta
presente en ambas técnicas
f
f
f CES IE CI PD D
K
Φ =
K -K +K +K +K +K
Este parámetro nos da una idea cualitativa para poder interpretar como pueden
influir factores estructurales y el entorno químico en la intensidad de
fluorescencia o fosforescencia. Este parámetro relaciona las distintas
velocidades relativas de los distintos procesos radiantes y no radiantes.
• Kf= velocidad relativa de fluorescencia
• Krv: relajación vibracional
• Kces= cruce entre sistemas
• Kce=conversión externa
• Kci=conversión interna
• Kpd= pre disociación
• Kd= disociación
Una molecular tiene características de ser fluorescente si Kces es mínimo o
nula y Kci también, Kpd y Kd deben ser nulas. Φf es un valor entre 0 y 1. Esta
en manuales, handbooks, etc.
Esta relacionada con medio y estructura. Kpd y Kd están relacionadas con la
estructura mientras que Ices y Kci dependen del medio (solvente, pH, etc.). Por
eso se puede estimar las fluorescencias (si son fuertes o no, cualitativamente)
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• Φ
f
cercanos a 1 = mucha fluorescencia o fosforescencia
• Φ
f
cercanos a 0 = poca fluorescencia o fosforescencia.
La emisión siempre ocurre en la región del visible
Factores que afectan las intensidades
Tipo de transiciones
Uno de los factores fundamentales para que una molécula sea fluor o
fosforescente es el tipo de transiciones que presenta. Generalmente las
molecular que presentan fluorescencia son moléculas que presentan
transiciones π→π* y las que presentan fosforescencia son moléculas con
transiciones n→π* .
Como a veces esto es impredecible (si tiene o no características de fosfo o
fluorescente) se hacen siempre determinadas consideraciones. Se sabe que
generalmente para las moléculas que tengan este tipo de transiciones se parte
de que la energía de excitación ocurre a longitudes de onda partir de 250nm
hasta aproximadamente 380nm. Es decir en la región del UV. A menores
longitudes de onda, en el UV lejano, la energía es tan alta que puede darse el
proceso de la disociación de la molécula, en este caso son moléculas que
tienen transferencia σ→σ*
Es importante conocer la estructura de las moléculas. Determinadas moléculas
como por ejemplo los hidrocarburos no aromáticos, con dobles enlaces, que
tiene trancisiones π→π* , generalmente tienen características fluorescentes.
Los hidrocarburos aromáticos, por ejemplo el benceno, por si solo tiene
características fluorescentes.
Susituyentes
La presencia de sustituyentes pueden variar la intensidad de fluorescencia,
fundamentalmente cuando los sustituyentes son halógenos. En los aromáticos
halogenados se produce conversión externa y eso disminuye la intensidad.
También hay moléculas que tiene grupos C=O o algún heteroatomo como N, S
donde predominan las transposiciones n →π* y esto hace que la molécula
tenga características fosforescentes.
Rigidez
Es importante la estructura en el sentido de la rigidez. Entre fluoreno y bifenilo,
por ejemplo, el grupo –CH2- en el fluoreno le brinda mayor rigidez haciendo
que tenga mayor eficiencia que aquellas que no son rígidas (se mueven). Si se
mueven están favorecidos los choques entre moléculas y por lo tanto la
conversión interna, lo cual disminuye la intensidad.
El entorno químico también es importante
Temperatura. Debe ser óptima de tal manera que se eviten choques entre
moléculas y se vean favorecidas la conversión externa, ya que esto disminuye
la intensidad de fluorescencia
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Solvente: debe ser el adecuado: si se usa un solvente muy viscoso las
colisiones disminuyen lo que puede favorecer la fluorescencia. También es
importante conocer la polaridad del solvente, esta puede provocar una re
orientación de las moléculas del solvente alrededor de las moléculas que uno
quiera excitar y esto puede provocar elevación de la señal de flor o
fosforescencia
pH: siempre es importante controlarlo. Hay especies que son fluorescentes a
cierto pH y a otro no.
O
2
y atomos pesados
Otro factor a tener en cuanta es la presencia de átomos pesados.
Se debe elegir el solvente adecuado para evitar que estos átomos pesados
favorezca la conversión externa y disminuya la fluorescencia (por ejemplo
cuando se usa como solvente bromuro de isopropilo).
Otro factor es la presencia de O
2
disuelto, en algunos casos la presencia de O
2
puede generar una oxidación de las moléculas y esto hace que cambie la
estructura de las moléculas y disminuya la intensidad de fluorescencia
Todas estas variables y la estructura molecular se deben conocer y tener en
cuenta al hacer una determinación cuantitativa.
INSTRUMENTACION EN TECNICAS FLUORESCENTE Y
FOSFORESCENTES.
El fluorimetro es un instrumento sencillo, de simple haz. Tiene una FER , un
dispositivo (selector de banda), un lugar donde se pone la muestra (cubeta) y a
90º respecto de la radiación incidente tiene colocado otro selector de banda y
luego viene el detector
Hay dos selectores de banda porque se necesita una longitud de onda de
excitación y de emisión
La mayoría de los equipos que se utilizan en el laboratorio son fluorimetros , es
decir que tienen como selectores de banda filtros, o en algunos casos
monocromadores, pero uno fija las longitudes de onda con las que va a trabajar
(λex y λem)
Hay otros instrumentos que tienen monocromadores de red, se llaman
espectrofluorimetros y permiten hacer espectros (barridos de longitudes de
onda). Uno puede obtener con este instrumento λex y λem, es decir se hacen
dos curvas espectrometricas.
FER
Siempre hay una FER que provoca la excitación de las moléculas. Las FER
que se utilizan en la técnica de fluorescencia y fosforescencia molecular son
fuentes continuas. Son aquellas que emiten en un amplio rango de longitudes
de onda, el espectro que se obtiene es una banda.
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En las lámparas usadas en estas técnicas la potencia que emiten tiene que ser
de mayor intensidad que en absorción molecular.
Dentro de las FER mas comunes utilizadas están: lámparas de Xe, lámpara de
Hg a baja presión y la lámpara de Hg a alta presión. Cualquiera de las tres son
tubos de vidrio donde adentro hay gas a baja presion (salvo de la Hg a alta
presion) y tienen filamentos de los distintos componentes. Cuando se genera la
descarga electrica emiten radiación. La lampara de Hg a alta presion emite
lineas intensas de radiación en forma continua.
En los primeros fluorimetros se utilizaba la lámpara de Hg a baja presión, esta
tenia la característica que emitía a longitudes de onda definidas, si bien era
continúa tenia determinadas longitud de onda de a las que emitía con mayo
intensidad, esto hacia que esas lámparas fueran inestables. Hoy en día la
mayoría de los equipos tiene lámpara de Xe. Este es estable, por lo que el
espectro es mas continúo y mas uniforme. Hay algunas que combinan la de Xe
y la de alta presión. Los equipos mas caros usan láser como FER
Selector de banda
Los selectores de banda que puede tener los fluorimetros son filtro de
interferencia, el espectrofluorimetro tiene monocromadores de red.
Cubetas
Las cubetas son de cuarzo o de vidrio, pero la característica que tienen que
presentar es que todas las caras sean transparentes (a diferencia de las de
absorción molecular).Esto se debe a que lo que vamos a medir es un señal de
fluorescencia y esta se emite en toda dirección y sentido.
Detectores
Los detectores pueden ser de cualquiera de los vistos de tipo fotoelectrico,
PMT, diodos dispuestos linealmente, etc. El detector esta colocado a 90º
respecto de la radiación incidente porque solo se necesita la señal de
fluorescencia, no la relación P/Po. Colocando el detector en cualquier otro
ángulo se asegura que lo que llega al detector es solo la señal de fluorescencia
y no hay perdida por absorción. Se necesita otro selector de banda para que al
detector solo llegue la λem.
Instrumento en fosforescencia
En fosforescencia molecular el instrumento tiene muy pocas diferencias.
La FER también es continua , generalmente lámpara de Xe. Con dos
diferencias
Que esa lámpara actúa en forma de flash, va irradiando la muestra en forma
alternada. Esto es porque la fosforescencia tarda un poco mas en ocurrir que la
fluorescencia. De tal manera que después de un determinado tiempo uno pude
medir la intensidad de fosforescencia
Como selectores de banda tienen exactamente los mismo y las cubetas
también son las mismas.
Los detectores también son los mismos
13
Analisis Instrumental ИиФерИх
Los equipos de fosforescencia vienen provisto de un dispositivo que permite
trabajar a temperaturas muy bajas (T de N
2
liquido, se aplica burbujeando).
Esto es para evitar que en algunos casos la señal de fluorescencia sufra alguna
disminución o degradación.
La fosforescencia es muy sensible y selectiva.
En otro casos se trabaja a T ambiente para hacer determinadas
fosforescencias , pero en este caso se debe trabajar con medeos organizados.
Suele utilizarse como medeos organizados las α y β dextrinas.
Efecto de la concentración en la intensidad de fluorescencia
Relación entre la señal de fluorescencia con respecto a la concentración.
Cualquiera de la tres técnicas son sensibles selectivas y permiten o tienen
limites de detección muy bajos , es decir que podemos determinar pequeñas
cantidades de muestras.
La intensidad de fluorescencia es proporcional a la intensidad de radiación
incidente. Podemos plantear.
o
F=K´(P -P)
Donde K es una constante que depende de la eficiencia cuantica de la
molecula.
Si recordamos la ley de Beer:
-εbc
o o
P P
A=-log ® =10
P P
| `

. ,
Si reemplazo y saco factor común Po y luego desarrollando la serie de Taylor:
( ) ( )
-εbc
o
2 3
o
F=K´P (1-10 )
2.303εbc 2.303εbc
2.303εbc
F=K´P - +
1! 2! 3!
]
]
]
]
Si la A es menor que 0,05 (soluciones diluidas) los términos elevados al
cuadrado y al cubo y demás se hacen despreciables. Si eso ocurre podemos
decir que:
o
K
F=K´P 2,303εbc=Kc
1 442 4 43
La fluorescencia molécular es mas sensible que la absorción molecular por lo
que se pueden medir valores muy chicos de señales dado que a bajas
concentraciones la relación es lineal. Esto ocurre cuando trabajamos con
soluciones diluidas y permite hacer determinaciones cuantitativas.
Esta tecnica es mas sensible que la absorción molecular ya que se trabaja en
rangos de A muy chicos, lo que conduce a pendientes mas elevadas.
La fluorescencia molecular se aplica para compuestos organicos, inorgánicos
(en este caso se los debe quelar primero, solos no son luminiscentes),
14
Analisis Instrumental ИиФерИх
muestras ambientales, etc. La fosforescencia tiene aplicaciones similares, pero
es mas seleciva aun que la fluorescencia.
PMQ para una tecnica luminiscente:
1) Fijar las condiciones operacionales
Seleccionar mediante una curva espectrometrica las longitudes de onda de
excitación y emisión y calibrado: el instrumento se calibra a 0 intensidad con el
blanco de reactivo y al 100 con el testigo de máxima concentración, la curva
queda entonces como Intensidad vs concentración.
2) Preparación y medicion de testigos y muestra
3) Procesamiento por minimos cuadrados
4) Expresión del resultado como intervalo de confianza, 95%
x0
C = X ± tS porque es una curva de calibrado g.l = n-2 →
Quimioluminiscencia (reacción química)
Es una técnica muy selectiva, muy sensible y tiene la ventaja de que es una
técnica simple. Ocurre cuando una reacción química genera una especie, esa
especie esta excitada y cuando vuelve a su estado fundamental lo hace
emitiendo radiación. Esa radiación puede ser transmitida o transportada a otra
especie que luego emite radiación.
Se la define como emision de radiación electromagnética generada a traves de
una reaccion quimica, la emision ocurre en el visible y en el IR
Puede ser directa o indirecta
Directa: un precurso reacciona con un oxidante fuerte, el precurso genera un
producto transitorio excitado p->p*, luego vuelve emitiendo hv
Indirecta: otro camino, mas usado, es en forma indirecta. El precursor mas el
oxidante dan el producto electronico excitado, pero este no alcanza para emitir,
se lo ayuda agregando un fluoroforo que recibe la energia del producto
intermedio y cuando vuelve al fundamental emite fotones.
A + B C
C* C + hν P P* P* P + hν
÷÷→
←÷
÷÷→ ÷÷→ ÷÷→

←÷÷ ←÷÷ ←÷÷
Son dos caminos para legar a la emision, reaccion en medio adecuado (con
oxidante fuerte y catalizador) o transferencia d energia
A +B reaccionan, me dan una especie excitada (los electrones de C* están en
un nivel excitado) cuando vuelven lo hacen emitiendo radiación
Hν puede ser transferida a otra especie (P) provocar la excitación y cuando
vuelve al estado inicial lo hace emitiendo.
Luminometro
Solo consiste en tener un recipiente donde .. Se produce la reacción y se mide
directamente la señal que emite. Se necesita un recipiente donde se coloca la
muestra y un detector (solo detectar emisión de radiación que se genera).
Generalmente es un PMT
15
Analisis Instrumental ИиФерИх
Lo que hay que tener en cuenta es que la reacción ocurre muy rápidamente y
hay que medir en el momento que se logro la máxima intensidad de
quimioluminiscencia. Uno tiene que buscar el TM, porque cuando se va a hacer
una curva de calibrado, si se toma el tiempo incorrecto la intesidad es menor y
la curva ya no es tan buena. El tiempo es un parámetro muy importante (tiempo
donde se produce la máxima señal). Se debe realizar previamente un grafico
de señal función del tiempo, eso hace a la sensibilidad del metodo.
Condiciones operacionales
Se debe trabajar con soluciones testigos. Hay que controlar las variables
experimentales u operacionales . Hay determinados componentes o reactivos
que tienen características luminiscentes (siempre se usan), tiene la
característica de provocar componentes luminiscentes. El que más se usa es
luminol (a) y luciferina , este en medio alcalino en presencia de O
2
, tiene la
característica de formar un componente que es el 3-aminoftlalato y emitir
radiación característica a 420-425 nm. Esta intensidad de radiación a esta
longitud de onda se ve modificada por la presencia de algunos metales , por
ejemplo Cu, Fe, V, Co, ya que disminuyen la intensidad de la señal. Uno puede
determinar pequeñas cantidades de metales con estas técnicas.
Para hacer la determinación cuantitativa , se preparan testigos con distintas
concentraciones se hace la curva de calibrado y se da un resultado como
intervalo de confianza,
Con cualquiera de las tres técnicas se pueden hacer determinación de
compuestos orgánicos, inorgánicos, en pequeñas cantidades ya que son muy
sensibles y selectivas
Espectroscopia atómica
Se basa en la absorción o emisión de energi radiante por parte de átomos.
Esos átomos generan absorción o emisión que da origen a espectros de
bandas estrechas, que son aproximadamente de 10
-5
a 10
-2
nanómetros.
El λ+Δλ es mucho mas chico que en emision o absorción molecular
Esto es porque se ven involucrados los niveles electrónicos (ni lo rotacionales
ni los vibracionales). Los espectros son más sencillos. El ensanchamiento que
se ve puede deberse a tres fenómenos o procesos
• Efecto de incertidumbre
• Efecto por presión
• Efecto “ensanchamiento doppler”
Efecto de incertidumbre o ensanchamiento natural: esta relacionado con el
tiempo que tardan los electrones cuando pasan del estado fundamental al
estado excitado y volver al estado fundamental, en un tiempo muy limitado. Al
volver se provoca el ensanchamiento
Efecto por presión (efecto Lorentz): se debe a choques que se generan
entre las especies que absorben energía o emiten y los otros iones o atomos
presentes en el medio. Eso provoca una disipación o cambios en lo niveles
16
Analisis Instrumental ИиФерИх
energéticos y como consecuencia trae que haya una dispersión con respecto a
la longitud de onda de absorción.
Efecto doppler: ocurre cuando usamos como atomizador a la llama. Los
átomos de la especie en estudio por efecto térmico chocan debido al
movimiento en el interior de la llamada provocan el ensanchamiento en la
banda

Transformación del analito en átomos.
Se usan atomizadores, hay de dos tipos:
{
¹
¹
'
¹
¹
ICP=plasma de acomplamiento inducido
Atomizadores Chispa elelctrica
Llama
Discretos Electrotermicos
Atomizadores continúos: Son aquellos donde la muestra se introduce en
forma de solución y se convierte en una niebla de gotitas muy chiquitas
mediante un nebulizador que luego es transportado por un gas hacia la zona
donde se produce la atomización. En cambio en los atomizadores discretos se
coloca en su interior un determinado volumen (cantidad de muestra) y allí se
produce la atomización de la especie.
Llama: se puede utilizar tanto en emisión como en absorción atómica. Una
llama esta compuesta por una mezcla de un combustible y un comburente
(mezcla C/C).
Es importante conocer la temperatura a la cual toda la muestra entra en estado
atómico gaseoso.
Uno de los parámetros fundamentales es la temperatura
Zonas de la llama
Zona de combustión primaria: es el cono interno es la zona donde recién
comienza a generarse y producirse las reacciones de combustión entre el
combustible y el oxidante. Son reacciones rápidas que no alcanzan a llegar al
equilibrio
En esta zona todavía no se alcanza la temperatura óptima
Zona de combustión intermedia: en esta zona las reacciones de combustión
están en equilibrio termodinámico, la temperatura deseada se logra y es
constante y homogénea, se logra la misma temperatura. Es la zona de trabajo
En la tercera zona: zona secundaria, es la externa. La más fría, es la zona que
esta en contacto con la atmósfera, difusa. Pueden ocurrir reacciones
secundarias, no conviene trabajar allí.
Para seleccionar la T optima se debe tener en cuenta que la mezcla C/C
genera un fondo de llamada
Otros factores de dependencia además de la mezcla C/C
• La velocidad con que fluyen los gases para tomar la llama
• De la relación molar C/C
17
Analisis Instrumental ИиФерИх
• Del diseño del quemador
• De la altura de la llama
También es importante la velocidad de ingreso de la muestra o de los testigos a
la llama
Proceso de atomizacion
Transporte de la muestra: en solución, es aspirada a través de un capilar y
transportada a traves de un tubo plastico de diametro pequeños hacia el interior
del nebulizador. La velocidad con que ingresa la muestra y los testigos debe
mantenerse siempre igual y debe ser reproducible (preparados de igual
manera). Una vez que llegan al nebulizador este transforma la solución en finas
gotas (spray), de tamaño homogéneo muy chiquitas, de tal manera que antes
de que llegan a la llama, el propio nebulizador, a traves del spoiler, es el
encargado de desechar aquellas gotas que no son homogéneas, las de mayor
tamaño. Una vez que el spray homogeneo llega a la llama (optima) ocurren tres
procesos.
1) Evaporación del solvente ocurre cuando el aerosol llega a la llama, se
evapora el solvente y quedan las partículas de la sal. Depende del tamaño de
gotas, velocidad de ingreso, tiempo de contacto con la llama y tipo de solvente.
Si estas condiciones no son buenas, la muestra estaría contaminada
2) Volatilización: las partículas sólidas pasan al estado de vapor y una vez
que ocurrió esta etapa ocurre la etapa final. Esta etapa depende de la
capacidad de volatilizacion de la muestra y de la temperatura.
3)Atomización: la sal se disocia y se forman los átomos neutros al estado
gaseoso, quedando disponibles para absorber o emitir energia.
Llama: puede usarse tanto en emision como en absorción atomica
Como atomizador la llama es mas económica, pero debe tenerse cuidado con
la temperatura de a llama, que sea optima y suficiente para lograr la
atomización completa de la muestra y además debe tenerse cuidado que
cuando se selecciona la mezcla C/C para trabajar el espectro de emisión de
esa muestra no interfiera en la señal del analito.
ICP= plasma de acoplamiento inducido
Este atomizador se utiliza en la técnica de emisión atómica, no en absorción
atomica
Plasma: un gas calentado y parcialmente ionizado que tiene la característica
de conducción la electricidad. Generalmente como plasma se utiliza Argon
Antorcha: esta formada por un tubo de cuarzo, dentro de otro, rodeados por
una bobina de inducción que esta conectada a un generador de radio
frecuencia. Por el interior de esos tubos circula un gas inerte, generalmente
Argon
Cuando se genera una descarga eléctrica que proviene de la bobina de
inducción ese argon se ioniza, generando en el medio iones argon y una
corriente eléctrica de electrones que genera el plasma, logrando un aumento
18
Analisis Instrumental ИиФерИх
de temperatura del gas que llega a alcanzar en el extremo superior de la
antorcha entre 9000 y 10000 grados Kelvin. Es ahí donde se logra la
atomización de la muestra. Es una llama muy luminosa pero sin combustión.
Una de las ventajas frente a la llama es que se logra mayor temperatura sin
que haya combustión. La temperatura se controla, se la mantiene estable y
constante, haciendo fluir Argon en forma tangencial (contracorriente,
refigerando el tubo). No hay espectro de fondo porque no hay combustión
Introducccion de la muestra.
El equipo tiene una entrada para el capilar donde se introduce la muestra, esta
llega al nebulizador, se forma el spray y de allí es introducida por la parte
inferior de la antorcha de plasma hacia el cono superior que es donde se
producen los tres procesos ya vistos.
Condiciones operacionales
Una de las variables que uno debe controlar es como generar ese plasma,
regular la generacion de la radiofrecuencia. Si es muy baja o no es la optima el
plasma que se genera es un plasma con forma de lagrima y hay perdida de
muestra, no llega toda la zona de combustión maxima
La forma adecuada del plasma es como lo indica el dibujo B donde esa
antorcha tiene como una inflexión de tal manera que no deja que se escapen
las gotitas. De esta manera llega mayor cantidad de muestra.
Ventajas del ICP frente a la llama:
• Temperatura: es muchísimo mayor , el tiempo de contacto entre la
muestra y la antorcha es menor, lo que optimiza los procesos de
evaporación, volatilizacion y atomizacion
• Los limites de detección son mucho mas bajos que si se utiliza la llama.
• Otra ventaja es que con el ICP como atomizador hay una elevada
densidad electrónica en el medio y esa densidad electrónica evita que
existan interferencias debido a especies que se ionizan fácilmente,
• Otra ventaja es que el efecto matriz o las interferencias generadas por el
efecto matriz es menor que utilizando la llama y eso se debe a que
estamos en un medio químicamente inerte que favorece el tiempo de
vida de los átomos neutros en estado gaseoso donde no hay
combustión.
Atomizadores discretos-> electrotérmicos-> horno de grafito
Se utiliza en absorción atómica.
Se les llama así porque se coloca determinado volumen o cantidad de muestra,
hasta que se logra la atomizacion completa.
Horno de grafito: Se utiliza en absorción atomica, no en emisión.
Es un cilindro de grafito recubierto por un material piroelectrico. Esta abierto en
los dos extremos y tiene un orificio en la parte frontal por donde se introduce la
muestra. La longitud es aproximadamente de 5 cms y tiene n diámetro interno
de 3 a 8 mm.
Ese cilindro abierto permite que este conectado a un par de conectores
eléctricos y alrededor del tubo circula un gas inerte (Argon) que tiene la función
de desalojar vapores que pueden quedar en el interior del tubo. Dentro del
cilindro se encuentra una plataforma llamada “plataforma de l´vov” , también
19
Analisis Instrumental ИиФерИх
recubierta del material piroelectrico y sobre ella se deposita la muestra de tal
manera que queda toda concentrada sobre esa plataforma.
Como ese horno esta conectado a esos contactos eléctricos la muestra sufre
un proceso de atomización debido a un calentamiento provocado por
resistencias eléctricas (electrotérmico).
Dentro de ese horno ocurren los tres procesos ya vistos (evaporación del
solvente, volatilización o calcinación y atomización)
La evaporación del solvente ocurre a temperaturas alrededor de los 100ºC,
luego hay una etapa de calcinación que comprende entre 350 y 1500ºC. en la
ultima fase, la atomización, las temperaturas son mayores , de 1500 hasta
3000ºC, donde se logra la atomización completa de la muestra.
Este ciclo se va programando según el tipo de muestra que se tiene. Hoy en
día los equipos tardan entre 3 o 4 segundos en lograr la atomización completa.
Ventajas
• Trabajar con hornos de grafito tiene algunas ventajas en comparación
con la llama:
• Se puede trabajar con pequeñas cantidades de muestra (micro o nano
gramos o litros)
• Los limites de detección son mucho mas bajos que la llama
• La muestra no sufre ningún proceso de dilución en el horno, si se ponen
por ejemplo 5μgr entran al ciclo 5 μgr. Si se usa la llama la muestra debe
estar diluida, debe ser aspirada (se puede perder) luego llega a la
mezcla C/C donde también se puede perder.
Se debe controlar bien que tipo de reactivo se utiliza, si necesita agua, etc
Desventajas:
• Es un método muy caro
• Si por algún motivo el ciclo no es completo (no se logra la atomización
completa) y dentro del horno quedan moléculas que pueden absorber la
radiación o pueden dispersarla, conduciendo a errores.
Las técnicas son absorción y emisión atómica.
Emisión atómica
Se basa en medir la emisión de energía radiante generada por parte de átomos
neutros en estado gaseoso. Luego de que fueron excitados térmicamente. La
técnica de emisión atómica es una técnica analítica cualitativa y cuantitativa
porque relaciona la emisión con la concentración. Cualitativa porque esos
átomos emiten a una longitud de onda característica, propia de cada elemento
y cuantitativa porque relaciona la emisión con la concentración.
En la técnica de emisión atómica no hay FER, la energía la proveen la llama y
el ICP (funciona como atomizador y como FER). La muestra se coloca en el
atomizador. Llega todo a la llama o al ICP. Luego tiene selectores de banda o
filtros de interferencia o monocromadores. La radiación llega al detector, que
generalmente son PMT y luego al registrador.
La variable más importante a controlar es la temperatura.
20
Analisis Instrumental ИиФерИх
Generalmente la técnica de emisión se usa para detectar metales
monovalentes o bivalentes: Li, Na, K etc. Tanto en forma cuantitativa como
cualitativa, ya que la longitud de onda de emisión es característica de cada
elemento.
La técnica es cuantitativa porque la IE (intensidad de emisión)=kC, a
soluciones diluidas la relación es lineal, lo que permite preparar curvas de
calibrado.
El resultado se expresa bajo las condiciones usuales y la expresión V
i
± V
ii
.
Las variables, en el caso de al presión del gas, se deben controlar.
Excepcionalmente en la práctica no se puede controlar la presión de gas
(porque es de línea). Así que no se hace curva de calibrado. Se aplica el
método del factor.
Absorción atómica
Se basa en medir la absorción de energía radiante por parte de los átomos
neutros en estado gaseoso luego de haber sido excitados por una fuente de
energía radiante. La característica es que la fuente es discontinua, entra
radiación en un número limitado de longitudes de onda características. La
lámpara que más se utiliza en absorción atómica es la lámpara de cátodo
hueco.
Lámpara de cátodo hueco: tubo cilíndrico hueco con ventana de cuarzo o
vidrio, en su interior tiene Argon a baja presión y tiene como ánodos un
alambre de Tungsteno y como cátodo tiene una lamina cilíndrica que esta
recubierta con la sal del elemento a determinar. Hoy en día hay lámparas
multielemento. Emite radiación característica del analito en estudio, es hace a
la técnica mas selectiva.
Otra lámpara que suele utilizarse es la lámpara de descarga sin electrodos.
Luego de la FER viene el Atomizador que en este caso es la llama o el horno
de grafito.
Dispositivo que actúa como selector de banda: filtros o monocromadores.
Detector: los mas comunes tiene PMT y luego el registrador.
También existen elementos simples y de doble haz.
Dos aplicaciones de la técnica de absorción atómica para trazas
• Generación de hidruros
• Técnica de vapor frío.
Generación de hidruros
Se usa cuando se quiere determinar pequeñas cantidades, trazas de Arsénico,
Selenio, Bismuto, antimonio, plomo y con la técnica de absorción atómica
propiamente dicha no se puede cuantificar.
Lo que se hace es tratar a la muestra con NaBH
4
en medio acido, de tal
manera que se forme un hidruro y ese hidruro tiene la característica de ser
volátil, puede ser arrastrado por un gas y llevado directamente hacia un
atomizador. En el atomizador se descompone el hidruro y se originan los
átomos neutros en estado gaseoso de ese elemento.
- +
4 3 3 3 3 3 2
3BH + 3H + 4H AsO H BO + 9H As + 3H O →
21
Analisis Instrumental ИиФерИх
La cuantificación se hace por testigos y curva de calibrado, como es usual.
Ventajas:
El analito es arrastrado de la matriz y esto hace que disminuyan las posibles
interferencias por la matriz.
Vapor frío
Se utiliza para determinar pequeñas cantidades de Hg en solución. El equipo
es semejante al anterior pero se mezcla la solución de mercurio con una
solución de cloruro estañoso Cl
2
Sn en presencia de algún oxidante fuerte
(H
2
SO
4
o HNO
3
). De esta manera esto se agita y el ion mercurio se convierte en
vapor metálico (vapor de Hg) y es arrastrado por un gas inerte hacia la cubeta
de absorción y de allí se mide directamente a la longitud de onda
característica del Hg que es 264nm
Se puede determinar cuantitativamente en ambos casos
Tanto en absorción como en emisión atómica puede haber dos tipos de
interferencia: espectrales y químicas.
Espectrales: se dan cuando la absorción o emisión de una especie genera un
solapamiento de las bandas características, provocando dispersión de la señal
o disminuyendo la intensidad.
1) La mas común es aquella que se origina cuando el atomizador es la llama y
la mezcla C/C proporción aun espectro de fondo de absorción o emisión.
Solución: cambiar la mezcla C/C.
2) Otra que puede ocurrir es, sobre todo en el horno de grafito, que quede
algún metal (St,Ti) que a determinada temperatura forman óxidos con las
paredes de los hornos refractarios y esos óxidos emitan en la zona donde
emite el analito y que también enmascaren la señal a cuantificar. Este tipo de
interferencia se trata de eliminar aumentando la temperatura hasta que los
óxidos sean inestables y no interfieran en la medición.
3) Otra interferencia posible es que la atomización no sea completa y quede
moléculas que generan un espectro (por ejemplo el Ca
2+
). Se soluciona
aumentando la temperatura.
4) Otra interferencia es que en la muestra haya dos sustancias que emitan o
absorban a longitudes de onda cerca, solapando las señales
Efecto matriz
En absorción o emision atómica es importante controlar la interferencia
provocada por la matriz del compuesto, es decir por los otros componentes
presentes. Este caso se presenta cuando debido a la presencia de compuestos
en la matriz interfieren con la muestra. Por ejemplo el Ca
2+
en leche, en la
leche hay otros componentes, se debe separa al Ca
2+
y atomizarlo todo, de otra
manera el resto de los constituyentes interfiere.
22
Analisis Instrumental ИиФерИх
El efecto matriz es particularmente importante en el análisis de alimentos, ya
que son matrices complejas
Se soluciona trabajando con instrumentos que presentan determinadas
características.
Esta interferencia es mas frecuente en absorción atómica y puede corregirse
de dos formas:
Método de corrección con una fuente continua : los equipos ya viene
equipados así (con una lámpara continua y otra de cátodo hueco). De tal
manera que ambas radiaciones pasan en forma alternada a través del
atomizador, así la radiación que proviene de la lámpara de cátodo hueco es
absorbida por los átomos neutros al estado gaseoso y por las moléculas que
generan ese efecto matriz mientras que la radiación que provino de la lámpara
continua es absorbida por las moléculas de tal manea que al detector llega
solamente la compensación de ambas señales y esa es la señal que se registra

]
→ →
]
]
LC
atomos atomos moleculas
LCH +
moleculas LCH LC
→ detectores
Corrección por efecto Zeeman
Otra forma de corregir, evitar o disminuir el efecto matriz es a través de la
corrección por efecto Zeeman. En este caso también hay una compensación de
señales de tal manera que al detector solo llega la señal correspondiente al
analito.
Este instrumento es un horno de grafito rodeado por un electroimán que
desdobla los niveles energéticos correspondientes a los átomos libres neutros
al estado gaseoso, de tal forma que cuando llega la radiación de la LCH
absorben de manera alternada los ANLg y las posible moléculas que
interfieren. Mediante un dispositivo el detector solo registra la señal de los
ANLg.
Cuando la luz pasa en forma normal absorben los ANLg y las moléculas,
cuando pasa en forma polarizada y el nivel electrónico se desdobla, solo
absorben los ALNg.
Quimicas
Las interferencias químicas generalmente ocurren cuando no se tuvo en cuenta
o no se controlaron correctamente las condiciones operacionales
1)La presencia o formación de compuestos poco volátiles (algunos aniones,
SO
4
, PO
4
, tienen la característica de que a determinada T reaccionan y forman
compuesto poco volátiles con el analito en estudio, por ejemplo con Mg o Ca).
Esto lleva a que haya menos ANLg , interfiriendo asi con la cantidad a
determinar. Se soluciona agregando a la solución del analito un compuesto
llamado agentes liberadores, que tienen la característica de reaccionar con el
anion antes de que este lo haga con el analito. Se usa Litio o Silicio como
agentes liberadores.
23
Analisis Instrumental ИиФерИх
2)Otra posible interferencia es el equilibrio de disociación. Algunos compuestos
tienen la característica de afectar y modificar el equilibrio de disociación de
algunas sales. Por ejemplo: si se tiene ClNA a determinada T se forman los
ALNg, pero si hay HCl en el medio en determinadas condiciones los átomos de
Cl provenientes del HCl hacen efecto de masa y desplazan el equilibrio.
Equilibrio de ionización: se debe elegir la T adecuada del atomizador de tal
manera que no provoque la ionización de la muestra. De no ser posible
cambiar la T de ionización se agrega al medio supresores de ionización cuya
función es ionizarse mas rápidamente que el analito en estudio. En el medio
habrá electrones que desplazan el equilibrio a favor de la no ionización del
analito. Esta situación lógicamente no sucede en el ICP, dado que el plasma es
gas parcialmente ionizado.
Espectrometría de absorción en IR
Esta técnica de absorción de energía radiante comprende la zona que va
desde 700 nm hasta aproximadamente 1300/1500 nm .
La región puede dividirse en cercano, medio y lejano
Generalmente desde el punto de vista analítico las determinaciones
cualicuantitativas se trabajan en ir cercano y medio
La técnica se usa mucho para la determinación de compuestos orgánicos.
Caracteristicas de los espectros
Los espectros se grafican en porcentaje de transmitancia en función del
numero de onda (1/λ). Los espectros dan picos o bandas característicos a
distintos grupos funcionales, por eso decimos que es una técnica que permite
identificar compuestos. (Hay dos espectros de ejemplos en fotococopia1): son
dos alcanos que presentan similitud en algunos picos, por ejemplo en zona de
2800-3000 cm-1, hay una banda típica de unión C-H, luego en 1600-1400 cm-1
hay otra banda característica de la unión C-C ).
Es una tecnica cualitativa y puede usarse para hacer cuantificaciones, estas
ultimas se ven condicionadas por el estructura del compuesto. Las moleculas
polinucleares, por ejemplo, son difíciles de determinar cuantitativamente porque
las bandas se superponen.

Generación de un IR
La radiación proviene de zona del IR cercano-1500nm [E:hc/v] cuanto mayor es
la longitud de onda menor es la energía: la radiación que proviene de esa zona
no es muy intensa (como si lo es la UV. y visible).
Esa radiación no alcanza para producir transiciones electrónicas, es decir, solo
alcanza para generar cambios en las energías rotacionales y vibracionales. Es
decir que la absorción a partir de moléculas en esta zona es bastante selectiva:
no todas las moléculas son capaces de absorber radiación a esta longitud de
onda, porque para que se produzca esta absorción de energía las moléculas
deben tener un momento dipolar distinto de 0.
La absorción cambia cuando el momento bipolar de la molecula es distinto de
cero. Las moléculas no son rígidas, sino que tienen un movimiento alrededor
de un eje imaginario (movimientos vibracionales de tensión o deformación).
Eso genera un cambio en cada molécula que esta relacionado con la densidad
24
Analisis Instrumental ИиФерИх
de carga que hay alrededor de cada átomo y la distancia que hay entre ambos
centro de cargas.
Ejemplo HCL
H -CI
ó+ ó-
Cuando la radiación que proviene de una fuente de energía incide sobre una
molécula y la frecuencia de esa radiación coincide con al frecuencia vibracional
y rotacional propias de la molécula, se origina un cambio en el momento dipolar
de la molécula yeso produce la absorción de energía radiante. Entonces ese
cambio de momento es lo que va a medir.
Condiciones
Esa característica la tienen las moléculas formadas por heteratomos (en
general). Mientras que las moléculas homopolares (O
2
, N
2
) tienen un momento
dipolar igual a cero: esas no absorben en el IR.
El cambio de momento bipolar en estas tecnicas es irreversible.
Los espectros de moléculas sencillas son simples (con pocos picos) mientras
que en las moléculas mas complejas hay muchas bandas, que pueden
superponerse haciendo mas difícil la determinación.
La condición para que, la molécula absorba en al región IR es tener un
momento diferente de cero, entonces al momento de ser irradiada la molécula
ese momento cambie (se perturbe).
Instrumentos
Lo que existen actualmente son Dispersivos y no dispersivos.
1.- Instrumental dispersivo (simple y doble haz)
2.- Instrumental no dispersivo (simple haz)
1.- Instrumental dispersivo. (doble haz)
En general se usan para hacer determinaciones cualitativas.
Se llaman así porque tiene un sistema de monocromadores que dispersan la
radiación que llega a la red de reflexión y emerge por la hendija de salida (ver
fotocopia 1)
Hay una FER, un espejo a la salida de ella que divide la radiación en dos. Esa
radiación pasa a través de dos cubetas (muestra y referencia), luego la
radiación que viene de la cubeta de referencia se atenúa con un atenuador,
luego se unen esas dos radiaciones, producen una interferencia constructiva y
así llegan al detector.
El monocromador esta después de la muestra (para esta técnica no es
necesario ponerlo antes, porque la radiación IR no es tan potente y no modifica
a la muestra). Tanto la FER como los detectores tiene características térmicas:
responden (sobre todo los detectores) a cambios de temperatura.
Funciona de igual manera que cualquier insterumento de doble haz.
25
Analisis Instrumental ИиФерИх
2.- Instrumentos no dispersivos
Permiten hacer determinaciones cuali y cuantitativas.
Este tipo de instrumentos se conocen como instrumentos de IR con
transformada de Fourier. No tienen sistema dispersivo sino que cuentan con un
interferometro, cuya funcion es modelar y modular la radiación proveniente de
la Fer.
Tiene un algoritmo matemático cuya función es decodificar la señal que se
registra y transformarla en un espectro fácilmente identificable o que se pueda
interpretar bien
Los componentes de estos instrumentos (que en general son de simple haz)
son:
FER, interferómetro, compartimiento de muestra, detector.
Inteferómetro
El interferómetro es que el reemplaza al monocromador y la diferencia que
tiene con este es que solo permite que pase una rango estrecho de longitudes
de onda pero no ocurre el proceso de dispersión sino que aca hay movimientos
de espejos que permiten que llegue radiación a la muestra a diferentes
longitudes de onda

El interferómetro esta compuesto por una combinación de espejos: fijos y
móviles que redirigen la radiación hacia la cubeta de la muestra; y en el medio
de ellos hay otro dispositivo llamado cortador del haz o de la radiación cuya
función es dividir el haz de radiación que le llega.
El cortador del haz esta recubierto por un material que permite que parte de
radiación se refleje y otra se transmita.
Funcionamiento
Llega radiación de la FER, pasa por el espejo colimador (para que vayan en
forma paralela), los rayos llegan al cortador del haz y parte de ellos se reflejan
y esa radiación que se refleja incide en el espejo móvil, otra parte de la
radiación atraviesa el cortador del haz y llega al espejo fijo. Entonces cuando,
por movimientos mecánicos, se va moviendo el espejo móvil de tal manla que
ambos espejos quedan a igual distancia del divisor del haz, ambas radiaciones
(las de los dos espejos) quedan en fase y se produce interferencia constructiva
que aumenta la intensidad de esa radiación que luego pasa por la muestra a
una determinada longitud de onda. El funcionamiento del cortador es similar al
del filtro de interferencia
Mientras que si las distancias de ambos espejos son diferentes, la radiación no
esta más en fase y al detector le van llegan diferentes señales en función de la
distancia entre los espejos.
Lo que se registra en el detector es un interferograma que a través de la
transformada de Fourier se decodifica y se obtiene un espectro convencional.
Estos equipos son de ultima generación, en vez de tener un sistema óptico de
monocromadores tienen un inteferometro con espejos que selecciona una
longitud de onda por medio del espejo móvil.
26
Analisis Instrumental ИиФерИх
Inteferograma
Es la señal en función de la distancia de los espejos. Como el barrido es muy
amplio, el interferograma es como en b, el algoritmo desarma eso y lo
transforma en una señal que se puede leer como el (a) (fotocopia 2).
FER. Validas para instrumentos radiantes y no radiantes.
Son sólidos inertes que se calientan eléctricamente y alcanzan temperaturas de
alrededor de 1500 -2200 K. Sonn fuentes continuas, es decir que el espectro
de emisión de la lámpara debe ser una banda que abarque un amplio rango de
longitudes de onda. La intensidad de radiación varía en función de la
temperatura.
Hay varios tipos de FER con las características anteriormente descriptas.
1) Lámpara incandescente de Nernst
Es la más común. Formada por un cilindro formado por una mezcla de oxido de
Circonio y otros óxidos de diferentes metales. Ese cilindro tiene un diámetro de
1-2 mm y una longitud de aproximadamente 50mm. Esta rodeado por una
cubierta de un material protector que tiene la función de evitar que ese cilindro
se sobrecaliente y se queme. En los extremos del cilindro se ha conectado
cables de platino cuya función es transmitir la electricidad y alcanzar
temperaturas entre 1200 y 2200 aproximadamente. Ver figura 4. La mayor
intensidad de emisión depende de la temperatura que alcance la lámpara.
2) Globar
Es una varilla cilíndrica de aproximadamente 50mm de longitud y 5 mm de
diámetro. Esa varilla de es carburo de silicio y esta rodeada de una resistencia
que hace que se alcanzen temperaturas que van desde 1300 a 1800 K
emitiendo asi en forma continua en el IR
3) Filamento incandescente
Es un alambre en forma de espiral de Ni y Cr. Alcanza temperaturas de hasta
1000K.
4) Arco de mercurio.
Es una lámpara que utilizan los instrumentos que permiten trabajar en la región
del IR lejano. Consiste en un tubo de cuarzo que tiene vapor de mercurio a baja
presión. Cuando pasa la electricidad (cuando se conecta) ese vapor de
mercurio se ioniza originando un plasma y ese plasma emite una radiación
continua en la región del IR lejano.
5) Lámpara de Tungsteno
Es la misma que vimos en absorción molecular. Se usa en IR cercano.
6) Láser de CO2 (para instrumentos no dispersivos con transformada de
Fourier)
Actualmente hay instrumentos que tiene como FER un láser de CO2. Este tipo
de fuente generalmente se usa cuando se esta haciendo un control
medioambiental para determinar contaminantes atmosféricos (NH3, benceno)
Esta serie de lámparas son comunes. La característica fundamental es que son
sólidos inertes que se calientan y emiten radiación .
27
Analisis Instrumental ИиФерИх
Cubetas o celdas
Son recipientes que presentan ventanas que son transparentes a la radiación
IR. Esas ventanas pueden ser de NaCI, NaBr, KBr,CeBr
Selectores de banda
Según el instrumento: sistema dispersivo(monocromadores)
Sistema no dispersivo: interferómetro.
Detectores
La característica principal de los detectores de IR es que su respuesta depende
del poder calorífico de la radiación
Hay tres tipos de detectores
Los dos primeros (térmicos) generalmente se usan en instrumentos con
sistemas dispersivos mientras que los fotoconductores y piroelectricos se usan
en equipos no dispersivos.
1.- Detectores térmicos
Este tipo de detector, cuando llega la radiación se produce un calentamiento y
ese aumento de temperatura es lo que se registra (hay una variación de
temperatura).La respuesta depende de la capacidad calorifica de la radiación.
Hay de varios tipos:

• Neumático de golay
• Termocuplas
• Bolometros
Los tres funcionan bajo el mismo principio .
Neumatico de golay:
Es una cámara que en su interior tiene gas a baja presion y en un extremo
tiene una membrana4cuando la radiación incide en el detector, el gas se
calienta, se expande y ejerce presión sobre la membrana que se desplaza
según el poder calorifico de la radiación, generando una señal termica ΔT y ese
aumento de temperatura es
la senal que se mide,
Termocuplas:
La unión de un alambre con una esfera en la punta de Bismuto y Antimonio,
todo eso soportado o colocado sobre un soporte conductor yeso colocado
dentro de una cámara donde se ha hecho vacío. Cuando llega la radiación,
incide en el gas, se genera un aumento de temperatura y ese aumento de
temperatura genera una diferencia de potencial y esta ultima es la señal que se
mide. Generalmente esa señal es muy chica y requiere amplificador.
Bolometros
Funcionan de forma semejante a las termocuplas con la única diferencia que
están formadas por laminas de platino o de níquel. Se genera un aumento de
temperatura, una diferencia de potencial y de ahí la señal que se mide.
28
Analisis Instrumental ИиФерИх
2.- Detectores piroelectricos .
Se basan en que cuando llega la radiación la absorben y la transforman en una
señal medible
Están formados por láminas cristalinas de materiales pirolectricos que tienen la
característica de presentar propiedades térmicas y eléctricas. Generalmente se
usa como material piroelectrico sulfato de triglicina (STG). Este material se
coloca entre dos electrodos y cuando la radiación es absorbida se produce un
calentamiento del STG y al calentarse varia la distribución de carga en la
superficie, lo que genera una corriente eléctrica y esa corriente eléctrica es la
señal que se mide.(Parecidos a los diodos n-p)
3.- Detectores fotoconductores.
Están formados por una delgada capa de un material semiconductor.
Generalmente se usa sulfato de Pb. Este material semiconductor esta
depositado sobre un vidrio y todo eso esta recubierto por un tubo de vidrio y
sellado al vacío. Cuando llega la radiación se produce una promoción de los
electrones de valencia, del sulfato de Pb y esto hace que se genera una
corriente y esa corriente es la señal que se mide.
29
Analisis Instrumental ИиФерИх
Técnicas electroanalíticas
Estas técnicas cuantitativas que se basan en reacciones electroquímicas, es
decir, que tiene en cuenta las propiedades eléctricas de los analitos cuando
están en solución dentro de una celda electroquímica. Generalmente son
especificas respecto a una tecnica optica. El instrumento es mas sencillo y mas
barato que los usados en tecnicas opticas.
Este tipo de celda tiene la particularidad de ser especificas debido a que se
puede determinar actividades de distintas especies cuando se encuentran en
disolución y estas especies están en distintos estado de oxido-reducción
Puedo determinar Fe
2+
, Fe
3+
Además , con esta técnica puedo determinar la actividad de la especie que es
importante para calcular constantes de equilibrio. Además la instrumentación
utilizada es mas barata. En ese tipo de técnica se tiene en cuenta reacciones
de oxido reducción que ocurren en la interfase electrodo-disolución
Para poder aplicar una técnica electroanalítica necesitamos una celda
electroquímica. Esta es un recipiente que tiene conectados dos electrodos que
están sumergidos en un recipiente que contiene una disolución del electrolito a
determinar . Pueden ser de tipo galvanicas o electroquimicas.
Reacción electroquímica
Definición: es la responsable de las transformaciones químicas que sufren las
especies debido al paso de corriente eléctrica a trabes de los electrodos y del
movimiento o transporte de especies cargadas o no desde la disolución hacia
los electrodos.
Conformacion de una celda electroquimica
Puede haber de dos tipos:
Una de ellas es la celda galvanica y la otra es la celda electrolítica
La celda galvánica es aquella que al conectarse a dos electrodos las
reacciones electroquímicas ocurren espontáneamente y se genera una
corriente. Este tipo de celda se utiliza en técnicas potenciometricas
30
Analisis Instrumental ИиФерИх
En la celdas electrolíticas se requiere de una fuente externa de energía para
que funcione y esa energía es consumida y así tiene lugar la reacción. Este tipo
de celda se utiliza en técnicas polarograficas.
Teniendo en cuanta la nomenclatura de la IUPAC siempre el proceso de
reducción ocurre en el cátodo y el proceso de reducción en el ánodo y siempre
el potencial de una celda según la iupac es : el potencial del cátodo menos el
potencial del ánodo. Los e- que circulan se deben a la redox. Los iones se
mueven hacia los electrodos, este movimiento puede deberse a tres procesos
La especie que esta dentro de la celda electroquímica se mueve con tipo de
movimiento:
• Conveccion
• Migración
• Difusión
Conveccion :es el movimiento de la disolución originado por agitación debido a
un aumento de T, una agitación magnética o mecanica.
Migración: es el movimiento o movilidad de los iones provocados por atracción
electroestatica entre los iones y los electrodos (positivos atraen partículas
negativas y viceversa)
Difusión: es el movimiento de la especie originado por un gradiente de
concentración (de mayor concertación hacia la interfase electrodo-disolución) .
Dependiendo de la tecnica a usar estos movimiento son de mayor o menor
importancia.
Electrodos polarizados y despolarizados
Alrededor de los electrodos se forma una doble capa difusa. Esta se forma por
un primer reordenamiento. Luego de aplicar un potencial . si aumenta el
potencial la doble capa se hace mas gruesa y esto hace que los electrones no
puedan alcanzar la interfase , allí no hay proceso faradicos y no se produce
redox. Se dice que el electrodo esta polarizado. La capa es la responsable de
que existan dos procesos que dan origen a dos tipos de corrientes (Faradicas y
no faradicas)
En una celda electroquímica siempre se produce una corriente porque hay una
transferencia de electrones desde el seno de la solución hacia el electrodo.
Pero esa cantidad de corriente esta gobernada y limitada por distintos
procesos. Esos proceso se denominas faradicos y no faradicos.
Procesos faradicos: son aquellos donde siempre hay un reacción de oxido
reducción en la superficie o interfase electrodo-disolución. La corriente allí
generada se llama corriente faradica. Esta corriente es necesaria en
potenciometria.
31
Analisis Instrumental ИиФерИх
Procesos no faradicos : pueden ocurrir cuando por algún proceso
termodinámico o cinético (por ejemplo adscorcion), no ocurra una reacción
redox y tenga lugar otros procesos que generan una corriente , pero la
corriente es una corriente de carga. Esos procesos que ocurren modifican de
alguna manera la interfase electrodo-disolución. Se dice entonces que la
corriente generada es no faradica.
El grafico a representa un electrodo polarizado. Es decir a medida que aumenta
(varia) el potencial, no hay variación en la intensidad de corriente. Esto sucede
cuando ocurren procesos no faradicos
El grafico b representa a un determinado potencial constante varia la intensidad
de corriente. En este caso el electrodo esta despolarizado. Esto sucede cuando
ocurren procesos faradicos.
Proceso de polarizacion
Son los procesos que ocurren cuando hablamos de la polarizacion de un
electrodo: ocurren distintos procesos antes de llegar a la polarizacion o
despolarizacion del electrodo.
Transferencia de masa: primera etapa.
Aqui la especie oxidada se mueve desde el seno de la solución hacia el la
interfase electrodo disolucion mediante un movimiento de migración.
Segunda etapa : generacion de especies indeseadas.
Se debe a la generación de alguna reacción química y dar origen a especies
intermedias . estas especies intermedias pueden también oxidarse o reducirse.
Si ocurre no hay transferencia de electrones
Tercera etapa: cambios fisicos en el analito
En las proximidades de la superficie de cada electrodo puede ocurrir la quinta
etapa , es decir, ocurrir un cambio en el estado físico de la especie, la cual
puede adsorberse , disociarse o cristalizarse antes de la transferencia de
electrones.
Cuarta etapa: transferencia de carga
La cuarta etapa puede ocurrir a distintas velocidades.
La polarizacion depende entonces de las velocidades de reaccion de las
diferentes etapas. Por supuesto la etapa mas lenta es la que controla el
proceso y eso lleva asociado que la intensidad de corriente se vea limitada por
cada una de estas etapas.
• Si la primera etapa es la mas lenta, se dice que el electrodo esta
polarizado por concentración .
• Si la segunda etapa es la mas lenta el electrodo esta polarizado por
reacción quimica
• Si la tercera etapa es la lenta el electrodo esta polarizado por adsorción
o disociación
• Si la cuarta etapa es la lenta el electrodo esta despolarizado
Calculo teorico del potencial de una celda
Se calcula utilizando la ecuación de Nersnt . Esta ecuación surge de una serie
de consideraciones termodinámicas, trabajando a P y T constante que se basa
32
Analisis Instrumental ИиФерИх
en los cambios de energía libre para una reacción dentro de una celda
electroquímica.
Si consideramos según la IUPAC.
¹
¹
'
¹
¹
n=numero de electrones involucrados en la reaccion
ΔG=-nFE F=cte de Faraday
E:potencial normal de celda
Podemos a través de ecuación llegar escribirla como la ecuación de nersnt
como esta en la transparencia
Recordemos que la actividad de una especie es

2
1
I=
2
i i
C Z
El f esta relacionado con la fuerza iónica de la solución (I). I depende de la
concentración y carga de la especie.
Cuando en química analítica se trabaja con soluciones diluidas el coeficiente de
actividad f tiende a 1 , por lo tanto podemos decir que a=C, si la solución es
diluida.
Considerando el ejemplo anterior tenemos
0
P
0.0591 [red]
Δ = E = E - log
n [ox]
reaccion en el electrodo
El potencial frente al eletrodo de referencia se calcula siguiendo el esquema de
celda.
Esquema de una celda
• Hacia afuera el electrodo (Zn
0
)
• La barra / indica electrodo, sumergido en una solución de Zn
2+
con una
dada concentración molar
• La doble barra // indica puente salino
• Cu
2+
con su concentración molar / (el otro electrodo) Cu
0
(Zn
2+
)
• Hacia fuera los electrodos. Al centro sus soluciones
• ΔP=potencial de un solo electrodo
• Ep=E
2
-E
1
potencial de unión liquida
El potencial se unión liquida se genera cuando se ponen en contacto dos
soluciones de distintas concentración. Desde el punto de vista experimental ,
este potencial se puede minimizar colocando al puente salino y se hace casi
despreciable por lo tanto en el Ej no se considera.
33
Analisis Instrumental ИиФерИх
Existe otro parámetro que es el potencial norma de electrodo o potencial
estándar de electrodo. Ese potencial es una constante física característica de
los pares redox. Ese potencial se calcula cando el cociente de actividad de la
especies reducidas y oxidas es igual a 1. Esto ocurre cuando los reactivos y
productos tiene una actividad igual a 1
}

142 43
1
0 0
P P
0
0.0591 [red]
Δ = E = E - log Δ = E
n [ox]
El potencial del electrodo de H es cero (E=0)
Potenciometria
La técnica que utiliza estas celdas es la potenciometria
• Utiliza celdas galvanicas
• Utiliza dos electrodos : uno de referencia y otro indicador
• Utiliza soluciones electrolíticas

Una técnica potenciometrica se basa en relacionar la concentración de una
especie con la medida del potencial que se genera entre un electrodo indicador
y un electrodo de referencia.
Electrodo indicador: es aquel cuyo potencial responde a la variación de la
actividad de las especies en estudio.
Electrodo de referencia: mantiene constante su potencial aun cuando se
producen pequeños pasajes de corriente, generalmente se utiliza como anodo.
Potencial de celda: potencial del anodo – potencial del catodo
Dentro de lo electrodos indicadores tenemos dos tipos: los indicadores
metálicos y los indicadores de membrana
Electrodos indicadores metalicos
Se basan en que el potencial se genera a traves de una redox, que ocurre en la
interfase electrodo-disolucion, mientras que en los electrodos selectivos el
potencial se genera medianrte un intercambio de iones a traves de la
membrana.
Dentro de los indicadores metálicos tenemos
• Los de 1era especie
• Los de 2da especie
• Los redox
Los de 1era especie o cationico
Son electrodos que están constituidos por una barra de metal sumergida en
una solución que contiene los propios iones. Ejemplo: una barra de Cu
0
que se
sumerge en una solución de Cu
2+
34
Analisis Instrumental ИиФерИх
}
142 43
0 2+
1
0Cu /Cu
P
0
0.0591 [red]
Δ = E = E - log
n [ox]
Los electrodos de segunda especie o anionicos.
Están formados por una barra metálica que esta en contacto con una solución
saturada de una sala poco soluble del metal y una determinada concertación
del anion correspondiente a la sal
Ejemplo: Ag
0
/ClAg
(sat)
;Cl
-
(X
m
)
Cuando la concentración molar del anion (Cl
-
) es mayor que 1M este electrodo
se comporta como electrodo de referencia.
Si no, es un electrodo anionico ([Cl
-
]<1M).
Los electrodos redox
Están formados por una barra de metal inerte (platino, paladio, oro) que esta
sumergida en una solución que contiene una cupla redox
Ej: Pt/Fe
2+
; Fe
3+
o Pd/Cs
3+
; Cs
4+
↓ ↓
↓ ↓

6 447 4 48
era
da
electrodos
indicadores referencia
metalicos membrana
1 especie
2 especie
redox
Electrodo de referencia: su potencial no varia aun cuando hay pequeños
pasajes de corriente, permanece constante en función del tiempo
Dentro de los electrodos de referencia tenemos el electrodo de H que es el que
se utiliza para calcular los potenciales normales o estándar y ese electrodo
tiene un potencial igual a cero. A todas las T y cuando la actividad de H
+
es 1M.
Electrodo de calomel
Otro electrodo muy frecuente es el de calomel. Este electrodo es un tubo de
vidrio que en su interior tiene una pasta de Hg que esta en contacto con una
solución de Hg
2
Cl
2
. Esa pasta de cloruro mercurioso esta saturada y con una
elevada concentración de KCl.
En el extremo inferior del tubo tiene una orificio poroso que esta en contacto
con la solucion de CLK (es de tipo anionico , [Cl-]>1M ) y además en la parte
interna hay un alambre de platino que es el que hace el contacto.
Este electrodo de calomel saturado (ECS) es que el que se usa como
referencia y tiene un E=0.268V
Otro electrodo de referencia que se usa es el electrodo de Agº/ClAg
(s)
; Cl
-
(Xm)
.
Cuando la concentración de Cl es mayor a 1M el electrodo es de referencia.
35
Analisis Instrumental ИиФерИх
El potencial de este electrodo de referencia es E=0.242V . su E se calcula
usando al electrodo de H como E de referencia.
Potecial normal de electrodo.
Es una constante fisica caracteristica de cada especie. El potencial normal de
electrodo se calcula cuando las actividades de las especies reducidas y
oxidadas son iguales a 1M. Asi se puede calcular los diferentes potenciales de
las distintas especies y poder clasificarlos , teniendo en cuenta su capacidad de
reducirse
Titulacion potenciometrica
Una de las aplicaciones prácticas es la titulacion potenciometrica: consiste en
medir el potencial de una celda galvanica luego del agregado de alicuotas de
un agente valorado, trabajando a corriente nula
Una celda de titulacion es un recipiente donde tenemos: electrodo indicador ,
electrodo de referencia, una bureta, la solución del electrolito. Nosotros vamos
a ir mirando el potencial en función de lo mililitros de agente valorado gastados.
De esa curva de titulacion potenciometrica vamos a obtener los militros de
agente valorado que gastamos en la titulacion y por medio de una reacción
estequiometrica calculas la concertación del analito. Se utiliza una celda
galvanica , es decir , la única corriente que debe generarse es la corriente que
proviene de la reacción de oxido reducción, en la interfase electrodo-disolución
En los electrodos indicadores metálicos la corriente se produce por una
reacción redox
En un titulacion potenciometrica están involucrados dos tipos de reacciones:
una reacción electrónica y una reacción química.
Puede entonces haber titulaciones de precipitación, neutralización, de
formación de complejos, y una reacción redox. Cualquiera de estas reacciones
puede producir al agregar el agente valorante . Dan lugar a cuatro tipos de
titulaciones potenciometricas.
Electrodos de membrana
El otro tipo de electrodos indicadores que existen son electrodos selectivos de
cationes y moleculas.
Electrodos de membrana: o electrodo selectivo a iones.
Estos tiene la particularidad de estar formados por una membrana que es
selectiva a distintos iones. La membrana esta en contacto con los iones pero
de actividad conocida y constante. Permiten hacer medidas directas, hay
especificos para cada ion.
La presencia de esa membrana en la disolución hace que se modifique la
movilidad de los iones dentro de esa solución y se genere un potencial que va
a depender de la concentración. Se genera un potencial por gradiente de
concentración que genera un intercambio de iones a traves de la membrana
Este potencial es el que se usa para calcular la concertación
36
Analisis Instrumental ИиФерИх
Es importante conocer la naturaleza de la membrana.
Existen electrodos selectivos a cada ion, la capacidad del electrodo de ser o no
selectivo depende en gran parte de la membrana. Esta debe presentar una
minima solubilidad , es decir la solubilidad de la membrana en la disolución del
analito debe tender a cero. La membrana responde selectivamente a distintos
iones , es importante conocer la composición de la membrana.
Además, la membrana debe tener una determinada conductividad eléctrica.
Generalmente , la conductividad esta dada por iones monovalentes que
constituyen la membrana. Además , la membrana debe tener una reactividad
selectiva con el analito o sea debe interactuar electivamente con el analito ne
estudio. Generalmente, las membranas son de moléculas grandes o agregados
moleculares como vidrios, resinas, sílice. Algunas membranas están formados
por compuestos inorgánicos como haluros de Ag.Esto hace que sean poco
solubles o insolubles. Deben estar siempre hidratadas para facilitar la reacción
de intercambio que ocurre a ambos lados de la misma.
Las tres características fundamentales que debe cumplir una membrana son:
• Minima solubilidad (dada por la composición con grandes moleculas)
• Conductividad eléctrica (dada por los iones monovalentes)
• Reactividad selectiva al analito en estudio. La membrana tiene que
poder interactuar de manera selectiva con el analito.
Hay dos tipos de membrana que se utilizan en este tipo de electrodo: las
membranas cristalinas, las no cristalinas y dentro de esta ultima tenemos las
membranas de vidrio, las formadas por líquidos y las movilizadas por líquidos
rígidos.
Membrana no cristalina de vidrio
El mas común es el electrodo selectivo a H
+
que es el electrodo selectivo a pH.
Hoy en día los electrodos selectivos son electrodos combinados . El indicador y
el de referencia están juntos dentro de un tubo de vidrio.
Dentro de ese tubo de vidrio hay una solución de HCl concetrado , saturada
con ClK, de actividad de H
+
constante y un alambre de Ag que actúa como
electrodo de referencia.
A su vez en el interior tiene otro electrodo de referencia de Ag/ClAg que forma
junto con el electrodo indicador la celda que se utiliza para medir pH.
La membrana de vidrio esta formada por redes tridimensionales de silicatos y
dentro de esas redes existen cationes mono, bi y trivalentes. Los monovalentes
son los encargados de la conductividad selectiva de la membrana, los bi y
trivalentes permanecen retenidos por los silicatos y mantiene humeda y rigida a
la membrana. Esta membrana esta en contacto con la solucion de H de
actividad desconocida
Potencial a través de membrana: una de la característica fundamental de la
membrana es que debe estar hidratada para poder medir la actividad de
analito. Debe estar hidratada en la cara externa cuando esta en contacto con la
solución del analito y la parte interna cuando esta en contacto con la disolución
37
Analisis Instrumental ИиФерИх
del analito de actividad constante. La región intermedia esta seca , allí es
donde se encuentran los iones monovalentes, se desplazan a lo largo de esa
red cristalina y son los responsables de la conducción eléctrica que va a
permitir generar un potencial.
Los iones Na
+
originan el potencial entre la disolución externa y la membrana
externa y un potencial entre la solución interna y la membrana interna. (P
i
y P
ii
).
La diferencia a ambos lados de la membrana es lo que se conoce como
potencial limite, potencial de membrana o potencial de superficie. La reacción
de intercambio que ocurre genera el gradiente de concentración. El movimiento
genera carga en la membrana y eso genera el potencial.
H V Na Na V H
+ − + + −
÷÷→
+
←÷÷ V: acido salicilico.
El equilibrio de la reacción , como debe estar hidratada la membrana, tiende a
desplazarse hacia la derecha. La superficie de la membrana predomina el
Acido Silicico y lo mismo ocurre en la cara interna de la membrana. El
equilibrio esta desplazado según la concentración de protones tanto en el
medio como en la disolución y eso genera un potencial limite E
b
= E
2
- E
1
.
Este es un parámetro analítico que se usa para medir pH.
Electrodo selectivo a pH
El potencial limite esta dado por la diferencia de potencial de los potenciales a
cada lado de la membrana (cada uno responde a la ecuación de Nersnt). Este
es el parámetro analítico que da una idea del pH de la solución.
En esa solución externa hay solución de H
+
cuya concentración o actividad no
conocemos pero del lado interno hay una concentración de protones conocida
y constante.
El potencial limite queda en función de la actividad de la especie en disolución
(es que el no se conoce).
pH=-log(a) , Eb=L-0,059pH potencial limite en función del pH para un electrodo
selectivo a pH.
El potencial limite es el parámetro analítico que me va dar el pH de la solución.
Es decir, el potencial de un electrodo indicador de este tipo, será igual al
potencial limite, responsable del pH, mas un potencial de referencia interno
mas un cierto potencial de asimetría (este potencial de asimetría es muy chico
y se debe a las distintas tensiones en la estructura de la membrana)
E
ind
= E
b
+ E
ref2
+ E
asi
E
b
=E
ind
- E
ref
38
Analisis Instrumental ИиФерИх
Potencial de asimetría.
Es un potencial muy pequeño y se debe a las diferencias de tensiones en la
estructura de la membrana, generada fundamentalmente por desgaste. Es
despreciable.
Limitaciones del electrodo selectivo a pH.
Este mismo electrodo, selectivo a H+, puede según las condiciones ser
sensible a otros iones monovalentes y en ese caso cuando el electrodo se usa
para medir soluciones básicas puede ser que sea sensible a iones Na+, K+. La
mediad o el valor de pH en ese casos era menor que el valor real y en ese caso
se dice que el electrodo presenta un error alcalino. Entonces debe definirse un
parámetro que se denomina coeficiente de selectividad.
Ese coeficiente indica como afecta la presencia de un ion en la disolución sobre
la mediad del pH. Es decir sobre el valor del potencial limite . En algunos casos
puede darse que el electrodo sufra lo que se conoce con el nombre de error
acido. Sucede a solución de pH inferiores a 0,5 o 1. en estos casos el pH
medido es mayor que el real.
Coeficiente de selectividad k
Esta variable esta involucrada dentro de la ecuación del potencial limite de
membrana -log (a1KA,B,b1)-. Este coeficiente de selectividad representa la
relacion que existe entr la respuesta de dos iones que estan presentas en la
misma disoclucion. Es el grado de interferencia que genera un ion sobre otro.
Indica cuanto interfiere la otra especie con respecto al electrodo del analito (B
interfiere con con el electrodo selectivo a A, por ejemplo)
Toma valores de 0 a 20 o 30 y es un dato que viene tabulado por el fabricante.
Si el coeficiente tiende a 0 indica que el ion no interfiere en la medicion
pH operacional: el pH de una solución debe ser una constante universal.
Según IUPAC y según el instituto nacional de patrones y tecnología (NIST)
establece como pH operacional aquel que se obtiene de la calibración directa
del instrumento con disoluciones patrones conocidas preparadas a partir de
estándares primarios, seguido de la determinación de pH de la disolución
incógnita. Estas soluciones se compran, no se preparan y no se conoce su
fuerza iónica.
Aplicación del electrodo selectivo a H+
Sirve para medir si una solución es acida o es básica , pero no se puede saber
la concentración de H
+
que hay en la solución si hacemos una medida directa.
Esto se debe a como se calibra el electrodo, al no conocerse la fuerza ionica de
los buffers es imposible relacionarla con la fuerza iónica de la muestra,
entonces al ser diferentes los coeficiente de actividad no se puede medir [H
+
]
Electrodo de membrana no cristalina liquida
Con los otros tipos de electrodos de membrana no cristalina tenemos los de
membrana liquida. Ese tipo de electrodo esta formado por un tubo de vidrio que
en su interior tiene otro tubo de vidrio y en el extremo inferior presenta una
39
Analisis Instrumental ИиФерИх
membrana de plástico porosa que se encuentra impregnada por un liquido
hidrofobito, esta saturada de uno o varios intercambiadores iónicos orgánicos
que se encuentran entre los dos tubos.
Dentro el tubo interno se encuentra un electrodo de referencia interno
sumergido en una solución acuosa del metal que uno quiere determinar.
Generalmente se usa para cationes bivalentes aunque los hay para
monovalentes.
El potencial se genera de la misma manera que el de vidrio, a traves de un
intercambio ionico en la membrana.
Electrodos no cristalinos de un liquido inmovilizados por un polímero
rigido
En este caso los electrodos son semejantes al anterior con la única diferencia
en que la membrana ya no es de plástico son que son membranas de cloruro
de polivinilo y esto hace que la membrana sea mas flexible y eso hace que el
coeficiente de selectividad sea menor. Con estos eléctrodos se pueden hacer
medidas directas de diferentes cationes y aniones. Cuando se calibra el
instrumental se lo hace con su solución patrón preparada por uno mismo.
Quiere decir que uno va a conocer esas soluciones patrones entonces va a
permitir conocer la concentración de la muestra.
A)Electrodos de membrana cristalina
Hay de dos clases:
• 1)Cristal único (membrana formada por un único cristal)
• 2)Policristalinos o mezcla de cristales.
1)Cristal único: las membranas están formadas por Fluoruros de Lantano
(LaF
3
) y es selectiva a iones F-. el electrodo es un tubo de vidrio que en la parte
inferior tiene una membrana que tiene un diámetro de 10 mm
aproximadamente y un espesor de 2 o 3 mm . esa membrana , que es de LaF
3
,
mediante un tratamiento con F
2
Eu (fluoruro de europio) con el objeto de
aumentar la capacidad conductora de la membrana. Se crean huecos en la
membrana para que los iones F puedan moverse con mayor facilidad y se
genere el potencial limite.
Dentro de ese tubo de vidrio que forma parte del electrodo se encuentra un
disolución que contiene NaCl y NaF donde la actividad de F es constante y
conocida, en la cual esta sumergido el electrodo de referencia interno.
Dependiendo de la concentración molar de F que hay en la disolución se
genera un potencial y ese potencial limite generado es el que se va a relacionar
después, a través de la ecuación de Nersnt con la concentración de F
-
La característica que tiene este electrodo es que se puede trabajar en un
amplio rango de temperatura (entre 0 y 80ºC) sin que haya variación del
potencial. La única limitación que tiene el uso del electrodo es que a pH
superiores a 8 empiezan a interferir lo –OH del medio y a pH menos a 4 o 5
comienzan a molestar los H+, pues se forma HF en el medio y ya no se tiene
iones F- para detectar (el electrodo tiene una menor respuesta). Es bastante
selectivo.
40
Analisis Instrumental ИиФерИх
2) Mezcla de cristales: generalmente la membrana es una mezcla de sales de
haluros de Ag con sulfuros de Ag en relación 1:1. se hace una mezcla
homogénea de tal manera que aumente la conductividad de la membrana. Son
electrodo que se suelen usar como electrodos selectivos para iones Ag
+
. Es
decir que como electrodo selectivo de Ag podemos tener de membrana
cristalina o no cristalina (según como este formada la membrana)
Lo importante siempre es conocer la composición de la membrana y saber que
siempre se puede hacer una medida directa, salvo en el caso del electrodo de
vidrio selectivo a protones.
Otros electrodos.
Existen electrodos selectivos a moléculas. Hay de dos tipos
• Electrodos selectivos a moléculas gaseosas
• Electrodos selectivos a moléculas orgánicas
También se conocen como sondas sensibles a gases. Son dispositivos
formados con un electrodo selectivo de iones que esta retenido por una
membrana permeable a gases y entre el electrodo selectivo y la membrana
sensible se encuentra una solución interna que es la que va generar el
producto para su posterior detección.
El gas disuelto pasa a través de la membrana permeable y se encuentra con la
solución interna- Al entrar en contacto se generan diferentes productos , en el
caso del CO
2
se generan H
+
y HCO
3-
,uno de los productos que se genera es
que reacciona con el electrodo selectivo.
Se pueden usar, todo, para determinaciones cuantitativas (con lo selectivos)
Se calibran con testigos preparados por uno mismo, luego se lee la muestra y
se obtiene la concentración del analito. Son lecturas directas de replicas, el
resultados se expresa como es usual.
Voltamperometria
Estas técnicas abarcan un conjunto de técnicas que permiten obtener
información de una especie a través de la medición de corriente en función de
un potencial aplicado. Se mide intensidad de corriente en función de un
potencial aplicado. El grafico generado generalmente es sigmoidal
Dentro de estas técnicas tenemos
¹
'
¹
¹
'
¹
¹
'
¹
Clasica
polarografia Por pulsos
Voltamperometria de barrido lineal
Titulacion amperometrica voltamperometria hidrodinamica
Sensores quimicos
Se estudiaran la polarografia clasica, la voltamperometria hidrodinámica para
titulaciones amperometrica y voltamperometria hidrodinámica para sensores
químicos.
41
Analisis Instrumental ИиФерИх
La voltamperometria de barrido lineal tiene la caracteristica de que el potencial
que se va aplicando tiene que variar linealmente con el tiempo.
Generalidades de la voltamperometria de barrido lineal
• En cualquiera de las dos técnicas se miden corriente I vs potencial
• Se usa una celda voltamperometrica
La celda voltamperometrica esta compuesta por : tres electrodos sumergidos
en una solución que contiene al analito y un exceso de un electrolito soporte
(disolución no reactiva de alta molaridad). Los electrodos estan conectados a
un generador de potencial de barrido lineal.
Estos electrodos son
• Electrodo de referencia: mantiene constante su potencial durante la
medición
• Electrodo auxiliar: es un alambre de Pt cuya función es conducir la
electricidad desde la fuente generadora de potencial hacia el tercer
electrodo (indicador)
• Electrodo indicador: es un microelectrodo , también llamado electrodo de
trabajo.
Microelectrodos
Electrodo de disco
Es una varilla de teflón que en la parte inferior tiene una plaquita o disco con
características conductoras, Este disco a su vez esta conectado a un hilo de Pt
que sirve como conexión.
El disco puede estar recubierto de diferente materiales (Pt, Hg, Au, C grafito) y
según sea ese material va a presentar diferentes potenciales dependiendo
también del electrolito soporte donde esta sumergido (fotocopia 1).
Generalmente este electrodo se utiliza en la voltamperometria hidrodinámica
empleando sensores químicos. Se suele usar también en polarografias por
pulsos
Electrodos de gota de Hg
Hay otro microelectrodos mas usados que son los microelectrodos de gotas de
Hg. Son tubos de vidrio que tiene un deposito, reservorio, donde se coloca el
Hg y en esa gotita de Hg es donde se produce la electrolisis. Las gotas deben
ser chiquitas y homogéneas para mantener la reproducibilidad del resultado.
Este tipo de electrodos de gota se usa mucho en polarografia clásica y en
titulaciones amperometricas.
Se trabaja con microeletrodos porque uno debe trabajar también en
condiciones de polarización por concentración.
Polarografia Clasica.
En esta técnica se usa una celda de polarografia (los tres electrodos, el analito
y la solución de electrolito soporte). Dentro de esa celda polarografica pueden
ocurrir tres tipos de movimiento (conveccion, difusión y migración) que dan
lugar a respetivas corrientes. En esta técnica la única que debe existir es la de
difusión en la interfase electrodo disolución.
42
Analisis Instrumental ИиФерИх
Las corriente de conveccion se elimina trabajando en reposo y a temperatura
constante y la de migración se elimina usando un electrolito soporte , que
“enmascara” a la posible corriente de migración que genere el analito
En estas condiciones la única corriente involucrada en la determinación de la
de difusión. El polarograma reflejara la relación entre el potencial y la corriente
de difusión que ocurre dentro de la celda polarografica. Otra condiciones es
que cuando se hace una cuantificación se debe asegurar que no haya O
2
disuelto. Si hay O
2
disuelto este se reducirá muy fácilmente cuando se apliquen
los potenciales, generando una onda polarografica que puede enmascarar a la
onda polarografica de la especie en estudio. Este problema se resuelve
burbujeando con N
2
Polarograma tipo
Es un grafico de intensidad de corriente versus potencial
La curva B corresponde al electrolito soporte, que tiene un potencial de
reducción mucho mas negativo que la especie a determinar. Esta característica
del electrolito soporte es una condiciones operacional
Los potenciales aplicados son negativos, ya que la corriente que generan es de
baja intensidad y fácilmente medible. Si se usaran potenciales positivos podría
ocurrir que generen corrientes muy altas y eso haría que no se pueda o que
interfiera, al momento de hacer una determinación cuantitativa. La corriente alta
que se genera cuando se aplican potenciales positivos es debido a la oxidación
del agua.
Generacion del polagrama
A medida que se aplican potenciales (y se va midiendo la corriente) se produce
un reordenamiento de cargas en la superficie de la gota de Hg, se va formando
la doble capa (este proceso corresponde a la parte plana de la curva). En esta
fase el electrodo esta polarizado por carga.
A determinado potencial la especie se reduce y el electrodo queda polarizado
por concentración. La corriente de difusión es la corriente entre la corriente
limite (microelectrodo polarizado por carga) menos la corriente residual
(generada cuando el electrodo esta polarizado por carga, la corriente residual
es generada por el electrolito soporte).
En determinación cuantitativa I:kC, es decir, en este método se pueden usar
testigos, construir una curva de calibrado y expresar el resultado como
0 Xo
X ± tS
El grafico queda, según cada testigo y su correspondiente señal, como
intensidad de corriente vs concertación del testigo. La relación entre ambos es
lineal. Muestra y testigo se tratan de la misma manera.
De un polarograma se puede obtener mucha información, por ejemplo la
corriente de difusión y el potencial de media onda.
Potencial de media onda.
Esta definido como el potencial donde la intensidad de corriente es la mitad de
la corriente limite, es un parámetro cualitativo que es característico del analito
en un determinado medio. Depende entonces: del analito, del pH, del electrolito
inerte, de la temperatura, pero NO depende de la concentración.
43
Analisis Instrumental ИиФерИх
Permite tener una idea cualitativa para poder identificar o diferenciar distintos
analitos. Como se ve en la fotocopia, cambiando el pH o el electrolito soporte
pueden diferenciarse analitos en una mezcla.
Para aplicar la polarografia es fundamental que la especie sea electroactiva, y
se puede hacer siempre y cuando las condiciones operacionales estén bien
fijadas. Estas son: temperatura, reposo, electrolito soporte y ausencia de O
2
Voltamperometria hidrodinámica.
Hay dos tipos de voltampermetria hidrodinamica: la titulacion amperometrica y
los sensores químicos.
Una característica de estas técnicas es que se trabaja en agitación, es decir,
que la corriente de conveccion junto a la difusión serán parte de la medición. La
única corriente eliminada es la de migración, mediante el uso del electrolito
soporte.
Titulación amperométrica
Se basa en medir la intensidad de corriente de una solución a medida que se
van agregando alícuotas de un agente valorado trabajando a potencial
constante. Se miden corrientes de conveccion y de difusión.
Se usa una celda amperometrica. Esta consta de: tres electrodos (referencia,
auxiliar y el de trabajo, que en este caso se usa goteo de Hg), una bureta
desde donde se agrega el agente valorado y un vaso de precipitado que
contiene la disolución del analito y el electrolito soporte.
Tiene además un generador de potencial conectado.
El potencial constante que se aplica se determina haciéndole un polarograma a
toda las especies involucradas (analito, agente valorado y producto de
reacción). Cada especie tendrá su curva característica , siempre y cuando sea
electroactivo.
Una vez seleccionado el potencial se agregan las alícuotas del agente
valorado.
Los gráficos obtenidos son curvas que presentan en un punto un quiebre, ese
punto de quiebre es el punto de equivalencia. La forma de la curva depende de
cual sea la especie electroactiva.
Ventajas con respecto a la polarografia.
Permite hacer una determinación cuantitativa siempre y cuando una de las
especies sea electroactiva, mientras que en polarografia todas las especies
deben serlo. Esto permite, por ejemplo, titular un analito no electroactivo si el
agente valorado o el producto lo son.
Condiciones operacionales.
• Se debe trabajar en agitación.
• No debe haber O2 disuelto
Como electrodo se usa comúnmente el goteo de Hg, aunque a veces aplica
también el de disco de Hg.
44
Analisis Instrumental ИиФерИх
Sensores quimicos
Esta variedad de voltamperometria hidrodinamica permite hacer
determinaciones directas cuantitativas usando sensores químicos. Hay
sensores químicos:
• Para moléculas gaseosas (CO2 disuelto por ejemplo)
• Para moléculas orgánicas, también llamados biosensores (por ejemplo
para glucosa)
Definición de sensor químico.
Es un dispositivo que esta formado por un sistema de reconocimiento y un
transductor.
El sistema de reconocimiento también se conoce con el nombre de receptor.
Este receptor puede estar formado por membranas sensibles a gases o
también puede estar formado por microorganismo, enzimas inmovilizadas.
Cuando los sistemas de reconocimiento tienen caracteristicas biologicas se les
llama biosensores, sino se les llama simplemente sensores quimicos.
Los transductores pueden ser potenciometricos (como los electrodos sensibles
a moléculas), voltampermotricos u ópticos.
El transductor voltamperometrico tiene una membrana sensible a gases, una
disolución de ClK y un cátodo con disco de Pt. Cuando el O
2
difunde a través
de la membrana y al aplicar un determinado potencial este se reduce en el
cátodo generando una señal de corriente proporcional a la concentración de O
2
disuelto (son similares a los potenciometricos, solo varia el transductor, en vez
de tener un electrodo selectivo poseen uno voltamperomtrico porque se aplica
un potencial)
También hay sensores químicos que detectan moléculas orgánicas donde el
receptor es una enzima inmovilizada. En lugar de una membrana permeable
tiene una que contiene a la enzima. La membrana esta rodeada de un anillo de
plata que actúa como ánodo. Luego hay una membrana de diálisis y otra de
acetato (actúan como filtros) y un microeletrodo de Pt. Lo único que varia es la
membrana.
La reacción entre la glucosa y la enzima da acido gluconico y H
2
O
2
El H
2
O
2
a determinado potencial que se aplica, se oxida y genera una señal de
corriente proporcional a la concertación de glucosa.
Cuando se tiene un sistema óptico en ve de microeletrodos hay una fibra óptica
concentrada a una espectrofluorimetro o fotometro y en la membrana hay un
reactivo o colorante que reacción con el producto generando la señal óptica. La
señal viaja por la fibra óptica hasta un PMT.
En resumen:
Los sistemas de reconocimiento pueden ser: membranas sensibles a gases o
membrana sensible a compuestos orgánicos
Los transductores pueden ser: potenciometricos, voltamperometricos u opticos.
Método de redisolución
Este método consta de tres pasos: Electrodepocision, redisolución y
determinación mediante barrido lineal de potencial.
45
Analisis Instrumental ИиФерИх
Es una aplica de voltamperometrica que generalmente se usa para determinar
analitos en trazas. Cuando la concentración es muy baja, aplicando la
voltamperometria común no se lograría determinar.
El último paso corresponde en realidad a la voltamperometria común, así que
se puede decir que la clave de estos métodos consiste en dos pasos
fundamental: la eletrodeposicion y la redisolución.
Eletrodeposicion.
Se aplica un determinado potencial que logra que se reduzca a los analitos en
disolución (el potencial debe conocerse). Se aplica el potencial y se agita la
solución durante determinado tiempo. Con esto se logra que el analito se
preconcentre en las cercanías del electrodo.
Redisolución
Una vez preconcentrado el analito se detiene la agitación y se comienza a
aplicar potenciales cada vez mas negativos. Al ir aplicando esos potenciales las
especies vuelven a disolverse, pero cuando lo hacen, cada una empieza a
oxidarse y al oxidarse genera una corriente que se registra y permite
determinar cuantitativamente la concertación. Se obtiene un grafico de picos
(intensidad de corriente en función del potencial). Los picos tiene un punto
máximo, con ese valor y trabajando con testigo, se puede hacer una curva de
calibrado.
El microelectrodo que se utiliza tiene un plaquita cubierta con una solución de
Hg y es de carbono vitrificado. Se trabaja en un determinado tiempo de
aplicación, el potencial debe conocerse para asegurar que logre reducir a la
especie.
Los gráficos obtenidos son muy claros, lo que permite hacer determinaciones
fácilmente.
Ejemplo:
Si se tiene una mezcla de Pb y Cd, se busca primero el potencial de reducción
de ambos, se preparan testigos con Cd y Pb, juntos, y registrando los picos
máximos se hace la curva de calibrado
Grafico.
Conductimetria
Las técnicas conductimetricas permiten medir la conductividad de una solución
electrolítica y esa conductividad esta dada por todos los iones presentes en la
disolución. Ese valor de conductividad va a depender de todos los iones
presentes en la disolución. Esto quiere decir que dependerá de la movilidad de
los iones cuando se aplica una diferencia de potencial
En esta técnica no interesa lo que ocurra en la interfase electrodo disolución
sino lo que suceda en el sena de la solución cuando se aplica un potencial.
Se hace uso de la ley de ohms, que sirve para cualquier conductor eléctrico, en
este caso electrolitos disueltos.
La ley dice que la corriente generada o que fluye a traves de un conductor es
directamente proporcional al potencial aplicado e inversamente proporcional a
la resistencia que ejercen los electrolitos en disolución. [A]=[V]/[Ω]. Se puede
usar siempre que los potenciales sean bajos, del orden de 0 a 100 volts.
Si aplicamos potenciales bajos podemos aplicar la ley de ohms para calcular la
conductividad de la especies en disolución.
46
Analisis Instrumental ИиФерИх
Cuando se conoce el potencial aplicado y se aplica, los electrolitos se mueven
generando una corriente, la única variable que no se conoce es la resistencia.
A partir de la ley de omhs se puede despejar ese valor de resistencia R=E/i
E: potencial aplicado, i: corriente que ejercen los electrolitos.
El valor de la resistencia R depende de la distancia con que estén ubicados los
dos electrodos y va a depender también del área de los electrodos. (se
estandariza 1 cm de distancia y 1 cm2 de superficie de electrodo).
Quiere decir que ese valor de resistencia va a estar relacionado con el valor ρ
(ro) , resistencia especifica.
Quiere decir que cuando se quiere medir la conductividad lo que se esta
midiendo (G= conductividad eléctrica) es la inversa de la resistencia que se
esta generando en el seno de la solución. Reemplazando ro por L/a, queda
G=1/roxA/l, donde 1/ro es k , la conductividad especifica.
La conductividad de una solución depende de varios factores:
• Geometría del electrodo (área y distancia entre ellos)
• Tipos de iones presentes
• Concentración (la conductividad aumenta con la concentración, pero no
indefinidamente, a muy altas concentraciones diminuye porque la
electricidad se pierde en roces electroestáticos, fuerzas de van der walls,
etc)
• Temperatura: idem concentración
• Solvente utilizado
• Potencia que se aplique.
Conductividad: da una idea de cómo se mueven los iones al aplicar un
determinado potencial
Conductividad especifica: conductividad de un determinado volumen, un
centímetro cúbico. (es la conductividad que tiene lugar en el centímetro cúbico
de solución que se encuentra entre los electrodos, área 1 cm2, distancia 1 cm)
Conductividad equivalente: se representa con la letra lambda mayúscula, Δ,
indica o expresa la conductividad eléctrica de todos los iones presentes en la
disolución por un gramo equivalente de soluto Δ=k[1000/C] (concentración por
litro). Cuanto se mueven los electrolitos en un litro de solución.
La conductividad equivalente disminuye con la concentración, en agua y a 25
grados, en otros solventes el comportamiento puede ser diferente.
Este valor también se representa como la suma de la conductividades de las
especies en disolución Δ=Σ λ+ λ-.
En química analítica se trabaja a dilución infinita y esa conductividad
equivalente esta dada por la sumatoria de cada una de las especies en
disolución, pero no interfieren entre si.
La alta contribución de los H y los OH es muy grande ya que tiene un gran
tamaño, una capacidad conductora y una movilidad elevada.
Mediciones directas
Se pueden hacer determinaciones directas de conductividad, se puede usar en
varias cosas, por ejemplo:
47
Analisis Instrumental ИиФерИх
Para conocer la naturaleza de diferentes electrolitos que forman parte de una
sal inorgánica (entre isómeros de la sal), ya que tendrán diferentes
conductividades.
Ayuda a conocer la salinidad o el tipo de sales que componente diferentes
aguas (puede conocerse el tipo de electrolito, cualitativamente al menos).
Conocer la composición de sal de diferentes matrices (leche, gaseosas, etc
Para hacer estas determinaciones se utilizan celdas como las esquematizadas
en la fotocopia, (a,b y d). Constan de dos recipientes que tiene conectados a
ambos lados los electrodos separados una distancia constante y tienen un área
determinada, generalmente son de platino recubierto de negro de platino.
Se introduce la muestra y el nivel es el mismo (el nivel del volumen, esquema
a), en ese tipo de celda se hace una medida directa (requiere mucha muestra)
Sino se tiene mucha muestra se usa una celda del tipo b que es como copa
invertida que contiene los electrodos. Esta copa se introduce en la muestra (se
usa en mediciones in situ)
La celda d es una celda de flujo, la muestra circula constantemente, los
electrodos tienen forma anular y suelen usarse en cromatografía
Lo importante en estas determinaciones es controlar las variables
operacionales, temperatura, Tipos de iones presentes, Concentración, Solvente
utilizado, Potencia que se aplique.
Titulación conductimetrica
Para esta titulación se utiliza una celda como la indicada en el esquema c. los
electrodos están a igual distancia, hay un termómetro para asegurarse una
temperatura constante y una bureta con el agente valorado
Se basa en medir la variación de la conductividad eléctrica de una disolución a
medida que se agregan alícuotas del agente valorado, la conductividad varia
antes y después del punto de equivalencia y la forma de las curva va a variar
en función de los electrolitos en disolución y del tipo de titulación (hay
titulaciones acido base y por precipitación)
Dentro de las acido base están: las de acido y base fuertes, las de acido débil
con base fuerte, las de acido y bases débiles y generalmente se utilizan, como
en potenciometría, cuando la solución presenta turbidez o coloración y no se
puede aplicar un método colorimétrico.
También se usan mucho para determinar las constante de equilibrio de ácidos
o bases débiles
Es importante tener en cuanta que la concentración del agente valorante debe
ser similar o levemente superior a la del analito.
Cromatografía
Es una técnica de separación que se basa en separar diferentes analitos que
forman parte de una muestra para pode cuantificarlos posteriormente.
Clasificación y tipo de cromatografías
Teniendo en cuenta como esta formada la fase estacionaria y la fase movil (los
analitos estan en la fase estacionaria) se la puede clasificar en
48
Analisis Instrumental ИиФерИх
A)Cromatografía plana
En papel y en capa fina. Donde la fase estacionaria se coloca sobre una placa
o papel.
Este tipo de cromatografía generalmente se usa para análisis cualitativo.
La fase estacionaria son sólidos, en el caso del papel es un papel de filtro en el
que se siembra la muestra y luego se le hace pasar el solvente que revela la
macha y esta mancha se mide. La capa fina es de vidrio y silica y funcionan de
la misma manera.
B)Cromatografía en columna
Se divide en
Cromatografía gaseosa : dos tipos CG solida (CGS) y CG liquida (CGL), esta
ultima es mas usada.
En esta cromatografia la fase movil es un gas y la fase movil puede ser un
solido o un liquido impregando en un solido.
Cromatografia liquida
La fase movil es un liquido y la fase estacionaria es un solido o un liquido que
tiene diferentes propiedades:
• En algunos casos donde la F.E tiene características polares, la
separacion ocurre por un fenomeno de adsorcion
• En otros casos lo solidos son intercambiadores iónicos, dan lugar a la
cromatografia liquida de intercambiadores iónicos
• En otros casos los sólidos son tales que permiten la separecion en
funcion del tamaño de la moléculas, este tipo se denomina cromatografia
liquida de exclusión.
• Otros sólidos san lugar a la cromatografia liquida de adsorción, todo
depende de las características de la FE.
Siempre existe una cierta relación entre ambas fases. El soluto que va a
separarse tiene que tener una determinada constante de distribución entre
ambas fases K=Cs/Cm. La adsorción es un fenómeno de afinidad entre el
soluto y la fase estacionaria.
Lo que se registra es un cromatograma, un grafico que indica como se separan
los componentes de una mezcla en función del tiempo.
Es importante asegurarse una buena resolución de los picos que se van
obteniendo en el cromatograma. Los picos tiene que partir y volver a la línea de
base, con forma de campana de gauss totalmente definida.
El parámetro importante es el tiempo de retención. Con el tiempo de retención
se puede identificar al analito. Para conocer el tiempo de retención de un
analito se le hace un cromatograma a un testigo del analito.
El tiempo de retención es independiente de la cantidad de muestra ingresada y
siempre en un cromatograma cuando comienza la corrida, generalmente,
aparece un piquito chiquito a un determinado tiempo. Ese tiempo se denomina
“tiempo muerto” y corresponde a algún analito que no fue retenido.
Generalmente se toma como referencia.
49
Analisis Instrumental ИиФерИх
Para que exista una buena resolución de los picos, uno tiene que tener en
cuenta algunos parámetros:
Eficacia de la columna: esta variable esta relacionada con la constante de
distribución de cada una de las especies que constituyen la muestra. Brinda
una idea acerca de como cada especie se distribuye en la fase móvil y en la
fase estacionaria. Este parámetro de eficacia de la columna se indica con la
letra
V
1α-1
R= N

| `

. ,
L
V=
Tr
, donde L es la longitud de la columna y Tr el tiempo de retención
A partir del cromatograma, donde uno conoce Tr y L, puede determinar la
eficacia de la columna.
Factor de selectividad o separación: este es otro parámetro importante para
lograr una buena separación. Este factor relaciona las constante de distribución
de los distintos analitos. Se le llama α. Además da una idea de las posiciones
relativas de cada uno de los analitos. También se puede calcular a través del
cromatograma ya que
a a m
b b m
K (Tr -T )
α= =
K (Tr -T )
, Tm, y los tiempos de retención se
obtienen desde el cromatograma.
Poder de resolución: este parámetro tambien es importante para una buena
separación, se puede calcular a partir del cromatograma, su formula es:
1α-1
R= N

| `

. ,
, donde N es el numero de platos teóricos, y α es el factor de
selectividad.
El valor de R según sea, indica el poder de resolución. Por ejemplo R:0.75
muestra picos superpuestos, lo cual no permite saber que cantidad de analito.
representa el pico
En cambio un valor mas elevado de R, por ejemplo R:1,5 brinda una buena
resolución.
Un valor R de 1 tampoco da una buena resolución, los picos muestran una
mezcla.
A mayor R mejor es la resolución, para mejorar este valor se puede trabajar
con columnas mas largas, ya que dan mas tiempo de contacto entre el soluto y
la FE. En algunos casos esto mejor la resolución.
En función del tipo de columna (que se compran con determinada fase
estacionaria) uno debe saber elegir el tipo y la longitud para poder hacer una
buena determinación cuantitativa.
Cromatografia gaseosa
Hay de dos tipos:
Cromatografia gaseosa liquida, CGL, donde la fase móvil es un gas y la fase
estacionaria es un liquido.
Cromatografia gaseosa solida, CGS, donde la fase móvil es un gas y la fase
estacionaria es un sólido.
50
Analisis Instrumental ИиФерИх
Esta técnica se usa mucho para la separación de componentes volátiles. Los
analitos deben ser estables a la temperatura necesaria para su volatilización.
La CGS se basa en la separación de los analitos teniendo en cuenta la
diferencia de temperatura de volatilización de cada analito y en la capacidad
que tengan para ser adsorbidos por la fase estacionaria
La CGL se basa en la diferencia de volatilización de cada analito y en la
solubilidad de cada uno en los componentes de la mezcla.
Características que debe tener la muestra para poder se cuantificada por CG.
Los compuestos deben estar en estado gaseoso
No deben descomponerse a la temperatura de separación
No deben descomponerse ni adsorberse en la fase estacionaria (no tienen que
quedar retenidos)
Tiene que ser fácilmente detectables
Cromatrografo gaseoso
Tiene un tuvo de gas que contiene a la fase móvil (carrier), tiene válvulas
reguladoras que regulan la salida del gas (flujo constante y conocido)
El gas: debe ser químicamente inerte, su flujo debe ser constante y conocido.
Para elegirlo se tiene en cuenta:
que debe tener una buena afinidad con el analito,
Cual es la fase estacionaria
Que tipo de detector que se utilizara
Teniendo esto en cuenta se elige el gas, generalmente se usan N2, H2, CO2,
He, Ar.
La fase móvil se divide en dos caminos, uno entra a la columna cromatografica
y la otra va directo al detector.
El cromatógrafo tiene además un horno cuya función es termoestatizar la a la
columna, porque es fundamental que la columna donde se produce la
separación tenga la temperatura adecuada, pues de ella depende la
separación.
En uno de los extremos de la columna se encuentra el sistema de inyección de
la muestra, que consiste en una cámara de vaporización instantánea que al
momento de inyectar la muestra (con jeringas o con una válvula de inyección la
muestra se volatiliza enseguida. Una vez volatilizada, ingresa arrastrada por la
fase móvil a través de la columna. En es columna se produce la separación y
desde allí van llegando los distintos analitos, se detectan y luego se desechan.
Es fundamental controlar la temperatura de la columna, porque allí se produce
la separación , pero también es muy importante asegurarse que la temperatura
de la cámara de volatilización sea la apropiada
Las columnas son capilares, largos y de diámetro pequeño
Sistemas de inyección
Jeringas: la inyección debe hacerse rápido para una buena reproducibilidad y
resolución. No se usa mas este método.
Válvulas de inyección: un sistema de carga y descarga, loop, y recipiente
pequeño de volumen fijo.
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Analisis Instrumental ИиФерИх
Detectores
Detector de ionizacion en llama (FID).
Es el mas común y versátil
Se basa en la capacidad de conductividad eléctrica que tienen la fase móvil.
Esta formada por una quemador o mechero y en la parte superior de ese
quemador tiene un electrodo colector de electrones. Al llegar el gas inerte y el
analito se ionizan y generan electrones que son colectado dando lugar a una
corriente Es una corriente muy débil (10
-10
– 10
-12
A) por lo tanto necesita un
amplificador de corriente. Esa corriente es proporcional a la concentración del
analito
Detector de conductividad termia (TCD)
Este tipo de detector se basa en que un filamento de tungsteno (W) libera calor
cuando circula a través de el un gas.
El detector tiene una cámara en cuyo interior hay un alambre en forma de
espiral por donde circula corriente. Cuando a través de ese espiral circula el
gas , se ioniza, genera una corriente eléctrica y esta se detecta.
Detector de captura electrónica
Este tipo de detector generalmente se usa en instrumentos que se usan para
determinaciones medioambientales (de compuestos como halógenos, algunos
grupos Ar)
El ECD se basa en medir la disminución de la corriente generada entre dos
electrodos. Entre esos dos electrodos hay una placa de un metal radiactivo,
cuando el gas con el analito atraviesan esa placa el material radioactivo ioniza
al gas generando un flujo de electrones , ese flujo de electrones genera una
corriente que es la que se detecta.
Componentes de un cromatógrafo HPLC.
Tubos o recipientes donde se encuentra la fase móvil: son de materiales inerte,
generalmente vidrio. Los solventes mas utilizados suele ser metanol,
acetonitrilo, cloroformo o mezclas de ellos. Deben ser de muy buena calidad y
no deben interaccionar con la muestra.
Válvulas: permitir y regular la entrada de estos reactivos. La fase móvil debe
fluir en forma continua.
Bombas: generalmente un par, de presión, cuya función es impulsar la fase ovil
en forma controlada hacia una cámara de mezclado (nº4). Allí se mezcla y se
homogeneiza la fase móvil donde llega a una válvulas o sistema de inyección.
Allí convergen la fase móvil y la muestra. Se inyectan pequeños volúmenes de
muestra, que deben ser controlados, debido a que se busca una buena
reproducibilidad. Esa válvula de inyección es semejante a las válvulas
rotatorias vistas en cromatografía gaseosa. Algunos equipos requieren una
precolumna para reconcentrar la muestra. Esas columnas (ver fotocopia) de
HPLC son bastante distintas a las de cromatografía liquida convencional. Una
vez que se va produciendo la separación va llegando a un detector. Estos
detectores tienen la característica de tener una microcubeta, de volumen muy
pequeño, que va generando una señal eléctrica a medida que va pasando la
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Analisis Instrumental ИиФерИх
muestra. Puede ser cualquier detector, de cualquier tipo (común, arreglo de
diodos, conductimetrico, etc). La señal de la microcubeta es registrada por el
PLC o la computadora y se genera un cromatograma , que es igual al de
cromatografía gaseosa (señal versus tiempo).
Colector de fracciones: se utiliza cuando se empela la cromatografía de forma
cualitativa, para separar pero no cuantificar. En este tipo de cromatografía la
temperatura es un parámetro no muy importante. Se trabaja, generalmente, a
temperatura ambiente.
Aplicaciones.
Son muy amplias, mucho mas que las gaseosas. Se usa mucho en análisis
farmacéutico, para control de calidad de principios activos, en el campo de
bioquímica y medio ambiente , alimentos, etc. Es una técnica cara por las
columnas y el mantenimiento.
Cromatografía liquida
La cromatografía liquida se basa en la separación de diferentes analitos
presentes en una muestra, teniendo en cuenta la absorción selectiva de cada
uno en la fase estacionaria. En este caso como fase móvil tenemos una fase
liquida y como fase estacionaria generalmente un solido que puede ser:
aluminas, sílices o diferentes resinas de intercambio iónico, que dependiendo
de la relación carga tamaño de la especie, los componentes serán mas o
menos retenidos en la fase estacionaria y esto es lo que va a permitir la
separación de cada analito. Ocurre entre la fase estacionaria y los
componentes de la mezcla diferentes mecanismo que van a permitir la
separación. Estos mecanismo pueden ser absorción, intercambio iónico o un
mecanismo de reparto ente una fase y otra.
Cuando la fase estacionaria es orgánica tiene lugar un proceso de distribución
entre la fase estacionaria y la mezcla que lleva los analitos a separar
Si se usa una resina , esta puede estar cargada y cuando se produce la
separación se produce un mecanismo o reacción de intercambio iónico.
Cuando la fase estacionaria es un líquido que reencuentra soportado sobre un
polímero se produce un mecanismo de distribución o extrusión, dependiendo
de los tamaños de las partículas de esa fase estacionaria.
Es fundamental el tamaño de las partículas de la fase estacionaria
Cuando surgió la cromatografía liquida de alta resolución (HPLC o CLARA). Al
fase móvil es un liquido y la estacionaria es un solido. Se trabaja a elevada
presión (característica fundamental). La fase móvil se hace fluir trabajando a
elevadas presiones. En la convencional la fase móvil fluye por gravedad o
haciendo vacío. Luego apareció la cromatografía liquida de alta presión. Al
aumenta así la velocidad de la fase móvil mejoraron las columnas que se
utilizan. Son columnas de diámetros muy chiquitos (8-10 μm) y una longitud de
20-25 cms. Esto hace que el relleno sean partículas de diámetro muy pequeño
y esto mejora la eficacia de la columna para que tenga una buena resolución.
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Analisis Instrumental ИиФерИх
Componentes de un cromatógrafo HPLC.
Tubos o recipientes donde se encuentra la fase móvil: son de materiales inerte,
generalmente vidrio. Los solventes mas utilizados suele ser metanol,
acetonitrilo, cloroformo o mezclas de ellos. Deben ser de muy buena calidad y
no deben interaccionar con la muestra.
Válvulas: permitir y regular la entrada de estos reactivos. La fase móvil debe
fluir en forma continua.
Bombas: generalmente un par, de presión, cuya función es impulsar la fase ovil
en forma controlada hacia una cámara de mezclado (nº4). Allí se mezcla y se
homogeneiza la fase móvil donde llega a una válvulas o sistema de inyección.
Allí convergen la fase móvil y la muestra. Se inyectan pequeños volúmenes de
muestra, que deben ser controlados, debido a que se busca una buena
reproducibilidad. Esa válvula de inyección es semejante a las válvulas
rotatorias vistas en cromatografía gaseosa. Algunos equipos requieren una
precolumna para reconcentrar la muestra. Esas columnas (ver fotocopia) de
HPLC son bastante distintas a las de cromatografía liquida convencional. Una
vez que se va produciendo la separación va llegando a un detector. Estos
detectores tienen la característica de tener una microcubeta, de volumen muy
pequeño, que va generando una señal eléctrica a medida que va pasando la
muestra. Puede ser cualquier detector , de cualquier tipo (común, arreglo de
diodos, conductimetrico, etc). La señal de la microcubeta es registrada por el
PLC o la computadora y se genera un cromatograma , que es igual al de
cromatografía gaseosa (señal versus tiempo).
Colector de fracciones: se utiliza cuando se empela la cromatografía de forma
cualitativa, para separar pero no cuantificar. En este tipo de cromatografía la
temperatura es un parámetro no muy importante. Se trabaja, generalmente, a
temperatura ambiente.
Aplicaciones.
Son muy amplias, mucho mas que las gaseosas. Se usa mucho en análisis
farmacéutico, para control de calidad de principios activos, en el campo de
bioquímica y medio ambiente , alimentos, etc. Es una técnica cara por las
columnas y el mantenimiento.
Electroforesis
Esta técnica se basa en separar especies cargadas en función de las distintas
velocidades de migración cuando están bajo la influencia de un campo
eléctrico. Para que se pueda llevar a cabo la electroforesis es necesario contar
con un medio de separación o medio electroforetico que tiene la función de
actuar como conductor de la corriente y controlar la carga eléctrica de los
analitos a determinar . generalmente se utiliza como medio electroforetico
soluciones reguladoras o soluciones tampones. Las especies a determinar van
a una determinada velocidad de migración cuando son sometidas a un campo
eléctrico.
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Analisis Instrumental ИиФерИх
Quiere decir que esta velocidad de migración va a depender de la viscosidad
del medio electroforetico. Ambos dependerán de la magnitud de campo
eléctrico que uno aplique. También dependerá de la carga neta de cada
molécula. A mayor carga mas rápido se moverán hacia los electrodos y va a
depender también del tamaño de esas moléculas (mas pesadas, mas lentas).
Siempre se debe conocer el compuesto con el que se trabaja . originalmente ,
en 1930, aparecieron las primera características de electroforesis y se dividen
en electroforesis libre y de zona.
La libre se basa en utilizar tubos en forma de U y que tenían electrodos
conectados en los extremos. Esos tubos se los rellenaba con una solución
reguladora y se les inyectaba una solución de la muestra, se aplicaba un
campo eléctrico y comenzaban a separarse los componentes de tal manera
que el que tenia mayor velocidad era el primero que uno recogía y separaba.
Este tipo de electroforesis era muy limitada (pocas muestras, proteínas).
Luego apareció la electroforesis de zona, en este caso la movilidad de las
partículas se realiza a través de un compuesto solido impregnado de una
solución tampón que contiene a la muestra. Como soporte solido se utilizaba
acetato de celulosa, laminas de papel de filtro , algodón , lana de vidrio y allí ,
sobre ese soporte, se aplicaba un campo eléctrico lográndose la separación de
los analitos.
Ese campo eléctrico tiene que ser controlado. Si es muy elevado genera un
movimiento de convección en la superficie. Al aumentar la temperatura en esa
zona no se logra separar la especie correctamente y hace que la señal sean
bandas muy anchas.
Por eso estos tipos de electroforesis fueron dejando de usarse por ser lentas y
tener muchas desventajas . Así es que surge la electroforesis capilar.
Esta técnica utiliza para la separación tubos capilares que tiene la función de
actuar como celdas electroforeticas . con el empleo de estos tubos capilares
disminuye notablemente el efecto del movimiento por conveccion y permite
entonces una buena separación de los componentes, en formas mas eficiente y
rápida. La diferencia con la convencional es que la migración o separación de
especies se realiza cando están sometidas a una campo eléctrico de elevado
voltaje.
En los extremos del capilar se encuentran los electrodos , que son los
encargados de generar ese movimiento de migración dentro del capilar. Esa
velocidad de migración depende de la viscosidad de esa solución que depende
de la relación carga/tamaño, del tampón, etc.
A ese tubo , de pequeño diámetro, se le hace una ventana que se coloca cerca
del detector
La velocidad de migración , que depende de estos parámetros, también esta
relacionada con dos fenómenos que ocurren allí dentro la electromigracion y la
electroósmosis.
Electromigracion: ocurre debido a ese campo eléctrico aplicado que hace que
las partículas que están cargadas se muevan a una velocidad que es
proporcional al campo eléctrico aplicado. Se la llama velocidad electroforetica.
El campo depende de la longitud de capilar (Lc) y del potencial que uno aplica
(V)[Lc/V] . estas partículas se van separar , van a tener una determinada
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Analisis Instrumental ИиФерИх
movilidad electroforetica, y esta movilidad electroforetica esta relacionada con
la relación carga/tamaño de las partículas . se obtienen , haciendo una
electroforesis, un electroferograma. De este se puede conocer las velocidades
electroforeticas y las movilidades electroforeticas de cada especie que luego
permite la cuantificación de la especie. También se pueden obtener el tiempo
de migración de cada especie para después relacionarlo con velocidad y
movilidad electroforetica.
Se define como tiempo de migración al tiempo que tarda el solido en migrar
desde que se inyecta hasta que llega al detector. Va a estar relacionado con la
Lc , longitud del capilar hacia el detector Vd., con el voltaje aplicado y la
velocidad y movilidad electroforetica
Electroósmosis: este fenómeno se debe a que la acción de un campo
electroforetico , además de moverse, las especies cargadas también se mueve
la solución tampón (solución reguladora.)
Para que ocurra una buena separación tiene que ocurrir los dos procesos.
Electroósmosis dentro del capilar: generalmente los capilares son de teflón y
vidrio y los mas comunes de sílice fundida. Esos capilares de sílice fundida
tiene silanoles (SiOH). Estos silanoles , dependiendo del pH de esa solución
tampón se ionizan dando compuestos cargados negativamente y
positivamente. A medida que circula la solución tampón esas cargas negativas
atraen a las cargas positivas de la solución tampón y se forma primariamente
una capa fija o una capa de adsorcion, sobre esa capa fija se vuelve a formar
otra capaz mas difusa que es una capa móvil , encargada de que cuando se
aplica el potencial , llevar a los componentes de la muestra. Entre esas dos
capas , una fija y otra difusa, se genera por el propio movimiento de las capaz
un potencial denominado potencial Z. este potencial Z va a depender del
espesor de esa doble capa y a su vez la formación de esa doble capa va a
depender del especies en estudio. Como hay flujo también hay una movilidad
electrosmotica, μ
EO,
y lógicamente una velocidad electrosmotica.
Estos parámetros dependen del potencial que uno este aplicando. Para poder
calcular estos parámetros uno lo hace a través de los gráficos de señal en
función de tiempo (electroferograma). De este se puede sacar información
cualitativa o cuantitativa (la llamada screening es cualitativa.)
En este tipo de técnica uno puede aplicar un voltaje de tal manera que las
especies que están cargadas positivamente vayan hacia el cátodo y las que
están cargadas negativamente hacia el ánodo y uno ten el detector ubicado
cerca del cátodo.
También se puede invertir el potencial y de esa manera colocar el capilar cerca
del ánodo. Se invierte el voltaje y el flujo de las especies. Las cargadas
positivamente al electrodo positivo y las cargadas negativamente al negativo (lo
normal es al revés). Dependiendo del fin de uso así se logra una separación ,
sobre todo cuando el pH es muy acido.
Convencionalmente el positivo a negativo y viceversa. Esto es a pH>4 y el
potencial aplicado es normal. entonces se aplica un potencial inverso de tal
manera que el positivo vaya al positivo y el negativo al negativo, a pH<4.
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Analisis Instrumental ИиФерИх
Es fundamental controlar:
• pH de la solución tampón
• La fuerza iónica de la solución tampón (si es muy alta el flujo
electrosmotico disminuye, suelen usarse buffers con fuerza iónica
intermedia).
• Temperatura de trabajo: generalmente se trabaja a temperatura
constante, que puede variar entre 15 y 25 ºC
Manteniendo constante la temperatura se evita el efecto joule.
Efecto joule: aumento de temperatura en el capilar, que genera un
movimientote conveccion haciendo que aumente el flujo electrosmotico.
El capilar debe ser bien seleccionado
Cuanto menor es el diámetro del capilar favorece la resolución de los picos y
meno es el efecto joule que puede ocurrir adentro
Voltaje: voltajes adecuado, del orden de los Kvolts, generalmente a mayor
voltaje mayor separación.
Generalmente las fuentes de voltaje van de 5 a 30 Kvolts
Introducción de la muestra al capilar: la muestra puede ingresarse de dos
formas:
Inyección hidrodinámica: aplicando presión sobre el capilar inyectado un
determinado volumen de muestra o mediante una bomba de vacío, que
provoca un efecto de succión o por simple gravedad.
Inyección electrocinética: aplicar un determinado voltaje durante un tiempo
muy corto. Se programa el equipo para que aplique el voltaje y esto permite el
ingreso de la muestra al capilar.
Una vez que ingreso la muestra al capilar, esta circula dentro del capilar con la
solución buffer, llega al detector donde se registra la señal . el detector puede
ser un detector óptico, cualquiera de los vistos, o un detector electroquímico o
un conductimetrico.
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Analisis Instrumental

ИиФерИх

descarga colisionan con las moléculas del gas y provocan la excitación hacia niveles energéticos superiores de los electrones del gas. Cuando esos electrones vuelven a su estado fundamental lo hacen emitiendo radiación continua en la zona del UV. Tienen espectro continuo en la zona del UV Dentro de la zona del UV hay también lámparas de argon (Ar) , lámparas de xenón (Xe), lámparas de mercurio a alta y a baja presión. Estas también se usan en el UV pero son mas intensas que las anteriores. Particularmente la de Xe se utiliza en fluorescencia molecular. En la zona del visible se usa generalmente la lámpara de filamento de tungsteno o wolframio, este tipo de lámparas son como las que de los faros de auto. Es un tubo de vidrio al vacío con un filamento de tungsteno (wolframio) adentro. Cuando se hace una descarga eléctrica circula corriente que genera un calentamiento en el filamento de tungsteno y ese calentamiento provoca una emisión de radiación en la zona del visible en la zona del IR cercano. Alcanzan temperaturas de 3700K Hoy en día estas lámparas tienen en su interior una cierta cantidad de algún halógeno, generalmente I2 gaseoso, con el objeto de aumentar la vida útil de la lámparas, dado que las descargas pueden fundir o gastar el filamento. Esta aumenta porque el I2 al ponerse en contacto con el tungsteno en estado gaseoso se une a este (I2W), y lo vuelve a unir al resto del filamento, por eso duran muchísimo más. Eso además hace que el máximo de emisión se desplace hacia la zona del visible . El IR se divide en tres regiones: cercano, medio y lejano. • En el cercano se puede usar la lámpara de Tg (Tungsteno) • En el medio y en el lejano las lámparas son de sólidos inertes que se calientan a temperaturas entre 1500 y 2000 K. Fuentes de línea Las FER de línea se caracterizan porque emiten un número limitado de bandas muy estrechas de radiación y cada una de esas bandas de radiación abarca un intervalo muy pequeño de longitudes de onda. Se dice que emiten líneas, un rango muy chiquito de longitudes de onda. En los gráficos se ven líneas (bandas muy estrechas). Este tipo de fuente se utiliza en las técnicas que involucran átomos (absorción atómica, en emisión atómica no se usa FER) La mas usada es la lámpara de cátodo hueco, otra es la lámpara de descarga sin electrodos. LASER Hay un tercer tipo de fuente, ni continúa ni de líneas, que es el láser. El láser es una fuente de energía radiante muy intensa, que emite radiación en un ancho de banda muy estrecho pero en forma continua. Son fuentes que presentan una elevada resolución y suelen usarse mucho en la técnica Raman, absorción molecular e IR

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Conformación de una fuente láser Medio activo, componente principal de la fuente, puede ser de un cristal sólido (generalmente rubí), un semiconductor (generalmente arseniato de galio), colorantes orgánicos o esta formado de un gas, generalmente argon. El tubo es bombardeado por una fuente externa que excita a los electrones hacia niveles superiores, cuando vuelven hacia el estado fundamental emiten energía. Los espejos reflejan la radiación emitida , generando cascadas de electrones y esto hace que la intensidad de la radiación emitida sea mayor. El haz que emerge de esa fuente es una radiación muy potente. Cualquier tipo de las fuentes antes vistas forman parte del primer dispositivo de un instrumento , según la técnica se usan diferentes lámparas. Selector de banda Dentro de los SB tenemos los filtros y los monocromadores • • Filtros: de absorción y de interferencia Monocromadores: los de redes y los de prismas

Función del SB: aislar un rango de longitudes de onda lo mas estrecho posible, es decir que esa radiación que emerge (Po) tiene que ser lo mas monocromática posible para que solamente emita un rango muy chiquito de longitud de onda (ley de Lambert-Beer, el rango es λ + Δλ). La luz salida de la FER es policromática, se la hace lo menos ancha posible. Los instrumentos mas sencillos usan filtros Ancho de banda efectivo: esta relacionado con la resolución (por ejemplo 50nm es mucho). Hoy en día algunos instrumentos tienen un ancho de banda de 0,1 nm . Los filtros por lo general tienen anchos de banda relativamente grandes, sobre todo los filtros de absorción. El ancho de banda efectivo da una idea sobre la calidad del SB. Hay dos clases de SB: filtros y monocromadores Conformación de los filtros de absorción. Son dos vidrios coloreados que tienen la finalidad de absorber la radiación y un vidrio central, en un soporte plástico. La radiación que no fue seleccionada es transmitida generando el ancho de banda seleccionado, generalmente se usa en la región del visible. El ancho de banda de estos filtros va de 20 a 250 nm Filtros de interferencia (posteriores): se usan tanto en la región del UV como en la región del visible, en algunos casos en la región del IR y proporcionan anchos de banda más estrechos que los anteriores. Tienen la característica de generar un ancho de banda efectivo en función de la interferencia óptica. Generalmente como material dieléctrico F2Ca o F2Mg Una radiación incidente coincide con la radiación siguiente que incide en el material dieléctrico, se suman, se ponen en fase y así sucesivamente de tal manera que la emergente es estrecha y muy intensa. Interferencia óptica constructiva. Las restantes radiaciones pasan, se pierden. Hoy en día son los más usados.

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Monocromadores: se tienen los de redes y los de prisma. Tienen diferentes resoluciones Los instrumentos que tiene monocromadores permiten hacer un barrido espectral, por lo tanto se puede hacer un curva espectrometrica. Conformación de los monocromadores Constan de una rendija de entrada por donde penetra un haz de radiación policromatica, es la encargada de seleccionar. Además tiene dos espejos o lentes colimadores que tienen la función de generar, producir, un haz de radiación paralelo, tiene además un sistema dispersivo que puede ser una red de reflexión o un prisma que tiene la función e dispersar a la radiación en sus longitudes de onda individuales. Hoy en dia la mayoría usan redes de difracción, los prismas son mas caros. Tiene tambien una ventana o rendija de salida que selecciona o aisla el ancho de banda deseado. Redes de Reflexion El haz incide en el espejo colimador, que genera haces paralelos que inciden en el sistema dispersivo (por ejemplo una red de reflexión. El Angulo de incidencia es distinto al Angulo inicial) cuando la radiación incide en la red se produce un fenómeno de difracción (fenómeno que genera la dispersión de la radiación) y esa radiación va contra el segundo espejo y sale por la rendija de salida, siendo lo mas estrecha posible. La cantidad de dientes de la red varia la aliad, van desde 300 a 2500 dientes. Prismas En los instrumentos que tiene prisma también hay una rendija de entrada, una lente colimadora , pero el fenómeno de dispersión ocurre por un proceso de refracción (desvío de la dirección). Luego pasa por una lente focalizadora (movil) hacia la ventana de salida. Hoy en día los instrumentos tienen redes. El material del prisma varia según el uso, los prismas de cuarzo se usan en el UV y de vidrio se usan en el visible, lo cual constituye una limitación. Cubetas Hay de muchos tipos y formas, según la región de trabajo (redondas, cuadradas, de flujo, etc.) En el UV generalmente las cubetas son de cuarzo o sílice fundido, en la región del visible pueden ser de vidrio o plástico. En el IR son de un vidrio especial o cubetas que tienen una ventana de NaCl cristalino. Se seleccionan según región. Las cubetas no deben tener imperfecciones y deben estar limpias. Detectores Dispositivos que tienen la función de detectar la energía radiante que les llegue y traducirla en una señal que sea fácilmente medible, esta señal generalmente es eléctrica. Deben tener ciertas características: deben ser estables e un amplio intervalo de longitudes de onda, una elevada sensibilidad en la región de trabajo, además deben presentar una elevada relación señal-ruido (R=señal/ruido). La señal eléctrica que se genera en el detector debe ser

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proporcional a la potencia de radiación que llega al detector. Tienen que dar una respuesta rápida. Dentro de los detectores hay dos grupos • Fotoeléctricos: de tipo A y B • Térmicos Fotoeléctricos. Son los que se utilizan en el UV , en el visible y en el IR cercano Térmicos: se respuesta se basa en el poder calorífico que brinda la radiación (esto se vera mas adelante),se utilizan generalmente en la zona del IR. Dentro de los fotoeléctricos se tienen dos tipos, en general los fotoeléctricos, el A y el B se basan en que tiene una superficie que tiene la capacidad de absorber la radiación electromagnetica, esta absorción genera la emisión de ey entonces da lugar a una fotocorriente En el primer grupo, llamado A la absorción de energía radiante provoca la emisión de electrones y genera una fotocorriente desde la banda de conducción hasta la banda de valencia y eso también genera una fotocorriente. Grupo A – tres tipos de detectores característicos. • Celda fotovoltaicas • Fototubos de vacío • Tubos fotomultiplicadores Grupo B • Fotodiodos • Fotodiodos dispuestos linealmente Celda fotovoltaica: generalmente se utilizan en instrumentos muy sencillos que se usan para mediciones directas (de campo), en la región del visible y esta formado por un tubo de vidrio que en su interior tiene un electrodo de Cu, sobre la superficie de ese electrodo se deposita un material semiconductor, generalmente selenio, y a su vez se lo recubre con un baño de Ag o Au. Cuando incide la radiación que proviene de la fuente de energía radiante, se produce una promoción, una excitación de los electrones del material semiconductor, se genera una corriente de e-, esta corriente es recolectada por el electrodo y es la que se mide, es proporcional a la cantidad de radiación que incidió. Fototubos de vacío: de los equipos más viejos. Ver fotocopia. Es un tubo de vidrio al que se le ha hecho vacío y que en su interior tiene un cátodo semicilíndrico y un alambre que actúa como ánodo, ese cátodo esta recubierto por un material fotosensible que cuando llega la radiación se genera una emisión de electrones que se dirigen al catodo generando una foto corriente y esa fotocorriente es proporcional a la radiación incidente. Esa fotocorriente es muy débil, estos instrumentos necesitan tener un amplificador. Tubos fotomultiplicadores: también se los llama PMT. Están formados por un tubo de vidrio al vacío que contiene un cátodo recubierto con un material fotosensible y un ánodo. La diferencia con el tubo al vacío es que entre el ánodo y el cátodo hay un conjunto de 9 o 10 plaquitas recubiertas por un 5

Registrador Es uno dispositivo que decodifica la señal que llega y permite su lectura. 1 segundos de distintas longitudes de onda. Este tipo de instrumentos.que dan lugar a una fotocorriente. en aproximadamente 0. con el objeto de aumentar la capacidad conductora del material. Cuando se le agrega (dopaje) As.Analisis Instrumental ИиФерИх material fotosensible que se denominan dinodos que tienen la función de emitir o amplificar la emisión de electrones. incorporados o no. por tener este tipo de detector . La respuesta es muy rápida . Generalmente como el material semiconductor se suele utilizar silicio o germanio . quiere decir que cuando se van a fabricar el detector . Es el único instrumento que la radicación policromatica incide sobre la muestra. Esquemas Existen diferentes tipos de instrumentos: I-Simple haz II-doble haz (b) en el espacio III doble haz temporal (c) 6 . estamos frente a un semiconductor tipo n. Este tipo de material semiconductor tiene la característica de que cuando incide radiación electromagnética provoca la promoción de estos electrones que adquieren la energía suficiente como para romper el enlace que los mantiene en una estructura rígida y pasan a la banda de conducción. se generan huecos positivos y negativos por aumento de temperatura. Con este tipo de detector se puede hacer un barrido espectral muy rápidamente . Esos dinodos están colocados de manera tal que uno presenta potenciales menos negativos que el que precede. Grupos B Los otros dos tipos de detectores se basan en que cuando absorben la radiación electromagnética provocan la promoción de electrones de la capa de conducción a la banda de valencia. Fotodiodos dispuestos linealmente: consiste en una serie de fotodiodos tipo n-p (200. Este tipo de detector se utiliza en instrumentos que se llaman “arreglo de diodos”. lo cual intensifica la señal haciendo innecesario el uso de amplificadores. el fotodiodo. cualquiera de los dos tienen cuatro electrones en la capa de valencia .250 hasta 3000-3500 fotodiodos). colocan ese material semiconductor y a su vez le agregan como impurezas en algunos casos Galio y en otros casos Arsénico.más que los anteriores (nanosegundos). Este dispositivo esta colocado sobre una placa de vidrio o de cuarzo y todo el conjunto esta dentro de un recipiente al vacío. Fotodiodos: están formados por unos dispositivos que esta recubierto por un material semiconductor. no usan SB de tipo monocromadores. digitales. pueden ser analógicos. cuando se le agrega Galio es de tipo p. En algunos casos se requiere amplificador. sino que tiene espejos como sistema dispersivo. generando huecos positivos y e.

Estas fluctuaciones se deben mayoritariamente a cambios de voltaje en la FER • Permite hacer un barrido espectral Arreglo de diodos Hay un tercer grupo de instrumentos llamados instrumento multicanal o arreglo de diodos. No conviene usarlo para hacer barrido espectral porque no hay forma de compensar las fluctuaciones de la FER. no para hacer curva espectrometricas Doble Haz: Se caracterizan en que cuando la radiación emergente del SB se divide en dos haces. las señales van llegan a un único detector. permitiendo obtener mucha información rápidamente. la radiación de la FER que pasa por la cubeta no perdería potencia. La cuña óptica disminuye la potencia de la radiación que pasa través de la cubeta de referencia para tener una intensidad semejante a la que proviene de la muestra. Son instrumentos que tienen una conformación óptica muy sencilla pero tienen la característica de que pueden o permiten detectar en forma simultanea lectura en toda la región del espectro. Sino existiese la cuña. 7 . Registrador. cuyas señales convergen a un amplificador del tal manera que se compensan para formar una sola señal que llega al registrador. Doble haz temporal: a la salida de la FER hay una espejo rotatorio que hace que la radiación pase a través de la cubeta de referencia y de la muestra alternativamente. Ventajas del instrumento de doble haz: • Las posibles fluctuaciones generadas por el ruido del instrumento pueden ser compensadas ya que existen dos haces. Cubeta. Son instrumentos sencillos. Cuando se calibra habría que hacerlo con el blanco para cada longitud de onda. se amplifica y registra. se usan para mediciones puntuales. La conformación esa una FER. Detector. Se dice simple haz porque de la FER. Hay dos cubetas (una de referencia donde va el blanco y otra con la muestra) Hay dos tipos Doble haz en el espacio: la radiación se divide en dos y de manera simultanea atraviesan la muestra y la cubeta de referencia.Analisis Instrumental ИиФерИх Simple Haz: Es el mas sencillo. llega a la muestra solamente un haz de radiación. es poco practico. luego se pone la cubeta y se lleva a 100%T. SB. En cambio si disminuye la potencia e la muestra entonces la cuña achica la diferencia entre las intensidades de las señales. de tal manera que una parte de la radiación pasa a través de una cubeta de referencia y la otra parte a la través de la muestra. Registra lecturas en todas las longitudes de onda. Este tipo de instrumento se calibra con blanco (de reactivo o agua destilada) El 0%T es automático. cada una llega a su detector.

Los electrones tratan siempre de deshacerse de ese exceso de energía volviendo al estado fundamental. Fundamento de la tecnica Al aplicar radiación se excita a las moléculas de tal forma que los electrones saltan a estados de energía superiores Cuando una molécula es excitada absorbe energía. vibran juntos y se va perdiendo parte de esa energía hasta llegar a un nivel menor de energía 8 . que le permite a los electrones absorber energía. Conversión interna: es un proceso intramolecular. En la quimiluminicencia las moléculas son excitadas a través de una reacción química. Es lo que se mide No radiante: generalmente se da por pérdida. Este proceso que se debe a choques entre moléculas excitadas y el solvente. es decir. Esta energía en exceso se puede perder en diferentes procesos: • • Radiantes: se pierden o absorben en forma de foton . En ambos casos la excitación genera la señal analitica. hν. Procesos luminiscentes • • • Fluorescencia molecular Fosforescencia molecular Quimioluminiscencia Son técnicas de emisión. Son tecnicas mas selectivas. Las primeras dos también se conocen como tecnicas fotoluminiscentes.Analisis Instrumental ИиФерИх Esta formad por una FER seguida por la cubeta de la muestra. luego un SB fijo y el detector que en este caso son diodos supuestos linealmente (muchos diodos n-p soportados por un chip) La radiación que incide sobre la muestra es policromatica. ocurre entre estados vibracionales de un mismo nivel electrónico. ya que no todas las moleculas tiene propiedades luminiscentes. Es tan rápido el proceso que la radiación policromatica no alcanza a destruir la muestra (en caso de que la muestra sea plausible de ser destruida por la radiación). Son técnicas donde las moléculas son excitadas por la acción de una fuente de energía radiante. transferencia o disipación de calor al medio Procesos no radiantes Relajación vibracional. ocurre cuando dos niveles electrónicos están muy próximos y generan un solapamiento de los niveles vibracionales. una vez que la atraviesa el SB dispersa la radiación en sus diferentes longitudes de onda que llegan a los diodos.

Disociacion: ocurre cuando la energía es muy alta y rompe los enlaces de la molecula. Se puede definir fluorescencia molecular como la diferencia de energía desde el nivel vibracional mas bajo del estado excitado hacia cualquier nivel vibracional del estado fundamental. es que la fluorescencia ocurre entre niveles electrónicos de igual multiplicidad (singulete. que se forma con energía transitoria. Se rompen enlaces y esa molécula original ya no es la misma. Fosforescencia molecular Existe otro proceso no radiante que se llama cruce entre sistemas Cruce entre sistemas: este proceso no radiante suele darse cuando por algún motivo (por ejemplo un solapamiento entre diferentes niveles vibracionales de estados electrónicos excitados singulete-triplete) los electrones pasan de un estado excitado .Analisis Instrumental ИиФерИх Pre-disociacion: se debe a que la energía involucrada en el proceso de conversión interna puede. donde los electrones tienen los spines desapareados. Estos procesos ocurren muy rápido (de 10-5 a 10-9 segundos) La longitud de onda aplicada en estas tecnicas. La fluorescencia es un proceso también muy rápido (10-6 a 10-10 segundos) Una de las características de la fluorescencia molecular. de la ecuación E:hν/λ se deduce que a menor longitud de onda mayor energia y viceversa. inestable. La molecula se excita en el UV y emite en el visible. es porque hay perdida de energia por estos procesos no radiantes. por el principio de Pauli. en algunos casos. no siguen el principio de Pauli. Entonces si la molecula absorbe en el UV y emite en el visible. triplete. A longitud de onda bajas (UV) puede ocurrir que las moléculas sufran un proceso de disociación molecular. desde el punto de vista del proceso. vuelven a su estado fundamental emitiendo energía (fotones) . 9 . con lo cual no tiene lugar el proceso de absorción. Romper algún enlace y entonces el analito pasa a ser otro compuesto. Fluorescencia molecular En caso de producirse relajación vibracional y conversión interna. que es la que produce la absorción depende de los factores anteriores. electrones con spines apareados). singulete. provocar una predisociación de la molecular. Pero aun en este estado triplete puede haber un exceso de energía que se pierde por relajación vibracional de manera que los electrones queden en el nivel vibracional mas bajo de ese estado triplete y de allí vuelvan al fundamental emitiendo energía. una vez que todos los electrones están en el nivel vibracional mas bajo del nivel electrónico excitado. a un estado excitado. A este proceso radiante se lo llama fluorescencia molecular.

a mayor longitud de onda menor ΔE λ Teoricamente toda molecula que absorbe energia puede ser luminiscente. Kpd y Kd están relacionadas con la estructura mientras que Ices y Kci dependen del medio (solvente. Ese proceso involucra la transferencia de energía entre las moléculas que son excitadas y las moléculas del solvente. se necesitan dos selectores de banda. que la longitud de onda de emisión sea mayor que la de absorción. para estimar o determinar esto existe un parametro “rendimiento cuantico” que esta presente en ambas técnicas ΛE=hν = h Φf = Kf Kf -KCES +KIE +KCI +KPD +KD Este parámetro nos da una idea cualitativa para poder interpretar como pueden influir factores estructurales y el entorno químico en la intensidad de fluorescencia o fosforescencia. Φf es un valor entre 0 y 1. c(luz) . Ambas técnicas requieren una longitud de onda de excitación y necesitan una longitud de onda de emisión. handbooks. Las longitudes de onda tienen la relacion λexciatacion < λemision . pH. Por eso se puede estimar las fluorescencias (si son fuertes o no.Analisis Instrumental ИиФерИх Este proceso se denomina fosforescencia y en general toma un poco mas de tiempo que la fluorescencia (de 10-4 a 10 segundos) La principal diferencia con la fluorescencia es que la fosforescencia ocurre entre niveles electrónicos de diferente multiplicidad (triplete) Conversion externa Puede darse otro proceso no radiante que es el proceso de conversión externa. es decir. etc. Es decir. Esta en manuales. Ese proceso provoca una disminución en la intensidad de fluorescencia y se conoce con el nombre de QUENCHING La disminución en la intesidad tambien puede deberse a la disociación y predisociación. cualitativamente) 10 .). etc. Esta relacionada con medio y estructura. • Kf= velocidad relativa de fluorescencia • Krv: relajación vibracional • Kces= cruce entre sistemas • Kce=conversión externa • Kci=conversión interna • Kpd= pre disociación • Kd= disociación Una molecular tiene características de ser fluorescente si Kces es mínimo o nula y Kci también. Este parámetro relaciona las distintas velocidades relativas de los distintos procesos radiantes y no radiantes. Kpd y Kd deben ser nulas..

Determinadas moléculas como por ejemplo los hidrocarburos no aromáticos. lo cual disminuye la intensidad. en el UV lejano. por si solo tiene características fluorescentes. Generalmente las molecular que presentan fluorescencia son moléculas que presentan transiciones π→π* y las que presentan fosforescencia son moléculas con transiciones n→π* . que tiene trancisiones π→π* . Los hidrocarburos aromáticos. A menores longitudes de onda. generalmente tienen características fluorescentes. Rigidez Es importante la estructura en el sentido de la rigidez. Si se mueven están favorecidos los choques entre moléculas y por lo tanto la conversión interna. fundamentalmente cuando los sustituyentes son halógenos. ИиФерИх La emisión siempre ocurre en la región del visible Factores que afectan las intensidades Tipo de transiciones Uno de los factores fundamentales para que una molécula sea fluor o fosforescente es el tipo de transiciones que presenta. por ejemplo. el grupo –CH2. Entre fluoreno y bifenilo. También hay moléculas que tiene grupos C=O o algún heteroatomo como N. la energía es tan alta que puede darse el proceso de la disociación de la molécula. en este caso son moléculas que tienen transferencia σ→σ* Es importante conocer la estructura de las moléculas. por ejemplo el benceno. con dobles enlaces. El entorno químico también es importante Temperatura.en el fluoreno le brinda mayor rigidez haciendo que tenga mayor eficiencia que aquellas que no son rígidas (se mueven). Debe ser óptima de tal manera que se eviten choques entre moléculas y se vean favorecidas la conversión externa.Analisis Instrumental • • Φf cercanos a 1 = mucha fluorescencia o fosforescencia Φf cercanos a 0 = poca fluorescencia o fosforescencia. En los aromáticos halogenados se produce conversión externa y eso disminuye la intensidad. Se sabe que generalmente para las moléculas que tengan este tipo de transiciones se parte de que la energía de excitación ocurre a longitudes de onda partir de 250nm hasta aproximadamente 380nm. Como a veces esto es impredecible (si tiene o no características de fosfo o fluorescente) se hacen siempre determinadas consideraciones. Susituyentes La presencia de sustituyentes pueden variar la intensidad de fluorescencia. Es decir en la región del UV. S donde predominan las transposiciones n →π* y esto hace que la molécula tenga características fosforescentes. ya que esto disminuye la intensidad de fluorescencia 11 .

se llaman espectrofluorimetros y permiten hacer espectros (barridos de longitudes de onda). pero uno fija las longitudes de onda con las que va a trabajar (λex y λem) Hay otros instrumentos que tienen monocromadores de red. es decir que tienen como selectores de banda filtros. Uno puede obtener con este instrumento λex y λem. O2 y atomos pesados Otro factor a tener en cuanta es la presencia de átomos pesados. FER Siempre hay una FER que provoca la excitación de las moléculas. Se debe elegir el solvente adecuado para evitar que estos átomos pesados favorezca la conversión externa y disminuya la fluorescencia (por ejemplo cuando se usa como solvente bromuro de isopropilo). un dispositivo (selector de banda).Analisis Instrumental ИиФерИх Solvente: debe ser el adecuado: si se usa un solvente muy viscoso las colisiones disminuyen lo que puede favorecer la fluorescencia. o en algunos casos monocromadores. El fluorimetro es un instrumento sencillo. un lugar donde se pone la muestra (cubeta) y a 90º respecto de la radiación incidente tiene colocado otro selector de banda y luego viene el detector Hay dos selectores de banda porque se necesita una longitud de onda de excitación y de emisión La mayoría de los equipos que se utilizan en el laboratorio son fluorimetros . en algunos casos la presencia de O2 puede generar una oxidación de las moléculas y esto hace que cambie la estructura de las moléculas y disminuya la intensidad de fluorescencia Todas estas variables y la estructura molecular se deben conocer y tener en cuenta al hacer una determinación cuantitativa. el espectro que se obtiene es una banda. es decir se hacen dos curvas espectrometricas. esta puede provocar una re orientación de las moléculas del solvente alrededor de las moléculas que uno quiera excitar y esto puede provocar elevación de la señal de flor o fosforescencia pH: siempre es importante controlarlo. Otro factor es la presencia de O2 disuelto. Las FER que se utilizan en la técnica de fluorescencia y fosforescencia molecular son fuentes continuas. También es importante conocer la polaridad del solvente. Son aquellas que emiten en un amplio rango de longitudes de onda. INSTRUMENTACION EN TECNICAS FLUORESCENTE Y FOSFORESCENTES. 12 . Hay especies que son fluorescentes a cierto pH y a otro no. Tiene una FER . de simple haz.

lámpara de Hg a baja presión y la lámpara de Hg a alta presión. Cualquiera de las tres son tubos de vidrio donde adentro hay gas a baja presion (salvo de la Hg a alta presion) y tienen filamentos de los distintos componentes. Se necesita otro selector de banda para que al detector solo llegue la λem. El detector esta colocado a 90º respecto de la radiación incidente porque solo se necesita la señal de fluorescencia. PMT. En los primeros fluorimetros se utilizaba la lámpara de Hg a baja presión. Cubetas Las cubetas son de cuarzo o de vidrio. Con dos diferencias Que esa lámpara actúa en forma de flash. va irradiando la muestra en forma alternada. Hay algunas que combinan la de Xe y la de alta presión. pero la característica que tienen que presentar es que todas las caras sean transparentes (a diferencia de las de absorción molecular). Dentro de las FER mas comunes utilizadas están: lámparas de Xe. si bien era continúa tenia determinadas longitud de onda de a las que emitía con mayo intensidad.Analisis Instrumental ИиФерИх En las lámparas usadas en estas técnicas la potencia que emiten tiene que ser de mayor intensidad que en absorción molecular. no la relación P/Po.Esto se debe a que lo que vamos a medir es un señal de fluorescencia y esta se emite en toda dirección y sentido. De tal manera que después de un determinado tiempo uno pude medir la intensidad de fosforescencia Como selectores de banda tienen exactamente los mismo y las cubetas también son las mismas. Instrumento en fosforescencia En fosforescencia molecular el instrumento tiene muy pocas diferencias. esta tenia la característica que emitía a longitudes de onda definidas. Este es estable. La lampara de Hg a alta presion emite lineas intensas de radiación en forma continua. Hoy en día la mayoría de los equipos tiene lámpara de Xe. Detectores Los detectores pueden ser de cualquiera de los vistos de tipo fotoelectrico. La FER también es continua . por lo que el espectro es mas continúo y mas uniforme. Colocando el detector en cualquier otro ángulo se asegura que lo que llega al detector es solo la señal de fluorescencia y no hay perdida por absorción. Cuando se genera la descarga electrica emiten radiación. Esto es porque la fosforescencia tarda un poco mas en ocurrir que la fluorescencia. esto hacia que esas lámparas fueran inestables. Los equipos mas caros usan láser como FER Selector de banda Los selectores de banda que puede tener los fluorimetros son filtro de interferencia. diodos dispuestos linealmente. generalmente lámpara de Xe. el espectrofluorimetro tiene monocromadores de red. Los detectores también son los mismos 13 . etc.

solos no son luminiscentes). Cualquiera de la tres técnicas son sensibles selectivas y permiten o tienen limites de detección muy bajos . F=K´(Po -P) Donde K es una constante que depende de la eficiencia cuantica de la molecula. Podemos plantear.303εbc ) 3  F=K´Po  +  1! 2! 3!     Si la A es menor que 0. Esto ocurre cuando trabajamos con soluciones diluidas y permite hacer determinaciones cuantitativas. pero en este caso se debe trabajar con medeos organizados. Si recordamos la ley de Beer: P P ®   =10-εbc Po  Po  Si reemplazo y saco factor común Po y luego desarrollando la serie de Taylor: A=-log F=K´Po (1-10-εbc )  2. lo que conduce a pendientes mas elevadas. En otro casos se trabaja a T ambiente para hacer determinadas fosforescencias . se aplica burbujeando). Si eso ocurre podemos decir que: F= K´Po 2.303εbc ( 2.303εbc ) 2 ( 2. es decir que podemos determinar pequeñas cantidades de muestras. La fosforescencia es muy sensible y selectiva. Esta tecnica es mas sensible que la absorción molecular ya que se trabaja en rangos de A muy chicos. 14 .303εb c=Kc 1 4 2 44 4 3 K La fluorescencia molécular es mas sensible que la absorción molecular por lo que se pueden medir valores muy chicos de señales dado que a bajas concentraciones la relación es lineal. La intensidad de fluorescencia es proporcional a la intensidad de radiación incidente. inorgánicos (en este caso se los debe quelar primero.Analisis Instrumental ИиФерИх Los equipos de fosforescencia vienen provisto de un dispositivo que permite trabajar a temperaturas muy bajas (T de N2 liquido. Suele utilizarse como medeos organizados las α y β dextrinas. Esto es para evitar que en algunos casos la señal de fluorescencia sufra alguna disminución o degradación. La fluorescencia molecular se aplica para compuestos organicos.05 (soluciones diluidas) los términos elevados al cuadrado y al cubo y demás se hacen despreciables. Efecto de la concentración en la intensidad de fluorescencia Relación entre la señal de fluorescencia con respecto a la concentración.

es en forma indirecta. la emision ocurre en el visible y en el IR Puede ser directa o indirecta Directa: un precurso reacciona con un oxidante fuerte. Luminometro Solo consiste en tener un recipiente donde . PMQ para una tecnica luminiscente: 1) Fijar las condiciones operacionales Seleccionar mediante una curva espectrometrica las longitudes de onda de excitación y emisión y calibrado: el instrumento se calibra a 0 intensidad con el blanco de reactivo y al 100 con el testigo de máxima concentración.Analisis Instrumental ИиФерИх muestras ambientales. Se necesita un recipiente donde se coloca la muestra y un detector (solo detectar emisión de radiación que se genera). 95% C = X ± tS x0 → porque es una curva de calibrado g. 2) Preparación y medicion de testigos y muestra 3) Procesamiento por minimos cuadrados 4) Expresión del resultado como intervalo de confianza.. A + B  C ←→   →  →  → C* ← C + hν → P ← P* P* ← P + hν    Son dos caminos para legar a la emision. Ocurre cuando una reacción química genera una especie. etc. pero es mas seleciva aun que la fluorescencia. me dan una especie excitada (los electrones de C* están en un nivel excitado) cuando vuelven lo hacen emitiendo radiación Hν puede ser transferida a otra especie (P) provocar la excitación y cuando vuelve al estado inicial lo hace emitiendo. luego vuelve emitiendo hv Indirecta: otro camino. la curva queda entonces como Intensidad vs concentración. Se la define como emision de radiación electromagnética generada a traves de una reaccion quimica. Generalmente es un PMT 15 . esa especie esta excitada y cuando vuelve a su estado fundamental lo hace emitiendo radiación. La fosforescencia tiene aplicaciones similares. muy sensible y tiene la ventaja de que es una técnica simple. se lo ayuda agregando un fluoroforo que recibe la energia del producto intermedio y cuando vuelve al fundamental emite fotones. Esa radiación puede ser transmitida o transportada a otra especie que luego emite radiación. Se produce la reacción y se mide directamente la señal que emite. El precursor mas el oxidante dan el producto electronico excitado. reaccion en medio adecuado (con oxidante fuerte y catalizador) o transferencia d energia A +B reaccionan.l = n-2 Quimioluminiscencia (reacción química) Es una técnica muy selectiva. el precurso genera un producto transitorio excitado p->p*. pero este no alcanza para emitir. mas usado.

Esta intensidad de radiación a esta longitud de onda se ve modificada por la presencia de algunos metales . Hay que controlar las variables experimentales u operacionales . Esos átomos generan absorción o emisión que da origen a espectros de bandas estrechas. El tiempo es un parámetro muy importante (tiempo donde se produce la máxima señal). Fe. en pequeñas cantidades ya que son muy sensibles y selectivas Espectroscopia atómica Se basa en la absorción o emisión de energi radiante por parte de átomos. Hay determinados componentes o reactivos que tienen características luminiscentes (siempre se usan). Eso provoca una disipación o cambios en lo niveles 16 . Condiciones operacionales Se debe trabajar con soluciones testigos. se preparan testigos con distintas concentraciones se hace la curva de calibrado y se da un resultado como intervalo de confianza. Co. Uno tiene que buscar el TM. en un tiempo muy limitado. Para hacer la determinación cuantitativa . Con cualquiera de las tres técnicas se pueden hacer determinación de compuestos orgánicos. por ejemplo Cu. ya que disminuyen la intensidad de la señal. este en medio alcalino en presencia de O2. tiene la característica de formar un componente que es el 3-aminoftlalato y emitir radiación característica a 420-425 nm. Al volver se provoca el ensanchamiento Efecto por presión (efecto Lorentz): se debe a choques que se generan entre las especies que absorben energía o emiten y los otros iones o atomos presentes en el medio. si se toma el tiempo incorrecto la intesidad es menor y la curva ya no es tan buena. El λ+Δλ es mucho mas chico que en emision o absorción molecular Esto es porque se ven involucrados los niveles electrónicos (ni lo rotacionales ni los vibracionales).Analisis Instrumental ИиФерИх Lo que hay que tener en cuenta es que la reacción ocurre muy rápidamente y hay que medir en el momento que se logro la máxima intensidad de quimioluminiscencia. eso hace a la sensibilidad del metodo. Uno puede determinar pequeñas cantidades de metales con estas técnicas. Se debe realizar previamente un grafico de señal función del tiempo. El que más se usa es luminol (a) y luciferina . tiene la característica de provocar componentes luminiscentes. porque cuando se va a hacer una curva de calibrado. El ensanchamiento que se ve puede deberse a tres fenómenos o procesos • Efecto de incertidumbre • Efecto por presión • Efecto “ensanchamiento doppler” Efecto de incertidumbre o ensanchamiento natural: esta relacionado con el tiempo que tardan los electrones cuando pasan del estado fundamental al estado excitado y volver al estado fundamental. que son aproximadamente de 10-5 a 10-2 nanómetros. V. Los espectros son más sencillos. inorgánicos.

se logra la misma temperatura.Analisis Instrumental ИиФерИх energéticos y como consecuencia trae que haya una dispersión con respecto a la longitud de onda de absorción. Llama: se puede utilizar tanto en emisión como en absorción atómica. Una llama esta compuesta por una mezcla de un combustible y un comburente (mezcla C/C). difusa. La más fría. Se usan atomizadores. Uno de los parámetros fundamentales es la temperatura Zonas de la llama Zona de combustión primaria: es el cono interno es la zona donde recién comienza a generarse y producirse las reacciones de combustión entre el combustible y el oxidante. Efecto doppler: ocurre cuando usamos como atomizador a la llama. es la externa. Es la zona de trabajo En la tercera zona: zona secundaria. es la zona que esta en contacto con la atmósfera. hay de dos tipos: ICP=plasma de acomplamiento inducido  Atomizadores  Chispa elelctrica  Llama  Discretos { Electrotermicos Atomizadores continúos: Son aquellos donde la muestra se introduce en forma de solución y se convierte en una niebla de gotitas muy chiquitas mediante un nebulizador que luego es transportado por un gas hacia la zona donde se produce la atomización. la temperatura deseada se logra y es constante y homogénea. Los átomos de la especie en estudio por efecto térmico chocan debido al movimiento en el interior de la llamada provocan el ensanchamiento en la banda Transformación del analito en átomos. Pueden ocurrir reacciones secundarias. Es importante conocer la temperatura a la cual toda la muestra entra en estado atómico gaseoso. En cambio en los atomizadores discretos se coloca en su interior un determinado volumen (cantidad de muestra) y allí se produce la atomización de la especie. Son reacciones rápidas que no alcanzan a llegar al equilibrio En esta zona todavía no se alcanza la temperatura óptima Zona de combustión intermedia: en esta zona las reacciones de combustión están en equilibrio termodinámico. no conviene trabajar allí. Para seleccionar la T optima se debe tener en cuenta que la mezcla C/C genera un fondo de llamada Otros factores de dependencia además de la mezcla C/C • La velocidad con que fluyen los gases para tomar la llama • De la relación molar C/C 17 .

de tal manera que antes de que llegan a la llama. rodeados por una bobina de inducción que esta conectada a un generador de radio frecuencia. no en absorción atomica Plasma: un gas calentado y parcialmente ionizado que tiene la característica de conducción la electricidad. Depende del tamaño de gotas. Por el interior de esos tubos circula un gas inerte. que sea optima y suficiente para lograr la atomización completa de la muestra y además debe tenerse cuidado que cuando se selecciona la mezcla C/C para trabajar el espectro de emisión de esa muestra no interfiera en la señal del analito. Esta etapa depende de la capacidad de volatilizacion de la muestra y de la temperatura.Analisis Instrumental • • Del diseño del quemador De la altura de la llama ИиФерИх También es importante la velocidad de ingreso de la muestra o de los testigos a la llama Proceso de atomizacion Transporte de la muestra: en solución. es aspirada a través de un capilar y transportada a traves de un tubo plastico de diametro pequeños hacia el interior del nebulizador. La velocidad con que ingresa la muestra y los testigos debe mantenerse siempre igual y debe ser reproducible (preparados de igual manera). Llama: puede usarse tanto en emision como en absorción atomica Como atomizador la llama es mas económica. a traves del spoiler. logrando un aumento 18 . Si estas condiciones no son buenas. el propio nebulizador. velocidad de ingreso. Una vez que llegan al nebulizador este transforma la solución en finas gotas (spray). ICP= plasma de acoplamiento inducido Este atomizador se utiliza en la técnica de emisión atómica. la muestra estaría contaminada 2) Volatilización: las partículas sólidas pasan al estado de vapor y una vez que ocurrió esta etapa ocurre la etapa final. se evapora el solvente y quedan las partículas de la sal. Una vez que el spray homogeneo llega a la llama (optima) ocurren tres procesos. 1) Evaporación del solvente ocurre cuando el aerosol llega a la llama. Generalmente como plasma se utiliza Argon Antorcha: esta formada por un tubo de cuarzo. de tamaño homogéneo muy chiquitas. dentro de otro. tiempo de contacto con la llama y tipo de solvente. generando en el medio iones argon y una corriente eléctrica de electrones que genera el plasma. las de mayor tamaño. generalmente Argon Cuando se genera una descarga eléctrica que proviene de la bobina de inducción ese argon se ioniza. quedando disponibles para absorber o emitir energia. es el encargado de desechar aquellas gotas que no son homogéneas. pero debe tenerse cuidado con la temperatura de a llama. 3)Atomización: la sal se disocia y se forman los átomos neutros al estado gaseoso.

se forma el spray y de allí es introducida por la parte inferior de la antorcha de plasma hacia el cono superior que es donde se producen los tres procesos ya vistos. Ese cilindro abierto permite que este conectado a un par de conectores eléctricos y alrededor del tubo circula un gas inerte (Argon) que tiene la función de desalojar vapores que pueden quedar en el interior del tubo. • Otra ventaja es que con el ICP como atomizador hay una elevada densidad electrónica en el medio y esa densidad electrónica evita que existan interferencias debido a especies que se ionizan fácilmente. Atomizadores discretos-> electrotérmicos-> horno de grafito Se utiliza en absorción atómica. Ventajas del ICP frente a la llama: • Temperatura: es muchísimo mayor . Esta abierto en los dos extremos y tiene un orificio en la parte frontal por donde se introduce la muestra. volatilizacion y atomizacion • Los limites de detección son mucho mas bajos que si se utiliza la llama. La temperatura se controla. Dentro del cilindro se encuentra una plataforma llamada “plataforma de l´vov” . refigerando el tubo). Es una llama muy luminosa pero sin combustión. • Otra ventaja es que el efecto matriz o las interferencias generadas por el efecto matriz es menor que utilizando la llama y eso se debe a que estamos en un medio químicamente inerte que favorece el tiempo de vida de los átomos neutros en estado gaseoso donde no hay combustión. no llega toda la zona de combustión maxima La forma adecuada del plasma es como lo indica el dibujo B donde esa antorcha tiene como una inflexión de tal manera que no deja que se escapen las gotitas. regular la generacion de la radiofrecuencia. No hay espectro de fondo porque no hay combustión Introducccion de la muestra. Condiciones operacionales Una de las variables que uno debe controlar es como generar ese plasma. Es ahí donde se logra la atomización de la muestra. Si es muy baja o no es la optima el plasma que se genera es un plasma con forma de lagrima y hay perdida de muestra. La longitud es aproximadamente de 5 cms y tiene n diámetro interno de 3 a 8 mm. El equipo tiene una entrada para el capilar donde se introduce la muestra. Es un cilindro de grafito recubierto por un material piroelectrico. lo que optimiza los procesos de evaporación. De esta manera llega mayor cantidad de muestra. el tiempo de contacto entre la muestra y la antorcha es menor. Se les llama así porque se coloca determinado volumen o cantidad de muestra.Analisis Instrumental ИиФерИх de temperatura del gas que llega a alcanzar en el extremo superior de la antorcha entre 9000 y 10000 grados Kelvin. haciendo fluir Argon en forma tangencial (contracorriente. también 19 . Una de las ventajas frente a la llama es que se logra mayor temperatura sin que haya combustión. esta llega al nebulizador. Horno de grafito: Se utiliza en absorción atomica. se la mantiene estable y constante. hasta que se logra la atomizacion completa. no en emisión.

en la ultima fase. La muestra se coloca en el atomizador. etc Desventajas: • Es un método muy caro • Si por algún motivo el ciclo no es completo (no se logra la atomización completa) y dentro del horno quedan moléculas que pueden absorber la radiación o pueden dispersarla. Como ese horno esta conectado a esos contactos eléctricos la muestra sufre un proceso de atomización debido a un calentamiento provocado por resistencias eléctricas (electrotérmico). Cualitativa porque esos átomos emiten a una longitud de onda característica. Hoy en día los equipos tardan entre 3 o 4 segundos en lograr la atomización completa. donde se logra la atomización completa de la muestra. la energía la proveen la llama y el ICP (funciona como atomizador y como FER). Se debe controlar bien que tipo de reactivo se utiliza. La técnica de emisión atómica es una técnica analítica cualitativa y cuantitativa porque relaciona la emisión con la concentración. debe ser aspirada (se puede perder) luego llega a la mezcla C/C donde también se puede perder. La variable más importante a controlar es la temperatura. si necesita agua. Dentro de ese horno ocurren los tres procesos ya vistos (evaporación del solvente. Luego tiene selectores de banda o filtros de interferencia o monocromadores. de 1500 hasta 3000ºC. la atomización. luego hay una etapa de calcinación que comprende entre 350 y 1500ºC. que generalmente son PMT y luego al registrador. Si se usa la llama la muestra debe estar diluida. las temperaturas son mayores . Este ciclo se va programando según el tipo de muestra que se tiene. Luego de que fueron excitados térmicamente. • Emisión atómica Se basa en medir la emisión de energía radiante generada por parte de átomos neutros en estado gaseoso. Ventajas Trabajar con hornos de grafito tiene algunas ventajas en comparación con la llama: • Se puede trabajar con pequeñas cantidades de muestra (micro o nano gramos o litros) • Los limites de detección son mucho mas bajos que la llama • La muestra no sufre ningún proceso de dilución en el horno. propia de cada elemento y cuantitativa porque relaciona la emisión con la concentración. La radiación llega al detector. volatilización o calcinación y atomización) La evaporación del solvente ocurre a temperaturas alrededor de los 100ºC. 20 . En la técnica de emisión atómica no hay FER. Llega todo a la llama o al ICP. si se ponen por ejemplo 5μgr entran al ciclo 5 μgr. Las técnicas son absorción y emisión atómica.Analisis Instrumental ИиФерИх recubierta del material piroelectrico y sobre ella se deposita la muestra de tal manera que queda toda concentrada sobre esa plataforma. conduciendo a errores.

La lámpara que más se utiliza en absorción atómica es la lámpara de cátodo hueco. Otra lámpara que suele utilizarse es la lámpara de descarga sin electrodos. Las variables. en el caso de al presión del gas. Selenio. a soluciones diluidas la relación es lineal. La técnica es cuantitativa porque la IE (intensidad de emisión)=kC. Se aplica el método del factor. entra radiación en un número limitado de longitudes de onda características. K etc. se deben controlar. antimonio. trazas de Arsénico. En el atomizador se descompone el hidruro y se originan los átomos neutros en estado gaseoso de ese elemento. es hace a la técnica mas selectiva. Emite radiación característica del analito en estudio. Lo que se hace es tratar a la muestra con NaBH4 en medio acido.+ 3H+ + 4H3 AsO3 → H3 BO3 + 9H3 As + 3H2 O 21 . Detector: los mas comunes tiene PMT y luego el registrador. Así que no se hace curva de calibrado. Absorción atómica Se basa en medir la absorción de energía radiante por parte de los átomos neutros en estado gaseoso luego de haber sido excitados por una fuente de energía radiante. ya que la longitud de onda de emisión es característica de cada elemento. La característica es que la fuente es discontinua. en su interior tiene Argon a baja presión y tiene como ánodos un alambre de Tungsteno y como cátodo tiene una lamina cilíndrica que esta recubierta con la sal del elemento a determinar. Tanto en forma cuantitativa como cualitativa. Bismuto. lo que permite preparar curvas de calibrado. Na. Hoy en día hay lámparas multielemento. Excepcionalmente en la práctica no se puede controlar la presión de gas (porque es de línea).Analisis Instrumental ИиФерИх Generalmente la técnica de emisión se usa para detectar metales monovalentes o bivalentes: Li. El resultado se expresa bajo las condiciones usuales y la expresión Vi ± Vii. Dispositivo que actúa como selector de banda: filtros o monocromadores. Dos aplicaciones de la técnica de absorción atómica para trazas • Generación de hidruros • Técnica de vapor frío. También existen elementos simples y de doble haz. Lámpara de cátodo hueco: tubo cilíndrico hueco con ventana de cuarzo o vidrio. 3BH4 . Luego de la FER viene el Atomizador que en este caso es la llama o el horno de grafito. de tal manera que se forme un hidruro y ese hidruro tiene la característica de ser volátil. Generación de hidruros Se usa cuando se quiere determinar pequeñas cantidades. plomo y con la técnica de absorción atómica propiamente dicha no se puede cuantificar. puede ser arrastrado por un gas y llevado directamente hacia un atomizador.

provocando dispersión de la señal o disminuyendo la intensidad. Este tipo de interferencia se trata de eliminar aumentando la temperatura hasta que los óxidos sean inestables y no interfieran en la medición. Solución: cambiar la mezcla C/C. como es usual. se debe separa al Ca2+ y atomizarlo todo. sobre todo en el horno de grafito. Ventajas: El analito es arrastrado de la matriz y esto hace que disminuyan las posibles interferencias por la matriz. 4) Otra interferencia es que en la muestra haya dos sustancias que emitan o absorban a longitudes de onda cerca. Espectrales: se dan cuando la absorción o emisión de una especie genera un solapamiento de las bandas características. Vapor frío Se utiliza para determinar pequeñas cantidades de Hg en solución. de otra manera el resto de los constituyentes interfiere. Se soluciona aumentando la temperatura. 1) La mas común es aquella que se origina cuando el atomizador es la llama y la mezcla C/C proporción aun espectro de fondo de absorción o emisión. 22 .Ti) que a determinada temperatura forman óxidos con las paredes de los hornos refractarios y esos óxidos emitan en la zona donde emite el analito y que también enmascaren la señal a cuantificar.Analisis Instrumental ИиФерИх La cuantificación se hace por testigos y curva de calibrado. De esta manera esto se agita y el ion mercurio se convierte en vapor metálico (vapor de Hg) y es arrastrado por un gas inerte hacia la cubeta de absorción y de allí se mide directamente a la longitud de onda característica del Hg que es 264nm Se puede determinar cuantitativamente en ambos casos Tanto en absorción como en emisión atómica puede haber dos tipos de interferencia: espectrales y químicas. El equipo es semejante al anterior pero se mezcla la solución de mercurio con una solución de cloruro estañoso Cl2Sn en presencia de algún oxidante fuerte (H2SO4 o HNO3). que quede algún metal (St. Este caso se presenta cuando debido a la presencia de compuestos en la matriz interfieren con la muestra. es decir por los otros componentes presentes. 3) Otra interferencia posible es que la atomización no sea completa y quede moléculas que generan un espectro (por ejemplo el Ca2+). en la leche hay otros componentes. Por ejemplo el Ca2+ en leche. solapando las señales Efecto matriz En absorción o emision atómica es importante controlar la interferencia provocada por la matriz del compuesto. 2) Otra que puede ocurrir es.

En este caso también hay una compensación de señales de tal manera que al detector solo llega la señal correspondiente al analito. Se usa Litio o Silicio como agentes liberadores. Mediante un dispositivo el detector solo registra la señal de los ANLg. De tal manera que ambas radiaciones pasan en forma alternada a través del atomizador.Analisis Instrumental ИиФерИх El efecto matriz es particularmente importante en el análisis de alimentos. de tal forma que cuando llega la radiación de la LCH absorben de manera alternada los ANLg y las posible moléculas que interfieren. así la radiación que proviene de la lámpara de cátodo hueco es absorbida por los átomos neutros al estado gaseoso y por las moléculas que generan ese efecto matriz mientras que la radiación que provino de la lámpara continua es absorbida por las moléculas de tal manea que al detector llega solamente la compensación de ambas señales y esa es la señal que se registra LC ↓ atomos moleculas  atomos  LCH →  + → detectores  → LCH LC  moleculas  Corrección por efecto Zeeman Otra forma de corregir. PO4. tienen la característica de que a determinada T reaccionan y forman compuesto poco volátiles con el analito en estudio. Este instrumento es un horno de grafito rodeado por un electroimán que desdobla los niveles energéticos correspondientes a los átomos libres neutros al estado gaseoso. evitar o disminuir el efecto matriz es a través de la corrección por efecto Zeeman. Quimicas Las interferencias químicas generalmente ocurren cuando no se tuvo en cuenta o no se controlaron correctamente las condiciones operacionales 1)La presencia o formación de compuestos poco volátiles (algunos aniones. SO4. por ejemplo con Mg o Ca). Esta interferencia es mas frecuente en absorción atómica y puede corregirse de dos formas: Método de corrección con una fuente continua : los equipos ya viene equipados así (con una lámpara continua y otra de cátodo hueco). Esto lleva a que haya menos ANLg . Cuando la luz pasa en forma normal absorben los ANLg y las moléculas. cuando pasa en forma polarizada y el nivel electrónico se desdobla. que tienen la característica de reaccionar con el anion antes de que este lo haga con el analito. solo absorben los ALNg. 23 . Se soluciona agregando a la solución del analito un compuesto llamado agentes liberadores. interfiriendo asi con la cantidad a determinar. ya que son matrices complejas Se soluciona trabajando con instrumentos que presentan determinadas características.

por eso decimos que es una técnica que permite identificar compuestos. Las moléculas no son rígidas. De no ser posible cambiar la T de ionización se agrega al medio supresores de ionización cuya función es ionizarse mas rápidamente que el analito en estudio. Equilibrio de ionización: se debe elegir la T adecuada del atomizador de tal manera que no provoque la ionización de la muestra. medio y lejano Generalmente desde el punto de vista analítico las determinaciones cualicuantitativas se trabajan en ir cercano y medio La técnica se usa mucho para la determinación de compuestos orgánicos. (Hay dos espectros de ejemplos en fotococopia1): son dos alcanos que presentan similitud en algunos picos. Algunos compuestos tienen la característica de afectar y modificar el equilibrio de disociación de algunas sales. solo alcanza para generar cambios en las energías rotacionales y vibracionales. es decir.Analisis Instrumental ИиФерИх 2)Otra posible interferencia es el equilibrio de disociación. Las moleculas polinucleares. porque para que se produzca esta absorción de energía las moléculas deben tener un momento dipolar distinto de 0. luego en 1600-1400 cm-1 hay otra banda característica de la unión C-C ). Esta situación lógicamente no sucede en el ICP. En el medio habrá electrones que desplazan el equilibrio a favor de la no ionización del analito. sino que tienen un movimiento alrededor de un eje imaginario (movimientos vibracionales de tensión o deformación). Esa radiación no alcanza para producir transiciones electrónicas. Eso genera un cambio en cada molécula que esta relacionado con la densidad 24 . La región puede dividirse en cercano. Caracteristicas de los espectros Los espectros se grafican en porcentaje de transmitancia en función del numero de onda (1/λ). Por ejemplo: si se tiene ClNA a determinada T se forman los ALNg. Los espectros dan picos o bandas característicos a distintos grupos funcionales. por ejemplo en zona de 2800-3000 cm-1. y visible). son difíciles de determinar cuantitativamente porque las bandas se superponen. Es una tecnica cualitativa y puede usarse para hacer cuantificaciones. estas ultimas se ven condicionadas por el estructura del compuesto. Generación de un IR La radiación proviene de zona del IR cercano-1500nm [E:hc/v] cuanto mayor es la longitud de onda menor es la energía: la radiación que proviene de esa zona no es muy intensa (como si lo es la UV. La absorción cambia cuando el momento bipolar de la molecula es distinto de cero. Es decir que la absorción a partir de moléculas en esta zona es bastante selectiva: no todas las moléculas son capaces de absorber radiación a esta longitud de onda. pero si hay HCl en el medio en determinadas condiciones los átomos de Cl provenientes del HCl hacen efecto de masa y desplazan el equilibrio. Espectrometría de absorción en IR Esta técnica de absorción de energía radiante comprende la zona que va desde 700 nm hasta aproximadamente 1300/1500 nm . hay una banda típica de unión C-H. dado que el plasma es gas parcialmente ionizado. por ejemplo.

entonces al momento de ser irradiada la molécula ese momento cambie (se perturbe). El monocromador esta después de la muestra (para esta técnica no es necesario ponerlo antes. Esa radiación pasa a través de dos cubetas (muestra y referencia).Analisis Instrumental ИиФерИх de carga que hay alrededor de cada átomo y la distancia que hay entre ambos centro de cargas.Instrumental dispersivo (simple y doble haz) 2. Tanto la FER como los detectores tiene características térmicas: responden (sobre todo los detectores) a cambios de temperatura.Instrumental no dispersivo (simple haz) 1.. Los espectros de moléculas sencillas son simples (con pocos picos) mientras que en las moléculas mas complejas hay muchas bandas. luego se unen esas dos radiaciones. N2) tienen un momento dipolar igual a cero: esas no absorben en el IR.. El cambio de momento bipolar en estas tecnicas es irreversible. producen una interferencia constructiva y así llegan al detector. un espejo a la salida de ella que divide la radiación en dos. 1. la molécula absorba en al región IR es tener un momento diferente de cero. 25 .. La condición para que. Funciona de igual manera que cualquier insterumento de doble haz. (doble haz) En general se usan para hacer determinaciones cualitativas. Condiciones Esa característica la tienen las moléculas formadas por heteratomos (en general). Entonces ese cambio de momento es lo que va a medir. porque la radiación IR no es tan potente y no modifica a la muestra). se origina un cambio en el momento dipolar de la molécula yeso produce la absorción de energía radiante. que pueden superponerse haciendo mas difícil la determinación.Instrumental dispersivo. Mientras que las moléculas homopolares (O2. Se llaman así porque tiene un sistema de monocromadores que dispersan la radiación que llega a la red de reflexión y emerge por la hendija de salida (ver fotocopia 1) Hay una FER. Ejemplo HCL H -CI ó+ óCuando la radiación que proviene de una fuente de energía incide sobre una molécula y la frecuencia de esa radiación coincide con al frecuencia vibracional y rotacional propias de la molécula. luego la radiación que viene de la cubeta de referencia se atenúa con un atenuador. Instrumentos Lo que existen actualmente son Dispersivos y no dispersivos.

la radiación no esta más en fase y al detector le van llegan diferentes señales en función de la distancia entre los espejos. interferómetro.. El cortador del haz esta recubierto por un material que permite que parte de radiación se refleje y otra se transmita. Estos equipos son de ultima generación. pasa por el espejo colimador (para que vayan en forma paralela). Tiene un algoritmo matemático cuya función es decodificar la señal que se registra y transformarla en un espectro fácilmente identificable o que se pueda interpretar bien Los componentes de estos instrumentos (que en general son de simple haz) son: FER.Analisis Instrumental ИиФерИх 2. en vez de tener un sistema óptico de monocromadores tienen un inteferometro con espejos que selecciona una longitud de onda por medio del espejo móvil. Este tipo de instrumentos se conocen como instrumentos de IR con transformada de Fourier.Instrumentos no dispersivos Permiten hacer determinaciones cuali y cuantitativas. compartimiento de muestra. ambas radiaciones (las de los dos espejos) quedan en fase y se produce interferencia constructiva que aumenta la intensidad de esa radiación que luego pasa por la muestra a una determinada longitud de onda. No tienen sistema dispersivo sino que cuentan con un interferometro. detector. y en el medio de ellos hay otro dispositivo llamado cortador del haz o de la radiación cuya función es dividir el haz de radiación que le llega. los rayos llegan al cortador del haz y parte de ellos se reflejan y esa radiación que se refleja incide en el espejo móvil. por movimientos mecánicos. Entonces cuando. otra parte de la radiación atraviesa el cortador del haz y llega al espejo fijo. cuya funcion es modelar y modular la radiación proveniente de la Fer. Funcionamiento Llega radiación de la FER. se va moviendo el espejo móvil de tal manla que ambos espejos quedan a igual distancia del divisor del haz. Inteferómetro El interferómetro es que el reemplaza al monocromador y la diferencia que tiene con este es que solo permite que pase una rango estrecho de longitudes de onda pero no ocurre el proceso de dispersión sino que aca hay movimientos de espejos que permiten que llegue radiación a la muestra a diferentes longitudes de onda El interferómetro esta compuesto por una combinación de espejos: fijos y móviles que redirigen la radiación hacia la cubeta de la muestra. 26 . El funcionamiento del cortador es similar al del filtro de interferencia Mientras que si las distancias de ambos espejos son diferentes. Lo que se registra en el detector es un interferograma que a través de la transformada de Fourier se decodifica y se obtiene un espectro convencional.

Esa varilla de es carburo de silicio y esta rodeada de una resistencia que hace que se alcanzen temperaturas que van desde 1300 a 1800 K emitiendo asi en forma continua en el IR 3) Filamento incandescente Es un alambre en forma de espiral de Ni y Cr. 27 . Se usa en IR cercano. Como el barrido es muy amplio. es decir que el espectro de emisión de la lámpara debe ser una banda que abarque un amplio rango de longitudes de onda. En los extremos del cilindro se ha conectado cables de platino cuya función es transmitir la electricidad y alcanzar temperaturas entre 1200 y 2200 aproximadamente. Ver figura 4. 1) Lámpara incandescente de Nernst Es la más común. 6) Láser de CO2 (para instrumentos no dispersivos con transformada de Fourier) Actualmente hay instrumentos que tiene como FER un láser de CO2.Analisis Instrumental ИиФерИх Inteferograma Es la señal en función de la distancia de los espejos. Consiste en un tubo de cuarzo que tiene vapor de mercurio a baja presión. La característica fundamental es que son sólidos inertes que se calientan y emiten radiación . 5) Lámpara de Tungsteno Es la misma que vimos en absorción molecular. FER. Validas para instrumentos radiantes y no radiantes. el interferograma es como en b. Este tipo de fuente generalmente se usa cuando se esta haciendo un control medioambiental para determinar contaminantes atmosféricos (NH3. La intensidad de radiación varía en función de la temperatura. Es una lámpara que utilizan los instrumentos que permiten trabajar en la región del IR lejano. La mayor intensidad de emisión depende de la temperatura que alcance la lámpara. Esta rodeado por una cubierta de un material protector que tiene la función de evitar que ese cilindro se sobrecaliente y se queme. Formada por un cilindro formado por una mezcla de oxido de Circonio y otros óxidos de diferentes metales. Son sólidos inertes que se calientan eléctricamente y alcanzan temperaturas de alrededor de 1500 -2200 K. Cuando pasa la electricidad (cuando se conecta) ese vapor de mercurio se ioniza originando un plasma y ese plasma emite una radiación continua en la región del IR lejano. el algoritmo desarma eso y lo transforma en una señal que se puede leer como el (a) (fotocopia 2). 4) Arco de mercurio. Sonn fuentes continuas. Alcanza temperaturas de hasta 1000K. Ese cilindro tiene un diámetro de 1-2 mm y una longitud de aproximadamente 50mm. Hay varios tipos de FER con las características anteriormente descriptas. 2) Globar Es una varilla cilíndrica de aproximadamente 50mm de longitud y 5 mm de diámetro. benceno) Esta serie de lámparas son comunes.

se genera un aumento de temperatura y ese aumento de temperatura genera una diferencia de potencial y esta ultima es la señal que se mide. Hay de varios tipos: • • • Neumático de golay Termocuplas Bolometros Los tres funcionan bajo el mismo principio . NaBr.CeBr Selectores de banda Según el instrumento: sistema dispersivo(monocromadores) Sistema no dispersivo: interferómetro. generando una señal termica ΔT y ese aumento de temperatura es la senal que se mide. cuando llega la radiación se produce un calentamiento y ese aumento de temperatura es lo que se registra (hay una variación de temperatura). Se genera un aumento de temperatura.Detectores térmicos Este tipo de detector. Cuando llega la radiación. incide en el gas. Esas ventanas pueden ser de NaCI. KBr.La respuesta depende de la capacidad calorifica de la radiación.Analisis Instrumental ИиФерИх Cubetas o celdas Son recipientes que presentan ventanas que son transparentes a la radiación IR. Neumatico de golay: Es una cámara que en su interior tiene gas a baja presion y en un extremo tiene una membrana4cuando la radiación incide en el detector. Detectores La característica principal de los detectores de IR es que su respuesta depende del poder calorífico de la radiación Hay tres tipos de detectores Los dos primeros (térmicos) generalmente se usan en instrumentos con sistemas dispersivos mientras que los fotoconductores y piroelectricos se usan en equipos no dispersivos. todo eso soportado o colocado sobre un soporte conductor yeso colocado dentro de una cámara donde se ha hecho vacío. 28 .. una diferencia de potencial y de ahí la señal que se mide. se expande y ejerce presión sobre la membrana que se desplaza según el poder calorifico de la radiación. 1. Bolometros Funcionan de forma semejante a las termocuplas con la única diferencia que están formadas por laminas de platino o de níquel. Generalmente esa señal es muy chica y requiere amplificador. Termocuplas: La unión de un alambre con una esfera en la punta de Bismuto y Antimonio. el gas se calienta.

Generalmente se usa sulfato de Pb. Se basan en que cuando llega la radiación la absorben y la transforman en una señal medible Están formados por láminas cristalinas de materiales pirolectricos que tienen la característica de presentar propiedades térmicas y eléctricas. lo que genera una corriente eléctrica y esa corriente eléctrica es la señal que se mide. Este material semiconductor esta depositado sobre un vidrio y todo eso esta recubierto por un tubo de vidrio y sellado al vacío.Detectores fotoconductores.(Parecidos a los diodos n-p) 3.Detectores piroelectricos . 29 . del sulfato de Pb y esto hace que se genera una corriente y esa corriente es la señal que se mide. Cuando llega la radiación se produce una promoción de los electrones de valencia. Este material se coloca entre dos electrodos y cuando la radiación es absorbida se produce un calentamiento del STG y al calentarse varia la distribución de carga en la superficie.Analisis Instrumental ИиФерИх 2. Están formados por una delgada capa de un material semiconductor. Generalmente se usa como material piroelectrico sulfato de triglicina (STG)...

Este tipo de celda tiene la particularidad de ser especificas debido a que se puede determinar actividades de distintas especies cuando se encuentran en disolución y estas especies están en distintos estado de oxido-reducción Puedo determinar Fe2+. Además la instrumentación utilizada es mas barata. Reacción electroquímica Definición: es la responsable de las transformaciones químicas que sufren las especies debido al paso de corriente eléctrica a trabes de los electrodos y del movimiento o transporte de especies cargadas o no desde la disolución hacia los electrodos. En ese tipo de técnica se tiene en cuenta reacciones de oxido reducción que ocurren en la interfase electrodo-disolución Para poder aplicar una técnica electroanalítica necesitamos una celda electroquímica. El instrumento es mas sencillo y mas barato que los usados en tecnicas opticas. es decir. con esta técnica puedo determinar la actividad de la especie que es importante para calcular constantes de equilibrio.Analisis Instrumental ИиФерИх Técnicas electroanalíticas Estas técnicas cuantitativas que se basan en reacciones electroquímicas. Pueden ser de tipo galvanicas o electroquimicas. Este tipo de celda se utiliza en técnicas potenciometricas 30 . Fe3+ Además . Esta es un recipiente que tiene conectados dos electrodos que están sumergidos en un recipiente que contiene una disolución del electrolito a determinar . que tiene en cuenta las propiedades eléctricas de los analitos cuando están en solución dentro de una celda electroquímica. Conformacion de una celda electroquimica Puede haber de dos tipos: Una de ellas es la celda galvanica y la otra es la celda electrolítica La celda galvánica es aquella que al conectarse a dos electrodos las reacciones electroquímicas ocurren espontáneamente y se genera una corriente. Generalmente son especificas respecto a una tecnica optica.

Pero esa cantidad de corriente esta gobernada y limitada por distintos procesos. Esos proceso se denominas faradicos y no faradicos.que circulan se deben a la redox.Analisis Instrumental ИиФерИх En la celdas electrolíticas se requiere de una fuente externa de energía para que funcione y esa energía es consumida y así tiene lugar la reacción. 31 . allí no hay proceso faradicos y no se produce redox. Este tipo de celda se utiliza en técnicas polarograficas. Migración: es el movimiento o movilidad de los iones provocados por atracción electroestatica entre los iones y los electrodos (positivos atraen partículas negativas y viceversa) Difusión: es el movimiento de la especie originado por un gradiente de concentración (de mayor concertación hacia la interfase electrodo-disolución) . este movimiento puede deberse a tres procesos La especie que esta dentro de la celda electroquímica se mueve con tipo de movimiento: • • • Conveccion Migración Difusión Conveccion :es el movimiento de la disolución originado por agitación debido a un aumento de T. Esta se forma por un primer reordenamiento. Procesos faradicos: son aquellos donde siempre hay un reacción de oxido reducción en la superficie o interfase electrodo-disolución. Los iones se mueven hacia los electrodos. Se dice que el electrodo esta polarizado. Teniendo en cuanta la nomenclatura de la IUPAC siempre el proceso de reducción ocurre en el cátodo y el proceso de reducción en el ánodo y siempre el potencial de una celda según la iupac es : el potencial del cátodo menos el potencial del ánodo. Dependiendo de la tecnica a usar estos movimiento son de mayor o menor importancia. Luego de aplicar un potencial . si aumenta el potencial la doble capa se hace mas gruesa y esto hace que los electrones no puedan alcanzar la interfase . La capa es la responsable de que existan dos procesos que dan origen a dos tipos de corrientes (Faradicas y no faradicas) En una celda electroquímica siempre se produce una corriente porque hay una transferencia de electrones desde el seno de la solución hacia el electrodo. La corriente allí generada se llama corriente faradica. una agitación magnética o mecanica. Electrodos polarizados y despolarizados Alrededor de los electrodos se forma una doble capa difusa. Esta corriente es necesaria en potenciometria. Los e.

• Si la segunda etapa es la mas lenta el electrodo esta polarizado por reacción quimica • Si la tercera etapa es la lenta el electrodo esta polarizado por adsorción o disociación • Si la cuarta etapa es la lenta el electrodo esta despolarizado Calculo teorico del potencial de una celda Se calcula utilizando la ecuación de Nersnt . Segunda etapa : generacion de especies indeseadas. estas especies intermedias pueden también oxidarse o reducirse. Aqui la especie oxidada se mueve desde el seno de la solución hacia el la interfase electrodo disolucion mediante un movimiento de migración. Transferencia de masa: primera etapa. ocurrir un cambio en el estado físico de la especie. En este caso el electrodo esta despolarizado. Esto sucede cuando ocurren procesos no faradicos El grafico b representa a un determinado potencial constante varia la intensidad de corriente. no ocurra una reacción redox y tenga lugar otros procesos que generan una corriente . pero la corriente es una corriente de carga. trabajando a P y T constante que se basa 32 . • Si la primera etapa es la mas lenta. El grafico a representa un electrodo polarizado. Esta ecuación surge de una serie de consideraciones termodinámicas. Se dice entonces que la corriente generada es no faradica. la cual puede adsorberse . Proceso de polarizacion Son los procesos que ocurren cuando hablamos de la polarizacion de un electrodo: ocurren distintos procesos antes de llegar a la polarizacion o despolarizacion del electrodo. Esos procesos que ocurren modifican de alguna manera la interfase electrodo-disolución. se dice que el electrodo esta polarizado por concentración . Esto sucede cuando ocurren procesos faradicos. La polarizacion depende entonces de las velocidades de reaccion de las diferentes etapas. disociarse o cristalizarse antes de la transferencia de electrones.Analisis Instrumental ИиФерИх Procesos no faradicos : pueden ocurrir cuando por algún proceso termodinámico o cinético (por ejemplo adscorcion). Es decir a medida que aumenta (varia) el potencial. Por supuesto la etapa mas lenta es la que controla el proceso y eso lleva asociado que la intensidad de corriente se vea limitada por cada una de estas etapas. no hay variación en la intensidad de corriente. es decir. Si ocurre no hay transferencia de electrones Tercera etapa: cambios fisicos en el analito En las proximidades de la superficie de cada electrodo puede ocurrir la quinta etapa . Se debe a la generación de alguna reacción química y dar origen a especies intermedias . Cuarta etapa: transferencia de carga La cuarta etapa puede ocurrir a distintas velocidades.

0591 [red] log n [ox] reaccion en el electrodo El potencial frente al eletrodo de referencia se calcula siguiendo el esquema de celda. Si consideramos según la IUPAC. Esquema de una celda • • • • • • • Hacia afuera el electrodo (Zn0) La barra / indica electrodo. n=numero de electrones involucrados en la reaccion  ΔG=-nFE  F=cte de Faraday  E:potencial normal de celda  Podemos a través de ecuación llegar escribirla como la ecuación de nersnt como esta en la transparencia Recordemos que la actividad de una especie es 1 I= ∑ C i Zi 2 2 El f esta relacionado con la fuerza iónica de la solución (I). Al centro sus soluciones ΔP=potencial de un solo electrodo Ep=E2-E1 potencial de unión liquida El potencial se unión liquida se genera cuando se ponen en contacto dos soluciones de distintas concentración. si la solución es diluida. por lo tanto podemos decir que a=C. I depende de la concentración y carga de la especie. Considerando el ejemplo anterior tenemos ΔP = E = E0 0. este potencial se puede minimizar colocando al puente salino y se hace casi despreciable por lo tanto en el Ej no se considera. sumergido en una solución de Zn2+ con una dada concentración molar La doble barra // indica puente salino Cu2+ con su concentración molar / (el otro electrodo) Cu0 (Zn2+) Hacia fuera los electrodos. Desde el punto de vista experimental . 33 .Analisis Instrumental ИиФерИх en los cambios de energía libre para una reacción dentro de una celda electroquímica. Cuando en química analítica se trabaja con soluciones diluidas el coeficiente de actividad f tiende a 1 .

Ese potencial se calcula cando el cociente de actividad de la especies reducidas y oxidas es igual a 1. mientras que en los electrodos selectivos el potencial se genera medianrte un intercambio de iones a traves de la membrana. Ejemplo: una barra de Cu0 que se sumerge en una solución de Cu2+ 34 .0591 [red] ΔP = E = E0 log ⇒ ΔP = E0 n [ox] 14 2 4 3 0 El potencial del electrodo de H es cero (E=0) Potenciometria La técnica que utiliza estas celdas es la potenciometria • Utiliza celdas galvanicas • Utiliza dos electrodos : uno de referencia y otro indicador • Utiliza soluciones electrolíticas • Una técnica potenciometrica se basa en relacionar la concentración de una especie con la medida del potencial que se genera entre un electrodo indicador y un electrodo de referencia.Analisis Instrumental ИиФерИх Existe otro parámetro que es el potencial norma de electrodo o potencial estándar de electrodo. generalmente se utiliza como anodo. Potencial de celda: potencial del anodo – potencial del catodo Dentro de lo electrodos indicadores tenemos dos tipos: los indicadores metálicos y los indicadores de membrana Electrodos indicadores metalicos Se basan en que el potencial se genera a traves de una redox. Electrodo indicador: es aquel cuyo potencial responde a la variación de la actividad de las especies en estudio. Esto ocurre cuando los reactivos y productos tiene una actividad igual a 1 }1 0. que ocurre en la interfase electrodo-disolucion. Ese potencial es una constante física característica de los pares redox. Electrodo de referencia: mantiene constante su potencial aun cuando se producen pequeños pasajes de corriente. Dentro de los indicadores metálicos tenemos • Los de 1era especie • Los de 2da especie • Los redox Los de 1era especie o cationico Son electrodos que están constituidos por una barra de metal sumergida en una solución que contiene los propios iones.

Cl-(Xm) Cuando la concentración molar del anion (Cl-) es mayor que 1M este electrodo se comporta como electrodo de referencia. A todas las T y cuando la actividad de H+ es 1M. Cuando la concentración de Cl es mayor a 1M el electrodo es de referencia. permanece constante en función del tiempo Dentro de los electrodos de referencia tenemos el electrodo de H que es el que se utiliza para calcular los potenciales normales o estándar y ese electrodo tiene un potencial igual a cero. Están formados por una barra metálica que esta en contacto con una solución saturada de una sala poco soluble del metal y una determinada concertación del anion correspondiente a la sal Ejemplo: Ag0/ClAg(sat) . En el extremo inferior del tubo tiene una orificio poroso que esta en contacto con la solucion de CLK (es de tipo anionico . Esa pasta de cloruro mercurioso esta saturada y con una elevada concentración de KCl. oro) que esta sumergida en una solución que contiene una cupla redox Ej: Pt/Fe2+. [Cl-]>1M ) y además en la parte interna hay un alambre de platino que es el que hace el contacto. Cl-(Xm).Analisis Instrumental }1 0. Cs4+ ↓ electrodos ↓ ↓ indicadores ↓ ↓ metalicos 6 4 7 44 4 8 era 1 especie 2da especie redox referencia membrana Electrodo de referencia: su potencial no varia aun cuando hay pequeños pasajes de corriente. paladio. 35 . Este electrodo de calomel saturado (ECS) es que el que se usa como referencia y tiene un E=0. Electrodo de calomel Otro electrodo muy frecuente es el de calomel. Los electrodos redox Están formados por una barra de metal inerte (platino.268V Otro electrodo de referencia que se usa es el electrodo de Agº/ClAg(s). Si no.0591 [red] log n [ox] 14 2 4 3 0 ИиФерИх ΔP = E = E0Cu 0 /Cu2+ Los electrodos de segunda especie o anionicos. es un electrodo anionico ([Cl-]<1M). Este electrodo es un tubo de vidrio que en su interior tiene una pasta de Hg que esta en contacto con una solución de Hg2Cl2. Fe3+ o Pd/Cs3+.

Analisis Instrumental ИиФерИх El potencial de este electrodo de referencia es E=0.242V . neutralización. en la interfase electrodo-disolución En los electrodos indicadores metálicos la corriente se produce por una reacción redox En un titulacion potenciometrica están involucrados dos tipos de reacciones: una reacción electrónica y una reacción química. Electrodos de membrana: o electrodo selectivo a iones. Dan lugar a cuatro tipos de titulaciones potenciometricas. Asi se puede calcular los diferentes potenciales de las distintas especies y poder clasificarlos . teniendo en cuenta su capacidad de reducirse Titulacion potenciometrica Una de las aplicaciones prácticas es la titulacion potenciometrica: consiste en medir el potencial de una celda galvanica luego del agregado de alicuotas de un agente valorado. El potencial normal de electrodo se calcula cuando las actividades de las especies reducidas y oxidadas son iguales a 1M. de formación de complejos. trabajando a corriente nula Una celda de titulacion es un recipiente donde tenemos: electrodo indicador . La presencia de esa membrana en la disolución hace que se modifique la movilidad de los iones dentro de esa solución y se genere un potencial que va a depender de la concentración. Permiten hacer medidas directas. Puede entonces haber titulaciones de precipitación. la solución del electrolito. Cualquiera de estas reacciones puede producir al agregar el agente valorante . una bureta. Se genera un potencial por gradiente de concentración que genera un intercambio de iones a traves de la membrana Este potencial es el que se usa para calcular la concertación 36 . electrodo de referencia. Nosotros vamos a ir mirando el potencial en función de lo mililitros de agente valorado gastados. la única corriente que debe generarse es la corriente que proviene de la reacción de oxido reducción. y una reacción redox. Se utiliza una celda galvanica . Es una constante fisica caracteristica de cada especie. hay especificos para cada ion. Potecial normal de electrodo. Electrodos de membrana El otro tipo de electrodos indicadores que existen son electrodos selectivos de cationes y moleculas. De esa curva de titulacion potenciometrica vamos a obtener los militros de agente valorado que gastamos en la titulacion y por medio de una reacción estequiometrica calculas la concertación del analito. es decir . Estos tiene la particularidad de estar formados por una membrana que es selectiva a distintos iones. su E se calcula usando al electrodo de H como E de referencia. La membrana esta en contacto con los iones pero de actividad conocida y constante.

de actividad de H+ constante y un alambre de Ag que actúa como electrodo de referencia. La membrana de vidrio esta formada por redes tridimensionales de silicatos y dentro de esas redes existen cationes mono. la conductividad esta dada por iones monovalentes que constituyen la membrana. bi y trivalentes. Algunas membranas están formados por compuestos inorgánicos como haluros de Ag. Deben estar siempre hidratadas para facilitar la reacción de intercambio que ocurre a ambos lados de la misma. las no cristalinas y dentro de esta ultima tenemos las membranas de vidrio.Esto hace que sean poco solubles o insolubles. las membranas son de moléculas grandes o agregados moleculares como vidrios. Hoy en día los electrodos selectivos son electrodos combinados . Esta debe presentar una minima solubilidad . Los monovalentes son los encargados de la conductividad selectiva de la membrana. saturada con ClK. Membrana no cristalina de vidrio El mas común es el electrodo selectivo a H+ que es el electrodo selectivo a pH.Analisis Instrumental ИиФерИх Es importante conocer la naturaleza de la membrana. sílice. las formadas por líquidos y las movilizadas por líquidos rígidos. Las tres características fundamentales que debe cumplir una membrana son: • Minima solubilidad (dada por la composición con grandes moleculas) • Conductividad eléctrica (dada por los iones monovalentes) • Reactividad selectiva al analito en estudio. Dentro de ese tubo de vidrio hay una solución de HCl concetrado . Debe estar hidratada en la cara externa cuando esta en contacto con la solución del analito y la parte interna cuando esta en contacto con la disolución 37 . El indicador y el de referencia están juntos dentro de un tubo de vidrio. Esta membrana esta en contacto con la solucion de H de actividad desconocida Potencial a través de membrana: una de la característica fundamental de la membrana es que debe estar hidratada para poder medir la actividad de analito. es importante conocer la composición de la membrana. Además . la capacidad del electrodo de ser o no selectivo depende en gran parte de la membrana. es decir la solubilidad de la membrana en la disolución del analito debe tender a cero. Generalmente . La membrana responde selectivamente a distintos iones . la membrana debe tener una reactividad selectiva con el analito o sea debe interactuar electivamente con el analito ne estudio. los bi y trivalentes permanecen retenidos por los silicatos y mantiene humeda y rigida a la membrana. A su vez en el interior tiene otro electrodo de referencia de Ag/ClAg que forma junto con el electrodo indicador la celda que se utiliza para medir pH. Hay dos tipos de membrana que se utilizan en este tipo de electrodo: las membranas cristalinas. La membrana tiene que poder interactuar de manera selectiva con el analito. la membrana debe tener una determinada conductividad eléctrica. Generalmente. Además. Existen electrodos selectivos a cada ion. resinas.

 → H + + V − Na + ← Na + V− H  V: acido salicilico. Los iones Na+ originan el potencial entre la disolución externa y la membrana externa y un potencial entre la solución interna y la membrana interna. Es decir. El equilibrio esta desplazado según la concentración de protones tanto en el medio como en la disolución y eso genera un potencial limite Eb = E2 . El movimiento genera carga en la membrana y eso genera el potencial. La superficie de la membrana predomina el Acido Silicico y lo mismo ocurre en la cara interna de la membrana.E1. se desplazan a lo largo de esa red cristalina y son los responsables de la conducción eléctrica que va a permitir generar un potencial. La diferencia a ambos lados de la membrana es lo que se conoce como potencial limite. allí es donde se encuentran los iones monovalentes. La reacción de intercambio que ocurre genera el gradiente de concentración. como debe estar hidratada la membrana.Analisis Instrumental ИиФерИх del analito de actividad constante. potencial de membrana o potencial de superficie. será igual al potencial limite. (Pi y Pii). mas un potencial de referencia interno mas un cierto potencial de asimetría (este potencial de asimetría es muy chico y se debe a las distintas tensiones en la estructura de la membrana) Eind= Eb + Eref2 + Easi Eb=Eind . En esa solución externa hay solución de H+ cuya concentración o actividad no conocemos pero del lado interno hay una concentración de protones conocida y constante. responsable del pH. La región intermedia esta seca . Este es el parámetro analítico que da una idea del pH de la solución.059pH potencial limite en función del pH para un electrodo selectivo a pH. El equilibrio de la reacción . tiende a desplazarse hacia la derecha. El potencial limite es el parámetro analítico que me va dar el pH de la solución. el potencial de un electrodo indicador de este tipo.Eref 38 . Este es un parámetro analítico que se usa para medir pH. El potencial limite queda en función de la actividad de la especie en disolución (es que el no se conoce). Eb=L-0. pH=-log(a) . Electrodo selectivo a pH El potencial limite esta dado por la diferencia de potencial de los potenciales a cada lado de la membrana (cada uno responde a la ecuación de Nersnt).

Ese tipo de electrodo esta formado por un tubo de vidrio que en su interior tiene otro tubo de vidrio y en el extremo inferior presenta una 39 . Limitaciones del electrodo selectivo a pH. no se preparan y no se conoce su fuerza iónica.5 o 1. selectivo a H+.B. Este mismo electrodo. Según IUPAC y según el instituto nacional de patrones y tecnología (NIST) establece como pH operacional aquel que se obtiene de la calibración directa del instrumento con disoluciones patrones conocidas preparadas a partir de estándares primarios. entonces al ser diferentes los coeficiente de actividad no se puede medir [H+] Electrodo de membrana no cristalina liquida Con los otros tipos de electrodos de membrana no cristalina tenemos los de membrana liquida. Es decir sobre el valor del potencial limite . Indica cuanto interfiere la otra especie con respecto al electrodo del analito (B interfiere con con el electrodo selectivo a A. Entonces debe definirse un parámetro que se denomina coeficiente de selectividad. K+. seguido de la determinación de pH de la disolución incógnita. por ejemplo) Toma valores de 0 a 20 o 30 y es un dato que viene tabulado por el fabricante. pero no se puede saber la concentración de H+ que hay en la solución si hacemos una medida directa. Coeficiente de selectividad k Esta variable esta involucrada dentro de la ecuación del potencial limite de membrana -log (a1KA. generada fundamentalmente por desgaste. Es el grado de interferencia que genera un ion sobre otro. En algunos casos puede darse que el electrodo sufra lo que se conoce con el nombre de error acido. Si el coeficiente tiende a 0 indica que el ion no interfiere en la medicion pH operacional: el pH de una solución debe ser una constante universal. Sucede a solución de pH inferiores a 0.Analisis Instrumental ИиФерИх Potencial de asimetría.b1)-. puede según las condiciones ser sensible a otros iones monovalentes y en ese caso cuando el electrodo se usa para medir soluciones básicas puede ser que sea sensible a iones Na+. al no conocerse la fuerza ionica de los buffers es imposible relacionarla con la fuerza iónica de la muestra. Es un potencial muy pequeño y se debe a las diferencias de tensiones en la estructura de la membrana. Ese coeficiente indica como afecta la presencia de un ion en la disolución sobre la mediad del pH. Este coeficiente de selectividad representa la relacion que existe entr la respuesta de dos iones que estan presentas en la misma disoclucion. La mediad o el valor de pH en ese casos era menor que el valor real y en ese caso se dice que el electrodo presenta un error alcalino. Es despreciable. en estos casos el pH medido es mayor que el real. Esto se debe a como se calibra el electrodo. Estas soluciones se compran. Aplicación del electrodo selectivo a H+ Sirve para medir si una solución es acida o es básica .

a través de la ecuación de Nersnt con la concentración de FLa característica que tiene este electrodo es que se puede trabajar en un amplio rango de temperatura (entre 0 y 80ºC) sin que haya variación del potencial. Quiere decir que uno va a conocer esas soluciones patrones entonces va a permitir conocer la concentración de la muestra. que es de LaF3. 40 . Dentro de ese tubo de vidrio que forma parte del electrodo se encuentra un disolución que contiene NaCl y NaF donde la actividad de F es constante y conocida. Generalmente se usa para cationes bivalentes aunque los hay para monovalentes. Es bastante selectivo. esta saturada de uno o varios intercambiadores iónicos orgánicos que se encuentran entre los dos tubos. a traves de un intercambio ionico en la membrana. Electrodos no cristalinos de un liquido inmovilizados por un polímero rigido En este caso los electrodos son semejantes al anterior con la única diferencia en que la membrana ya no es de plástico son que son membranas de cloruro de polivinilo y esto hace que la membrana sea mas flexible y eso hace que el coeficiente de selectividad sea menor. Con estos eléctrodos se pueden hacer medidas directas de diferentes cationes y aniones. 1)Cristal único: las membranas están formadas por Fluoruros de Lantano (LaF3) y es selectiva a iones F-. El potencial se genera de la misma manera que el de vidrio. esa membrana .para detectar (el electrodo tiene una menor respuesta).Analisis Instrumental ИиФерИх membrana de plástico porosa que se encuentra impregnada por un liquido hidrofobito. pues se forma HF en el medio y ya no se tiene iones F. Dependiendo de la concentración molar de F que hay en la disolución se genera un potencial y ese potencial limite generado es el que se va a relacionar después. A)Electrodos de membrana cristalina Hay de dos clases: • 1)Cristal único (membrana formada por un único cristal) • 2)Policristalinos o mezcla de cristales. Cuando se calibra el instrumental se lo hace con su solución patrón preparada por uno mismo. Se crean huecos en la membrana para que los iones F puedan moverse con mayor facilidad y se genere el potencial limite. el electrodo es un tubo de vidrio que en la parte inferior tiene una membrana que tiene un diámetro de 10 mm aproximadamente y un espesor de 2 o 3 mm . Dentro el tubo interno se encuentra un electrodo de referencia interno sumergido en una solución acuosa del metal que uno quiere determinar. en la cual esta sumergido el electrodo de referencia interno. La única limitación que tiene el uso del electrodo es que a pH superiores a 8 empiezan a interferir lo –OH del medio y a pH menos a 4 o 5 comienzan a molestar los H+. mediante un tratamiento con F2Eu (fluoruro de europio) con el objeto de aumentar la capacidad conductora de la membrana.

en el caso del CO2 se generan H+ y HCO3. la voltamperometria hidrodinámica para titulaciones amperometrica y voltamperometria hidrodinámica para sensores químicos. Se pueden usar. para determinaciones cuantitativas (con lo selectivos) Se calibran con testigos preparados por uno mismo. Son dispositivos formados con un electrodo selectivo de iones que esta retenido por una membrana permeable a gases y entre el electrodo selectivo y la membrana sensible se encuentra una solución interna que es la que va generar el producto para su posterior detección. Voltamperometria Estas técnicas abarcan un conjunto de técnicas que permiten obtener información de una especie a través de la medición de corriente en función de un potencial aplicado.Al entrar en contacto se generan diferentes productos . Son electrodo que se suelen usar como electrodos selectivos para iones Ag+. El gas disuelto pasa a través de la membrana permeable y se encuentra con la solución interna. Son lecturas directas de replicas. El grafico generado generalmente es sigmoidal Dentro de estas técnicas tenemos  Clasica  polarografia  Por pulsos Voltamperometria de barrido lineal  voltamperometria hidrodinamica Titulacion amperometrica   Sensores quimicos Se estudiaran la polarografia clasica.Analisis Instrumental ИиФерИх 2) Mezcla de cristales: generalmente la membrana es una mezcla de sales de haluros de Ag con sulfuros de Ag en relación 1:1. Existen electrodos selectivos a moléculas. 41 .. todo. salvo en el caso del electrodo de vidrio selectivo a protones. luego se lee la muestra y se obtiene la concentración del analito. Se mide intensidad de corriente en función de un potencial aplicado. el resultados se expresa como es usual. se hace una mezcla homogénea de tal manera que aumente la conductividad de la membrana. Es decir que como electrodo selectivo de Ag podemos tener de membrana cristalina o no cristalina (según como este formada la membrana) Lo importante siempre es conocer la composición de la membrana y saber que siempre se puede hacer una medida directa. Otros electrodos.uno de los productos que se genera es que reacciona con el electrodo selectivo. Hay de dos tipos • Electrodos selectivos a moléculas gaseosas • Electrodos selectivos a moléculas orgánicas También se conocen como sondas sensibles a gases.

donde se coloca el Hg y en esa gotita de Hg es donde se produce la electrolisis. El disco puede estar recubierto de diferente materiales (Pt. Hg. C grafito) y según sea ese material va a presentar diferentes potenciales dependiendo también del electrolito soporte donde esta sumergido (fotocopia 1). Las gotas deben ser chiquitas y homogéneas para mantener la reproducibilidad del resultado. Los electrodos estan conectados a un generador de potencial de barrido lineal. reservorio. En esta técnica la única que debe existir es la de difusión en la interfase electrodo disolución. En esta técnica se usa una celda de polarografia (los tres electrodos. Se trabaja con microeletrodos porque uno debe trabajar también en condiciones de polarización por concentración. Son tubos de vidrio que tiene un deposito. Estos electrodos son • Electrodo de referencia: mantiene constante su potencial durante la medición • Electrodo auxiliar: es un alambre de Pt cuya función es conducir la electricidad desde la fuente generadora de potencial hacia el tercer electrodo (indicador) • Electrodo indicador: es un microelectrodo . también llamado electrodo de trabajo. Dentro de esa celda polarografica pueden ocurrir tres tipos de movimiento (conveccion.Analisis Instrumental ИиФерИх La voltamperometria de barrido lineal tiene la caracteristica de que el potencial que se va aplicando tiene que variar linealmente con el tiempo. Microelectrodos Electrodo de disco Es una varilla de teflón que en la parte inferior tiene una plaquita o disco con características conductoras. Se suele usar también en polarografias por pulsos Electrodos de gota de Hg Hay otro microelectrodos mas usados que son los microelectrodos de gotas de Hg. difusión y migración) que dan lugar a respetivas corrientes. 42 . Generalidades de la voltamperometria de barrido lineal • En cualquiera de las dos técnicas se miden corriente I vs potencial • Se usa una celda voltamperometrica La celda voltamperometrica esta compuesta por : tres electrodos sumergidos en una solución que contiene al analito y un exceso de un electrolito soporte (disolución no reactiva de alta molaridad). el analito y la solución de electrolito soporte). Este tipo de electrodos de gota se usa mucho en polarografia clásica y en titulaciones amperometricas. Este disco a su vez esta conectado a un hilo de Pt que sirve como conexión. Polarografia Clasica. Generalmente este electrodo se utiliza en la voltamperometria hidrodinámica empleando sensores químicos. Au.

La corriente alta que se genera cuando se aplican potenciales positivos es debido a la oxidación del agua. que “enmascara” a la posible corriente de migración que genere el analito En estas condiciones la única corriente involucrada en la determinación de la de difusión. Si hay O2 disuelto este se reducirá muy fácilmente cuando se apliquen los potenciales. construir una curva de calibrado y expresar el resultado como X0 ± tS Xo El grafico queda. ya que la corriente que generan es de baja intensidad y fácilmente medible. es un parámetro cualitativo que es característico del analito en un determinado medio. 43 . Esta definido como el potencial donde la intensidad de corriente es la mitad de la corriente limite. es decir. Potencial de media onda. del electrolito inerte. Depende entonces: del analito. del pH. por ejemplo la corriente de difusión y el potencial de media onda. de la temperatura. Si se usaran potenciales positivos podría ocurrir que generen corrientes muy altas y eso haría que no se pueda o que interfiera. Este problema se resuelve burbujeando con N2 Polarograma tipo Es un grafico de intensidad de corriente versus potencial La curva B corresponde al electrolito soporte.Analisis Instrumental ИиФерИх Las corriente de conveccion se elimina trabajando en reposo y a temperatura constante y la de migración se elimina usando un electrolito soporte . De un polarograma se puede obtener mucha información. La corriente de difusión es la corriente entre la corriente limite (microelectrodo polarizado por carga) menos la corriente residual (generada cuando el electrodo esta polarizado por carga. generando una onda polarografica que puede enmascarar a la onda polarografica de la especie en estudio. Otra condiciones es que cuando se hace una cuantificación se debe asegurar que no haya O2 disuelto. A determinado potencial la especie se reduce y el electrodo queda polarizado por concentración. Muestra y testigo se tratan de la misma manera. se va formando la doble capa (este proceso corresponde a la parte plana de la curva). La relación entre ambos es lineal. Esta característica del electrolito soporte es una condiciones operacional Los potenciales aplicados son negativos. al momento de hacer una determinación cuantitativa. la corriente residual es generada por el electrolito soporte). En esta fase el electrodo esta polarizado por carga. que tiene un potencial de reducción mucho mas negativo que la especie a determinar. En determinación cuantitativa I:kC. pero NO depende de la concentración. El polarograma reflejara la relación entre el potencial y la corriente de difusión que ocurre dentro de la celda polarografica. Generacion del polagrama A medida que se aplican potenciales (y se va midiendo la corriente) se produce un reordenamiento de cargas en la superficie de la gota de Hg. según cada testigo y su correspondiente señal. como intensidad de corriente vs concertación del testigo. en este método se pueden usar testigos.

Los gráficos obtenidos son curvas que presentan en un punto un quiebre. Como se ve en la fotocopia. Ventajas con respecto a la polarografia. La forma de la curva depende de cual sea la especie electroactiva. • No debe haber O2 disuelto Como electrodo se usa comúnmente el goteo de Hg. electrolito soporte y ausencia de O2 Voltamperometria hidrodinámica. mientras que en polarografia todas las especies deben serlo. El potencial constante que se aplica se determina haciéndole un polarograma a toda las especies involucradas (analito. Hay dos tipos de voltampermetria hidrodinamica: la titulacion amperometrica y los sensores químicos. Esta consta de: tres electrodos (referencia. Cada especie tendrá su curva característica . auxiliar y el de trabajo. ese punto de quiebre es el punto de equivalencia. Condiciones operacionales. La única corriente eliminada es la de migración. Se miden corrientes de conveccion y de difusión. por ejemplo. 44 . Para aplicar la polarografia es fundamental que la especie sea electroactiva. Tiene además un generador de potencial conectado. siempre y cuando sea electroactivo. Estas son: temperatura. Titulación amperométrica Se basa en medir la intensidad de corriente de una solución a medida que se van agregando alícuotas de un agente valorado trabajando a potencial constante. agente valorado y producto de reacción). Se usa una celda amperometrica. cambiando el pH o el electrolito soporte pueden diferenciarse analitos en una mezcla. una bureta desde donde se agrega el agente valorado y un vaso de precipitado que contiene la disolución del analito y el electrolito soporte. Esto permite. que en este caso se usa goteo de Hg). aunque a veces aplica también el de disco de Hg. titular un analito no electroactivo si el agente valorado o el producto lo son. y se puede hacer siempre y cuando las condiciones operacionales estén bien fijadas. • Se debe trabajar en agitación.Analisis Instrumental ИиФерИх Permite tener una idea cualitativa para poder identificar o diferenciar distintos analitos. es decir. Permite hacer una determinación cuantitativa siempre y cuando una de las especies sea electroactiva. que la corriente de conveccion junto a la difusión serán parte de la medición. Una característica de estas técnicas es que se trabaja en agitación. Una vez seleccionado el potencial se agregan las alícuotas del agente valorado. mediante el uso del electrolito soporte. reposo.

solo varia el transductor. sino se les llama simplemente sensores quimicos. una disolución de ClK y un cátodo con disco de Pt. Este receptor puede estar formado por membranas sensibles a gases o también puede estar formado por microorganismo. enzimas inmovilizadas. Hay sensores químicos: • Para moléculas gaseosas (CO2 disuelto por ejemplo) • Para moléculas orgánicas. voltampermotricos u ópticos. Luego hay una membrana de diálisis y otra de acetato (actúan como filtros) y un microeletrodo de Pt. La señal viaja por la fibra óptica hasta un PMT. La membrana esta rodeada de un anillo de plata que actúa como ánodo. Lo único que varia es la membrana. voltamperometricos u opticos. La reacción entre la glucosa y la enzima da acido gluconico y H2O2 El H2O2 a determinado potencial que se aplica. también llamados biosensores (por ejemplo para glucosa) Definición de sensor químico. Cuando los sistemas de reconocimiento tienen caracteristicas biologicas se les llama biosensores. Los transductores pueden ser potenciometricos (como los electrodos sensibles a moléculas). En resumen: Los sistemas de reconocimiento pueden ser: membranas sensibles a gases o membrana sensible a compuestos orgánicos Los transductores pueden ser: potenciometricos. Cuando el O2 difunde a través de la membrana y al aplicar un determinado potencial este se reduce en el cátodo generando una señal de corriente proporcional a la concentración de O2 disuelto (son similares a los potenciometricos. redisolución y determinación mediante barrido lineal de potencial. En lugar de una membrana permeable tiene una que contiene a la enzima. El sistema de reconocimiento también se conoce con el nombre de receptor. 45 . en vez de tener un electrodo selectivo poseen uno voltamperomtrico porque se aplica un potencial) También hay sensores químicos que detectan moléculas orgánicas donde el receptor es una enzima inmovilizada. Es un dispositivo que esta formado por un sistema de reconocimiento y un transductor. Método de redisolución Este método consta de tres pasos: Electrodepocision. El transductor voltamperometrico tiene una membrana sensible a gases.Analisis Instrumental ИиФерИх Sensores quimicos Esta variedad de voltamperometria hidrodinamica permite hacer determinaciones directas cuantitativas usando sensores químicos. Cuando se tiene un sistema óptico en ve de microeletrodos hay una fibra óptica concentrada a una espectrofluorimetro o fotometro y en la membrana hay un reactivo o colorante que reacción con el producto generando la señal óptica. se oxida y genera una señal de corriente proporcional a la concertación de glucosa.

se puede hacer una curva de calibrado. Se aplica el potencial y se agita la solución durante determinado tiempo.Analisis Instrumental ИиФерИх Es una aplica de voltamperometrica que generalmente se usa para determinar analitos en trazas. Eletrodeposicion. Se trabaja en un determinado tiempo de aplicación. Al ir aplicando esos potenciales las especies vuelven a disolverse. La ley dice que la corriente generada o que fluye a traves de un conductor es directamente proporcional al potencial aplicado e inversamente proporcional a la resistencia que ejercen los electrolitos en disolución. Cuando la concentración es muy baja. Redisolución Una vez preconcentrado el analito se detiene la agitación y se comienza a aplicar potenciales cada vez mas negativos. Los picos tiene un punto máximo. y registrando los picos máximos se hace la curva de calibrado Grafico. se busca primero el potencial de reducción de ambos. Conductimetria Las técnicas conductimetricas permiten medir la conductividad de una solución electrolítica y esa conductividad esta dada por todos los iones presentes en la disolución. lo que permite hacer determinaciones fácilmente. Se obtiene un grafico de picos (intensidad de corriente en función del potencial). pero cuando lo hacen. Se aplica un determinado potencial que logra que se reduzca a los analitos en disolución (el potencial debe conocerse). [A]=[V]/[Ω]. Los gráficos obtenidos son muy claros. en este caso electrolitos disueltos. El microelectrodo que se utiliza tiene un plaquita cubierta con una solución de Hg y es de carbono vitrificado. Ejemplo: Si se tiene una mezcla de Pb y Cd. El último paso corresponde en realidad a la voltamperometria común. cada una empieza a oxidarse y al oxidarse genera una corriente que se registra y permite determinar cuantitativamente la concertación. Se hace uso de la ley de ohms. Con esto se logra que el analito se preconcentre en las cercanías del electrodo. del orden de 0 a 100 volts. Si aplicamos potenciales bajos podemos aplicar la ley de ohms para calcular la conductividad de la especies en disolución. Ese valor de conductividad va a depender de todos los iones presentes en la disolución. el potencial debe conocerse para asegurar que logre reducir a la especie. 46 . se preparan testigos con Cd y Pb. juntos. así que se puede decir que la clave de estos métodos consiste en dos pasos fundamental: la eletrodeposicion y la redisolución. aplicando la voltamperometria común no se lograría determinar. Se puede usar siempre que los potenciales sean bajos. Esto quiere decir que dependerá de la movilidad de los iones cuando se aplica una diferencia de potencial En esta técnica no interesa lo que ocurra en la interfase electrodo disolución sino lo que suceda en el sena de la solución cuando se aplica un potencial. con ese valor y trabajando con testigo. que sirve para cualquier conductor eléctrico.

un centímetro cúbico. Reemplazando ro por L/a. distancia 1 cm) Conductividad equivalente: se representa con la letra lambda mayúscula. se puede usar en varias cosas. indica o expresa la conductividad eléctrica de todos los iones presentes en la disolución por un gramo equivalente de soluto Δ=k[1000/C] (concentración por litro). En química analítica se trabaja a dilución infinita y esa conductividad equivalente esta dada por la sumatoria de cada una de las especies en disolución. A partir de la ley de omhs se puede despejar ese valor de resistencia R=E/i E: potencial aplicado. a muy altas concentraciones diminuye porque la electricidad se pierde en roces electroestáticos. La alta contribución de los H y los OH es muy grande ya que tiene un gran tamaño. i: corriente que ejercen los electrolitos.Analisis Instrumental ИиФерИх Cuando se conoce el potencial aplicado y se aplica. Este valor también se representa como la suma de la conductividades de las especies en disolución Δ=Σ λ+ λ-. Cuanto se mueven los electrolitos en un litro de solución. área 1 cm2. Quiere decir que ese valor de resistencia va a estar relacionado con el valor ρ (ro) . la conductividad especifica. etc) • Temperatura: idem concentración • Solvente utilizado • Potencia que se aplique. pero no indefinidamente. en agua y a 25 grados. los electrolitos se mueven generando una corriente. La conductividad equivalente disminuye con la concentración. una capacidad conductora y una movilidad elevada. (es la conductividad que tiene lugar en el centímetro cúbico de solución que se encuentra entre los electrodos. Δ. Quiere decir que cuando se quiere medir la conductividad lo que se esta midiendo (G= conductividad eléctrica) es la inversa de la resistencia que se esta generando en el seno de la solución. resistencia especifica. fuerzas de van der walls. Mediciones directas Se pueden hacer determinaciones directas de conductividad. queda G=1/roxA/l. en otros solventes el comportamiento puede ser diferente. El valor de la resistencia R depende de la distancia con que estén ubicados los dos electrodos y va a depender también del área de los electrodos. Conductividad: da una idea de cómo se mueven los iones al aplicar un determinado potencial Conductividad especifica: conductividad de un determinado volumen. pero no interfieren entre si. La conductividad de una solución depende de varios factores: • Geometría del electrodo (área y distancia entre ellos) • Tipos de iones presentes • Concentración (la conductividad aumenta con la concentración. la única variable que no se conoce es la resistencia. (se estandariza 1 cm de distancia y 1 cm2 de superficie de electrodo). donde 1/ro es k . por ejemplo: 47 .

Solvente utilizado. la muestra circula constantemente. Concentración. etc Para hacer estas determinaciones se utilizan celdas como las esquematizadas en la fotocopia. la conductividad varia antes y después del punto de equivalencia y la forma de las curva va a variar en función de los electrolitos en disolución y del tipo de titulación (hay titulaciones acido base y por precipitación) Dentro de las acido base están: las de acido y base fuertes. (a. Se introduce la muestra y el nivel es el mismo (el nivel del volumen. ya que tendrán diferentes conductividades. También se usan mucho para determinar las constante de equilibrio de ácidos o bases débiles Es importante tener en cuanta que la concentración del agente valorante debe ser similar o levemente superior a la del analito. Titulación conductimetrica Para esta titulación se utiliza una celda como la indicada en el esquema c. temperatura. Clasificación y tipo de cromatografías Teniendo en cuenta como esta formada la fase estacionaria y la fase movil (los analitos estan en la fase estacionaria) se la puede clasificar en 48 . las de acido y bases débiles y generalmente se utilizan. gaseosas. los electrodos tienen forma anular y suelen usarse en cromatografía Lo importante en estas determinaciones es controlar las variables operacionales. Conocer la composición de sal de diferentes matrices (leche.Analisis Instrumental ИиФерИх Para conocer la naturaleza de diferentes electrolitos que forman parte de una sal inorgánica (entre isómeros de la sal). Esta copa se introduce en la muestra (se usa en mediciones in situ) La celda d es una celda de flujo. las de acido débil con base fuerte. cualitativamente al menos). cuando la solución presenta turbidez o coloración y no se puede aplicar un método colorimétrico. Cromatografía Es una técnica de separación que se basa en separar diferentes analitos que forman parte de una muestra para pode cuantificarlos posteriormente. como en potenciometría. Tipos de iones presentes. Ayuda a conocer la salinidad o el tipo de sales que componente diferentes aguas (puede conocerse el tipo de electrolito. esquema a). los electrodos están a igual distancia.b y d). en ese tipo de celda se hace una medida directa (requiere mucha muestra) Sino se tiene mucha muestra se usa una celda del tipo b que es como copa invertida que contiene los electrodos. Potencia que se aplique. Constan de dos recipientes que tiene conectados a ambos lados los electrodos separados una distancia constante y tienen un área determinada. hay un termómetro para asegurarse una temperatura constante y una bureta con el agente valorado Se basa en medir la variación de la conductividad eléctrica de una disolución a medida que se agregan alícuotas del agente valorado. generalmente son de platino recubierto de negro de platino.

La adsorción es un fenómeno de afinidad entre el soluto y la fase estacionaria. Siempre existe una cierta relación entre ambas fases. La fase estacionaria son sólidos. un grafico que indica como se separan los componentes de una mezcla en función del tiempo. con forma de campana de gauss totalmente definida. En esta cromatografia la fase movil es un gas y la fase movil puede ser un solido o un liquido impregando en un solido. Para conocer el tiempo de retención de un analito se le hace un cromatograma a un testigo del analito. dan lugar a la cromatografia liquida de intercambiadores iónicos • En otros casos los sólidos son tales que permiten la separecion en funcion del tamaño de la moléculas. Ese tiempo se denomina “tiempo muerto” y corresponde a algún analito que no fue retenido. aparece un piquito chiquito a un determinado tiempo. El soluto que va a separarse tiene que tener una determinada constante de distribución entre ambas fases K=Cs/Cm. la separacion ocurre por un fenomeno de adsorcion • En otros casos lo solidos son intercambiadores iónicos. generalmente. 49 . Los picos tiene que partir y volver a la línea de base. El parámetro importante es el tiempo de retención. Este tipo de cromatografía generalmente se usa para análisis cualitativo. Donde la fase estacionaria se coloca sobre una placa o papel. B)Cromatografía en columna Se divide en Cromatografía gaseosa : dos tipos CG solida (CGS) y CG liquida (CGL). El tiempo de retención es independiente de la cantidad de muestra ingresada y siempre en un cromatograma cuando comienza la corrida.Analisis Instrumental ИиФерИх A)Cromatografía plana En papel y en capa fina. La capa fina es de vidrio y silica y funcionan de la misma manera. este tipo se denomina cromatografia liquida de exclusión. Cromatografia liquida La fase movil es un liquido y la fase estacionaria es un solido o un liquido que tiene diferentes propiedades: • En algunos casos donde la F. • Otros sólidos san lugar a la cromatografia liquida de adsorción. todo depende de las características de la FE. esta ultima es mas usada. Con el tiempo de retención se puede identificar al analito. Es importante asegurarse una buena resolución de los picos que se van obteniendo en el cromatograma. Generalmente se toma como referencia.E tiene características polares. Lo que se registra es un cromatograma. en el caso del papel es un papel de filtro en el que se siembra la muestra y luego se le hace pasar el solvente que revela la macha y esta mancha se mide.

Cromatografia gaseosa solida. CGL. uno tiene que tener en cuenta algunos parámetros: Eficacia de la columna: esta variable esta relacionada con la constante de distribución de cada una de las especies que constituyen la muestra.5 brinda una buena resolución. También se puede calcular a través del K a (Tra -Tm ) cromatograma ya que α= = . ya que dan mas tiempo de contacto entre el soluto y la FE. para mejorar este valor se puede trabajar con columnas mas largas. CGS. Se le llama α. En algunos casos esto mejor la resolución. Poder de resolución: este parámetro tambien es importante para una buena separación. 50 . Este parámetro de eficacia de la columna se indica con la 1α-1   N letra V R=  4α   L V= . Tm. los picos muestran una mezcla. su formula es: 1α-1   R= N  . donde uno conoce Tr y L. donde L es la longitud de la columna y Tr el tiempo de retención Tr A partir del cromatograma. y α es el factor de 4α   selectividad. indica el poder de resolución. En función del tipo de columna (que se compran con determinada fase estacionaria) uno debe saber elegir el tipo y la longitud para poder hacer una buena determinación cuantitativa. Cromatografia gaseosa Hay de dos tipos: Cromatografia gaseosa liquida. Por ejemplo R:0. representa el pico En cambio un valor mas elevado de R. Este factor relaciona las constante de distribución de los distintos analitos. Un valor R de 1 tampoco da una buena resolución. donde la fase móvil es un gas y la fase estacionaria es un liquido. Además da una idea de las posiciones relativas de cada uno de los analitos.Analisis Instrumental ИиФерИх Para que exista una buena resolución de los picos. puede determinar la eficacia de la columna. Factor de selectividad o separación: este es otro parámetro importante para lograr una buena separación. lo cual no permite saber que cantidad de analito. donde N es el numero de platos teóricos. por ejemplo R:1. donde la fase móvil es un gas y la fase estacionaria es un sólido. se puede calcular a partir del cromatograma. El valor de R según sea. A mayor R mejor es la resolución. Brinda una idea acerca de como cada especie se distribuye en la fase móvil y en la fase estacionaria. y los tiempos de retención se K b (Trb -Tm ) obtienen desde el cromatograma.75 muestra picos superpuestos.

pero también es muy importante asegurarse que la temperatura de la cámara de volatilización sea la apropiada Las columnas son capilares. Los compuestos deben estar en estado gaseoso No deben descomponerse a la temperatura de separación No deben descomponerse ni adsorberse en la fase estacionaria (no tienen que quedar retenidos) Tiene que ser fácilmente detectables Cromatrografo gaseoso Tiene un tuvo de gas que contiene a la fase móvil (carrier). porque allí se produce la separación . pues de ella depende la separación. que consiste en una cámara de vaporización instantánea que al momento de inyectar la muestra (con jeringas o con una válvula de inyección la muestra se volatiliza enseguida. se detectan y luego se desechan. El cromatógrafo tiene además un horno cuya función es termoestatizar la a la columna. La CGS se basa en la separación de los analitos teniendo en cuenta la diferencia de temperatura de volatilización de cada analito y en la capacidad que tengan para ser adsorbidos por la fase estacionaria La CGL se basa en la diferencia de volatilización de cada analito y en la solubilidad de cada uno en los componentes de la mezcla. tiene válvulas reguladoras que regulan la salida del gas (flujo constante y conocido) El gas: debe ser químicamente inerte. uno entra a la columna cromatografica y la otra va directo al detector. Cual es la fase estacionaria Que tipo de detector que se utilizara Teniendo esto en cuenta se elige el gas. Los analitos deben ser estables a la temperatura necesaria para su volatilización. loop. porque es fundamental que la columna donde se produce la separación tenga la temperatura adecuada. Características que debe tener la muestra para poder se cuantificada por CG. Ar.Analisis Instrumental ИиФерИх Esta técnica se usa mucho para la separación de componentes volátiles. y recipiente pequeño de volumen fijo. Para elegirlo se tiene en cuenta: que debe tener una buena afinidad con el analito. Válvulas de inyección: un sistema de carga y descarga. La fase móvil se divide en dos caminos. 51 . su flujo debe ser constante y conocido. Una vez volatilizada. CO2. generalmente se usan N2. No se usa mas este método. En es columna se produce la separación y desde allí van llegando los distintos analitos. H2. He. Es fundamental controlar la temperatura de la columna. largos y de diámetro pequeño Sistemas de inyección Jeringas: la inyección debe hacerse rápido para una buena reproducibilidad y resolución. En uno de los extremos de la columna se encuentra el sistema de inyección de la muestra. ingresa arrastrada por la fase móvil a través de la columna.

Algunos equipos requieren una precolumna para reconcentrar la muestra. El detector tiene una cámara en cuyo interior hay un alambre en forma de espiral por donde circula corriente. de volumen muy pequeño. Cuando a través de ese espiral circula el gas . algunos grupos Ar) El ECD se basa en medir la disminución de la corriente generada entre dos electrodos. Componentes de un cromatógrafo HPLC. Esta formada por una quemador o mechero y en la parte superior de ese quemador tiene un electrodo colector de electrones. Tubos o recipientes donde se encuentra la fase móvil: son de materiales inerte. Esas columnas (ver fotocopia) de HPLC son bastante distintas a las de cromatografía liquida convencional. Estos detectores tienen la característica de tener una microcubeta. debido a que se busca una buena reproducibilidad. Los solventes mas utilizados suele ser metanol. Entre esos dos electrodos hay una placa de un metal radiactivo. cloroformo o mezclas de ellos. Deben ser de muy buena calidad y no deben interaccionar con la muestra.Analisis Instrumental ИиФерИх Detectores Detector de ionizacion en llama (FID). Bombas: generalmente un par. Al llegar el gas inerte y el analito se ionizan y generan electrones que son colectado dando lugar a una corriente Es una corriente muy débil (10-10 – 10-12 A) por lo tanto necesita un amplificador de corriente. cuando el gas con el analito atraviesan esa placa el material radioactivo ioniza al gas generando un flujo de electrones . se ioniza. Esa corriente es proporcional a la concentración del analito Detector de conductividad termia (TCD) Este tipo de detector se basa en que un filamento de tungsteno (W) libera calor cuando circula a través de el un gas. Es el mas común y versátil Se basa en la capacidad de conductividad eléctrica que tienen la fase móvil. Detector de captura electrónica Este tipo de detector generalmente se usa en instrumentos que se usan para determinaciones medioambientales (de compuestos como halógenos. Allí convergen la fase móvil y la muestra. Allí se mezcla y se homogeneiza la fase móvil donde llega a una válvulas o sistema de inyección. Esa válvula de inyección es semejante a las válvulas rotatorias vistas en cromatografía gaseosa. Válvulas: permitir y regular la entrada de estos reactivos. genera una corriente eléctrica y esta se detecta. Se inyectan pequeños volúmenes de muestra. de presión. Una vez que se va produciendo la separación va llegando a un detector. que va generando una señal eléctrica a medida que va pasando la 52 . cuya función es impulsar la fase ovil en forma controlada hacia una cámara de mezclado (nº4). acetonitrilo. que deben ser controlados. ese flujo de electrones genera una corriente que es la que se detecta. La fase móvil debe fluir en forma continua. generalmente vidrio.

Cromatografía liquida La cromatografía liquida se basa en la separación de diferentes analitos presentes en una muestra. Cuando la fase estacionaria es un líquido que reencuentra soportado sobre un polímero se produce un mecanismo de distribución o extrusión. Se usa mucho en análisis farmacéutico. Al fase móvil es un liquido y la estacionaria es un solido. En este tipo de cromatografía la temperatura es un parámetro no muy importante. En la convencional la fase móvil fluye por gravedad o haciendo vacío. generalmente. intercambio iónico o un mecanismo de reparto ente una fase y otra. de cualquier tipo (común. Estos mecanismo pueden ser absorción. esta puede estar cargada y cuando se produce la separación se produce un mecanismo o reacción de intercambio iónico. conductimetrico. Es una técnica cara por las columnas y el mantenimiento. sílices o diferentes resinas de intercambio iónico. para separar pero no cuantificar. Es fundamental el tamaño de las partículas de la fase estacionaria Cuando surgió la cromatografía liquida de alta resolución (HPLC o CLARA). mucho mas que las gaseosas. para control de calidad de principios activos. Son columnas de diámetros muy chiquitos (8-10 μm) y una longitud de 20-25 cms. a temperatura ambiente. Son muy amplias. que dependiendo de la relación carga tamaño de la especie. En este caso como fase móvil tenemos una fase liquida y como fase estacionaria generalmente un solido que puede ser: aluminas. La fase móvil se hace fluir trabajando a elevadas presiones. etc). que es igual al de cromatografía gaseosa (señal versus tiempo). etc. Colector de fracciones: se utiliza cuando se empela la cromatografía de forma cualitativa. 53 . Ocurre entre la fase estacionaria y los componentes de la mezcla diferentes mecanismo que van a permitir la separación. Puede ser cualquier detector. Se trabaja. La señal de la microcubeta es registrada por el PLC o la computadora y se genera un cromatograma . Esto hace que el relleno sean partículas de diámetro muy pequeño y esto mejora la eficacia de la columna para que tenga una buena resolución. los componentes serán mas o menos retenidos en la fase estacionaria y esto es lo que va a permitir la separación de cada analito. teniendo en cuenta la absorción selectiva de cada uno en la fase estacionaria. dependiendo de los tamaños de las partículas de esa fase estacionaria. alimentos. Se trabaja a elevada presión (característica fundamental). Aplicaciones. Al aumenta así la velocidad de la fase móvil mejoraron las columnas que se utilizan.Analisis Instrumental ИиФерИх muestra. Luego apareció la cromatografía liquida de alta presión. Cuando la fase estacionaria es orgánica tiene lugar un proceso de distribución entre la fase estacionaria y la mezcla que lleva los analitos a separar Si se usa una resina . en el campo de bioquímica y medio ambiente . arreglo de diodos.

Aplicaciones. alimentos. generalmente. etc. que es igual al de cromatografía gaseosa (señal versus tiempo). generalmente vidrio. 54 . Colector de fracciones: se utiliza cuando se empela la cromatografía de forma cualitativa. Los solventes mas utilizados suele ser metanol. Se trabaja. para separar pero no cuantificar. Esas columnas (ver fotocopia) de HPLC son bastante distintas a las de cromatografía liquida convencional. de presión. Bombas: generalmente un par. acetonitrilo.Analisis Instrumental Componentes de un cromatógrafo HPLC. cuya función es impulsar la fase ovil en forma controlada hacia una cámara de mezclado (nº4). Allí convergen la fase móvil y la muestra. a temperatura ambiente. para control de calidad de principios activos. Estos detectores tienen la característica de tener una microcubeta. de volumen muy pequeño. etc). conductimetrico. Se usa mucho en análisis farmacéutico. Para que se pueda llevar a cabo la electroforesis es necesario contar con un medio de separación o medio electroforetico que tiene la función de actuar como conductor de la corriente y controlar la carga eléctrica de los analitos a determinar . Electroforesis Esta técnica se basa en separar especies cargadas en función de las distintas velocidades de migración cuando están bajo la influencia de un campo eléctrico. Una vez que se va produciendo la separación va llegando a un detector. La señal de la microcubeta es registrada por el PLC o la computadora y se genera un cromatograma . Válvulas: permitir y regular la entrada de estos reactivos. La fase móvil debe fluir en forma continua. cloroformo o mezclas de ellos. Son muy amplias. Es una técnica cara por las columnas y el mantenimiento. Esa válvula de inyección es semejante a las válvulas rotatorias vistas en cromatografía gaseosa. Allí se mezcla y se homogeneiza la fase móvil donde llega a una válvulas o sistema de inyección. arreglo de diodos. Algunos equipos requieren una precolumna para reconcentrar la muestra. generalmente se utiliza como medio electroforetico soluciones reguladoras o soluciones tampones. ИиФерИх Tubos o recipientes donde se encuentra la fase móvil: son de materiales inerte. que deben ser controlados. En este tipo de cromatografía la temperatura es un parámetro no muy importante. debido a que se busca una buena reproducibilidad. mucho mas que las gaseosas. Deben ser de muy buena calidad y no deben interaccionar con la muestra. en el campo de bioquímica y medio ambiente . que va generando una señal eléctrica a medida que va pasando la muestra. de cualquier tipo (común. Las especies a determinar van a una determinada velocidad de migración cuando son sometidas a un campo eléctrico. Puede ser cualquier detector . Se inyectan pequeños volúmenes de muestra.

proteínas). con el empleo de estos tubos capilares disminuye notablemente el efecto del movimiento por conveccion y permite entonces una buena separación de los componentes. Al aumentar la temperatura en esa zona no se logra separar la especie correctamente y hace que la señal sean bandas muy anchas. Ese campo eléctrico tiene que ser controlado. Como soporte solido se utilizaba acetato de celulosa. Se la llama velocidad electroforetica. Electromigracion: ocurre debido a ese campo eléctrico aplicado que hace que las partículas que están cargadas se muevan a una velocidad que es proporcional al campo eléctrico aplicado. mas lentas). Ambos dependerán de la magnitud de campo eléctrico que uno aplique. originalmente . Esa velocidad de migración depende de la viscosidad de esa solución que depende de la relación carga/tamaño. A ese tubo . también esta relacionada con dos fenómenos que ocurren allí dentro la electromigracion y la electroósmosis. La libre se basa en utilizar tubos en forma de U y que tenían electrodos conectados en los extremos. Esos tubos se los rellenaba con una solución reguladora y se les inyectaba una solución de la muestra. aparecieron las primera características de electroforesis y se dividen en electroforesis libre y de zona. etc. van a tener una determinada 55 . de pequeño diámetro. se aplicaba un campo eléctrico lográndose la separación de los analitos. del tampón. Por eso estos tipos de electroforesis fueron dejando de usarse por ser lentas y tener muchas desventajas . Luego apareció la electroforesis de zona. estas partículas se van separar . lana de vidrio y allí . en 1930. en este caso la movilidad de las partículas se realiza a través de un compuesto solido impregnado de una solución tampón que contiene a la muestra. Siempre se debe conocer el compuesto con el que se trabaja . que depende de estos parámetros. Si es muy elevado genera un movimiento de convección en la superficie. A mayor carga mas rápido se moverán hacia los electrodos y va a depender también del tamaño de esas moléculas (mas pesadas. se aplicaba un campo eléctrico y comenzaban a separarse los componentes de tal manera que el que tenia mayor velocidad era el primero que uno recogía y separaba. en formas mas eficiente y rápida. se le hace una ventana que se coloca cerca del detector La velocidad de migración . También dependerá de la carga neta de cada molécula. sobre ese soporte. laminas de papel de filtro . algodón . En los extremos del capilar se encuentran los electrodos . Esta técnica utiliza para la separación tubos capilares que tiene la función de actuar como celdas electroforeticas . Así es que surge la electroforesis capilar.Analisis Instrumental ИиФерИх Quiere decir que esta velocidad de migración va a depender de la viscosidad del medio electroforetico. que son los encargados de generar ese movimiento de migración dentro del capilar. La diferencia con la convencional es que la migración o separación de especies se realiza cando están sometidas a una campo eléctrico de elevado voltaje. El campo depende de la longitud de capilar (Lc) y del potencial que uno aplica (V)[Lc/V] . Este tipo de electroforesis era muy limitada (pocas muestras.

Electroósmosis dentro del capilar: generalmente los capilares son de teflón y vidrio y los mas comunes de sílice fundida. las especies cargadas también se mueve la solución tampón (solución reguladora. De este se puede sacar información cualitativa o cuantitativa (la llamada screening es cualitativa. Para poder calcular estos parámetros uno lo hace a través de los gráficos de señal en función de tiempo (electroferograma). Esto es a pH>4 y el potencial aplicado es normal. Como hay flujo también hay una movilidad electrosmotica. longitud del capilar hacia el detector Vd. También se pueden obtener el tiempo de migración de cada especie para después relacionarlo con velocidad y movilidad electroforetica. De este se puede conocer las velocidades electroforeticas y las movilidades electroforeticas de cada especie que luego permite la cuantificación de la especie. sobre esa capa fija se vuelve a formar otra capaz mas difusa que es una capa móvil .Analisis Instrumental ИиФерИх movilidad electroforetica. con el voltaje aplicado y la velocidad y movilidad electroforetica Electroósmosis: este fenómeno se debe a que la acción de un campo electroforetico . μEO. este potencial Z va a depender del espesor de esa doble capa y a su vez la formación de esa doble capa va a depender del especies en estudio. A medida que circula la solución tampón esas cargas negativas atraen a las cargas positivas de la solución tampón y se forma primariamente una capa fija o una capa de adsorcion. sobre todo cuando el pH es muy acido. un electroferograma. a pH<4. Esos capilares de sílice fundida tiene silanoles (SiOH). Dependiendo del fin de uso así se logra una separación . Va a estar relacionado con la Lc . También se puede invertir el potencial y de esa manera colocar el capilar cerca del ánodo.) Para que ocurra una buena separación tiene que ocurrir los dos procesos. haciendo una electroforesis. 56 . llevar a los componentes de la muestra.. Convencionalmente el positivo a negativo y viceversa. dependiendo del pH de esa solución tampón se ionizan dando compuestos cargados negativamente y positivamente. además de moverse. Las cargadas positivamente al electrodo positivo y las cargadas negativamente al negativo (lo normal es al revés). se obtienen . Entre esas dos capas . Estos silanoles . se genera por el propio movimiento de las capaz un potencial denominado potencial Z. una fija y otra difusa. y esta movilidad electroforetica esta relacionada con la relación carga/tamaño de las partículas . encargada de que cuando se aplica el potencial . y lógicamente una velocidad electrosmotica. Se invierte el voltaje y el flujo de las especies.) En este tipo de técnica uno puede aplicar un voltaje de tal manera que las especies que están cargadas positivamente vayan hacia el cátodo y las que están cargadas negativamente hacia el ánodo y uno ten el detector ubicado cerca del cátodo. Se define como tiempo de migración al tiempo que tarda el solido en migrar desde que se inyecta hasta que llega al detector. entonces se aplica un potencial inverso de tal manera que el positivo vaya al positivo y el negativo al negativo. Estos parámetros dependen del potencial que uno este aplicando.

o un detector electroquímico o un conductimetrico. cualquiera de los vistos. Efecto joule: aumento de temperatura en el capilar. Temperatura de trabajo: generalmente se trabaja a temperatura constante. que genera un movimientote conveccion haciendo que aumente el flujo electrosmotico. generalmente a mayor voltaje mayor separación.Analisis Instrumental Es fundamental controlar: • • • ИиФерИх pH de la solución tampón La fuerza iónica de la solución tampón (si es muy alta el flujo electrosmotico disminuye. llega al detector donde se registra la señal . Una vez que ingreso la muestra al capilar. 57 . esta circula dentro del capilar con la solución buffer. Inyección electrocinética: aplicar un determinado voltaje durante un tiempo muy corto. el detector puede ser un detector óptico. que puede variar entre 15 y 25 ºC Manteniendo constante la temperatura se evita el efecto joule. Se programa el equipo para que aplique el voltaje y esto permite el ingreso de la muestra al capilar. que provoca un efecto de succión o por simple gravedad. del orden de los Kvolts. Generalmente las fuentes de voltaje van de 5 a 30 Kvolts Introducción de la muestra al capilar: la muestra puede ingresarse de dos formas: Inyección hidrodinámica: aplicando presión sobre el capilar inyectado un determinado volumen de muestra o mediante una bomba de vacío. suelen usarse buffers con fuerza iónica intermedia). El capilar debe ser bien seleccionado Cuanto menor es el diámetro del capilar favorece la resolución de los picos y meno es el efecto joule que puede ocurrir adentro Voltaje: voltajes adecuado.

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