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Prácticas de laboratorio

PRIMERA PRACTICA Objetivo Particular El alumno técnico Laboratorista, aprenderá a investigar microscópicamente el mundo, de los microorganismos que a simple vista no se ven, utilizando materiales de laboratorio, para su aprendizaje por descubrimiento.

Introducción El alumno técnico Laboratorista, aplicara los conocimientos anteriormente obtenidos, que le ayudaran en su formación, profesional y que al final de su recorrido deductivo, sabrá identificar por medio de la observación microscópica y la investigación bibliográfica el mundo microscópico.

Marco Teórico.

Esta práctica es un recuento de las distintas funciones del microscopio como también utilizar adecuadamente las partes del microscopio: Base, foco, diafragma, tornillo micrómetro, tornillo macrométrico, platina, pinzas, deslizamiento de platina, revolver, objetivos, oculares, cabeza y brazo. Posteriormente reconocer y saber todos los microorganismos existentes en el agua dulce estancada, a su vez tener conocimiento de las características de estos mismos, como lo son: Los paramecios, Euglena, Volvox, Chlorella. Con esto aplicar adecuadamente los conocimientos adquiridos, en las siguientes

Materiales.

v Microscopio compuesto o fotónico. v Materiales de Cristalería: § Porta objetos

§ Cubre objetos § Pipeta Pasteur § Bulbo de plástico § Papel secante v Mesa de laboratorio v Papel para cubrir mesa de laboratorio (blanca) v Muestra de agua estancada

Tema de investigación microscópica: · · · · Paramecio Volvox Chlorella Euglena

Desarrollo.

El alumno laboratorista desarrollara la sig. Actividades. · · · Debe contar con su equipo de bioseguridad Solicitar hoja para materiales del laboratorio Vestir mesa del laboratorio Con papel blanco

· Depositar los materiales solicitados en el centro de la mesa y 4 microscopios de forma esquinada. · En el porta objetos debe aplicar una gota de agua estancada utilizando la pipeta Pasteur y cubrir con el cubre objetos. · Montar la muestra en la platina, sujetarla con las pinzas de la platina.

· Iluminar el campo microscópico, utilizando los elementos adecuados para su observación: Dar luz abriendo el diafragma y el condensador para tener una mejor claridad

· Enfocar con tornillo micrométrico apoyándose con el tornillo macrométrico para subir y bajar la platina sin que la muestra toque los objetivos. · Una vez teniendo los pasos anteriormente mencionaos será el enfoque, observando con los objetivos 4x, 10x, y 40x. · Una vez observado el microorganismo ya identificado se le dibuja o fotografía para tener la evidencia microscópica que debe llevar pie de Foto.

Conclusiones. La práctica anterior nos da a conocer los usos que tiene un microscopio, su manejo; además los microorganismos que existen en el agua estancada junto con sus características, formas y tamaños. Y con el empeño empleado logramos identificar los protozoarios en esta. Y con esto, estar capacitados para utilizar fácilmente el microscopio al momento de hacer una práctica. En el caso de los microorganismos tendremos un mayor conocimiento y facilidad para identificarlos y definirlos. Para así con esto aportar nuevos conocimientos hacia nosotros en nuestro desarrollo como Técnico Laboratorista Clínico.

Trabajo de investigación Volvox Volvox es un género de algas clorofíceas microscópicas que suele formar colonias o cenobios de forma esférica y hueca, rodeados por células superficiales biflageladas y unidas entre sí por conexiones citoplasmáticas. En el interior de la colonia existen múltiples o osporas. Este primitivo organismo vive en aguas ricas en oxígeno. Chlorella. Chlorella es un género de algas verdes de unicelulares, del Filo Chlorophyta. De forma esférica, cerca de 2-10 m de diámetro, sin flagelo. Chlorella contiene los pigmentos verdes fotosintetizado- res clorofila-a y -b en su cloroplasto. A través de la fotosíntesis se multiplica rápidamente requiriendo solo dióxido de carbono, agua, luz solar, y pequeñas cantidades de minerales, para reproducirse. Paramecio: Protozoarios, son organismos microscópicos, unicelulares eucarióticos; heterótrofos, fagótrofos, depredadores o detritívoros, a veces mixó trofos(parcialmente autótrofos); que viven en ambientes húmedos o directamente en medios acuáticos, ya sean aguas saladas o aguas dulces; la reproducción puede ser asexual por bipartición y también sexual por isogametos o por conjugación intercambiando material genético. Euglena: Euglena es un género de protistas unicelulares perteneciente al grupo de los Euglénidos, con numerosos cloroplastos en forma de lente o aplanados, cada uno con un pirenoide.

TERCERA PRACTICA
Introducción El alumno técnico laboratorista observara cada una de las partes del autoclave su manipulación, además del proceso de esterilización por calor húmedo, para posteriormente aplicar en prácticas de laboratorio. Objetivos El alumno pretende con esta práctica los siguientes objetivos · · · · Conocer las partes del autoclave Aplicar medidas con matraces Aprender el procedimiento de esterilización por calor húmedo Saber manipular el autoclave

Marco teórico El alumno técnico laboratorista llego a la hora indicada a su práctica de laboratorio con su equipo de bioseguridad se colocó en su lugar correspondiente, el doctor Alfaro escogió a 2 técnicas laboratoristas por cada 3 mesas y estas realizarían la práctica siguiendo todos los pasos que el fuera dando mientras el resto de los técnicos laboratoristas observarían detalladamente el proceso de esterilización por calor húmedo. Materiales utilizados · Autoclave

v Parilla v Olla de aluminio v Charola v Manguera corrugada v Canaleta v Válvula v Barómetro v Perillas v Perilla de temperatura

· · · ·

Matraz Erlenmeyer 50 0 ml Matraz Erlenmeyer 2000 ml Agua corriente Equipo bioseguridad

Procedimiento v Los técnicos laboratoristas se colocaron en sus respectivas mesas de trabajo v Se colocaron 2 autoclaves en las 2 mesas del centro uno en cada una v Los técnicos laboratoristas observaron el procedimiento de esterilización por calor húmedo mientras 2 técnicas lo realizaban v Comenzaron por la muestra y presentación de las partes del autoclave y su manipulación v Se comenzó con el procedimiento de esterilización o El autoclave debe quedar completamente vacío o Con el matraz de 2000 ml con agua corriente hasta la marca de 2000 se va vertiendo al autoclave 2 veces teniendo dentro 4000 ml o Se coloca la parrilla en el autoclave o Posteriormente se toma el matraz Erlenmeyer de 500 ml o Con el matraz Erlenmeyer has la última marca (500 ml) se va vertiendo agua corriente hasta que queda al ras de la parrilla (varia de 4400 a 4500 ml) o Se coloca la olla de aluminio con la parrilla dentro, sobrepuesta en la parrilla o Posteriormente se sobrepone la tapa con la válvula cerrada o Se gira a la izquierda la perilla de temperatura se conecta y se enciende el autoclave o Se esperan 20 minutos exactos o Se verifica que la manguera corrugada se encuentre colocada correctamente o Se coloca la tapa embonando bien y se colocan las perillas en forma de cruz cerrándolas con la mayor presión posible. o Se espera a que el barómetro llegue a 5 o Se apaga el equipo se gira a la derecha la perilla de temperatura y se desconecta el equipo

o Se libera el vapor por la válvula de escape hasta que todo el aire se desaloje y comience la salida de vapor o Una vez purgado el autoclave se cierra la válvula nuevamente se conecta el equipo se enciende y finalmente gira la perilla de temperatura nuevamente o Se empieza a contar el tiempo de esterilización hasta que el barómetro marque 15 (total 15 minutos 32 segundos) o Se libera con la válvula el vapor se cierra y se espera a que el barómetro marque nuevamente 15 y así constantemente durante el mismo tiempo que duro la esterilización o Se apaga el equipo se cierra la perilla de temperatura y se desconecta o Se libera el vapor poco a poco con la válvula de escape abriendo y cerrando hasta que el barómetro llegue a 5 o Una vez que el barómetro marque 5 se abre la válvula hasta que salga todo el vapor y el barómetro marque 0 o Se abren las perillas y se quita la tapa o Se sacan con pinzas los materiales esterilizados y los propios del autoclave o Se vacía el agua que no se evaporo al área de lavado de instrumentos, y se coloca el autoclave en su lugar respectivo o Se recogen los materiales utilizados.

Conclusiones El calor húmedo destruye los microorganismos por tanto este método de esterilización es muy eficiente aunque se debe tener especial cuidado ya que los materiales dentro del autoclave pueden romperse por la presión que ejerce, además de utilizar un buen equipo de bioseguridad ya que este método por el calor que alcanza puede llegar a causar quemaduras de hasta segundo grado. El método es sencillo si se siguen los pasos correctamente y con la atención que se merece.

Esterilización por calor húmedo. Autoclave
Llegando al laboratorio, cada alumno vistió su bata para la practica (esta vez no se utilizo guantes de látex y ni otro material de seguridad biológica como gorro o cubrebocas). Colocamos la autoclave en medio de la mesa y todos los alumnos alrededor de ella pues solo hay dos Autoclaves. Por ser la primera vez que utilizábamos este material de apoyo dentro del Laboratorio los desvestimos y conocimos cada una de sus partes como lo son: la tapa con manómetro y válvula de escape la parrilla, olla de acero inoxidables de acero con asas, charola de sostén, manguera corrugada, entre otros. El Autoclave al momento de ser utilizado se llena con agua destilada pero para observar su funcionamiento llenamos con agua corriente hasta cierta medida, con un Matraz Erlenmeyer de 2000ml y 500ml. Colocamos los componentes de Autoclave, sobrepusimos la tapa y conectamos a la corriente eléctrica, el agua una vez vertida en el Autoclave se deja calentando por 15 minutos. Los materiales es esterilizar son Cajas Petri o algún otro material sucio o contaminado con un algún reactivo y/o muestra (R.P.B.I.). Después de haber pasado los 15 minutos se colocaron unos guantes antitérmicos (especiales para materiales calientes), se tomo la temperatura del agua con el manómetro (hay que saber que el autoclave llega a temperaturas como 120o C), y se paso a cerrar el Autoclave girando los guilletes (que se encuentran en la tapa) de forma de que cada vez se gire un guillete se encuentre con su opuesto. Después de 20 minutos el siguiente paso era purgar la Autoclave esto es, dejar que el vapor de agua se escapara o saliera a través de la válvula. Al momento de purgar era mantener la temperatura del Autoclave en 15 libras no tenia que pasarse ni estar debajo de 15 libras, esto con el fin de desinfectar los materiales, este purgamiento duro alrededor de 10 minutos o 15, terminado esto proseguía un segundo purgamiento con el Autoclave ya apagado y desconectado que era, para terminar de sacar el vapor restante del primer purgamiento. Este último purgamiento no fue tan prolongado al momento de levantar la válvula, si no que se dejaba poco tiempo, pero este movimiento era constante y rápido. Una vez purgada el Autoclave y llegado el manómetro a 0 libras se paso a destapar el Autoclave girando cada guillete, se saca la olla de acero inoxidable (se supone que deberían estar los materiales esterilizados) y el agua restante que quedo en el Autoclave se desecho al drenaje (solo por ser la primera practica y no haber esterilizado nada). Este fue lo ultimo que se hizo en esta practica solo lo que restaba era guardar el autoclave y cada material utilizado en esta tercera practica.