BAB II PROSEDUR PEMERIKSAAN CD4

I. Persiapan 1.1 Alat FACSCount Hidupkan alat, biarkan sistem bekerja sendiri (protokol disket telah terpasang pada flopp drive). Setelah 2 menit akan tampak pesan dilayar. Alat dapat dibiarkan selama 1 hari, jika dilakukan prosedur shutdown dan probe sampel dalam posisi diatas
FACSCount Software Version 1.4 10/93 Becton Dickkinson Immunocytometry Sstems FACSCount San Jose, CA 95131 13:12:34 10/02/93

1.2 Botol Cairan Pencuci dan Botol Pembuangan Sebelum melakukan pemeriksaan kontrol dan sampel, siapkan larutan pada botol system fluid reservoir dan kosongkan botol pembuangan. 1. Pengisian Sistem Fluid Reservoir a. Buka pintu tempat cairan pencuci dan botol pembuangan dengan cara menekan bagian atas tengah dari pintu kemudian biarkan pintu terbuka. b.Lepaskan tubing system fluid dari panel fluidic dengan cara menekan clip metal konektor putih kenudian tarik tubing dari fitting-nya. c. Lepaskan system fluid detection probe dari fluidic panel dengan cara menekan tabs putih disamping konektor dan tarik. d.Pindahkan system fluid reservoir dari alat BD FACSCount dan letakkan pada bidang datar. e. Isi dengan cairan system hampir penuh sekitar 1 inci (2,5 cm) dari atas. f. Tutup reservoir dan tempat kembali pada alat. g.Hubungkan system fluid tubing dan fluid detection probe connector pada alat dengan cara menekan systen fluid tubing secara perlahan sampai terdengar bunyi

9

Tekan ³DRAIN´ pada layar akan tampak pesan : DRAIN Put on tube of distilled water Press DRAIN to start draining . Lepaskan botol pembuangan dari alat dan letakkan pada tempat datar.3 Pengisian Cairan System Periksa flow cell setiap hari pada saat menghidupkan alat. Jika mengganti filter ulangi prosedur priming lima kali untuk memastikan tidak ada gelembung udara. 1.Kosongkan botol pembuangan pada tempat pembuangan biohazard. Lepaskan waste fluid tuing dari fluidics panel dengan cara menekan metal clip pada konektor dan tarik. 2. . Lakukan prime pada system jiak terdapat gelembung udara pada flow cell. h. Tambahkan 200 ml larutan blech yang telah diencerkan pada tabung pembuangan. Jika telah keluar. f. buka clamp plastic pinch sampai udara keluar dari vent tubing. e. b. tutup clamp.Lepaskan waste fluid detection probe connector dari fluidis panel dengan cara tekan tabs puti pada sisi konektor dan tarik.Tekan ³UTILIT´ pada layar alat FACSCount untuk masuk ke layar utility UTILITY . Hubungkan kembali botol pembuangan dengana alat. Jika perlu. kemudian tutup kembali.10 click dan menghubungkan system fluid detection probe connector dengan menekan tabs pada tempatnya. d. Mengosongkan Botol Pembuangan a.Periksa system fluid filter apakah telah terisi cairan dengan cara : Jika terdapat gelembung udara pada filter. c. ketuk secara perlahan untuk menghilangkan gelembung keluar dari air vent tubing.

Persiapan a. Floow cell secara otomatis akan terisi dengan cairan. kemudian akan tampak pesan : DRAIN Refilling flow cell. Untuk memulai prosedur pembersihan harian. tekan ³CLEAN´. High) dan sampel darah normal dalam tabung K3EDTA. Buka tutup reagen menggunakan coring station dengan cara : . akan tampak pesan DRAIN Press STOP to stop draining . Vortex kembali dengan posisi kebawah selama 5 detik d. Please wait. UTILITY . Medium.1 Pemeriksaan Kontrol 1. PROSEDUR PEMERIKSAAN 2.Tekan ³DRAIN´ kembali. Untuk mematikan alat tekan ³SHUTDOWN´ II. Vortex tubs reagen kontrol bead dengan posisi keatas selama 5 detik c.11 . Buka kedua pintu optik untuk melihat cairan mengering pada flow cell. tekan ³STOP´. Siapkan tubs reagen kontrol bead (Low.Tekan ³MAIN´ untuk kembali ke menu layar FACSCount. b.Jika semua cairan telah keluar dari flow cell.

Vortex tubs reagen kontrol medium/high masukkan sebanyak 50 Ql kontrol medium (tutup biru) ke dalam tubs reagen berlabel Medium o. Tutup semua tubs reagen dan vortex selama 5 detik i. Periksa semua reagen tutup menggunakan alat BD FACSCount 2. High g. Siapkan 3 buah tubs reagen dan beri label masing-masing Low. 68 ± 77 oF) pada workstation dan tutup pintu workstation untuk menghindari cahaya j. Tutup kembali semua tubs reagen dengan tutup yang baru dan vortex selama detik (sampel dapat dibiarkan selama 24 jam sebelum penambahan control bead) l. Tutup kembali tubs reagen dengan tutup yang baru q. Pindahkan tubs reagen kontrol dan tempatkan pada daerah kontrol workstation 5 m. Vortex tubs reagen kontrol zero/low masukkan sebanyak 50 Ql kontrol low (tutup merah) ke dalam tubs reagen berlabel Low n.12 - Masukkan tubs reagen kedalam alat coring station Tekan dari lever core ke bawah Biarkan lever kembali ke posisi semula Pindahkan tubs reagen kontrol ke workstation dengan posisi tegak keatas Tutup workstation untuk mengindari cahaya e. Tekan ³CONTROL´ pada layar CONTROL BEADS Lot Code: 39011721 50____ Med: 248___ High: 999 Counts-Low: . Buka semua tutup tubs reagen kemudian tambahkan 50 Ql larutan fixatif ke dalam semua tubs reagen k. Vortex tubs reagen kontrol medium/high masukkan sebanyak 50 Ql kontrol high (tutup ungu) ke dalam tubs reagen berlabel High p. Memasukkan Informasi Control dan Reagen a. Pipet sebanyak 50 Ql darah normal masukkan ke dalam 3 buah tubs reagen h. Medium. Biarkan semua tubs reagen selama 60 ± 120 menit pada suhu kamar (20 ± 25 oC. Bolak-balik tabung sampel darah normal f.

Masukkan nilai bead untuk kontrol Low. Pembacaan a. Akan tampak data yang telah dimasukkan kedalam alat. Masukkan 8 digit lot code reagent. Nilai reagent dapat dilihat pada label bag reagen. Tekan ³Confirm´ untuk menyimpan data kedalam disket. Medium dan High.13 Lot code dan count values dari bead akan tampak pada layar dimana nilainya merupakan nilai terakhir yang digunakan. Masukkan referensi bead CD4 untuk reagent lot. Setelah memasukkan data ID kontrol normal pada layar akan tampak : CONTROL NormID: 12345678_____ First pair. . Masukkan ID kontrol normal (sebanyak 15 karakter). Tekan ³ENTER´ untuk data berikutnya c. Tekan ³ENTER´ untuk data berikutnya f. 3. Nilai referensi dapat dilihat pada label bag reagen g. lanjutkan dengan memasukkan nomor ID kontrol normal CONTROL NormID: 12345678_____ Type in the lab normal ID number And press the ENTER key. Kemudian akan tampak laar reagen REAGENTS Lot Code: 30012121 1000 CD8: 2000 Counts-CD4: e. Nilai kontrol dapat dilihat pada kertas yang menyertai reagen d. Jika pertama kali dilakukan. Tekan ³Confirm´ untuk menyimpan informasi ke dalam disket. Masukkan 8 digit lot code dari kontrol bead. lot code dan count values merupakan nilai default alat b. Move the CD4-Low tube Into position and press the RUN key.

akan tampak pesan pada layar : CONTROL NormID: 12345678_____ Control boost. Vortex reagen Low menghadap ke atas selama 5 detik c. . NormID: 12345678_____ Jika telah selesai pembacaan reagen kontrol.14 b. hasil akan tercetak dan akan ditampilkan pada layar CONTROL Control run: PASSED NormID: 12345678_____ Control ruselt are on printout. Jika analisa telah selesai. CONTROL-Low Event Rate: 310 NormID: 12345678_____ Total: 2500 Acquiring initial data. Please wait. sampel holder akan turun. tempatkan pada sampel holder pada alat CD4 FACSCount d. Tekan ³RUN´. Please wait. CONTROL-Low Event Rate: 320 NormID: 12345678_____ Total: 9500 Acquiring/analyzing data. Please wait. Kemudian akan tampak pesan : CONTROL-Low Event Rate: 300 NormID: 12345678_____ Total: 1000 Bead search. lanjutkan ke pembacaan kontrol berikutnya CONTROL Move the CD4-Medium tube Into position and press the RUN key. Please wait. Buka tutup reagen Low.

Hasil Printout . Jika terdapat hasil kontrol yang tidak memenuhi syarat maka akan tampak pesan : CONTROL See printout for error code(s).15 Untuk memeriksaan sampel. Untuk kembali ke menu utama. tekan ³MAIN´. 4. NormID: 12345678_____ Tekan ³Continue´ untuk melihat hasil kontrol. tekan ³SAMPLE´.

Inkubasi tubs selama 60 ± 120 menit pada suhu kamar. Buka tubs reagen menggunakan coring station f. tempatkan pada workstation b. Tambahkan sebanyak 50 Ql sampel darah pasien ke dalam tubs reagen h. Buka tutup tubs dan tambahkan sebanyak 50 Ql larutan fiksatif k. Syarat Sampel Syarat sampel untuk pemeriksaan CD4 : Menggunakan antikoagulan K3EDTA (cair) Penyimpanan tidak lebih dari 48 jam pada suhu kamar (20 ± 25 oC) 2. Campur sampel darah dengan cara membolak balik tabung g. Baca tubs reagen sampel dalam waktu kurang dari 48 jam 3. Vortex dengan posisi keatas selama 5 detik d. Pengerjaan Sampel Pasien a. Tutup tubs reagen yang telah mengandung sampel darah pasien dan vortex selama 5 detik i. Beri label/identitas masing-masing 1 tubs reagen untuk tiap 1 pasien c. Tutup kembali tubs dan tutup yang baru dan vortex selama 5 detik l.Memasukkan Data Pasien dan Reagen . Pemeriksaan Sampel Pasien 1. tempatkan pada workstation dan lindungi dari cahaya dengan menutup pintu pelindung sampel workstation j. larutan fiksatif dan tubs reagen CD4. Vortex kembali dengan posisi kebawah selama 5 detik e.16 III. Siapkan sampel pasien.

Buka tutup tubs reagen sampel.Pembacaan Sampel a. Setelah memasukkan data tekan ³Confirm untuk masuk ke menu sampel SAMPLE NormID: ________________ Type in the sample¶s accession number and press the ENTER key. Acc. akan tampak : SAMPLE Move the CD4 tube into position and press the RUN key. Tekan ³RUN´. Pada layar hasil kontrol. Please wait. Vortex tubs reagen sampel selama 5 detik c. Please wait. akan timbul pesan SAMPLE Acc. Setelah memasukkan informasi pasien.17 a.#: 1234____________ Total: 2560 . NormID: 1234____________ b. tekan ³SAMPLE´. tempatkan pada sampel holder d. SAMPLE-CD4 Event Rate: 230 Acquiring initial data. c. masukkan lot code reagen dan reference bead count REAGENTS Lot Code: 30012121 1000 CD8: 2000 Counts-CD4: b.#: 1234____________ Sample boost. akan tampak layar reagen. Masukkan kode pasien (< 15 karakter) 4.

1 4/93 Sample Results . Jika terdapat kesalahan maka pada layar akan tampak pesan : SAMPLE-CD4 See prinout for error code(s).55 i.78 CD3 Avg: 1486 Acc. tekan ³SAMPLE´. Please wait.#: 1234____________ k. Tutup kembali tubs reagen sampel h.43 CD8/CD3: 0. Jika telah selesai akan tampak pesan : SAMPLE-CD4 Move the CD8 tube into position and press the RUN key. Untuk membaca sampel berikutnya.18 SAMPLE-CD4 Event Rate: 220 Acc. masukkan kode pasien. Tekan ³Continue´ untuk melihat hasil sampel 5. Acc. Tekan ³STOP´ untuk membatalkan pemeriksaan CD8 g. e. Acc. Hasil Printout Sampel FACSCount SW Version 1.#: 1234____________ f. Hasil sampel akan di printout dan tampak pada layar SAMPLE-CD4 CD4: 642 CD8: 820 CD4/CD8: 0.#: 1234____________ CD4/CD3: 0.#: 1234____________ Total: 9500 Acquiring/analyzing data. lakukan mulai dari langkah a ± d pada pembacaan sampel j.

42 CD8/CD3 : 0.76 Signature: ________________________________ _________________________________________ Commnents: ______________________________ _________________________________________ _________________________________________ .55 : 0.19 Reagent Lot ID : 20052121 Reference Bead Counts .cells/Ql CD4 : 838 CD8 : 1107 Total CD3 Average : 2002 CD4/CD8 CD4/CD8 : 0.beads/Ql CD4 Tube : 1004 CD8 Tube : 2032 Date : 3/15/93 18:42 Last Control Run : PASSED Control Run Date : 3/15/93 18:42 Control Run Reagent Lot ID : 20052121 Control Run Control Lot ID : 29031721 Accession #: 5678 Absolute Counts .