In the last few years a general model of cell cycle control has been established for all eukaryotic

cells. Experiments from a variety of organisms and from a variety of experimental approaches have identified a protein kinase and its unstable regulatory subunit as the activator of mitosis; related molecules seem to be involved in the activation of chromosome replication. The identification of the biochemical components of these important regulatory pathways is providing several new insights into homeostatic and developmental control mechanisms in higher organisms.
AS THE PIONEERS of molecular biology reach retirement, they have begun to rhapsodize about the simplicity and singleness of purpose that characterized their era. In contrast to the previous era, where generality in biology seemed to emerge from a study of its diversity, molecular biology emphasized the value of concentrating on a few model systems, such as E. coli and phage. In the past few years the pendulum has begun to swing back to a strategy of reconstructing general truths from the myriad of special cases that biology affords. This revisionist strategy has flourished during the period covered by the last 100 issues of TIBS and nowhere so clearly as in research on the cell cycle. Here the forbidden bastion of cell cycle control was breached, not by a concerted frontal attack on one model system or by one overpowering technique, but by the stealth, indirection and serendipity that could only be found in diverse organisms and diverse approaches.

Early ideas, assembling the cast
In 1980 I attended my first cell cycle symposium. Most of the talks in that session were unlike any I had previously encountered; they were mostly about theory and measurement. The field of the cell cycle at that time was concerned with somatic cells or single-celled organisms and was filled with arcane concepts, such as limit oscillators and transition probabilities. The message of my brief talk, by contrast, was very unsophisticated. I showed a movie of frog eggs, brutalized in various ways (enucleated, ecentriolated, emicro-tubuleated). When viewed in time lapse, the eggs popped up and down with the same regular cadence as the cleavage of their pristine siblings (Fig. 1). The conclusion was obvious: there must be a biochemical oscillator in the cytoplasm that regulated the cell cycle. It was a clock that happily ticked on even without its hands1. Since then I learned that a movie makes for a very popular seminar but I lost whatever illusions I had about my own popularity, when instead of receiving seminar invitations, I began to receive invitations to just send my movie. By 1984 real progress had been made on the components of the cell cycle. Lee Hartwell had worked for years defining genes that could be involved in the cell cycle in Saccharomyces cerevisiae, but in the pre-cloning and pre-geneknockout era the cell cycle (cdc) mutants were just numbers to me. His picture of the cell cycle in yeast did not look at all like the bouncing frog eggs; rather, it was an assembly line. Whenever Lee and I met, we would have interesting conversations and I could not help being impressed by the depth of his thinking and the cleverness of his approaches. I think both of us walked away believing that the cell cycle disappointingly was not very general. Yet, generality in components, if not in overall physiology, was just around the corner. Paul Nurse, taking a similar genetic approach in the more obscure fission yeast Schizosaccharomyces pombe, had identified a gene, cdc2, that seemed to control entry into mitosis. In 1982 he and David Beach showed that this gene was homologous to the S. cerevisiae gene, CDC28 (discovered by Hartwell2), which also regulated the cell cycle, and that the S. cerevisiae gene could substitute for the cdc2 gene3. Despite the evolutionary divergence of these two species of yeast, it was not clear how relevant their cell cycle was to that of metazoan organisms. For several years after I returned from my sabbatical, I was interested in finding the biochemical mechanism underlying the master oscillator in the frog. With John Gerhart and Michael Wu in Berkeley we carefully measured the activity of maturation promoting factor (MPF) in the non-dividing eggs and in oocytes 4. This intracellular factor causing oocyte maturation was discovered by Yoshio Masui and by Dennis Smith in the early 1970s and by that time was known to be found in a wide variety of eukaryotic cells5 6. Its discovery in somatic cells portended its fundamental role in cell cycle transitions. We found that MPF oscillated in the bouncing eggs as well as in normally dividing eggs and, except for the first meiotic division, these oscillations required protein synthesis. This was the first biochemical marker for the autonomous oscillator, but this experiment did not distinguish whether MPF drove the cell cycle or merely responded to it. At about the same time Ryn Miake-Lye in my laboratory and Fred Lohka in Masui's laboratory showed that partially purified MPF could induce mitotic events in vitro and with John Newport we showed that merely adding and subtracting MPF could drive the complete mitotic cycle including DNA replication 7-9. MPF became the holy grail of cell cycle control in frog eggs, just as cdc2 became the holy grail in yeast. Could anyone doubt that the two quests would lead to the same end? The last major ingredient in the cell cycle was found quite by accident by Tim Hunt and his students in the Physiology Course at Woods Hole. Tim was not looking for a new regulator of the cell cycle, but was just looking for a simple experiment for students with sea urchin eggs. Their experiment of labeling eggs continuously with 35S-methionine showed that one protein, which they named cyclin, oscillated in abundance in each cell cycle during the early synchronous cleavage stages in sea urchins 10. Tim Hunt recognized that a protein that accumulated during interphase and was degraded during mitosis was a perfect candidate for a cell cycle activator. For a while it appeared that nothing could be done but speculate about any relationship between the oscillating protein and the regulation of the cell cycle, and about cyclin, cdc2 and MPF.

Towards a general mechanism, assembling the scene

the breakdown and reformation of the nuclear membrane. The long arduous task of purifying MPF was finally accomplished by Lohka and Mailer. Reconstitution in vitro is a goal of all biochemical research. There were several high moments of drama. In the years since 1984. there was no indication that it was a central regulator. The breakdown of the nuclear membrane has been the clearest biochemical target of MPF. biochemical evidence demonstrating the association of cyclins with cdc2 24. The frog egg has several unequaled advantages for such an approach. and it can be made to go from one state to the other by addition of purified molecules. The unraveling of the basic cell cycle mechanisms came quickly in the past eight years. It has moved in six major directions at once. The identification of an oscillating HI kinase activity that contained cdc2 in human cells by Beach's group 16 and in starfish eggs by Doree17 further supported and generalized the identification of cdc2 with MPF. initiation of DNA replication20. In 1989 the apotheosis of all in vitro systems was the reconstitution of the entire pathway of cell cycle progression by Andrew Murray in my laboratory22. as measured by the cyclic appearance and disappearance of MPF. The cell cycle field has not paused to consolidate the gains made since 1989. Reconstitution of complex processes. First came the creeping'sense of the generality of the mechanisms. The linkage of MPF to cdc2 and ultimately to cyclin came from many directions. In the last couple of . Does this mean that each is a substrate for cdc2-cyclin or does it mean that this kinase sits at the node of a regulatory network of kinases or other enzymes that carry out the mitotic process? There will be no complete answer to this question until each subprocess of mitosis is examined. Using concentrated frog egg cytoplasm depleted of endogenous transcripts. Doxsey and M.Even if cyclin had some role in the cell cycle. followed by an appreciation of why the frog and yeast cells. who with Jean Gautier confirmed the connection between cdc2 and MPF by immunoblotting with anti-cdc2 antibodies obtained from Nurse 15. It is arrested at a single state of the cell cycle. after all. There were. (1) The complementation of yeast cdc2 by a homologous human gene by Lee and Nurse removed any doubt about evolutionary conservation of the cell cycle11. Exasperatingly. Something else must be responsible. such as the cell cycle or mitosis. But if MPF oscillated as an activity. its dephos-phorylation causes reassembly. significantly in both frogs' and other eggs. several complicated reactions have been reconstituted from the nearly purified cytoplasm obtainable from frog eggs. Yet in every system cdc2 did not seem to vary during the cell cycle. since the first meiotic division required no new protein synthesis. (4) The development of an extract that generated active MPF in the absence of protein synthesis by Martha Cyert in my laboratory stimulated a search for regulatory post-trans-lational modifications in the activation of MPF13. such as histones. reasons for believing that cyclin could not be MPF. were fundamentally the same. Kirschner. buoyed by the apparent conservation of the basic reactions and by the ease of moving from higher to lower eukary-otes and from genetics to biochemistry. The cyclin-cdc2 complex and mitosis Can the orchestrated sequence of events in mitosis be ascribed to the activation of a single kinase at a single place and at a single time? Almost every component of the cell is drastically remodeled at mitosis. the basic and universal paradigm of the cell cycle was established (Fig. (2) The activation of frog oocyte maturation by clam cyclin RNA by Swenson and Ruderman was a puzzling result in some ways. but it gave the first indication that cyclins might have a regulatory activity12. since protein synthesis was not required to activate the first meiotic division in frogs. (3) The development of concentrated extracts that responded to MPF by Manfred Lohka and Yoshio Masui and by John Newport and Ryn Miake-Lye in my laboratory showed that addition and removal of MPF could drive the entire cell cycle.) Yet. seem to have stored most of the materials needed for many rapid cell divisions. 2). I will list the high points for me. may have seemed impossibly difficult to some but for me it always seemed like a rather small step from injecting an egg and using it as an in vivo test tube to squeezing the egg into a real test tube and using it as an in vitro biochemical system. The nuclear lamin protein is a member of the class of very durable intermediate filament proteins. hence protein synthesis and presumably cyclin synthesis was required only to activate MPF7"9. each cell must duplicate its entire contents before each division. The long-sought protein synthesis requirement for cell cycle progression was shown to be cyclin. Affinity chromatography by Dunphy. Eggs. the requirement for protein synthesis was very significant and proved to be an intimate part of cell cycle regulation. Coupled with results from Tim Hunt's laboratory showing a cyclin requirement for cell cycle progression23. A requirement for protein synthesis may seem unremarkable to anyone studying growth and division in somatic cells. In retrospect. It is essentially pure cytoplasm. in fact. the assembly and disassembly of the mitotic spindle and DNA replication. he demonstrated that cyclin fulfilled the entire protein synthesis requirement for the cell cycle. Nuclei have been reconstituted 18 as well as mitotic spindles19. The best candidate was cyclin. however. so should cdc2. which originally appeared so different. nuclear transport21 and centrosome duplication (S. containing stockpiles of cellular components. Beach and Newport suggested that cdc2 was in frog MPF14.25 and the identification of one of the yeast cell cycle genes as cyclin 26"28. particularly in the last four. but the evidence was purely circumstantial. there was a universal requirement for protein synthesis for each mitotic division. At the risk of offending some. (We now know that in the frog oocyte cyclin has already been synthesized and MPF is held in an inactive state by a posttrans-lational block. Its phosphorylation causes its complete solubilization. deoxyribonucleotides and tubulin. unpublished). at that time there was no known mutant for cyclin and hence no genetic test for its role.

the discovery of the cyclin-cdc2 transition in Gl did not come from looking at cdc2 but instead came through separate genetic experiments directed at genes that controlled the sensitivity to a-factor arrest or cell size control 41. which after considerable biochemical effort proved to be a member of a new class of tyrosine phosphatases32. CLN2 47. interacts directly with one of the Gl cyclins. despite the usual cyclin requirement for entry into mitosis. FAR1. Genetic complementation of cyclin-deficient yeast mutants with human DNA as well as other physiological properties have allowed the cloning of human Gl cyclins 4445. and with Fred Chang found that one of them. Cyclin. Yet despite these clues. I read a memorable review by Bob Schimke on protein degradation that argued that for non-dividing cells. Proteins artificially fused to this sequence are degraded by the ubiquitin pathway during mitosis but not in interphase. The cell cycle field has revived interest in the regulatory potential of protein degradation. through a cascade of kinases to activate specific genes. once as part of what we now know as MPF. However.30. will have its own story of regulation. since we do not know of any analogous transition to the G2/M transition. It is important to stress how little we know about the 'Gl' cyclins. a kinase responsible for the activation of cdc2 and a phosphatase responsible for its inactivation 35. cdc25. Mutants in this sequence cause a failure to be ubiquitin-ated and a failure to be degraded. it also acts through intermediaries. Thus cdc2. which in turn may respond to the state of completion of specific events. nor do we know of any phosphorylated targets. Experiments by Michael Glotzer and Andrew Murray in my laboratory have shown that cyclin stability is controlled by a specific recognition sequence near the amino terminus of the molecule39. The yeast cell uses standard means of cell communication to transduce the mating signal to specific downstream targets.42.33. such as spindle formation or the reconstitution of the endoplasmic reticulum and Golgi. Cyclin accumulates as a stable protein 9A in interphase and is rapidly degraded at anaphase". In addition. even if MPF is an on-off switch that signals the onset of mitosis. Genetic studies in 5. albeit weak homology to the mitotic cyclins. Lamin disassembly is just one process of mitosis. In Drosophila. the activity of cdc25 (the tyrosine phosphatase) is rate limiting and hence the major controlling element 36. cdc2 and the Gl/S transition The G2/M paradigm has served as a good model for the Gl/S transitions and perhaps other transitions in the cell cycle. the individual downstream events may occur in a temporal order due to an imposed substrate-product sequence. nor do we know whether like the G2/M phase there is a specific requirement for cyclin degradation. With great rapidity new Gl and G2 cyclins have been identified in yeast. Genetic experiments in yeast had shown that cdc2 was required twice. other sites on lamins are also phosphorylated by kinases whose activity is activated by MPF. however. In principle. Thus. Activation of cdc2 by cyclin The combination of cyclin with cdc2 does not immediately activate kinase activity. Subsequently it was shown by Steve Reed's laboratory that a redundant set of Gl cyclins cooperate to drive the yeast cell into S phase43. These genes identified Gl regulator proteins with some. The targets of exogenous cell cycle regulators The regulation of cell division in yeast in response to mating pheromones is probably the best-understood pathway for cell differentiation and cell growth. which proved to be a specific tyrosine kinase31 and a positive regulator. There is now further evidence for their episodic expression in Gl or S and their combination with cdc2 or a closely related protein called CDK246. a time loosely called the Gl/S boundary40. Yet the Gl/S transition is closest to the hearts of biologists interested in growth control. These reactions are also entry points for regulation by checkpoint controls described below. which leads to a dominant metaphase arrest. both acted in an antagonistic manner to control the final activity of the cyclin-cdc2 complex at a single tyrosine on cdc2 identified by Kathy Gould and Paul Nurse 34. The most unusual reaction that has been identified in the cell cycle is the highly regulated destruction of cyclin. which are responsible for the activation of cdc2 by cyclin. Ira Herskowitz has been particularly interested in those activated genes that inhibit cell cycle progression. each of the other processes. pombe had at first identified a negative regulator. How this system is regulated is the terra incognita of cell cycle research. since most cells arrest at that stage of the cell cycle. during this time experiments of cell cycle physiologists like Arthur Pardee kept alive the notion that the accumulation of unstable proteins could regulate transitions in the cell cycle38. the entire regulatory pathway of one Gl cyclin can now be traced back to an initial extracellular signal. weel. have been studied in in vitro extracts with the addition of purified components by Mark Solomon in my laboratory25. and another as a requirement before DNA replication. Cyclin degradation In 1970 while I was still a graduate student. these reactions constitute the highly cooperative transition into mitosis that shows a threshold in cyclin concentration and a lag after addition of cyclin. Together. although dependent ultimately on cyclin and cdc2. Some of these kinases and phosphatases can serve as rate-limiting activities in mitotic induction at certain stages of development. The complex temporal control in mitosis is undoubtedly an interplay of these intermediaries. Biochemical experiments in frog cell extracts identified two other activities. while protein degradation has been relegated to the role of a waste disposal system. the monarch of all kinases.years work of Gary Ward in my laboratory and Mattheus Peter in Erich Nigg's laboratory has shown that in vitro MPF phosphorylates a specific serine residue in the lamin proteins29. is not too proud to act directly on the common mitotic substrates. as transcription and RNA processing have shown incredible complexity and capacity for control. The intervening years have not been kind to this opinion. These reactions. protein turnover could play as significant a role in controlling enzyme activity as transcription and translation37. Each has its own story of transcriptional and trans-lational control and each serves to .

If research on the cell cycle has made any contribution to the culture of science. and developmental decisions48. Hartwell and Weinert specifically looked for such negative controls that might halt the yeast cell cycle in response to a failure to complete a downstream task. they chose the failure to repair DNA damage 51. These 'checkpoint' mutants have defined several pathways involved in feedback control. In mammalian cells. These connections suggest that recessive oncogenes are targets of the Gl-activated kinase regulated by the Gl cyclins. and hence would be deficient in allocating enough time in the cell cycle for DNA damage to be repaired. and at present no biochemical system exists for Gl cyclins in mammalian cells that approaches the power of the in vitro systems for G2/M in frog. There is no doubt that the situation will get more complicated in the future.53. Similar mutants have also been found that regulate the exit from mitosis in response to abnormalities in the mitotic spindle52. Kishi-moto used a genetic approach to identify another apparent feedback system involving a chromosomal protein. At present the mechanisms of sensing damage are not known and the pathways for regulating the cell cycle machinery are also unknown. that is a GTP exchange factor for a common small G protein in the Ras class called Ran5455. a description of the process of cyclin degradation. though it is probably possible to choose some goals. Checkpoint controls One of the early mysteries of the cell cycle was the apparent autonomy of the cell cycle reactions in the frog egg and the extreme dependence in yeast. However. sea urchins and mammals saved us from being distracted by the peculiarities of each system and facilitated a rapid understanding of the general biological process. They include a more complete description of downstream targets of the mitotic kinase. a new and now indispensable unit of biological time) has shown it is futile to try to predict the' pathway of discovery. In somatic mammalian cells the newly discovered Gl cyclins have served as lures to explore their control. the initial results tie cyclin A (a cyclin protein that is made in early S phase and is degraded in mitosis) and some of the new Gl cyclins. Intervention in checkpoint controls might also improve the effectiveness of chemotherapy. it is very likely that many of the strategies of cell cycle control will be first understood in yeast. The purpose of these phosphorylations may be to control the transcription of the Gl cyclins. There is a similarity between the efforts in the recent period of cell cycle research and the common practice of searching for homologies among related proteins.50. one biological principle'. Yet it is particularly gratifying that what did emerge emerged from so many sources and so many experimental approaches. and perhaps other mitotic kinases. In both cases comparison helps focus attention on the highly conserved and most important parts of a sequence or process. However. and events in S phase that are regulated by the 'Gl' cyclins. to the recessive oncogenes encoding RB and pl07 and to the elusive transcription factor E2F49. it is clear that the exact appearance of the resulting pathway can be very different. knowledge of these pathways and better understanding of the biochemistry of the cell cycle events promise to clarify these important systems well before the 300th issue of TIBS. RCC1. such as cyclin E. cell cycle decisions. an auto-feedback loop that has been suggested for the Gl cyclins in yeast. The future lies ahead of us As the history of the past eight-and-a-third years (100 issues of TIBS. yeast. Immediate goals include a better description of the biochemistry of checkpoint controls and enzymes that regulate the activation of cdc2 and related kinases. .clarify the physiological and homeostatic mechanisms that integrate growth. The tools are much more limited than the genetic tools found in yeast. Although no one pretends that the yeast incorporates the complex regulation of metazoan organisms. Though no one now questions the generality of the mechanisms. as there are many cyclins and cdc2-related proteins. They reasoned that there should be a subclass of radiation-sensitive mutants that would be sensitive because they failed to arrest the cell cycle in response to DNA damage. which loosely translated means 'from many biological systems. and parallels the postradiational autoactivating pathway demonstrated for the G2 cyclins in the frog. depending on which reactions are rate determining and which regulatory pathways are interconnected by feedback loops and checkpoint controls. Longer-term goals would be to try to connect the regulation of cell division with developmental decisions and even to intervene in promoting division of non-proliferating cells or inhibiting the division of proliferating cells. The ability to amalgamate results from studies of the cell cycle of frogs. it is best expressed by the motto found on every US coin: E pluribus unum. We need to understand the Gl transition or transitions and in particular if cyclin degradation is required to proceed to the next phase.

pero el golpe de gracia antes de la era de la clonación y la pre-gen de las células (ciclo CDC) en mu tantes eran sólo números para mí. cuando en lugar de recibir invitaciones a seminarios. Lee Hartwell había trabajado durante años la definición de los genes que podrían estar involucrados en el ciclo celular en Saccharomyces cerevisiae. En los últimos años la plumapéndulo ha comenzado a volver a adoptar una estrategia de reconstrucción de las verdades generales de la gran cantidad de casos especiales que ofrece la biología. Sin embargo. incluso sin Desde entonces he aprendido que una película lo convierte en un seminario muy popular. Cuando nunca Lee y yo nos conocimos. Primeras ideas. donde la generalidad de la biología parecía surgir de un estudio de su y DIVERSIDAD. La conclusión era evidente: debe haber un oscilador bioquímicas en el citoplasma plasma que regula el ciclo celular. pero perdió lo que las ilusiones que tenía sobre mi propia popularidad. F ue un reloj que felizmente marcado en sus manos. sino que eran en su mayoría sobre la teoría y medición. engaño y la casualidad de que sólo podía encontrarse en diversos órganos ismos y enfoques diversos. Cuando se ve en lapso de tiempo. COMO LOS PIONEROS moleculares de cada dos llegar a la jubilación logía. era muy poco sofisticado. enfatiza la biología molecular empresas el valor de concentrarse en un modelo de sistemas de pocos. como E. coli y del fago. El campo del ciclo celular en ese momento era de Con preocupados con las células somáticas o de organismos unicelulares simples y se llene de correo d con conceptos arcanos.En los últimos años un modelo general de control del ciclo celular se ha establecido ESTABLECIDO para todas las células eucariotas. moléculas relacionadas parecen estar implicados n i la activación de la replicación del cromosoma. El mensaje de mi breve charla. sino por la ocultación. ecentriolated. una. la . Creo que ambos nos alejó de creer que la desaparición del ciclo celular pointingly no era muy general. que han comenzado a entusiasmarse por la sencillez y unidad de propósito que el carácter industrializados su época. En contraste con la anterior era vious. La mayoría de las conversaciones en ese período de sesiones se diferencia de cualquier otra que se había encontrado con anterioridad. Los experimentos de una variedad de organismos y de una variedad de enfoques experimentales han identificado una proteína quinasa y su reglamentación subunidad inestable como el activador de la mitosis. por el contrario. Este comienzo revisionista gia ha florecido durante el período cubierto por los últimos 100 temas de TIBS y en ningún lugar con tanta claridad como en la investigación sobre el ciclo celular. el montaje del molde En 1980 asistí a mi primera celda le simposio ciclorama. como la oscilación límite dores y las probabilidades de transición. Su foto tura del ciclo celular en la levadura no se parece en nada a los huevos de rana que despide. brutalmente de diversas maneras (enucleado. emicrotubuleated). los huevos apareció arriba y hacia abajo con la misma cadencia regular como la escisión de sus hermanos prístina (Fig. nos habría conversaciones t iones interesante y yo no podía dejar de estar impresionado por la profundidad de su pensamiento y la inteligencia de sus planteamientos. empecé a recibir nvitations i enviar sólo mi película. La identificación de los componentes bioquímicos de estas vías de reglamentación importante es proporcionar varios nuevos conocimientos sobre los mecanismos de control del desarrollo y la homeostasis en los organismos superiores. Me mostró una película de huevos de rana. no por un ataque concertado f Rontal en el sistema de un modelo o una técnica abrumadora. En 1984 los progresos se han realizado verdaderos de los componentes del ciclo celular. Aquí el bastión prohibido de ciclo de control celular fue violada. 1). sino que fue una cadena de montaje.

montaje de la escena Incluso si ciclina había algún papel en el ciclo celular. gen cerevisiae. que no estaba claro la relevancia de su ciclo celular fue a la de los organismos metazoos. Cdc28 (descubierto por Hartwell que también regula el ciclo celular. no había ninguna indicación de que se trataba de un regulador central. estaba a la vuelta de la esquina. Se encontró que MPF oscilado en los huevos rebote. hubo una uni requisito universal para síndrome de proteínas tesis para cada división mitótica. ¿Podría alguien duda de que las dos misiones que llevan al mismo fin? 4. Casi al mismo tiempo Ryn Miake-lejía en mi laboratorio y Lohka Fred en el laboratorio de Masui mostró que parcialmente purificado MPF podría inducir eventos mitótica in vitro y con John Newport hemos demostrado que simplemente sumar y restar F MP podría conducir el mitótico ciclo completo. gen Saccharomyces podría sustitución tuto para el gen cdc2 3. desde síndrome de proteínas tesis no estaba obligado a activar la primera división meiótica en las ranas. estaba interesado en encontrar los mecanismos bioquímicos subyacentes al oscilador principal en la rana. cdc2. así como cdc2 se convirtió en el santo grial en la levadura. si no en más de una fisiología ll. significativamente. tomando un enfoque genético similar en lo oscuro la levadura de fisión Schizosaccharomyces pombe más. pero especular sobre cualquier relación entre la proteína oscilante y la regulación del ciclo celular. A pesar de la divergencia evolutiva de estas dos especies de levadura. Tim no estaba buscando un nuevo regulador del ciclo celular. Esta fue la primera marcador bioquímico para el oscilador autónomo. (Ahora sabemos que en la ciclina ovocitos de rana ya ha sido sintetizado y MPF se mantiene en un estado de inactivación v erelacional de un bloque de posttrans. en efecto. 2). En 1982 y de la playa David mostró que este gen se homologa a la S. Un requisito para la síntesis de proteínas puede parecer .) Sin embargo. 35 10 Hacia un mecanismo general. había identificado un gen. Durante un tiempo parecía que nada podía hacer. tanto en "las ranas y otros huevos. incluyendo el ADN replicación de MPF se convirtió en el santo grial de control del ciclo celular en huevos de rana. El ingrediente ma jor por última vez en el ciclo celular se encontró casi por accidente por Tim Hunt y sus alumnos del Curso de Fisiología en Woods Hole. estas oscilaciones requiere la síntesis de proteínas. Tim Hunt reconoció que una proteína que se acumula en los intervalos entre fase y se degradó durante la mitosis es un candidato perfecto para un activador del ciclo celular. Con John Erhart G y Wu Michael en Berkeley cuidadosamente medido la actividad de promoción de la maduración de los factores (MPF) en la división de los huevos-y no en los ovocitos Este factor intracelular que causa la maduración de ovocitos fue descubierto Ered por Yoshio Masui y por Dennis Smith en l década de 1970 y para entonces se sabía que se encuentran en una amplia variedad de células eucariotas 6. Había. así como en la norma lly dividiendo los huevos y. a excepción de la primera división meiótica. razones para creer que la ciclina no podía ser MPF. que parecía controlar la entrada en mitosis. pero esta experiencia ción no distingue si MPF condujo el ciclo celular o m erely responsabilidad ded a ella. que llamaron la ciclina. pero fue sólo en busca de un experimento sencillo para los estudiantes con vistas al mar huevos de erizo. cdc2 y MPF. 5 7-9. Su descubrimiento Ery en las células somáticas presagiaba su diversión papel fundamental en las transiciones del ciclo celular. osciló en abundancia en cada ciclo celular durante las etapas de división sincrónica temprana en erizos de mar. Su experimento de etiquetado huevos continuamente con S-metionina mostró que una proteína. Durante varios años después que regresé de mi año sabático. y que la S. y sobre la ciclina.generalidad de los componentes. Paul Nurse.

El huevo de la rana tiene varias ventajas sin igual de este enfoque. Se trata esencialmente de citoplasma puro. quien junto a Jean Gautier confirmó la Conferencia conexión entre cdc2 y MPF por im-munoblotting con anti-cdc2 anticuerpos obtenidos a partir de Enfermería La identificación ción de una actividad quinasa oscilante HI que contenía cdc2 en las células humanas por el gr upo de playa de y en los huevos de estrellas de mar por Doree más el apoyo y la generación generalizados a la identificación de cdc2 con MPF. En retrospectiva. Pero si MPF osciló como una actividad. pero la evidencia es puramente circunstancial. pero para mí siempre me pareció un pequeño paso en lugar de la inyección de un huevo y que sirva como un tubo de ensayo en vivo a apretar el huevo en un tubo de ensayo real y utilizarlo como un sistema in vitro en bioquímica. (4) El desarrollo de un extracto que generó MPF activa en ausencia de síntesis de proteínas por Martha Cyert en mi laboratorio estimulado la búsqueda de reglamentacióntrans-relacional modificaciones posteriores en la activación vación del MPF 11. en todos los sistemas cdc2 no parecen variar durante el ciclo celular. tales como el ciclo celular o mitosis. una camiseta de ese momento no se conocía ningún mutante de ciclina y por lo tanto no existe ninguna prueba genética para su papel. desoxirribonucleótidos y Tubul i n. El desenlace del ciclo de mecanismos celulares básicos no tardó en llegar en los últimos ocho años. Primero fue el creeping'sense de la generalidad de los mecanismos.anodina para los estudiantes de gro º W y la división en las células somáticas. 16 17 La reconstitución in vitro es un objetivo de toda la investigación bioquímica. Otra cosa que debe ser responsable. que en un principio parecía tan diferentes.presumiblemente sintetizando s ciclina fue re requeridas para activar el MPF sólo "9. desde la primera división meiótica no requería la síntesis de proteínas nuevas. 7 13. Exasperante. 14. La reconstitución de los procesos complejos. cromatografía de afinidad por Dunphy. El mejor candidato era ciclina. cada célula debe duplicar todo su contenido antes de cada división. A riesgo de ofender a algunos. Hubo varios momentos de gran dramatismo. Beach y Newport sugirió que cdc2 estaba en rana MPF El ar a largo duous tarea de purificar MPF se llevó a cabo finalmente por un Lohk y Mailer. 12. (1) La complementación de la levadura cdc2 por un gen homólogo humano de Lee y la enfermera despejado cualquier duda sobre la conservación de la evolución del ciclo celular (2) La activación de ovocitos de rana ma turación por cl am ciclina ARN por Swenson y Ruderman era un puz Zling resultado en cierto modo. por lo que debe cdc2. voy a enumerar los puntos altos para mí. puede haber parecido imposible di fícil para algunos. después de todo. por lo que la síntesis de proteínas y pre. Sin embargo. 15. sin embargo. el requisito para la síntesis de proteínas es muy importante y resultó ser una parte íntima de la regulación del ciclo celular. Los huevos. sobre todo en los últimos cuatro años. parecen haber guardado la mayor parte de los materiales necesarios para muchas divisiones celulares rápida. se fun cuenta la misma. La vinculación de MPF a cdc2 y en última aproximadamente a la ciclina vinieron de muchas di correcciones. pero dio la primera indicación de que las ciclinas podría tener una actividad reguladora (3) El desarrollo de Concentr extractos serie ATED que respondieron al MPF por Manfred Lohka y Masui Yoshio y por John Newport y Ryn Miake lejía en mi laboratorio mostraron que la adición y la eliminación de MPF podría conducir todo el ciclo celular. fol seguidas por una apreciación de por qué la rana y células de levadura. que contiene las reservas de los componentes . como las histonas.

Jue s. 18.30. En los años desde 1984.celulares. la universa l paradigma y básicos del ciclo celular se estableció (Fig. tales como la formación del huso o el reconocimiento Constitución del retículo endoplasmático y aparato de Golgi. cada uno de los otros procesos. La proteína lamina nuclear es un miembro de la clase de bienes no perecederos muy l filamento proteínas e intermedios. Junto con los resultados de T im laboratorio de caza que muestra una nueva ciclina requisito para la progresión del ciclo celular las pruebas bioquímicas que demuestran la asociación de las ciclinas cdc2 con y la identificación de uno de los genes del ciclo celular de la levadura como la ciclina "28. Lamin desmontaje es sólo un proceso de mitosis. medida por la aparición y desaparición cíclica del MPF. . sin embargo. El temporal de control complejos en la mitosis es sin duda edly una interacción de estos intermediarios Aries. impulsado por la conservación aparente de las reacciones básicas y por la facilidad de pasar de mayor a menor eucariotas-otas y de la genética a la bioquímica. 2). . los acontecimientos posteriores individual puede darse en un orden temporal debido a un sustrato-producto secuencia impuesta. Kirschner.¿Significa esto que cada uno es un sustrato para cdc2-ciclina o significa que esta proteína se encuentra en el nodo de una red de regulación de las quinasas u otras enzimas que llevan a cabo el proceso mitótico o pr? No habrá respuesta completa a esta pregunta hasta que cada subproceso de la mitosis es el examen INED. aunque depende en última aproximadamente de ciclina y cdc2. 21 En 1989. Así cdc2. y se puede hacer para pasar de un estado a otro por Además de las moléculas purificadas.25 26 El campo del ciclo celular no se ha detenido para consolidar los logros alcanzados desde 1989. La composición de la membrana nuclear ha sido la más clara bio objetivo química de MPF. 19. demostró que la ciclina cumplido el requisito de la síntesis de proteínas de todo el ciclo celular. Doxsey y M. que a su vez puede responder al estado de realización de eventos específicos. el desglose y la reforma de la membrana nuclear. Uso de la rana citoplasma del huevo concentrado empobrecido de las transcripciones endógena. la apoteosis de todos los sistemas in vitro fue la reconstrucción de la vía completa de la progresión del ciclo celular por Andrew Murray en mi laboratorio 2. el monarca de todas las quinasas. otros sitios en las laminas son fosforilados por quinasas cuya actividad es activado por los FPO. Se ha movido en seis direcciones principales a la vez. 20. tendrá su propia historia de la regulación. Los núcleos se han reconstituido así como husos mitóticos el inicio de ADN eplication r el transporte nuclear y la duplicación del centrosoma (S. incluso si es un MPF-off en que las señales del inicio de la mitosis. varias reacciones complicadas se han reconstituido de la purificada citoplasma cerca de obtener de huevos de rana. 24. también actúa a través de intermediarios. su-fosforilación causas dephos montaje. no publicado). La síntesis de proteínas-requisito buscado durante mucho tiempo para el ciclo de progresión de la célula ha demostrado ser ciclina. y des de montaje de montaje del huso mitótico y la replicación del ADN. La ciclina-cdc2 complejo y la mitosis ¿Puede el orquestada secuencia de eventos en la mitosis se atribuye a la activación de una quinasa individual en un solo lugar y en una sola vez? Almo c / todos los componentes de la célula es radicalmente remodelado en la mitosis. Es detenido en un solo estado del ciclo celular. 29. 2 23. En el último par de años de trabajo de Gary Ward en mi laboratorio y Peter Mattheus Nigg en el laboratorio de Erich ha demostrado que in vitro MPF fosforila un residuo de serina específicos en las proteínas de Lamin Además. Su fosforilación provoca su solubilización completa. no es demasiado orgulloso para actuar dirección temente en los substratos mitótica común.

el volumen de negocios proteína podría jugar como señal un papel significativo en el control de ca enzima dad como la transcripción y traducción Los años transcurridos no han sido amables con esta opinión. 35. Algunas de estas quinasas y fosfatasas pueden servir como limitante de la velocidad en las actividades de inducción mitótico en ciertas etapas de desarrollo ción. he leído un comentario memorables de Bob Schimke sobre la degradación de la proteína que sostiene que para que no se dividen las células. 39. como receta transición y el procesamiento del ARN han demostrado en complejidad creíble y capacidad de control. lo que conduce a un paro metafase dominante. que son responsables de la activación de cdc2 de ciclina. que resultó ser una tirosina quinasa específica y una regulación positiva Lator.Mutantes i n este sí cuencia provocar un fallo que se ubiquitina-serie ATED y la falta de ser degradado. La degradación de la ciclina En 1970. mientras todavía era un estudiante graduado.La activación de cdc2 por ciclina La combinación de la ciclina con cdc2 no im inmediatamente activar la actividad quinasa. 38. 37. cdc2 y el Gl / S transición El G2 / M Paradi GM ha servido como un buen modelo para el Gl / S transiciones y tal vez . pero no en la interfase. La reacción más inusual que ha sido Identificación entified en el ciclo celular es la destrucción altamente regulada de la ciclina. una quinasa responsable de la activación de cdc2 y una fosfatasa responsable de su inactivación Estas reacciones.33. En Drosophila. Estudios genéticos en 5. durante este tiempo de los experimentos de fisiología del ciclo celular oftalmólogos como Pa dee r Arthur mantenido viva la idea de que la acumulación de las Naciones Unidas proteínas estables podría regular transición siciones en el ciclo celular El campo del ciclo celular ha revivido el interés en la regulación potencial de historia de la degradación de proteínas. Cdc25. estas reacciones nes constituyen la cooperativa de transición muy en mitosis que muestra un umbral de concentración de ciclina y un retraso después de la adición de la ciclina. Ciclina se acumula como 9Aestable de la proteína en la interfase y se degrada rápidamente en la anafase ". se han estudiado en los extractos o vitr con la adición de la PU componentes rified por Mark Solomon en mi laboratorio En conjunto. 31 32. la actividad de Cdc25 (la tirosina phosphata se) es la limitación de velocidad y por lo tanto el control de los elementos principales Estas reacciones también son puntos de entrada para la regulación mento de puestos de control se describen a continuación. 25. 34. Sin embargo. Ciclina. mientras que la degradación de proteínas ha sido relegado al papel de un sistema de eliminación de residuos. a pesar de la obligación de ciclina habitual para la entrada en mi apoptosis. pombe habían identificado por primera vez en un regulador negativo WEEL. experimentos de Michael Glotzer y Andrew Murray en mi laboratorio oratoria han demostrado que la estabilidad de la ciclina es controlada por una secuencia de reconocimiento específico cerca del extremo amino terminal de la molécula Las proteínas fusionadas artificialmente a esta secuencia se degradan por la vía de la ubiquitina durante la mitosis. ¿Cómo este sistema se regula es la terra incognita del ciclo de la investigación con células. 36. que tras un esfuerzo considerable bioquímica demostró ser un miem número de una nueva clase de tirosina fosfatasa phatases ambos actuaron en un Antag onistic manera de controlar la actividad final de la ciclina-cdc2 complejo en una sola tirosina en cdc2 identificados por Kathy Gould y Paul Nurse Bio experimentos químicos en la rana de células ex vías identificadas otras dos actividades.

Con gran rapidez nuevas Gl y G2 ciclinas se han identificado en la levadura. y las decisiones de desarrollo Aunque nadie pretende que la levadura incorpora la compleja regulación de los organismos metazoos.otras transiciones en el ciclo celular. interactúa directamente con una de las ciclinas Gl. El propósito de estas fosforilaciones puede ser para controlar la transcripción o la f ciclinas Gl. 43. así como otras propiedades fisiológicas han permitido la clonación de humanos ciclinas Gl Ahora hay pieles hay evidencia de su ex episódica presión en Gl o S y sus combinaciones nación con cdc2 o una proteína estrechamente relacionado llamado CDK2 Es importante hacer hincapié en lo poco que sabemos acerca de 'GI' ciclinas. el Gl / S transición está más cerca del corazón de los biólogos interesados en controlar el crecimiento. 48. CLN2 En principio. FAR1. el descubrimiento de las ciclinas cdc2 transición Gl no vino de mirar cdc2 sino que llegó a través de diferentes experimentos genéticos dirigidos a los genes que controlan la sensibilidad a un factor de la detención o el tamaño del control celular Estos genes identificados regulador de las proteínas Gl con algunos. en la resultados itial ciclina empate A (una proteína ciclina que está hecho a principios de la fase S y se degrada en la mitosis) y algunos de los nuevos ciclinas Gl. Los experimentos genéticos de la levadura se había demostrado que era necesario cdc2 dos veces. ni sabemos si como la fase G2 / M no es un requisito específico para la degradación de la ciclina dación. ciclo celular s n DECISIÓ. a los oncogenes recesivos codificación R B y pl07 y la transcripción difícil factores tor E2F Estas conexiones sugieren que oncogenes recesivos son los objetivos de la GIquinasa activada regulados por las ciclinas Gl. complementación genética de levaduras mutantes deficientes-ciclina con el ADN humano.50. 47. a pesar de estos indicios. un tiempo ligeramente llamado Gl / límite S Sin embargo. Posteriormente se demostró por el laboratorio de Reed. Steve que un conjunto redundante de ciclinas Gl cooperar para impulsar la célula de levadura en la fase S 40.42. un bucle de retroalimentación automática que se ha sugerido para las ciclinas Gl en la levadura. y como un requisito de ser otro ADN tanto eplication r. y en la actualidad no existe sistema bioquímico de ciclinas Gl en células de mamífero que AP enfoques de energía e ª de la en los sistemas in vitro MET en el G2 / M en rana. . como la ciclina E. 41. puesto que no sabemos de ninguna transición análoga a la G2 / M transición transición. una como parte de lo que hoy conocemos como MPF. 46. En mamíferos las células somáticas n el recién descubierto ciclinas Gl han servido como señuelos para explorar su control. ya que m o c células de detención en esa fase del ciclo celular. es muy probable que muchas de las estrategias de control del ciclo celular serán los primeros en estaba en la levadura. Sin embargo. 4445. La célula de levadura utiliza medios estándar de comunicación celular a los trans producir una señal de apareamiento específico que se establecen objetivos de la corriente. aunque homología débil para las ciclinas mitóticas. Los objetivos de los reguladores del ciclo celular exógena La regulación de la división celular en la levadura en respuesta a Phero apareamiento Mones es probablemente el mejor-vía para entender la diferenciación celular y el crecimiento celular. la vía de reglamentación de toda una ciclina Gl ahora se remonta a una señal extracelular inicial. ni tampoco sabemos de ningún fósforo phorylated objetivos. Las herramientas son mucho más limitadas que las herramientas genéticas que se encuentran en la levadura. Sin embargo. Cada uno tiene su propia historia y el trans-relacional de control transcripcional y cada uno sirve para aclarar y homeostático mecanismos fisiológicos que integran el crecimiento. Ira Herskowitz ha sido particularmente entre interesados en los genes activados que yo nhibit ciclo de progresión de la célula. y con Fred Chang encontró que uno de ellos. a través de una cascada de quinasas que activan genes específicos. y es paralela a la ruta 49.

53. y ahora una nueva unidad indispensable de biológi tiempo de cal) ha demostrado que es inútil tratar de predecir el «itinerario de descubrimiento. Aunque ya nadie cuestiona la generación erality de los mecanismos. Estos «control 'Mutantes puntuales han definido varias vías involucradas en el control de retroalimentación. dependiendo de qué reacciones son determinar la tasa y cuál es el camino de reglamentación formas están interconectadas por lazos de retroalimentación y puestos de control. que es un hecho de cambio r GTP para una pequeña proteína G común en la clase Ras llamado Ran En la actualidad los mecanismos de detección de daños no se conocen y las vías para la regulación de la maquinaria del ciclo celular son también desconocidos. Hartwell y Weinert específicamente buscó como controles negativos que podrían detener el ciclo celular de la levadura en respuesta a una falla Ure para completar una tarea posterior. No s i no cabe duda de que la situación se complica más cated en el futuro. mutantes similares también se han encontrado que el e r gulate la salida de la mitosis en volver respuesta a las anormalidades en el huso mitótico En células de mamíferos. es evidente que el aspecto exacto de la nueva vía resultante se pueden enviar en alquiler esta muy. RCC1. sino que optó por la falta de reparación de daño en el DNA Pensaron que no debe ser una subclase de la radiación-sen TIVO mutantes que ser sensible.de acceso autoactivating postradiational Demostración de la autopista de las ciclinas G2 en la rana. el conocimiento de estas vías y mejores understandi ng de la bioquímica del ciclo de eventos de células promesa de aclarar estas importaciones sistemas de hormiga mucho antes de la 300a edición de TIBS. Nos n id a entender la transición Gl o transiciones y. 5455. Sin embargo. ya que no la detención del ciclo celular en Onse resp al daño del ADN. Las metas a largo plazo sería la de tratar de conectar la regulación Reglamento de la división celular con DESARROLLO las decisiones de capital y hasta t en ervene en división de la promoción de la no proliferación de las células o la inhibición de la división de programas liferating células. aunque es probable que sea posible elegir algunos de los objetivos. 51. Si la investigación sobre el ciclo celular ha hecho ningún aporte a la cultura de la ciencia cia. y eventos en la fase S que están regulados por 'Gl' ciclinas el. una biografía principio lógico. que traducido libremente significa "de muchos sistemas biológicos. en particular si la degradación de la ciclina se requiere para pasar a la siguiente fase. y por lo tanto sería deficiente en la asignación de suficiente tiempo en el ciclo celular de los daños del ADN para ser reparado. Intervención en jaque controles de los puntos también se podría mejorar la eficacia de la quimioterapia.Ellos incluyen una descripción más completa de abajo objetivos de flujo de la quinasa mitótica.UU. una descripción del proceso de degradación de la ciclina.: E Pluribus Unum. Kishi-moto utiliza un enfoque genético para ident ify otro sistema de retroalimentación evidente que implica a las proteínas cromosómicas. El futuro está delante de nosotros Como la historia de los ocho-y-un-tercer año pasado (100 cuestiones de TIBS. que se expresa mejor por el lema que se encuentran en cada moneda EE. objetivos inmediatos incluyen una mejor descripción de la bio química de los puestos de control y las enzimas que r e gulate la activación de las quinasas cdc2 y relacionados. ya que hay muchas ciclinas y las proteínas . 52. Puesto de control de los controles Uno de los misterios iniciales de la celda ycle c fue la aparente autonomía de las reacciones del ciclo celular en el huevo de ranas y la dependencia extrema en la levadura.

la levadura.relacionadas con cdc2. y tal vez otras quinasas mitóticas. Sin embargo. los erizos de mar y los mamíferos nos salvó de ser des atraídos por las peculiaridades de cada sistema temperatura y facilitó una u n rápida comprensión del proceso biológico en general. En ambos casos comparación ayuda a centrar la atención en el altamente con r sí ved y más importante parte de una secuencia o proceso. es especialmente gratificante que lo que surgió surgió de muchas fuentes y muchos así lo enfoques experimentales. La capacidad para amalgamar los resultados de los estudios del ciclo celular de las ranas. Hay una similitud entre los esfuerzos en los últimos tiempos del ciclo de volver a la célula búsqueda y la práctica común de la búsqueda de homologías entre las proteínas relacionadas. .