Universidad de San Carlos de Guatemala Facultad de Ciencias Químicas y Farmacia Escuela de Química Biológica Departamento de Bioquímica Bioquímica I, QF, BB Resolución

hoja de trabajo Cinética e inhibición enzimática Instrucciones En parejas resolver cada uno de los problemas planteados. Entregar la resolución al finalizar el período de clase en el cubículo de instructores de Bioquímica. 1. La enzima lactato deshidrogenasa permite la conversión de piruvato en lactato en presencia del cofactor NADH + H, el cual se oxida formando NAD+. En un laboratorio se determinaron algunas constantes cinéticas de la lactato deshidrogenasa a condiciones experimentales, observándose que a una concentración de sustrato ([S]) de 0.01 M la velocidad inicial (Vo) de reacción es de 35 mM/s y el valor de Km es de 2.46 mM. En base a los datos proporcionados determine: a. La velocidad máxima de la reacción (Vmax). Vmax = 43.61 mM/s b. Vo cuando [S] es de: 18 mM y 0.034 M. Vo con [S] 18 mM = 38.37 mM/s Vo con [S] 0.034M (34mM) = 40.66 mM/s

2.

En un laboratorio de alimentos se determinó la actividad enzimática de la amilasa presente en el germen de trigo a condiciones experimentales. El principal interés de los investigadores era determinar el comportamiento de la enzima cuando se enfrenta a diferentes concentraciones de sustrato. Los resultados obtenidos se reflejan en la siguiente tabla: Concentración de almidón (mM) 6.25 * 10-6 4.5 * 10-5 1 * 10-4 1 * 10-3 1 * 10-2 Vo (mM/s) 35.12 56.25 60.03 74.91 76.02

Determine los valores de Km y Vmax para la amilasa a condiciones experimentales. S (mM) 6.25E-06 4.50E-05 1.00E-04 1.00E-03 1.00E-02 Vo (mM/s) 35.12 56.25 60.03 74.91 76.02 1/S 1.60E+05 2.22E+04 1.00E+04 1.00E+03 1.00E+02 1/Vo 0.0284738 0.0177778 0.0166583 0.0133494 0.0131544

Amilasa
0.035 0.03 0.025 0.02 0.015 0.01 0.005 0 0.00E+00 5.00E+04 1/S 1.00E+05

y = 9E-08x + 0.014 R² = 0.957

-5.00E+04

1/Vo

1.50E+05

2.00E+05

Vmax = 71.43 mM/s Km 6.42 E -06

Calcule los valores de Km y Vmax en presencia de inhibidor.6 40.4 4.00E+00 Vo mM/s I=0 I = 5mM 10.15625 0.4 11.8 40.08 1/Vo 0. Ki = 1.6 33.1 14.00E-01 5. se hace reaccionar a una concentración de sustrato de 3 * 10-2 mM y en presencia de un inhibidor competitivo ([I] = 2. Calcule los valores de Km y Vmax de la hexoquinasa sin inhibidor.4 22. S (mM) 3.06 0. modificada para inhibición competitiva.5 Pasar todos los datos a la misma dimensional y establecer los valores de los inversos.04 0.33E+00 2.33E-01 1. Vo = 5.0884956 0.0295858 a.0442478 0. Una enzima cuyos valores cinéticos son: Km = 2 * 10-4 mM y Vmax = 55 mM/s.044444444 0.3 * 10-3 0.998 0. . en presencia de un inhibidor.024691358 0.00E+00 2.5 * 10-3 1 * 10-3 3 * 10-3 9 * 10-3 Vo (mM/s) Inhibidor 5 * 10-3 mM 4.40 E+01 mM/s Para estudiar la glucólisis en un microorganismo fermentador de glucosa se decidió analizar la actividad de la enzima hexoquinasa (primera enzima de la glucólisis).5 33.5 6.022 R² = 0.022x + 0. Sin inhibidor 0.00E+00 3.5 * 10-3 mM). Inhibidor 0 mM 10.1 6.00E+00 9.00E-01 1.00E+00 5.1 0.5 * 10-3 mM.029585799 0.12 0. Calcular primero el valor de α con los datos del inhibidor α = 2.45 mM.00E+00 1.4 14.02 0 y = 0.068965517 0.3 22.00E+00 3.3 33.00E-01 1. Km = 1 mM b.5 11.8 22.00E+00 1.50E+00 1/S Vmax = 45.3.5 33.2439024 0.5 22.096153846 0.11E-01 Vo mM/s 1/Vo no I 1/Vo con I 0.8 4.50E+00 3. Calcule la Vo en presencia de inhibidor competitivo a las concentraciones de sustrato e inhibidor dadas.00E+00 3.33 E-04 mM Luego incluir esos datos en la fórmual de Michaelis y Mentel.67 Con el valor de α calcular el valor de αKm (Km aparente) αKm = 5.8 1/S 3.50E+00 2. En la tabla siguiente se presentan los datos obtenidos: Concentración de sustrato (M) 0.

25 0. Es necesario determinar primero el valor de α α = Km(con inhibidor) / Km (sin inhibidor) α=3 Luego determinar el valor de Ki tomando el cuenta el valor de Km Ki = 2.50E+00 3.066x + 0.00E+00 1.5 mM Fórmulas Michaelis y Mentel Vo = Vmax [S] Km + [S] Lineweaver – Burk (dobles recíprocos) 1 = Km 1 + 1 .022 R² = 1 0. Vo Vmax [S] Vmax Inhibición acompetitiva Vo = Vmax [S] Km + α’[S] α' = 1 + [I] . d.05 0 y = 0. K’i K’i = [ES] [I] [ESI] 1 = Km 1 + α’ . Vo Vmax [S] Vmax Inhibición competitiva Vo = Vmax [S] αKm + [S] α = 1 + [I] .00E+00 3.1 0. Calcule el valor de Ki. Km = 3 c.00E+00 2.3 0.00E+00 5.45 mM. Ki Ki = [E] [I] [EI] 1 = αKm 1 + 1 . y únicamente se determina variación en el valor de Km a medida que se evalúa el efecto del inhibidor. ¿Qué tipo de inhibición se observa? Explique. Inhibición competitiva ya que se observa el mismo valor de Vmax en presencia y ausencia del inhibidor.00E-01 1.50E+00 1/S Vmax = 45.50E+00 2. Vo Vmax [S] Vmax .Con inhibidor 0.2 1/Vo 0.15 0.