Lucrri practice Fiziologie I

EXPLORAREA SERIEI ERITROCITARE

Eritrocitele (hematiile) reprezint alturi de leucocite i trombocite elementele figurate ale sngelui. Procesul de formare al eritrocitelor se numete eritropoiez, realizat prin multiplicarea i maturarea precursorilor eritrocitari, expulzia nucleului si eritrodiabaza (trecerea eritrocitelor din mduva hematogen n circulaie). Pentru explorarea corect a seriei eritrocitare este necesar determinarea urmtorilor parametri: numrul de eritrocite hematocritul hemoglobina indicii eritrocitari.

1. NUMRTOAREA ERITROCITELOR
PRINCIPIU Metoda manual - se numr direct la microscop (n camera de numrat) eritrocitele dintr-un volum cunoscut de snge, diluat ntr-o proporie cunoscut (diluarea sngelui se face pentru a putea numra eritrocitele care sunt foarte numeroase i pentru ca sngele s nu coaguleze). Metoda automat - principiul impedanei electrice - o suspensie de eritrocite ntrun volum cunoscut de reactiv trece printr-un orificiu (fant) prevzut cu electrozi ntre care se aplic un curent constant. Trecerea prin orificiu a fiecrui eritrocit, nonconductor, va determina o scdere brusc de tensiune denumit puls. Pulsurile sunt numrate electronic i exprimate ca numr de eritrocite. VALORI NORMALE RBC (red blood cells) = 4-5,5 mil/mm3 sau 4-5,5 1012/l (valoare medie) brbai = 4,9 0,7 mil/mm3 femei = 4,3 0,6 mil/mm3 VARIAII FIZIOLOGICE poliglobulia: definete valorile crescute, poate fi ntlnit la persoanele care triesc la mare altitudine VARIAII PATOLOGICE poliglobulia: apare n insuficiena respiratorie, bolile cardio-pulmonare ,etc.; anemia: definete valorile sczute, apare n hemoragie, hemoliz, insuficiena mduvei hematogene din intoxicaii, iradiere, infecii,etc.

2. DETERMINAREA HEMATOCRITULUI
DEFINIIE Hematocritul (Ht) reprezint raportul dintre volumul total al eritrocitelor, dup centrifugare, fa de volumul sangvin total, exprimat n % sau litru/litru. Ht reprezint cea mai precis metod de evaluare a strii de anemie sau poliglobulie.

Lucrri practice Fiziologie I PRINCIPIU Metoda automat - se face cu ajutorul aparatelor electronice. Ht este calculat prin msurarea numrului de eritrocite i a VEM (volum eritrocitar mediu). Metoda manual - se face prin centrifugare, se separ eritrocitele de plasm i se evalueaz raportul cantitativ eritrocite/snge. MATERIALE NECESARE centrifug 2 tuburi de hematocrit snge venos recoltat pe anticoagulant (heparin) TEHNICA Se umplu cu snge venos 2 tuburi de hematocrit i se centrifugheaz 30 minute la 3000 de turaii/min. Dac centrifugarea este complet eritrocitele se vor separa de plasm. Leucocitele i trombocitele formeaz un strat ntre acestea i nu reprezint n mod normal mai mult de 1% din volumul total de celule sedimentate. CALCUL Se citete n mm nlimea coloanei de eritrocite (h) i se exprim procentual fa de nlimea total a coloanei de snge (H):
h 100 H

Ht (%) =

VALORI NORMALE (NORMOCITEMIE): valoare medie: 39-50 % brbai: 45 7 % (0,38 - 0,52 l/l); raport eritro-plasmatic : 45-55 femei : 42 5 % (0,37 - 0,47 l/l); raport eritro-plasmatic : 40-60 VARIAII PATOLOGICE policitemia: definete valori crescute (poliglobulie, deshidratare etc.); oligocitemia: definete valori sczute (anemii, hiperhidratare etc.). Dup o hemoragie acut, nainte de refacerea plasmatic exist normocitemie. Pentru o apreciere corect, rezultatele obinute la determinarea Ht se coreleaz cu cele ale volemiei (Tabelul I): Tabelul I. Corelaia hematocritului cu volemia Volemie Elemente figurate Normovolemie normocitemic oligocitemic policitemic Hipovolemie Hipervolemie normocitemic oligocitemic policitemic normocitemic oligocitemic policitemic Exemple starea fiziologic anemii fiziologic (de altitudine); patologic (boli cardio-pulmonare hemoragie acut boli cronice consumptive deshidratare extracelular fiziologic(gravide n trimestrul III) patologic ( hipertensiunea arterial) hiperhidratare extracelular HTA cu insuficien respiratorie
2

Lucrri practice Fiziologie I

3. DOZAREA HEMOGLOBINEI SANGUINE. METODA DRABKIN

DEFINIIE Hemoglobina (Hb) reprezint elementul principal pentru realizarea funciei respiratorii a eritrocitului. Eritrocitul conine: 60% ap, 33-35% Hb, 5-7% alte substane: 2% enzime, pompe ionice: Na+/K+, de Ca+2, schimbtor de Cl-/HCO3-. Exist 3 tipuri de Hb: Hb embrionar, Hb fetal, Hb de tip adult . PRINCIPIU Hb n prezena unei soluii de cianur de potasiu i fericianur de potasiu se transform n cianmethemoglobin de culoare galben-rocat. Intensitatea culorii este proporional cu concentraia de Hb i se determin spectrofotometric. MATERIALE NECESARE reactiv Drabkin (conine cianur i fericianur de potasiu); snge proaspt sau recoltat pe anticoagulant (EDTA-Na2); spectrofotometru. TEHNICA n dou eprubete se introduc: Reactivi Reactiv Drabkin (ml) Snge (l) Eprubeta Prob 5 20 Eprubeta Martor 5 -

se omogenizeaz coninutul eprubetei prob; se las n repaus la temperatura camerei 20 minute; se citete extincia probei fa de martor la 540 nm; concentraia de Hb, corespunztoare extinciei, se determin din tabele.

VALORI NORMALE valoare medie: 13-17 g/dl; brbai: 15 2 g/dl; femei: 14 2 g/dl. VARIAII PATOLOGICE poliglobulia: definete valorile crescute ale Hb. anemie: definete valorile sczute ale Hb.

Lucrri practice Fiziologie I

4. INDICII ERITROCITARI
Valorile Hb, Ht i ale numrului de eritrocite stau la baza calculrii indicilor eritrocitari, utili pentru studiul eritrocitelor n funcie de mrime i coninutul n Hb, i pentru diagnosticul morfologic al anemiei (Tabelul.1). 4.1. VOLUMUL ERITROCITAR MEDIU (VEM, MCV, MEAN CORPUSCULAR VOLUME) DEFINIIE VEM indic volumul mediu al eritrocitului. FORMULA DE CALCUL VEM (m3) =
Ht (%) 10 E (mil / mm 3 )

VALORI NORMALE 80 - 100 m3 sau fl (femtolitri) = normocite. VARIAII PATOLOGICE Valori mai mici dect 80 m3 (fl) caracterizeaz microcitele (n cazul anemiei prin deficit de Fe, microsferocitoz); Valori mai mari de 100 m3 (fl) caracterizeaz macrocitele (n cazul anemiei prin defit de acid folic i vitamina B12, anemia Biermer, megaloblastic). 4.2. CONCENTRAIA MEDIE DE HB ERITROCITAR (CHEM, MCHC-MEAN CORPUSCULAR HEMOGLOBIN CONCENTRATION) DEFINIIE CHEM reprezint concentraia medie de Hb/100 ml eritrocite. FORMULA DE CALCUL CHEM =
Hb ( g / dl ) 100 Ht (%)

VALORI NORMALE 32 - 36 g Hb/100 ml eritrocite (normocromie) VARIAII PATOLOGICE Valori mai mici dect 31 g Hb/100 ml eritrocite definesc hipocromia. 4.3. HEMOGLOBINA ERITROCITAR MEDIE (HEM, MCH- MEAN CORPUSCULAR HEMOGLOBIN) DEFINIIE HEM reprezint cantitatea de Hb coninut de un eritrocit. FORMULA DE CALCUL HEM =
Hb ( g / dl ) 10 E ( mil / mm 3 )
4

Lucrri practice Fiziologie I VALORI NORMALE 20 - 34 pg VARIAII PATOLOGICE Valori mai mici dect 20pg definesc hipocromia. 4.4. INDICELE DE DISTRIBUIE ERITROCITAR (RDW RED CELL DISTRIBUTION WIDTH) DEFINIIE RDW reprezint deviaia standard a mediei volumelor eritrocitare raportate la VEM i se determin cu ajutorul histogramelor curbe de distribuie % a mrimii celulelor. VALORI NORMALE 11,5 - 14,5 %.

Celule normale

Reticulocitoz crescut

VARIAII PATOLOGICE Variabilitatea crescut a volumului eritocitelor definete anizocitoza (RDW crescut). Astfel, ca ct RDW va fi mai mare, cu att anizocitoza este mai marcat.

5. DIAGNOSTICUL DIFERENIAL AL ANEMIILOR

Tabelul II. Diagnosticul diferenial al anemiilor.

INDICI VEM CHEM HEM Cauze Valori normale 80-100m3 32-36g% 20-34pg Anemie hipocrom microcitar Anemia feripriv (deficit de Fe2+ ) Anemie normocrom normocitar N N N Anemia aplastic (insuficiena mduvei osoase hematogene)
5

Anemie normocrom macrocitar N N Anemia megaloblastic (deficit de B12 i acid folic)

Lucrri practice Fiziologie I

6. VITEZA DE SEDIMENTARE A HEMATIILOR

ncepnd cu anul 1924 cnd Westergreen a standardizat metoda de determinare ce-i poart numele, viteza de sedimentare a hematiilor (V.S.H.) s-a rspndit ca un test paraclinic nespecific utilizat n diagnosticul unor variate stri patologice. PRINCIPIU n sngele recoltat pe anticoagulant, lsat n repaus, se produce separarea plasmei de elementele figurate care sedimenteaz, n virtutea gravitaiei (Fig.1). n sngele circulant elementele figurate se gsesc n suspensie dispersate n plasm. Meninerea hematiilor n suspensie i implicit valorile V.S.H.-ului sunt determinate de: factori globulari : - ncrctura electronegativ a eritrocitelor, care determin respingerea electrostatic a acestora; - vscozitatea sngelui condiionat de masa eritrocitar; astfel scderea numrului de hematii (anemie) determin accelerarea V.S.H., iar creterea numrului de eritrocite (poliglobulii) determin scderea V.S.H. factori plasmatici : - raportul albumine/globuline. Albuminele, care prezint un grad mare de disociere ionic, determin creterea numrului de sarcini electronegative care se opun sedimentrii. n schimb, globulinele i fibrinogenul, cu un grad de disociere ionic mult mai redus, favorizeaz sedimentarea. Astfel, scderea raportului albumine/globuline fie prin scderea concentraiei de albumine, fie prin creterea concentraiei de globuline sau fibrinogen va accelera sedimentarea i va crete valoarea V.S.H.-ului. - creterea fibrinogenului plasmatic favorizeaz sedimentarea prin fenomenul de pseudoaglutinare. MATERIALE NECESARE sering de 2 cm3 i ac de puncie venoas; pipete Westergreen cu stativul corespunztor; citrat de sodiu 3,8%, soluie steril; materiale necesare recoltrii sngelui prin puncie venoas. TEHNICA se aspir n sering soluie de anticoagulant cu care se cltete toat seringa, reinndu-se 0,4 ml. se puncioneaz vena, dup prealabila dezinfectare, i se aspir snge n sering pn la 2 ml. coninutul seringii se amestec prin cteva micri de rsturnare. proba se trece apoi ntr-o eprubet din care se aspir cu pipeta Westergreen pn la diviziunea 0, astfel nct coloana de snge s fie continu. se plaseaz pipeta n stativ n poziie perfect vertical. citirea se face dup o or, iar rezultatul se exprim n mm coloan de plasm separat de eritrocite n decurs de o or (mm la 1 or). VALORI NORMALE brbat: 1 10 mm la 1 or; femeie: 2 13 mm la 1 or; nou-nscut: 0,5 mm la 1 or (datorit poliglobuliei).
6

Lucrri practice Fiziologie I

VARIAII FIZIOLOGICE la femei V.S.H. crete n timpul menstruaiei; la femei V.S.H. crete n sarcin (mai ales n ultimele luni). VARIAII PATOLOGICE: creterea V.S.H.-ului apare n boli infecioase sau inflamatorii (pneumonii, reumatism articular acut, tuberculoz activ, septicemie, pielonefrite), n anemii, infarct miocardic, leucemii, neoplasme etc. scderea V.S.H.-ului apare n poliglobulii etc.

Fig.1. Determinarea V.S.H. prin metoda Westergreen. 1. P.M. sex masculin V.S.H. = 8 mm la 1 or (normal) 2. S.I. sex feminin V.S.H. = 40 mm la 1 or (patologic)

Pentru a evita rezultatele eronate trebuie respectate urmtoarele condiii: sngele se recolteaz dimineaa pe nemncate; determinarea se face imediat dup recoltare (n primele 2-3 ore); conservarea sngelui crete V.S.H.; se utilizeaz ca anticoagulant citratul de sodiu deoarece oxalatul de sodiu crete V.S.H.; poziia pipetei trebuie s fie perfect vertical, nclinarea acesteia crescnd V.S.H.; temperatura camerei trebuie s fie cuprins ntre 20 i 27C deoarece creterea temperaturii crete V.S.H.; s se evite hemoliza. BULETINE DE INTERPRETARE S se interpreteze urmtoarele hemograme: 1. , 18 ani (RBC) Nr E = 3,3 mil/mm3 (HGB) Hb = 10 g/dl (HCT) Ht = 30 % (MCV) VEM = 90 fl (MCHC) CHEM = 33,3 g% (MCH) HEM = 30 pg RDW = 12 % 2. , 25 ani Nr E = 3 mil/mm3 Hb = 7 g/dl Ht = 27 % VEM = 110 fl CHEM = 34 g% HEM = 32 pg RDW = 17 % 3. , 20 ani Nr E = 2,8 mil/mm3 Hb = 5 g/dl Ht = 20 % VEM = 70 fl CHEM = 25 g% HEM = 18 pg RDW = 16 %

Lucrri practice Fiziologie I

TESTE (CU UN SINGUR RSPUNS CORECT) 1. Care sunt valorile normale ale eritrocitelor? A. La femei 4 - 5,5 mil/mm3 B. La barbai 4,2 - 5,6 mil/ mm3 C. 5000 - 9000/mm3 D. 4 - 5,5 x 1012/l 2. Alegei afirmaiile corecte de mai jos : A. Creterea nr. RBC (red blood cells) definete poliglobulia i apare n insuficiena mduvei hematogene B. Creterea nr. RBC (red blood cells) definete poliglobulia i nu apare n insuficiena respiratorie C. Poliglobulia apare ca urmare a scderii nr. de eritrocite D. Anemia semnific o scdere a nr. de eritrocite sub 4 mil/ mm3 3. In caz de anemie vom avea: A. Scderea numrului de eritrocite sub 4 mil/ mm3 B. Creterea concentraiei de hemoglobin medie 36gHb/100ml E C. Normovolemie cu oligocitemie D. HEM > 32pg 4. Pe frotiul de snge periferic putem ntlni: A. Anizocromie = variaii de volum B. Anizocitoza = variaii de volum C. Poichilocitoza = variaii de ncrcare cu hemoglobin D. Poichilocitoza = variaii de numr 5. Care dintre urmtoarele afirmaii sunt false? A. Hemoglobina se poate determina spectofotometric B. Indicele de distribuie eritrocitar (RDW) reprezint deviaia standard a mediei volumelor eritrocitare raportate la VEM C. Volumul eritrocitar mediu (VEM, MCV) indic volumul mediu al unui eritrocit i este normal <80 fl D. Dozarea hemoglobinei (Hb) se poate face i prin metoda Drabkin 6. Despre V.S.H. (viteza de sedimentare a hematiilor) se poate afirma c : A. Reprezint un test paraclinic nespecific B. n anemie scade V.S.H. C. Valorile normale sunt: la brbat 1-10 mm la 1 or iar la femeie 2-15 mm la 1 or D. Poliglobulia duce la creterea V.S.H. 7. Alegei afirmaia corect de mai jos : A. Eritrocitul conine 40% ap, 30-32% Hb, 5-7% alte substane B. Exist 3 tipuri de Hb: embrionar, fetal, de tip senil C. Hb , Ht i VEM nu stau la baza calculrii indicilor eritrocitari D. VEM (MCV=mean corpuscular volume) > 100 fl caracterizeaz eritrocitele macrocite ntlnite n anemia prin deficit de acid folic i vitamina B 12
8

(CHEM)

>

Lucrri practice Fiziologie I 8. Variaiile Ht (hematocritului) definesc: A. Policitemia dac valoarea Ht >0,52 l/l la brbat i >0,47 l/l la femeie B. Oligocitemia dac valoarea Ht >0,52 l/l la brbat i >0,47 l/l la femeie C. Policitemia dac valoarea Ht este 0,38 0,52 l/l la brbat i 0,37 0,47 l/l la femeie D. Dup o hemoragie acut, nainte de refacerea plasmatic exist anemie 9. Alegei afirmaia corect de mai jos : A. Indicele de distribuie eritrocitar (RDW) se utilizeaz la aprecierea anizocitozei B. Indicele de distribuie eritrocitar (RDW) se utilizeaz la aprecierea hipocromie C. Indicele de distribuie eritrocitar (RDW) nu are valoare normal cuprins ntre 11,5 i 14,5 D. Toate afirmaiile de mai sus sunt adevrate 10. VSH ul reprezint : A. Un parametru nespecific folosit pentru determinarea numrului de eritrocite din sngele circulant B. Un parametru specific folosit pentru determinarea numrului de eritrocite din sngele circulant C. Un test paraclinic nespecific folosit n diagnosticul unor variate stri patologice D. Nici o afirmaie nu este corect Rspunsuri: 1-D, 2-D, 3-A, 4-B, 5-C, 6-A, 7-D, 8-A, 9-A, 10-C