1. OBTENCIÓN DE AMILASAS FÚNGICAS A PARTIR DE ASPERGILLUS SP.

SEMILLAS DE LENTEJAS

AISLADO DE

Las amilasas son enzimas que catalizan las reacciones hidrolíticas del almidón, dando origen a diversos productos que poseen una gran relevancia para algunas operaciones y procesos industriales. Las amilasas son comúnmente halladas en animales y en plantas; sin embargo, para fines industriales, las más utilizadas son aquellas de origen bacteriano o fúngico. Las amilasas poseen una gran importancia en la producción de alimentos y de biocombustibles, Las -amilasas presentan una gran utilidad tanto para la industria textil como para la de alimentos pues rompen la molécula del almidón en fracciones más cortas (dextrinas). Actúan directamente sobre los enlaces -1,4 de la molécula, dando origen a moléculas como la maltotriosa, maltotetraosa, maltopentaosa y maltohexaosa, entre otras. Concluciones Se realizaron técnicas apropiadas para el aislamiento de microorganismos productores de amilasas presentes en semillas de lentejas. Aunque se logró aislar dos microorganismos, el número 1, identificado como Aspergillus sp. Demostró mayor capacidad hidrolítica del almidón, confirmado de forma cualitativa mediante la ausencia de reacción ante la adición de revelador lugol. La actividad amilolítica del complejo enzimático fue cuantificada como equivalente de dextrosa, el cual presentó un valor de 6,5 g de glucosa/100 g de almidón, evidenciando la capacidad de hidrólisis de las enzimas obtenidas mediante cultivo de Aspergillus sp. Sobre salvado de trigo. Es importante resaltar que este trabajo se limitó a la medición de la actividad a 37°C y un pH de 5. Por lo tanto es necesario realizar más estudios acerca de la influencia del pH y la temperatura sobre la actividad amilasa e igualmente sobre las condiciones de cultivo del microorganismo aislado. 2. TRICHODERMA EN EL CONTROL BIOLOGICO DE ENFERMEDADES DE PLANTAS ENZIMAS PRODUCIDAS POR TRICHODERMA SPP. La pared celular de los hongos está formada principalmente por quitina y -1,3 glucans embebidas en una matriz de material amorfo, por lo tanto se espera que para el éxito de la degradación de la pared celular intervengan más de una enzimas. Trichoderma spp. Son eficientes productores de polisacaridasas, proteasas y lipasas, compuestos que pueden ser usados en la degradación de la pared de las células del patógeno. Se han purificado dos enzimas quitinoliticas (endoquitinasa y quitobiosdasa), obtenidas a partir de Trichoderma harzianum; se comprobó que el grado de inhibición del patógeno fue proporcional al nivel de quitina en la pared celular del hongo atacado, e igualmente se verifico que la combinación de las dos enzimas resulto ser sinergostica (54, 56, 57, 75), aunque la mezcla de estas dos enzimas no es requerida para la inhibición del hongo atacado (56). Es interesante resaltar que las dos enzimas se enfrentaron a cultivos de Trichoderma y este no se vio afectado por las mismas, a pesar de tener quitina en sus paredes.

C 3. rolfsii.Haran et al. la misma resultó la mejor productora de enzima lipasa. solani. muy usados en la industria farmacéutica y agroquímica.05-0. LIPASAS DE HONGOS INMOVILIZADAS. así como el interés por estas enzimas para trabajos posteriores. cuando Trichoderma se enfrenta a S.1.1. alcanzándose niveles de actividad lipolítica entre 0.fumigatus mostró niveles altos de expresión y en la literatura no se encontró reporte alguno sobre lipasa producida por este microorganismo. se han convertido en catalizadores de gran interés para obtener isómeros ópticamente puros. Debido a esta propiedad que presentan y a la gran variedad de sustratos que aceptan.12 16.5 . 3.56 0. Encontraron niveles diferentes de producción de las enzimas hidroliticas. Se pudo comprobar que todos los micoorganismos se desarrollaron de modo similar en el medio de cultivo empleado (los resultados de crecimiento no se reportan). rolfsii o a R. Por la importancia del tema. algunos de ellos se presentan a continuación: Derivado Octil Aspergillus fumigatus Aspergillus fumigatus Aspergillus niger Aspergillus niger Aspergillus oryzae Aspergillus oryzae Condición experimental E(S/R) pH 5 4oC pH 4 4oC pH 7 4oC pH 5 4oC pH 7 25oC pH 7 4oC 0. ESTUDIO DE SU SELECTIVIDAD FRENTE A UN ESTER RACÉMICO Introducción. Resultados y Discusión. capaces de hidrolizar una sola especie en una mezcla racémica. no se detecto en la relación Trichoderma y R. Por otra parte se puede añadir que aunque la cepa J-1 de A.7 0. solani.3).niger no sea la misma a la empleada por otros autores.26 UI/mL. Las lipasas (E. la actividad de una de las enzimas. Los estudios de selectividad de la enzima arrojaron a resultados interesantes. de igual modo la cepa de A. son enzimas de gran especificidad.50 0. la cual se produjo durante la acción parasítica de Trichoderma y S.17 0. Los resultados obtenidos arrojaron que todos los hongos eran productores de lipasas. se ha decidido en el presente trabajo estudiar la esterereo especificidad de diversas lipasas inmovilizadas en la reacción de hidrólisis de un ester bajo diferentes condiciones de reacción de pH y temperatura. resaltando que la expresión de estas enzimas durante la interacción con el patógeno fue afectada por el hongo patógeno al cual se enfrento.

78 Como se puede apreciar todos los derivados de las distintas lipasas fueron sensibles a las condiciones experimentales estudiadas en mayor o menor grado.16 2. mientras que para otros derivados las variaciones fueron pequeñas. DETERMINACIÓN DE LA ESPECIFICIDAD DE PROTEASAS FÚNGICAS EN LA HIDRÓLISIS DE PROTEINA Hoy en día la tecnología enzimática ocupa un lugar preponderante dentro de la biotecnología. . así como sus Aplicaciones. al igual sucedió con la lipasa de Mucor grysoceanum aumentando la enantio preferencia hacia el isómero S. De este modo una misma lipasa inmovilizada puede presentar enantioselectividades diferentes por simples cambios de las condiciones de reacción. de las cuales muchas de ellas han sido aisladas. 4. producción de hidrolizados de proteína.4 20 0. Actualmente se conoce la existencia de más de 2.7 cuando se disminuó el pH del medio de reacción. Concluciones La posibilidad de modular la enantio selectividad de una enzima ha sido ampliamente discutida en la literatura y diversas herramientas se han empleado para modificarla.Mucor grysoceanum Mucor grysoceanum Trichoderma hartzianum Trichoderma hartzianum pH 7 4oC pH 4 4oC pH 5 4oC pH 4 4oC 0.000 enzimas. el 10% restante corresponde en las áreas farmacéuticas y analítica.niger inmovilizada incrementó su enantio selectividad hacia el isómero S de 0. por mencionar algunos. fabricación de pan. siempre y cuando puedan promoverse cambios en la enzima que causen modificación de la enantio selectividad de las mismas en diversas biotrans formaciones. por ejemplo la lipasa de A. ablandadores de carnes. aunque es conveniente señalar que con las proteasas alcalinas empleadas en detergentes ocupan 25% del total de la distribución. Alrededor de un 65% de las enzimas proteolíticas o proteasas que se producen industrialmente están de una u otra manera relacionadas con la industria alimentaria. En la Tabla se muestran algunas enzimas de uso industrial. Se comprobó que la variación de las condiciones del medio de reacción continúa siendo una de las más fáciles y económica. purificadas y cristalizadas gracias a la experiencia ganada en este terreno. entre los usos más comunes se encuentra la maduración de quesos.12 a 16.

en su mayoría de tejidos animales y vegetales. se desarrollaron tecnologías para producir proteasas de origen microbiano.amilasas. además que las enzimas que se extraen de este sistema son de mejor calidad y se necesitan menos solventes para extraerlas Para la aplicación industrial de proteasas se recurrió inicialmente a la producción de preparados enzimáticos provenientes. así como de la elevada actividad en presencia de compuestos que normalmente inhibirían a las de origen animal y vegetal.Las bacterias producen principalmente proteasas alcalinas mientras que las proteasas provenientes de hongos puedes ser ácidas. al incrementarse la demanda de proteasas como consecuencia de su aplicación como aditivo en detergentes utilizados a nivel industrial y doméstico. glucosamilasas. neutras y alcalinas. lipasas y pectinasas. ya que reúnen propiedades deseables como gran estabilidad en intervalos de pH y temperatura de procesos. lo que ofrece una gran ventaja ya que pueden crecer tanto en medio sólido como líquido. Gracias a que los hongos como Aspergillus oryzae y Rhizopus oryzae son productores de proteasas alcalinas así como de . estos crecen naturalmente en medios sólidos y se pueden emplear en la fermentación en medio sólido utilizando generalmente salvado de trigo como soporte. . además de ser más factible su producción a partir de microorganismos que a partir de tejidos . celulasas. lactasas.

La presencia de fenantreno fue significativa (p>0.01 a 0. En medio sólido de agar C.0L. benzenodiol: oxígeno reductasa) en medio líquido sin y con fenantreno (172 mg/l). entre los que se encuentra el fenantreno. y con fenantreno la máxima actividad fue al día 3 de incubación (3. sin fenantreno. Neutrasa 0. concentración del sustrato.01 U/g biomasa en peso seco). Los hongos de la división basidiomicota (Pleurotus ostreatus. Novozym FM 2.5L grado alimenticio. cladosporioides encontrada en suelo de humedales. es decir la presencia del fenantreno aumentó la actividad específica de la enzima. la Environmental Protection Agency en Estados Unidos de Norteamérica (EPA). Trametes versicolor. ha considerado a 16 de ellos de alta importancia. aislado de suelo contaminado con hidrocarburos.09 U/g biomasa en peso seco). entre otros) pueden degradar tales compuestos. tuvo la capacidad de producir la enzima lacasa. Cabe señalar que existen varias posibilidades de elección de la enzima para una buena obtención de hidrolizados de proteína como es su origen microbiano.5 días de incubación (1. Lo anterior se debe a su producción de enzimas ligninolíticas. Por sus efectos negativos a la salud humana. ya que su costo oscila entre 280 y 420 pesos por gramo de enzima. Sin embargo existen hongos deuteromicetos que pueden biotransformar HAP. Pero el uso de este tipo de enzimas encarece la recuperación de la proteína. cladosporioides.01) para la actividad específica de la enzima lacasa y presentó una correlación positiva (p>0. quien degradó sustancias húmicas en agua y una de las enzimas que estuvo involucrada fue la lacasa. Delvolase (Gist. 5. las cuales son extracelulares y poco específicas. mostró una actividad enzimática de lacasa máxima a los 3. especificidad del sustrato. PRODUCCIÓN DE LA ENZIMA LACASA POR EL HONGO CLADOSPORIUM CLADOSPORIOIDES EN PRESENCIA DE FENANTRENO El hongo deuteromiceto Cladosporium cladosporioides tuvo la capacidad de producir la enzima lacasa (EC:1.10. INTRODUCCIÓN Los hidrocarburos aromáticos policíclicos (HAP) se encuentran en suelo. contaminado con fluoranteno. Dentro de dichas enzimas se encuentra la lacasa (EC:1.0078 g/l). tipo de reacción catalizada. pH óptimo de actividad.10.2. así como la relación costo . naturaleza del centro catalítico. y observaron que hubo una reducción del 26% de antraceno (de 0. benzenodiol:oxígeno reductasa) quien reduce el oxígeno molecular a agua. sin embargo ninguna de las variables dependientes e independientes tuvo un efecto significativo en la remoción del fenantreno en el medio de cultivo.01 a 0.2. . Flavourzyme 500 MG y Kojizyme (Novo Nordisk). ya que son tóxicos y/o cancerígenos. Una cepa de C. Éste hongo. por mencionar algunas.3. fue inoculada en medio líquido sintético. como Cladosporium cladosporioides.Brocades).3.Hoy en día existen en el mercado enzimas de origen fúngico que se emplean para la obtención de hidrolizados de proteína como son: Bioproteasa LA450 (Gygyc Biocon). Alcalase 2.01). son de origen natural y antropogénico [1].rendimiento.0023 g/l) y 78% de fluorantreno (de 0. aire y agua. Hubo una remoción máxima de fenantreno de 54 % en el día 4 de incubación (de 172 a 125 mg/l).4L grado alimenticio.

cladosporioides. . en medio líquido.Existen pocos estudios sobre la intervención de la enzima lacasa en la degradación de HAP por el hongo C. cladosporioides. en presencia (172 mg/l) y ausencia de fenantreno. El objetivo de éste trabajo fue medir la actividad de la enzima lacasa producida por C. en medio líquido.

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