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EXTRACCIN DE ADN DE TEJIDOS VEGETALES

PROTOCOLO DE SHAWN CARLSON MATERIALES.

DE USO COMN: Agua mineral, sal, bicarbonato, champ, fruta o verdura, isopropanol (fro), azul de metileno, batidora o pasapur, vasos de precipitados grandes (500 1000 ml), centrfuga, cuchillos, probeta (500 ml), matraces (500 ml), pipeta (5 ml). PARA CADA GRUPO:
y 1 tubo de ensayo grande. y 2 tubos de ensayo pequeos (para centrfuga). y 1 pipeta de 10 ml. y 1 vaso de precipitados pequeo. y 1 varilla de vidrio. y 1 pipeta Pateur. MTODO. PROCESO DETALLES FUNCIN

Preparacin del tampn (comn 240 ml agua mineral + 3 g de sal + 10 g de El tampn contiene una para todos los grupos). bicarbonato + 10 ml de champ. concentracin muy alta de iones que permite romper las membranas de las clulas y del (Se prepar con anterioridad) Enfrar a 0 C. ncleo Preparcin del material Se trocean las verduras, se les aade un poco Al triturar las verduras lo que biolgico. de agua y a continuacin se trituran utilizando hacemos es romper las una batidora. Para triturarlo se dan tres pulsos membranas de muchas clulas de 10 segundos cada uno. con lo que liberamos su contenido Trituracin del material biolgico, (orgnulos, ncleos, protenas, mejor en fro. ADN, ARN ...) Si es posible hacerlo en fro. Mezcla del pur con el Se cogen 5 ml del triturado y se depositan en Al mezclar el pur con el tampn fro. el tubo de ensayo grande. A continuacin se tampn conseguimos que se le aaden 10 ml del tampn fro. rompan las membranas de las clulas y de los ncleos sin que se estropee el ADN que Se agita VIGOROSAMENTE durante 2 queremos obtener. minutos. Adems el detergente que lleva el tampn ayuda a terminar de romper las membranas de los ncleos celulares en los que se encuentra el ADN y adems elimina protenas que se encuentran protegiendo el ADN. El contenido del tubo de ensayo se separa en Con la centrifugacin se los dos tubos de ensayo pequeos, de separan los materiales ms manera que los dos tengan la misma masa. grandes, como clulas enteras, membranas, grandes orgnulos (se quedan en el fondo del tubo) A continuacin estos tubos se ponen en la

Centrifugacin 5.

centrfuga durante 5 min.

Recoger el sobrenadante.

Tras la centrifugacin se recoge el sobrenadante (con cuidado de no coger el precipitado) de cada uno de los tubos de ensayo; para ello nos ayudamos de una pipeta Pasteur. Este sobrenadante lo pondremos en el vaso de precipitados pequeo. Aadir 10 ml de isopropanol Se aaden en el vaso de precipitados sobre fro. nuestra muestra con mucho cuidado: para ello se va dejando caer el isopropanol sobre las paredes del vaso de precipitados.

de los materiales ms pequeos como protenas, pequeos orgnulos, ADN y ARN (que quedan en el lquido sobrenadante). Recoger la porcin en la que se encuentra el ADN (adems de otras sustancias como ARN, protenas y pequeos orgnulos).

Hace que el ADN precipite en la interfase propanol-agua, mientras que el resto de materiales se quedan en el pur.

PROCESO

DETALLES

FUNCIN

Recoger el ADN con una varilla Tras aadir el isopropanol en nuestra muestra Recoger el ADN (tambin nos de vidrio. han quedado dos fases, una superior llevamos el ARN). (contiene el isopropanol) y otra inferior. En los laboratorios de biologa Se introduce la varilla de vidrio en la interfase molecular se aadira una enzima entre el isopropanol y el resto de la muestra y que destruye el ARN de modo se va moviendo la varilla con cuidado de uno que slo obtuvisemos ADN. a otro lado durante 1 min. Entonces se saca la varilla y en ella tenemos pegado el ADN Aadir una gota de azul de El mtodo que hemos utilizado metileno al tubo de ensayo. para extraer al ADN no es todo lo eficiente que quisiramos, con lo que en la muestra todava queda ADN sin extraer. Al aadir el azul de metileno, en la interfase, se teirn las fibras de ADN que no hemos conseguido extraer.

NOTA: A pesar de que no es mucha la eficiencia del mtodo que hemos usado es posible utilizar el ADN obtenido para realizar otros experimentos. BIBLIOGRAFA. CARLSON, S. (1998). Deshilando el tejido de la vida. Investigacin y Ciencia. 266 , 84-85.