Activitatea antimicrobiana “in vitro”

Se determina activitatea antimicrobiana in vitro pentru cunoasterea :  cunoasterea sensibilitatii/rezistentei unei tulpini bacteriene la substantele antimicrobiene  concentratiilor de substanta antimicrobiana in lichide organice si tesuturi Determinarea sensibilitatii la antibiotice se poate efectua prin”  Metoda difuzimetrica  Metoda dilutiilor  Metoda Etest  Metode auromate CMI-concentratia minima inhibitorie reprezinta cea mai mica concentratie de substanta antibimicrobiana care inhiba dezvoltarea unei culturi microbiene CMB- concentratie minima bactericida- reprezinta cea mai mica concentratie de substanta antibimicrobiana care dostruge o cultura microbiena.

Antibiograma –metoda difuzimetrica (K Bauer)

Mediul “Muller Hinton Agar” Mediul “Muller Hinton Agar” cu 5% sange, pentru Steptococcus spp., Streptococcus pneumoniae “Haemophylus Test Medium” pentru Haemophylus spp. • Grosimea mediului în placi este critică: trebuie să fie de 4 mm. • se efectuează un inocul concentrat 0,5 pe scala Mc Farland. În eprubeta specială
pentru densitometru se repartizează aprox. 3 ml soluţie salină izotonă sterilă. Cu ansa 1

se prelevă 5 colonii bine individualizate din cultura de 18- 24 ore a bacteriei de cercetat. Se transferă coloniile în eprubetă omogenizând cu grijă masa bacteriană pentru a obţine o suspensie bacteriană cât mai omogenă. Concentratia bacteriană se etalonează la densitometru la citirea 0,5. Se ajustează adăugând după caz fie soluţie salină fie masă bacteriană. Din momentul etalonării plăcile trebuie inoculate în interval de 15 min.

• se imersează tamponul în suspensia bacteriană etalonată a bacteriei de testat. Se scurge
excesul de lichid prin rotirea fermă a tamponului pe pereţii eprubetei. Se descarcă tamponul pe toată suprafaţa plăcii în striuri paralele succesiv în 3 direcţii rotind placa cu câte 600. În final se parcurge cu vârful tamponului toată circumferinţa mediului. În acest mod inoculul este dispesat uniform.

• Sau se descarca inoculul pe suprafata placii, se roteste usor placa astfel inact sa se
inunde intreaga suprafat, se indeparteaza excesul de lichis

• placa însămanţată se lasă 3-5 min (niciodată mai mult de 15 min) pentru adsorbţia
inoculului.

• se depun discurile de antibiotice la distanţe de minimum 15 mm de marginea plăcii şi
30 mm între centrele a două discuri vecine folosind o pensă sau un dispenser automat. Pe o placă cu diametrul de 9 cm pot fi dispuse 5 discuri iar pe o placă cu diametrul de 15cm cel mult 12 discuri. Presează ferm cu pensa fiecare disc în parte pe suprafaţa mediului.

• se incubează imediat plăcile la 350 C pentru 16-18 ore • incubrea prelungita pana la 24 ore pentru :
oxacilina, vancomicina - staphylococcus spp vancomicina - enterococcus spp. Streptococcus spp Se măsoară cu rigla gradată în mm. diametrul zonelor de inhibitie completă, în lumină reflectată. În cazul mediilor transparente se măsoară pe spatele plăcilor, iar în cazul mediilor cu sânge pe suprafaţa agarului. Se evită la măsurare zonele eventual afectate de apropierea marginii plăcii sau

Citirea si interpretarea rezultatelor

2

interacţiunea între două discuri. Se vizează inhibiţia completă, făcând abstracţie de hemoliză pe mediile cu sânge şi de coloniile periferice, fine, vizibile doar la o scrutare atentă prin lupă a zonei. Coloniile mari din zona de inhibiţie trebuie identificate şi retestate: pot fi variante rezistente sau contaminanţi. Se vizează creşterea masivă făcând abstracţie de vălul invaziv format de Proteus şi de creşterea pulverulentă în zonele sulfamidei şi trimetoprimului. Diametrele zonelor de inhibiţie se raportează la tabelul interpretativ oferit de CLSI/2009, transformându- se în categorii de sensibilitate (sensibil, intermediar, rezistent).

3

4

dispenser pt antibiograma

5

6

E-TEST

7

8

Kirby-Bauer sensitivity plate to test the effectiveness of various antibiotics on the bacterial culture.

All images on this site are protected under U.S. copyright law. For licensing, contact us at 603.673.0999

9

Modul de desfasurare a lucrarii practice studentii primesc manuscrisul cu „Activitatea antimicrobiana in vitro “ Lp se desfasoara interactiv Fiecare student masoara diametrele antibiogarmelor, noteaza in caiet si stabileste folosind standardul CLSI/2009, S,I,R Fiecare student prinde imaginea la microscop si examineaza frotiuri

Bibliografie  Bacteriologie Medicala, Olga Dorobat, editura UTM, 2006  Clinical Microbiology Procedures Handbook, Henry D. Isenberg, American Society for Microbiology, 2004  Koneman's Color Atlas and Textbook of Diagnostic Microbiology , Washington C Winn, Stephen D. Allen, Gail L. Woods, William M. Janda, Paul C. Schreckenberger , editura Lippincott Williams & Wilkins, 2005 Manual of Clinical Microbiology , Patrick R. Murray , Ellen Jo Baron , Michael A. Pfaller , Fred C. Tenover , Robert H. Yolken, editura ASM, 2007 Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing”.M 100, S19 CLSI /2009 editata

10

Sign up to vote on this title
UsefulNot useful