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Cromatografa de Lquidos

M. en C. Elba Rojas Escudero.

Separacin

Para separar se emplean bsicamente tres alternativas:

Separaciones mecnicas Procesos cinticos y electrocinticos Equilibrios de distribucin entre dos fases

Cromatografa
Gas Lquido

Slido CGS

Lquido CGL

Slido CLS

Lquido CLL

Cromatografa
Gas Columna Lquido Plano

CLS

CLL

CFE

CII

CE

CCF CP

CPG

CFG

Proceso Cromatogrfico

La fase mvil fluye, arrastrando consigo los solutos Los solutos se reparten entre ambas fases

Fase mvil Muestra

Fase estacionaria

Muestra

Objetivos
Separacin Mezcla de compuestos

Cuantitativo Cualitativo Purificacin

Cromatografa

Fase Normal FE Polar FM No polar Fase Inversa FE No polar FM Polar

Elucin

La muestra se aplica al principio de la columna como una banda fina El eluyente tiene menor afinidad por la fase estacionaria que los solutos Los solutos avanzan por el sistema a velocidades diferentes, menores a la de la fase mvil Los solutos se separan en bandas que eluyen al final de la columna

Requisitos de la muestra

Presin de vapor baja Compuestos inicos Compuestos de peso molecular elevado Termolbil

Instrumentacin
Fase mvil Bomba de alta presin Gradiente de elucin

Muestra

Inyector

Columna Control de temperatura Detector Registrador

Fase mvil
Disolvente Hexano Isoctano ter isoproplico Cloruro de metileno Acetonitrilo Metanol o 0.00 0.01 0.22 0.32 0.50 0.73

Fase mvil

Disolventes grado cromatogrfico Agua de 18 m Baja viscosidad No voltil Miscibilidad Filtrada Sin oxgeno disuelto (degasificada) Solubilidad de los analitos Compatible con el detector

Cromatografa Fase Inversa

FE Slica qumicamente modificada con grupos no-polares: hidrocarburos saturados: C2 dimetil, C4 tetrametil, C8 octil, C18 octadecil FM Mezclas: acuosos / orgnicos H2O + (CH3OH, CH3CH2OH, CH3CN)

Fase estacionaria (columna)

Empaque Slica gel, C8, C18, Ciano, Amino, Resinas, Polmeros Carga de Carbn 5-20 % w/w Intervalo de pH = f (FE) Lmite de presin de trabajo Compatible con la fase mvil

Cromatografa Fase Inversa

Efecto solvofbico fuerte: Parte apolar de la molcula del soluto es mayor % C en la FE es mayor Polaridad de la FM es alta (mayor % de H2O)

Cromatografa Fase Inversa

Ventajas

Reproducibilidad en las separaciones Estabilidad de la FE (pH 7) Mezclas: acuosos/orgnicos H2O + (CH3OH, CH3CH2OH, CH3CN)

Gradiente de Elucin

Problema general de la elucin

Elucin

Instrumentacin
Fase mvil Bomba de alta presin Gradiente de elucin

Muestra

Inyector

Columna Control de temperatura Detector Registrador

Proceso Cromatogrfico

El lecho cromatogrfico puede ser abierto (placa) o cerrado (columna) La fase mvil fluye a lo largo del lecho cromatogrfico en contacto con la fase estacionaria

Separacin de los solutos

Ventajas

Anlisis de compuestos inicos, de alto peso molecular Diversidad de columnas y detectores Formacin de derivados pre-columna y post-columna Separaciones con control de pH Separaciones preparativas

Limitantes

Muestras relativamente limpias Solubilidad de la muestra en la fase mvil Viscosidad de la fase mvil Dimensiones de la columna Presin de trabajo Intervalo de pH Utilizar un filtro (pre-columna)

Equipo para la formacin de derivados


FM Inyector Reactor FE Detector

FM Inyector

FE Reactor Detector