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OBTECION DE CULTIVOS DE MICROORGANIMOS CULTIVOS. Un cultivo es el crecimiento de poblaciones microbianas de forma controlada en un medio artificial.

Un cultivo según su composición química puede ser: • Sintéticos: Tiene una composición química definida. Cuanto más simple es mejor purificamos los productos de la bacteria. • Complejos: su composición es no conocida, no sirve para purificar los compuestos pero en ellos puede crecer cualquier microorganismo. (Ej. caldo glucosado). Según el estado físico del medio los cultivos pueden ser: Líquido, sólido, semisólido. Depende de si el agar es más o menos gelatinoso. El agar es un compuesto formado por agarosa que es un polímero de galactosa al 70% y de agaropectina al 30%. Es sólido cuando existe el 1.5-2% de agar, semisólido (para estudios de mivilidad) cuando la concentración es de 0.15-04% y es líquido cuando hay menos del 0.15% de agar. APLICACIONES: • Medios enriquecidos: Añaden nutrientes a los cultivos donde el microorganismo exige mucho. (Ej. sangre para que crezca Hemofilus) • Medios selectivos: Añaden compuestos al agar que permiten el crecimiento selectivo de los microorganismos. Ej. Cristal violeta: sólo crecen Gram-; Maltosa: Sólo crecen los que tengan la enzima maltasa; Penicilina: sólo crecen eucariotas; etc.) • Medios diferenciales: Los microorganismos crecen de forma diferente, añadiendo al medio sustancias especiales (sangre). Se usa también viraje de colores. Ej. en sangre diferenciamos los organismos hemolíticos de los que no los son; en EMB (eosina azul de metileno vemos los que aprovechan lactosa de los que no; medio McConky (rojo neutro); en sales de pb vemos los productores de SH2 que dan un precipitado negro de lo que no lo producen.Un ejemplo típico es el caldo común, que es glucosa más extracto de carne, y peptona , se ajusta el pH, se añade NaOH, tamponamos, filtramos, espesamos y por último esterilizamos. SIEMBRA: TÉCNICAS E INSTRUMENTOS: .- INSTRUMENTOS: • Asa de siembra: picadura. • Asa de vidrio. • Pipeta Pasteur. .- TÉCNICAS: • De líquido a placa: Se puede hacer de dos formas: a) Estría en placa, Asa de cultivo asa de vidrio. b) Extensión en placa.• De líquido a tubo: Se puede hacer: a) En tubo inclinado. Aumenta la superficie. b) En Tubo no inclinado. Por picadura. c) Semisólido. Por picadura.• También se puede transferir a un cultivo puro. OBTENCIÓN DE CULTIVOS PUROS 1. Siembra en superficie. Extensión y estría. 2. Vertido en placa. Mezclando los microorganismos con agar fundido a 44ºC, y se echa luego sobre la placa. Los microorganismos crecen en la superficie y dentro 3. Técnicas de enriquecimiento. Aplicar el elemento adecuado (por ejemplo benzoato) al tubo de ensayo, se aíslan microorganismos que no se aíslan con los métodos anteriores y que están en pequeñas cantidades (como pueden ser aquellos que sólo usan benzoato). Se debe realizar varias veces para asegurarnos que tenemos un cultivo puro. (Otros ejemplos: elevada temperatura para termófilos; calentamiento a 80ºC para esporulados y termófilos.) 4. Dilución seriada. Sólo aíslo el microorganismo más abundante. (Lister con Streptococcus lactis hace diluciones, cada dilución la siembra en 20 tubos, cuando de un dilución dólo crece el 5% la probabilidad de que en ese tubo crezca 1 aólo tipo de microorganismo es del 4.8%, así estamos seguros de que sólo existe un tipo de microorganismo). 5. Micromanipulador: aislamos una sola célula utilizando este aparato. 6. Aislamiento de microorganismos anaerobios. Micromanipulados. Obtenemos los organismos anaerobios por una adición de agar a 44ºC, mezclamos y tapamos con parafina (aceite estéril). Eliminamos el O2 con agentes reductores (tioglicolato, añadimos un colorante REDOX para ver cuando se ha reducido), con una vela que consuma el oxígeno, usamos la jarra de anaerobios (sistema que produce CO2 + H2 y un catalizador que consume O2). Cuanto más sensibles son más precauciones tenemos que tomar. PARAFINA

CARACTERIZACIÓN DE CULTIVOS PUROS • Las colonias deben ser iguales en forma, tamaño y color. • Que no existan formas inhibidas. • Al microscopio deben tener un aspecto común. • Tiene que tener iguales propiedades tintoriales.

La liofilización es la sublimación a alto vacío de las muestras congeladas con rapidez. de la separación sobre el medio de cultivo.Se debe cubrir con parafina.). Es muy importante realizar el mayor número de estrías posible. El éxito del aislamiento. El método más usual es la siembra por estría sobre un medio de cultivo sólido adecuado dispuesto en una placa de petri. se evapora el agua. Una vez que se ha logrado el aislamiento es posible obtener la bacteria de interés en cultivo puro . Por ello el primer problema al estudiar una bacteria es su aislamiento del resto de los microorganismos presentes (enn una muestra patológica. Cada colonia bacteriana tiene unas características determinadas en cuanto a su forma. El aislamiento requiere un reducido inóculo de partida. En las estrías finales deberán aparecer colonias separadas unas de otras. congelamos las células.. tamaño. Obtención de cultivos puros Se trata de obtener el cultivo de un solo tipo microbiano en un medio de cultivo. Los tipos de bacterias presentes en la muestra original es visible como tipos diferentes de colonias. cultivadas en el laboratorio en cultivos puros (o axénicos).. Para ello. con lo cual la transferencia se puede hacer más tarde. elevación.. se obtiene una pequeña cantidad de masa bacteriana de una colonia separada en el aislamiento. Para ello se toma una pequeña cantidad de muestra con un asa de platino y se reparte sobre la superficie del medio de cultivo. …………………………… ……………………………. tamaño . En ocasiones el olor es también característico.• Deben ser bioquímicamente y fisiológicamente iguales. ……………………………….Una regla importante es no coger nunca de la primera colonia. Criterios para la diferenciación de colonias El aspecto de las colonias. por ejemplo en un tubo inclinado de agar nutritivo. A partir de colonias separadas suficientemente es posible obtener un cultivo puro de cada uno de los tipos de bacterias presentes en la muestra original. disminuye el metabolismo y tardan en envejecer.. de suelo. Para proteger las células y que no se formen cristales que las dañen se usa el glicerol 4. etc.. o rugosas.htm En la naturaleza.. permiten diferenciar diferentes bacterias. por lo que a continuación se realiza una descripción muy general. ……… Aislamiento Es la separación de un determinado microorganismo del resto de microorganismos que le acompañan. . 3. de alimentos. 2. aunque son propiedades generales muy influenciadas por las condiciones de cultivo. borde. En las primeras estrías aparecerán colonias confluentes o una masa continua de microorganismos.Debemos transferir periódicamente. cada célula viable origina una colonia visible resultado de sucesivas divisiones celulares. Los cultivos de estas mezclas se llaman por ello cultivos mixtos.. depende de la superficie sobre la que se ha distribuido la muestra. La incubación en condiciones adecuadas . el conocimiento de los microorganismos se consigue mediante el estudio de cepas aisladas. etc. Sobre el medio quedan separadas e inmovilizadas las células bacterianas. MANTENIMIENTO 1. Sin embargo. los microorganismos se encuentran formando poblaciones mixtas con otros tipos de microorganismos. En ocasiones el estudio molecular conduce a la caracterización de los microorganismos. La sucesiva disminución del tamaño de la población sobre el asa (por descarga sobre el medio de cultivo) al recorrer el medio de cultivo. ya que los tubos de agar se secan.com/microbiologia/loscultivos.elergonomista.Se disminuye la temperatura. aún en poblaciones mixtas. http://www. debe asegurar que finalmente algunas células queden suficientemente separadas (aisladas unas de otras) sobre la superficie. Sin embargo la identificación bacteriana y la caracterización completa solo es posible tras el aislamiento de la bacteria y la obtención de cultivos puros. Con ella se inocula un nuevo medio de cultivo haciendo estrías muy juntas. su coloración. etc. Otras aparecen con superficie pulverulenta. translucidas o transparentes. Tras la incubación en condiciones adecuadas. Algunas producen pigmentos fluorescentes cuando se iluminan con luz ultravioleta. Las colonias pueden ser opacas. …………… ……………………. de agua. otras son lisas. consistencia. o poseen anillos concéntricos.

1). mediante observación al microscopio. BORDE: Continuo. rojo ladrillo.mx/cbi/quimica/microbiologia/p12. gelatinosa.. fisiológicas. etc.. elevada. festoneado. TAMAÑO: Estimar el diámetro en mm.uam. etc. viscosa. amarillo. Obtenido el cultivo puro es conveniente comprobar su pureza mediante una tinción de Gram. etc. y pueden ser diferenciadas sobre estas bases. ESTRUCTURA INTERNA: Amorfa o granulosa. Una de las copias puede ser liofilizada para su conservación. etc.com/pages/practicas/bacteriologia/aislamiento Estudio de la morfología colonial INTRODUCCION Si se toma un asa bacteriológica cargada con una muestra que contenga bacterias y se van haciendo estrías de ésta sobre una placa de agar nutritivo de tal manera que el material se vaya “diluyendo” sobre la superficie (Fig. de los microorganismos que coexistían en la muestra original. Para estudiar las características físicas. rizoide. http://www. rugosa. Usar el asa bacteriológica para determinar la consistencia. La terminología mencionada a continuación sobre algunas de las características más constantes de una colonia bacteriana es muy útil: MICROBIOLOGIA APLICADA Manual de Laboratorio FORMA: Puntiforme.proporcionará un cultivo puro. circular. La morfología de las colonias es importante por lo anteriormente expuesto y debe familiarizarse el alumno con ella. 64. 8. un cultivo puro. ondulado. anaranjado.pdf . alargada. filamentoso. filamentosa. separados.2). cada una se habrá multiplicado muchas veces. Las colonias de cada especie bacteriana son diferentes ya sea en tamaño. etc. membranosa. 12. OPACIDAD: Transparente. umblicada. CONSISTENCIA: Dura. 32. etc. opaca. siendo el segundo paso la siembra de una porción de una colonia en un medio de cultivo en tubo. consistencia etc. http://www. después de cierto tiempo. etc.azc. SUPERFICIE: Lisa. pulvinada. formando sobre la superficie del medio un pequeño promontorio constituido por células bacterianas llamado Colonia. Puede repetirse el proceso con cada tipo de colonia. mucosa. Los cultivos puros de microorganismos son mantenidos en el laboratorio porresiembras (pase de un medio de cultivo a otro) sucesivas. químicas. (Fig. ya que se supone que es la descendencia de una sola célula y por tanto. de una bacteria. Es aconsejable hacer un segundo aislamiento antes de proceder a la obtención del cultivo puro. que se obtiene generalmente en unas 24-48 horas. 4. etc. puede usarse una de ellas para establecer el cultivo puro. ELEVACION: Aplanada. erosionado. COLOR: Según sea observado por la luz reflejada o por la luz transmitida. llegará un momento en que las bacterias depositadas en la estría estén bien separadas unas de otras.). verificando su pureza después de la incubación apropiada. Si todas las colonias de la segunda placa resultan idénticas. que varía según la especie bacteriana. 16. Cada colonia aislada está constituida de un solo tipo de bacterias. umbonada. color. Dependiendo del tiempo de generación.pomif. en anillos concéntricos. Se obtendrá una colección de cultivos puros. cerebriforme. puede ser de color blanco. reproduciéndose cada una en progresión geométrica (1. 12. irregular. lobulado. se necesita que ésta sea aislada en cultivo puro y el aislamiento en caja Petri es el primer paso para ello. 2. fusiforme. convexa. etc.

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