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Facultad de Ciencias Biológicas Departamento de Ciencias Biológicas BIO156 - 2010

Caries y Enfermedad periodontal

Clase 05 Enfermedad Periodontal

Dr. Mauricio Bittner O.

w.bittner@uandresbello.edu

Microbiología de la enfermedad periodontal
Encía Sana Gingivitis

Enfermedades de la encía. Gingivitis

Periodontitis
Gingivitis

Inducida por la placa

Dependiente sólo de la placa Modificada por factores sistémicos Modificada por medicamentos Modificada por la desnutrición De origen bacteriano específico De origen viral (herpes) De origen fúngico (eritema lineal) De origen genético (fibromatosis) Manifestaciones de enf. sistémicas Lesiones traumáticas

NO inducida por la placa

iii) Debe ser posible determinar la respuesta del hospedero frente a las bacterias blanco. agresiva) La distribución de la lesión (localizada. adulta) En asociación con desórdenes sistémicos o del desarrollo Enfermedad periodontal Sano Gingivitis Modificaciones a los postulados de Koch ? Periodontitis Socransky postuló las siguientes modificaciones para determinar los patógenos periodontales: i) La mayoría de las bacterias blanco deben estar asociados a la periodontitis. Destrucción temprana de colágeno. Enfermedad periodontal Se clasifican de acuerdo a: El grado de progresión de la enfermedad (crónica. Formación del saco periodontal. v) Debería ser determinado un único mecanismo de patogenicidad. Lesión establecida: Tiempo variable. generalizada) Grupo atareo (juvenil. iv) Si es posible. Predominan células plasmáticas. . Inflamación aguda Las células inflamatorias ocupan entre un 5% y 10% del tejido conjuntivo gingival Lesión temprana: Después de 7días de acumulación de placa. la patogenicidad debería ser demostrada en un modelo animal adecuado. ii) La eliminación de las bacterias blanco resulta en la detención de la progresión de la enfermedad. Predominan linfocitos y macrófagos.Desarrollo de la lesión periodontal Lesión inicial: Dentro de los primeros 4 días de acumulación de placa. Las células inflamatorias ocupan entre un 15% del tejido conjuntivo gingival.

Peptostreptococcus. C..Conformación bacteriana subgingival La placa supragingival contiene muchos compuestos bioactivos (ácidos orgánicos. compuestos asufrados. etc. Corynebacterium matruchotii) Se han descrito más de 100 especies presentes en la microflora subgingival que no son cultivables Se estima que existen unas 300 especies desconocidas Actinomyces spp. matruchotii . Zona donde existe una mayor mineralización de la placa: por precipitación de sales a pH alcalino. ya que se relaciona directamente con la placa supragingival. pero existen mayor proporción de anaerobios estrictos (Veillonella. Estos compuestos difunden hacia la superficie del epitelio gingival aumentando el flujo de fluido crevicular gingival y fluido inflamatorio del tejido periodontal. Asociada a la caries radicular. Presencia de grandes cantidades de bacterias con la capacidad de cristalización intracelular (Actinomyces spp.. Las bacterias proteolíticas de la placa se expanden. Este nuevo suministro de nutrientes modifica el ecosistema adyacente a la encía inflamada. Eubacterium y Fusobacterium). lo que acelera el daño tisular Conformación bacteriana subgingival Conformación bacteriana subgingival Existen más de 500 especies capaces de colonizar la placa subgingival Ribotipificación Conformación bacteriana subgingival La Placa Subgingival de puede dividir en tres: i) Adherida al diente: Predominan Streptococci orales y Actinomyces spp. enzimas proteolíticas PAMPs.

Microflora similar a la de la placa adherida al epitelio. Están asociados a la invasión del tejido conectivo. Progresión de la enfermedad Enzimas proteolíticas extracelulares: i) Pueden degradar proteínas de la matriz extracelular. Prevotella spp. No necesitan adherirse. Aggragatibacter actinomycetemcomitans. iii) En un comienzo la estrategia para determinar el o los agentes etiológicos consistía en comparar la composición microbiana de la placa subgingival entre sitios sanos. con el desarrollo de la biología molecular. Fusobacterium. ii) Pueden degradar inhibidores de proteinasas de la matriz del hospedero. etc.. ii) Posteriormente se determinó que microorganismos como bacterias eran responsables de la patología. iii) Pueden activar metaloproteinasas de la matriz del hospedero. Fusobacterium Capnocytophaga Progresión de la enfermedad i) Inicialmente la enfermedad periodontal se manejaba eliminando la placa bacteriana. Conformación bacteriana subgingival La Placa Subgingival de puede dividir en tres: iii) No adherida o flotante: Se dispone entre la placa adherida al diente y la adherida al epitelio. Principalmente a Gram negativos y bacilos móviles. v) Pueden alterar las defensas del hospedero: a) degradando receptores celulares b) degradando proteínas del complemento c) degradando anticuerpos y ciertas citoquinas . Esta adhesión bacteria/células se debe principalmente a la presencia de fimbrias específicas. Capnocytophaga spp. Porphyromonas. Compuesta principalmente por Gram negativos y bacilos móviles. tratamiento y estimación de riesgo futuro se basan en el seguimiento y cuantificación de factores de virulencia.. Inducen y aceleran el proceso inflamatorio. iv) En la actualidad.. Hoy en día es posible determinar el número de ciertos patógenos periodontales. Prevotella nigrescens / Prevotella intermedia.Conformación bacteriana subgingival La Placa Subgingival de puede dividir en tres: ii) Asociada al epitelio: No es bien conocida su composición. Fusobacterium spp. así como las propiedades de toxinas y enzimas destructoras de tejidos. Aggregatibacter. Porphyromonas gingivalis. Eikenella y Treponema denticola (hacia el fondo donde al Eh es más negativo). Selenomonas. gingivitis y periodontitis. sólo establecen uniones débiles. las metodologías de diagnóstico. iv) Pueden inducir citoquinas pro-inflamatorias involucradas en la destrucción tisular y reabsorción ósea. pero estaría constituida por especies con la capacidad de unirse a superficies blandas.

a C. rectus P. nucleatum F. Treponema denticola (2. consisus A. V. oralis Streptococcus spp. denticola C. polymorphum F. parvula A. ochracea C. noxia P.Cápsulas . nuc.201 pb) Identificación de Ag bacterianos y epítopos b) proteómica: análisis de proteínas de superficie o secretadas mediante electroforesis uni o bidimensionales. sanguis S. periodonticum E. nuc.Progresión de la enfermedad Identificación de Ag bacterianos y epítopos “Como los antígenos son usualmente proteínas asociadas a las superficies bacterianas una de las estrategias para identificarlas es caracterizar extractos de la superficies o proteínas secretadas de un determinado patógeno” Utilización de: a) genómica: secuenciación de genomas completos y estudios de la regulación genética de potenciales factores de virulencia. gordonii S. intermedia P. mitis S. nodatum S. sputigena C. gracilis S. corrodens C. intermedius C. S. gingivalis C.843. nuc. actinomycetemcomitans b . nigrescens M. Lipopolisacárido – Lípidos de ME – Fimbrias – Flagelo .etc. Tamaño Utilización de: Complejos microbianos en la Placa Subgingival Actinomyces spp. castellatus E. gingivalis T. vincentii F. forsythia T. showae Punto isoeléctrico A. actino. micros F. odontolyticus S.

Porphyromonas gingivalis 3.. Eubacterium nodatum. Fimbrias . Fusobacterium nucleatum.Complejos microbianos en la Placa Subgingival Según estudios epidemiológicos y en modelos animales 1.Tannerella forsythia (ex Bacteroides forsythus) 4. Leucotoxina. Campylobacter rectus. Cdt.. Inmóvil. Eikenella corrodens.. No formador de esporas. Micromonas micros y Streptococcus intermedius Microbiología de la Periodontitis Agresiva Aggregatibacter actinomycetemcomitans (Aa) Aggregatibacter actinomycetemcomitans Cocobacilo Gram negativo.Treponema denticola Gram negativo Capnofílico Bacterias Gram Negativas anaerobias estrictas Prevotella intermedia/nigrescens.. Anaerobio facultativo Microaerofílico y Capnofílico Lipopolisacárido (LPS).Aggregatibacter actinomycetemcomitans 2.

Aggregatibacter actinomycetemcomitans (Aa) Factores de adherencia: Proteína Aae i) Adherencia a células epiteliales Aggregatibacter actinomycetemcomitans (Aa) Factores de adherencia. Además anticuerpos específicos inhiben adhesión>>>Vacuna?! . invasión y evasión del sistema inmune: Proteína ApiA i) Adherencia a células epiteliales ii) Invasión de células epiteliales iii) Resistencia al suero* Proteína EmaA i) Adherencia a colágeno Polisacárido PGA (NAG) i) Autoagregación Aggregatibacter actinomycetemcomitans (Aa) Factores de adherencia e invasión: Fimbria flp-1 y operon tad i) Adherencia a células epiteliales ii) Adherencia a la película adquirida y superficies abióticas iii) Formación de Biopelículas iv) Invasión de células epiteliales mediante receptores específicos Aggregatibacter actinomycetemcomitans (Aa) Factores de adherencia y co-agregación: Operon pilABCD: Pili Tipo IV y competencia PilA unión a DNA Generan un alto título de anticuerpos.

b y c más prevalentes en Chile. activación de la vía alternativa del complemento. Destrucción de linfocitos vía apoptosis Destrucción de linfocitos vía formación de poros y necrosis Desgranulación de neutrófilos Liberación de MMP8 Desregulación de la respuesta inmune!!! Aggregatibacter actinomycetemcomitans (Aa) Factores que modulan el sistema inmune: Lipopolisacárido (LPS) Aggregatibacter actinomycetemcomitans (Aa) Factores que modulan el sistema inmune: Lipopolisacárido (LPS) Lípido A: activación de la vía clásica del complemento.Aggregatibacter actinomycetemcomitans (Aa) Factores que modulan el sistema inmune: Leucotoxina (LtxA) Proteína de 116 KDa anclada a la superficie del membrana externa de la bacteria y secretada (LFA-1: CD11a CD18) Aggregatibacter actinomycetemcomitans (Aa) Factores que modulan el sistema inmune: Lipopolisacárido (LPS) Serotipificación en base al Antígeno O: Mediante Anticuerpos y PCR: a – f. Citoquinas: IL-8 IL-1 TNFα (Factor de necrosis tumoral α) PGE2 (Prostaglandina E2) .

Aggregatibacter actinomycetemcomitans (Aa) Factores que modulan el sistema inmune: Proteasas Aggregatibacter actinomycetemcomitans (Aa) Factores que modulan el sistema inmune: Aa estimula TH1 A. IgA e IgM Desregulación de la respuesta inmune Degradación de fibrinógeno y colágeno RANKL Caries y Enfermedad periodontal Enfermedad periodontal Sano Gingivitis ? Periodontitis . actinomycetemcomitans posee: i) serina proteasas ii) proteasas que degradan IgG (todas).

fibronectina y laminina unión de la bacteria a células del hospedero. Promueve la destrucción de células epiteliales (mecanismo desconocido). lípidos Msp. a) Poseen efecto citotóxico sobre: Fibroblastos gingivales Linfocitos Células epiteliales Eritrocitos Treponema denticola Factores de adherencia e invasión: Flagelo Permite un movimiento tipo “atornillador”. formación de poros? ii) (64 KDa): se une a complejos de quimiotripsinas y a fibroblastos gingivales. penetrar el epitelio gingival y tejido conectivo. gelatinasas) y metaloproteinasas de la matriz (MMP-8 y MMP-9) El flagelo está compuesto por tres filamentos: FlaA (38 KDa) FlaB1 (35KDa) FlaB2 (35 KDa) FlaB3 (34 KDa) . Enzimas proteolíticas extracelulares.Microbiología de la periodontitis crónica Treponema denticola Espiroqueta Gram negativa. Móvil. Asacarolítico. Anaerobio estricto Lipopolisacárido. Esto le permite moverse en microambientes muy viscosos (FCG). b) Aumentan la respuesta inflamatoria: Promueven la desgranulación de PMN (colagenasas. Flagelo Treponema denticola Factores de adherencia e invasión: Proteína Msp (major surface protein) i) (53 KDa): se une a fibrinógeno.

Título elevado de anticuerpos en pacientes con periodontitis crónica. etc. sustancia P y angiotensinas I y II. iv) induce: apoptosis en células epiteliales. “La cistalisina hidroliza puentes disúlfuro. iii) H2S: es tóxico para glóbulos rojos y otras células presente en el epitelio (mal olor). Enzimas proteolíticas extracelulares. . Cistalisina Hidroliza proteínas y libera: i) piruvato: utilizado como fuente de energía ii) NH3: alcaliniza el medio. inactiva inmunoglobulinas. colágeno tipo IV. por lo tanto. ii) degrada: bradiquinina. Anaerobio estricto. " Tannerella forsythia ex Bacteroides forsythus Tannerella forsythia Factores de virulencia: Se sabe muy poco de sus factores de virulencia porque es muy difícil de cultivar en el laboratorio. Requiere ácido N-acetilmurámico Lipopolisacárido. Se uniría a CD14 y TLR-4?! y a fibrinógeno. etc. IgG e IgA.Treponema denticola Factores que modulan el sistema inmune: Enzimas proteolíticas extracelulares. citoquinas. Otros antígenos Proteína tipo GroEL BspA (proteína de superficie). Trepolisina o Dentilisina i) hidroliza: fibrinógeno. gingivalis (reacciones cruzadas en ensayos de ELISA) Enzimas proteolíticas extracelulares Enzimas tipo tripsina: Serina proteasas (70 KDa y (81 KDa) Cisteína proteasa hemolítica PrtH (48KDa) Bacilo fusiforme Gram negativo. iii) degrada: inhibidores de proteasas como α1-antitripsina. proteínas regulatorias de proteasas y de la respuesta inmune contribuye a la destrucción incontrolada del tejido periodontal y progresión de la enfermedad" Treponema denticola Factores que modulan el sistema inmune: Enzimas proteolíticas extracelulares. Sacarolítico. LPS Parecido al de P. transferrina. antitrombina III. “La habilidad de degradar proteínas de la matriz. gelatina. desregulando la respuesta inmune.

” . ii) Altos niveles séricos de IgA e IgG (isotipo IgG3). “La inmunización con péptidos fimbriales protege de la pérdida de hueso en un modelo murino. Fimbrias. VCAM-1. Selectinas P y E. K4. invasión y evasión del sistema inmune: Cápsula: Antígeno capsular K Serotipificación: K1. No móvil. IV y V Tipo I: adhesión e invasión de células epiteliales orales y fibroblastos La invasión estimularía la expresión de receptores ICAM-1. Asacarolítico Anaerobio obligado Cápsula. K6 y K(-) Cápsula de PG: i) aumenta la invasividad ii) inhibe la adherencia de los fibroblastos del ligamento periodontal al diente iii) resistencia a la fagocitosis iv) disminuye la activación de la vía alterna del complemento v) aumenta la hidrofobicidad de la bacteria Porphyromonas gingivalis (PG) Factores de adherencia e invasión Fimbrias i) Son altamente antigénicas tanto en pacientes con periodontitis agresiva como con periodontitis crónica. iii) Esta compuesta por fibrillas de una proteína de 43 KDa codificada por el gen fimA iv) De acuerdo a su “antigenicidad” son clasificadas en serotipos: Tipo I. II. III. K5.Porphyromonas gingivalis (PG) Porphyromonas gingivalis (PG) Cocobacilo Gram negativo. Porphyromonas gingivalis (PG) Factores de adherencia. Hemaglutininas. Lipopolisacárido. K2. Reclutamiento de linfocitos aumentando la inflamación. Enzimas proteolíticas extracelulares. K3.

Porphyromonas gingivalis (PG) Factores que modulan el sistema inmune: Lipopolisacárido (LPS) Es el antígeno de superficie más importante de PG. Además bloquea la inmunidad adquirida estimulando células de la línea linfoide (Th2) Porphyromonas gingivalis (PG) Factores que modulan el sistema inmune: Enzimas proteolíticas extracelulares PG posee una gran cantidad de proteasas extracelulares. pero las más importantes son las denominadas “gingipain (gingipainas)”. gingivalis induce la reabsorción ósea estimulando células mieloides (macrófagos) y no-mieloides (fibroblastos). que poseen el 80 % del total de la actividad proteolítica y el 100% de la actividad proteolítica tipo tripsina de esta bacteria. Cisteína Proteasas Gingipain R (arg-gingipain) Gingipain K (lys-gingipain) Gingipain R rgpA rgpB Gingipain K Porphyromonas gingivalis (PG) Factores que modulan el sistema inmune: Gingipain: (Modificaciones post-traduccionales) kgp . (IgG2) Porphyromonas gingivalis (PG) Factores que modulan el sistema inmune: Lipopolisacárido (LPS) Las modificaciones del LPS de PG son importantes en la respuesta del hospedero: IL-1β IL-6 Fibroblastos gingivales IL-8 IL-13 IL-5 IL-10 Linfocitos Th2 Antígeno O: tetrasacáridos fosforilados i) Rha-P (α1-3) Gal-P (α1-3) Glc-P (α1-4) GlcNAc-P ii) Glc-P (α1-4) Rha-P (α1-3) GalNAc-P (α1-3) Gal-P El LPS de P.

Hemaglutininas. Efecto sinérgico en la destrucción de tejido blando en un modelo murino. β-lactamasas . evasión de la opsonización Activación de Metaloproteinasas y fagocitosis) Degradación de los receptores de de la Matriz.Porphyromonas gingivalis (PG) Factores que modulan el sistema inmune: Gingipain: (Modificaciones post-traduccionales) Porphyromonas gingivalis (PG) Efecto sobre los componentes del complemento (reclutamiento de PMN. Agrava la pérdida de hueso alveolar e induce una mayor respuesta inflamatoria en comparación con la mono infección en modelo murino. reabsorción ósea y tendencia al sangramiento) Prevotella intermedia/nigrescens Fusobacterium nucleatum Fusobacterium nucleatum: subsp. Bacilo Gram negativo. gingivalis en células del hospedero. Posee el mayor poder antigénico Degradación de péptidos antibacterianos (evasión de la Des-regulación de la coagulación actividad antibacteriana) y las vías fibrinolíticas (liberación de trombina. MMP (aumentando PMN (evasión de la actividad actividad proteolítica del antibacteriana y fagocitosis) hospedero) Degradación de citoquinas (desregulación de la reacción inflamatoria local) Activación de la vía de la Calicreína/Quinina (generación de fluido crevicular gingival) Gingipains Estimulación de la síntesis de MMP por los fibroblastos gingivales (aumento local de la actividad proteolítica) HA: dominio hemaglutinina /adhesina. nucleatum mejora la unión de P. nucleatum subsp. vicentii subsp. Algunas especies presentan pigmentos negros Lipopolisacárido. Anaerobio estricto. polymorphum F.

además de flora anaeróbica total .AGAR COLUMBIA : Agar – caseína digerida pancreática – extracto de levadura – extracto de carne – almidón de maíz – cloruro de sodio – hemina – menadiona Especies de Porphyromonas y Prevotella..Hipótesis de la placa ecológica Inflamación reducida Respuesta Inflamatoria Acumulación de placa Inflamación aumentada FCG bajo Alto Eh Cambios Ambientales FCG alto Bajo Eh Predominio G(+) Anaerobios Facultativos Cambio Ecológico Predominio G(-) Anaerobios Obligados Caries y Enfermedad periodontal Reducción de la placa Los microorganismos son necesarios.AGAR BRUCELLA – BACTEROIDES : Agar – cristal violeta – sangre de caballo – eritrocitos humanos hemolizados Especies de Bacteroides (Tannerella) 4. Medios de cultivo 1. pero no suficientes para el desarrollo de la Enfermedad Periodontal.vancomicina Especies de Aggregatibacter (AA) 3.AGAR SANGRE HEMINA-MENADIONA: Tripticasa – sangre de cordero – hemina – menadiona (Factor X) Flora anaeróbica total del surco Monitoreo de las enfermedades infecciosas asociadas a la Placa Dental 2..AGAR TSBV: Tripticasa – levadura . El rol de la respuesta inflamatoria del hospedero es un determinante crítico de la susceptibilidad y severidad de la Enfermedad Periodontal..suero de Caballo – bacitracina ..

se detecta un sub – producto del metabolismo proteico que es el hidrógeno sulfurado. .Agar Sangre Hemina-Menadiona Agar TSBV Microflora subgingival total Microflora subgingival total Colonias de Porphyromonas gingivalis Aggregatibacter actinomycetemcomitans Catalasa (+) Monitoreo Periodontal Índice de hidrógeno sulfurado Como la microflora periodontal es eminentemente proteolítica. Test de BANA Detecta hidrólisis del sustrato N-BENZOIL-DL-ARGININA-2-NAFTILAMIDA (BANA) Esta hidrólisis la realizan sólo las bacterias que poseen TLE (proteasas tipo tripsina) Treponema denticola – Porphyromonas gingivalis – Tannerella forsythia Se realiza con tarjetas (perioscan) que contienen los reactivos en las cuales se coloca la muestra subgingival o de saco periodontal. Se utilizan trozos de papel filtro embebidos en sub acetato de plomo.