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UNIVERSIDADE FEDERAL DE LAVRAS DEPARTAMENTO DE CINCIAS BIOLGICAS SETOR DE FISIOLOGIA VEGETAL

ANLISE MINERAL E ESTUDO DA DEFICINCIA NUTRICIONAL DE PLANTAS EM CULTIVO HIDROPNICO

EMANUELA GARBIN MARTINAZZO SARA DOUSSEAU SUERLANI A. FERREIRA MOREIRA THIAGO CORREA DE SOUZA

2 Lavras, MG DEZEMBRO, 2007

EMANUELA GARBIN MARTINAZZO SARA DOUSSEAU SUERLANI A. FERREIRA MOREIRA THIAGO CORREA DE SOUZA

ANLISE MINERAL E ESTUDO DA DEFICINCIA NUTRICIONAL DE PLANTAS EM CULTIVO HIDROPNICO

Relatrio de aulas prticas, apresentado como requisito parcial, das exigncias da disciplina Laboratrio de Bioqumica e Metabolismo de Plantas DBI 581, do curso de Fisiologia Vegetal/Agronomia, nvel de Mestrado.

Prof Dr. Luiz dson Mota de Oliveira Dr Alessandro Carlos Mesquita

4 Lavras, MG DEZEMBRO, 2007

NDICE

1 INTRODUO.......................................................................................................................7 2 REFERENCIAL TERICO....................................................................................................9 2.1 NUTRIENTES MINERAIS..............................................................................................9 2.1.2 Classificao dos nutrientes ....................................................................................10 2.1.2 Formas de absoro e transporte de nutrientes........................................................12 2.1.3 Fatores que afetam a absoro de nutrientes............................................................18 2.1.3 Funes dos nutrientes.............................................................................................23 2.2 DEFICINCIAS NUTRICIONAIS................................................................................25 2.2.1 Tcnicas para o estudo da deficincia nutricional...................................................25 2.2.2 Sintomas de deficincia nutricional.........................................................................26 2.3 ANLISE MINERAL....................................................................................................35 2.3.1 Mtodos analticos para analise mineral..................................................................36 2.3.2 Preparo da amostra para anlise mineral..................................................................37 2.3.3 Extrao dos elementos minerais da amostra .........................................................38 2.3.3 Determinao do teor de nitrognio total (Mtodo de Kjeldahl) ............................39 2.3.4 Determinao do teor de alumnio (mtodo da Aluminona)....................................42 2.3.3 Espectroscopia de emisso atmica por chama ......................................................43 2.4.1 Tipos de sistema hidropnico..................................................................................47 2.4.2 Vantagens e desvantagens do sistema hidropnico.................................................51 2.5 SOLUES NUTRITIVAS...........................................................................................53 2.5.1 Utilizao das solues nutritivas............................................................................53 2.5.2 Formulaes de solues nutritivas.........................................................................53 2.5.2 Cuidados no preparo da soluo nutritiva................................................................55 3 OBJETIVOS..........................................................................................................................59 4 MATERIAL E MTODOS...................................................................................................60 4.1 ANLISE MINERAL....................................................................................................60 4.1.1 Extrao e determinao do teor de nitrognio total (Mtodo de Kjeldahl)............61 4.1.3 Extrao de alumnio, cobre, ferro, clcio e fsforo (Digesto Nitroperclrica).....62 4.1.4 Determinao do teor de cobre, ferro, clcio e fsforo............................................62 4.1.5 Determinao do teor de alumnio (Mtodo da Aluminona)...................................62 4.2 ESTUDO DAS DEFICINCIAS NUTRICIONAIS DE PLANTAS EM HIDROPONIA ...............................................................................................................................................63 5 RESULTADOS E DISCUSSO...........................................................................................70 5.1 ANLISE MINERAL....................................................................................................70 5.2 ESTUDO DAS DEFICINCIAS NUTRICIONAIS DE PLANTAS EM HIDROPONIA ...............................................................................................................................................71 5.2.1 Alteraes morfolgicas decorrentes da hipoxia.....................................................71 5.2.2 Alteraes morfolgicas decorrentes deficincia de nutrientes...............................72 a) Sintomas visuais da deficincia de ferro.......................................................................73 b) Sintomas visuais da deficincia de clcio.....................................................................73 c) Sintomas visuais da deficincia de nitrognio..................................................................74

d) Sintomas visuais da deficincia de potssio.........................................................................75 e) Sintomas visuais da deficincia de boro.......................................................................76 6 CONCLUSES.....................................................................................................................79 7 REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS...................................................................................80

1 INTRODUO

A anlise elementar da matria seca de uma planta mostra que cerca de 90% do total dos elementos correspondem ao C, H e O; e o restante, aos minerais. Esses elementos minerais presentes nos tecidos vegetais so oriundos de processos fotossintticos e podem ser classificados em essenciais e benficos. Um elemento para ser considerado essencial deve ser fundamental para que a planta complete o seu ciclo de vida e participar diretamente do metabolismo. Eles so denominados de nutrientes e podem ser classificados, conforme as quantidades exigidas pelas plantas, em macronutrientes e micronutrientes. Enquanto que os elementos benficos no so essenciais, mas favorecem o desenvolvimento de algumas plantas. Os nutrientes so absorvidos na forma inica, alguns como ctions e outros como nions. Para que um elemento chegue at o xilema ele precisa entrar na clula, seja ainda no tricoma radicular ou posteriormente, quando ele precisa vencer a barreira da endoderme. Sendo assim, cada nutrientes atravessa a membrana celular com a ajuda de protenas transportadoras especficas presentes nas membranas, denominadas canais, carreadores e bombas. Os fatores que mais influenciam a absoro de nutrientes em uma soluo, so o pH e a interao entre os elementos presentes no meio (inibio e sinergismo). O pH influencia na solubilidade dos nutrientes e conseqentemente na disponibilidade dos mesmos para as plantas. As interaes entre os nutrientes podem estar relacionados a fatores antagonsticos ou sinergsticos, sendo respectivamente, quando a presena de um nutriente causa a indisponibilizao do outro, e quando a presena de um nutriente aumenta ou facilita a absoro do outro.

8 Os nutrientes apresentam diversas funes nos vegetais e a sua deficincia causa uma serie de sintomas caractersticos para cada elemento. Quando os sintomas de deficincia aguda so relacionados a um nutriente em particular, uma pista importante a extenso com que ele pode ser reciclado de folhas mais velhas para as mais jovens. Se um nutriente mvel, o sintoma de sua deficincia ser evidenciado primeiramente em folhas mais velhas, enquanto que por outro lado, se for imvel, ser nas folhas jovens. Atravs da tcnica do nutriente faltante, podem-se obter informaes importantes, como a definio de quais nutrientes so deficientes, a importncia relativa dessa deficincia, a velocidade de reduo da fertilidade do solo e a referncia semiquantitativa da necessidade de adubao. Nesse tipo de tcnica se utiliza o cultivo em sistema hidropnico, com solues nutritivas. As solues nutritivas fornecem os nutrientes essenciais ao desenvolvimento das plantas. Porm, para cada espcie e condies de cultivo existe uma soluo nutritiva mais adequada, dependendo da exigncia nutricional. Esta exigncia refere-se s quantidades de nutrientes que uma cultura extrai da soluo nutritiva para atender suas necessidades, crescer e produzir adequadamente. Alguns fatores devem ser observados em um cultivo hidropnico, como o suprimento do nitrognio tanto na forma de amonio (NH4+) quanto de nitrato (NO3-), o fornecimento de ferro juntamente com compostos quelantes, a oxigenao, a manuteno do pH, volume e condutividade eltrica da soluo. Para obtermos informaes sobre aspectos relacionados com a produo agrcola, como o acmulo e a extrao de nutrientes pela colheita de diferentes rgos (razes, tubrculos, caule, gros e frutos), bem como para a diagnose foliar, efetua-se a anlise qumica do tecido vegetal, atravs de procedimentos especficos para cada nutriente.

2 REFERENCIAL TERICO

2.1 NUTRIENTES MINERAIS A anlise elementar da matria seca de uma planta mostra que cerca de 90% do total dos elementos correspondem ao C, O, H; o restante, aos minerais. O estudo do modo como as plantas obtm e utilizam os nutrientes minerais chamado de nutrio mineral. Essa rea de pesquisa de fundamental importncia tanto para a agricultura moderna quanto para a proteo ambiental. A aquisio de compostos qumicos por um organismo para suprir o seu metabolismo chamada de nutrio. O metabolismo compreende os processos pelos quais os compostos qumicos (nutrientes) so utilizados para o crescimento e manuteno dos vegetais. Os nutrientes podem, principalmente, ser convertidos em compostos estruturais ou ser usados como fonte de energia. As plantas, por serem organismos autotrficos, no dependem do fornecimento de compostos ricos em energia produzidos por outros organismos, como, ocorre aos heterotrficos. Elas sintetizam os compostos necessrios para o seu desenvolvimento atravs do processo fotossinttico, no qual utilizam minerais, gua e CO2, para produo de carboidratos e O2.

10 2.1.2 Classificao dos nutrientes

a) Elementos essenciais Um elemento para ser considerado essencial deve atender os trs critrios da essencialidade, propostos por Arnon & Stout (1939): a sua deficincia impede que a planta complete o seu ciclo de vida, alm de no poder ser substitudo por outro com propriedades similares (Ex: Na x K); ele deve participar diretamente no metabolismo da planta; seu benefcio no deve estar somente relacionado ao fato de melhorar as caractersticas do solo, melhorando o crescimento da microflora ou algum efeito similar. Sendo assim, os elementos qumicos considerados essenciais so denominados de nutrientes e podem ser classificados, conforme as quantidades exigidas pelas plantas, em macronutrientes e micronutrientes (figura 1). Essa classificao utilizada sob o ponto de vista da nutrio mineral de plantas e da fertilidade do solo.

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Figura 1: Quadro dos nveis adequados no tecido de elementos que podem ser requeridos pela planta. Fonte: TAIZ E ZEIGER (2004)

O contedo mineral dos tecidos vegetais varivel, dependendo do tipo de planta, das condies climticas durante o perodo de crescimento, da composio qumica do meio e da idade do tecido, entre outros fatores. b) Elementos benficos Alguns elementos no so essenciais, mas so classificados como benficos para o desenvolvimento de algumas plantas, como o Na, Si e Co. O sdio normalmente muito txico para os vegetais. No entanto ele importante para as espcies que possuem

12 fotossntese do tipo C4. interessante notar que boa parte das plantas halfitas (resistentes ao sdio) so de fotossntese C4. Sabe-se que nessas plantas, o sdio seja necessrio para a entrada de piruvato na clula do mesofilo onde ele regenera o fosfoenolpiruvato (PEP), que substrato da enzima PEPCase. Em plantas que acumulam silcio, este depositado como slica (SiO2) amorfa na parede celular. O Si contribui para as propriedades da parede celular, incluindo rigidez e elasticidade. Alm disso, o Si previne a herbivoria j que prejudica o aparelho bucal de insetos mastigadores. Plantas de arroz deficientes em Si so mais susceptveis ao acamamento e ao ataque de fungos. O cobalto necessrio para as bactrias que fixam nitrognio e, por conseguinte, imprescindvel para as leguminosas que esto fazendo simbiose com esses organismos. Contudo, plantas supridas com nitrognio no necessitam mais de cobalto. Embora no seja essencial para plantas, o cobalto faz parte da vitamina B12, a qual essencial para os animais. Nesse caso, interessante que as plantas acumulem esse elemento, principalmente aquelas empregadas em pastagens.

2.1.2 Formas de absoro e transporte de nutrientes Os nutrientes so absorvidos na forma inica, alguns como ctions (por ex., NH4+, K+, Ca2+, Mg2+, Fe2+, Fe3+), e outros como nions (por ex., NH3-, SO43-, H2PO4-, PO43-, Cl-). Para que um elemento chegue at o xilema ele precisa entrar na clula, seja ainda no tricoma radicular ou posteriormente, quando ele precisa vencer a barreira da endoderme. Sendo assim, cada nutrientes atravessa a membrana celular com a ajuda de protenas transportadoras especficas presentes nas membranas, denominadas canais, carreadores e bombas. NITROGNIO O N absorvido predominantemente pelas razes e nas formas de NO3- e NH4+, sendo que normalmente o NO3- a fonte preferencial, contudo, varia em funo da espcie da planta e de alguns fatores ambientais. Entre esses fatores destacam-se o pH , a temperatura e o teor de carboidratos nas razes. Geralmente, em pH prximo a neutro o

13 NH4+ o mais absorvido e cai medida que o pH se abaixa. Em temperaturas mais baixas o NH4+ absorvido mais rapidamente. Em presena de maior teor de carboidratos a absoro de NH4+ favorecida (talvez pelo maior suprimento de carbono e energia para assimilao do NH3-). A uria pode ser absorvida diretamente pelas razes e folhas das plantas, mas geralmente sua absoro menor que a do NO3-. O nitrognio absorvido pelas razes metabolizado nas razes ou transportado para a parte area atravs do xilema. A forma como o N transportado depende da forma absorvida (NO3- ou NH4+) e do metabolismo das razes. Muito do NH4+ absorvido , geralmente assimilado nas razes enquanto o NO3- metabolizado nas razes ou transportado para a parte area como tal. Para que o N seja incorporado aos compostos orgnicos ele deve estar reduzido a NH3-, pela ao de enzimas redutoras. O processo de reduo ocorre com a atuao de enzimas como a redutase do nitrato e redutase do nitrito. A reduo do nitrato uma reao enzimtica que pode ocorrer nas clulas das razes ou das folhas, sendo sua atividade maior nas folhas, embora isso dependa da espcie e do desenvolvimento da planta. A redutase do nitrato, uma flavo-proteina, enzima induzida pelo substrato e localiza-se no citoplasma, especialmente em clulas meristemticas, obtendo o NAD (P) H de clulas fotossintetizadoras atravs do ciclo de Calvin nas plantas C-3 (gliceraldedo fosfato). Nas clulas da raiz, o NADH provm da respirao. Assim nota-se uma estreita relao entre o metabolismo do nitrognio (nitrato) e a fotossntese e respirao. O NO3- produzido no se acumula nos tecidos vegetais, em condies aerbias. A enzima redutase do nitrato catalisa a converso do NO3- a NH4+. Nas folhas essa reduo ocorre nos cloroplastos e nas razes ela ocorre nos plastdeos. A incorporao do nitrognio, na forma de amnia, a compostos orgnicos tem sido descrita principalmente pelas vias: -Via desidrogenase glutmica (GDH) nos mitocondrias das folhas e razes formando cido glutmico; -Via glutamina sintetase (GS) / glutamato sintase (GOGAT) resultando em, cido glutmico nos cloroplastos.

14 A via GS/GOGAT preferencial para a introduo do NH4+ em aminocidos de plantas superiores. A GS tem alta afinidade pelo substrato e capaz de incorporar NH4+ em baixas concentraes. Quando NH4+ incorporado nas razes, convertido principalmente a amidas (glutamina e asparagina), as quais so transportadas para os demais rgos das plantas. A partir do cido glutmico so formados todos os demais aminocidos, pela ao de aminotransferases ou transaminases. FSFORO As razes das plantas so capazes de absorver fosfato de solues com concentraes muito baixas desse nion. Geralmente o contedo de fosfato nas clulas das razes e na seiva do xilema cerca de 100 a 1000 vezes maior que o da soluo do solo. Isso mostra que o fosfato absorvido pelas clulas da planta, contra um gradiente de concentrao muito grande e, portanto, a absoro ativa. A absoro de fosfato considerada como sendo feita por intermdio do co-transportador de H+. O pH no apoplasto no s controla a concentrao de H2PO4- , mas tambm o seu mecanismo de absoro. Assim, na mesma concentrao de H2PO4- no apoplasto (2,5 M), a absoro de fosfato no pH 4 trs vezes maior que no pH 6. A capacidade de absoro ativa de fosfato difere entre as espcies de plantas e pode mesmo diferir entre cultivares da mesma espcie. H dvidas se compostos orgnicos de fsforo so absorvidos pelas razes das plantas em grandes quantidades. Em plantas jovens de cevada, o fsforo presente em polifosfatos absorvido somente depois de hidrolisados para a forma de ortofosfato. O fosfato absorvido pelas plantas envolve-se rapidamente em processos metablicos, sendo que depois de apenas 10 minutos, cerca de 80% do fosfato absorvido j pode ser incorporado a compostos orgnicos. POTSSIO Uma caracterstica importante do potssio a alta taxa com que ele absorvido pelos tecidos das plantas. Essa rpida absoro de potssio dependente da permeabilidade ao potssio relativamente alta, das membranas das plantas, a qual provavelmente resulta de ionforos localizados na membrana, o que torna possvel sua difuso facilitada.

15 Os ionforos, como valinomicina e eniatina, podem funcionar como carregadores no transporte de ctions atravs da membrana. Do lado externo da membrana, o on hidroflico liga-se ao ionforo lipoflico, formando um complexo lipoflico. O complexo lipoflico difundi-se atravs da membrana , para libertar o on do lado interno da membrana, deixando o ionforo livre para difundir-se de volta para o lado externo da membrana e ento complexar um outro ction. A direo do transporte segue o gradiente eletroqumico de tal forma que tanto a importao como a exportao devem ser medidos por carregadores. Essa alta permeabilidade da membrana ao potssio, pode tambm conduzir uma considervel sada de potssio da clula, se a atividade metablica for suprimida. A reteno de potssio na clula depende principalmente do potencial negativo da mesma. Se esse potencial negativo diminudo, por exemplo, afetando-se a respirao, a capacidade de reteno de K+ tambm diminuda. Alm dessa absoro passiva de potssio, comandada pela atividade da ATPase, um processo de absoro ativa de potssio foi relatado e ocupa importante papel em baixas concentraes de potssio (< 0,5 mM) na soluo externa. CLCIO As formas inicas de Ca2+ existentes na soluo do solo, so absorvidas pelas plantas por interceptao radicular e fluxo de massa. So escassos os estudos sobre a assimilao desse nutriente. MAGNSIO As formas inicas de Mg2+, existentes na soluo do solo, so absorvidas pelas plantas por interceptao radicular e fluxo de massa. Assim como para ao clcio, so escassos os estudos sobre a assimilao desse nutriente. ENXOFRE O enxofre absorvido pelas plantas essencialmente na forma de ons sulfatos presentes na soluo do solo, atravs de processo ativo. O movimento desses ons para a superfcie radicular ocorre predominantemente por fluxo de massas. Alm de SO42- tem se

16 afirmado que as plantas podem absorver do solo aminocidos contendo enxofre e S elementar. Pelas folhas e frutos as plantas podem tambm absorver SO 2 da atmosfera, que passa atravs do estmato, sendo distribudo para a planta. O transporte das razes para a parte area ocorre pelo xilema, principalmente na forma inorgnica de SO42-. O sulfato para ser assimilado pela planta necessita ser reduzido a sulfeto, num mecanismo semelhante ao que ocorre com o nitrato. Seguramente duas etapas foram identificadas nesse processo: a ativao do sulfato e a reduo do sulfato. Um ponto importante a destacar praticamente a uniformidade dos autores em afirmar que a cistena o primeiro produto estvel na assimilao do sulfato. BORO Formas solveis de boro so facilmente disponveis para as plantas , que podem absorv-lo como cido brico no dissociado, bem como outras espcies presentes no meio. Acredita-se que a propriedade do cido brico de formar complexos com polissacardeos tem uma importante funo no processo passivo. Aparentemente, o boro em soluo move-se para as razes atravs do fluxo de gua, at que ocorra um equilbrio entre os nveis do elemento nas razes e na soluo. Devido a esta absoro passiva, quantidades txicas so absorvidas pelas plantas quando o nvel do boro na soluo alto. CLORO O cloro absorvido pelas razes e pelas folhas na forma Cl- e tem grande mobilidade na planta. COBRE O cobre absorvido com Cu2+ e Cu-quelato e a concentrao do mesmo nas plantas baixa, geralmente entre 2 a 20 mg/kg matria seca. A sua absoro parece ocorrer por processo ativo e existem evidncias de que este elemento inibe o fortemente a absoro do zinco e vice-versa.

17 O cobre tem forte afinidade com o tomo de nitrognio do grupo amino e parece que compostos nitrogenados solveis, como os aminocidos, atuam como carregadores deste nutriente no xilema e no floema. Uma quantidade considervel do cobre presente nos tecidos parece estar ligada plastocianina e a alguma frao protica. H tambm uma tendncia do acmulo do elemento em rgos reprodutivos das plantas, embora isto varie entre as cultivares. FERRO A absoro de ferro pelas plantas metabolicamente controlada e ele pode ser absorvido como Fe3+ , Fe2+ e Fequelato. A capacidade das razes em reduzir Fe3+ para Fe2+ parece ser fundamental na absoro deste ction por muitas plantas. aceito que o ferro preciso ser reduzido antes de entrar nas clulas, sendo que no espao livre aparente esse elemento precisa estar presente na forma inica ou como quelato. O Fe3+ quelato reduzido muito mais rapidamente do que o FeCl3. A velocidade de reduo do ferro depende do pH, sendo maior em pH baixo. Em exsudados do xilema o ferro parece ocorrer na forma no quelatizada, embora seu transporte seja controlado por citrato. Em tecidos de plantas, formas mveis deste elemento tem sido identificadas como citratos e ferrodoxinas solveis. Tanto a absoro quanto ao transporte deste elemento em plantas so fortemente afetados por fatores da planta e ambientais, tais como pH e concentrao de clcio e fsforo. MANGANS Em todos os trabalhos sobre absoro e distribuio de mangans nas plantas tem sido encontradas amplas evidencias de que a sua absoro controlada metabolicamente, aparentemente de uma forma similar a aquele que ocorre para outros ons como Mg2+ e Ca2+. Entretanto, a absoro passiva desde elemento tambm pode ocorrer, principalmente quando o metal encontra-se em nveis elevados na soluo. O mangans parece ser facilmente absorvido pelas plantas quando ocorre na forma solvel no solo, existindo uma relao direta entre o teor solvel do elemento no solo e a

18 concentrao na planta. Por outro lado, existe uma correlao de mangans nas plantas e o aumento do pH e uma correlao positiva com a matria orgnica. MOLIBDNIO O molibdnio o micronutriente exigido em menor quantidade pelas plantas e tambm o que ocorre em menor concentraes nos solos. Ele absorvido como molibdato e sua absoro proporcional a sua concentrao na soluo do solo, que pode ser reduzida pelo efeito competitivo do SO24-. Embora no existam evidncias diretas, acredita-se que o molibdnio seja absorvido metabolicamente. ZINCO Formas solveis de zinco so prontamente absorvidas e se tem encontrado uma correlao linear entre absoro pelas plantas e concentrao do nutriente no substrato. A velocidade de absoro do zinco difere grandemente entre as espcies e depende do meio de cultivo. A composio da soluo de nutrientes, particularmente a presena de clcio, de grande importncia. No existe um consenso na literatura se a absoro do zinco ocorre de forma ativa ou passiva. Alguns autores sugerem que a absoro do metablica. A forma em que o zinco absorvido pelas razes tambm no bem conhecida. Existe, entretanto, uma concordncia de que a forma predominante absorvida a de Zn2+, podendo tambm o ser na de Zn - quelato.

2.1.3 Fatores que afetam a absoro de nutrientes Os fatores que mais influenciam a absoro de nutrientes em uma soluo, so o pH e a interao entre os elementos presentes no meio (inibio e sinergismo). a) pH da soluo O pH influencia na solubilidade dos nutrientes e conseqentemente na disponibilidade dos mesmos para as plantas (Figura 2). O ideal chegar-se a um valor

19 intermedirio de pH onde todos os nutrientes estejam disponveis, sendo o valor geralmente recomendado, entre 5,5 a 6,5.

Figura 2 Relao entre o pH da soluo e a disponibilidade de diversos nutrientes. Adaptado de Malavolta et al. (1989).

Em pH 7,0 todos os macronutrientes esto disponveis para as plantas, mas o zinco, o cobre, o mangans e o ferro, ficam insolveis, pois precipitam na forma de hidrxidos. Por outro lado, em pH cido, devido a uma maior concentrao de hidrognio, esses micronutrientes ficam na forma reduzida, se tornando mais solveis e portanto, mais disponveis s planta, podendo levar a fitotoxidez. Quando presentes juntos em soluo, o molibdnio tende a ficar adsorvido ao alumnio ou ao ferro, portanto, se elevar o pH, sua disponibilidade aumentada devido a precipitao do ferro e do alumnio, na forma de hidrxidos. A precipitao do alumnio tambm interessante, pois para muitas plantas, esse elemento txico. Se considerarmos as plantas se desenvolvendo em um substrato com cargas, o pH da soluo afeta a disponibilidade dos nutrientes, no s pelo efeito na precipitao, mas como tambm na capacidade de troca de ctions (Figura 3).

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Figura 3 Princpio da troca de catinica na superfcie de uma partcula de solo.

De acordo com o princpio da troca catinica na superfcie de uma partcula de solo, os ctions se mantm ligados superfcie das partculas, porque a superfcie carregada negativamente. A adio de um ction com o potssio (K +), pode deslocar outro ction como o clcio (Ca2+), de sua ligao na superfcie da partcula de solo e torn-la disponvel para a absoro pelas razes. Nos solos brasileiros h o predomnio de cargas dependentes de pH, como a caulinita e xidos de ferro e alumnio. Minerais que desenvolvem cargas independentes de pH (cargas permanentes), como montmorilonita, ilita e vermiculita (substituio isomrfica) so presentes em solos brasileiros em baixa concentrao.

b) Efeitos interinicos Como a soluo do solo apresenta uma gama altamente heterognea de ons, a presena de um pode modificar a velocidade de absoro de outro, devido s interaes entre os nutrientes. Sendo assim, interaes entre nutrientes a influncia ou ao recproca de um elemento (nutriente) sobre o outro, relativa ao crescimento das plantas, ou seja, a resposta diferencial de um nutriente em combinao com vrios nveis (doses), de um segundo elemento, aplicado simultaneamente (Olsen, 1972).

21 Segundo Malavolta (1987), os tipos de interaes entre nutrientes, que afetam a sua absoro, esto relacionados a fatores antagonsticos e sinergsticos. Antagonismo quando a presena de um nutriente causa a indisponibilizao do outro, apesar deste estar presente em quantidade suficiente no solo. Por outro lado, sinergismo quando a presena de um nutriente aumenta ou facilita a absoro do outro. A indisponibilizao de um nutriente por outro pode ser causada diretamente pela sua combinao e precipitao na soluo do solo, ou pela inibio no stio de absoro do on. Esse tipo de inibio est relacionado com os mecanismos de absoro e pode ser competitiva ou no. Inibio competitiva quando a diminuio na absoro de um nutriente causada pela combinao de outro com um stio ativo do carregador (competio pelo carregador transportador para dentro da planta). Pode ser contornada aumentando a concentrao do nutriente. Por outro lado, na no-competitiva, a diminuio na absoro causada pela combinao do elemento com um stio no-ativo do carregador, que o torna incapaz de se ligar ao nutriente para promover a absoro. Nesse caso, a concentrao do nutriente no afeta sua ocorrncia. Na figura 2 est apresentado os casos mais comuns de efeitos de um on sobre a absoro de outro.

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Figura 4: quadro de Exemplos de efeitos interinicos.

Relaes entre macronutrientes: NK O potssio afeta a absoro do nitrato e sua reduo nos tecidos vegetais. No tecido do trigo por exemplo, teores adequados de potssio determinam a atividade da enzima sintetase glutamina. De uma forma geral, o potssio estimula a sntese protica nas folhas. Mg P Esta interao um caso de sinergismo: O magnsio co-fator de enzimas ligadas ao metabolismo do fsforo na planta, o mecanismo no totalmente conhecido, mas h dados empricos mostrando esta interao positiva. Ca, Mg e K Trata-se de uma interao eletrosttica: os Ctions bivalentes (Ca e Mg) so atrados com mais fora pelas partculas do solo. A nica forma de se contrapor este efeito

23 aumentando a concentrao de K. Por outro lado, excesso de Ca e/ou Mg no solo via de regra dificultam a absoro do K Castro & Menengueli (1989). Relaes entre macro e micronutriente P Mo Evidencias indicam um sinergismo entre P e Mo. Em princpio o P afeta a liberao do Mo das clulas das razes para o sistema de translocao na planta (Olsen, 1972). B Ca Estudos mostram interrelao positiva, inclusive estabelecendo uma relao tima, que seria de 500:1 no caso da soja. A adio de Ca previne o aparecimento de efeitos txicos do B (Olsen, 1972). Por outro lado, excesso de calcrio (ou carbonatos livres no solo) levam a adsoro do B, podendo levar a deficincia (Kabata-Pendias & Pendias, 1984). P Zn O antagonismo entre P e Zn, normalmente provocado por altas doses de fertilizantes fosfatados, conhecida desde 1936 e seu mecanismo pouco esclarecido. A soluo para o problema simplesmente adicionar Zn na adubao (Olsen, 1972). S Mo O enxofre dificulta a absoro do Mo pelas plantas. Devemos ter cuidado ao utilizar fertilizantes com altos teores de S ou mesmo ao aplicarmos gesso agrcola, principalmente se ele tiver histrico de deficincia de Mo.

2.1.3 Funes dos nutrientes Segundo alguns pesquisadores, a classificao dos nutrientes em macro e micro difcil de ser justificada do ponto de vista fisiolgico. Sendo assim, Menguel & Kirkby (1987), propuseram uma classificao, na qual divide os nutrientes em quatro grupos

24 bsicos, que leva em considerao os processos bioqumicos e as funes fisiolgicas nas plantas (Tabela 2).

O primeiro grupo compreende os elementos essenciais que fazem parte dos compostos de carbono e assimilados por meio de reaes bioqumicas, envolvendo oxidoreduo. O segundo grupo constitui-se dos elementos que so importantes em reaes de armazenagem de energia e na manuteno da integridade estrutural. Esses compostos esto comumente presentes em tecidos na forma de fosfatos, boratos e steres de silicatos, em que o grupo elementar est ligado a hidroxila de uma molcula orgnica. No terceiro grupo esto presentes nos tecidos na forma inica livre ou ligados a substancias tais como cidos pcticos, presentes na parede celular. Esses elementos so fundamentais como co-fatores enzimticos e na manuteno do potencial osmtico. J no quarto grupo, perfazem os nutrientes que desempenham importantes funes em reaes envolvendo transporte de eltrons.

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2.2 DEFICINCIAS NUTRICIONAIS

Nas condies brasileiras Malavolta et al. (1989), relatam que as deficincias de N, P, K, S, B e Zn , so mais freqentes, em geral devido pobreza de matria orgnica, baixa fertilidade e acidez elevada. Contudo, caractersticas distintas podem ser observadas no que diz respeito as exigncias de nutrientes pelas diferentes espcies. Essas variaes de estado nutricional podem ser explicadas pelos efeitos competitivos, antagnicos ou sinergsticos em funo da presena ou no de cada nutriente na fertilizao (Mengel & Kirkby, 1987). A limitao pela deficincia de um nutriente modifica o estado inico interno, o metabolismo e a morfologia externa das plantas (parte area e radicular), influenciando tambm na absoro dos nutrientes (Malavolta et al., 1989).

2.2.1 Tcnicas para o estudo da deficincia nutricional

Demonstrar que um elemento essencial exige que as plantas sejam cultivadas sob condies experimentais, nas quais apenas o elemento que est sob investigao esteja ausente. Um dos grandes problemas para a utilizao de espcies nativas em plantios comerciais o escasso conhecimento acerca de seu metabolismo, principalmente no que se refere as suas exigncias nutricionais. Nesse contexto, a avaliao de exigncias nutricionais de plantas pode envolver aspectos qualitativos ou quantitativos. Como passo inicial est a avaliao de carter qualitativo, que fornece subsdios para estudos quantitativo, e constitui-se numa ferramenta simples e eficiente, que utiliza comumente a tcnica do elemento faltante. A tcnica do nutriente faltante simples e segura para a identificao de deficincias nutricionais. Ela envolve o crescimento de plantas sob condies de campo ou de casa-de-vegetao, em que testado um tratamento completo (com todos os nutrientes

26 necessrios em doses adequadas), e uma srie de tratamentos incompletos, nos quais feita a omisso de um nutriente de cada vez. De acordo com Braga (1983), para evitar que o resultado seja influenciado pela deficincia de outros nutrientes, nos tratamentos com elementos faltantes, so adicionadas fontes dos demais nutrientes em quantidades no limitantes e nem txicas. O mesmo cuidado deve-se ter em relao quantidade do elemento estudado. Sanchez & Salinas (1981) consideram como deficincia severa quando a produo de matria seca cai a 40% a menos do que o tratamento completo. Por meio da tcnica do nutriente faltante, podem-se obter informaes importantes, como a definio de quais nutrientes so deficientes, a importncia relativa dessa deficincia, a velocidade de reduo da fertilidade do solo (Chaminade, 1972) e a referncia semiquantitativa da necessidade de adubao (Malavolta, 1980).

2.2.2 Sintomas de deficincia nutricional

Os sintomas de deficincia nutricional em plantas so a expresso de distrbios metablicos resultantes do suprimento insuficiente de um elemento essencial. Tais distrbios esto relacionados com as funes (Tabela 2), desempenhadas por esses elementos no metabolismo normal da planta. Sendo assim os sintomas de deficincias sero tratados em cada um dos quatro grupos de funes. Embora cada elemento essencial participe de diversas reaes metablicas diferentes, geralmente eles apresentam funo estrutural ou regulatria. Essa forma, uma explicao para os macronutrientes serem requeridos em quantidades elevadas o fato deles fazerem parte de molculas essenciais para o vegetal, ou seja, possuem um papel estrutural. Por outro lado, os micronutrientes esto mais relacionados ativao de certas enzimas, sendo esse um papel regulatrio. Quando os sintomas de deficincia aguda so relacionados a um nutriente em particular, uma pista importante a extenso com que ele pode ser reciclado de folhas mais velhas para as mais jovens. Sendo assim, alguns elementos essencial so mveis e outros imveis (Tabela 3). Se um nutriente mvel, o sintoma de sua deficincia ser evidenciado

27 primeiramente em folhas mais velhas, enquanto que por outro lado, se for imvel, ser nas folhas jovens.
Tabela 2: Elementos minerais classificados com base em suas mobilidades dentro da planta e suas tendncias de translocao durante deficincia

Moveis Nitrognio Potssio Magnsio Fsforo Cloro Sdio Zinco Molibdnio

Imveis Clcio Enxofre Ferro Boro Cobre

a) Deficincias de nutrientes minerais do Grupo 1: integram compostos de carbono Este primeiro grupo consiste de nitrognio e enxofre. A disponibilidade de nitrognio em solos limita a produtividade das plantas na maioria dos ecossistemas naturais e agrcolas. Por outro lado, os solos geralmente contm enxofre em excesso. No entanto, nitrognio e enxofre tm em comum a propriedade de que seus estados de oxidaoreduo variam amplamente. Algumas das reaes mais intensas energeticamente na vida convertem formas inorgnicas altamente oxidadas, absorvidas do solo, em formas altamente reduzidas, encontradas em compostos orgnicos como aminocidos. NITROGNIO O nitrognio o elemento mineral que as plantas exigem em maiores quantidades. Ele serve como constituinte de muitos componentes da clula vegetal, incluindo aminocidos e cidos nuclicos Portanto, a deficincia de nitrognio rapidamente inibe o crescimento vegetal. Se tal deficincia persiste, a maioria das espcies mostra clorose (amarelecimento das folhas), sobretudo nas folhas mais velhas, prximas base da planta. Sob severa deficincia de nitrognio, essas folhas tornam-se completamente amarelas ou castanhas) e caem da planta. Folhas mais jovens podem no mostrar inicialmente tais

28 sintomas, pois possvel que o nitrognio seja mobilizado a partir das folhas mais velhas. Assim, uma planta deficiente em nitrognio pode ter folhas superiores verde claras e folhas inferiores amarelas ou castanhas. Quando a deficincia de nitrognio desenvolve-se lentamente, possvel que as plantas tenham caules pronunciadamente delgados e comumente lenhosos. Esse carter lenhoso pode ser devido a um acmulo dos carboidratos em excesso, que no podem ser usados na sntese de aminocidos ou de outros compostos nitrogenados. Os carboidratos no utilizados no metabolismo do nitrognio podem, entretanto, ser usados na sntese de antocianina, levando ao acmulo desse pigmento. Essa condio revela-se pela colorao arroxeada de folhas, pecolos e caules de algumas plantas deficientes em nitrognio, como tomate e algumas variedades de milho. ENXOFRE O enxofre encontrado em dois aminocidos e constituinte de vrias coenzimas, alm de vitaminas essenciais ao metabolismo. Muitos dos sintomas da deficincia de enxofre so similares aos da deficincia de nitrognio, incluindo clorose, reduo do crescimento e acmulo de antocianinas. Tal similaridade no surpreende, pois o enxofre e o nitrognio so constituintes de protenas. Entretanto, a clorose causada pela deficincia de enxofre aparece, em geral, inicialmente em folhas jovens e maduras, em vez de em folhas velhas, como na deficincia de nitrognio, porque ao contrrio do nitrognio, o enxofre no remobilizado com facilidade para as folhas jovens, na maioria das espcies. No entanto em muitas espcies vegetais, a clorose por falta de enxofre pode ocorrer simultaneamente em todas as folhas ou at mesmo iniciar nas folhas mais velhas. b) Deficincia de nutrientes minerais do Grupo 2: importantes na armazenagem de energia ou na integridade estrutural Este grupo consiste de fsforo, silcio e boro. Fsforo e silcio so encontrados em concentraes no tecido vegetal que lhes garantem a classificao como macronutrientes, enquanto o boro muito menos abundante e considerado um micronutriente. Esses elementos esto usualmente presentes nas plantas em ligaes steres a uma molcula e carbono.

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FSFORO O fsforo (como fosfato, P04-3) um componente integral de compostos importantes das clulas vegetais, incluindo fosfato-acares, intermedirios da respirao e fotossntese, bem como os fosfolipdeos que compem as membranas vegetais. tambm componente de nucleotdeos utilizados no metabolismo energtico das plantas (como ATP) e no DNA e RNA. Sintomas caractersticos da deficincia de fsforo incluem crescimento reduzido em plantas jovens e uma colorao verde escura das folhas, as quais podem encontrar-se malformadas e conter pequenas manchas de tecido morto, chamadas de manchas necrticas. Da mesma forma que na deficincia de nitrognio, algumas espcies podem produzir antocianinas em excesso, conferindo s folhas uma colorao levemente arroxeada. Em comparao com a deficincia de nitrognio, a colorao prpura gerada pela deficincia de fsforo no est associada clorose. Na verdade, as folhas podem apresentar uma colorao roxa fortemente esverdeada. Sintomas adicionais da deficincia de fsforo incluem a produo de caules delgados (mas no lenhosos) e a morte das folhas mais velhas. A maturao da planta tambm pode ser retardada. SILCIO Algumas espcies acumulam quantidades substanciais de silicio em seus tecidos e apresentam melhoria no crescimento e na fertilidade, quando supridas com quantidades adequadas de silcio (Epstein, 1999). Plantas deficientes em silcio so mais suscetveis ao acamamento (tombamento) e infeco fngica. O silcio depositado principalmente no retculo endoplasmtico, paredes celulares e espaos intercelulares, como slica amorfa hidratada (Si02.nH2O). Ele tambm forma complexos com polifenis e, assim, serve como alternativa lignina no reforo das paredes celulares. Alm disso, o silcio pode aliviar a toxicidade de muitos metais pesados.

BORO

30 Embora o papel preciso do boro no metabolismo vegetal no seja claro, evidncias sugerem que ele desempenha funes no alongamento celular, sntese de cidos nuclicos, respostas hormonais e funcionamento de membranas (Shelp, 1993). Plantas deficientes em boro podem exibir uma ampla variedade de sintomas, dependendo da espcie e da idade da planta. Um sintoma caracterstico a necrose preta de folhas jovens e gemas terminais. A necrose das folhas jovens ocorre principalmente na base da lmina foliar. Os caules ficam anormalmente rgidos e quebradios. A dominncia apical pode ser perdida, tornando a planta altamente ramificada; entretanto, os pices terminais dos ramos logo se tomam necrticos devido inibio da diviso celular. Estruturas como frutos, razes carnosas e tubrculos podem exibir necrose ou anormalidades relacionadas desintegrao de tecidos internos. c) Deficincias de nutrientes do Grupo 3: permanecem na forma inica. Este grupo inclui alguns dos elementos minerais mais familiares: os macronutrientes potssio, clcio e magnsio e os micronutrientes cloro, mangans e sdio. Eles podem ser encontrados em soluo no citosol ou vacolos ou podem estar ligados eletrostaticamente ou como ligantes a compostos com carbono. POTSSIO O potssio, presente nas plantas como o ction K+ desempenha um importante papel na regulao do potencial osmtico das clulas vegetais. Ele tambm ativa muitas enzimas envolvidas na respirao e na fotossntese. O primeiro sintoma visvel da deficincia de potssio clorose em manchas ou marginal, que, ento, evolui para necrose, principalmente nos pices foliares, nas margens e entre nervuras. Em muitas monocotiledneas, essas leses necrticas podem formar-se inicialmente nos pices foliares e margens e, ento, estender-se em direo base. Como o potssio pode ser remobilizado para folhas mais jovens, esses sintomas aparecem inicialmente nas folhas mais maduras da base da planta. As folhas podem tambm curvar-se e secar. Os caules de plantas deficientes em potssio podem ser delgados e fracos, com regies internodais anormalmente curtas. Em milho deficiente em potssio, as razes podem ter uma suscetibilidade aumentada a fungos da podrido radicular presentes no solo, e essa suscetibilidade, juntamente com os

31 efeitos caulinares, resulta em uma maior tendncia de tombamento da planta no solo (acamamento). CLCIO Os ons clcio (Ca2+) so utilizados na sntese de novas paredes celulares, em particular a lamela mdia, que separa clulas em diviso. O clcio tambm utilizado no fuso mittico durante a diviso celular. Ele requerido para o funcionamento normal das membranas vegetais e foi-lhe atribudo o papel de mensageiro secundrio em vrias respostas da plantas, tanto a sinais ambientais quanto a hormonais (Sanders e cols., 1999). Em sua funo como mensageiro secundrio, o clcio pode ligar-se calmodulina, uma protena encontrada no citosol de clulas vegetais. O complexo calmodulina-clcio regula muitos processos metablicos. Sintomas caractersticos da deficincia de clcio incluem a necrose de regies meristemticas jovens, como os pices radiculares ou folhas jovens, nas quais a diviso celular e a formao de paredes so mais rpidas. A necrose em plantas em lento crescimento pode ser precedida por uma clorose generalizada e um curvamento para baixo das folhas. As folhas jovens tambm podem parecer deformadas. O sistema radicular de uma planta deficiente em clcio pode mostrar-se acastanhado, curto e altamente ramificado. Pode haver reduo severa no crescimento, se as regies meristemticas da planta morrerem prematuramente. MAGNSIO Em clulas vegetais, os ons magnsio (Mg+2) tm um papel especfico na ativao de enzimas envolvidas na respirao, fotossntese e sntese de DNA e RNA. O magnsio tambm parte da estrutura em anel da molcula de clorofila. Um sintoma caracterstico da deficincia de magnsio a clorose entre as nervuras foliares, ocorrendo, primeiro, nas folhas mais velhas por causa da mobilidade de tal elemento. Esse padro de clorose ocorre porque a clorofila nos feixes vasculares permanece inalterada por perodos mais longos que a clorofila nas clulas entre os feixes. Se a deficincia muito grande, as folhas podem tornar-se amarelas ou brancas. Um sintoma adicional da deficincia de magnsio pode ser a absciso foliar prematura.

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CLORO O elemento cloro encontrado nas plantas como o on cloreto (Cl-). Ele necessrio para as reaes de quebra da molcula de gua da fotossntese, pelas quais o oxignio produzido.. Alm disso, o cloro pode ser necessrio para a diviso celular tanto em folhas quanto em razes (Harling e cols., 1997). Plantas deficientes em cloro desenvolvem murcha dos pices foliares, seguida por clorose e necrose generalizadas. As folhas podem tambm exibir crescimento reduzido. Eventualmente, as folhas podem assumir uma colorao bronzeada (bronzeamento). As razes de plantas deficientes em cloro podem parecer curtas e grossas junto aos pices radiculares. Os ons cloreto so muito solveis e geralmente disponveis nos solo porque a gua do mar carregada para o ar pelo vento e distribuda sobre o solo quando chove. Portanto, a deficincia de cloro desconhecida nas plantas que crescem em hbitats nativos ou agrcolas. A maioria das plantas geralmente absorve cloro em nveis muito maiores do que os necessrios ao funcionamento normal. MANGANS Os ons mangans (Mn+2) ativam vrias enzimas nas clulas vegetais. As descarboxilases e desidrogenases envolvidas no ciclo de Krebs em particular, so especificamente ativadas pelo mangans. A funo mais bem- definida do mangans a da reao fotossinttica pela qual o oxignio produzido a partir da gua (Marschner 1995). O sintoma principal da deficincia de mangans a clorose internervura, associada com o desenvolvimento de pequenas manchas necrticas. Essa clorose pode ocorrer em folhas jovens ou mais velhas, dependendo da espcie vegetal e da taxa de crescimento. SDIO A maioria das espcies que utiliza as rotas C4 e CAM de fixao do carbono requer ons sdio. Nestas plantas, o sdio parece ser vital para a regenerao do fosfoenolpiruvato, substrato da primeira carboxilao nas rotas C4e CAM (Johnstone e cols., 1988). Sob deficincia de sdio, essas plantas exibem clorose e necrose ou deixam de florescer. Muitas espcies C3 igualmente se beneficiam de uma exposio a baixos nveis de ons sdio. O

33 sdio estimula o crescimento por meio de uma maior expanso celular, alm de poder parcialmente substituir o potssio como um soluto osmoticamente ativo. d) Deficincias de nutrientes do Grupo 4: envolvidos em reaes redox Este grupo de cinco micronutrientes inclui os metais ferro, zinco, cobre, nquel e molibdnio, os quais podem sofrer oxidaes e redues reversveis, alm de desempenharem importantes funes na transferncia de eltrons e na transformao de energia. Usualmente so encontrados em associao com molculas maiores, como citocromos, clorofila e protenas (normalmente enzimas). FERRO O ferro tem um importante papel como componente de enzimas envolvidas na transferncia de eltrons (reaes redox), como citocromos. Nesse papel, ele reversiveimente oxidado de F+2 a Fe+3 durante a transferncia de eltrons. Da mesma forma que na deficincia de magnsio, um sintoma caracterstico da deficincia de ferro a clorose internervura. Ao contrrio dos sintomas de deficincia de magnsio, tais sintomas aparecem inicialmente nas folhas mais jovens porque o ferro no pode ser prontamente mobilizado das folhas mais velhas. Sob condies de deficincia extrema ou prolongada, as nervuras podem tomar-se clorticas tambm, fazendo com que toda a folha se torne branca. As folhas tornam-se clorticas porque o ferro necessrio para a sntese de alguns dos complexos clorofila-protena no cloroplasto. A baixa mobilidade do ferro deve-se, provavelmente, sua precipitao nas folhas mais velhas na forma de xidos ou fosfatos insolveis ou formao de complexos com a fitoferritina, uma protena de ligao de ferro encontrada na folha e em outras partes da planta (Oh e cols., 1996). A precipitao do ferro diminui a subseqente mobilizao do metal para dentro do floema, para o transporte de longa distncia.

ZINCO

34 Muitas enzimas requerem ons zinco (Zn2+) para suas atividades, e este elemento pode ser exigido para a sntese de clorofila em algumas plantas. A deficincia de zinco caracterizada pela reduo do crescimento intemodal, e, como resultado, a planta apresenta um hbito de crescimento rosetado, no qual as folhas formam um agrupamento circular que se irradia no solo ou perto dele. As folhas podem ser tambm pequenas e retorcidas, com margens de aparncia enrugada. Tais sintomas podem resultar da perda da capacidade de produzir quantidades suficientes da auxina cido indolactico. Em algumas espcies (milho, sorgo, feijoeiro), as folhas mais velhas podem tornar-se clorticas entre as nervuras e, ento, desenvolver manchas necrticas brancas. possvel que a clorose seja uma expresso da necessidade de zinco para a sntese de clorofila. COBRE Como o ferro, o cobre est associado com enzimas envolvidas em reaes redox, sendo reversivelmente oxidado de Cu+ a Cu+2. Um exemplo de tal enzima a plastocianina, a qual est envolvida no transporte de eltrons durante as reaes dependentes de luz da fotossntese (Haehnel, 1984). O sintoma inicial da deficincia de cobre a produo de folhas verde escuras, que podem conter manchas necrticas. As manchas necrticas aparecem primeiro nos pices das folhas jovens e ento se estendem em direo base da folha, ao longo das margens. As folhas podem tambm ficar retorcidas ou malformadas. Sob deficincia extrema de cobre, h possibilidade de as folhas carem prematuramente. NQUEL A urease a nica enzima que se conhece em plantas superiores que contm nquel, embora microrganismos fixadores de nitrognio exijam nquel para a enzima que reprocessa parte do gs hidrognio gerado durante a fixao (hidrogenase de captao de hidrognio). Plantas deficientes em nquel acumulam uria em suas folhas e, em conseqncia, apresentam necrose nos pice foliares. Plantas cultivadas em solo raramente, ou mesmo nunca, mostram sinais de deficincia de nquel, pois as quantidades requeridas de nquel so minsculas. MOLIBDNIO

35 Os ons molibdnio (Mo+4 at Mo+6) so componentes de vrias enzimas, incluindo nitrato redutase e nitrogenase. A nitrato redutase catalisa a reduo do nitrato a nitrito durante sua .assimilao pela clula vegetal; a nitrogenase converte o gs nitrogneo a amnia em microrganismos fixadores de nitrognio. O primeiro indicativo da deficincia de molibdnio a clorose generalizada entre as nervuras e a necrose das folhas mais velhas. Em algumas plantas, como couve-flor e brcolis, por exemplo, as folhas podem no se tornar necrticas, mas, por outro lado, pdem parecer retorcidas e, subseqentemente, morrer. H possibilidade de a formao de flores ser impedida ou de as flores carem prematuramente. Como o molibdnio est envolvido tanto com a reduo do nitrato quanto com a fixao de nitrognio, a deficincia de molibdnio pode acarretar uma deficincia de nitrognio, caso a planta dependa da fixao simbitica de nitrognio. Embora as plantas necessitem apenas de pequenas quantidades de molibdnio, alguns solos suprem nveis inadequados. Pequenas adies de molibdnio nesses solos podem melhorar bastante o crescimento de culturas e forrageiras a um custo desprezvel.

2.3 ANLISE MINERAL

A anlise qumica do tecido vegetal pode ser utilizada para obtermos informaes sobre aspectos relacionados com a produo agrcola, como o acmulo e a extrao de nutrientes pela colheita de diferentes rgos (razes, tubrculos, caule, gros e frutos), bem como para a diagnose foliar. Atravs da diagnose foliar determina-se qual o teor adequado nas folhas fisiologicamente maduras ou outro rgo representativo da planta, para que cada cultura possa atingir 90-95% da produtividade, levando-se em conta o fator econmico para se atingir tal ndice de produo. Com base nesse teor e outros aspectos agronmicos, como a cultivar e o tipo de cultivo, so determinadas as estratgias de adubao. Segundo Malavolta et al. (1989), a composio de macro e micronutrientes do tecido foliar esto diretamente ligadas absoro, translocao e ao transporte a longa distncia desses elementos.

36 2.3.1 Mtodos analticos para analise mineral A metodologia utilizada para a determinao dos nutrientes no tecido vegetal pode ser dividida em mtodos volumtricos, gravimtricos e instrumentais. a) Mtodos volumtricos Os mtodos volumtricos so um grupo de procedimentos quantitativos baseados na determinao da concentrao de um constituinte de uma amostra a partir de uma reao, em soluo, deste com um reagente de concentrao conhecida, acompanhada pela medida de quantidades discretas de soluo adicionada. Trata-se de determinar a concentrao de uma espcie de interesse em uma amostra a partir do volume (ou massa) de uma soluo com concentrao exatamente conhecida (soluo padro) necessria para reagir quantitativamente com esta amostra em soluo (soluo problema). A determinao da concentrao de uma soluo (soluo problema) a partir de sua reao quantitativa com uma quantidade conhecida de uma substncia que pura (padro primrio) chamada de titulao de padronizao, ou simplesmente padronizao. Neste caso, aps ter sua concentrao determinada, a soluo problema passa a ser uma soluo padronizada. Destes, o mais usado para analise mineral a titulao, que corresponde ao processo de adio de quantidades discretas de um dos reagentes, geralmente com o auxlio de uma bureta, no meio reacional para quantificar alguma propriedade. Quando se pretende encontrar uma concentrao, a titulao um procedimento analtico e, geralmente, so feitas medidas de volume, caracterizando as titulaes volumtricas; mas, em alguns casos, pode-se monitorar a variao gradual de uma outra grandeza, como a massa, caso das titulaes gravimtricas, ou a absoro da luz, como nas titulaes espectrofotomtricas.

b) Mtodos gravimtricos

37 A medida final o peso de um constituinte da amostra, ou seja, pode-se monitorar a variao gradual de uma outra grandeza, como a massa, caso das titulaes gravimtricas, para se obter a concentrao de uma soluo. c) Mtodos instrumentais Mtodos baseados na medida de propriedades fsicas (pticas, eltricas, trmicas, entre outras) com o uso de instrumentos apropriados, mais complexos que os requeridos pela gravimetria e/ou volumetria. Em outras palavras, mtodos instrumentais seriam aqueles com uso de equipamentos eltricos para medidas. Impropriamente, esta classificao no considera os equipamentos volumtricos, tais como bureta, proveta e pipeta, nem a balana, mesmo eletrnica, como instrumentos. No entanto, esta diviso amplamente difundida e encontrada na literatura. Os mtodos analticos instrumentais que surgiram apresentavam vantagens como rapidez, simplicidade, seletividade e sensibilidade; sendo alguns particularmente apropriados para a determinao de baixas concentraes da espcie de interesse (g L-1 e, em alguns casos, at pg L-1). Com isso, estes mtodos foram ganhando aceitao cada vez maior e passaram a ser introduzidos nos laboratrios de indstrias e centros de pesquisa. 2.3.2 Preparo da amostra para anlise mineral O material vegetal deve ser devidamente identificado e conduzido imediatamente para limpeza, secagem, moagem e armazenagem. a) Limpeza A amostra fresca deve ser lavada agitando-a por alguns segundos em gua destilada contendo um pouco de detergente. Em seguida enxaguadas com gua destilada, em pores sucessivas, para remover todo o detergente. Sec-las levemente e em papel absorvente. b) Secagem O material vegetal colocado em sacos de papel perfurados, devidamente identificados, mantidas em estufas com circulao de ar e com temperatura variando entre

38 65 a 70C, at atingir peso constante. O tempo de estufa depende do tipo de folha, podendo variar de 3 a 7 dias. c) Moagem Deve-se utilizar de preferncia moinho de ao inx tipo Willey, para evitar contaminao da amostra principalmente com ferrugem. A amostra moda deve passar por peneira de malha 1mm ou 20 mesh, que deve estar acoplada ao moinho. d) Armazenagem As amostras modas podem ser acondicionadas em frascos de vidro com tampa plstica, devidamente identificadas. 2.3.3 Extrao dos elementos minerais da amostra Para a determinao dos teores de nutrientes nas plantas, normalmente necessria a transformao da matriz orgnica (amostra de tecidos vegetais) em uma forma inorgnica simples. A extrao refere-se fase de retirada dos nutrientes dos compostos orgnicos aos quais ele faz parte ou estando adsorvidos aos mesmos. Os principais tipos de extrao so a digesto cida a quente e a digesto por via seca, nos quais a matria orgnica (MO) da amostra totalmente oxidada. a) Digesto cida a quente Compreende a digesto sulfrica, para se determinar o teor de nitrognio total da amostra, e a digesto ntrico-perclrica, que utilizada na determinao de P, S, Ca, Mg, K, Fe, Mn, Cu, Zn, Ni, Na, Al e Rb. b) Digesto via seca (incinerao) Atravs da incinerao da amostra via seca, determina-se o boro, alumnio, molibdnio e cobalto.

39 2.3.3 Determinao do teor de nitrognio total (Mtodo de Kjeldahl) O termo Nitrognio Kjeldahl Total (NKT) refere-se combinao de amnia e nitrognio orgnico. O mtodo de determinao de NKT foi desenvolvido em 1883 por Johan Kjeldahl, e tornou-se um mtodo de referncia para determinao de nitrognio. Apresenta como principal vantagem o uso de uma aparelhagem extremamente simples e pouco onerosa (Ferreira et al). De acordo com Bremner (1965) e Keeney & Bremner (1967), o mtodo clssico Kjeldahl satisfatrio para a anlise de Ntotal para a maioria dos compostos nitrogenados que ocorrem nos solos e plantas. Entretanto, no apresenta resultados satisfatrios quando esto presentes compostos com ligaes N-N e N-O. O mtodo clssico Kjeldahl compreende duas etapas: (1) digesto da amostra para converter N orgnico a on amnio (N-NH4+) e (2) determinao do N-NH4+ digerido, aps destilao com lcali. O sulfato de amnio resultante da digesto aquecido com uma base, desprendendo amnia (NH3), conforme reao abaixo: NH4+ + OH- NH3 + H2O. A amnia desprendida ento recolhida em uma soluo cida, e N-NH 4+ determinada por colorimetria, eletrodo on seletivo ou titulao com soluo padro cida (BREMNER, 1965; YASUHARA e NOKIHARA, 2001). a) Digesto da amostra Na etapa de digesto, a amostra submetida a digesto acida a quente, com cido sulfrico. Existem muitas variaes para essa etapa do que foi sugerido originalmente por Kjeldahl, incluindo o uso de misturas digestoras com cido sulfrico concentrado com adio de sais para aumentar a temperatura de ebulio do cido, catalisadores e agentes oxidantes outros que no o permanganato de potssio. So utilizados sais (K2SO4 ou Na2SO4), para aumentar a temperatura de ebulio do H2SO4, e catalisadores, tais como Se, Hg ou Cu que promovem um aumento da velocidade de oxidao da matria orgnica (BREMNER, 1965).

40 A temperatura, que controlada pela quantidade de K2SO4 (ou Na2SO4) empregada. Quando se utilizam baixas concentraes de K2SO4, so necessrias vrias horas de digesto. Com altas concentraes, o tempo de digesto reduzido, diminuindo os perigos inerentes operao. Entretanto, a utilizao de altas concentraes de K2SO4 apresentam a desvantagem da formao de um digerido slido, quando arrefecido temperatura ambiente, sendo necessrio dissolv-lo com gua antes da destilao. Outra desvantagem a formao de espuma durante a digesto de amostras de solo orgnico e perdas de N, que podem ocorrer quando a temperatura de digesto ultrapassa 400C . Os catalisadores aumentam a velocidade de digesto, quando baixas concentraes so utilizadas, e tm praticamente nenhum efeito quando so utilizadas altas concentraes. Na produo rpida de um digerido claro, os catalisadores so apresentados em ordem decrescente: Se > Hg > Cu. Selnio no significativamente mais eficiente que Hg quando so consideradas as velocidades de clareamento do digerido e converso de N orgnico a N-NH4+, mas Se e Hg so consideravelmente mais eficientes que Cu. Se um catalisador seguro e eficiente quando adequadamente utilizado, e perda de N ocorre somente quando usado em excessiva quantidade ou com grande quantidade de K2SO4 ou Na2SO4, e digesto muito prolongada. Considerando-se ambos os efeitos de clareamento do digerido e converso de N orgnico a N-NH4+, Hg mais eficiente que Se. Entretanto, dificulta a liberao do NH3 na destilao (BREMNER, 1965). Vrios agentes oxidantes so usados, um deles j referido o permanganato de potssio. O agente oxidante mais usado o perxido de hidrognio (H2O2) e tem mostrado ser melhor nas digestes que no requerem pre-tratamento da amostra. Para amostras em que o N est na forma oxidada, como os nitratos e nitritos, necessrio efetuar um pr-tratamento antes da digesto da amostra. Os nitratos so reduzidos amnia; a adio de ferro reduzido em meio cido libera H+ e reduz o NO3- amnia; os nitritos so primeiramente oxidados com permanganato nitrato e este posteriormente reduzido amnia com adio do ferro reduzido em meio cido. Um tempo mnimo para digesto de amostras o de 5 horas a fim de assegurar completa converso de N-orgnico NH4+. Um perodo curto de tempo de digesto pode levar a inexatido dos resultados de razo isotpica, especialmente em amostras de solo.

41 Para alta preciso na anlise de N-total de material de solo ou vegetal, a amostra deve estar seca (60oC) e bem moda (passar atravs de peneira de 150 m: 100 mesh), bem misturada e faz-se a pesagem em balana de preciso 0,01 mg. Algumas vezes a digesto feita em amostras de solo mido para evitar a perda de N durante a sua secagem. Controles (brancos) so includos em cada conjunto de amostras postas a digerir, a fim de corrigir a contribuio do N contido nos reagentes da mistura digestora e uma possvel absoro de N-NH3 do ar durante a digesto. Inclui-se tambm amostras-controle para avaliar o desempenho da digesto. Um controle usado padro primrio Tris hidroximetil amino metano. b) Destilao e determinao do N-NH4+ Aps concluda a digesto cida da amostra, o NH4+ resultante deve ser separado dos reagentes usados para a sua converso, e tambm dos outros constituintes do extrato, para eliminar as substncias que possam decompor o reagente hipobromito usado na oxidao de NH4+ N2. O modo convencional de separao conduzido por destilao da amnia da amostra por arraste de vapor em aparelhos de destilao (Figura 1). No processo de destilao em meio alcalino, todo o N da amostra convertido a NH3.

Figura XX Aparelho destilador de amnia por arraste de vapor. Fonte: Mulvaney (1993).

42 A amostra a ser destilada baseificada com soluo concentrada de NaOH (18 M). A amnia destilada por arraste de vapor, sendo recebida em soluo de cido sulfrico, clordrico ou de cido brico contendo indicador. Se a amostra destilada recebida em cido sulfrico ou clordrico ela posteriormente titulada com uma base (soluo padronizada de NaOH ou KOH) e por diferena entre o nmero de miliequivalente do cido antes e aps a destilao calcula-se a massa de N da amostra; se ela recebida em soluo de cido brico contendo indicador titulada diretamente com cido sulfrico ou clordrico padronizado. Nesse ponto, determina-se a concentrao de N-total da amostra. Entre destilaes de uma amostra e outra aconselhvel destilar uma soluo contendo cido frmico e etanol, ou somente etanol, que remover algum resduo de NH 3 da ltima amostra que ficou aderida s paredes internas do destilador. Esse procedimento feito para evitar contaminao entre amostras (cross contamination). Durante a destilao com etanol as primeiras fraes do destilado adicionado amostra que precedeu a operao. 2.3.4 Determinao do teor de alumnio (mtodo da Aluminona) Esse mtodo baseia-se na interao do reagente Aluminona (C22H11O9(NH4)3, que forma um complexo rosa com o ion de alumnio, conforme figura 5.

Figura 5 Reao do mtodo do Aluminona (http://old.ournet.md/~biochim/ghid/ch_re_cat/ch_re_cat.doc).

43 Para esta reao, utiliza-se um tampo para manter o pH cido e o HCl, pois o alumnio fica mais solvel, possibilitando melhor interao. Pelo grfico da figura ?, podese observar a solubilidade de vrios compostos, dentre eles o alumnio, em funo do pH. 2.3.3 Espectroscopia de emisso atmica por chama Os tomos ou as molculas que esto excitadas a altos nveis de energia podem cair a nveis menores emitindo radiao, emisso ou luminescncia. Para os tomos excitados por uma fonte de energia de alta temperatura esta emisso de luz normalmente chamada de emisso atmica ou ptica (espectroscopia de emisso atmica), e para tomos excitados com luz chamada fluorescncia atmica (espectroscopia de fluorescncia atmica). A espectroscopia de emisso atmica utiliza a medio quantitativa da emisso ptica de tomos excitados para determinar a concentrao da substncia a ser analisada. Os tomos do analito na soluo so aspirados na regio de excitao onde so dissolvidos, vaporizados e atomizados por uma chama, descarga ou plasma. Estas fontes de atomizao a altas temperaturas fornecem energia suficiente para promover os tomos a altos nveis de energia. Os tomos voltam a nveis mais baixos emitindo luz. O emprego da espectroscopia de emisso por chama (fotometria de chama), de ampla aplicao em anlise elementar. Pode ser usada para anlise quantitativa e qualitativa e um mtodo de elemento simples. Seus usos mais importantes so a determinao de sdio, potssio, ltio e clcio em fludos biolgicos e tecidos. Na espectrofotometria de chama a amostra introduzida na chama em forma de um aerossol e mede-se a intensidade da radiao emitida pelos tomos excitados. Para qualquer um dos mtodos baseados em espectroscopia de chama, onde a amostra uma soluo lquida, deve-se encontrar um meio para introduzir o lquido em uma forma finamente dividida na chama. A obteno de uma chama conveniente, tanto para absoro atmica quanto para emisso ir depender ento de um bom maarico. Os maaricos se classificam em duas classes, de acordo com o fato de haver mistura dos gases combustvel e oxidante anterior ou no entrada na rea da chama. O maarico de queima total concentra a chama em uma pequena rea, o que vantagem na emisso, onde deve focalizar uma mxima quantidade de luz no detector ou no monocromatizador. Ele um queimador seguro para se operar, no est sujeito a

44 retrocesso explosivo. Apresenta uma desvantagem para trabalhos de absoro que o feixe de luz percorre apenas uma distncia atravs da amostra vaporizada. A chama turbulenta desse tipo de maarico com freqncia desagradavelmente barulhenta. O outro tipo de maarico o de escoamento laminar ou premix. Misturam-se o combustvel e os gases oxidantes no corpo da montagem do maarico, junto com a amostra aspirada. A mistura ento passa atravs de uma rea contendo um ou mais obstculos para completar a mistura antes de entrar na cabea do maarico. As gotas grandes do aspirador se chocam com as paredes da cmara misturadora e so removidas de modo que apenas as gotas finas encontram seu caminho para a chama. O orifcio do maarico consiste em uma fenda longa e estreita que produz uma chama no turbulenta, calma, em forma de tira. Uma desvantagem compartilhada com o maarico de queima total a parede de gotas grandes do atomizador. Cerca de 90% da amostra podem ir para o dreno. Quando se usam solventes mistos, h uma possibilidade de evaporao rpida do mais voltil, que tender a segregar o soluto de preferncia nas gotas grandes, introduzindo erros significativos. Um desenvolvimento muito recomendvel rompe com prticas anteriores, pois separa a converso da soluo em vapor da produo da chama, o nebulizador snico. Nesse dispositivo a soluo da amostra bombeada atravs de um tubo capilar para a superfcie vibrante de um transdutor ultra-snico. A intensa vibrao de alta freqncia muito efetiva na converso do lquido em um fino vapor de partculas de tamanho uniforme. O vapor recolhido por um dos gases e conduzido ao maarico, que pode ser de qualquer tipo. O nico obstculo o aumento de despesa devido energia do oscilador necessria para movimentar o transdutor. Para a formao da chama no fotmetro necessrio utilizar substncias combustveis e oxidantes. Na prtica, os nicos oxidantes usados so oxignio, ar, e xido nitroso. A variedade de gases combustveis maior e a escolha pode depender da disponibilidade. A tabela a seguir rene as temperaturas mximas obtidas a partir de um nmero de combinaes.

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Tabela XX Temperaturas mximas obtidas a partir de um nmero de combinaes de oxidantes e combustveis. Fonte: (http://www.ufpa.br/ccen/quimica/espectroscopia%20de%20absorcao%20atomica.htm)

Os valores para o metano e o butano so praticamente os mesmos que para o propano e assim pode-se adotar esse valor como representante para o "gs natural". Podemse usar vrios tipos de gases manufaturados sem dificuldade. Para maaricos de queima total, a combinao mais amplamente usada oxignio e acetileno. Para fotmetros de chama planejados apenas para metais alcalinos, adequado usar ar comprimido com gs natural ou manufaturado. Para a absoro atmica com maaricos premix, no se pode usar com segurana a mistura oxignio - acetileno porque a chama se propaga to rapidamente que difcil evitar seu retrocesso, provocando exploso dos gases pr misturados no corpo do maarico. Ar e acetileno so mais freqentemente escolhidos para esse tipo de maarico. xido nitroso promete grande utilidade como oxidante com acetileno; produz uma temperatura apenas um pouco mais baixa que oxignio acetileno, mas sem to grande perigo de exploso. O xido nitroso quase essencial na anlise de elementos como alumnio, titnio e os lantandeos, que formam xidos refratrios na chama ar acetileno. Pode-se usar os mtodos de chama para solues noaquosas. Se o solvente for combustvel, sua presena poder aumentar levemente a temperatura da chama, enquanto que a gua a esfria por dissociao endotrmica. O processo particularmente conveniente para metais que se podem extrair seletivamente da soluo aquosa por um solvente orgnico para produzirem uma soluo que se pode aspirar diretamente na chama. Um exemplo a determinao de ferro em ligas no ferrosas por emisso de chama aps a extrao de uma soluo acidulada com acetilacetona. A linha de emisso seis vezes mais intensa quando o ferro dissolvido em acetilacetona em vez de em gua.

46 A hidroponia uma tcnica bastante difundida em todo o mundo e seu uso est crescendo em muitos pases. Sua importncia no somente pelo fato de ser uma tcnica para investigao hortcola e produo de vegetais; tambm est sendo empregada como uma ferramenta para resolver um amplo leque de problemas, que incluem tratamentos que reduzem a contaminao do solo e da gua subterrnea, e manipulao dos nveis de nutrientes no produto. A hidroponia ou hidropnica, termos derivados de dois radicais gregos (hydor, que significa gua e ponos, que significa trabalho), est-se desenvolvendo rapidamente como meio de produo vegetal, sobretudo de hortalias sob cultivo protegido. Ela uma tcnica alternativa de cultivo protegido, na qual o solo substitudo por uma soluo aquosa contendo apenas os elementos minerais indispensveis aos vegetais. (Furlani et. al., 1999). O cultivo sem solo proporciona um bom desenvolvimento das plantas, bom estado fitossanitrio, alm das altas produtividades quando comparado ao sistema tradicional de cultivo no solo. Segundo Furlani et. al. (1999), no Brasil, tem crescido nos ltimos anos o interesse pelo cultivo hidropnico, predominando o sistema NFT (Nutriente film technique). Muitos dos cultivos hidropnicos no obtm sucesso, principalmente em funo do desconhecimento dos aspectos nutricionais desse sistema de produo que requer formulao e manejo adequados das solues nutritivas. Outros aspectos que interferem igualmente nos resultados relacionam-se com o tipo de sistema de cultivo. Para a instalao de um sistema de cultivo hidropnico, necessrio que se conhea detalhadamente as estruturas bsicas que o compem (Castellane e Araujo, 1994; Cooper, 1996; Faquin et. al., 1996; Martinez e Silva Filho, 1997; Furlani, 1998). Na hidroponia, cujos sistemas so mais caros e exigentes no manejo, as expectativas de produo em quantidade, qualidade e segurana so maiores do que nas culturas que so produzidas de forma tradicional. Uma vez que na hidroponia, a planta encontra, em timas condies, os elementos que necessita (gua, nutrientes, oxignio, etc.), pode haver grandes oscilaes de produo, dependendo do controle correto ou incorreto dos fatores de produo fornecidos planta.

47 2.4.1 Tipos de sistema hidropnico A maioria das plantas tem o solo como o meio natural para o desenvolvimento do sistema radicular, encontrando nele o seu suporte, fonte de gua, ar e minerais necessrios para a sua alimentao e crescimento. As tcnicas de cultivo sem solo substituem este meio natural por outro substrato, natural ou artificial, slido ou lquido, que possa proporcionar planta aquilo que, de uma forma natural, ela encontra no solo (Canovas Martinez apud Castellane e Arajo, 1995). Existem diversos tipos de sistemas de cultivo sem solo variando de acordo com o substrato, a estrutura e fornecimento de oxignio: 1 Sistemas com substratos orgnicos Existem vrios mtodos e os mais utilizados so a serragem que se cultiva s para uma estao; os musgos, um dos primeiros meios tratados e no considerado por alguns como meio hidropnico; a fibra de coco, recentemente tem sido adicionada como meio hidropnico e sua qualidade varia consideravelmente entre provedores, principalmente relacionado a contedo de sais; produtos de espuma que do bom resultados, mas com custo elevado e produtos de madeira e gis com poucos resultados e pouca aceitao. 2 Sistemas com substratos inorgnicos Temos como sistemas com substratos inorgnicos a l de rocha que um material caro, constituda de muitos espaos vazios, usualmente 97%, isto permite absorver nveis muito altos de gua, enquanto que tambm um bom contedo de ar; a areia de quartzo (no a de tipo calcrio como pedra calia e areias de praia), que hoje em dia pouco usada por trazer enfermidades nas razes e problemas no controle de pH; a perlita feita por aquecimento de l de rocha em gua, a qual se expande muito para dar partculas aeradas com uso significativo, principalmente no oriente; a Escria que uma rocha ligeiramente aerada, um meio efetivo, mas pesado (800 kg/m3) sendo usado somente onde um recurso natural local e outros como pumecita, Argila expandida e vermiculita. 3 Sistemas baseados em gua Embora a gua seja tambm um substrato inorgnico, devido as diversas tcnicas que utilizam esses elemento, esse tipo de sistema ser tratado em um tpico isolado.

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NFT (Tcnica de Pelcula Nutriente) (5%) Segundo Bernardes (1997), o sistema NFT uma tcnica de cultivo em gua, no qual as plantas crescem tendo o seu sistema radicular dentro de um canal ou canaleta (paredes impermeveis) atravs do qual circula uma soluo nutritiva (gua + nutrientes). O pioneiro dessa tcnica foi Allen Cooper, no Glasshouse Crop Research Institute, em Littlehampton (Inglaterra), em 1965. NFT originrio das palavras NUTRIENT FILM TECHNIQUE, que foi utilizado pelo Instituto ingls para determinar que a espessura do fluxo da soluo nutritiva que passa atravs das razes das plantas deve ser bastante pequena (laminar), de tal maneira que as razes no ficassem totalmente submergidas, faltando-lhes o necessrio oxignio. No sistema NFT no h necessidade de se colocar materiais dentro dos canais, como pedras, areia, vermiculia, argila expandida, palha de arroz queimada; dentro dos canais somente razes e soluo nutritiva.O sistema NFT funciona da seguinte maneira: a soluo nutritiva armazenada em um reservatrio, de onde recalcada para a parte superior do leito de cultivo (bancada) passando pelos canais e recolhida, na parte inferior do leito, retornando ao tanque,Este sistema recircula uma fina pelcula (lmina) de soluo nutritiva nos canais de cultivo (figura 7).

Figura 7 Soluo nutritiva bombeada na forma de uma fina pelcula ao longo de uma canaleta rasa, banhando as razes da planta.

Cultivo em gua (3%) A principal tcnica comercial a Tcnica de Fluxo Profundo (DFT, Deep Flow Technique), onde pranchas de poliestireno flutuam sobre uma soluo nutritiva aerada por

49 recirculao(figura 8). Este o principal sistema no Japo com 270 hectares, de cultivos de folha principalmente. Outros pases onde seu uso significativo, se encontram na sia, com seu uso predominante em cultivos de hortalias de folha. O sistema de piscinas muito usado para a produo de mudas, como por exemplo, de alface. Nessa piscina so colocadas as bandejas de isopor, deixando correr uma lmina de soluo nutritiva (aproximadamente de 4 a 5 cm) suficiente para o desenvolvimento do sistema radicular das mudas, mantendo o substrato mido e permitindo a absoro dos nutrientes. Segundo Furlani et. al. (1999), no sistema DFT no existem canais, mas sim uma mesa ou caixa rasa nivelada onde permanece uma lmina de soluo nutritiva. O material utilizado para sua construo pode ser madeira, plstico ou fibras sintticas (em moldes pr-fabricados). No sistema DFT as razes das plantas permanecem submersas na soluo nutritiva por todo o perodo de cultivo, por isso a oxigenao da soluo merece especial ateno, tanto no depsito quanto na caixa de cultivo. A instalao de um venturi na tubulao de alimentao permite eficiente oxigenao na lmina de soluo.

Figura 8 As razes so imersas em soluo nutritiva e o ar borbulhado atravs da soluo

Cultivo em Cascalho (1%) O mais comum a Tcnica de Fluxo em cascalho (GFT, Gravel Flow Technique), onde os canais de NFT so cobertos com uma capa de 50 mm (2 polegadas) de

50 cascalho.Est includo por sua conexo histrica e classificado como um sistema baseado em gua porque sempre se usou como uma tcnica de recirculao, como contnuo ou como inundao e drenagem. Aeroponia (0,2%) Com o intuito de se conseguir maior produtividade e melhoria na eficincia e qualidade de produo em sistemas hidropnicos, tm se desenvolvido outros mtodos alternativos de cultivo. A aeroponia uma tcnica de cultivo sem solo que consiste em cultivar as plantas suspensas no ar, tendo como sustentao canos de PVC que podem ser dispostos no sentido horizontal ou vertical, permitindo um melhor aproveitamento de reas e a instalao de um nmero maior de plantas por metro quadrado de superfcie da estufa, obtendo-se, assim, um aumento direto de produtividade.Nesse sistema no utilizado nenhum tipo de substrato, sendo que as razes, protegidas da luminosidade dentro dos canos, recebem a soluo nutritiva de forma intermitente ou gota a gota, de acordo com esquema previamente organizado. uma tcnica onde as razes esto suspendidas em uma neblina de soluo nutritiva (figura 9). Vrias formas desta tcnica tem sido provadas por mais de 20 anos. Atraiu muita publicidade e existem um nmero de sistemas para aficcionados que esto sendo vendidos. Sua realidade comercial tal que s se tem reportado 19 hectares na Coria. Seu uso est limitado a um punhado de pequenas operaes espalhados pelo mundo.

Figura 9 As razes so suspensas acima da soluo nutritiva, a qual turbilhonada por um rotor motorizado gerando um spray (uma das formas de aeroponia).

51 2.4.2 Vantagens e desvantagens do sistema hidropnico Vantagens -Produo de melhor qualidade: pois as plantas crescem em um ambiente controlado, procurando atender as exigncias da cultura e com isso o tamanho e a aparncia de qualquer produto hidropnico so sempre iguais durante todo o ano. -Trabalho mais leve e limpo: j que o cultivo feito longe do solo e no so necessrias operaes como araes, gradagens, coveamento, capinas, etc. -Menor quantidade de mo-de-obra: diversas prticas agrcolas no so necessrias e outras, como irrigao e adubao so automatizadas. -No necessria rotao de cultura: como a hidroponia se cultiva e meio limpo, pode-se explorar, sempre, a mesma espcie vegetal. -Alta produtividade e colheita precoce: como se fornece s plantas boas condies para seu desenvolvimento no ocorre competio por nutrientes e gua e, alm disso, as razes nestas condies de cultivo no empregam demasiada energia para crescer antecipando o ponto de colheita e aumentando a produo. -Menor uso de agrotxicos: como no se emprega solo, os insetos e microorganismos de solo, os nematides e as plantas daninhas no atacam, reduzindo a quantidade de defensivos utilizada. -Mnimo desperdcio de gua e nutrientes: j que o aproveitamento dos insumos em questo mais racional. -Maior higienizao e controle da produo: alm do cultivo ser feito sem o uso de solo, todo produto hidropnico tende a ser vendido embalado, no entrando em contato direto com mos, caixas, veculos, etc. -Melhor apresentao e identificao do produto para o consumo: na embalagem utilizada para acondicionamento dos produtos hidropnicos pode-se identificar a marca, cidade de origem, nome do produtor ou responsvel tcnico, caractersticas do produto, etc. -Melhor possibilidade de colocao do produto no mercado: por ser um produto de melhor qualidade, aparncia e maior tamanho, torna-se um produto diferenciado, podendo agregar ele melhor preo e comercializao mais fcil. -Maior tempo de prateleira: os produtos hidropnicos so colhidos com raiz, com isso duram mais na geladeira.

52 -Pode ser realizado em qualquer local: uma vez que seu cultivo independe da terra, pode ser implantado mais perto do mercado consumidor Desvantagens -Os custos iniciais so elevados, devido a necessidade de terraplenagens, construo de estufas, mesas, bancadas, sistemas hidrulicos e eltricos. Dependncia grande de energia eltrica. O negcio para ser lucrativo exige conhecimentos tcnicos e de fisiologia vegetal. Em um sistema fechado, com uma populao alta de plantas, poucos indivduos doentes podem contaminar parte da produo. Exige rotinas regulares e peridicas de trabalho (Carmo Jr., 2003). -O balano inadequado da soluo nutritiva e a sua posterior utilizao podem causar srios problemas s plantas. O meio de cultivo deve prover suporte s razes e estruturas areas das plantas, reter boa umidade e, ainda, apresentar boa drenagem, ser totalmente inerte e facilmente disponvel. Somente materiais inertes podem entrar em contato com as plantas (toxidez de Zn e de Cu podero ocorrer, caso presentes nos recipientes). essencial boa drenagem para no haver morte das razes (Castellane e Arajo, 1995). -Emprego de inseticidas e fungicidas: No incio do emprego da hidroponia, para fins comerciais, se propagava que no ocorriam pragas e doenas no referido sistema de cultivo. Hoje, sabe-se, que se pode ter esses problemas na instalao hidropnica, embora em muito menor grau em comparao com o sistema convencional. Entretanto, a deciso quanto ao uso de inseticidas e fungicidas sempre muito difcil. Deve-se, sempre, procurar alternativas menos agressivas sade e ao ambiente, evitando, ao mximo, o uso de produtos qumicos. Pois, caso contrrio, o mtodo perde um dos atrativos de comercializao (Teixeira, 1996). -Os equipamentos necessrios para trabalhar as culturas hidropnicas devem ser mais precisos e sofisticados que para o solo, portanto, mais caros de aquisio, instalao e manuteno. A falta de inrcia dos sistemas hidropnicos torna-os vulnerveis perante qualquer falha ou erro de manejo. O que se pode cultivar por Hidroponia?

53 Praticamente tudo. Hoje em dia a alface ainda a mais cultivada, mas pode-se plantar brcoli, feijo-vagem, repolho, couve, salsa, melo, agrio, pepino, beringela, pimento, tomate, arroz, morango, forrageiras para alimentao animal, mudas de rvores, plantas ornamentais, entre outras espcies.

2.5 SOLUES NUTRITIVAS As solues nutritivas fornecem os nutrientes essenciais ao desenvolvimento das plantas. Porm, no existe uma que seja adequada para todas as culturas. Para cada espcie e condies de cultivo existe uma soluo nutritiva mais adequada, dependendo da exigncia nutricional. Esta exigncia refere-se s quantidades de nutrientes que uma cultura extrai da soluo nutritiva para atender suas necessidades, crescer e produzir adequadamente. Nos primeiros estudos, a composio qumica das solues nutritivas simulava a constituio da soluo do solo; atualmente, a composio de uma soluo nutritiva baseiase, preferencialmente, na composio qumica das folhas por serem os rgos que melhor refletem o estado nutricional da planta (Parker & Norvell, 1999). Segundo Martinez (1997), as maiores diferenas entre esses dois tipos de soluo residem nos teores de N, P e K, com concentraes mais elevadas nas que se baseiam na composio qumica foliar.

2.5.1 Utilizao das solues nutritivas As solues nutritivas podem ser utilizadas para diversos objetivos, dentre eles, o estudo das exigncias nutricionais e como veculos de adubao, seja no solo ou via foliar. Falar mais ... Dar exemplos ... 2.5.2 Formulaes de solues nutritivas Hogland & Arnon (1950), desenvolveram duas frmulas, sendo a primeira contendo NO3- como fonte exclusiva de nitrognio e a segunda contendo NO3- e NH4+ como fontes de

54 nitrognio. Posteriormente, Johnson (1957), propuseram modificaes na segunda soluo de Hoagland & Arnon (1950), onde propem que as fontes de nitrognio, NO3- e NH4+ mantivessem uma relao de 7:1, de tal modo que a soluo final tivesse um comportamento semelhante ao de uma soluo tampo, mantendo o pH da mesma em torno de 5,0. Sarruge (1975), propem o balanceamento da soluo de Hoagland & Arnon (1950). Atualmente, grande parte das formulaes existentes resultam da modificao da soluo original de Hoagland, desenvolvida a partir das exigncias nutricionais do tomateiro. Esta ltima a mais usada na investigao de problemas nutricionais de plantas e configura-se como a base para formulao de vrias solues nutritivas comerciais (Furlani et al., 1999). Segundo Hoagland & Arnon (1938), no h uma composio nutritiva melhor do que outra, pois as plantas possuem grande capacidade de adaptao s diferentes condies nutricionais. A soluo de Hoagland modificada apresenta uma formulao mais moderna para uma soluo nutritiva (Quadro XX). Quadro XX Composio de uma soluo de Hoagland modificada para cultivo de plantas.

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Uma soluo de Hoagland modificada contm todos os elementos minerais necessrios ao rpido crescimento das plantas. As concentraes desses elementos so estabelecidas no maior nvel possvel, sem produzir sintomas de toxicidade ou estresse salino e, assim, podem ser vrias ordens de magnitude maiores do que as encontradas no solo ao redor das razes. Por exemplo, enquanto o fsforo est presente na soluo do solo em concentraes normalmente menores do que 0,06 ppm, na soluo nutritiva ele oferecido a 62 ppm (Epstein, 1972). Tais nveis iniciais altos permitem s plantas crescerem no meio por perodos prolongados sem reposio dos nutrientes. Muitos pesquisadores, no entanto, diluem suas solues nutritivas em muitas vezes e as trocam com freqncia para minimizar as flutuaes na concentrao de nutrientes no meio e no tecido vegetal. Falar sobre a soluo de Huiz ... 2.5.2 Cuidados no preparo da soluo nutritiva Alguns fatores devem ser observados em um cultivo feito em soluo nutritiva, so eles: Fonte de nitrognio Uma outra propriedade importante da formulao de Hoagland modificada que o nitrognio suprido tanto na forma de amonio (NH4+) quanto de nitrato (NO3-). Suprir nitrognio em mistura balanceada de ctions e nions tende a reduzir o rpido aumento no pH do meio, que comumente observado quando o nitrogenio fornecido apenas na forma do nion nitrato (Asher & Edwards, 1983). Mesmo quando o pH do meio mantido neutro, a maioria das plantas cresce melhor se tiver acesso tanto a NH4+ quanto a nitrato, pois a absoro e a assimilao das duas formas de nitrognio promovem um balano ction-nion dentro da planta (Smith, 1976; Bloom, 1994). Disponibilidade de ferro

56 Um problema significativo das solues nutritivas a manuteno da disponibilidade de ferro. Quando fornecido na forma de um sal inorgnico como FeSO4 ou Fe(N03)2, o ferro pode precipitar da soluo como hidrxido de ferro. Se sais fosfato esto presentes, fosfato de ferro insolvel tambm ser formado. A precipitao do ferro na soluo torna-o fisicamente indisponvel planta, a no ser que sais de ferro sejam adicionados com freqncia. Pesquisadores mais antigos abordaram o problema adicionando ferro junto com cido ctrico ou tartrico. Compostos como esses so chamados de quelantes, pois formam complexos solveis com ctions, como ferro e clcio, nos quais o ction retido por foras inicas, e no por ligaes covalentes. Ctions que formam quelatos so, ento, fisicamente mais disponveis s plantas. Solues nutritivas mais modernas usam os produtos qumicos cido etilenodiaminatetractico (EDTA) ou cido dietilenotriaminapentactico (DTPA ou cido penttico) como agentes quelantes (Sievers & Bailar, 1962). A Figura 10 mostra a estrutura do DTPA.

FIGURA 10 Estrutura qumica do quelante DTPA.

O destino do quelato durante a absoro do ferro pelas clulas radiculares no claro; o ferro pode ser liberado do quelante quando reduzido de Fe+3 a Fe+2 na superficie radicular. O quelante pode difundir-se de volta soluo nutritiva (ou do solo) e reagir com outro on Fe3+ ou com outros ons metlicos. Aps a absoro, o ferro mantido solvel

57 por formao de quelatos com compostos orgnicos presentes nas clulas vegetais. O cido ctrico pode desempenhar um papel importante na formao de quelatos com ferro e no transporte de longa distncia do mesmo no xilema. Volume da soluo Periodicamente deve ser monitorado o nvel de gua da soluo nutritiva, devido a perda causada pela prpria absoro radicular ou pela evaporao para a atmosfera. Como completar?? D exemplos ... O perodo de troca varivel ... D exemplos ... Ajuste de pH da soluo nutritiva Durante o processo de absoro de nutrientes as razes das plantas vo alterando o pH da soluo nutritiva. Esse pH significa a acidez ou basicidade da soluo nutritiva. As plantas tm o seu desenvolvimento mximo entre pH 5,5 a 6,5 e medida que elas crescem elas alteram esse pH da soluo nutritiva. Por essa razo diariamente aps completar o volume da soluo com gua o pH da soluo deve ser medido. Se ele estiver fora desta faixa de 5,5 a 6,5, ele dever ser ajustado com cido se estiver acima de 6,5. E com base caso esteja abaixo de 5,5, isto importante para que a planta tenha condies de absorver todos os nutrientes na quantidade que ela necessitar para o seu crescimento. Condutividade eltrica medida que as plantas crescem os nutrientes da soluo vo sendo consumidos e esta soluo vai se esgotando. Chega a um ponto que a soluo no consegue mais fornecer os nutrientes necessrios ao desenvolvimento das plantas. Nesse ponto a soluo deve ser trocada. Um dos maiores problemas saber quando esta troca deve ser realizada. muito comum que se usem intervalos iguais entre trocas, o que no correto, pois no incio do desenvolvimento as plantas consomem muito menos que no final do seu desenvolvimento. Para contornar esta situao a maneira mais fcil e simples usar um condutivmetro, que um aparelho que mede a condutividade eltrica da soluo. Uma soluo que contm sais tem a capacidade de conduzir a corrente eltrica. Essa capacidade

58 de conduo da corrente eltrica tanto maior quanto maior a concentrao de sais dissolvidos na soluo. Assim atravs da reduo na condutividade eltrica possvel saber quando necessrio fazer a troca da soluo nutritiva. A condutividade deve ser medida a cada 3 ou 4 dias e portanto saber qual o momento adequado para se trocar a soluo.

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3 OBJETIVOS

Este trabalho teve como objetivos a descrio dos procedimentos usados na digesto e anlise de elementos minerais constituintes dos tecidos vegetais de folhas verdes e amarelas e razes de milho, cultivado em soluo nutritiva, objetivando-se o conhecer as principais tcnicas de anlise. Ainda, objetivou-se verificar, atravs de solues nutritivas, o desenvolvimento dos sintomas de deficincia nutricional no desenvolvimento de plntulas de feijo.

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4 MATERIAL E MTODOS

4.1 ANLISE MINERAL

As atividades foram conduzidas no Laboratrio de Bioqumica de Plantas do Departamento de Biologia, localizado no Setor de Fisiologia Vegetal, na Universidade Federal de Lavras, no perodo 20 de setembro a 10 de outubro de 2007. A coleta do material vegetal foi realizada entre as 15 e 16 horas, no dia 23 de agosto, ou seja, mesmo material obtido da coleta utilizada para as extraes do relatrio II (biomolculas, amido e protena). Foram selecionadas cerca de 20 plantas de Hevea brasiliensis, maduras, sadias, localizadas em uma rea clonal prxima ao departamento e cultivadas aparentemente, sob as mesmas condies ambientais. Coletou-se cerca de 100 folhas completamente expandidas, que foram levadas ao laboratrio para o preparo das amostras. Os demais materiais utilizados para a anlise foram gros de milho soja e tubrculos de batata, provenientes de exemplares comercias. Depois de realizada a seleo do material vegetal coletado, na qual se excluram as folhas danificadas por ataque de pragas e doenas e, aquelas que estavam imaturas, com colorao arroxeada e textura membrancea; descartou-se o pecolo e os pecilulos e separaram-se apenas as laminas foliares dos fololos. Posteriormente a essa classificao, retirou-se a nervura central das laminas foliares, que foram mantidas em embalagem de papel, em estufa de circulao forada, a 70C, at obter peso constante, juntamente com tubrculos de batata.

61 Os materiais secos foram triturados em moinho tipo Willey, para realizar a digesto cida a quente, sendo a sulfrica para a extrao do nitrognio, e a nitroperclrica, para os elementos alumnio, cobre, ferro, clcio e fsforo.

4.1.1 Extrao e determinao do teor de nitrognio total (Mtodo de Kjeldahl) a) Digesto sulfrica Pesou-se 0,1 g da amostra e transferiu-se para tubos de digesto, adicionando-se 1,5 g de Sulfato de Potssio (K2SO4) e 0,3 g de Sulfato de Cobre (CuSO4). Posteriormente, adicionou-se 3 mL de cido Sulfrico concentrado, sendo essa mistura colocada em bloco digestor a 500C, aumentando a temperatura lentamente at atingir 3700C, sob capela. Tal mistura foi deixada em bloco digestor at atingir a colorao verde-clara. Aps chegar temperatura ambiente, adicionou-se 30 ml de gua destilada, agitando-se at dissolver o resduo e, em seguida, procedeu-se a determinao do N total. a) Destilao Em um erlenmeyer de 125 ml, adiciona-se 10 ml da soluo cido-brico indicador, oriundo da mistura de 1g de cido brico (H3BO3), 0,5 ml de soluo indicadora, a qual composta por 0,015g de verde de bromocresol + 0,006g de vermelho metila + completar o volume para 10 ml de lcool etlico. Por fim, completa-se tal soluo (acdo-brico indicador) para 50mL com gua destilada. Na entrada do destilador, encaixa-se o tubo de digesto e adiciona-se lentamente 10 ml de NaOH 13N. Eleva-se a temperatura do destilador ao mximo at iniciar a ebulio, reduzindo posteriormente at que o volume do destilado fique prximo a 25 ml. b) Titulao Titulou-se o destilado com HCl 0,07143 N ( resulto da pipetagem de 71,43 ml de HCl 1 N (8 ml de HCl e dissolveu-se em 92 ml de gua destilada) e transferiu-se para balo volumtrico de 1 L, onde o volume foi completado com gua destilada) at que houvesse mudana da cor verde para rosa escuro. Anotou-se o volume gasto que igual porcentagem de N na amostra. Para a obteno das protenas totais, atravs da porcentagem de N, utiliza-se da seguinte frmula:

62

%PTN = % N X 6,25

4.1.3 Extrao de alumnio, cobre, ferro, clcio e fsforo (Digesto Nitroperclrica) Pesou-se 0,5g da amostra previamente preparada e transferiu-se para os tubos de digesto, acrescentou-se a essa, 6mL de uma mistura de acido ntrico concentrado e cido perclrico (2:1), deixando em repouso por duas horas. Os tubos foram postos no bloco digestor at que o volume atingiu-se a metade, aproximadamente 40 minutos, elevando a temperatura a partir de ento, at atingir 210 C, deixando nessa temperatura por mais aproximadamente 20 minutos. A disgesto foi finalizada quando a soluo se tornou incolor, com o surgimento de uma fumaa branca e densa, oriunda do cido perclrico. Aps o resfriamento adicionou-se 14,5 mL de gua destilada para uma diluio de 30% - procedendo-se posteriormente a determinao dos minerais.

4.1.4 Determinao do teor de cobre, ferro, clcio e fsforo Os extratos obtidos pela digesto nitroperclorica foram levados ao Laboratrio de Anlise Mineral do Departamento de Qumica da presente UFLA, para quantificao dos teores de Cu, Fe, Ca e P, utilizando-se o fotmetro de chama.

4.1.5 Determinao do teor de alumnio (Mtodo da Aluminona) a) Preparo dos reagentes 1 Tampo acetato de aluminona, pH 4,6 Oriundo da diluio de 120mL de cido actico glacial, 37g de NaOH (hidrxido de sdio) e 0,35g de aluminona, sendo esse volume completado com gua destilada para 1L e o pH corrigido para 4,6.

63 2 Soluo padro contendo 250ppm de Al+ 3 Soluo de HCl 0,3N b) Obteno da curva padro Procedeu-se conforme a tabela 2, procede-se a obteno da curva padro, sendo que para a quantificao de alumnio, foram realizados testes de alquotas para cada tecido. Tabela 2 Procedimentos para a obteno da curva padro para quantificao do alumnio. Tubos 0 1 2 3 4 5 6 7 Sol. Padro de Al (mL) 0 0,3 0,6 0,9 1,2 1,8 2,4 3,0 H20 (mL) 3 2,7 2,4 2,1 1,8 1,2 0,6 0 HCl 0,3N (mL) 1 1 1 1 1 1 1 1

Aps a adio das solues acima descritas, agitou-se os tubos de ensaio em vrtex, levou-se em banho-maria 80C por 30 minutos, para posterior adio de 1mL de tampo acetato de aluminona. Repouso por mais 30 minutos e leitura em espectrofotmetro = 525nm.

4.2

ESTUDO DAS HIDROPONIA

DEFICINCIAS

NUTRICIONAIS

DE

PLANTAS

EM

As atividades foram conduzidas na casa de vegetao, para a germinao das sementes de feijo e posterior cultivo hidropnico e no Laboratrio de Bioqumica de Plantas do Departamento de Biologia, para a preparao da soluo nutritiva, ambos

64 localizados no Setor de Fisiologia Vegetal, na Universidade Federal de Lavras. Para este ensaio, foi necessrio o perodo de 11 de outubro a 10 de novembro de 2007. Foi escolhida para o presente ensaio, a observao de plantas de feijo cultivadas em soluo hidropnica sob os seguintes tratamentos: T1 - Soluo completa sem aerao T2 - Soluo completa com aerao T3 - Soluo sem nitrognio T4 - Soluo sem potssio T5 - Soluo sem clcio T6 - Soluo sem ferro T7 - Soluo sem boro Cada tratamento foi conduzido em um vaso, o qual j previamente pintado, cada vaso contendo duas plntulas, sendo cada uma, por sua vez, representou uma repetio, conforme esquema da figura ?.

Figura XX Esquema da conduo do ensaio de nutrio nutritiva.

Os vasos ficaram sobre uma bancada, localizada na casa de vegetao, cada vaso recebeu uma tampa de isopor, com dois orifcios, para a insero das mudas. Foi construdo um varal para escorar as plantas durante o crescimento (FIGURA ?). A aerao

65 foi disponibilizada por um compressor de ar, onde cada vaso recebeu uma mangueira para a conduo do oxignio, exceto para o tratamento isento desse.

Figura XX Localizao do experimento na casa de vegetao do setor de Fisiologia Vegetal, UFLA. Adetalhe do compressor de ar utilizado para a aerao dos vasos. B- vasos antes da utilizao do varal. C- vasos com o uso do varal, aps as plantas estarem com tamanho maior.

Devido ao tombamento das plntulas, foi realizado um apoio para as mesmas, com copos de caf, alm da armao com barbante, conforme detalhe na figura abaixo.

Figura XX A- detalhe do copo de plstico, utilizado para apoio da planta. B- detalhe do varal para segurar as plntulas, evitando o tombamento.

Para a soluo nutritiva, esta foi calculada conforme metodologia de Ruiz, sendo que, para os micronutrientes, foram feitas as seguintes solues estoque:

66
Tabela 3 Sais utilizados para obteno de soluo estoque para micronutrientes, e suas respectivas concentraes.

Sal H3BO3 MnCl24H2O ZnSO47H2O CuSO45H2O (NH4)6Mo7O244H2O Fe-EDTA

Concentrao 19,0 mol/L 7,0 mol/L 2,0 mol/L 0.5 mol/L 0,086 mol/L 40 mol/L

Para as solues estoques de macronutrientes, estas foram preparadas conforme tabela que segue.
Tabela XX Sais utilizados para obteno de soluo estoque para macronutrientes, e suas respectivas concentraes.

Soluo Completa

Sem N

Sem K

Sem Ca

Sem Fe Sem B

Sal Concentrao Quantidade KNO3 2 mmol/L 101 g/L Ca(NO3)2.4H2O 1,7 mmol/L 200,6 g/L NH4H2PO4 0,8 mmol/L 46 g/L MgSO4.7H2O 0,2 mmol/L 24,6 g/L K2HPO4 0,8 mmol/L 34,8 g/0,5L KCl 0,389 mmol/L 7,25 g/0,5L CaCl2 (99%pureza) 1,7 mmol/L 47,175 g/0,5L MgSO4.7H2O 0,2 mmol/L 12,3 g/0,5L Ca(NO3)2.4H2O 1,7 mmol/L 100,3 g/0,5L NH4H2PO4 0,8 mmol/L 23,0 g/0,5L Mg(NO3)2.6H20 0,2 mmol/L 12,815 g/0,5L (NH4)2SO4 0,2 mmol/L 6,6 g/0,5L NH4NO3 0,625 mmol/L 25 g/0,5L KNO3 2 mmol/L 50,5 g/L NaPO4 2 mmol/L 23,6 g/L Mg(NO3)2.6H20 0,8 mmol/L 12.815 g/L (NH4)2SO4 0,2 mmol/L 6.6 g/L NH4NO3 1,7143 mmol/L 34,286 g/L Soluo completa sem FeEDTA Soluo completa com a de micronutrientes sem o Boro

67 Sendo que, para o presente ensaio, utilizaram-se as seguintes propores das solues estoque para cada tratamento: a) Soluo Completa 16 mL - KNO3 16 mL - CaNO34H2O 16 mL - NH4H2PO4 16 mL - MgSO47H2O 08 mL - Soluo Completa de micronutrientes 3,7 mL - Ferro b) Soluo Completa sem aerao 16 mL - KNO3 16 mL - CaNO34H2O 16 mL - NH4H2PO4 16 mL - MgSO47H2O 08 mL - Soluo Completa de micronutrientes 3,7 mL - Ferro c) Soluo sem Fe 16 mL - KNO3 16 mL - CaNO34H2O 16 mL - NH4H2PO4 16 mL - MgSO47H2O 08 mL - Soluo Completa de micronutrientes

d) Soluo sem B 16 mL - KNO3 16 mL - CaNO34H2O

68 16 mL - NH4H2PO4 16 mL - MgSO47H2O 08 mL - Soluo de micronutrientes sem boro 3,7 mL - Ferro e) Soluo sem N 16 mL - K2HPO4, 16 mL - KCl, 16 mL - CaCl2 16 mL - MgSO47H2O 08 mL - Soluo Completa de micronutrientes 3,7 mL - Ferro f) Soluo sem K 16 mL - CaNO34H2O, 16 mL - NH4H2PO4, 16 mL - Mg(NO3)26H2O, 16 mL - (NH4)2SO4 16 mL - NH4NO3 08 mL - Soluo Completa de micronutrientes 3,7 mL - Ferro

g) Soluo sem Ca 16 mL - KNO3, 16 mL - Na3PO4,

69 16 mL - Mg(NO3)26H2O, 16 mL - (NH4)2SO4 16 mL - NH4NO3 08 mL - Soluo Completa de micronutrientes 3,7 mL - Ferro

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5 RESULTADOS E DISCUSSO

5.1 ANLISE MINERAL

Os teores de protenas, nitrognio, cobre e ferro, no diferiram significativamente entre si a 5% de probabilidade (TABELA). Pode-se observar que para batata e milho, tm-se valores negativos de cobre, devido a possvel contaminao do extrato, tanto pelo mal condicionamento ou turgidez visvel da amostra. Ainda, o fato de no haver, estatisticamente, diferena significativa, pode ser devido ao alto CV, o qual admite uma grande variabilidade entre as mdias, o que traz uma baixa preciso dos dados analisados.
Tabela: Valores mdios de nutrientes presentes em milho, seringueira, batata e soja.

Espcie Milho Seringueir a Batata Soja CV (%)

Protena Nitrognio (%) (%) 2,71 a 0,43 a 3,33 a 2,92 a 4,79 a 35,58 0,53 a 0,47 a 0,77 a 35,6

Clcio Fsforo Cobre Ferro Alumnio (%) (%) (ppm) (ppm) (ppm) 0,04 c 0,17 b -0,0340 a 2,0527 a 20,65c 0,64 a 0,04 c 0,10 b 5,27 0,15 b 0,0327 a 3,1537 a 0,12 c -0,1143 a 2,3267 a 0,29 a 0,5913 a 6,6607 a 5,29 271,34 78,99 50,11 b 10,98 d 87,15 a 5,94

Mdias com letras minsculas iguais nas linhas, no diferenciam entre si pelo teste de Tukey a 5%.

Sabe-se que o nitrognio e o ferro, so classificados como macronutrientes, devido a sua maior exigncia no metabolismo vegetal, sendo o primeiro relacionado aos teores de protenas. A composio de macro e micronutrientes do tecido foliar esto diretamente ligadas absoro, translocao e ao transporte a longa distncia desses elementos. Para o clcio, seringueira apresentou maiores porcentagens, seguido da soja, milho e batata tiveram menores valores, sendo esse mineral tambm considerado um macronutriente.

71

De acordo com as anlises estatsticas, os teores de alumnio, variaram significativamente dependendo do tipo de tecido analisado. Esse nutriente considerado txico quando em excesso na planta. 5.2 ESTUDO DAS HIDROPONIA DEFICINCIAS NUTRICIONAIS DE PLANTAS EM

As plantas submetidas nutrio mineral completa (FIGURA), apresentaram crescimento e desenvolvimento superior aos demais tratamentos, tendo em vista que o metabolismo da mesma no sofreu estresses relacionados a baixa fertilidade do meio. Pode-se observar, entretanto, caractersticas relacionadas a variabilidade gentica e ataque de pequenos insetos.

Figura ?: Plantas de feijo submetidas ao tratamento com soluo nutritiva completa. (A) e (B) 17 dias aps o inicio do tratamento com elemento (C) e (D) 30 dias aps o incio do tratamento.

5.2.1 Alteraes morfolgicas decorrentes da hipoxia As plntulas condicionadas a esse tratamento, receberam a disponibilidade de todos os nutrientes, porm no tiveram suas razes aeradas (FIGURA), apresentando assim adaptaes morfo-anatmicas nas razes, pelo desenvolvendo razes adventcias.

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Figura ?: Plantas de feijo submetidas ao tratamento com soluo nutritiva completa sem aerao. (A) e (B) 17 dias aps o inicio do tratamento com elemento (C) e (D) 30 dias aps o incio do tratamento.

Tal adaptao garante a disponibilidade de oxignio para o desenvolvimento da planta, apesar da mesma apresentar murcha visvel nas folhas e leve amarelecimento nas mesmas. Ainda apresentou ocorrncia de lenticelas hipertrofiadas, as quais podem ser importantes na difuso de oxignio para as razes (Pimenta et al. 1996, Medri et al. 1998) e na eliminao de metablitos potencialmente txicos (Medri et al. 1998).

5.2.2 Alteraes morfolgicas decorrentes deficincia de nutrientes

As plantas submetidas aos tratamentos com omisso de nutrientes na soluo nutritiva apresentaram sinais de deficincia nas folhas, devido o nvel exigido para o crescimento vegetal, ser nulo. Os efeitos da ausncia do nutriente comearam a ser mais bem visualizados aos 19 dias aps o incio dos tratamentos, para todos os elementos faltantes. Encontra-se a seguir, os sintomas observados pelos autores do presente relatrio, sabe-se, porm que, devido a anlise ser visual, podero ser observadas caractersticas que, para os outros grupos, as mesmas no foram visualizadas, tendo em vista a individualidade da observao e concluso dos resultados, quando estes se baseiam apenas pelo mtodo da observao.

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a) Sintomas visuais da deficincia de ferro A falta do elemento causou, aps 15 dias, a alterao na colorao das folhas novas (FIGURA), que apresentaram nervuras na tonalidade verde, formando um contraste com o resto amarelado do limbo. Com a severidade da deficincia e queda dos nveis de clorofila, as folhas tornaram-se totalmente clorticas. As folhas inferiores e/ou medianas apresentaram cor e tamanho normais. O sistema radicular mostrou-se com tonalidade marrom ou ferruginosa.

Figura ?: Plantas de feijo submetidas ao tratamento com soluo nutritiva sem ferro. (A) e (B) 17 dias aps o inicio do tratamento com elemento (C) e (D) 30 dias aps o incio do tratamento.

b) Sintomas visuais da deficincia de clcio A omisso de clcio acarretou, decorrido 15 dias do incio do tratamento, anormalidades visveis nas folhas mais novas (FIGURA), percebendo-se, inicialmente, a ponta do limbo foliar recurvada, e a folhagem apresentando colorao verde normal, porm pequenas manchas clorticas puderam ser visualizadas transcorrido um tempo maior no tratamento.

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Figura ?: Plantas de feijo submetidas ao tratamento com soluo nutritiva sem clcio. (A) e (B) 17 dias aps o inicio do tratamento com elemento (C) e (D) 30 dias aps o incio do tratamento.

A falta de clcio caracterizada pela reduo do crescimento de tecidos meristemticos, sendo observada, inicialmente, nas extremidades em crescimento e nas folhas mais jovens. Com a evoluo dos sintomas, as plantas sofreram reduo no crescimento pela paralisao do desenvolvimento apical.

c) Sintomas visuais da deficincia de nitrognio As plantas de feijo em soluo nutritiva, com omisso de nitrognio (FIGURA), manifestaram sintomas de deficincia do nutriente aps 15 dias do incio dos tratamentos. Verificou-se, primeiramente, que as folhas mais velhas, a partir da regio basal, perdiam gradualmente a colorao verde para uma tonalidade verde-plida, distribuindo-se uniformemente no limbo, pecolo e nervuras (clorose em forma de V). O nitrognio absorvido facilmente distribudo na planta via floema, na forma de aminocidos. Quando o suprimento insuficiente, o nitrognio das folhas velhas mobilizado para os rgos e folhas mais novas. Conseqentemente, verificam-se sintomas de clorose nas plantas deficientes em nitrognio, principalmente nas folhas velhas. A colorao amarelada est associada menor produo de clorofila e com modificaes na forma dos cloroplastos (Malavolta et al. 1997).

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Figura ?: Plantas de feijo submetidas ao tratamento com soluo nutritiva sem nitrogenio. (A) e (B) 17 dias aps o inicio do tratamento com elemento (C) e (D) 30 dias aps o incio do tratamento

Com a intensidade da deficincia, todas as folhas ficaram amareladas e sem brilho, ocorrendo queda prematura das folhas mais velhas. Observou-se, tambm, reduo na altura e dimetro do caule, o qual apresentou-se levemente lenhoso devido ao acmulo de carboidratos.

d) Sintomas visuais da deficincia de potssio A deficincia de potssio caracterizou-se, aos 14 dias, com um esverdeamento intenso da folhagem (FIGURA), com pequena reduo no tamanho das folhas novas. Nas folhas mais velhas, a partir do pice, observou-se clorose marginal, avanando em direo parte central por entre as nervuras, inicialmente de colorao verde-amarela, para posteriormente marrom, como conseqncia da necrose. Com a severidade da deficincia, ocorreram a queda das folhas basais e estabilidade no crescimento.

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Figura ?: Plantas de feijo submetidas ao tratamento com soluo nutritiva sem potssio. (A) e (B) 17 dias aps o inicio do tratamento com elemento (C) e (D) 30 dias aps o incio do tratamento

e) Sintomas visuais da deficincia de boro Os efeitos da ausncia do nutriente comearam a ser mais bem visualizados aos 15 dias aps o incio do tratamento (FIGURA). As folhas mais novas e mais estreitas do que as consideradas normais apresentaram leve clorose internerval, evoluindo do centro para os bordos da folha. Em seqncia, essas folhas tornaram-se plidas, exibindo, posteriormente, um reticulado escuro das nervuras, que se destacavam sobre um fundo levemente clortico. Essas folhas se encurvaram e se retorceram para baixo, ocorrendo, em seguida, uma acentuada queda dos primeiros pares, mas persistindo as folhas mais velhas.

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Figura ?: Plantas de feijo submetidas ao tratamento com soluo nutritiva sem boro. (A) e (B) 17 dias aps o inicio do tratamento com elemento (C) e (D) 30 dias aps o incio do tratamento

As plantas deficientes em boro apresentaram folhas menores, de textura pergaminhosa e mais espessa em relao das folhas normais. Foi observado, ainda, ao longo da nervura central, a formao de algumas protuberncias, de origem corticosa. Quanto ao sistema radicular, observou-se a diminuio das razes, com leses necrticas escurecidas, principalmente nas extremidades, alm da colorao castanho por toda sua extenso. Assim, comparando todos os tratamentos, ao fim da conduo do experimento (FIGURA), pode-se visualizar as deficincias nutricionais caractersticas de cada elemento, sendo a deficincia dos mesmos e a localizao dos sintomas de deficincia estarem diretamente relacionada com a mobilidade relativa dos elementos qumicos.

Figura: Plantas de feijo, 30 dias aps o inicio dos tratamentos com elementos faltantes. (A) soluo nutritiva completa, (B) soluo nutritiva completa sem aerao; (C) soluo nutritiva sem ferro; (D) soluo nutritiva sem clcio; (E) soluo nutritiva sem nitrognio; (F) soluo nutritiva sem potssio e (G) soluo nutritiva sem boro.

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O efeito geral mais importante das deficincias minerais a reduo do ritmo de crescimento das plantas, mas o efeito mais visvel, geralmente, o amarelecimento ou clorose das folhas causado pelo decrscimo da sntese da clorofila. A clorose est mais freqentemente associada carncia de N. Entretanto, tambm, causada pela deficincia de Fe, Mn, Mg, K, etc., assim como por fatores ambientais desfavorveis como excesso ou falta de gua, temperatura inadequada, substncias txicas e excesso de minerais. As folhas so os mais sensveis indicadores de deficincias.

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6 CONCLUSES

Diante dos resultados obtidos atravs dos extratos provenientes da digesto nitroperclrica e sulfrica, pode-se concluir, atravs da anlise mineral que:

Em relao ao cultivo em soluo nutritiva com elementos faltantes, conclui-se que: A falta de ferro, clcio, nitrognio, potssio e boro, na soluo nutritiva resulta em alteraes morfolgicas, traduzidas como sintomas caractersticos de deficincia nutricional de cada nutriente. A hipoxia acarreta em mudanas morfo-anatmicas, caractersticas para a adaptao da planta a determinado meio.

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