UNIVERSIDAD CATLICA DEL MAULE FACULTAD DE CIENCIAS BASICAS BIOLOGIA CELULAR

LABORATORIO PRACTICO N 2 FROTIS DE SANGRE HUMANA INTRODUCCIN Un frotis de sangre nos brinda informacin acerca del nmero y forma de las clulas sanguneas. El nmero promedio de glbulos rojos en el hombre es de 5.000.000 por mm3 de sangre. La cifra media de glbulos blancos es de 7.000 a 8.000 por mm3. Hay por tanto un glbulo blanco por cada 600 700 glbulos rojos. El nmero de plaquetas es de unas 250,000 por mm3. En frotis podremos observar: Elementos anucleados: Eritrocitos: Sin ncleo, con citoplasma rosado Plaquetas: Elementos muy pequeos con zona central granulosa y periferia hialina y dbilmente basfila. Elementos nucleados: Polimorfonucleados (Granulocitos) Eosinfilos: Citoplasma con granulaciones gruesas y rojizas. Neutrfilos: Citoplasma con granulaciones finas abundantes y violceas. Generalmente son los ms numerosos. Basfilos: Citoplasma con granulaciones de tamao desigual y color pardo oscuro. Normalmente son los ms escasos. Mononucleados (Agranulocitos). Linfocito: Ncleo redondeado u oval (a veces algo escotado) muy cromtico y citoplasma basfilo sin granulaciones o con pocas granulaciones azurfilas. Monocitos: Son los de mayor tamao, poseen ncleo redondeado u oval (frecuentemente escotado o hendido) con cromatina suavemente teida. Citoplasma con basofilia dbil y numerosas granulaciones finas azurfilas.

OBJETIVOS Obtener monocapas de clulas mediante frotis para tincin. Desarrollar habilidades de manipulacin para la obtencin de frotis de sangre teidos y fijados. Reconocer y caracterizar poblaciones de clulas sanguneas.

ACTIVIDADES Observacin de una muestra de frotis de sangre humana. Para realizar la preparacin debe seguir el siguiente procedimiento; 1. Limpie dos portaobjetos con etanol 70%. Seque ambos elementos con un trozo de toalla nova evitando dejar rastros de grasa o pelusas. 2. Aproveche el etanol y limpie la yema de su dedo, cuidadosamente con la punta de una aguja estril o valindose de un estilete, pinche la piel. Apriete hasta obtener una gota. 3. Ponga una gota de sangre en el extremo izquierdo del portaobjetos o derecho si usted es zurdo. 4. Tome el otro portaobjetos y formando un ngulo de 45 con el portaobjetos que tiene la muestra, aplaste la gota y cuando vea que sta se ha extendido por todo el borde del cristal, arrastre la muestra hacia el lado opuesto del portaobjeto. 5. De esta forma habr obtenido una monocapa de clulas 6. Seque la preparacin a temperatura ambiente durante 3 minutos. Puede ayudarse de movimientos para airear y secar ms rpido. 7. Fije el preparado con metanol 100% y djelo secar a temperatura ambiente. 8. Tia la muestra con la solucin de Giemsa segn el siguiente protocolo:

Agregue 3 gotas de la solucin Giemsa sobre el preparado y mueva el portaobjeto de manera que quede totalmente cubierto. Incube en la solucin de Giemsa durante 2 - 5 minutos. Lave la muestra con agua y luego etanol. Deshidrate la muestra utilizando una batera de alcoholes, cada vez menos hidratado, finalmente ponga xilol. Fije la muestra cubrindola con un cubreobjetos provisto de una gota de entelln. Presione cuidadosamente el cubreobjeto de manera que el entelln quede disperso homogneamente. Deje reposar unos minutos, siempre en posicin horizontal. Observe su frotis de sangre

OBSERVACIONES

H. Monzn G.