Biorremediación estimulada por efluentes cloacales tratados de suelos contaminados con hidrocarburos.

Autor: Leandro Pellini.
Directora de Tesis: Lic. María Eugenia Parolo. Co - Directora de Tesis: Bioq. Irene E. Zajonskovsky. Tutor: Ing. Juan D. Vasallo

Escuela Superior de Salud y Ambiente Universidad Nacional del Comahue Lugar de Trabajo: Laboratorios de la Escuela Superior de Salud y Ambiente – Departamento de Química de la Facultad de Ingeniería. Universidad Nacional del Comahue. 2006

Agradecimientos
María Eugenia Parolo, Irene E. Zajonskovsky: Directoras del alumno en el presente trabajo. Lelia McKormack: Coordinadora de los laboratorios Nº 1 y Nº 2 de la Escuela Superior de Salud y Ambiente, por su invaluable colaboración. Gabriela Paladino: Compañera de laboratorio a lo largo de todo el trabajo. Juan D. Vasallo: Tutor del alumno durante la presente investigación. A la Universidad Nacional del Comahue: Porque me permitió cambiar mi realidad.

Resumen / Abstract Introducción
1.1. Propiedades y Composición del Suelo 1.2. Hidrocarburos 1.3. Productos Derivados del Petróleo 1.4. Efecto de los Hidrocarburos en los Seres Vivos 1.5. Actividad Hidrocarburífera en la Región 1.6. Contaminación del Suelo 1.7. Remediación de Suelos Contaminados con Hidrocarburos 1.8. Técnicas de Remediación 1.9. Métodos Analíticos para la Determinación de Hidrocarburos Objetivos – Fundamentación - Hipótesis Materiales y Métodos 1.10. Características del área 1.11. Obtención del Suelo y Pretratamiento 1.12. Enmienda del Suelo Correspondiente al Tratamiento EST 1.13. Fortificación del Suelo con Hidrocarburos 1.14. Diseño Experimental

1.15. Determinación de Microorganismos Mesófilos Heterótrofos Totales Resultados y Discusión 1.16. Análisis Físico-Químico del Suelo Estudiado. 1.17. Niveles de Hidrocarburos Totales de Petróleo en el Suelo Seleccionado para el Estudio. 1.18. Características Químicas y Microbiológicas del Efluente Utilizado. 1.19. Niveles de Hidrocarburos Totales de Petróleo en los Tratamientos EFL y EST. 1.20. Bacterias Heterótrofas Totales en los Tratamientos EST y EFL Conclusiones Bibliografía Anexos 1.21. Normativa Internacional Aplicable 1.22. Normativa Provincial Relacionada 1.23. Tabla de McCrady para Tres Replicas por Dilución 1.24. Análisis Estadístico

RESUMEN
El suelo es un sistema complejo que se forma en la superficie del terreno, inicialmente por la alteración física y química de las rocas y luego también por la influencia de los seres vivos, desarrollando una estructura en niveles superpuestos, el perfil, y una composición química y biológica definidas. Se lo considera contaminado o en proceso de contaminación, cuando sus componentes químicos y biológicos están agredidos por sustancias ajenas a él, incompatibles con su estado de equilibrio. Años atrás, las malas prácticas empleadas en la explotación de hidrocarburos y la ausencia de un marco legal apropiado, afectaron la calidad del suelo. En la actualidad la principal causa de contaminación del suelo con estas sustancias, se debe principalmente a situaciones imponderables. Estas circunstancias, originan la necesidad de recomponer el suelo contaminado siendo la biorremediación, una de las técnicas más empleadas para su restitución. El objetivo del presente trabajo es comparar dos tratamientos de biorremediación, el primero es un tratamiento a través de técnicas reconocidas o tradicionales, y en el segundo tratamiento, la humedad y los nutrientes inorgánicos son aportados por efluentes cloacales tratados. Según los resultados obtenidos, se puede concluir que un tratamiento de biorremediación en el cual se aportan los nutrientes inorgánicos a través de efluentes cloacales tratados, no es más eficiente que un tratamiento de biorremediación fertilizado con productos comerciales y humedecido con agua pura

ABSTRACT
The soil is a complex system formed on the surface of the land, initially by the physic and chemic alterations of de rocks and by the influence of live beings, developing a structure of superposed layers. It’s considered contaminated or in contamination

process, when it’s biological and chemical components are attacked by substances detached from it, which are incompatible with it balance status. Years ago, bad practices employed in the hydrocarbon exploitation and the absence of an appropriate legal matrix, damaged soil quality. Today the first source of soil contamination by these substances is mainly because of imponderable situations. Those circumstances originate the necessity to recompose the contaminated soil, being bioremediation one of the most employed techniques for its restitution. The aim of the present work is to compare two bioremediation treatments, one of those is a treatment through the recognized or traditional techniques, and in the second treatment the moisture and the inorganic nutrients are incorporated by refined sewage effluents. Depending on the obtained results, those allows to conclude that a bioremediation treatment in that inorganic nutrients are incorporated by refined sewage effluents, is not more efficient that a bioremediation treatment fertilized by commercial products and moistured with fresh water

1.1. Propiedades y Composición del Suelo
El suelo está constituido por tres fases: la fase sólida, compuesta a su vez por la fracción mineral y la orgánica; la fase líquida; y la gaseosa; que ocupa el espacio que la fase líquida deja libre en la porosidad presente en el suelo. Como consecuencia de estas tres fases, el suelo presenta determinadas propiedades que dependen de su composición. La fase líquida constituye el medio ideal que facilita la reacción entre las tres fases, pero también se producen reacciones dentro de cada una de ellas. En un promedio general la materia orgánica constituye un 5% del suelo, el agua 25% mientras que la fracción mineral está representada en un porcentaje del 45%. Los minerales constituyen la base del armazón sólido que soporta el suelo. Cuantitativamente en un suelo normal la fracción mineral representa de un 45 a un 49% del volumen del mismo, pero dentro de la fase sólida constituyen, para un suelo representativo, del orden del 90 al 99% (el 1-10% restante corresponde a la materia orgánica). La fase sólida, muy heterogénea, representa la fase más estable del suelo y la más ampliamente estudiada. La fase líquida se caracteriza por su variabilidad en el espacio y el tiempo, tanto a nivel cualitativo como cuantitativo, esta variabilidad está condicionada por las propiedades específicas de esa fase líquida, por las características de los espacios en que se encuentra y por las propiedades del suelo que la sustenta. Esta fase líquida del suelo es

fundamentalmente una solución acuosa, y por ello, y al contener sustancias en solución, se le llama solución del suelo. Las soluciones del suelo proceden de la alteración de los minerales y de la materia orgánica. El agua ejerce importantes acciones, tanto para la formación del suelo (interviene decisivamente en la meteorización física y química, y translocación de sustancias) como para su fertilidad. La fase líquida circula a través del espacio poroso, quedando retenida en los huecos del suelo; está en constante competencia con la fase gaseosa. Los cambios climáticos estacionales, y concretamente las precipitaciones atmosféricas, hacen variar los porcentajes de cada fase en cada momento. El agua que se mueve por la fuerza de gravedad se denomina “agua libre” o “agua gravitacional”, y se encuentra en los poros más grandes del suelo, que frecuentemente están llenos de aire. Parte del agua se retiene contra la fuerza gravitacional como resultado de la atracción entre el agua y los otros constituyentes. No toda el agua del suelo es aprovechable biológicamente y sólo una parte de esta poción retenida en contra de la atracción gravitacional puede ser usada por los sistemas vivientes. La fase gaseosa es una mezcla de gases que ocupa los espacios que la fase líquida deja libres en la porosidad del suelo. Debido a sus características intrínsecas como fluido, la fase gaseosa presenta una marcada similitud con la fase líquida, sobre todo en lo que se refiere a su dinámica, aunque tiene algunas diferencias con respecto a esta. La atmósfera del suelo está condicionada por la dinámica de los procesos biológicos que se producen en relación a ella, y que están determinados por el consumo de oxígeno y por la producción de CO2 que realizan los microorganismos y las plantas durante sus procesos de oxidación (Campbell, 1987). En cuanto a la textura el suelo está constituido por partículas de muy diferente tamaño. El término textura se usa para representar la composición granulométrica del suelo. Conocer esta granulometría es esencial para cualquier estudio. Para clasificar la textura del suelo, básicamente todas aceptan los términos de grava, arena, limo y arcilla, hay diferencia en los valores de los límites establecidos para definir cada clase. Cada término textural se corresponde con una determinada composición cuantitativa de arena, limo y arcilla (Figura Nº 1). En los términos de textura se prescinde de los contenidos en gravas; se refieren a la fracción del suelo que se estudia en el laboratorio de análisis de suelos y que se conoce como tierra fina.

agitación lenta. mientras que la sedimentación en fase acuosa es el método normal de separación de los limos y de las arcillas. En esta fase previa existen diversos métodos para separar a las partículas del suelo. agitación rápida. dispersión de las arcillas con hexametafosfato sódico o amoníaco).Figura Nº 1: Triángulo de textura a partir del cual se obtienen los nombres de las clases de textura. ataque ácido de los carbonatos y compuestos de Fe con ClH. El pH influye en las propiedades físicas y químicas del suelo. Como los agentes agregantes pueden ser muy distintos. Si se necesita subfraccionar la fracción de arcilla se ha de recurrir a la centrifugación. aluminio y manganeso. por ello antes de proceder a la extracción de las diferentes fracciones hay una fase previa de preparación de la muestra. por ejemplo. Entre otros aspectos. lavado y cocción) y otras son técnicas químicas (oxidación de la materia orgánica con agua oxigenada. el pH del suelo influye en el nivel de toxicidad de algunos elementos como. También influye decisivamente en procesos microbiológicos de tanta trascendencia como son la mineralización y humificación de los restos vegetales . ultrasonidos. Algunos son métodos físicos (trituración suave. siendo por lo tanto necesario destruir la agregación para separar las partículas individuales. La extracción final de las fracciones se realiza por tamizado para las arenas. Las partículas no están sueltas sino que forman agregados. normalmente no sirve uno solo de estos métodos sino que se monta una cadena de tratamientos.

1998). Hidrocarburos El petróleo crudo contiene una gran variedad de elementos combinados de diferentes formas.-Hidrocarburos saturados: son la clase principal presente en el petróleo. oxígeno y nitrógeno y constituyentes metálicos en concentraciones relativamente bajas.incorporados. o sea hay dos tipos de acidez.2. En los suelos. Están compuestos por enlaces simples C-C. Las moléculas pueden encontrarse en distintas configuraciones. 1994) 1. Alcanos e isoalcanos: responden a la siguiente fórmula: Contienen solamente enlaces simples entre los átomos de carbono. Ejemplos: . Pueden ser de cadena lineal o ramificados (el prefijo n corresponde a los alcanos con configuración estructural de cadena lineal). A pesar de la complejidad de este grupo de compuestos se los puede clasificar en dos grandes grupos: los hidrocarburos y los compuestos que no entran en dicha categoría (TPH CRITERIA WORKING GROUP –TPHCWG-. Los principales constituyentes son carbono e hidrógeno que en forma combinada componen los hidrocarburos. insaturados y aromáticos. ejerciendo una poderosa influencia sobre la fertilidad del suelo. activa o real (en solución) y de intercambio o reserva (para los adsorbidos). La industria del petróleo se refiere a ellos como parafinas e isoparafinas. Si se eliminan protones de la solución se liberan otros tantos protones adsorbidos. nitrógeno). (Alexander. con los demás enlaces restantes saturados con átomos de H. a. Además están presentes otros compuestos orgánicos que contienen azufre. Como consecuencia el suelo muestra una fuerte resistencia a cualquier modificación de su pH. los iones H+ están en la solución como también en el complejo de intercambio. Es imposible identificar todos los componentes. ambas están en equilibrio dinámico. y en la dinámica y transformaciones de numerosos nutrientes (por ej. Los hidrocarburos se clasifican en: hidrocarburos saturados. está fuertemente tamponado. por ello los compuestos del petróleo son caracterizados en términos de rangos según el punto de ebullición y número aproximado de carbonos. respectivamente.

. y son producidos principalmente en los procesos de craqueo en la producción de moléculas pequeñas a partir de las más grandes.Cicloalcanos: son compuestos cíclicos con la siguiente fórmula general: Estos compuestos son hidrocarburos saturados donde los carbonos forman estructuras cíclicas. se los llama dienos conjugados. ramificados o cíclicos y su fórmula general es: Estos compuestos tienen uno o más enlaces dobles entre los átomos de carbono. La industria del petróleo se refiere a ellos como naftenos o cicloparafinas. Estos compuestos no se encuentran en el petróleo crudo.Hidrocarburos no saturados (o insaturados): esta clase de compuestos tiene al menos dos átomos de carbono en la molécula unidos por un doble o triple enlace (doble para alquenos y triple para alquinos). Alquenos/olefinas: pueden ser lineales. Se forman estos enlaces múltiples cuando no hay suficiente hidrógeno para saturar la molécula. A los alquenos que contienen dos dobles enlaces se los denomina dienos y cuando los dos dobles enlaces están separados por un enlace simple. Ejemplos: . Ejemplos: b.

como benceno. Los compuestos aromáticos son contaminantes comunes en sitios afectados por productos de petróleo. Esto produce sitios de carga positiva y negativa dentro de la molécula. Generalmente. esto le otorga estabilidad química a la molécula. Los electrones se encuentran deslocalizados (participando en varios enlaces). Los monoaromáticos. tolueno. lo cual le otorga a la misma una moderada polaridad. Las nubes de electrones que rodea a las moléculas de los anillos pueden deformarse por la carga de las moléculas adyacentes. en los cuales los electrones son compartidos entre varios átomos de carbono. Los enlaces C-C son enlaces de resonancia. a medida que la polaridad aumenta. Cada carbono está unido a un hidrógeno. Aquellos que tienen como base más de dos anillos fusionados son los hidrocarburos aromáticos policíclicos (HAPs). Los compuestos monoaromáticos poseen un anillo de benceno. pudiendo estar uno o más hidrógenos sustituido por grupos alquilo. se incrementa el punto de ebullición y la solubilidad en agua. y xileno (BTEX) tienen una solubilidad en agua significativa y son móviles en el ambiente.Alquinos/acetilenos: pueden ser lineales o ramificados y responden a la siguiente fórmula general: Ejemplos: c. Todos los tipos de petróleo crudo y casi todos los productos derivados contienen hidrocarburos aromáticos. La molécula es plana y simétrica con nubes de electrones por debajo y sobre el plano de la molécula. Los diaromáticos tienen como base dos anillos bencénicos fusionados. Este anillo contiene seis carbonos. Esta polaridad determina la interacción de las moléculas entre ellas y con el agua. Tienen como base la estructura de anillo de benceno..Hidrocarburos Aromáticos: son una clase especial de hidrocarburos no saturados. Muchos HAPs que se .

Por ejemplo. Hay distintos tipos de isómeros. En general. Dentro de estos compuestos los que predominan son los aromáticos heterocíclicos con azufre. 1998). Generalmente. a medida que el número de carbonos aumenta. en menor cantidad compuestos organometálicos y sales inorgánicas. Dentro de cada serie las propiedades físicas de los compuestos varían con el número de átomos de carbono. azufre y nitrógeno. Ejemplos: . particularmente en suelo y sedimentos. especialmente los que contienen oxígeno. 1998). la persistencia de los hidrocarburos en el ambiente se incrementa con el aumento del punto de ebullición. como por ejemplo el grupo metileno (CH2). se incrementa significativamente el número de isómeros posibles. hay series homólogas. Se encuentran principalmente concentrados en las fracciones de destilación más pesadas y los residuos provenientes de la refinación. Los isómeros son compuestos que tienen la misma fórmula elemental pero tienen configuraciones estructurales diferentes. un alcano con seis átomos de carbono tiene cinco posibles isómeros. Ejemplos: Dentro de cada familia y sub-familia de hidrocarburos. Otra característica de los hidrocarburos es que tienen una gran cantidad de isómeros.encuentran en petróleo crudo y sus productos pueden ser contaminantes persistentes. Por ejemplo. Se los llama también asfaltenos y resinas (TPHCWG. mientras que unos de diez carbonos posee setenta y cinco (TPHCWG. Otros Compuestos: el petróleo crudo contiene cantidades significativas de compuestos que no entran dentro de la categoría de hidrocarburos. Están presentes también. A cada miembro de la serie se lo llama homólogo y difiere del miembro adyacente en la serie por una unidad que se repite. hay un incremento de aproximadamente 20°C en el punto de ebullición por cada átomo que se suma en una cadena de los alcanos lineales.

eficiencia y vida útil. 1998). Productos Derivados del Petróleo Los productos del petróleo son tanto fracciones de destilación del crudo o mezclas de fracciones luego de un proceso de refinación. Algunos de estos PNA (principalmente estructuras de 4. siendo la gran mayoría compuestos aromáticos polinucleares (PNA). solventes. por lo que los PNA tanto en aceite lubricante virgen como usado no son la mayor fuente de preocupación. Tabla Nº 1: Rangos de punto de ebullición para las distintas fracciones del petróleo (McMILLEN et al. La composición de la base orgánica está formada de cientos de miles de compuestos orgánicos. Debido a que puede resultar extremadamente difícil identificar todos los componentes del petróleo. 5 y 6 anillos) son considerados cancerígenos como el benzopireno. La tabla I muestra los puntos de ebullición y rangos de número de carbonos para seis fracciones del petróleo crudo. 2001). Algunos de los productos son: gasolinas. naftas. Fracción Gasolina El aceite lubricante tanto para uso en automóviles e industrias.. Los aditivos Nafta Kerosene Diesel y fuel oil . combustible diesel. estos últimos utilizados para aumentar su rendimiento. kerosene. aceites lubricantes (TPHCWG. naftas de aviación.3. está compuesto en general (excepto en aceites sintéticos) por una base orgánica y aditivos. fuel oil.1. existen otros combustibles cuyas concentraciones de PNA son superiores. sin embargo. Los productos son utilizados para fines industriales o militares o en gran escala en numerosos productos de consumo. tanto el petróleo como sus derivados pueden ser caracterizados en términos de rangos según el punto de ebullición y el número aproximado de carbonos.

Existen dos tipos principales de crudos de petróleo: crudo parafínico y crudo nafténico. será degradado en sucesivas fases. son mezclas complejas de hidrocarburos y las características estructurales de cada grupo de compuestos. es decir. 2000). siendo en general mineralizada. En aceites para motor existen los monogrados que van del 0W hasta el 60 y en los multigrados desde el 5W – 50 hasta el 20W – 50. compuestos halogenados y trazas de metales (Ruíz. completamente convertida en dióxido de carbono (CO2) y agua. E. Los aceites lubricantes para motores a gasolina se pueden clasificar de acuerdo a dos criterios generales: según su viscosidad (SAE) y según requerimientos industriales (API). así como sus fracciones. nitrógeno. suele ser el escaso grado de solubilización del compuesto y su lenta liberación desde los poros del suelo. típicamente contienen constituyentes inorgánicos como azufre. por lo cual puede no alcanzarse la mineralización. 1.3. su alta composición en componentes parafínicos hace que su índice de viscosidad sea más elevado que el de el crudo nafténico (Pit & Quarry. frecuentemente un compuesto con una estructura química compleja. .de la base orgánica del aceite que pueden llegar a constituir hasta un 30 % en volumen del total de aceite virgen. El instituto Americano del Petróleo (API) clasifica los aceites para motor de acuerdo a sus características y a las condiciones exigidas por los lubricantes de automóviles. El crudo parafínico es el más usado para la fabricación de aceites lubricantes.. pero una porción de la molécula puede resultar recalcitrante (resistente a la biodegradación). Es necesario distinguir entre degradación y mineralización.1. La sociedad de ingenieros automotores SAE ha generado una clasificación que depende exclusivamente del grado de viscosidad del lubricante. y con la participación de diversos grupos de microorganismos y de enzimas.is físico-químico. Biodegradabilidad de los Componentes del Petróleo El petróleo crudo. La designación para aceites según API ha variado desde SA hasta SG que es el recomendado en la actualidad. El factor limitante para que lo propio ocurra con las fracciones más pesadas. Las bases lubricantes minerales son refinadas del crudo del petróleo. determinarán la velocidad y viabilidad de la degradación. 1991). sus características están determinada por la fuente de crudo y el proceso especifico de refinación usado por el fabricante. Usualmente la fracción más liviana de los hidrocarburos es más rápidamente degradada que la fracción más pesada.

el alcano lineal n-octano es degradado más fácilmente que el 3-etil hexano. Una excepción pueden ser los hidrocarburos poliaromáticos. azufre y átomos de oxígeno ligados a aromáticos policíclicos. los cuales pueden degradarse a productos más volátiles. 1998). altas concentraciones de alcanos con número de carbonos entre 5 y 10. La susceptibilidad a la degradación de los Cicloalcanos tiende a decrecer con el incremento del número de anillos en su estructura. 1991). son degradados con mayor facilidad que los compuestos que contienen más de un anillo en su estructura (Altamirano. estos grupos de compuestos tienden a ser muy recalcitrantes (Atlas. Los asfaltos y muchas resinas son compuestos por largas cadenas de hidrocarburos. los cuales incluyen. en general. elementos tales como níquel y vanadio. Los Cicloalcanos son menos biodegradables que sus isómeros de cadena lineal.En líneas generales. Una ramificación muy extensa ó compleja del alcano.. En general. En los HAP’s. Los alcanos lineales son los hidrocarburos del petróleo más biodegradables debido a la simplicidad de su estructura molecular. Sin embargo. 1990). La biodegradabilidad de los compuestos aromáticos disminuye con el incremento del número de anillos y del número de sustituyentes alquilos. Los alcanos de C20 a C40 tienen. en presencia de n-alcanos de C12 a C18 (Leahy & Colwell. muy estables químicamente. muy baja solubilidad en agua. Debido a su insolubilidad y a la presencia de grupos funcionales y extensivas estructuras de anillos. algunos estudios han publicado la eliminación de asfaltos por cometabolismo. aunque ambos tienen la misma fórmula empírica: C8H18 (Gibson. 1991). la degradación de alcanos origina productos muy oxidados. el aumento del peso molecular y del número de anillos. dificultando el acceso de los microorganismos degradadores (Brubaker. también puede significar una dificultad para su metabolización microbiana. estos últimos. las transformaciones aerobias hacen que el producto de la metabolización sea un compuesto menos volátil. como los BTEX. como resultado de la ruptura del anillo aromático y formación de compuestos de bajo peso molecular (Eweis et al. los cuales son menos volátiles que sus compuestos parentales (Eweis et al. . pueden ser inducidas por la presencia de compuestos aromáticos de bajo peso molecular. Los compuestos monoaromáticos. 2000). como el naftaleno ó el antraceno (Atlas. 1991). ya que como solventes lisan la membrana lipídica del microorganismo. las enzimas requeridas para la degradación de los HAP’s. a su vez. inhiben la biodegradación. que los protegen de los ataques microbianos. Pese a ello. No obstante. nitrógeno. 1984). lo cual interfiere en la degradación biológica. más soluble y más degradable que el original. 1999). produce una disminución en la solubilidad y volatilidad e incrementa la capacidad de adsorción a las partículas sólidas del suelo. pero más biodegradables que los Hidrocarburos Aromáticos Policíclicos (HAP’s) por ser. como es el caso de los HAP’s. Por ejemplo..

como Pb. Hg. Concentraciones menores a la concentración límite. aromáticos polinucleares y asfaltenos. de este modo. Una explicación de este fenómeno es que. alcanos cíclicos. Atlas & Bartha. . es frecuente la presencia de metales pesados acompañando a los residuos del petróleo. Ba. V y Se entre otros. determinan la siguiente secuencia de biodegradación. de probado efecto ecotóxico. a muy bajas concentraciones. si se encuentran presentes otros sustratos más fácilmente biodegradables. 1992. bencenos sustituidos en la posición meta. Zn. entre los factores estructurales que dificultan la biodegradación de los compuestos. Cd. para que este factor no signifique una razón de fracaso. monoaromáticos. pueden detener el proceso y el contaminante podría persistir en el ambiente por años. Ni. no considerando tóxicos a los hidrocarburos del petróleo en sí mismos.Generalizando. ó no inducen el sistema enzimático necesario para su metabolismo. Concentración y Toxicidad del Contaminante Dos parámetros primordiales que afectan significativamente la tasa de biodegradación de un contaminante son su concentración y toxicidad.2. 1990). una alta concentración del contaminante puede resultar tóxica para la microflora autóctona del suelo. 1994. es decir aquella concentración mínima suficiente como para soportar el crecimiento ó mantenimiento de la población microbiana degradadora. compuestos nalquil aromáticos de bajo peso molecular. cuando éstos componen el único contaminante presente y en la concentración adecuada (Norris et al. se encuentran: la presencia de grupos amino. es necesario establecer la concentración apropiada del contaminante en cuestión. Una posibilidad para reducir la concentración es agregar suelo no contaminado en el sitio a remediar. enlaces éter y cadenas muy ramificadas de carbonos. As. pesos moleculares muy altos ó cadenas de longitud larga.. en orden decreciente: n-alcanos. Los factores señalados. 1. Cu. 1981. alcanos de cadena ramificada. Sin embargo. un efecto de “dilución” del residuo. Por ello. Si la mezcla contaminante no es tóxica por sí misma para los microorganismos degradadores. sulfonatos y nitro. algunos de sus componentes pueden serlo. retardando la biodegradación de otros contaminantes ó fracciones presentes (Volke Sepúlveda. 1994). La toxicidad constituye otro factor clave en la biorremediación. 2002). 1994). la halogenación extensiva. pueden ser inhibitorias para el proceso de biodegradación (Ferrari et al. metoxi. alquenos ramificados. Algunos autores afirman que la toxicidad aparece debido a la presencia de alcoholes y solventes clorados. generando una disminución ó supresión en la actividad de degradación y/ó muerte de la comunidad (Alexander. Por otro lado. Diversos autores acuerdan en que concentraciones de hidrocarburos superiores al 10 %. Leahy & Colwell. logrando.. previamente a aplicar un tratamiento de biorremediación. los compuestos no generan suficiente energía para el crecimiento de los microorganismos.3.

menor movilidad y permanecen cerca de la fuente. modificándose su disponibilidad y movilidad (Beck. Por ejemplo. Cuando ya no existe suficiente volumen para que continué la migración. mientras que los más livianos migran hacia porciones más profundas del perfil debido a su mayor solubilidad en agua. Comúnmente. 1998). la gasolina.1. A medida que la cantidad de hidrocarburos disminuye. gaseosa y acuosa del suelo.4. Parte de la fracción aromática de un derrame de petróleo puede particionarse en el agua que está en contacto con la contaminación. 1. en general. un producto volátil se evaporará rápidamente en un derrame superficial. reduciendo la capacidad de la fase orgánica de desplazarse. Cuando los hidrocarburos entran en el suelo.3. volatilización. la fase no acuosa en el suelo es denominada saturación residual (API. 1998). La velocidad de transformación depende principalmente de las condiciones ambientales. transferencia a la fase acuosa. también actúan simultáneamente en la remoción de aromáticos volátiles como el benceno y tolueno. los aromáticos tienden a ser más solubles en agua que los alifáticos. mientras que el mismo producto liberado bajo una capa de arcilla cubierta con asfalto tenderá a evaporarse con lentitud (el proceso de intemperización no será detectado por años). Los cuerpos de agua contaminados por petróleo suelen estar enriquecidos por estos compuestos en relación con las otras fracciones de petróleo. Efecto de los Hidrocarburos en los Seres Vivos 1. etilbenceno y xileno) tienen una solubilidad en agua bastante significativa. Los procesos de volatilización. se produce una separación natural de los distintos constituyentes. También pueden unirse a las partículas del suelo. oxidación química y degradación microbiológica. además de los alcanos de bajo número de carbonos. entre otros. la fracción soluble en agua se difunde del punto de origen del derrame. Por difusión.3. lentamente. tolueno. los hidrocarburos pueden redistribuirse desde la superficie del suelo hacia el interior del mismo. 2003). En los Microorganismos . Además. Comportamiento de los Hidrocarburos en el Suelo El petróleo crudo y los productos del petróleo liberados al ambiente sufren con el tiempo procesos de intemperización. Dentro de los compuestos aromáticos. Estos procesos incluyen.4. Por ejemplo. 1997). utilizando cualquier medio que se lo permita (TPHCWG. la fracción del espacio poroso ocupada por los mismos disminuye. mientras que estos últimos tienden a ser más volátiles. Los compuestos de alto peso molecular tienen. Los conductos de comunicación entre los poros se tornan más pequeños y tortuosos. En el caso del suelo estos procesos pueden tener una variedad de escenarios potenciales. Otros hidrocarburos relativamente insolubles en agua pueden transferirse al agua a través de la adsorción a partículas suspendidas en la fase acuosa o como aglomeraciones de gotas muy pequeñas (microemulsión) (TPHCWG. debido a la exposición de la fase no acuosa a las fases sólida. cada proceso de intemperización afecta a las familias de hidrocarburos de manera diferente. al estar en contacto con agua. ya sea por disolución u otro mecanismo de remoción. los BTEX (benceno.1.

cuando esta concentración es de 1 a 5% de hidrocarburos en suelo. alterar la hidrofobicidad de su superficie celular para regular esta incorporación. ocasionando cambios en su fluidez y en la conformación de las proteínas de membrana.2. En estudios realizados también se detectó daño a membranas celulares. de la capa exterior. Además. La gravedad de los efectos detectados dependen tanto de los constituyentes y cantidad de producto. y en bacterias gram-negativas. A una concentración igual o menor al 1% (p/p) de hidrocarburos. Algunas plantas pueden catabolizar benzo(a)pireno. ya que cuando los HAPs son degradados metabólicamente se transforman en compuestos aún más tóxicos. su incorporación está relacionada con el coeficiente de partición octanol-agua del compuesto lipofílico.Dada la naturaleza hidrofóbica del área entre las monocapas de la membrana citoplasmática. no es extraño que las moléculas lipofílicas como los hidrocarburos se incorporen en ellas. es decir. Esto es un factor importante a tener en cuenta. carcinógenos y mutagénicos. se hacía una distinción entre los efectos agudos y crónicos. También este proceso ocurre en sedimentos y plantas acuáticas y por lo tanto puede impactar en especies herbívoras de peces y vida silvestre en general. Los hidrocarburos tienden a alojarse en el área hidrofóbica entre las monocapas de la membrana en las cadenas acilo de los fosfolípidos. Las plantas pueden acumular este grupo de compuestos. durante la descomposición microbiana. se espera que la reducción en la producción de las plantas sea muy baja o nula. reducción en la transpiración y aumento en la respiración. el sitio puede recuperarse naturalmente en un . Esto provoca la disrupción de la membrana y de las funciones de transducción de energía. Ha habido una diferenciación. 1997). Los hidrocarburos del petróleo pueden producir un efecto directo sobre las plantas al disolver los tejidos. y entre los efectos biofísicos y bioquímicos. En las Plantas En los primeros abordajes. La disminución en el crecimiento se atribuyó a la sofocación de las plantas causada por el desplazamiento del aire de los poros por los hidrocarburos o por la falta de oxígeno debido al aumento de la actividad microbiana. La bacteria puede formar biofilms en respuesta al estrés. De la misma forma. La inserción de los hidrocarburos en la membrana altera la estructura de la misma.4. Las transformaciones metabólicas hacia compuestos más peligrosos también pueden ocurrir a través de la degradación microbiana en el suelo o sedimentos (Irwin. Además. pueden ser utilizados mecanismos de reparación con gasto de energía para compensar las pérdidas en la integridad de la membrana a causa de la intrusión de los compuestos lipofílicos (Van Hamme et al. entre los efectos agudos y rápidos causados por aceites livianos y los efectos crónicos y lentos resultantes de los aceites pesados. de las condiciones ambientales y de las especies de plantas. 1. Un grupo a tener en cuenta al analizar la toxicidad de los hidrocarburos del petróleo es el de los hidrocarburos aromáticos policíclicos (HAPs). además. pueden encontrarse compuestos con azufre y manganeso en cantidades que resulten tóxicas. 2003).

y una inhalación severa de las emanaciones tóxicas puede producir graves problemas como inflamación. renal y del sistema nervioso central (Farré. 2001). Se descubrió que la fitodisponibilidad de mezclas complejas de hidrocarburos que tienen bajo coeficiente de reparto octanol-agua (Kow) es muy baja. que estén basados en el riesgo para la salud humana. el grado de intemperismo de los hidrocarburos. aún cuando el contenido de HTP es tan alto como 1%. disperso. oxígeno.transcurso de tiempo menor a un año (Deuel. que es una combinación de biodegradación. la forma en que se encuentre (emulsión. gástrico e intestinal. como por ejemplo: el tipo de hidrocarburos al que están expuestos. Por Vía Gastro Intestinal La entrada por vía oral de petróleo produce irritación y una posterior destrucción de los epitelios esofágicos. en especial al contenido de compuestos aromáticos.3. b. Esta recuperación es el resultado de la asimilación de hidrocarburos en el suelo. Si estos compuestos volátiles llegan a ser absorbidos (por ejemplo por causa de lesiones en el interior del pulmón).. 1. a. y la unión de los hidrocarburos a la materia orgánica del suelo. A pesar de ello aún se requieren valores guía para ciertas mezclas de hidrocarburos. pérdida por evaporación. se ha demostrado que el valor guía propuesto por el Instituto Americano de Petróleo (1% HTP) tiene la finalidad de proteger la vida vegetal.4. absorbido en materia orgánica) y por último a la especie expuesta. se producirán lesiones sistémicas a nivel hepático. afectan negativamente a los animales. congestión y hemorragias pulmonares. el agua subterránea y además puede lograrse a través del método de biorremediación. La fitotoxicidad resultó ser mayor para los hidrocarburos de bajo peso molecular y aromáticos. a la concentración y tiempo de exposición. Es de destacar que. nitrógeno y diversos metales pesados. En Vertebrados Los daños biológicos sobre los organismos vivos dependen de varios factores que pueden actuar juntos o por separado. Pueden observarse efectos más o menos comunes en las distintas vías de ingreso al organismo de los animales. y que todos ellos. de una manera u otra. el petróleo contiene otros componentes como sulfuro. Según lo expuesto. Estos efectos producen a su vez una alteración en la motilidad gastrointestinal y los consecuentes síndromes de mal . Por Vía Inhalatoria A nivel local se produce una irritación del epitelio respiratorio. a parte de los diferentes hidrocarburos. 1991). Los componentes específicos del petróleo crudo deben ser identificados y su riesgo potencial evaluado para aquellos sitios donde se deba tener en cuenta la exposición humana (Mc Millen et al. 2002).

una hipertermia (por la imposibilidad de eliminarlo). La impregnación externa con petróleo produce una acción lesiva directa sobre la piel de los delfines. Una gran parte de las exposiciones proviene de las ocupaciones que involucran la manipulación de productos de petróleo. etc. las focas y las tortugas marinas. Los HTP pueden entrar y salir del cuerpo cuando se los inspira con el aire. La exposición puede provenir también a través del consumo de agua de acuíferos subterráneos contaminados. Su ingestión puede producir la carcinogénesis en el individuo. de la presencia del pelo. 2002). Otros compuestos son transportados . Una pequeña cantidad de los HTP más livianos se encuentran en el aire. algunos plaguicidas. Las lesiones oculares van desde la simple irritación hasta las graves úlceras corneales. incluyendo químicos utilizados en el hogar y el trabajo.digestión y mala absorción. Por Contacto con la Piel y las Mucosas Es importante considerar. Los efectos de esta alteración de los mecanismos de regulación térmica. ya que el mecanismo termorregulador de estos animales marinos no depende únicamente de la capa de grasa sino. pasando por los diferentes grados y tipos de conjuntivitis y el blefaroespasmo (Farré. el efecto en la fauna marina. siendo las afectaciones más graves a nivel ocular. Los niños pueden estar expuestos al jugar en terrenos contaminados. el agua o cuando se los toca. c. en una parte importante. En el ser Humano La exposición a HTP proviene de muy diversas fuentes.4. La respuesta biológica se puede clasificar en: efectos tóxicos letales cuando los hidrocarburos interfieren en procesos celulares produciendo la muerte. o en el escape de predadores (Farré. 1. en estaciones de servicio. efectos subletales cuando los hidrocarburos alteran el comportamiento y las actividades fisiológicas pero no provocan la muerte. de derrames o pérdidas donde puede entrar en contacto directo con los productos o inhalarlos. Otros pueden ser transformados en químicos más dañinos. La mayoría de los componentes de este grupo entran en el torrente sanguíneo rápidamente cuando se los inhala en forma de vapor o cuando se los ingiere. 2002). Otros efectos se relacionan con la interferencia en la búsqueda de alimentos. cuando se los ingiere con los alimentos. Los efectos del contacto directo del petróleo con las mucosas producirán una irritación de éstas. pueden producirse en dos sentidos opuestos: puede instaurarse una hipotermia (por la imposibilidad de retener el calor corporal) o bien. 2002). Otras consecuencias más graves son las gastroenteritis y gastroenteritis hemorrágicas (Farré.1. Algunos componentes son ampliamente distribuidos por la sangre y rápidamente transformados a compuestos químicos menos peligrosos.3. ya que los sucesos más importantes de contaminación por contacto con la piel y mucosas se presentan en este grupo. pero es especialmente negativo en las focas.

la capacidad para biorremediar y la toxicidad del producto liberado al ambiente. Sin embargo. Los alcanos presentes en las gasolinas son depresores del SNC. pueden afectar al sistema nervioso central. Es fundamental tener en cuenta los procesos de intemperización. náuseas y adormecimiento. Además la gasolina y benzo(a)pireno son considerados como probables carcinogénicos para humanos (IARC gupos 2B y 2A. Los compuestos de ciertas fracciones pueden también afectar a la sangre. los síntomas desaparecen. Los constituyentes de diferentes fracciones de HTP afectan a la salud de manera distinta. han sido atribuidas a los vapores de hidrocarburos inhalables. Sin embargo. principalmente por sus efectos carcinógenos. si la exposición se extiende por un largo tiempo. Los principales peligros provenientes de elevadas concentraciones de hidrocarburos totales de petróleo en general están relacionados a los HAPs encontrados en la contaminación de petróleo. hígado.muy lentamente a través del cuerpo y no son transformados en otros. ya que estos cambian la composición de los productos y puede afectar los resultados. riñones. La Agencia Internacional de Investigación del Cáncer (IARC) ha determinado que el benceno es carcinogénico para humanos (grupo 1). Como resultado de este proceso. Se ha demostrado que el benceno es responsable de causar cáncer (leucemia) en los seres humanos. tolueno y xileno. otros. depresión del sistema nervioso central. dolor de cabeza. muertes repentinas. éstos también tienen efectos biológicos. el sistema inmune. 1999). especialmente los de bajo peso molecular. como los presentes en las gasolinas (Irwin. como ciertos aceites minerales no son tóxicos y son utilizados en alimentos. causando un desorden nervioso llamado “neuropatía periférica” caracterizada por el entumecimiento de las extremidades y en casos graves. los compuestos son absorbidos mucho más lentamente que cuando son inhalados o ingeridos. La mayoría de los HTP abandonan el cuerpo a través de la orina o con el aire exhalado. Esto ha ocurrido a trabajadores expuestos a una concentración de 500 a 2000 ppm de n-hexano en el aire. Algunos. la gasolina en el pasado fue evaluada como agente anestésico. Se conoce muy poco sobre la toxicidad de algunos compuestos que integran este grupo. Aunque los HAPs son generalmente más peligrosos que los alcanos. y en relación a la evaluación de riesgo de sitios . Estos incluyen el tipo de compuesto químico. La ingestión de algunos productos como gasolina y kerosene causa irritación de garganta y estómago. la cantidad y la duración de la exposición. parálisis. De hecho. puede ocurrir daño permanente al sistema nervioso central. respectivamente) (ATSDR. pulmones y el desarrollo embrionario. como el benceno. dificultad para respirar y neumonía. Si la exposición es suficientemente alta. La inhalación de tolueno a concentraciones mayores a 100 ppm por varias horas puede causar fatiga. El n-hexano. pueden ocasionar la muerte. Cuando la exposición cesa. Cuando la vía de exposición es la dérmica. posiblemente como resultado de ritmo cardíaco irregular. 1997). algunos compuestos son irritantes de la piel y las mucosas. Los efectos en la salud por la exposición a los HTP dependen de muchos factores. puede afectar el sistema nervioso central (SNC) de una forma diferente.

Estos cambios se producen a causa de la transformación empresaria. derrames de hidrocarburos en suelo y agua. que se manifiesta por los niveles de contribución a la economía de la provincia. En este contexto.O.)). la concientización en la comunidad con respecto a los problemas ambientales se encuentra en una etapa incipiente de evolución. pozos fuera de control. derrame en baterías y cargaderos. contaminación de napas freáticas. No sólo se logra un control sobre la actividad hidrocarburífera a través de las normas oficiales. líneas de conducción “aéreas”. piletas de lodos sin impermeabilizar. agua y suelo con hidrocarburos es uno de los impactos potenciales asociados a dicha actividad. a través de la promulgación de legislación y el seguimiento por parte de la Autoridad de Aplicación (Ley Provincial 1875. en general presentan menor riesgo para la salud humana y el medio ambiente respecto de los mismos materiales provenientes de un derrame más reciente (Beck. Modificada por Ley 2267 (T. 1997). actos de sabotaje).E. los materiales que han sufrido intemperización.5. la exploración y explotación se realizaba sin considerar el ambiente o los superficiarios. Se sabe que la industria del petróleo presenta ciertos riesgos inherentes a su actividad. A partir de 1992 comenzaron profundos cambios en la actividad hidrocarburífera de nuestro país respecto al manejo de los hidrocarburos y el cuidado ambiental. . desde entonces y hasta 1992 aproximadamente. pero que lentamente se fortalece. 1. hacia otras que producen un menor impacto en el medio.F.145). la privatización de Y. los organismos de certificación de normas internacionales y las comunidades que se organizan y reclaman una mejor calidad de vida. pérdida en los tanques de almacenamiento. La actividad petrolera en la provincia de Neuquén tiene un significado estratégico de primera magnitud. Entre algunas de las prácticas más nocivas para el medio ambiente se puede observar: picadas sísmicas. y la generación de reglamentaciones que principian la matriz legal actual a nivel nacional y provincial. los derrames de hidrocarburos se presentan como los problemas más importantes que las empresas petroleras tienen que combatir con planes de prevención y contingencia adecuados. se ha logrado una lenta y progresiva modificación de las prácticas que involucraban la exploración y explotación. Entre las posibles causas de derrames en suelo se encuentran: roturas de líneas de conducción (pinchaduras. fractura completa o parcial. (ley 24. locaciones de pozos cortando los frentes de barda. La contaminación del aire. etc. agua de purga vertida al campo o al río. durante estos últimos años. En la provincia de Neuquén.P. sino que existen otras áreas de control como son los organismos nacionales e internacionales no gubernamentales. Así como la legislación provincial data de poco tiempo atrás. Actividad Hidrocarburífera en la Región La primera perforación con el objeto de obtener hidrocarburos. etc. S.contaminados. se realizó en 1918 en Plaza Huincul.

Los niveles de limpieza menores a 1%. son difíciles de lograr en sitios que contienen hidrocarburos de petróleo intemperizados. agua ó algún otro medio afectado. principalmente en zonas hidrocarburíferas. que coincide con el nivel de referencia desarrollado y propuesto por el Instituto Americano del Petróleo (API). hidrocarburos extraíbles y aceites y grasas.000mg HTP /Kg de suelo). En algunas jurisdicciones provinciales se toma como valor objetivo (a alcanzar luego de una remediación) una concentración de Hidrocarburos Totales de Petróleo del 1% p/p (10. Se ha confirmado que la migración de hidrocarburos no es un problema a bajas concentraciones en el suelo. En Estados Unidos.Destruirlos. Este valor está por debajo del nivel mínimo requerido para la movilidad de los hidrocarburos (o por debajo de la saturación residual). Según Raymond (1976) agregando 2% de petróleo en los 15cm superficiales del suelo.Aislar ó inmovilizar dichos contaminantes .6. aproximadamente el 75% de los estados utilizan criterios de limpieza basados en HTP. En base a este y otros estudios disponibles. hidrocarburos de petróleo. De acuerdo a Sellers (1999) cualquier tecnología de remediación debe cumplir alguno de los siguientes objetivos: . Por lo tanto este valor guía previene el movimiento de los hidrocarburos hacia el agua subterránea. se lo denomina también aceites minerales. El uso de concentraciones de HTP es comúnmente utilizado para establecer niveles objetivos de limpieza para suelo y agua.Separar los contaminantes del suelo. se ha dado considerable importancia al desarrollo de tecnologías para la recuperación de suelos contaminados con el fin de reutilizarlos. si bien son posibles de lograr en determinadas situaciones. el 99% permanece en los 20cm superiores luego de un año. Remediación de Suelos Contaminados con Hidrocarburos Debido a los problemas de contaminación mencionados.1.7. . el impacto en suelos por hidrocarburos en sitios de exploración y explotación ha sido tratado tomando como base el contenido total de hidrocarburos de petróleo (HTP). Contaminación del Suelo Tradicionalmente. . la concentración de 1% HTP parece justificarse además por ser protectiva de las fuentes de agua subterránea El grupo de compuestos que se agrupa bajo el término HTP. 1. El valor guía de 1% HTP parece ser confirmado por las investigaciones sobre biodegradación.

además de los factores mencionados. son las preferidas en el momento de enfrentar un problema de remediación. físicas o biológicas.Por su parte. una “reducción del volumen. . en forma significativa y permanente.Características ecológicas (ecosistemas involucrados). movilidad ó volumen del material contaminado” ( US EPA. Técnicas de Remediación Para enfrentar la recuperación de los ambientes contaminados por la incorporación de residuos tóxicos. ubicación de poblaciones cercanas y cuerpos de agua. existen diversas tecnologías. . . 2002): . ó serie de operaciones unitarias. particularmente en suelos y aguas. de su disponibilidad. . Obviamente las técnicas de destrucción del contaminante o de transformación en un producto inocuo o de menor toxicidad.Tipo de vegetación. la Agencia de Protección Ambiental de los Estados Unidos (US EPA).Formas de acceso al sitio. 2001). tanto superficiales cómo subterráneas. cada una de ellas con sus ventajas y desventajas. El uso de una tecnología en particular depende. que altera la composición de una sustancia peligrosa o contaminante a través de acciones químicas. fiabilidad (demostrada o proyectada). en la selección de la metodología a implementar en un sitio a tratar.Características hidrogeológicas (formaciones geológicas. es necesario disponer de la siguiente información (Volke Sepúlveda & Velasco Trejo. ciclo hidrológico y flujo de cuerpos de agua). . .Tipo de instalación que dio origen a la contaminación.Magnitud y distribución del contaminante. escala piloto o gran escala) y de su costo. clima y topografía del sitio. mientras que la aplicación de cualquiera de las restantes representan un problema para el futuro. estado de desarrollo (laboratorio. 1.Ubicación geográfica y uso del suelo afectado. recomienda el uso de técnicas de remediación de suelos que impliquen.8. toxicidad y movilidad de las sustancias peligrosas y contaminantes” y define el término «tecnología de tratamiento» como “cualquier operación unitaria. de manera que reduzcan la toxicidad. De hecho. .

Estrategia de remediación: pueden usarse separadas o combinadas: Ø Destrucción ó modificación de los contaminantes: Este tipo de tecnologías busca alterar la estructura química del contaminante. residuos líquidos que deben ser tratados. quema. (I) . Ø Tratamientos biológicos (Biorremediación): Esta metodología utiliza el metabolismo de organismos vivos (plantas. . 1997. el contaminante. bacterias) para degradar ó transformar los contaminantes a productos metabólicos inocuos ó de menor toxicidad. residuos sólidos (cenizas) y. (III) . que puede realizarse en el mismo sitio (on site) o fuera de él (off site). Ø Aislamiento ó inmovilización: en este caso se trata de estabilizar o solidificar los contaminantes por métodos físicos o químicos. Ø Extracción ó separación: Los contaminantes se extraen y/o separan del medio contaminado. hongos. el principio de remediación ó funcionamiento determina tres tipos distintos de tratamientos: Ø Tratamientos térmicos: Por medio de la acción del calor se logra la volatilización (separación). carga eléctrica. solubilidad..8. Ø Ex situ: en este caso se requiere realizar una excavación. en base a los siguientes principios: (I) lugar en que se realiza el proceso de remediación. (II) .). etc. Producen vapores. Ø Tratamientos fisicoquímicos: en base a las propiedades físicas y/ó químicas de los contaminantes ó del medio contaminado. Tecnologías de Remediación Térmica La mayoría de estos métodos pueden aplicarse in situ y ex situ. se separa ó destruye.Las tecnologías de remediación pueden agruparse de diferentes maneras. (II) estrategia de remediación.1. 2001).Por otra parte. en ocasiones. en base a sus propiedades físicas ó químicas (volatilización. US EPA.De acuerdo al lugar donde se realiza el tratamiento de remediación: Ø In situ: el tratamiento se realiza en el mismo sitio en donde se encuentra la contaminación. dragado ó cualquier otro proceso. 1. y (III) tipo de tratamiento (Van Deuren et al. para remover el suelo contaminado antes de su tratamiento. descomposición ó fusión (inmovilización) de los contaminantes en un suelo.

que van desde los 870 a los 1200 ºC. las altas temperaturas provocan la destrucción o remoción de los materiales orgánicos (US EPA 2001).8. Tecnologías de Remediación Fisicoquímicas La mayoría de estas tecnologías se aplican in situ y se basan en el aprovechamiento de las propiedades físicas y/o químicas de los contaminantes ó del material contaminado. en hornos y equipos similares a los utilizados para la incineración. con el fin de vaporizarlos y por consiguiente separarlos de éste. en el cual quedan incorporados los compuestos inorgánicos. Pirólisis: Mediante este método se produce la descomposición química de materiales orgánicos inducida por calor en ausencia de oxígeno. Vitrificación: Como en el caso anterior. Pirólisis y Desorción Térmica (Volke Sepúlveda & Velasco Trejo. con temperaturas que van de 1600 a 2000 ºC. tienen el inconveniente de ser los más costosos y en algunos casos destruyen el suelo.Si bien poseen la ventaja de ser procesos rápidos. Se realiza a presión y a temperaturas de operación mayores a 430 ºC. y se realiza mediante una corriente eléctrica que funde los suelos contaminados. pero se deben operar a temperaturas menores y en ausencia de aire. Puede llevarse a cabo in situ o ex situ. con el uso de un acarreador de gases o un sistema de vacío. 1. Con esta tecnología se produce un material cristalino químicamente estable que no produce lixiviados. para destruir.2. Las tecnologías térmicas más importantes son: Incineración. Desorción Térmica (DT): La DT consiste en calentar el suelo contaminado por compuestos orgánicos hasta temperaturas entre 90 y 540 ºC. para lograr volatilizar y quemar compuestos orgánicos y halogenados. Vitrificación. Estabiliza la mayoría de los contaminantes inorgánicos y destruye los orgánicos. separar ó contener la contaminación. este proceso puede llevarse a cabo in situ o ex situ. Entre ellas se encuentran: Extracción por Solventes: . Durante el proceso. 2002): Incineración: Se utilizan altas temperaturas de operación. Los contaminantes liberados son dirigidos hasta un sistema de tratamiento de gases. en presencia de oxígeno. Es un proceso de separación física no destructivo.

2001). requiere de un tratamiento posterior para remover ó destruir los contaminantes (Sellers. El líquido que resulta del lavado de suelo y de la extracción por solventes. Este tratamiento puede llevarse a cabo con la incorporación de algún aditivo. quedando retenidas en la solución acuosa. generalmente por la adición de materiales. a través de la circulación del solvente. se disuelven los contaminantes utilizando solventes orgánicos y así removerlos del suelo. para aumentar el nivel en la zona contaminada. US EPA. Aprovecha las propiedades conductivas del suelo. ya que las partículas finas con el contaminante sorbido en ellas son extraídas. La estabilización limita la solubilidad o movilidad del contaminante. también conocida como ventilación del suelo. cal o polímeros. La solidificación se refiere a las técnicas que encapsulan (atrapan físicamente) al contaminante formando un material sólido. vaporización y volatilización. cuyo objetivo es separar y extraer contaminantes orgánicos e inorgánicos (metales) de suelos. Implica la aplicación de una corriente directa de baja intensidad entre un electrodo positivo y uno negativo (US EPA. Solidificación/Estabilización (S/E): Es una técnica en el que el suelo contaminado es mezclado con aditivos para inmovilizar los contaminantes. Lavado de Suelos: Los contaminantes son removidos mediante la circulación de soluciones acuosas.Como su nombre lo indica. El suelo es realmente “lavado” y de esta manera se reduce el volumen del material contaminado. grandes cantidades de agua para favorecer el paso de los contaminantes hacia el cuerpo de agua. con el objeto de disminuir ó eliminar la lixiviación. Ésta es extraída y tratada en forma separada. es una metodología en la que se aplica vacío para inducir un flujo controlado y continuo de aire. con el uso de un campo eléctrico que permite remover las especies cargadas (iones). (Riser-Roberts 1998). 2001). como cemento Portland. Extracción de Vapores (EV): Esta tecnología. Remediación Electrocinética (RE): Esta tecnología está en desarrollo. lodos y sedimentos. Inundación del Suelo: Se aplican al suelo o se inyectan en cuerpos de agua cercanos. que aseguren que los . removiendo así contaminantes volátiles y semivolátiles del suelo. 1999.

bacterias. conservadores de madera (creosota) e Hidrocarburos Aromáticos Policíclicos (HAP‘s). 2002). los cuales utilizan los contaminantes como fuente de carbono y energía para su subsistencia. La degradación de contaminantes orgánicos.8. En esta tecnología se pueden emplear organismos autóctonos.3. solventes (Benceno y Tolueno). por ser. etc. entre otros. plaguicidas (Ácido 2. 2001). Sin embargo dicho proceso se encuentra. Tecnologías de Remediación Biológicas (Biorremediación) Cómo ya se mencionó la biorremediación involucra tratamientos que utilizan organismos vivos (plantas. a productos metabólicos inocuos ó de menor toxicidad (Van Deuren et al. las propiedades del suelo contaminado y el sistema de tratamiento que se seleccione. constituye un proceso que se produce en forma natural en el ambiente y que depende de las actividades catabólicas de éstos. Volke Sepúlveda. 1997. tanto orgánicos como inorgánicos. compuestos orgánicos tóxicos. propios del sitio contaminado ó exógenos. compuestos orgánicos altamente clorados o sales inorgánicas.) para degradar ó transformar. por parte de los microorganismos. 1997). su biodegradabilidad. (Van Deuren et al. Además los solventes utilizados pueden aumentar la movilidad del contaminante 1. .. la biorremediación de suelos ha demostrado ser una tecnología eficaz para el tratamiento de la contaminación por petróleo. tóxicos para los microorganismos si se encuentran en grandes cantidades. la mayoría de las veces. La eficacia de las medidas biocorrectivas es limitada en lugares con una alta concentración de metales.4-D). Asimismo. hongos. de otros sitios.. El grado de biodegradación depende principalmente de la toxicidad y de la concentración inicial del contaminante. Los métodos mencionados tiene la ventaja de necesitar equipos accesibles y pueden utilizarse para un amplio rango de contaminantes. La S/E puede realizarse tanto in situ como ex situ. 2003). Aún cuando no todos los compuestos orgánicos son susceptibles a la biodegradación. lodos y sedimentos contaminados con hidrocarburos del petróleo (HTP’s). físicos y medioambientales (Eweis et al. limitado por factores químicos.4Diclorofenoacético: 2. clorofenoles (Pentaclorofenol-PCP). los procesos de biorremediación se han utilizado con éxito para el tratamiento de suelos. éstos compuestos. 1999.. debido a que gran parte de los componentes del crudo y sus productos refinados son biodegradables (Van Hamme et al.. pero tienen el incoveniente de que generan residuos que a su vez necesitan tratamiento y disposición final lo que encarece el proceso. Semple et al..constituyentes peligrosos se mantengan en su forma menos móvil o tóxica. explosivos (TNT). también puede realizarse in situ o ex situ y en condiciones aerobias (en presencia de oxígeno) ó anaerobias (sin oxígeno).

2001). En general. el término “biorremediación”. y puede aplicarse tanto en forma in situ como ex situ (Hutchinson. esta metodología es de uso preferencial debido a que presenta ventajas tales como bajo costo. . No obstante. efectividad en la remoción de contaminantes (los cuales pueden ser eliminados o transformados en productos inocuos). tales como: Ø El tiempo requerido para completar la degradación es mayor que en los tratamientos físico químicos. Ø El éxito del proceso depende de la destreza para mantener las condiciones óptimas para el crecimiento microbiano. 2001). es utilizado para designar los tratamientos que utilizan organismos microscópicos (principalmente bacterias y hongos). es mínimo el impacto en el ecosistema involucrado. que es un proceso que utiliza plantas superiores para remover. lo que es muy importante. Se debe verificar que el contaminante no sea tóxico para los microorganismos y que el suelo sea apto para los mismos. donde el suelo contaminado es mezclado con agua. lodos y sedimentos. bioestimulación (aporte de nutrientes). fácil implementación.En la biorremediación realizada in situ. casi no se necesita tratamiento posterior y. en la recuperación de ambientes contaminados. en el que el suelo se coloca en una celda de tratamiento (composteo) ó sobre membranas impermeables (biolabranza ó Landfarming). En la actualidad. transferir. con el agregado de agua y nutrientes (US EPA. Una de las maneras de lograr esto es con el bioventeo (aporte de aire y oxígeno). Otra tecnología de biorremediación y que cada vez tiene mayor importancia es la Fitorremediación. y procesos de biodegradación en fase sólida. Los procesos ex situ incluyen: procesos de biodegradación en fase de lodos (biorreactores). se debe proporcionar a los microorganismos las condiciones ambientales óptimas para que desarrollen a partir del contaminante. bioaumentación (aporte de microorganismos) además del control de humedad temperatura y pH (US EPA. en el momento de pensar en la aplicación de este tipo de tratamientos se deben tener en cuenta una serie de factores que pueden constituirse en desventajas. Ø No siempre se puede predecir la efectividad. Ø El contaminante debe ser biodegradable. 2001). microorganismos y nutrientes. estabilizar. concentrar y/o destruir contaminantes (orgánicos e inorgánicos) en suelos.

1. Si el oxígeno (O2) es utilizado como aceptor de electrones.1. para un mismo substrato orgánico.A. 1994). compuestos inorgánicos y componentes celulares. En consecuencia. El término "biodegradación" puede referirse a la completa mineralización de los contaminantes orgánicos. cuando se utiliza otro aceptor de electrones (por ejemplo. Fe3+. vertidos al ambiente. obteniendo carbono y energía para su crecimiento y reproducción. el mejor aceptor de electrones. sulfatos ú otros aceptores de . El oxígeno es. igual. La respiración ó degradación aerobia soporta un rango más amplio de reacciones. es decir.). presentes en el suelo y el agua subterránea. la biodegradación de los contaminantes orgánicos puede darse en forma “aerobia” ó en forma “anaerobia”. el proceso metabólico es denominado “respiración microbiana”. donde las enzimas microbianas catalizan la transferencia de los electrones. El proceso de Biorremediación Numerosos microorganismos indígenas ó autóctonos.8. agua. obteniendo como producto final Dióxido de Carbono (CO2). Entonces. generalmente. y el compuesto orgánico a degradar actúa como “dador de electrones” ó “substrato orgánico”. y en particular hidrocarburos. ó a la transformación parcial de contaminantes orgánicos en otros compuestos de menor. poseen la capacidad metabólica de transformar diversos compuestos orgánicos tóxicos. ó mayor toxicidad para el ecosistema involucrado. así como con menor ó mayor movilidad en el ambiente (US E..3. La biodegradación es fundamentalmente un “proceso metabólico de transferencia de electrones”.P. en las que el oxígeno molecular (O2) es incorporado en las moléculas por enzimas oxigenasas y es llevada a cabo por microorganismos “aerobios estrictos”. se produce “respiración aerobia”. debido a la adaptación de la microflora presente al contaminante (Marchal et al. En ambos procesos los microorganismos se desarrollan sobre la sustancia contaminante. En los ambientes contaminados existen en abundancia especies con éstas capacidades metabólicas específicas. el proceso de respiración se producirá en forma “anaerobia”. 2003). Cuando la materia orgánica es utilizada como fuente de energía (dador de electrones) y un compuesto exógeno (extracelular) es utilizado como aceptor terminal de electrones. el que produce la mayor energía libre en una reacción completa. La respiración ó degradación anaerobia es realizada por microorganismos “anaerobios estrictos” (no sobreviven en presencia de oxígeno) y “anaerobios facultativos” (microorganismos capaces de crecer tanto en presencia como en ausencia de oxígeno). NO-3 ó SO4 2. NO2-. los microorganismos que emplean el oxígeno como agente oxidante pueden generar mayor energía que aquellos que emplean nitratos. La energía necesaria para el crecimiento microbiano se obtiene durante el proceso de oxidación de materiales reducidos.

1994). 1999. para metabolizar otras sustancias. el substrato orgánico es oxidado (adición de oxígeno). Por lo tanto la biodegradación aerobia es típicamente más eficiente que la biodegradación de contaminantes orgánicos en forma anaerobia (Eweis et al. que para una mezcla compleja de compuestos. Las especies que mejor se adapten a un ambiente en particular. como son el petróleo ó sus derivados. 2003). el substrato orgánico sirve como fuente de energía (electrones) y como fuente de carbono para la biosíntesis de componentes celulares (biomasa). generalmente organizados en asociaciones. y el O2 molecular es reducido (adición de electrones e hidrógeno) a agua (H2O). 1996. una interacción positiva. De esta forma. US EPA. donde un grupo de microorganismos se beneficia de las acciones del otro. 1997.. es por ello. determinado principalmente por la presencia de una fuente de carbono y energía utilizable. generalmente. El proceso denominado “cometabolismo” ó “cooxidación” consiste en la transformación de aquellos compuestos orgánicos. que implica la participación de varias especies de microorganismos. Estrategias involucradas en la biodegradación: Cohortes microbianos y Cometabolismo La biodegradación de componentes orgánicos es catalizada por enzimas producidas por los microorganismos. que no pueden ser utilizados como fuente de carbono ó energía por los microorganismos.electrones alternativos. lo que implica un mayor consumo del sustrato. En este caso. 1999). temperatura y pH. Estos compuestos. se denominan “cosustratos” (Atlas. Las enzimas son generalmente específicas para cada sustancia a degradar. para la eliminación de los contaminantes (Marchal et al. US EPA. logrando de esta forma crecer a mayor velocidad. será necesaria una gran variedad de enzimas para biodegradar totalmente los componentes orgánicos. . Una asociación consiste en varias poblaciones microbianas viviendo en estrecha proximidad e interactuando entre sí.. son las que predominarán (Eweis et al. El proceso de biodegradación aerobia puede esquematizarse de la siguiente manera: Substrato orgánico + O2 = biomasa + CO2 + H2O + compuestos inorgánicos Así. La cooperación ó asociación entre especies y el cometabolismo. la biodegradación de un compuesto es típicamente un proceso gradual. consorcios ó cohortes microbianos (US EPA. y de esta forma varias especies están involucradas en cada etapa de la mineralización ó conversión de un compuesto. las condiciones de humedad. 1994). de los cuales sí pueden obtener energía ó nutrientes para su subsistencia. son los principales mecanismos que explican la demostrada eficiencia de la microflora presente en ambientes poluídos. pero pueden ser potencialmente degradados por enzimas generadas por los mismos. 1994). La asociación implica.

. 1994). que pueden ser utilizados por otros microorganismos y de esta forma continuar hasta la degradación completa del compuesto contaminante. Sin embargo. los que revisten mayor importancia en el proceso de biodegradación son: o Temperatura o pH del suelo o Humedad del suelo o Disponibilidad de oxigeno o Disponibilidad de nutrientes. por el hombre. 2002). optimizándolos para conseguir mejores resultados en el menor tiempo posible. Factores que inciden en la biorremediación de suelos contaminados Los factores que afectan al rendimiento de la biorrecuperación pueden clasificarse en tres grandes grupos: Medioambientales. sin ser utilizado como sustrato para el crecimiento ó como fuente de energía. Fisicoquímicos y Biológicos (propiedades del contaminante y características del suelo). 1. ha sido el más ampliamente empleado para describir el proceso donde un compuesto es transformado fortuitamente. Dichos factores determinan la efectividad y velocidad de la degradación.3.8. los productos del cometabolismo son metabolitos ó subproductos parcialmente oxidados ó transformados. Generalmente. y pueden limitar el crecimiento microbiano y la disponibilidad de los contaminantes en el suelo (Volke Sepúlveda. El cometabolismo puede suponer un requisito previo a la mineralización de muchos compuestos recalcitrantes. Factores Medioambientales: Los factores medioambientales son aquellos que afectan directamente el crecimiento y actividad de los organismos que llevan a cabo la biodegradación. el término cometabolismo.A. US E. en algún grado.P. con el objeto de acelerar y/ó reformar estos procesos naturales.2. Entre éstos. ya que algunos autores utilizan este término sólo si el cosustrato se encuentra presente durante la metabolización del compuesto secundario (aquel que no aporta nutrientes y energía para el crecimiento). tales como los Hidrocarburos Aromáticos Policíclicos (PAH’s) (Atlas.El uso del término “cometabolismo” se encuentra en discusión en el ámbito científico. 1997. Estos factores pueden ser modificados.

la tasa de biotransformación se duplica (Eweis et al.5 a 8. 1990). . conforme aumenta la temperatura. se detiene esencialmente la biodegradación (Sims et al. a temperaturas mayores a 40ºC decrece la biotransformación. debido a la desnaturalización de las proteínas y enzimas microbianas. pueden llevar el pH del suelo a valores inhibitorios para el desarrollo microbiano. y los productos metabólicos emigran al exterior..Temperatura: La temperatura del suelo afecta considerablemente la actividad microbiana y las tasas de biodegradación. por lo tanto su suministro es esencial para el crecimiento y desarrollo de los microorganismos. La mayoría de las especies bacterianas presentes en los suelos son clasificadas como mesófilas. se considera que aproximadamente por cada 10 ºC de incremento en la temperatura. pH del suelo: La presencia de contaminantes extremadamente ácidos ó alcalinos. un nutriente importante para los microorganismos.. 1997). condiciones altamente ácidas ó alcalinas generalmente inhiben las funciones microbiológicas. resultando en un crecimiento en la tasa de biodegradación. por lo cual los tratamientos biológicos realizados a campo pueden extenderse más de lo esperado. es decir en un intervalo de 6.5 y el transporte de metales se minimiza a valores de pH superiores a 6 (Eweis et al. es máximo a pH aproximadamente neutro. El pH del suelo afecta también la solubilidad del fósforo. Regularmente. debido a las fluctuaciones de la temperatura ambiente. se maximiza la biodisponibilidad del compuesto contaminante. las cuales se desarrollan entre 15 ºC y 45 ºC. ya que regulan la actividad microbiana. 1999). Es necesario considerar que el clima de la región norpatagónica presenta temperaturas promedio menores a las reportadas como óptimas. Van Deuren et al. De esta forma. es el medio de transporte por el que los compuestos orgánicos y nutrientes se difunden al interior de la célula. 1999. 1999).. durante períodos de tiempo prolongados. Humedad del suelo: El agua presente y el Potencial de Matriz del suelo revisten una gran importancia en el proceso de biorremediación. Ello se atribuye a un aumento en la solubilidad del contaminante y a una disminución de los compuestos adsorbidos en la matriz del suelo. los cuales se encuentran presentes en muchos contaminantes. y el transporte de metales peligrosos en el suelo. a temperaturas aproximadas a 0 ºC. La solubilidad del fósforo se maximiza a niveles de pH de 6. En adición. particularmente del suelo.. Por lo tanto.Por regla general.. El agua es el mayor constituyente del protoplasma bacteriano. El crecimiento de muchos microorganismos. teniendo un intervalo de crecimiento óptimo entre 25 ºC y 35 ºC (Madigan et al.

US E. un exceso de agua origina un suelo saturado. 1997). como consecuencia. y el pH. la actividad microbiana. Ello requiere que los componentes químicos de la célula se encuentren disponibles para la asimilación y síntesis del nuevo material celular. pueden generarse zonas de anaerobiosis y. llevando el oxígeno a los microorganismos. Disponibilidad de Oxígeno: El oxígeno (O2) puede constituir uno de los factores limitantes para el desarrollo del proceso de biodegradación en suelos. la oxidación del sustrato mediante oxigenación (ganancia de oxígeno). Los nutrientes necesarios son asimilados .P. la energía destinada por los microorganismos para este proceso.El Potencial de Matriz es la energía requerida para superar las fuerzas capilares y adsorbentes (originadas en la interfase sólido .A.P. para incorporar el oxígeno atmosférico en el sistema (Kincannon. El uso de sistemas de bioventeo. La aireación y humedad se encuentran estrechamente relacionadas ya que el espacio poroso del suelo no llenado por agua.. predios de tratamiento). es óptima a niveles de humedad comprendidos entre el 60 y 80% de la capacidad de retención de agua del suelo ó capacidad de campo[1] (US E. implican generalmente. donde el aire es forzado a ingresar en el suelo. la naturaleza y cantidad de materiales solubles. principales responsables de la biodegradación. Generalmente. y en sistemas de tratamiento in situ.P. Según sea menor ó mayor el contenido de agua.A. De esta forma. sedimentos y acuíferos. lo cual supone una gran demanda de este elemento (Atlas. es llenado por gas. medida como “tasa de biodegradación”.A. afectando el estado de aireación (difusión del oxígeno). La presencia de agua determina muchas propiedades del suelo. 1999. 1972). inhibiendo así el intercambio de gases y la difusión del oxígeno (la solubilidad del oxígeno en el agua es muy baja) a través del perfil edáfico. como ya se mencionó anteriormente. puede ser aumentada labrando. biopilas. la eliminación de especies bacterianas aerobias. el oxígeno puede ser incorporado mediante dichos procedimientos. La presencia del oxígeno como aceptor terminal de electrones es esencial en el metabolismo microbiano aeróbico. Disponibilidad de Nutrientes: El metabolismo microbiano está orientado hacia la reproducción de los organismos. 1996). Las concentración de oxígeno en el suelo. drenando y/ó volteando el suelo no saturado. los pasos iniciales en la biodegradación de hidrocarburos. constituye otra opción pero a un mayor costo (US E. será mayor ó menor respectivamente (Eweis et al. 1996). En prácticas de biotratamiento realizadas en forma ex situ (compostaje.líquido) y extraer el agua de los poros del suelo. En particular. 1996).

Pucci et al. Leahy & Colwell. siempre que los nutrientes se encuentren en forma disponible para su asimilación. y reducir la cantidad disponible para el metabolismo microbiano.. 1997). se encuentran habitualmente disponibles en forma natural en la mayoría de los suelos. En la Tabla III se sintetizan los parámetros ambientales críticos para la actividad microbiana en el suelo: Factores Fisicoquímicos: .1. 2003). Sin embargo. 1996. Todos los compuestos orgánicos presentes en el suelo están incluidos en el TOC. Éstos pueden limitar la velocidad de degradación microbiana. Numerosos estudios y experiencias han demostrado la importancia de la presencia de éstos nutrientes en los procesos de biodegradación de derrames de petróleo (Atlas & Bartha. 1972. sería efectiva en este tipo de suelos. es muy importante en el diseño y operación de los tratamientos biológicos de suelos y aguas contaminados. provocando una fase de latencia ó retardo en el crecimiento microbiano. 1994. con el objeto de determinar la cantidad óptima de nutrientes para la biorremediación.sólo si se encuentran en determinados estados elementales. La incorporación de nutrientes en altas concentraciones puede provocar un efecto adverso al deseado. nitritos (NO2¯) y nitratos (NO3¯). 1990). Otros nutrientes como el potasio. (US EPA. si no se encuentran en concentraciones suficientes y en un estado asimilable por los microorganismos. el magnesio y el azufre. Los suelos de la Patagonia presentan naturalmente un marcado déficit de nitrógeno y de fósforo. altas concentraciones de calcio y de magnesio pueden precipitar los fosfatos. es por ello que la cantidad y el estado de los mismos. Se han realizado trabajos en suelos patagónicos contaminados por hidrocarburos del petróleo (Luque et al. El Carbono total es medido como Carbono Orgánico Total (TOC: En Inglés: “Total Organic Carbon”). Se considera que una relación C:N:P (Carbono/ Nitrógeno/ Fósforo) = 100:10:1 es óptima para el proceso de biodegradación de contaminantes orgánicos (US EPA. el nitrógeno y el fósforo son los nutrientes de mayor importancia. El carbono. y el fósforo en su forma soluble ó reactiva (o-PO4). Atlas.. 1994). el calcio. 1973. y las comunidades bacterianas presentes en estos sitios se encuentran altamente adaptadas a estas condiciones ambientales. El nitrógeno puede ser asimilado por la flora microbiana en forma de nitrógeno orgánico. Los contaminantes orgánicos biodegradables proveen una fuente de carbono. y ésta es una medida del sustrato disponible para el crecimiento microbiano. amoníaco (NH3). llegando a la conclusión de que una relación C:N:P = 100:1:0. Bartha & Atlas.

Singer & Finnerty. 1984). Como ya se describió anteriormente. de la fase líquida. los microorganismos toman el carbono orgánico. etc. naturaleza y efecto de los sustituyentes. elementos químicos constituyentes. viscosidad. 1999. Volatilidad: La volatilización es el proceso en el cual un contaminante se difunde desde la fase sólida ó liquida a la fase gaseosa. grado de insaturación. No obstante. peso molecular. determinarán la interacción del contaminante con el suelo y con la comunidad microbiana presente. En suelos contaminados por vertidos de productos del petróleo. El éxito de la biorrecuperación de un contaminante orgánico en el suelo. porosidad y el contenido de materia orgánica y arcillas del suelo. 1982. la identificación y evaluación de las propiedades físicas y químicas del residuo es esencial para llevar a cabo la remediación del sitio afectado. volatilidad y densidad. pueden ser divididos en dos grandes grupos: · Factores relativos al sustrato · Factores relativos al suelo Factores relativos al sustrato: La composición y estructura química del contaminante (tipo de compuesto.). ó con gotas de éste suspendidas en la fase acuosa (Reddy et al. será incorporado con mayor facilidad en el metabolismo microbiano. La biodegradabilidad de un compuesto depende de su solubilidad. grado de ramificación. que pueden afectar la biodegradación. Mc Millen et al. un microorganismo puede tener la capacidad de asimilar un compuesto poco soluble en agua. los nutrientes inorgánicos y los aceptores de electrones necesarios para el crecimiento.. si el contaminante se encuentra en esta fase. 2001).. En general. es decir que la flora microbiana presente posea las rutas metabólicas adecuadas.Entre los factores fisicoquímicos se incluyen aquellas propiedades tanto del suelo como del contaminante. al aumentar la solubilidad de un contaminante. presión de vapor y solubilidad. en su retención en las fases sólida ó líquida del suelo (Eweis et al. la concentración y sus propiedades físicas como: solubilidad. La velocidad de este proceso en el suelo es función de su concentración. y de que se encuentre biodisponible ó accesible al organismo. Los factores fisicoquímicos que determinan la biodegradabilidad del contaminante y su biodisponibilidad. también influirán en la volatilización del compuesto ó de lo contrario.. temperatura. así. depende de que éste sea biodegradable. la disponibilidad para los microorganismos aumenta. mediante el contacto directo con gotas del contaminante más grandes que la célula. . La humedad.

La densidad determina la tendencia de la fase inmiscible del contaminante. A modo de ejemplo. como el kerosene y el gas oil. la biodegradación es uno de los principales mecanismos de eliminación de los mismos desde la matriz del suelo. en parte. La migración de un compuesto en un medio depende de su densidad y viscosidad. ya que determina. a flotar ó sumergirse en la superficie del suelo. puede suponerse más significativa que por volatilización. tienden a ser mayormente removidos del suelo por volatilización y. 2005). La viscosidad constituye una propiedad significativa del contaminante. los crudos pesados. Tomando la densidad especifica como medida. 2002). como los aceites lubricantes. su percolación en el suelo. tienen mayores concentraciones de asfaltenos y resinas que aquellos crudos más livianos. Como punto de referencia. el agua tiene 10º API. Los Grados API de los productos de refinación del crudo varían dependiendo del producto.Los hidrocarburos del petróleo más livianos. La composición de los distintos tipos de crudo es reflejada en su valor de Grados API. como el agua. con una densidad entre 0. Densidad: La densidad de los hidrocarburos es expresada convencionalmente en Grados API (American Petroleum Institute). de densidades mayores a 20º API. como las gasolinas. atraídos por la gravedad. de menos de 20º API. Los Grados API son una medida de la densidad específica del hidrocarburo. en menor grado.0. y por consiguiente la zona donde éste quedará concentrado (Volke Sepúlveda. siendo sus tres principales componentes las arcillas (< 0. los sedimentos (0. Los suelos se clasifican en función de su tamaño de partícula. Los materiales altamente viscosos no fluyen rápidamente. mientras que los más livianos y menos viscosos. contienen menores porcentajes de constituyentes volátiles. Factores Relativos al Suelo: Tamaño de partícula.05 . En el caso de los componentes más pesados ó no volátiles. por biodegradación. La viscosidad de un fluido tiende a decrecer conforme aumenta la temperatura a la que está expuesto.002 mm). medida a 60º F (15ºC). Viscosidad: Este parámetro es una medida de la resistencia interna de una sustancia a fluir.002 . el petróleo crudo es menos denso que el agua. por lo cual la remoción por biodegradación de estas fracciones. Los productos medios del petróleo. siendo la volatilización insignificante en su sustracción (Maila & Cloete.98.85 a 0. pueden fluir fácilmente. partiendo de 15º para el Fuel Oil Nº 6 hasta 62º para las Gasolinas.

Métodos Analíticos para la Determinación de Hidrocarburos Debido a la diversidad de compuestos que forman el petróleo. Pueden crearse canales indeseables de fluidos en las capas arenosas y arcillosas. deben cumplirse varias condiciones: Ø El residuo debe ser susceptible de biodegradarse biológicamente. una baja permeabilidad en el suelo disminuye la efectividad de la mayoría de las tecnologías de remediación.0 mm). tienen un impacto directo sobre las propiedades físicas. 1998). . Es útil para realizar cálculos para el transporte del material (Van Deuren et al. 1997). Se refiere a la facilidad o dificultad con la que un líquido puede fluir a través de un medio permeable. 1997). La permeabilidad de un suelo es uno de los factores que controla la efectividad de tecnologías in situ (Sellers 1999). A este grupo de compuestos que forman el petróleo se lo denomina ‘hidrocarburos totales del petróleo’ (HTP o TPH). Permeabilidad. los materiales no consolidados (arenas y gravas finas) son más fáciles de tratar (Van Deuren et al. En general. En general.2.9.05 . Un suelo demasiado heterogéneo puede impedir el uso de tecnologías in situ que dependan del flujo de un fluido. Ø Deben estar disponibles los microorganismos apropiados. Ø Las condiciones ambientales (como el pH. 2001) 1. siendo útil medir la cantidad total de hidrocarburos que se encuentran en una muestra particular de suelo. incluyendo agua y espacios. Es importante considerar que el suelo está compuesto por sólidos y espacios llenos de agua y/o aire. Es importante considerar esta propiedad.mm) y las arenas (0. Factores Biológicos: Para que una técnica de biorremediación opere eficientemente. químicas y biológicas del suelo. la temperatura y el nivel de oxígeno) deben ser las apropiadas. (Braid. Densidad aparente. y que su densidad dependerá de su humedad. Es el peso del suelo por unidad de volumen. generalmente no es práctico analizarlos a cada uno individualmente. 1997. Eweis et al. ya que la relación área/volumen de los diferentes tipos de partícula. y por consiguiente en las tecnologías de remediación. dando como resultado tratamientos inconsistentes (Van Deuren et al. Heterogeneidad. y presentarse en una forma física que sea susceptible a los microorganismos. agua o aire.

S.A. y determinación del peso. Las desventajas son la menor especificidad. Cuando una molécula absorbe radiación IR aumenta la frecuencia de vibración de la misma. 2001). y su incapacidad de proveer información en la identificación de los hidrocarburos y su riesgo potencial. • Método 413. • Método 8015M para Compuestos Orgánicos del Rango Diesel (DRO): es una extracción con solvente seguida de una determinación por cromatografía gaseosa (GC).1 U. La mayoría de los métodos miden la absorción a una única frecuencia (generalmente 2930cm-1) que corresponde a los grupos alifáticos CH2.9. evaporación del solvente. cada uno mide un subgrupo de derivados de hidrocarburos presentes en las muestras. Las técnicas convencionales cuantifican solamente aquellos hidrocarburos que son extraídos de la muestra y debido a que la extracción de hidrocarburos varía de una técnica a otra. • Método 8015M para Compuestos Orgánicos del Rango de las Gasolinas (GRO): es una extracción con solvente seguida de una determinación por cromatografía gaseosa.1 para aceites y grasas: es un método gravimétrico que consiste en una extracción con solvente. La principal ventaja del método es que resulta simple. comparándolo con GC. a cualquier hidrocarburo extractable por un solvente. y detectados. purificados. Se define Hidrocarburos Totales (HTP) analizados por espectroscopia IR. la misma muestra analizada por distintos métodos. • Método 418. rápido y comparativamente económico. La definición de los HTP depende del método analítico utilizado (TPHCWG. Existen diversas técnicas analíticas disponibles que miden concentraciones de HTP en el ambiente. Análisis Químicos de Hidrocarburos Totales por Espectroscopia Infrarroja. 1. el cual no es removido por la sílica gel y que puede ser detectado por un espectrofotómetro de radiación infrarroja. 1998). .: consiste en una extracción con solvente seguido de un tratamiento en columna de sílica gel y luego la cuantificación por espectroscopia infrarroja. Las técnicas varían en la forma en que los hidrocarburos son extraídos.P.1. La espectroscopía infrarroja determina la energía absorbida por las moléculas en esta región del espectro electromagnético. Los distintos grupos funcionales y tipos de enlaces tienen distintas frecuencias e intensidades de absorción. Los métodos para la medición de HTP miden la absorción de los enlaces C-H.Los HTP son definidos por el método analítico que se utiliza para determinarlos. producirán distintos resultados (API. E.

La extracción se realiza con un solvente adecuado que no contenga enlaces C-H. Estándares específicos para hidrocarburos totales de petróleo (HTP) se emplean para construir la curva de calibración del equipo. La eliminación de interferentes puede realizarse utilizando columnas con material adsorbente a través de la cual se hace pasar el extracto o se puede adicionar al extracto una sustancia adsorbente en forma de pequeñas partículas y luego removerla a través del filtrado. La técnica que se utiliza para la extracción es la recomendada en la norma 5520 E de los métodos normalizados utilizados generalmente para lodos. Los métodos basados en una sola frecuencia no son adecuadas para la medición de benceno o naftaleno porque no contienen grupos alquilos. de los hidrocarburos totales de petróleo. Debido a que el método de cuantificación del analito es sensible a hidrocarburos que derivan de animales y vegetales así como a otros compuestos polares. una vez que ha cesado el drenaje interno debido a la fuerza de gravedad” . para preservar en el extracto los hidrocarburos petrogénicos. es necesario eliminar tales interferentes. isooctano y colorobenceno en proporciones definidas. La espectroscopía IR puede medir cualquier compuesto que contiene grupos alquílicos en su molécula. por ejemplo 2960cm-1 para el grupo CH3 y de 3000 a 3100cm-1 para los enlaces C-H de los compuestos aromáticos (Willard et al. cobre y mercurio (para la remoción de sulfuro). De acuerdo al método 418. alquenos.Otros métodos usan más de una frecuencia. Cuando se utiliza esta única frecuencia. NOTAS: [1] La Capacidad de Campo es un término frecuentemente empleado.1 de la Environmental Protection Agency la cuantificación se lleva a cabo por espectroscopia infrarroja. sílica gel. alcoholes). Este procedimiento de purificación del extracto. Posteriormente se trata la muestra con silicagel para adsorber los compuestos polares que puedan interferir con la determinación de hidrocarburos totales de petróleo.-1. aromáticos sustituidos. 1991). se mide cadenas parafínicas. La extracción de hidrocarburos se obtiene utilizando CCl4 como solvente de extracción. que describe “la capacidad de un suelo para retener agua. asociado a la humedad de un suelo. geles que funcionan por el principio de exclusión por tamaño. hidrocarburos aromáticos policíclicos (HAPs) si tienen algún grupo alquilo. El espectrofotómetro IR se utiliza para determinar la absorbancia de los extractos en la región cercana a 2930 cm. permite diferenciar las grasas y aceites de origen animal y vegetal. Existe una variedad de técnicas que utilizan entre otros: alúmina. cicloalcanos. Los estándares se preparan a partir de una solución stock de hexadecano. y moléculas oxigenadas (éteres.

en Saneamiento y Protección Ambiental. Las políticas ambientales actuales establecen un uso apropiado de los recursos naturales y marcan la tendencia a la protección y recuperación de los ambientes degradados como resultado de la intervención antrópica. FUNDAMENTACIÓN La actividad hidrocarburífera ha producido y produce alteraciones en el suelo por la ocurrencia de derrames de petróleo y derivados. Una estrategia adecuada para . interpretación de resultados y redacción de tesis. ■ Comparar dos tratamientos de Biorremediación de suelos en los que se utiliza distintos métodos de estimulación del proceso. Como consecuencia de ello.1. ■ Integrar las distintas disciplinas que conforman la Lic. con el fin de lograr la sustentabilidad de aquellas actividades económicas donde el ambiente se vea comprometido. 1. ■ Determinar la factibilidad del uso del agua residual tratada para estimular los procesos de biodegradación de hidrocarburos en suelos. Objetivos Generales ■ Participar en las distintas etapas de un trabajo de investigación: búsqueda bibliográfica. Objetivos Específicos ■ Determinar los niveles de hidrocarburos totales en suelos contaminados artificialmente a lo largo de la experiencia. tanto en forma accidental como por malas prácticas operativas desarrolladas antiguamente. diseño experimental. se afectan las propiedades físicas y fisicoquímicas del suelo produciéndose la degradación del mismo.OBJETIVOS 1. puesta a punto de técnicas analíticas. El desarrollo y aplicación de tecnologías para la restauración de ambientes degradados en el nivel internacional ha sido considerable.2. ■ Estudiar el comportamiento de la microbiota conformada por bacterias heterótrofas totales a lo largo del tiempo. sin embargo en nuestro país el avance científico en la temática ambiental se encuentra en una etapa inicial.

presenta una superficie bastante quebrada. M. También pueden presentarse algunas heladas. es una de las pocas áreas relativamente llanas que se pueden encontrar en el territorio. Las precipitaciones características de la zona son de corta duración pero torrenciales. de suelos y cuerpos de agua subterráneos y superficiales. D.minimizar la contaminación es la disminución de la reactividad y peligrosidad del contaminante. R: Navarro. las altas temperaturas y los vientos carentes de humedad evaporan el agua y contribuyen a la aridez de la región (Pérez. la caída del agua de lluvia modifica el relieve con regularidad arrastrando el material erosionable de las bardas. al menos similares. denominadas en su conjunto Técnicas de Remediación. es decir el retorno a las condiciones previas a la contaminación ó. 2005). mientras que en invierno la media puede variar entre 4 y 6 ºC. Existen diversas técnicas destinadas a la rehabilitación de ambientes comprometidos.10. HIPÓTESIS Los microorganismos pueden degradar los hidrocarburos de suelos contaminados. con pendientes cortas pero pronunciadas. Presenta algunos cauces temporarios con gran concentración de sales. No llegan vientos desde el Océano Atlántico. para su posterior reutilización y aprovechamiento Es por ello que la investigación para la optimización de métodos de remediación y su adaptación a las condiciones locales. utilizando los nutrientes inorgánicos aportados por las aguas residuales tratadas Materiales y Métodos 1. Mediante el uso y aplicación de estas tecnologías es posible la restauración ó recuperación.10. 1. no superan los 200 mm. . es de extrema importancia y constituye un aporte al progreso del conocimiento y la investigación en el ámbito nacional y regional. Las precipitaciones son escasas. Características del área El área se encuentra próxima a la barda que se ubica paralela al Río Neuquén. Durante el verano la región presenta una temperatura media es de 25 ºC. anuales.Características climáticas El aire que ingresa a la zona desde el Océano Pacífico descarga toda su humedad al pasar por la Cordillera de los Andes.1. en una sola lluvia puede completarse la media de precipitaciones esperada para ese mes del año. C.

2 ºC y en el mes más frío.Ubicación En la imagen satelital.el mes más cálido. julio. se observa que el sitio donde se obtuvo el suelo se encuentra en la zona Norte de la Ciudad de Neuquén. A partir de estas observaciones es que se incrementan las posibilidades de obtener un suelo sin afectaciones.4.7 ºC. tiene un clima estival netamente desértico. La temperatura media del mes de enero .10. atenuado por la gran amplitud térmica que hace descender la temperatura por las noches. La Tabla Nº 2 presenta los datos característicos el al región en estudio.10.A pesar de su situación dentro de un oasis es una región bastante desértica. Condición climática Temperatura media anual Amplitud media anual Temperatura máxima anual Período libre de heladas (días) Lluvias (mm) Déficit hídrico anual Exceso anual de agua Clima Régimen de humedad del suelo Régimen de temperatura del suelo Vegetación Medición 14 ºC 16ºC 20-23ºC 150-180 130 500>¤=600 0 Árido Arídico Térmico mésico Estepa arbustiva 1.Condiciones climáticas del área.5 ºC.2.10. representativos de la región.3. 1.se ubica en los 23. 1. lo cual facilita la labor de contaminación del suelo con la concentración contaminante predeterminada. es de 5. Los vientos promedio son de 18 km/h en diciembre y de 9 km/h en julio. es decir caluroso y seco. La diferencia entre la temperatura del mes más caliente y la del más frío se eleva a 17.Características del Sitio Seleccionado Para la realización de esta experiencia se trabajó con suelos provenientes de la provincia de Neuquén. tampoco se ha desarrollado la actividad hidrocarburífera. . Se seleccionó este sitio porque se encuentra dentro de los límites de la ciudad y en este lugar no se registraron derrames de petróleo o sus derivados.

Acceso a Barrio Rincón de Emilio Sitio de obtención del suelo Universidad Nacional del Comahue Calle Leloir Sitio de obtención del suelo tomando como referencia la Universidad Nacional del Comahue.Ciudad de Cipolletti Ubicación del sitio Ciudad de Neuquén Río Neuquén Río Limay El lugar donde se extrajo el suelo para realizar la experiencia se ubica en el sector norte de la Ciudad de Neuquén. . En imagen anexa la ampliación del sitio. al Noroeste del acceso al Barrio Rincón de Emilio.

con pocos agregados y de apariencia arenopedregosa. Una vez transportado al laboratorio. . Obtención del Suelo y Pretratamiento El suelo se extrajo de los 15 centímetros superficiales. 1. Este material que luego del proceso se tornó en apariencia arenoso. utilizando una pala barreno para excavar y bolsas de polietileno de alto micronaje como recipiente para el transporte. el suelo se dejó secar al ambiente durante 48 horas. Posteriormente se homogeneizó utilizando un mortero de porcelana y se pasó a través de una malla metálica de 2mm (12 mesh). El suelo en ese momento presentaba un aspecto suelto.El suelo para realizar la experiencia. No se registraron precipitaciones en los siete días precedentes a la extracción del material por lo que el suelo se presentó relativamente seco. Y: 4691616 y Z: 270. se depositó en cuatro bateas plásticas. proviene de un sitio ubicado sobre las coordenadas del sistema Gauss Kruguer campo inchauspe X: 2581750. este lote fue homogenizado en el lugar por medio de volteos sucesivos sobre una membrana de polímero plástico.11. como se muestra en la Figura Nº 5. Se tomaron alrededor de 80 Kg de suelo. Sitio de donde se extrajo el suelo.

Enmienda del Suelo Correspondiente al Tratamiento EST La incorporación de nutrientes al suelo se llevó a cabo respetando la relación C/N/P 100:10:0. El contenido de Fósforo se determinó por medio del método Olsen sobre la cantidad de fósforo extraída por una solución de bicarbonato de sodio (extractante Olsen). Para la medición del pH se utilizó la técnica de medición potenciométrica de pH en pasta y pH hidrólisis 1:2.H. 15% de P2 O5 y 15% de K2O) y NH4NO3. Para la determinación de la materia orgánica se utilizó el método Walkley Black En la determinación de la conductividad eléctrica se utiliza un conductímetro sobre el extracto de saturación.5. 1.Recipiente conteniendo el suelo pretratado en el laboratorio. Una porción de aproximadamente 300 g de suelo se envió al Laboratorio de Servicios Agrarios y Forestales (LASAF) perteneciente al Ente Provincial de Agua y Saneamiento para su análisis fisicoquímico.1 (Adams Shroeder. Se determinó la textura de las muestras a través del método de Bouyocus.12. et al. R. Para lo cual se agregó Triple 15 (15% de N. 1999). aunque también pueden utilizarse distintas diluciones de suelo en agua. .

Luego de agregada la solución de fortificación se homogeneizó el suelo por completo. consistencia pastosa y sin olor apreciable.13. Para todas las experiencias se preparó una única mezcla suelo. tipo SAE 30 normal.Se incorporó las siguientes cantidades a 1500 g de suelo: Triple 15 450 mg. esta solución se denominó “solución de fortificación”. aunque con una coloración más oscura. El suelo contaminado presentaba la textura arenosa original. mezclando a intervalos de 2 h. el suelo fue dispuesto en los recipientes plásticos correspondientes donde se someterán a los distintos tratamientos. Fortificación del Suelo con Hidrocarburos Se utilizó una solución de fortificación de aceite mineral monogrado para motores de vehículos. . La solución de fortificación.contaminante (el contaminante fue aceite de motor virgen) que se distribuyó en los distintos recipientes. en una relación de 500 mL de freón y 20 g de aceite contaminante por cada 1000 g de suelo. se preparó. Imagen del suelo luego de la contaminación. 1. homogeneizando el suelo a intervalos regulares. marca YPF. El freón se dejó volatilizar durante 24 horas bajo campana. con el objeto de obtener una contaminación inicial del 2%. NH4NO3 720 mg. Una vez finalizada ésta operación. El solvente utilizado fue freón.

y la reposición del agua evaporada se realizó por adición de 50 mL de agua dos a tres veces por semana. Dos recipientes para los suelos control del tratamiento EFL. esto último con el objeto de mantener la humedad del suelo cercana al 10% (Ercoli. Estos recipientes fueron almacenados en estantes. E.. Dos recipientes para los suelos control del tratamiento EST. 2000).1. Diseño Experimental Se realizaron dos tratamientos de biorremediación. . Los tratamientos se llevaron a cabo en recipientes plásticos.14. Cuatro recipientes correspondientes al tratamiento EFL. Dos veces por semana se aireó y mezcló todo el contenido de cada maceta con una espátula. y fue denominado “EFL”. en cada uno de los cuales se colocó 1500 g de suelo para facilitar la homogeneización del mismo (Figura Nº 6 y Nº 7). a una temperatura de 20 ºC con una variación de ± 1 ºC. El diseño experimental fue el siguiente: Cuatro recipientes correspondientes al tratamiento EST. el primer tratamiento es un proceso de biorremediación tradicional llamado en este trabajo “EST”. y el otro es un tratamiento de biorremediación donde los nutrientes inorgánicos y la humedad son aportados por el efluente tratado de la Planta Depuradora de Líquidos Cloacales del Parque Industrial de la Ciudad de Neuquén. et al.

El muestreo para el análisis de hidrocarburos totales de petróleo y recuento de microorganismos heterótrofos totales se realizó a los 0.Espacio físico donde se almacenaron las macetas. Tetracloruro de carbono grado espectroscópico (Merck). de Haz Simple (Figura Nº 8). Se realizaron recuentos estándar en placa de los líquidos cloacales utilizados. Reactivos y Materiales para la Determinación de Hidrocarburos Totales en Suelos Para la realización del presente trabajo. en relación 15:15:10 de n-hexadecano: isooctano: clorobenceno. Sulfato de Sodio anhidro (Baker). se utilizaron los siguientes reactivos de laboratorio: Tetracloruro de carbono pro análisis (Merck). Mezcla de Referencia. Espectrofotómetro IR Buck Scientific M500. . 30. Balanza granataria (Figura Nº 10). El Instrumental utilizado fue el siguiente: Balanza analítica (Figura Nº 10). 15. Inc.). Silica Gel. respectivamente (Buck Scientific. Acetona pura (Dorwil). 60 y 90 días. 100-200mesh (Merck).

Espectrofotómetro IR. Misceláneos Mortero de porcelana. Tamiz, 2mm. Material de vidrio de uso corriente en el laboratorio. Equipo para extracción por Soxhlet. Manta calefactora para balones de 25 mL. Agitador magnético. Papel de filtro, banda negra, Whatman Nº 40, de 9 cm de diâmetro. Estufa de secado (Figura Nº 9). Pipeta automática. Dispenser para medios de cultivo. Vórtex. Autoclave.

Estufa para esterilización. Estufa para cultivo de bacterias.

Estufa de secado.

Balanza analítica y balanza granataria. Toma de Muestras de Suelo para Análisis Químicos

Se tomó una muestra por cada maceta de la siguiente forma: primero se realizó la homogeneización de todo el contenido de la maceta empleando una espátula, luego se dividió la superficie del suelo dentro de las macetas, formando una cuadrícula de nueve cuadrantes, de estos cuales se tomó una porción de suelo de tres de ellos elegidos al azar, las porciones de suelo se mezclan para conformar una única muestra.

M M Maceta

1 4 7

2 5 8

3 6 9

Se elige en forma aleatoria tres cuadrantes, de los cuales se toma una porción de suelo, por ejemplo: cuadrantes 2, 5 y 9.

Recipiente para muestras m m Metodología de muestreo para análisis de HTP´s. El procedimiento se repite para cada muestra a analizar. Preparación de las Muestras para el Análisis de Hidrocarburos Totales en Suelo A cada una de las muestras así obtenidas se las depositó en un erlenmeyer numerado, el cual fue tarado, posteriormente se agrega Na2SO4 anhidro con el objeto de capturar la humedad remanente en la muestra, la boca del erlenmeyer se cierra con un film de polietileno para evitar el intercambio de humedad entre la muestra y el ambiente. De esta forma, la muestra queda preparada y debe almacenarse durante 24 hs, tiempo suficiente para que el Na2SO4 retenga toda la humedad de la muestra. Extracción de Hidrocarburos del Suelo El erlenmeyer conteniendo el suelo se pesa en balanza analítica para precisar su contenido por diferencia entre el peso del erlenmeyer vacío y el peso del erlenmeyer con el suelo. En el momento de la extracción, el suelo contenido en el erlenmeyer se

trasvasa a un cartucho de papel para utilizar en el equipo de extracción soxhlet. Aproximadamente 7 g. se tulizarón para la extracción La extracción se llevó a cabo con CCL4 y realizó utilizando un equipo soxhlet por cada muestra, y mantas calefactoras con balones de 25 mL. Dentro del equipo de extracción, el solvente recircula constantemente, evaporándose desde el balón inferior y condensándose en el refrigerante superior para gotear sobre la muestra en el cuerpo central del equipo de extracción. Una vez que el solvente en el cuerpo central alcanza determinado nivel, la muestra se encuentra completamente en contacto con el solvente y un mecanismo sifón, drena el solvente desde el cuerpo central al balón en la parte inferior del equipo recomenzando el ciclo. Al completarse el tiempo de extracción (4 hs.), se enfría y filtra la solución, y se lleva a volumen en matraz de 25 mL.

Equipos de extracción por soxhlet. Eliminación de Interferencias Debido a que el método de cuantificación del analito es sensible a sustancias que derivan de animales o vegetales así como a otros compuestos polares, es necesario eliminar tales interferentes, con el objeto de preservar en el extracto los hidrocarburos petrogénicos. Para lograr esto, se tratan 10 mL. del extracto obtenido con 3 g. de sílicagel 100-200 mesh utilizando un erlenmeyer, se homogeneizó por medio de un agitador magnético durante 15 minutos, y posteriormente al extracto se lo filtró, empleando para ello papel

4673 La correspondiente curva de calibración se muestra en la Figura Nº 13.de filtro de tipo Whataman banda negra de 9 cm. Valores de absorbancia de soluciones standard de hidrocarburos. Los extractos obtenidos del filtrado.2047 0. Las soluciones estándar fueron preparadas a partir de una solución Stock obtenida de una mezcla de Referencia (Referece Oil).26 13. se cierran herméticamente y se almacenan refrigerados Construcción de la Curva de Calibración Para cuantificar HTP´s del suelo se prepararon soluciones estándar de hidrocarburos de concentración conocida.7 cm-1 utilizando una celda de cuarzo de 1cm. La misma está compuesta por una mezcla de 15:15:10 de n-hexadecano.42 6. isooctano y clorobenceno respectivamente.1 Absorbancia 0. En esta curva de calibración se exhibe en el eje de las ordenadas el valor de absorbancia obtenido. Estándar 1 2 3 4 5 Concentración (mg HC/ 100mL) 3. En base a las soluciones concentraciones de las patrón preparadas y las absorbancias obtenidas de las mismas.68 17. Posteriormente se registraron los valores de Absorbancia a 2939. . La solución de referencia tiene un valor certificado de 99. utilizadas para construir luego la curva de calibración.95% de HTP.3229 0. de diámetro y embudos de vidrio.84 10.1286 0. se logra confeccionar la Tabla Nº 3.4121 0. y en el eje de las abscisas el valor de concentración de las soluciones estándar.

yi*)2 / n-2] ½ Donde: yi : valor de absorbancia registrado para cada solución estándar yi *: valor ajustado de yi. Se especifica también como la concentración de analito que produce una señal tres veces mayor que la desviación estándar de la señal de fondo ó blanco. sobre la recta de tendencia calculada .Yb = 3 Sb Donde: Y: Límite de detección Yb: Señal del blanco (se estima utilizando el valor de la ordenada al origen de la recta expresada en (3.1)) Y Sb= S x/y = [ Σ(yi . según la siguiente ecuación: Y .Curva de calibración para HTP´s. Limite de Detección El límite de detección de la técnica se define como “la concentración de analito que da una señal significativamente diferente a la señal de fondo ó blanco (Yb)”.

lo cual constituye una limitación reconocida de dicha técnica. Las determinaciones se llevaron a cabo por triplicado. con CCl4 como solvente. El porcentaje de humedad del suelo se calculó de la siguiente manera: % H = (pssa-psse)/pssax100. Determinación de Microorganismos Mesófilos Heterótrofos Totales . La confiabilidad de los resultados obtenidos mediante la técnica de extracción por solvente. de muestras de suelo contaminado de similares características a las analizadas. debido a que es altamente improbable encontrar compuestos orgánicos volátiles en el suelo analizado y a que el hidrocarburo para cuantificar es pesado.8 % (Brissio. psse: peso del suelo seco a estufa.12 mg Hidrocarburo/ kg suelo seco Recuperación del Método La recuperación del método se realiza para conocer la eficiencia del método de extracción. Aún así debe tenerse en cuenta que el método puede no alcanzar el 100 % en la extracción debido a diversas variables. 2005). este procedimiento influye en gran medida en la confiabilidad de los resultados. La recuperación de la extracción en Soxhlet. y luego extraer el contaminante por el método de extracción seleccionado. ha sido examinada en trabajos anteriores. Donde: pssa: peso del suelo seco al aire. 2005): x : 22. No obstante. recomendada por el Método 3540C de la US EPA.El límite de detección para esta técnica fue determinado previamente (Brissio. 1. Determinación de Peso Seco del Suelo Una fracción de 10 g de suelo se colocó en un crisol y se llevó a estufa a una temperatura de 110 ºC hasta que el peso de la muestra se mantuvo constante. se utilizó este procedimiento de extracción en el presente trabajo. obteniéndose una recuperación del 85.15. por ello se calcula el porcentaje de recuperación del método. Consiste en contaminar un suelo blanco con un aceite (que en este caso se trata del mismo aceite utilizado a lo largo de todo el trabajo) a una concentración conocida. puede verse afectada por la pérdida de analitos volátiles.

50 g. correspondientes a un mismo tratamiento. empleando un medio de cultivo completo (PTGY). 0. se recoge 1 g. Componente Peptona Triptona Extracto de Levadura Glucosa MgSO4.2H2O Agua Destilada Peso 0. 2000. cuya composición se presenta en la Tabla Nº 4. se fracciona el medio de cultivo en tubos de ensayo a razón de 5 mL por tubo. El número de tubos conteniendo medio de cultivo.. se conforma una muestra única (“pool”) por tratamiento y se homogeneiza. antes y después de secarlo en estufa. Composición del medio de cultivo.Se utilizó la técnica del Número más Probable (NMP) en medio líquido (Boonchan et al. para la realización de las correspondientes diluciones que la técnica a efectuar indica. Por otro lado se dispone una determinada cantidad de tubos de ensayo con 9 mL de agua destilada cada uno.Toma de Muestras y Diluciones para Recuento Microbiológico Se toma una muestra de cada uno de los cuatro microcosmos.7H2O CaCl2.30 g. de suelo se colocan en estufa a 110 ºC.0035 g.. El contenido de humedad del suelo se determina por la diferencia de peso. Estos tubos se esterilizan previamente en autoclave. 0. Fraccionamiento del Medio de Cultivo y del Líquido de Dilución Luego de preparado. en placa de petri para determinar el porcentaje de humedad del suelo..50 g. 0.15. Peressutti et al. 2003. hasta peso constante. será determinado por la cantidad de tubos a sembrar según las diluciones calculadas para cada muestreo. siendo necesarios tres tubos por dilución. El procedimiento se esquematiza en la Figura Nº 14. en condiciones estériles. Van Hamme et al.25 g. .25 g. 2003). 1. y se esteriliza en autoclave a 121 ºC y 1 atm de presión durante 15 minutos.1. 0. Las placas de petri conteniendo 5 g. 0. De la misma forma se toman 5 g. 1000 mL.

Tubo de ensayo esterilizado Paca de Petri 5 gr. De dicha muestra única se pesa 1 gramo y se introduce en un tubo de ensayo. A estufa en placa de petri para determinar su peso seco Macetas A.D.Tratamiento EST Tubo de ensayo 9 mL. A.E. Se toma 1 mL del sobrenadante de ésta primera dilución.D. conteniendo 9 mL del líquido de dilución (agua destilada estéril). Macetas Tratamiento EFL Tubo de ensayo 9 mL. Tubo de ensayo esterilizado Placa de Petri 5 gr.: Agua Destilada Estéril. A.: Agua Destilada Estéril.E. A estufa en placa de petri para determinar su peso seco A.E.D. y se lo coloca en un segundo tubo conteniendo 9 mL de agua destilada estéril.D. con una pipeta estéril. el cual corresponde a un primer nivel de dilución de 1:10 (10-1). el cual corresponde a la . para dilución 1 gr. para dilución 1 gr. Toma de muestras para recuento microbiológico. Se agita en el vórtex.E.

D. Una vez que se dispone de todas las diluciones. 1 g. 10 -1 10 -2 10 -3 10 -… 9mL Totalizando 10 tubos de ensayo desde la dilución 10-1 a la dilución 10-10 Dilución de las muestras de suelo. de cada dilución en los tubos con medio de cultivo previamente preparados (Figura Nº 17). Siembra de las Muestras Mesada para siembra de bacterias heterótrofas totales. 1 mL. se procede de la misma manera hasta alcanzar el último nivel de dilución establecido (10-10) (Figura Nº 15). 1 mL. Así.1 mL. A. por triplicado.segunda dilución (10-2).E. Muestra (en este caso sólida) Dilución de la muestra 1 mL. para siembra de microorganismos. . se siembra una alícuota de 0.

Recuento de Microorganismos Viables Con el objeto de estimar cual es la carga incorporada de bacterias vivas en el tratamiento EFL a través del líquido cloacal tratado. tomándose como positivos a aquellos tubos que presentan turbidez debido al desarrollo microbiano.1 mL Diluciones Medio de cultivo 10 -1 10 -2 10 -3 10 -4 10 -… 10 -10 Totalizando 30 tubos de ensayo con medio de cultivo (tres por cada dilución) Siembra de medios de cultivo a partir de las diluciones. 1. 0.Siembra de las diluciones A. Célula viable. para tres réplicas por dilución (Ver en anexo).2.Incubación y Lectura Los tubos son incubados durante 7 días a temperatura ambiente. Al octavo día se realiza la lectura de los mismos. . 1.gr suelo-1). Luego se determina estadísticamente el número de bacterias por gramo de suelo seco (Nº bact.15. se define como la que es capaz de dividirse y formar una progenie. se realizó un recuento de bacterias viables.3. mediante la tabla de Mc Crady.E 9 mL.15.D. Este procedimiento se realiza para cada tratamiento.

Agar fundido para recuento (45 ºC) 10 -1 10 -2 10 -3 10 -… 1 mL.E 9 mL. el cual a sido enfriado a 45 ºC (Figura Nº 18) luego las placas se colocan en una mesa lisa y nivelada hasta que solidifica el agar. Muestra (en este caso líquida) 11 o 12 mL. Esta técnica puede ser usada para determinar unidades formadoras de colonias por mililitro o por gramo de muestra.El método preferido para este trabajo es el Recuento Estándar en Placa por la técnica de agar volcado “Pour Plate”. Es fundamental trabajar siempre en el área de influencia del cono estéril del mechero. Como rara vez se conoce la cuenta viable aproximada en un momento dado. la que tiene el mayor significado estadístico. de agar fundido. Diluciones A. La práctica común. Ejemplo de siembra de bacterias en placa de petri. tanto para la siembra como para el volcado del agar. Para diluciones 1 mL. Para obtener el número apropiado de colonias. posteriormente se deben invertir las placas en incubar manteniéndolas a temperatura ambiente por 48 hs. a continuación se agrega a cada placa una cantidad de 11 o 12 mL. suele ser necesario hacer más de una dilución . y se depositan cada una en una placa de petri estéril.D. es la de contar solamente aquellas placas que tengan entre 30 y 300 colonias. en esta técnica se realizan diluciones de la muestra en forma similar a la técnica del “Número más Probable” De cada dilución se toman tres alícuotas de 1 mL. usualmente se debe diluir la muestra a contar. Placa de Petri Estéril Por cada dilución se realizan tres placas de petri como la que se muestra.

5) Conductividad (dS/M) Materia Orgánica (÷) Carbono Orgánico (÷) Nitrógeno (÷) (Mox 0.5 0-15 Arenosa 8.05) Fósforo Olssen (ppm) Na+ Sales solubles (meq/l) (Ext. Profundidad (cm.químico del suelo utilizado en el estudio. La tabla Nº 5 muestra las propiedades fisicoquímicas del suelo analizado. Saturación) cationes Ca2+ 4. Los resultados obtenidos se muestran en la Tabla Nº 6. La relación de adsorción de sodio (RAS) indica suelo no sódico. y medianamente provisto de fósforo.09 0. La conductividad eléctrica medida en el extracto de saturación indica suelo no salino. Concentración de hidrocarburos totales en los suelos blanco.38 9.9 0.6 1.17.8 Mg2+ RAS 5.2 0. Niveles de Hidrocarburos Totales de Petróleo en el Suelo Seleccionado para el Estudio. Análisis físico. Previo al inicio de la experiencia se determinó el contenido de HTP´s del suelo seleccionado para el estudio.) Textura PH (pasta) PH (1:2. El pH en pasta es moderadamente alcalino. con el objeto de evaluar los valores base o de fondo correspondientes. En cuanto a la fertilidad está muy pobremente provisto en materia orgánica y nitrógeno.Resultados y Discusión 1.16.8 8.09 13.35 0. . Análisis Físico-Químico del Suelo Estudiado. El suelo presenta una textura gruesa (arenosa).

18. Muesta 1 Muestra 2 Muestra 3 98 11 99 Fechas de Análisis T0 T 30 T 60 T 90 N-NH3 (mg/L) 13 13 9 14 P total (mg/L) 1. al superar la concentración de 0. En la Tabla Nº 8 se muestran los análisis químicos realizados a los efluentes cloacales tratados de la planta de tratamientos ubicada en la zona del Parque Industrial Neuquén durante el tiempo del presente estudio. Características Químicas y Microbiológicas del Efluente Utilizado. en todos los casos. 1. el suelo seleccionado para el estudio se puede considerar apto como blanco.8 4 En base a la cantidad de fósforo encontrado.93680 Máximo 110.Análisis estadístico para HTP´s en suelo blanco. La relación DBO/DQO se presenta siempre por debajo de 0. La concentración de HTP´s presentes en el suelo seleccionado se encuentra en un orden significativamente menor a los niveles alcanzados en la contaminación experimental.5 lo que implica que la mayor parte de la materia orgánica presente en el agua no será fácilmente utilizada como nutriente por los microorganismos. 1999). D.1332 Variancia 41.1 2.1 mg/L (Orea. Caracterización química del líquido cloacal de la Planta del Parque Industrial Neuquén. TPH Blancos Muestras 3 Muestra Media 102. por cuanto estos valores base no interferirán en la evaluación posterior. .04780 Mínimo 98.2 1. G. el agua analizada se considera como un medio hipereutrófico.432441 Teniendo en cuenta los niveles propuestos por las “Normas Holandesas”.37630 ( Desvío Estándar 6.7059 Mediana 99.

donde es retornado por medio de . recibe los efluentes industriales y pluviales a través de la red de drenajes. Las bombas en el pozo operan en forma automática por medio de un sensor de nivel que acciona las mismas evacuando el líquido crudo a un tanque ecualizador. de velocidad de flujo baja. se deriva el líquido que lleva barros activados en suspensión. y sedimente en el fondo donde es arrastrado por un barredor hacia la zona central. hacia el clarificador. desembocan en una cámara colectora de efluentes. El líquido ecualizado pasa luego a un sedimentador tipo Imhof que cumple la función de sedimentador primario y digestor anaerobio de barros. El objetivo es promover una zona quieta. El tanque ecualizador permite además retirar los sólidos gruesos que pudieran pasar el sistema de rejas. ubicada en la zona Este del Parque Industrial Neuquén. de modo que el barro se separe del líquido. donde la baja velocidad de flujo en esta unidad provoca la decantación del los sólidos suspendidos. Tratamiento de los Líquidos Cloacales. La Planta Depuradora de Líquidos Cloacales del Parque Industrial. Posterior a la cámara. la aireación tiene el objeto de facilitar el proceso de degradación de la materia orgánica realizado por los microorganismos residentes en él. los efluentes avanzan sobre canales desarenadotes hasta un pozo de bombas. el cual nivela el pH para que no llegue a los procesos biológicos un pico ácido o básico. Los barros estabilizados en esta unidad. la remoción se realiza por medio de un barredor de superficie. Un sistema de rejas retiene los sólidos de mayor tamaño arrastrados por las aguas a tratar. Después de la etapa de oxigenación. Fecha 29/06/2005 14/07/2005 03/08/2005 21/09/2005 Res 104x1 151x1 75x 1 94x1 Una parte fundamental del proceso de depuración de los efluentes es la aireación del líquido en el reactor aerobio que se ubica luego del sedimentador Imhof. son enviados posteriormente a piletas de secado.En la Tabla Nº 9 se muestran los recuentos de microorganismos viables realizados a los efluentes cloacales tratados de la planta de tratamientos ubicada en la zona del Parque Industrial Neuquén durante el tiempo del presente estudio Recuento de microorganismos viables en el efluente a lo largo del tiempo. los que pueden eliminarse por medio de un peine mecánico. La red de drenajes industriales y pluviales.

Recuento de microorganismos aerobios totales en los suelos no contaminados (microorganismos por gramo de suelo seco). Tiempo T Cero T 90 T90 Resultad 7. Desde el clarificador y previo análisis para verificar las composición y aptitud del efluente para su disposición final. Bacterias Heterótrofas Totales en Suelos no Contaminados En los dos suelos no contaminados. EST No Cont. Estos datos se observan en la tabla Nº 10. El proceso se esquematiza en la Figura Nº 19.bombas hacia el tanque de aireación. manteniendo de este modo una edad de barro estable. Se presume que el aumento del valor obtenido en el recuento de microorganismos para el tratamiento EST. De estos dos resultó mayor el que corresponde al tratamiento EFL. EFL No Cont. Esquema de la planta. el agua tratada pasa a canal de desagüe por el cual es transportada hasta las afueras de la planta y luego hasta su cuerpo de agua receptor (Medcalf. se observa al final del tratamiento un aumento en las poblaciones de microorganismos por un valor aproximado de un orden de magnitud. Muestra Suelo Bco.85x10 .57x10 5.65x10 1. 1977). es una consecuencia del agregado de nutrientes inorgánicos.

Concentración de hidrocarburos totales de petróleo registrados en tratamiento EST.155 17041.02 3948.92 HTP´s Promedio HTP´s .75 12458.81 4587.65 4324.31 11790.385 11997.54 6796. Tiempo Muestra (Días) 0 I II III IV 15 I II III IV 30 I II III IV 60 I II III IV 90 I II III (mg HC/Kg. se muestran en las Tablas Nº 11 y 12 respectivamente. Suelo Seco) 22449.72 10680. suelo seco) (mg HC/Kg.41 11919.19.18 5723.89 3420.64 19633.67 18707. Niveles de Hidrocarburos Totales de Petróleo en los Tratamientos EFL y EST.8 10333.56 19458.79 5921.53 12638.77 5586.19 11409.93 10208. Los valores obtenidos en la determinación de HTP´s para los dos tratamientos (EST y EFL) de biodegradación a lo largo del tiempo.12 12563.Es posible de que el aumento en la población microbiana del tratamiento de suelo no contaminado EFL radique en la incorporación de microorganismos y materia orgánica a través del efluente tratado.23 3952. 1.

44 10220. Suelo Seco) 22275.37 11316.92 12437.37 15964.22 10588.76 16823. Tiempo Muestra (días) 0 I II III IV 15 I II III IV 30 I II III IV 60 I II III IV mg HC/Kg.46 12041.81 mg HC/kg suelo seco 20000 15000 10000 5000 0 0 20 40 60 Tiem po (días) 80 100 Concentraciones promedio de HTP en el Tratamiento EST.16 12765.64 11133.28 16160.57 23055.07 HTP´s ( Promedio HTP´s .14 23186.27 22267.72 16187. suelo seco) (mg HC/Kg.69 11140.93 12458.IV 25000 4115.65 15800.25 22696.73 11808. Concentración de hidrocarburos totales de petróleo registradas en tratamiento EFL.

76 25000 mg HC / kg suelo seco 20000 15000 10000 5000 0 0 20 40 60 80 100 Tiempo (días) Concentraciones promedio de HTP en el Tratamiento EFL.90 I II III IV 8805. mg HC / kg suelo seco 25000 20000 15000 10000 5000 0 0 20 40 60 80 100 Tiempo (días) Concentraciones promedio de HTP´s obtenidas en los Tratamientos: · EST y ¨ EFL. en el tratamiento EFL son superiores a los incorporados en el momento de la contaminación (2%). posiblemente debido a contenido de HTP´s presentes en el agua tratada. Con respecto a los niveles iniciales de hidrocarburos.43 7192. Humedad del Suelo . En el período 30-60 días se observa en el tratamiento EST una disminución de la concentración de HTP´s luego de los cuales los valores permanecen constantes para llegar a niveles menores de 0.5% al final del estudio (90 días).24 1075.1 9214. Para el tratamiento EFL se alcanzan niveles mayores que el EST (ver anexo).28 9676.

Los resultados se presentan en la Tabla Nº 23.9024 5.422 4. Porcentaje de humedad hallado en los tratamientos. Además deben considerarse las condiciones climáticas diarias que pueden influir en la evaporación del agua desde el suelo. Debido a que estos incrementos no se observaron en los suelos no contaminados. psse: peso del suelo seco a estufa.A lo largo de la experiencia se determinó el porcentaje de humedad de las muestras. el crecimiento solo puede atribuirse a la utilización del hidrocarburo como única fuente de carbono.8443 . Bacterias Heterótrofas Totales en los T 30 Tratamientos EST y EFL EFL EST T 60 EFL EST T 90 EFL Donde: pssa: peso del suelo seco al aire. El mismo varió de un tratamiento a otro y a su vez en las distintas instancias de muestreo debido principalmente a que el riego se realizó homogenizándolo en forma manual. pssa 4.9631 6.3809 4. Tiempo (días) Ambos tratamientos presentan un significativo incremento en sus poblaciones durante los primeros 15 días de tratamiento.075 6.0876 9.9965 5.20. Muestra EST T0 EFL EST T 15 EFL EST 1.5425 4.4138 3.

2000).H. 302 pp. Alrededor de los 60 días de tratamiento. x gr de suelo seco 9 8 7 6 5 4 3 2 1 0 T cero EST EFL T 15 T 30 T 60 T 90 Crecimiento de la población de bacterias heterótrofas totales en los tratamientos EST y EFL. 1981. 2003). 1994. DOMINGUEZ RODRÍGUEZ. El crecimiento de las poblaciones es similar en los dos tratamientos durante los primeros 30 días. Sobre el final de la experiencia las poblaciones comienzan a decrecer. Introducción a la microbiología del suelo.A.. ambos tratamientos se encuentran por debajo del 1% P/P transcurridos 90 días. ALEXANDER. de la misma forma se destaca que una de las curvas se ubica por encima de la otra. Biodegradation and Bioremediation. este hecho podría ser consecuencia de las bajas concentraciones de hidrocarburos. Y GARCÍA HERNÁNDEZ. (Ercoli. lo cual se considera común para microorganismos en proceso de biodegradación (Peressutti. Academic Press. San Diego. Esta particularidad en el tratamiento EFL. el número de microorganismos oscila en torno a ordenes de magnitud de 107 y 108. M. México: AGT Editor S. M.Recuento de bactérias heterótrofas totales Log del número de bact. podría tener origen en la cantidad de microorganismos aportados a dicho tratamiento a través del efluente cloacal. Ø Ø . L. Bibliografía Ø ADAMS SCHROEDER. Potencial de la Biorremediación del Suelo y Agua Impactados por Petróleo en el Trópico Mexicano. I. V. ALEXANDER. 1999. Universidad Autónoma de Tabasco. R.

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tal como se indicó anteriormente De la misma forma. se puede concluir que el tratamiento EST es más efectivo que el tratamiento EFL debido a los niveles de HTP´s alcanzados al tiempo final (90 días). Conclusiones Ambos tratamientos alcanzan un nivel de hidrocarburos aceptable. Según los resultados obtenidos. En la Figura Nº 24 se observa el comportamiento de hidrocarburos y microorganismos a lo largo de los 90 días que duró la experiencia. El tratamiento EST además alcanza los valores mínimos dispuestos en la “Holland List” y en la Norma Mexicana NOM-138-SEMARNAT/SS-2003 para la fracción media de hidrocarburos.Disminución de TPH y crecimiento microbiano a lo largo del tiempo. Es factible utilizar el agua residual tratada para estimular procesos de biodegradación en suelo. . Durante los primeros 30 días de estudio se observa una disminución de los niveles de hidrocarburos totales de petróleo y un aumento en los recuentos microbianos hasta llegar a niveles constantes a partir de los 60 días. los estudios estadísticos indican que el tratamiento EST se ajusta al modelo exponencial (ver anexo) mientras que el tratamiento EFL no sigue el mismo comportamiento. según lo dispuesto por el Instituto Americano del Petróleo. sin embargo el uso de este tipo de aguas implica una menor eficiencia en el tratamiento. y por la velocidad de degradación alcanzada.

4. Normativa Internacional Aplicable 1. Normativa Provincial Relacionada 1.4. suficientemente significativas como para ser cuantificadas por espectroscopia infrarroja.Análisis Estadístico 1.2.3.4. aumenta sensiblemente al incorporar el hidrocarburo como única fuente de carbono y realizar la bioestimulación del tratamiento Anexos 1. se adopta como valor objetivo en trabajos de remediación un valor final del 1% P/P (10. valor basado principalmente en dos criterios: el efecto de toxicidad para las plantas y la movilidad de los hidrocarburos hacia el agua subterránea. Análisis de Regresión 1. .4. el que coincide con el nivel guía desarrollado y propuesto por el Instituto Americano del Petróleo (API).3. La microbiota nativa del suelo en un tratamiento de biorremediación. dado que no existe en la Legislación Nacional y/o Provincial niveles guía de hidrocarburos totales de petróleo (TPH).000 ppm). Datos de HTP´s Correspondientes a los Tratamientos de Biorremediación 1. Tabla de McCrady para Tres Replicas por Dilución 1.2.Los tratamientos de biorremediación de suelos contaminados artificialmente con hidrocarburos en un porcentaje del 2%.1.1. presentan variaciones de concentración a lo largo de los primeros 90 días. Normativa Internacional Aplicable En el caso de contaminación de suelos por hidrocarburos. Comparación de medias de HTP´s correspondiente a los 90 días (tiempo final) 1.1.

Para el caso de compuestos específicos.000 (saneamiento) Norma Mexicana NOM-138SEMARNAT/SS-2003 TPH (fracción liviana) Suelo (Uso Industrial) TPH (fracción media) (mg/kg base seca) TPH (fracción pesada) Suelo API (mg/kg base seca) TPH (mineral oil) 10. Normativa Provincial Relacionada Ley Provincial 1875. También se considera como referencia lo establecido en la Norma Oficial Mexicana NOM138-SEMARNAT/SS-2003.000 (inicio investigación) Parámetro Valor de Referencia (ppm) 100 (concentración base) 1. Complementariamente. 31. Incorpora elementos nuevos que no se habían tenido en cuanta antes.2.000 500 TPH (mineral oil) 1. 24..Dicho valor final se toma como referencia para áreas de exploración y explotación hidrocarburífera. . Los límites máximos permisibles para fracciones de hidrocarburos en suelo establecidos en esta norma son los siguientes: Tabla Nº 1: Valores de referencia considerados.000 6. no obstante en áreas de mayor sensibilidad ambiental. se podrá adoptar un valor guía inferior a fin de lograr los niveles de calidad adecuados para la actividad que se desarrolla en el lugar. Norma Matriz Suelo Holland List (mg/kg base seca) 5.000 5. Modificada por Ley 2267 (T. · Participación ciudadana a través de la Audiencia Pública Art. la cual establece “Límites Máximos de Hidrocarburos en Suelos y las especificaciones para su caracterización y remediación”.O. como valor objetivo para este estudio se han utilizado los niveles guía difundidos en la informalmente denominada “Holland List” (Entidad Gubernamental de Medio Ambiente de los Países Bajos Norma "Leidraad Bodermbescherming" -edición 1994). como por ejemplo: · Licencia ambiental Art.) Decreto Reglamentario 2656/99 La reforma de la Ley y se realizó en Diciembre de 1998 y la reglamentación en Septiembre del año 1999.

La autoridad de aplicación es la Dirección Provincial de Hidrocarburos y Combustibles. separadoras y de bombeo. de Crudo. · El control y la fiscalización Ambiental. Controlar los derrames de hidrocarburos. y cuenta con Decreto Reglamentario 1147/96. Esta Ley regula la actividad hidrocarburífera de la provincia y crea la Policía de Hidrocarburos. 32. 33. respecto a las tecnologías utilizadas. Ley Nº 1347 La provincia de Neuquén adhiere al régimen de la Ley Nacional Nº 22. 27. baterías Plantas de tratamiento de Gas. · Registros Ambientales Art. 20.· El proponente Público Art. a efectos de proteger el medioambiente. Refinerías). Las funciones principales: Contralor operativo de toda la actividad dentro de la provincia (Pozos. de Agua.428 de uso y conservación del suelo . Ley 1926 Actividad Hidrocarburífera. 24. Reglamentación – Decreto Nº 2656/99 Define claramente el procedimiento administrativo que lo Proponentes deben cumplir. Liquidación y pago de regalías. 28. · Seguros Ambientales Art. Exigir las declaraciones juradas de la producción de hidrocarburos líquidos o gaseosos. · Régimen de Sanciones Art. Controlar el buen uso del recurso hidrocarburífero. · Comité provincial de medio Ambiente Art. transporte y almacenamiento. antes y durante la ejecución de la obra Art.

6 1.243 9.64 19633.3.12 22275.690 9.000 30.000 15.5 130 1.668 9. Análisis Estadístico 020 0.4.3 011 0.678 9.000 15.3 010 0.4 101 0. Datos de HTP´s Correspondientes a los Tratamientos de Biorremediación 100 0.1.837 9.000 15.27 22267.9 Valores de HTP´s para los tratamientos EST y EFL.411 1 2 3 4 5 6 7 8 9 22449.4.22 12588.53 12638.6 200 0.57 23055.445 9.0 001 0.000 0.67 18707.000 0.28 16160.7 111 1.37 15964.046 10.731 9.1 120 1.1 110 0.430 9.051 10.93 10208.7 102 1.000 30.386 9.75 12458. TIEMPO 0.41 11919.011 9.80 10333.743 9.44 12220.14 23186.1.885 9.76 16823.000 10 N Cara .37 15.39 11997.019 9.56 17041.392 LN EFL 10.231 9. Tabla de McCrady para Tres Replicas por Dilución Tabla de McCrady Número Número de Característico Microorganismos 000 0.000 EST EFL LN EST 10.000 0.1 121 1.011 10.65 15800.6 1.441 9.

083 9.000 90.000 90.686 8.000 12563.138 8.230 4115.46 8805.430 9.2.276 8.770 5586.428 9.459 9.824 8. Resumen de regresión para la variable dependiente: LN EST R = 0.72 10680.026305 df f Nivel p 1 18 234.000 30.64 10207. Residual 6. VD: LN EST Ho: b=0 (no hay dependencia entre el ln EST y el tiempo) Suma de los cuadrados Regresión.18) = 234.100 9214.473493 Media de cuadrados 6.00000 . la variabilidad de ln EST puede ser explicada por el tiempo.000 90.890 3420.16 10107. Análisis de Regresión TRATAMIENTO EST Análisis de variancia.020 3948.170833 0.439 9.323 9.59 p < 0.4.000 60.000 60.54 6796.221 9.000 90.92477817 F (1.11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 30.218 9.5863 0.92873722 Ajustado R² = 0.628 8.650 4324.000 60.644326 Se rechaza Ho.177 9.240 9512.810 12816.93 10081.000 60.160 9.231 9.810 4587.000000 Total: 6.73 10503.259 9.92 12437.96371013 R² = 0.280 9676.281 8.431 8.129 1.170833 0.790 5921.372 8.

017191 .770914 -.963710 . Valores observados contra valores anticipados para el tratamiento EST.000000 Los datos ajustan al Modelo Exponencial EST= 17500.056846 .Error de estimación: 0.8843 -15.062921 9.9248.000000 .16219 Desvío estándar de Beta BETA B Desvío estándar de B t(18) p-nivel Intercepción TIEMPO -.001122 171.017 tiempo con un coeficiente de determinación (R2) de 0. ANÁLISIS DE LOS ERRORES CORRESPONDIENTES AL TRATAMIENTO EST .8 e – 0.3162 .

Gráfico de probabilidad normal de residuales Valor normal esperado contra valores residuales para el tratamiento EST. Homocedasticidad e Independencia de los errores.Valores residuales contra valores anticipados para el tratamiento EST. Se observa normalidad. TRATAMIENTO EFL Ho: b=0 (no hay dependencia entre el ln EST y el tiempo) .

869671 0.823838 0.87 p<0.015878 df f Nivel p 1 18 114. DV: LN EFL Suma de los cuadrados Regresión.4741 -10.044165 0.8662 0.000000 0.Análisis de Variancia. la variabilidad de ln EST puede ser explicada por el tiempo.00000 Error de estimación: 0.86452541 Ajustado R²= 0.000872 BETA B t(18) p-level Intercepción TIEMPO -0.086755 9.12601 Desvío estándar de Beta Desvío estándar de B 0.18)=114.109641 Se rechaza Ho.000000 .009346 223.7176 0. Resumen de regresión para la variable dependiente: LN_EFL R= 0.823838 0.000000 Total 2.92979859 R²= 0.285803 Media de cuadrados 1.929799 0.85699905 F(1. Residual 1.

Análisis de los errores correspondientes al tratamiento EFL Valores residuales contra valores anticipados en el tratamiento EFL . Debido a la falta de independencia de los residuales y al coeficiente R2 obtenido. se concluye que el Tratamiento EFL no ajusta al Modelo Exponencial esperado.Valores observados contra valores anticipados para el tratamiento EFL.

05000 Desvío Estándar 386. 2° Prueba t de comparación de medias T-test para muestras dependientes Las diferencias marcadas son significativas para p < 0.4. a=0.178 9302.84 191. Comparación de medias de HTP´s correspondiente a los 90 días (tiempo final) 1° Prueba F de Homocedasticidad: Ho= sEST 2 /sEFL 2 =1 F calculado= Sx 2/ Sy 2 = (386.Valores normales esperados contra valores residuales en el tratamiento EFL 1.8426 3 0.3.020 F crítico (2.36) 2 = 1.013 .6041 -55.000013 Diferencia del desvío estándar Media N Diferencia t df P EST T FIN EFL T FIN 3952.25) 2 / (382.2553 382.2.3597 4 5349.05)=19 No se rechaza la Hipótesis de Homocedasticidad.

Las medias de HTP´s correspondientes a los 90 días no son iguales .