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8, 1714-1719, 2010 CARACTERIZAO FSICO-QUMICA DO FRMACO ANTICHAGSICO BENZNIDAZOL Flvia Pires Maximiano, Guilherme Hideki Yoshizane Costa e Jacqueline de Souza Escola de Farmcia, Universidade Federal de Ouro Preto, Rua Costa Sena, 171, 35400-000 Ouro Preto - MG, Brasil Marclio Srgio Soares da Cunha-Filho* Instituto de Cincias da Sade, Universidade Federal do Mato Grosso, Campus Universitrio de Sinop, Av. Alexandre Ferronato, 1200, 78557-267 Sinop - MT, Brasil Recebido em 5/1/10; aceito em 18/4/10; publicado na web em 9/8/10

Artigo

PHYSICOCHEMICAL CHARACTERIZATION OF ANTICHAGASIC BENZNIDAZOLE. Currently, benznidazole (BNZ) is a unique therapeutic alternative available in Brazil to treat Chagas disease. Despite its traditional medical use, little is known about the chemical nature of this drug. A detailed study of the physicochemical properties of BNZ was performed using multiple assays. Thermal, diffractometric, morphological and reological drug profiles were obtained. The partition coefficient and solubility results allowed this drug to be classified as a class IV drug according to the biopharmaceutical classification system. This information will be useful for the development of more effective BNZ formulations and for establishing the quality profile of BNZ. Keywords: benznidazole; preformulation; biopharmaceutical classification.

INTRODUO A pesquisa e o desenvolvimento de medicamentos inovadores tm sido uma empreitada cada vez mais cara e complexa, o que torna mais escassa a introduo de novas molculas no mercado.1 Estima-se que de cada 30.000 compostos sintetizados, apenas 0,003% chegam a se tornar frmacos disponveis no comrcio.2 Dentre as causas que explicam estes inmeros fracassos esto problemas derivados de sua biodisponibilidade e toxicidade, que podem estar relacionados ao escasso conhecimento acerca da natureza da molcula em estudo.3 Neste contexto, os estudos de pr-formulao, realizados nas etapas de pesquisa pr-clnica e clnica de frmacos inovadores, e que visam acumular o mximo de informao sobre o comportamento das novas entidades qumicas, constituem um valioso instrumento para traar estratgias de desenvolvimento racional de formulaes mais eficazes e seguras e, portanto, com maiores possibilidades de xito.4,5 Diversos aspectos concernentes substncia ativa, como a biodisponibilidade a partir da forma farmacutica, ou ao medicamento, como seu prazo de validade, e at mesmo seu processamento industrial so afetados pelas propriedades fsico-qumicas dos frmacos. O Benznidazol [BNZ] (N-benzyl-2-nitro-1-imidazole-acetamide) (Figura 1), constitui um dos nicos recursos teraputicos disponveis no combate doena de Chagas h dcadas. Este medicamento bastante efetivo na fase aguda da doena, mas existem relatos de baixa ou nenhuma eficcia na fase crnica. Efeitos secundrios severos associados utilizao desse frmaco tm sido reportados, tendo como consequncia, a interrupo do tratamento medicamentoso.6

Apesar de ser um frmaco j consolidado no mercado e bastante estudado do ponto de vista farmacolgico, as propriedades fsicoqumicas do BNZ so praticamente desconhecidas. Estudos de prformulao poderiam propiciar uma maior compreenso das suas caractersticas biofarmacuticas e permitir vislumbrar alternativas para melhorar sua ao teraputica. Desta forma, o objetivo deste estudo foi traar o perfil fsicoqumico do BNZ atravs de diferentes ensaios de caracterizao, como forma de estabelecer parmetros de qualidade para este composto e auxiliar no melhoramento tecnolgico de medicamentos base deste antichagsico. PARTE EXPERIMENTAL Materiais Benznidazol [BNZ] (MW 260,25) produzido pelos laboratrios Roche, lote 13871. Todos os solventes e reagentes utilizados nos ensaios foram de pureza analtica. Solubilidade Os estudos foram conduzidos utilizando excesso de frmaco em 10 mL de diferentes meios lquidos. As amostras pulverizadas de BNZ foram inicialmente submetidas a ultrassom por 15 min e colocadas sob agitao magntica vigorosa a 25 oC ( 2 oC) at o estabelecimento do equilbrio, a seguir foram filtradas (0,45 m) e doseadas por metodologia espectrofotomtrica previamente validada a 324 nm. Este experimento foi realizado em triplicata e a saturao das amostras foi previamente determinada em 48 h. Meios lquidos de diferentes naturezas e polaridades foram utilizados como solventes no ensaio de solubilidade e encontram-se listados a seguir: gua, metanol, etanol, acetona, acetato de etila; isopropanol, diclorometano, hexano, clorofrmio, ter de petrleo, acetonitrila, octanol, fluido gstrico simulado (pH 1,2), 7 fluido entrico simulado (pH 6,8),7 soluo aquosa de lauril sulfato de sdio [LSS] em diferentes concentraes (0,1; 0,2; 0,5 e 1,0%), leo mineral e leo de amndoas.

Figura 1. Estrutura molecular de BNZ *e-mail: marciliofarm@hotmail.com

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Velocidade intrnseca de dissoluo [VID] Para determinar a velocidade intrnseca de dissoluo do BNZ, foram preparados discos compactos no desintegrveis deste frmaco, empregando presses elevadas em uma compressora excntrica Fabbe utilizando punes circulares planas de 12 mm. Os comprimidos de BNZ obtidos com elevada dureza e superfcies lisas foram recobertos de parafina, de forma que o topo e as laterais do comprimido ficassem revestidos e somente uma das faces de rea calculada em 1,13 cm2 permanecesse exposta. O ensaio de dissoluo foi realizado em um dissolutor Nova Etica, utilizando 900 mL de fluido gstrico simulado como meio de dissoluo a 37 C e ps como aparato de agitao a uma velocidade de 75 rpm.7 Os comprimidos foram fixados ao fundo da cubeta com auxlio de uma malha de ao inox e com a face sem parafina exposta ao meio de dissoluo. Amostras do meio foram coletadas em tempos programados, filtradas e quantificadas quanto concentrao de BNZ, utilizando metodologia espectrofotomtrica previamente validada. O ensaio foi realizado em quintuplicata e a VID foi obtida a partir do coeficiente angular da regresso linear da quantidade de frmaco dissolvido por superfcie em funo do tempo, conforme descreve a equao de Noyes-Nernst.8 Coeficiente de partio pelo mtodo de agitao moderada

a 0,25% p/p. Os valores representam a mdia de 5 determinaes e so expressos em porcentagem (%p/p). Perfil difractomtrico Ensaios de difrao de raios-X do p foram realizados em amostras de BNZ empregando-se um equipamento XRD-6000 (Shimadzu), utilizando monocromador de grafite e nodo de Fe no intervalo de 2 a 60 o2. Superfcie especfica A rea superficial especfica do BNZ foi determinada por meio da tcnica de adsoro de nitrognio aplicando-se o modelo proposto por Brunauer, Emmett e Teller [BET].10,11 Amostras de frmaco previamente degaseificadas por 24 h a 40 oC foram analisadas no equipamento BET Surface Area Analyser Nova 1000. Densidade real A densidade real do frmaco foi determinada por picnometria de hlio, conforme descrito na Farmacopeia Americana, em duplicata, utilizando um picnmetro Quantachrome MPY.7 Anlise granulomtrica e morfolgica

O coeficiente de partio do BNZ foi obtido conforme mtodo de agitao moderada validado para frmacos de baixa solubilidade aquosa.9 Utilizou-se como fase orgnica 1-octanol e como fase aquosa, gua destilada, fluido gstrico simulado pH 1,2 e fluido entrico simulado pH 6,8.7 Os meios de partio foram submetidos saturao mtua por 2 dias, com temperatura controlada de 25 oC antes do estudo. O BNZ foi previamente solubilizado na fase orgnica e colocado junto fase aquosa sob agitao magntica durante 5 dias, a 25 oC. A turbulncia na interface de separao dos meios foi controlada, de forma a evitar a emulsificao do octanol na fase aquosa. Ao final, as concentraes de frmaco nas fases aquosa e octanlica foram quantificadas por espectrofotometria na regio do ultravioleta a 324 nm, utilizando-se metodologia validada. O experimento foi realizado em triplicata. O coeficiente de partio foi representado pelo logaritmo de base 10 da relao entre a concentrao de frmaco nas fases octanlica e aquosa [LogPow]. Perfil trmico De forma a determinar o comportamento trmico deste produto, medidas de calorimetria diferencial de varredura [DSC] foram conseguidas utilizando-se os calormetros MDSC Q100 (TA Instruments) e DSC 2010 (TA Instruments). Nitrognio foi utilizado como gs de purga com fluxo de 50 mL/min. A calibrao do equipamento foi realizada com padres de ndio e zinco. Amostras de BNZ, de aproximadamente 3 mg, foram colocadas em cpsulas de alumnio planas tapadas e submetidas velocidade de aquecimento de 10 oC/min no intervalo de temperatura de 30 a 300 o C. Ciclos de aquecimento-resfriamento-aquecimento tambm foram realizados de forma a confirmar os fenmenos trmicos empregando velocidades de 10 oC/min. A pureza do princpio ativo foi conseguida a partir de anlises segundo a equao de vant Hoff, empregando-se o software TA Universal analysis 2000 V4. Para tanto, amostras de 2 mg foram submetidas a aquecimento de 2 oC/min, partindo-se da temperatura de 30 at 200 oC.7 A umidade residual do frmaco foi determinada utilizando termobalana de infravermelho Eurotherm (Gibertini). Foram pesadas amostras contendo 1,0 g de frmaco e submetidas a aquecimento atravs do infravermelho, at que a variao de peso fosse inferior

A avaliao da morfologia dos cristais de BNZ foi realizada por microscopia eletrnica de varredura (MEV) utilizando-se um microscpio LEO-435VP. As amostras foram previamente metalizadas com ouro. A distribuio dos tamanhos de partcula do lote comercial de BNZ foi determinada por tamisao a partir de 50 g de material utilizando um tamisador Bertel. O tamanho mdio de partcula do frmaco foi calculado a partir de anlise estatstica utilizando-se o mtodo de probabilidades.12 Propriedades de fluxo Medidas reolgicas dos cristais de BNZ foram avaliadas baseandose nas tcnicas propostas por Carr e em parmetros farmacopeicos.7,13 O ngulo de repouso foi medido pelo cone de p formado pelo escoamento do frmaco atravs de um funil de dimenses padronizadas sobre uma superfcie plana. O ngulo formado entre o cone e a superfcie foi medido com auxlio de um transferidor. O tempo de escoamento foi determinado pela medida do tempo necessrio para o escoamento de uma quantidade pr-definida de frmaco atravs de um funil padronizado, utilizando-se um cronmetro digital. A compressibilidade e o ndice de Hausner foram calculados a partir de medidas de volume aparente do slido antes [V0] e aps [Vf] ser submetido a compactaes com auxlio de uma proveta empregando a seguintes equaes: Compressibilidade = (V0 Vf) /V0 *100 ndice de Hausner = V0 /Vf A densidade de enchimento foi calculada a partir da relao entre peso de BNZ e volume ocupado pelo slido aps escoamento espontneo para uma proveta. Todas as medidas de fluxo de p foram realizadas em triplicata. Higroscopicidade A habilidade do BNZ em interagir com a umidade ambiental atmosfrica foi estudada empregando-se o modelo experimental estabelecido

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por Callahan e colaboradores.14 Amostras de BNZ foram expostas a 12 condies de umidade relativa diferentes (5-98%), durante 7 dias. Estas condies foram obtidas utilizando-se solues salinas saturadas em sistemas fechados a 25 oC.15 A quantidade de gua absorvida pelas amostras foi medida por gravimetria atravs do monitoramento do incremento de peso percentual das amostras de BNZ em p, previamente dessecadas, e aps o tempo de exposio nas diferentes condies de umidade relativa atmosfrica. O experimento foi executado em triplicata. RESULTADOS E DISCUSSO Solubilidade A solubilidade dos frmacos uma propriedade que influencia diferentes aspectos relativos farmacocintica e estabilidade qumica da molcula. Auxilia tambm na escolha do solvente mais adequado para utilizaes analticas, assim como na eleio do veculo mais idneo para uso em ensaios in vivo ou para uma possvel formulao lquida do frmaco. Os solventes com maior capacidade para dissolver o BNZ e que, portanto, so os mais recomendveis para utilizao em mtodos analticos e extraes deste composto foram o metanol, a acetonitrila e a acetona (Tabela 1). Notam-se algumas diferenas dos resultados deste ensaio (Tabela 1) com respeito aos valores de solubilidade descritos na literatura. A solubilidade aquosa do BNZ citada em algumas publicaes como 0,4 mg/mL,16 afastando-se consideravelmente do valor experimental encontrado de 0,2 mg/mL em gua destilada ou nos fluidos gstrico e entrico simulados. Este dado demonstra que o frmaco no se ioniza nas condies avaliadas, o que j era esperado, uma vez que a molcula de BNZ no apresenta grupos facilmente ionizveis (Figura 1). Observa-se tambm que mesmo apresentado uma solubilidade limitada em gua, os valores encontrados para alguns veculos oleosos (leo de amndoas e leo mineral) so ainda mais reduzidos. A presena de um tensoativo (Lauril sulfato de sdio) possibilita incrementar de forma importante a solubilidade aquosa do BNZ somente em concentraes elevadas (Tabela 1). Destacam-se ainda as divergncias existentes em relao classificao da solubilidade farmacopeica e a monografia do BNZ matria-prima encontrada na Farmacopeia Brasileira IV ed.17 Para alguns solventes (acetona e isopropanol), a solubilidade experimental superior descrita na monografia, o que pode ser explicado pela diferena de metodologia empregada, uma vez que o ensaio farmacopeico no garante condies de saturao das amostras. No entanto, para os solventes etanol, acetato de etila, diclorometano e hexano as solubilidades farmacopeicas declaradas so superiores aos dados de solubilidade determinados neste estudo. Os resultados aportados podero servir de base para uma futura reviso e complementao da monografia oficial do BNZ na Farmacopeia Brasileira. Velocidade intrnseca de dissoluo [VID] A velocidade intrnseca de dissoluo [VID] uma caracterstica inerente a cada substncia slida e, diferentemente das medidas de solubilidade, que se baseiam em equilbrio, esta constitui um parmetro cintico dependente da molhabilidade e da difusibilidade do composto. A determinao da VID fornece indcios se determinado frmaco apresentar problemas de biodisponibilidade em funo de suas caractersticas de dissoluo. Durante o ensaio, a quantidade de BNZ dissolvido no meio aumenta com o tempo de forma linear at os primeiros 20 min, quando a velocidade de dissoluo parcial do frmaco comea a declinar,

Tabela 1. Dados de solubilidade mdios de BNZ em diferentes solventes a 25 oC. Entre parnteses est representado o desvio padro dos resultados Monografia Farm. Bras. IV gua Destilada Muito pouco solvel Metanol 13,078 (2,240) Ligeiramente solvel Ligeiramente solvel Etanol 4,989 (0,359) Pouco solvel Ligeiramente solvel Acetona 30,546 (0,249) Ligeiramente solvel Pouco solvel Acetado de etila 3,550 (0,092) Muito pouco solvel Ligeiramente solvel Isopropanol 1,940 (0,130) Pouco solvel Muito pouco solvel Diclorometano 3,138 (0,192) Pouco solvel Ligeiramente solvel Hexano 0,141 (0,048) Muito pouco solvel Solvel Clorofrmio 1,499 (0,267) Muito pouco solvel Muito pouco solvel ter de petrleo 0,067 (0,007) Praticamente insolvel Praticamente insolvel Acetonitrila 24,741 (2,866) Ligeiramente solvel Octanol 0,530 (0,024) Muito pouco solvel Fluido gstrico 0,236 (0,004) Muito pouco solvel Fluido entrico 0,244 (0,012) Muito pouco solvel LSS 0,1% 0,219 (0,002) Muito pouco solvel 0,2% 0,229 (0,014) Muito pouco solvel 0,5% 0,299 (0,008) Muito pouco solvel 1,0% 0,406 (0,013) Muito pouco solvel leo mineral 0,003 (0,001) Praticamente insolvel leo de amndoas 0,029 (0,001) Praticamente insolvel a De acordo com a ref 17. Solvente Solubilidade (mg/mL) 0,237 (0,012) Classificao experimentala Muito pouco solvel

em funo da variabilidade das condies hidrodinmicas do ensaio (Figura 1S, material suplementar). A VID obtida para o BNZ, calculada a partir da poro linear inicial da curva, foi de 0,18 mg/cm2/ min, valor bastante inferior ao mnimo recomendvel de 1 mg/cm2/ min, o que indica que a dissoluo deste frmaco poder ser um fator limitante de sua absoro.8 Coeficiente de partio pelo mtodo de agitao moderada O coeficiente de partio fornece informaes sobre a facilidade dos frmacos em atravessar as membranas biolgicas. Esta medida da permeabilidade in vitro foi determinada para o BNZ utilizandose o mtodo de agitao moderada, que emprega uma agitao controlada na interface das fases orgnica e aquosa, de maneira a evitar a formao de microgotas de octanol na fase aquosa.9 Este mtodo se apresenta mais confivel que o mtodo tradicional de agitao em funil de separao, que promove a emulsificao da fase orgnica na fase aquosa propiciando uma sobre-estimao da concentrao do frmaco nesta fase, que no caso de frmacos pouco solveis em gua, como o BNZ, acarreta um erro significativo para o clculo de LogPow. Os valores de LogPow para o BNZ encontram-se descritos na Tabela 2. Valores similares de LogPow, em torno a 0,7, foram encontrados na literatura para os diferentes meios aquosos. Estimativas tericas relativas ao seu LogPow utilizando modelagem molecular por diferentes softwares disponveis (ClogP, KOWWIN, miLogP 2.2, ACD LogP) apresentaram valores entre 0,7 a 1,2.18 Os dados experimentais

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situam-se dentro da faixa prevista in silico, no entanto, apresentam um amplo intervalo de valores dependendo do modelo matemtico empregado pelos softwares, o que evidencia a necessidade de sua determinao experimental como forma de elevar o nvel de preciso deste ensaio (Tabela 2).
Tabela 2. Coeficiente de partio de BNZ baseado em valores experimentais e de estimativas in silico. Entre parnteses est representado o desvio padro dos resultados Meio orgnico 1-octanol 1-octanol 1-octanol Meio aquoso Log Pow Estimativas matemticas Log P ClogP KowWin miLogP2.2 ACDlogP 0,9 1,22 0,778 0,910 Figura 2. Perfil trmico de BNZ atravs de DSC. Termograma correspondente a um ciclo de aquecimento-esfriamento-aquecimento de BNZ (+200 oC;-20 o C;+300 oC)

gua 0,772 destilada (0,019) Fluido 0,784 gstrico (0,011) Fluido 0,763 entrico (0,027)

O tradicional sistema de classificao biofarmacutica divide os frmacos em 4 categorias, segundo suas caractersticas de solubilidade e de permeabilidade.19 A falta de informaes experimentais sobre estas medidas para o BNZ tem causado interpretaes dbias sobre a classificao biofarmacutica deste frmaco que, segundo publicaes recentes, chegou a ser inserido na categoria II (baixa solubilidade e alta permeabilidade) e III (alta solubilidade e baixa permeabilidade).20,21 O valor de LogPow do BNZ, embora relativamente alto, ainda no garante uma imediata permeao da molcula, que s ocorreria com substncias com LogPow superiores a 1,7.21 Considerando esta medida de permeabilidade e a reduzida solubilidade aquosa do BNZ (Tabela 1), pode-se incluir este antichagsico no grupo IV da classificao biofarmacutica, ou seja, um frmaco de baixa permeabilidade e de baixa solubilidade.
Figura 3. Difratograma de raios-X do p de BNZ experimental e simulado

Perfil trmico Um nmero elevado de eventos qumicos e fsicos pode ser detectado utilizando-se tcnicas trmicas como o DSC.22 Conforme se observa na Figura 2, o BNZ apresenta um pico endotrmico de fuso a 191,3 oC com entalpia associada de aproximadamente 140 J/g e degradao iniciando-se a partir de 240 oC. A Figura 2 mostra tambm que o resfriamento do BNZ, logo aps a fuso, promove a recristalizao do frmaco, evidenciado por um pico exotrmico bem definido a 115 oC, envolvendo uma entalpia de 95 J/g. Durante o segundo aquecimento desta amostra, a fuso do frmaco ocorre novamente na mesma temperatura e com valor similar de energia, o que confirma a natureza destes fenmenos e comprova que a segunda cristalizao origina a mesma fase cristalina inicial. A determinao da pureza do BNZ possui especial relevncia, uma vez que suas impurezas de sntese no esto estudadas a nvel toxicolgico. O mtodo trmico baseado na equao de vant Hoff recomendado pela Farmacopeia para anlise de frmacos e representa um mtodo rpido e preciso para este tipo de determinao.7 O lote de BNZ analisado apresenta elevada pureza, estimada em 99,43%. A umidade residual encontrada para o lote testado foi de 0,93% ( 0,38). Perfil difratomtrico O difractograma de um composto capaz de determinar sua pureza fsica. Neste ensaio foi estabelecido o padro de difrao do p para o antichagsico BNZ. Observa-se um perfil tipicamente policristalino, com picos principais bem definidos posicionados a 9,4; 13,9; 18,9; 20,4; 21,5 e 26,1 o2 (Figura 3). Podem-se apreciar algumas flutuaes nas intensidades relativas dos picos do BNZ quando comparado com seu difractograma padro simulado a partir dos dados de raios-X do monocristal (Figura 3).23 Estas variaes podem ser justificadas pela orientao preferencial dos cristais e indicam tratar-se da mesma forma cristalina estabelecida na literatura. Alteraes na fase cristalina do frmaco, como o aparecimento de formas polimrficas, seriam facilmente identificadas por este teste, com um elevado grau de segurana. Devido relevncia do controle cristalino atualmente recomendado para frmacos, o perfil difratomtrico constitui, portanto, uma ferramenta importante, juntamente com os mtodos trmicos, para ser aplicada rotina do controle de qualidade de matrias-primas de uso farmacutico. Superfcie especfica A rea superficial especfica do BNZ, determinada pelas isotermas de adsoro do nitrognio, revelou um valor de superfcie de 0,5 m2/g e reduzida porosidade das partculas, estimada em 1,4x10-3 cm3/kg. Estes dados explicam sua lenta velocidade intrnseca de dissoluo e justificam as deficientes propriedades de fluxo deste produto. Densidade real A densidade de um slido pode adotar diferentes valores em funo da tcnica empregada em sua determinao. A densidade picnomtria ou real encontrada para o BNZ foi de 1,35 g/cm3. Este valor se aproxima do referenciado no ensaio do monocristal (1,44 g/cm3), o que comprova a inexistncia de microporos ou de espaos

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vazios impenetrveis pelo gs nos cristais de BNZ.23 Esta medida de densidade real poder servir como referncia para o controle do polimorfismo ou do grau de cristalinidade do BNZ, uma vez que alteraes nestes parmetros influenciam consideravelmente a densidade de um slido. Anlise granulomtrica e morfolgica Os cristais monoclnicos de BNZ, utilizados na produo industrial do medicamento comercial Rochagan, apresentam hbito cristalino acicular, conforme se aprecia na fotomicrografia da Figura 2S, material suplementar. A anlise morfolgica de frmacos constitui um parmetro de fcil monitoramento e capaz de detectar mudanas cristalinas em decorrncia de variaes no processo de sntese ou mesmo no processamento farmacutico. A distribuio granulomtrica dos insumos exerce influncia importante em aspectos relacionados s etapas da produo industrial de um medicamento, como em processos de mistura e de enchimento, assim como em sua estabilidade e eficcia biolgica. No caso do BNZ, deve haver um controle rigoroso do tamanho de partcula, uma vez que este parmetro fsico possui influncia direta em sua velocidade de dissoluo, um fator crtico para sua biodisponibilidade.24 Os dados de tamisao do BNZ se ajustaram a uma distribuio logaritmo normal, o que permitiu determinar os valores de dimetro mdio de partcula e desvio padro geomtrico em 192,2 e 0,12 m, respectivamente. Conforme se observa no histograma da Figura 4, a distribuio do tamanho de partcula do BNZ relativamente fechada e com tamanhos de partcula considerveis.

Apesar de possuir um tamanho de partcula grande e de distribuio uniforme, o resultado dos diferentes ensaios realizados permite situar este frmaco como um material bastante coesivo e de mobilidade extremamente comprometida.
Tabela 3. Medidas de fluxo de BNZ. Entre parnteses est representado o desvio padro dos resultados Parmetro ngulo de repouso [] ndice de compressibilidade [%] ndice de Hausner Tempo de escoamento [s] Densidade de enchimento [g/mL] Resultados 60 (3,5) 40,7 (1,2) 1,68 (0,03) 0,39 (0,01) Classificao Muito deficiente Extremamente deficiente Extremamente deficiente -

O ngulo de repouso s pode ser medido aps escoamento forado do p. As medidas de compressibilidade e de ndice de Hausner confirmam o fluxo medocre do material, apresentando valores muito superiores aos recomendados para insumos farmacuticos. O BNZ no flui livremente, possuindo tempo de escoamento infinito (Tabela 3). Este comportamento pode ser explicado pela morfologia das partculas (Figura 2S, material suplementar) que favorece interaes interparticulares. A manipulao farmacutica deste frmaco deve, portanto, requerer substncias adjuvantes ou mesmo etapas adicionais de processamento industrial, que promovam a mobilidade de suas partculas. O BNZ revela ainda um baixo valor de densidade de enchimento, o que praticamente o inviabiliza como candidato compresso direta, mtodo mais vantajoso de produo de comprimidos para a indstria farmacutica.27 Higroscopicidade A higroscopicidade de um frmaco refere-se a sua capacidade de captar gua em funo da umidade relativa ambiental. Considerando que a gua o veculo para as reaes de decomposio dos princpios ativos, a estabilidade dos frmacos fortemente afetada pelo seu percentual de umidade livre. As propriedades mecnicas dos materiais farmacuticos tambm so criticamente influenciadas pelo teor de umidade dos slidos.28 Os resultados deste estudo (Figura 3S, material suplementar) mostram que mesmo quando o BNZ conservado em umidades relativas elevadas no h captao de gua aprecivel (inferior a 0,3%), o que permite classificar este composto como um material no higroscpico.14 A umidade relativa atmosfrica no representa, portanto, um parmetro de risco para a manipulao e o armazenamento deste frmaco em estado slido, de maneira que se podero escolher materiais de envase mais flexveis e baratos para este princpio ativo e suas formas farmacuticas. CONCLUSES

Figura 4. Distribuio de frequncia do tamanho de partcula de BNZ por tamisao

Propriedades de fluxo O estudo das propriedades de fluxo dos materiais crucial no processo de fabricao de qualquer forma farmacutica unidose, uma vez que exerce influncia na alimentao uniforme das mquinas e, tambm, nas propriedades fsicas e mecnicas dos comprimidos.25 Diferentemente de outros tipos de mensuraes, a reologia dos slidos no uma propriedade inerente ao material e sim o resultado da combinao das propriedades fsicas que afetam seu fluxo e do equipamento empregado no seu processamento, de maneira que recomendvel utilizar diferentes metodologias para avaliar este parmetro; vrias delas encontram-se descritas nas Farmacopeias.26 As medidas reolgicas realizadas para a matria-prima BNZ encontram-se resumidas na Tabela 3 e classificadas segundo Carr.13

O estudo apresentado aporta importantes informaes sobre a natureza fsico-qumica do frmaco antichagsico benznidazol, em sua maioria inditas, que ajudaro a nortear o melhoramento farmacotcnico do BNZ, assim como fornecem subsdios para o estabelecimento de um perfil de qualidade detalhado a ser adotado no controle de qualidade de rotina para este frmaco e para formulaes que o utilizem como base. Ao apresentar pela primeira vez sua classificao biofarmacutica baseada em dados experimentais, ser possvel propor estratgias para minorar os problemas de biodisponibilidade deste frmaco, tentando suplantar no apenas sua limitada solubilidade aquosa, mas tambm

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utilizando ferramentas que possam melhorar a sua lipossolubilidade, atravs de adjuvantes farmacuticos apropriados ou empregando sistemas de liberao vetorizados. MATERIAL SUPLEMENTAR Dados complementares esto disponveis gratuitamente em http:// quimicanova.sbq.org.br, na forma de arquivo PDF. Neste material encontram-se perfil de dissoluo intrnseca de BNZ (1S), fotomicrografia por MEV dos cristais de BNZ (2S), e isoterma de soro do BNZ a 25 oC (3S). AGRADECIMENTOS Este trabalho contou com o financiamento do CNPq projeto (472134/2008-6) e com o apoio das Universidades Federais de Ouro Preto (UFOP) e do Mato Grosso (UFMT). Os autores agradecem ao Laboratrio Farmacutico do Estado de Pernambuco (LAFEPE) em nome do Prof. J. L. Soares Sobrinho, da Universidade Federal do Piau, pela doao da matria-prima Benznidazol utilizada neste estudo. REFERNCIAS
1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. Joshi, H. N.; Int. J. Pharm. 2007, 343, 1. Federsen, H. J.; Chirality 2003, 15, S128. Wang, J.; Urban, L.; Drug Discovery World 2004, Fall, 73. Pereira, A.; Bicalho, B.; Lilla, S.; De Nucci, G.; Quim. Nova 2005, 28, S107. Swamivelmanickam, M.; Valliappan, K.; Reddy, P. G.; Madhukar, A.; Manavalan, R.; Int. J. ChemTech Res. 2009, 1, 1032. Caldas, I. S.; Talvani, A.; Caldas, S.; Carneiro, C. M.; de Lana, M.; da Matta Guedes, P. M.; Bahia, M. T.; Parasitol. Res. 2008, 103, 413. United States Pharmacopeia, 30th ed., United States Pharmacopeial Convention: Rockville, 2008. Zakeri-Milani, P.; Barzegar-Jalali, M.; Azimi, M.; Valizadeh, H.; Eur. J. Pharm. Biopharm. 2009, 73, 102.

9. OECD - Organisation for Economic Co-operation and Development; Guideline 123 - Partition coefficient n-octanol/water Slow-stirring method for highly hydrophobic chemicals, November 2003. 10. Stanley-Wood, N. G.; Enlargement and compaction of particulate solids. 1st ed., Butterworths: London, 1983. 11. Fungaro, D. A.; Bruno, M.; Quim. Nova 2009, 32, 955. 12. Vila Jato, J.; Tecnologa Farmacutica, 1st ed., Sntesis: Madrid, 1997. 13. Carr, R.; Chem. Eng. 1965, 72, 69. 14. Callahan, J. C.; Drug Dev. Ind. Pharm. 1982, 8, 355. 15. Greenspan, L.; J. Res. Nat. Bur. Stand. Sect. A. Phys. Chem. 1977, 81A, 89. 16. Lamas, M.; Villaggi, L.; Nocito, I.; Bassani, G.; Leonardi, D.; Pascutti, F.; Serra, E.; Salomon, C. J.; Int. J. Pharm. 2006, 307, 239. 17. Farmacopeia Brasileira, 4a ed., Atheneu: Rio de Janeiro, 1988. 18. Machatha, S. G.; Yalkowsky, S. H.; Int. J. Pharm. 2005, 294, 185. 19. Amidon, G. L.; Lennernas, H.; Shah, V. P.; Crison, J. R.; Pharm. Res. 1995, 12, 413. 20. Lima, A. A. N.; Soares-Sobrinho, J. L.; Silva, J. L.; Correa Jnior, R. A.; Lyra, M. A. M.; Rolim Neto, P. J.; Quim. Nova 2009, 32, 2196. 21. Kasim, N. A.; Whitehouse, M.; Ramachandran, C.; Bermejo, M.; Lennernas, H.; Hussain, A. S.; Junginger, H. E.; Stavchansky, S. A.; Midha, K. K.; Shah, V. P.; Amidon, G. L.; Mol. Pharm. 2004, 1, 85. 22. Bernal, C.; Couto, A. B.; Breviglieri, S. T.; Cavalheiro, E. T. G.; Quim. Nova 2002, 25, 849. 23. Soares-Sobrinho, J. L.; Cunha-Filho, M. S. S.; Rolim Neto, P. J.; TorresLabandeira, J. J.; Dacunha-Marinho, B.; Acta Crystallogr., Sect. E: Struct. Rep. Online 2008, 64, o634. 24. Brando, F. C. ; Tagiari, M. P.; Silva, A. S.; Berti, L. F.; Stulzer, H. K.; Pharm. Chem. J. 2008, 42, 368. 25. Schussele, A.; Bauer-Brandl, A.; Int. J. Pharm. 2003, 257, 301. 26. Prescott, J. K.; Barnum, R. A.; Pharm. Technol. 2000, 60. 27. S-Barreto, L. C. L.; Cunha-Filho, M. S. S.; Lat. Am. J. Pharm. 2009, 28, 304. 28. Aulton, M. E.; Pharmaceutics: The Design and Manufacture of Medicines, 3rd ed., Elsevier: Oxford, 2007.