UNIVERSIDAD AUTONOMA DE NUEVO LEON FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS DIVISION DE ESTUDIOS DE POSGRADO

ANALISIS DEL EFECTO ANTIFUNGIC O DE 20 EXTRACTOS DL PLANTAS TESIS PRESENTADA C O M O REQUISITO PARCIAL PARA OBTENER EL GRADO DE MAESTRO EN CIENCIAS CON ESPECIALIDAD EN MICROBIOLOGIA

POR MARIA D E LOS ANGELES VERASTEGUI M O N T E M A Y O R

MONTERREY, N. L. MEXICO

MARZO DE 1995

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UNIVERSIDAD AUTONOMA DE NUEVO LEON FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS DIVISION DE ESTUDIOS DE POSGRADO

ANALISIS DEL EFECTO ANTIFLNGK O DE 20 EXTRACTOS DE PLANTAS TESIS PRESENTADA COMO REQUISITO PARCIAL PARA OBTENER EL GRADO DE MAESTRO EN CIENCIAS CON ESPECIALIDAD EN MICROBIOLOGIA

POR MARIA DE LOS ANGELES VERASTEGUI M O N T E M A Y O R

MONTERREY, N. L. MEXICO

MARZO DE 1995

UNIVERSIDAD A U T O N O M A DE NUEVO LEON FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS DIVISION DE ESTUDIOS DE POSTGRADO

ANALISIS D E L E F E C T O A N T I F U N G I C O D E 20 E X T R A C T O S D E P L A N T A S

TESIS P R E S E N T A D A C O M O R E Q U I S I T O P A R C I A L PARA O B T E N E R DEL G R A D O DE M A E S T R O EN C I E N C I A S CON E S P E C I A L I D A D EN M I C R O B I O L O G I A

POR

MARIA DE LOS ANGELES VERASTEGUI M O N T E M A Y O R

APROBADA

COMISION DE

TESIS

DR.

SANTOS GARCIA AL VARADO PRESIDENTE

DRA. M A R I A JULIA V E R D E STAR SECRETARIO

/ M.C. LICET V I L L A R R E A L T R E V I N O VOCAL

r e e . fondo tesis 167Ü87 .

C. JOSE S A N T O S GARCIA A L V A R A D O Y LA A S E S O R I A D E LA M.N. N O R M A L A U R A H E R E D I A ROJAS Y DE LA M. EN EL L A B O R A T O R I O DE B I O Q U I M I C A Y GENETICA DE M I C R O O R G A N I S M O S DEL D E P A R T A M E N T O DE M I C R O B I O L O G I A DL LA FACULTAD D E C I E N C I A S B I O L O G I C A S DE LA U.ANALISIS DEL EFECTO ANTIFUNGICO DE 20 EXTRACTOS DE PLANTAS EL PRESENTE T R A B A J O SE R E A L I Z O B A J O LA D I R E C C I O N DEL DR. G R A C I E L A GARCIA DIAZ.L .C.A.

A MIS A S E S O R E S DR.C. N O R M A L. H E R E D I A POR SU P A C I E N C I A . M I S HIJAS V A N E S S A Y M A R I A N A CON T O D O MI A M O R P O R SU A P O Y O E N MI S U P E R A C I O N P E R S O N A L A MI M A D R E LILA M O N T E M A Y O R D E V E R A S T E G U I Y H E R M A N O S . A MIS A M I G O S POR P R O P O R C I O N A R M E EL E S T I M U L O N E C E S A R I O PARA L O G R A R MI META.DEDICATORIA A MI E S P O S O E N R I Q U E . E S P E C I A L M E N T E A M Y R N A C O N M U C H O C A R I N O P O R A Y U D A R M E EN MIS M O M E N T O S DIFICILES. ENTREGA Y AMISTAD. JOSÉ S A N T O S G A R C Í A Y M. .

Norma I.ono: L.cet Villareal. Graciela G a r d a Díaz por su excelente asesoría v a mis compañeros de labora. tenacidad y buena voluntad se puede lograr todo. Cesar Sánchez.AGRADECIMIENTOS Mi eterno agradecimiento . Melv A la Facultad de Ciencias B.ológicas de la Universidad Autónoma de Nuevo León por a b n m t e sus IT . Susan García.C. Luis Rodrigue. mis asesores Sr. Heredia por demostrarme que con diciplina. ' Agradezo sinceramente a la M.C. José Santos G a r d a y M.

INDICE DE CONTENIDO Página Dedicatoria Agradecimientos Indice de Contenido Lista de Figuras Lista de Tablas Lista de Abreviaturas Resumen Introducción Hipótesis Objetivo Antecedentes — Material y M é t o d o s Resultados Discusión Conclusiones Literatura Citada — — — j II Ili IV V VI 1 2 4 4 5 16 22 36 38 39 .

Efecto de Agave lechuguilla Torr.Efecto de Larrea tridentata filamentosos y actiuomicetos Pers.Cromatograma del extracto de Agave lechuguilla luz ultravioleta 8. sobre el crecimiento de h o n g o s (hojas) observada con 27 7.C...Cromatograma del extracto de Larrea tridentata ultravioleta . (raíz) sobre e! crecimiento hongos 25 T o n .LISTA DE FIGURAS Página 1. (hojas) sobre el crecimiento de hongos - 25 * 26 4.Cromatograma del extracto de Baccharis ultravioleta glutinosa 30 observadas con luz -— observada con luz 32 3] 9.Efecto de Agave lechuguilla filamentosos y actinomicetos 3.Efecto de Baccharis glutinosa filamentosos y actinomicetos 6.Efecto De Agave lechuguilla levaduriformes.... 2. sobre el crecimiento de h o n g o s - 26 27 D... (raíz) sobre el crecimiento de hongos Torr.. (hojas) sobre el crecimiento de hongos filamentosos y actinomicetos — 5..Efecto d e s o v e lechuguilla levaduriformes TOIT.

.Separación p o r cromatografía en capa fina del extracto de Larrea tridentata usando como eluente una mezcla de cloroformo y metanol 29 33 33 34 35 ..Separación por cromatografía en capa fina del extracto de Agave lechuguilla (raíz) usando como eluente una mezcla de cloroformo y metanol 9:1 7.CMI de los extractos de plantas sobre los microorganismos probados— 5..Separación preliminar mediante cromatografía en capa fina con extractos de plañías 6...LISTA DE TABLAS Página 1..Separación p o r cromatografía en capa fina del extracto de Baccharis glutinosa usando como eluente una mezcla de cloroformo y metanol 9:1 9..Efecto de extractos de plantas sobre el crecimiento de levaduras 3...Separación por cromatografía en capa fina del extracto de Agave lechuguilla (hojas) usando como eluente una mezcla de cloroformo y metanol 9:1 — — 8.Efecto de extractos de plantas sobre el crecimiento de hongos filamentosos y actinomicetos 24 28 17 23 4.Plantas analizadas 2.

Concentración mínima inhibitoria Grados centrígrados Hora Metro Miligramos Minutos Mililitros Milímetros Microlitros l^ni P/V % Rf T01 Micrómetros Peso por volumen Porciento Relación de frentes Revoluciones p o r minuto .ABREVIATURAS Am CMI °C h m mg min mi mm Absorbancia a 600 nm.

extraidos de plantas regionales. Consideramos que este trabajo y estudios posteriores propoudrán más opciones para que en un futuro cercano sean utilizados más fármacos de origen vegetal. El objetivo de este trabajo fué analizar la actividad antifungica de 20 extractos de plantas utilizadas tradicionalmente en enfermedades que pueden ser causadas por hongos.0 mg/ml ± 2.1 mg/ml ± 2. registrado alérgias y además han provocado resistencia en los organismos blanco. krasei que inhibió a y mostró un promedio de las CMI de 4. con acción eficaz y menor toxicidad y efectos secundarios que los actualmente conocidos. Con efecto menor pero con el mismo espectro de organismos fue e! de las hojas de la misma planta que mostró un promedio de CMI de 9. Un espectro similar mostró el extracto de L. glutinosa inhibió a todos los microorganismos con excepción de las levaduras y presentó un promedio de CMI de 14.0.RESUMEN Muchos de los medicamentos antifüngicos actuales aunque efectivos han mostrado toxicidad. lechuguilla todos los organismos estudiados excepto C. i o que reduce las alternativas existentes.0.4. 5 especies de hongos filamentosos y 2 actinomicetos.5mg/ml m 1. . El de mayor efecto fue el de la raíz de A. los de Agave lechuguilla. De los 20 extractos examinados. Por cromatografía en capa fina se aislaron las fracciones con actividad antifungica de los 3 extractos. Baccharis glutinosa y Larrea tridentata mostraron tener efecto inhibitorio contra varios de los microorganismos estudiados en las concentraciones analizadas.6. El de B. tridentata con un promedio de CMI de 17. Además se estableció la concentración mínima inhibitoria (CMI) de los extractos con actividad antifungica.7 mg/ml ± 1. Se determinó por varios métodos el efecto inhibitorio de los extractos sobre ó especies de hongos levaduriformes.

proporcionó glucósidos cardíacos que se usan en medicina. el síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA) que se proyecta en forma logaritmica n o i revela un panorama preocupante que exige nuevas y mejores demandas terapéuticas ( 12). la quimioterapia en cáncer y los tratamientos con medicamentos como antibióticos. Un ejemplo son los alcaloides del "curare" obtenidos de parras sudamericanas que eran usados por los nativos para fabricar flechas envenenadas. por ejemplo los tratamientos inmunosupresores previos a trasplantes. otros producen alergias y algunos más lian provocado resistencia en los organismos blanco (33). Añadiendo a lo anterior. Esta tendencia se atribuye en parte. corticosteroides y citotóxicos (45).. En numerosas ocasiones los registros folklóricos de muchas culturas han proporcionado gran ayuda en la búsqueda de plantas con propiedades medicinales (27. Similarmente otras plantas bioactivas y venenosas con historia folklórica han proporcionado una . La raza humana ha dependido de las plantas ya que desde hace mucho tiempo han servido como fuente de agentes medicinales debido a que contienen una gran cantidad de diversos metabolitos que vanan en complejidad química y actividad biológica. y actualmente esos extractos se utilizan para producir numerosos compuestos purificados que son indispensables en la medicina moderna. sin embargo esta planta posteriormente serpentina.56). A partir de 1980 la incidencia de las infecciones fúngicas se ha incrementado paralelamente al desarrollo de la medicina moderna. Los actuales medicamentos antifungicos aunque efectivos. Nuestros antepasados nativos usaron plantas como venenos.INTRODUCCION. a las nuevas estrategias terapéuticas que se aplican en diferentes situaciones clínicas. medicinas etc. Las raices de Rawoìfia una planta de la india. lo que nos motiva a buscar nuevas opciones en el campo micològico. se usaron por siglos como planta medicinal por los nativos y su principal principio activo el reserpina es actualmente empleado en medicna como tranquilizador y antihipertensivo. presentan problemas o desventajas tales como el que algunos son muy tóxicos. Esto reduce el número de alternativas terapéuticas existentes. Actualmente los productos naturales incluyendo sus derivados y análogos representan más del 50% de todas las drogas de uso clínico (ó).54. Una utilidad similar se obtenía de la especie de Sírophantus africans.

efedrina. además como antihipertensivos. sus dos millones de kilómetros cuadrados de extensión se hallan distribuidos en ambos lados del trópico de Cáncer. antiasmáticos (broncodilatadores) y analgésicos (31). Las plantas continúan siendo importante fuente de nuevas drogas y como evidencia reciente tenemos el metabolito secundario "taxol". un derivado diteipenoide anticanceroso extraído del casi extinto árbol Taxus brevifoha. morfina. Este compuesto ha sido aprobado recientemente en E.gran diversidad de medicamentos por ejemplo: codeína. La diversidad de flora en México ofrece un gran campo de investigación de la actividad antimicrobiana de plantas que debe ser aprovechado. bosques de coniferas. dando margen a un enorme campo p o r investigar (56). La ubicación y la forma del territorio de México tienen características notables. Los canabinoides también se usan en el tratamiento de glaucomas y desórdenes neurológicos como la epilepsia. La flora de México es una de las más variadas de la Tierra. . A. viucristina. para el tratamiento del cáncer ovárico. El resurgimiento de la terapia a base de plantas constituye una vía alternativa para evitar los efectos adversos de los compuestos sintéticos tanto en plano médico como en el económico. El 85% de las especies de plantas en el mundo han sido pobremente estudiadas en cuanto a su actividad biológica. quinina. se aprobó el uso de varios derivados de la marihuana (Cannabis sativa) para el tratamiento de la náusea provocada por la terapia cancerosa. teofilina. A. cocaina. desde los desiertos hasta las densas y frondosas selvas pasando por páramos de altas montañas. en E. escopolamina.U. U. pues en su territorio están representados todos los grandes biomas que se han descrito de la superficie de nuestro planeta. etc. sur. atropina. etc. donde más del 50% altitudes mayores de 1000 m sobre el nivel del mar (43). También recientemente. pastizales. ya que la ventaja de la medicina natural nos proporciona una sustancia química activa que presenta un equilibrio fisiológico más asimilable por el organismo que aquellos obtenidos por tiene quiiní o síntesis (23). este y en algunos sitios también en el norte. el mar baña sus costas por el oeste. Sin ser una isla. Su relieve se encuentra entre los más accidentados del planeta..

usadas tradición al mente como tratamiento contra enfermedades causadas por hongos. . 2) Determinar la concentración mínima inhibitoria de los extractos con potencial antimicrobiano. 3) Separar los principales compuestos de los extractos y determinar su efecto antimicrobiano.HIPOTESIS Los extractos de 20 plantas de diferentes especies muestran actividad amimicrobiana OBJETIVOS 1) Analizar el efecto antimicrobiano de 20 extractos de plantas.

También hay pruebas de que hace mucho tiempo los chinos. Plinio publicó "Historia Natural" con 47 volúmenes cubriendo la descripción de más de 1000 plantas y Galeno escribió "Medicina y Farmacia" que consiste en 20 libros (18). Ellos demostraron una actividad positiva del compuesto en 4 de las 5 muestras de líquido cefalorraquídeo provenientes de los pacientes . los efectos . entre ellos tenemos: La Biblia que describe 200 plantas medicinales.ANTECEDENTES Se puede afirmar que el uso general de las plantas se remonta a 60. Mas recientemente Davis y su equipo estudiaron el efecto trapéutico antifüngico del ajo en pacientes con meningitis. ya que desde hace 2.000 años y de esto hay evidencia en restos arqueológicos en la cueva del hombre de Neanderthal. de esta planta contra cepas v Trichosporutu. en Egipto se usó contra muchos padecimientos.500 plantas. asirios. Los aztecas mantenían sus jardines botánicos donde cultivaban plantas no solo con fines ornamentales sino terapéuticos. usaban plantas medicinales. el papiro de Eber incluye 3. Las ievaduriformes del género Candida. Varios siglos después. Una de las plantas más estudiadas es el ajo (AUivm sativum ) que tiene una larga historia en el uso medicinal. Aristóteles e Hipócrates lo mencionaban como altamente potente contra varios padecimientos. Durante muchos años. Ton/losis técnicas analíticas utilizadas fueron las de dilución y difusión y se comprobaron las propiedades ftingistáticas y fungicidas del compuesto (39). ellos creían poseer una planta para el tratamiento de cada enfermedad que existía en aquellos tiempos. Rhodotorula. Discórides escribió "De materia Médica".000 años aparecía en la literatura china. Moore y Atkins en 1977 analizaron el efecto antifüngico Criptococcns. Nuestros antepasados n o s legaron libros con información recabada por m u c h o s años sobre las propiedades medicinales de las plantas. las plantas se usaron empíricamente contra muchos padecimientos y a medida que se implementaron técnicas microbiológicas y fitoquímicas su estudio se volvió mas profundo y serio. sumerios. Teofrasto nos heredó "La historia de las plantas". griegos y egipcios entre otros.. Sin embargo. donde se encontraron fósiles de 8 especies de plantas.

utilizando técnicas de espectroscopia y cromatografía (36). a los cuales se les detenninó su estructura química y su actividad antimicrobiana. se observaron los efectos tóxicos sobre las células susceptibles debido a la inhibición del transporte electrónico en la mitocondria (2). Se demostró que la planta tenía actividad biológica por sus lactonas sesquiterpénicas con actividad citotóxica y antitumoral (8).adversos que se observaron fueron dolor e incomodidad abdominal. no así las bacterias ya que algunas demostraron resistencia hacia alguno de los compuestos p r o b a d o s (20). albicans y de liposomas multilaminares. En un estudio de compuestos activos con actividad antibacteriana. Por otro lado Martillo (1988) estudió compuestos polifenólicos de Achyrocline tomentosa. Mediante la incorporación de timidina y leucina radioactiva. Fue evidente que todos los hongos examinados fueron sensibles. Así también se han reali/ado estudios mediante métodos analíticos y espectrometricos de los componentes de Artemisia arborescens. Estos han originado el aislamiento de 40 fracciones. Eu este caso. Se ha establecido la metodología para la detección directa de compuestos antibacterianos en placas de cromatografía de capa fina. de los cuales 4 son lignanos y uno es un flavonoide (aitemetina). El-Gammal y Mansour estudiaron 6 flavonoides (sustancias producidas p o r plantas en respuesta a un estrés o infección). antihelmínticas y antileishmánica. el aisló flavonoides y derivados del ácido cafeico a partir de extractos metanólicos y cetónicos. fué cubierta con una . Estos fueron probados en 14 organismos bacterianos y fungicos. Daniels en 1965 estudió plantas de la familia de las Compuestas confirmó su acción antibiótica contra Candida albicans debido a la presencia de poliacetilenos y sus derivados tiofenos. a Elias (1991) aisló 4 nuevas saponinas triterpenoides de las hojas de actividad están esos compuestos se les probó su efecto microbicida y mostraron Se estableció antifungica. lo cual fue demostrado por Hamburger y Cordel! en 1987. Recientemente Hederá helix. que estos compuestos relacionados a la hederagenina y acido oleanólico (21). También se ha demostrado que las fitoalexinas de la zanahoria alteran la permeabilidad de la membrana de C. Se determinó que la acción antibiótica del primero aumentó al aplicarse luz ultravioleta ya que ese era convertido en el correspondiente tiofeno (15).. náusea y tromboflebitis en 25% de los pacientes (17). la placa con los productos naturales separados.

En 1982 Azzouz y Bullernan publicaron los resultados de un análisis antimicrobiano de 16 hierbas y especias. sin embargo otros lo pueden estimular (14). usadas comunmente en los alimentos. antifímgica y antiviral del extracto de las hojas probados fueron. Ellos utilizaron métodos de difusión con discos impregnados de las muestras. En estos experimentos se utilizaron métodos de dilución y difusión con orificios en el agar (55). que algunos aceites esenciales pueden inhibir el crecimiento. También Conner y Beucliat en 1984 determinaron el efecto de 32 aceites de hierbas y especias sobre el crecimiento de 13 levaduras de uso industrial. De entre los productos que mostraron un efecto inhibitorio más fuerte fueron el ajo y el orégano. Morris y colaboradores (1978) determinaron la actividad antimicrobiana de fragancias de jabón demostrando que actuán de una manera similar o aun mejor que los agentes bacteriostáticos conocidos. solubilidad y complejidad son factores . Este estudio se hizo iti vivo utilizando cepas bacterianas y fungí cas. rubrum. Ríos y su equipo en 1988 efectuaron una revisión de la literatura para determinar los métodos usados para probar la actividad antimicrobiana de productos naturales. Cada uno tiene vanantes o modificaciones que (os hace adecuados dependiendo de las características de la sustancia o microorganismo a analizar (46). (40) Por otro lado en 1980 Van H o o f y su equipo investigaron la actividad antibacteriana. Por otro lado en una revisión de la literatura realizada sobre la actividad antimicrobiana de aceites esenciales. que los m é t o d o s básicamente son tres: difusión. Se llegó a la conclusión. de álamos del género Populas. Esta se incubó en ambiente h ú m e d o permitiendo el desarrollo del microbio. De 521 fragancias probadas el 4 4 % de ellas presentaron efecto inhibitorio contra uno de los organismos probados. Su actividad fué comparada con el de agentes antifúngicos comerciales. y se utilizó el método de difusión con discos impregnados de la fragancia. Janssen determinó que la volatilidad. Las zonas de inhibición fueron visualizadas detectando la actividad antimicrobiana mediante el uso de un reactivo (26 ). Los hongos ca?us y Tnchophyton Microspontm los cuales se inhibieron en diferentes grados de acuerdo a las híbridizaciones sufridas por el extracto. mentagrophyfes. Las especies que han mostrado actividad antimicrobiaiia fueron el clavo y la canela entre otros (3). dilución y autobiográficos. Tnchophyton Candida albicans. El resultado indicó.suspensión de microorganismos.

Otro grupo de investigadores herba-albn). el medio de cultivo no debe tener componentes que reaccionen con el aceite y se debe tomar en cuenta la influencia que tiene la solubilidad de la muestra. deben tomar en cuenta para el análisis con aceites: la técnica que se de ensayo. Encontró que cuando las células de C. Se estableció obtener dispersión del aceite (11). Recientemente Davidson (1993) realizó una revisión de las especies y saborizantes de alimentos con actividad antimicrobiana. De entre las que demostraron actividad antifüngica están la canela. Se estudió su mecanismo de acción encontró que produce respiración y la celular (16). Escherichia coh y Candida albicans). En forma particular. el medio de cultivo. Recientemente Briozzo en 1988 determinó la actividad antimicrobiana del aceite de clavo en soluciones concentradas de azúcares. el microorganismo y el aceite esencial. ha trabajado con el arbusto enano del desierto (Artemisa y probaron el extracto de las p a n e s alteraciones en el metabolismo microbiano particularmente en y se la esporulación y se estableció que esto es debido a la disminución de la energía ellos usaron métodos de dilución y difusión aéreas de la planta contra 5 bacterias gram positivas. ya que pueden producir zonas de inhibición pequeñas (30). Bacillus subtihs. El principio activo fué separado por cromatografía en columna y fué identificado como alcohol santolina (47).4 % (p/v) del aceite ecencial. Los liqúenes han sido evaluados in vitro para determinar la actividad antimicrobiana de sus metabolitos contra bacterias y hongos (Staphylococcus aureus. estas morían en un período de 2 a 7 min. el clavo. el ajo y la cebolla. aeruginosa. albicans eran colocadas en caldo suplementado con 63% (p/v) de azúcar y 0. Así también se ha demostrado que la mostaza negra (Brassica júncea) presenta actividad que el azúcar se agregó como vehículo para antimicrobiana contra 9 bacterias y 16 hongos (6 levaduras y 10 mohos). el orégano. Pseudomona En este trabajo se usaron los métodos . El compuesto activo fué aislado por destilación y cromatografía de gases y fué identificado como isotiocianato de alilo Esta sustancia actualmente se produce sintéticamente en Japón y es utilizado como aditivo en alimentos (29). E! afirmó que existen 4 factores especialmente importantes. suguiere que la técnica no debe requerir dispersión homogénea.que dificultan su utilización.

Se demostró su actividad antimicrobiana y antineoplásica. Así mismo se reportó un nuevo diterpeno aislado del . granulare. mediante cromatografía en columna y se demostró la carencia de toxicidad en un modelo animal (42). Para el estudio ellos usaron 6 especies microbianas entre las cuales se encontraba C. Después de 12 a 15 aplicaciones. Entre las plantas que en cuyas hojas se detectó demostraron este mecanismo de acción se encuentra Larrea tndentata. las cuales se usan en la medicina popular como agentes antimicrobianos. El compuesto activo es un derivado del ácido medicagénico (saponina). Se estudiaron también otras plantas. esta sustancia es fuertemente afín al ergosterol y su efecto fungicida es probablemente porque altera la permeabilidad de la pared celular (22). March especies y determinó sua actividad contra en 1991 estudió 22 9 hongos y 6 bacterias contaminadoras de alimentos almacenados. Ríos y su equipo (1987) analizaron 81 plantas del área española mediterránea. la acción antimicrobiana.dilución y difusión con disco. ellos determinaron su actividad utilizando conteo en hematocitómetro y espectofotometría. el 80% de las lesiones fueron curadas mientras que de las no tratadas solo el 20% se curaron espontáneamente. Polacheck y su equipo aislaron un compuesto (Medicago sativa. Brazil. sin embargo no t o d o s los liqúenes inhibieron los gram negativos y los hongos (28). Por otra parte. La Subtribu Pectuudae mayor frecuencia una acción biocida fototóxica mostró con que era activada por la luz. llamado G2 de las raices de )a alfalfa Gilboa) con propiedades fungicidas. se aplicó tópicamente en cobayos infectados experimentalmeute con el dermatofito T. Posteriormente este compuesto. Se estableció que los extractos pudieron inhibir un total de 7 hongos y 3 bacterias (37). tal filé el caso de Nicoletti quien trabajo con una gramínea (Echinolinea inflexa•} colectada en el estado de Peniambuco. Continuando con el análisis de las plantas de esta región. albicans. Se demostró un efecto inhibitorio para los microorganismos gram positivos. mentagrophytes var. En un estudio 115 especies de plantas fotosintetizadoras o con actividad pertenecientes a zonas áridas y semiáridas de Norteamérica. El compuesto se aisló métodos de dilución. Se detectó que 30 extractos tenían actividad contra alguno de los microorganismos p r o b a d o s (46). En ese trabajo las muestras se analizaron en la oscuridad así como en la luz para hacer comparaciones de la actividad antimicrobiana en ambas condiciones (19).

bactericida y fungicida. . azuloso. antibacteriana e insecticida. Querétaro. se sospechó de su acción fungicida así como de su potencial insecticida. ésta es de utilidad foirajera silvestre para ganado bovino y caprino sin toxicidad reportada. son p o c o numerosas. Basándose en su resistencia a la putrefacción por hongos. e! cual es el responsable de la actividad antes mencionada (41). Nuevo León. antifúngica. su Rhizopus. En este estudio se determinó su actividad Aspergil/us mger. Carson en 1992 estudió el efecto antimicrobiano del extracto de Maleleuca cdternifolia (té de árbol. tiene una espina terminal acanalada de 4 a 5 cm de largo y en la base presenta dientes marginales longitudinales de 5 a 6 mm de largo que se desprenden con la edad.). flavas y A. De ellos fueron analizados que son nativos 11 géneros (600 especies) para determinar su actividad antitumoral. Así se demostró potencial fungicida sobre hongos de importancia agricola ( 47 ). Los hongos estudiados fueron los cuales fueron inhibidos por el extracto. A. Esta planta mide de 60 a 70 cm de altura.Pertenece a la famillia Amarihdaceae. Durango. La barreta (Helietta parvifolia) es una planta que forma parte del m a t ó n al submontano del semidesierto del noreste de México.. pita. mostrando ser nula. meniagrophyies La toxicidad del extracto se determinó en conejos. izeth y tzuta. de largo por 3 a 4 cm de ancho. cilbiccms y 7. como PemciUium. maguey de cerro. Entre estas principales plantas tenemos las siguientes: Agave lechuguilla Torr. Estos arbustos son reconocidos por su producción de lignanos y neolignanos. además presentan una faja pálida en la cara superior y líneas obscuras en el dorso y miden de 40 a 60 cin. en este caso fueron aislados 6 lignanos (34). Esta planta es nombrada a nivel popular como lechuguilla. C. San Luis Potosi. Crece en las zonas desérticas del país como Coahuila.extracto etanólico de las raíces de la planta. Lopes en 1988 estudió arbustos trepadores de la familia Anstolochiaceae de regiones tropicales y subtropicales. Las hojas están de color verde claro a verde dispuestas en rosetas en forma ascendente. Chihuahua. el cual ha sido utilizado en Australia con propósitos médicos desde 1788.ochraceus En la República Mexicana se han utilizado en forma empírica muchas plantas para el tratamiento de diferentes micosis. Tamaulipas y Zacatecas. Fusarium. Es una de las plantas mejor conocidas en el norte de la República Mexicana por su uso a nivel textil. Esta planta contiene sustancias tales como saponinas esteroidales. Aspergí flus niger.

Asia y Africa.glucósidos.53. pinadas y están cubiertas de una pelusilla plateada o grisácea. Artemisia absinthmm L. de las hojas se extrae una fibra usada en la industria textil. La planta presenta un tallo erguido.Planta perteneciente a la familia Compositae conocida por los como nombres comunes de altemisa o artemisa. Es una planta vivaz de porte crespitoso.52. digestivo y colagogo (54).Es una planta de la familia Lihaceae\ como sábila. ácidos orgánicos y taninos. un jugo amargo. como estimulador del apetito. Al parecer. así como taninos y j u g o s amargos. zabila o aloe. Sus flores son de color amarillo. ab sentina. de los jugos gástricos de la bilis y además se recomienda para eliminar cólicos (27). Esta planta se recomienda en la medicina tradicional como un purgante ligero. La raíz es utilizada para combatir dermatitis causada p o r algunos hongos. Algunos estudios han revelado q u e presenta un aceite esencial llamado tuyona. herbáceo. como tratamiento de toda clase de golpes y para combatir la diabetes.. crece en lugares secos y entre malezas. ácido crisámico y aloina. La medicina la eliminación de parásitos tradicional marca su uso contra t r a n s t o m o s estomacales. etc. es también conocida como ajenjo o absenta. Algunos estudios han mostrado que la planta contiene ácido oleico. Las hojas son alternas...50. El fruto de la planta es de forma capsular y en el interior de las hojas se encuentra un jugo mucilaginoso de sabor amargo.54). rojizo o amarillento de forma tubular. para intestinales. La . Las flores se presentan en cabezuelas de color amarillo en agrupaciones de 30 a 40 cm. carnosas y con bordes espinosos: por lo regular produce flores de color banco. Del cogollo se fabrican bebidas alcohólicas. Esta la cual se conoce popularmente insectos es originaria de las zonas áridas de Africa pero fue traída a se cultivó con facilidad en las zonas México por los españoles en la época de la conquista y desérticas y semidesèrti cas del país. Esta planta presenta hojas largas. asi como aperitivo. Aloe vulgaris L. Actualmente también se usa como agente de control biológico contra (38.Pertenece a la familia Compositae.48. Artemisia mexicana. posee un tallo anguloso de color rojizo recubierto de hojas alternas muy recortadas grises y muy tomentosas en la cara inferior. esta planta contiene un aceite esencial. El tallo se utiliza para disminuir los dolores de costado. Crece en la zonas templadas de Mexico adventicia de los jardines y como mala hierba en las superficies sembradas con césped. estimulador del flujo mestruai. Esta planta es originaria de Europa. El hombre le ha dado diversos usos a las diferentes p a n e s de la planta.

arroyos.D. y se utiliza en casos de amenorrea y problemas de irritación vaginal (56). presenta hojas sésiles lanceoladas de 3 a 12 cm de largo. es de color gris. enteras o denticuladas . presenta hojas de color verde en posición alternada. mexicana Benth. y para detener las hemorragias en los partos y contra escobilla. muy ramificado con hojas sésiles oblongas y rugosas de 1 a 3 cm. Las flores de la planta crecen en grupo y son de color inorado-rojizo. canales . sales de potasio.pertenece a la familia de las Longaruaceae.5 a 2. Se usa contra diarreas y como antiparasitario (27). hojas opuestas en forma de corazón. Esta planta también es usada como desinfectante del tracto digestivo y antiparasítica (54). En medicina popular se utiliza dolores reumáticos. los transtornos nerviosos y el tratamiento de las enfermedades de la mujer. como contraceptivo afecciones en la piel (48. taninos. estimula la producción de jugos gástricos y de bilis. Crece en r k e r a s de n o s . acequias etc. La medicina tradicional la recomienda como vermífugo y contra toda clase de parásitos intestinales. ayuda en casos de dispepsia. abstinita y vitaminas B y C. Algunos estudios han demostrado que esta planta contiene aceite volátil.C..Conocida comúnmente como istafiate o estafiate. Se ha encontrado que esta planta presenta un aceite esencial de olor penetrante. Esta altura. Cedronella Labiatae. Las florea se disponen en cabezuelas y a su vez en racimos. crece en climas húmedos de la República Mexicana incluyendo a los estados planta es de tipo herbáceo. El vegetal presenta un tallo erguido.50. conocida como contra fiebres intermitentes. Buddelia scordioides HBK. crece en los estados de Durango. Baccharis glutinosa .medicina tradicional la usa contra el insomnio. Chalco y el valle de México. . granos y dolores reumáticos (54).Es un arbusto que pertenece a la familia Cornpositae. Veracruz y San Luis Potosí. tiene tallo ramificado. de altura. templadas y húmedas de México como Xochimilco. una resina neutra. mide hasta 1 ni de de México. es conocido popularmente como jarilla mide 1. Es un arbusto que mide hasta 1 m de alto. Artemisia ludoviciana. Sus flores en forma de cabezuelas son amarillas. ayuda a sanar golpes. Coahuila y San Luis Potosí. Iztapalapa.0 m. una resina amarga y sustancias mucilaginosas.56).Su nombre común es toronjil y pertenece a la familia Esta planta es originaria las zonas frías. La literatura de medicina floklotica nos indica que esta planta es usada para aumentar la función digestiva. pertenece a la familia Cornpositae.

Produce un fruto de color negro que contiene un líquido rojizo en el interior. correosos. dolor de estómago. taninos y j u g o s amargos. con hojas alternas alargadas lanceoladas y las flores se agrupan en glomémlos.. etc. de sen. las flores son pequeñas sésiles o pedunculadas. La medicina tradicional nos indica que ésta es usada contra úlceras de la piel. compuestas > abovadas. es eficaz contra parásitos intestinales. piesenta abundante follaje. planta anual de tallo rojizo ramificado. Se utiliza en medicina popular para estimular las funciones digestivas. dismenorrea. Jatropha dioica H. de hemorroides. alternas.5 a I 1. asma y transtornos nerviosos (50). sangredrago. Esta planta se utiliza en casos de cáncer de estómago y de intestinos.K.5 mm de ancho.5 cin de largo por 6. sus hojas son ovales de bordes enteros de 1. enteras o rriboladas con una longitud de hasta 7 era. además en casos de tifoidea (27). duros y flexibles que pueden medir desde 0. pertenece a la familia Julianaceae. Las hojas son fasiculadas lineales o espatuladas. enfermedades venéreas e irritaciones de ia garganta (48). Flouremia cernua DC. hoja de sé. gruesos. amontonadas. Presenta flores unisexuales. corteza astringente y hojas dentadas. Contiene un aceite esencial cuyos principales componentes son el ascaridol.B.. La planta en si presenta un olor característico parecido a lúpulo y tiene un sabor amargo. diarrea. su nombre común es sangre de drago.Conocida popularmente como epazote y esta incluida lista es una en la familia Chenopodiaceae. adstringens Sch¡ .5 a 5 m de altura. Presenta taninos y la literatura tradicional nos indica que sirve contra la caída del cabello. Juliana Cuachalalá. las sapoiiinas. sangregrado. sangre de draco.7 a 2. Las flores se dan en agrupaciones discoideas colgantes y solitarias entre las hojas. . obscuro rojizos. Esta planta pertenece a la familia Composnae.Chenopodium ambrosioides L.Es conocida popularmente por el nombre de cua chai al ate o Este es un árbol de 6 m o mas de altura. El vegetal crece en los estados del norte y centro de la República Mexicana. erupciones en la piel. disenteria. que alcanza de 1 a 2 m de altura.Esta planta pertenece a la familia Euforbtaceae... suculentos. hoja-s-e u hoja crece principalmente en el norte de México. es originaria de las regiones tropicales americanas.Conocida comúnmente como hojasen. el pedúnculo del fruto tiene forma de ala con una sola semilla. es un arbusto de tallos erectos. Me Vaugh. . Es un arbusto de tallos lisos. cólicos y otros desarreglos estomacales (56).

encuentra en los desiertos de Chihuahua y Sonora en México y en el desierto de Mojave en los Estados Unidos de América. Toda la planta es rica en mucílagos. Las flores son de color verde por encima y en el revés presenta una pelucilla contiene un aceite de color lila-azulado. es un árbol que crece en las regiones áridas y semiáridas de la República Mexicana. También conocida como malva. El vegetal presenta un tallo semileñoso de hasta 2 m de altura. sus flores son de color rojo-violeta. dolor de garganta y como vasodepresiva (17). tos. enfermedades venéreas. contra transtornos gástricos. Esta planta requiere de climas desérticos para su desarrollo. volátiles. es una planta perteneciente a la familia ZygophyIIaceae. Las hojas son opuestas gruesas. problemas renales. plateada.Cuyo nombre común es mezquite. hojas palmeadas alternas con largos pecíolos. calambres intestinales. presenta ramas espinosas.. resfriados. potasio y magnesio. aceites esenciales y pigmentos entre otros productos. hinchazones.Conocida por el nombre común de romero: es una planta perteneciente a la familia Labiatae. problemas hepáticos y de la piel. Estudios de la planta han demostrado que contiene materia mucilaginosa. parásitos. Es originaria de Europa y se cultiva fácilmente en jardines y huertos. así como un gran número de compuestos fenólicos y glicósidos. Esta planta se usa para bajar la inflamación del tubo digestivo. cientos de compuestos encontradas en alguna especie. hojas bipinadas de color amarillo-verdoso colocadas en espigas. gastritis. como expectorante. siendo diploides.- Su nombre común es gobernadora..Larrea tridentata (DC. Malva silvestris L. en heridas purulentas y en gaigarismos para enjuagues de la boca (56). calosfrío.) Cov. La literatura folklórica nos dice que esta planta se usa en el tratamiento de diversos padecimientos como: reumatismo. canfeno. acido nordihidroguaireico. Esta se encuentra en el norte de la República Mexicana Se teniendo variantes en su cantidad cromosómica.. un principio balsámico amargo. dolor de cabeza. Varios estudios han revelado que el vegetal contiene una de las mayores diversidades químicas se han encontrado ceras complejas. cineol. es una planta herbácea bianual o perenne. de olor agradable. contra infecciones y diarreas (54 ). El fruto es una vaina de 10 a 12 cm de largo por I de ancho. caries. ornamental. Prosopis julijlora (Swartz) DC. Se ha demostrado que esta escencial. saponinas y otros triterpenos. ácido arábigo (arabina) y sales de calcio. Rosmarinas offícinalis L. tetraploides y bexaploides. Las hojas se utilizan como tizanas contra catarros. taninos y una resina . tuberculosis. borreol. pineno. taninos. mal olor. diarrea. indigestión.

Chihuahua. antirreumático. además presenta un olor a anís al flotarse. Morelia. Senecio candiddissimum GreenmEs una planta conocida p o r el n o m b r e común de té herbácea con hojas afelpadas milagro o hierba del f u e g o . Schinvs Anacardiaceae. Las hojas están partidas con s e g m e n t o s lineales de 10 m m . En su paite superior presenta flores m o n o p é t a l a s en espigas. Sonora y N u e v o León. colagogo. Verbena Carolina L. es perteneciente a la familia Compositae. Esta planta se usa en contra de la caída del cabello (posible infección p o r hongos). antidepresivo. La planta según literatura de medicina tradicional nos dice que es usada para casos de irritación de los intestinos y de las vías urinarias (27). Las flores se disponen en cabezuelas a b o m b a d a s colocadas en c o r i m b o s amarillos \ con vilanto blanco sedoso.escencial. que p e r t e n e c e a la familia Compositae. Presenta un sexos separados y colonia.. Jalisco. El vegetal Sonora. de 7 a 8 cm. aserradas y elípticas de 4 cm. 1020091523 .Conocida c o m o verbena es una planta que pertenece a la familia Vebenaceae. Esta es originaria de México y p u e d e ser encontrada con facilidad en los E s t a d o s de México. sangrado de las encias y nubes en los o j o s (27 ). flores p e q u e ñ a s de color amarillento. La literatura folklórica la recomienda c o m o digestivo. presenta una altura de 60 a 80 cm con hojas opuestas. Es usada en contra de las úlceras. Oaxaca.. tuberculosis. llagas. planta también llamada pirul. es h e r b á c e o de 10 a 30 cm de altura. las flores se presentan en cabezuelas con el involucro alargado. y contra las p a p e r a s (54).La planta también conocida c o m o hierbanis o yerbanis Esta se localiza en los Estados de Jalisco. es perteneciente a la familia Es originaria de Sudamerica p e r o está aclimatada a México desde la época de la es común en la p a r t e central y en los lugares secos del país. EIs utilizado empíricamente contra infecciones de la piel y enfermedades del riñon ( 5 4 ) Tagetes fil ¡folia Lag. Su presencia tronco tortuoso de ramillas colgantes. v e r m í f u g o y e m e n a g o g o (56).. mol le LEsta estimulante. un fruto de color rosado-rojizo seco con semilla sabor a pimienta. México y Puebla.

vaginitis. Blanca Ortíz Saldívar de la Facultad de Ciencias Químicas de la Universidad de San Luis Potosi. granos. la mayoría de las cuales se utilizan en mediciua popular desde hace mucho tiempo contra diversas enfermedades tales como dermatomicosis. Estas se conservaron a 5 C en medio de cultivo de Papa-Dextrosa-Agar y se hicieron resiembras cada 2 meses (9). Estas fueron clasificadas y se agrupan a continuación (tabla I): . 6 hongos levaduriformes: Candida Candida Candida krusei albicans rugosa neoformans laurentu albidus Criptococcus Criptococcus Criptococcus 5 hongos filamentosos : Microsporum Microsporun Trichophyton Epidermophyton Sporothrix canis gypseum tonsurans floccosum schenckii 2 actinomicetos: Nocardia Nocardia asteroides ßraisliensis Las cepas fueron proporcionadas por Ma. tinas etc. PLANTAS A N A L I Z A D A S Se analizaron 20 extractos los cuales se obtuvieron de plantas que forman parte de la flora de nuestro país.MATERIAL Y METODOS MICROORGANISMOS ANALIZADOS: En este trabajo se incluyeron 13 microorganismos.

mexicanaBen\\\ graveolensL cernva dioica astrmgens D..Aloe vulgaris 3......Rosmarinus mezquite romero pirul officinalis 17.Larrea tridentata 14.Malva silvestris 15. DC. Willd Pers.Artemisia 5. L.. Para destilada para dar una solución al 10%. ajenjo artemisa estafiate jarilla escobilla toronjil epazote hoja sen sangre grado cuachalalate gobernadora malva scordioidesHBK.Schinus molle L..C..Artemisia 6.-Agave lechuguilla L. L.Baccharis 7.Cedronella 9.. HBK. seco y su estudio el extracto fué rehidratado con agua oscuro hasta su análisis posterior..Buddelia 8. lechugilla y amolé sábila hoja y raíz hoja hoja y tallo 1 1 J hoja y tallo hoja y tallo hoja y ra/Jo hoja hoja y tallo hoja y tallo hoja tallo hoja hoja y tallo hoja hoja y tallo hoja.000 rpm por Wliatman No.Jatropha 12. 13. El sobrenadante se filtró en papel se secó a 50°C por una semana.Prosopis juhflora 16.. 18. Gr te milagro yerbanis verbena OBTENCION DE LOS EXTRACTOS La planta fresca se fragmentó en licuadora y posteriormente se trituró en mortero por 15 min utilizando como solvente etanol al 80%.Senecio candidissimum \9.. 2.Tagetesßlifolia 20. Zwartz L. Este se almacenó en lugar fresco.. y se esterilizó por filtración utilizando una membrana de .Juliana absinthium mexicana ludovician glutinosa L.. tallo y flores hoja y tallo hoja y tallo hoja hoja .TABLA 1 PLANTAS NOMBRE CIENTIFICO ANALIZADAS COMUN PARTE UTILIZADA NOMBRE 1 .Chenopodium 10. L.Verbena carolina Lag. Sch. La suspención se maceró 2 a 3 h y posteriormente se centrifugó a 3.Fluorencia 11.. DC..Atemissia 4. 1 y 10 min..

Se incubó 5 a 8 días a temperatura ambiente. el radio de inhibición desde el b o r d e del pozo hasta el límite del crecimiento (Fig. En uno de dichos cuadros se hizo un orificio en la parte central donde se colocó el extracto. posteriormente se midió la absorbancia utilizando un espectro fot ó metro Coleman Júnior mod. en tanto que otro funcionó como control (sin extracto). b) M é t o d o de dilución: también se utilizó con dos variantes. posteriormente se inoculó una suspensión de levaduras la cual estaba ajustada a una absorbancia (A ñ00 ) de 0. se usó el método de microcultivo con la técnica de Ridell (4. La inhibición se midió comparando con el crecimernto del cuadro control. L o s cultivos se incubaron a temperatura ambiente por 24 h al cabo del cual se determinó. se inoculó p o r picadura el hongo filamentoso en las 4 esquinas de cada cuadro de agar.No. El extracto estéril se recolectó en tubos ependorff y fué almacenado a 5°C.nitrocelulosa con un p o r o de 0.33) modificada de la manera siguiente: Se colocaron una o dos portaobjetos de vidrio sobre un tubo de vidrio en forma de V ó de U dentro de una caja de Petri. 2). los cuales se describen a continuación.9. . posteriormente se hicieron orificios en la capa de agar y en ellos se agregaron lOOpl de los extractos a probar.45 pm. se inocularon por estría en cajas de petri las cuales contenían PDA. El extracto a probar se agregó en un volúmen de 100 pl quedando una concentración de 2mg/ m i . I). 340. de caldo nutritivo en tubos de vidrio. Se colocó una porción deshidratación de algodon húmedo en la caja de Petri para evitar la del agar. A N A L I S I S D E L A A C T I V I D A D ANTEV11CROBIANA Los m é t o d o s usados en los bioensayos fueron de difusión y dilución (45. se colocaron cuadros de P D A de 1 cm de lado mas o menos por 5 mm de alto.150. a) Método de difusión: Se utilizaron 2 variantes de este método: 1) Para el estudio de hongos levaduriformes los cultivos de reserva se activaron exponiéndolos 24 h a temperatura ambiente.51). Los cultivos fueron incubados a temperatura ambiente durante 24 h.Pava el análisis de la actividad antimicrobiana sobre hongos filamentosos.Para cepas levaduriformes: Debido a la facilidad de dispersarse homogéneamente se colocaron 5 mi. Con ayuda de una asa bacteriológica. En los extremos de la laminillas.

Se utilizó también la técnica de microcultivo en donde se mezcló el extracto con el agar a diferentes concentraciones. Cada siembra se llevó a cabo con su respectivo control. se midió el área de crecimiento.Para los hongos esterilizado y se colocó en filamentosos dos el extracto se mezcló con el agar ( P D A ) pieviamente compartimentos de una caja petri con 3 divisiones. después délo cual. Se realizó una cromatografía preliminar a fin de determinar los eluentes ideales. Se utilizaron cajas de Petri con 3 compartimentos (iniciando con 1 mg/ml) en los cuales se agregó concentraciones ascendentes del extracto mezclado con el agar. se llevó a cabo usando como soporte sólido e inerte placas de 5 x 10 cm de vidrio las cuales fueron cubiertas con una capa adsorbente de Kieselgel 60 G ( M e r c k ) como fase estacionaria. La CMI se definió como la concentración del extracto más baja que inhibió el crecimiento de los microorganismos. El otro compartimento fungió como control al agregarse medio sin extracto. muchos extractos de plantas La separación y aislamiento cromatográfico de las mezclas. Se dejó solidificar el medio de cultivo y se procedió a sembrar por estria o picadura dependiendo del hongo a estudiar. La incubación varió de acuerdo a las técnicas utilizadas y a las especies fúngicas en estudio. El medio se inoculó por picadura con los hongos a probar.51). Los eluentes p r o b a d o s fueron de diferente polaridad y son los siguientes: .49. CONCENTRACION M I N I M A INHIBITORIA (CMI) Esto se determinó por 2 métodos: 1) Se utilizó el método de dilución en agar solidificado (30). al 10% para llevar a cabo las técnicas de sensibilidad. Esta última fué escogida por su versatilidad y rapidez para separar los componentes químicos de (25. tomándose como 100% al crecimiento del control. Se incubaron a temperatura ambiente durante 10 días. CROMATOGRAFIA PRELIMINAR Se utilizaron los extractos alcohólicos separación por cromatografía en capa fina.2).

metanol. cloroformo y acetato de etilo. Distancia recorrida por la mancha Rf= ----- Distancia recorrida por el eluente CROMATOGRAFIA PREPARATIVA. di el oro et ano.81 y el metanol de 32. Se registró la cantidad de manchas desarrolladas y se midió la distancia de migración a fin de determinar su Rf (relación de frentes) característico. c) la temperatura del medio ambiente y d) cantidad de la muestra aplicada. Este valor está en función de la adsorción del soporte. Polares: Acetona. La muestra filé aplicada en la placa con un tubo capilar y se corrió la cromatografía utilizando diferentes eluentes.N o polares: Hexauo. b) la humedad relativa. Intermedios: Diclorometano. ácido acético y agua. la polaridad del elueivte y la solubilidad de los compuestos por separar. Se sabe que este proceso puede ser modificado por: a) la presión de vapor ejercido por el eluente. Sabemos que el efecto de la elución depende de la constante dieléctrica o polaridad de el o los eluentes y que el cloroformo tiene una constante dieléctrica de 4. El Rf fiié calculado en porciento. Este valor se obtuvo aplicando la siguiente fórmula. Para la preparación de las placas se pesaron 10 g de Kieselgel y se mezclaron con 25 mi de agua destilada.80. tetracloruro de carbono y benceno. La hoja de vidrio . considerando como 100% el máximo corrimiento posible (solo el eluente). después la placa se dejó secar y fué observada bajo luz ultravioleta. éter de pertóleo. Para el análisis se utilizó como fase estacionaria Kieselgel 60 G (Merck): y corno soporte se usaron hojas de vidrio de 20 x 20 cm de lado y 6 a 8 mm de espesor.

se cubiió con esta mezcla mediante un aplicador de compuerta intercambiable.500 rpm por 5 min. Las muestras se rehidrataron en agua a un concentración de 20 mg/ml y fueron probadas contra las cepas estudiadas a fin de determinar si tenían efectos antifungicos.4 mm. posteriormente se colocó la muestra en la parte inferior de la placa utilizando un tubo capilar y procediendo en dos formas: I) En linea continua para obtener mayor cantidad de los compuestos separados. la placa se activó colocándola en un h o m o a 120*C por 1 h. y se determinó: a) el número de manchas formadas b) la distancia recorrida por cada una. mediante los m é t o d o s anteriormente descritos. Se agregaron 2 mi de alcohol etílico para disolver el o los compuestos y se centrifugó a 2. d) el área de la mancha y e) el Rf (en porciento). Los eluentes se depositaron en la cámara de desarrollo 15 min antes del corrirnieuto para saturarla con los vapores (24). Antes de usarse.No. El sobrenadante se depositó en viales previamente pesados y se secaron en una estufa.3 a 0. se delimitaron todas las fracciones visibles con luz UV y fueron raspadas y depositadas en tubos de ensayo. b 7 U8 / 21 . La placa se secó a temperatura ambiente y se obtuvo una placa uniforme con un espesor de fase estacionaria de 0. Después del corrimiento la placa se escurrió y secó.4) y determinar su Rf. y 2) en una pequeña región a fin de medir el área desarrollada por la mancha (Fig. Ya secos fueron pesados nuevamente a fin de calcular el peso real del compuesto aislado. Para aislar los componentes del extracto. c) el color desarrollado por cada banda con exposición a luz U V y luz visible.

observándose este último tiene una mayor actividad tóxica sobre levaduriformes. hojas: 8. tridentata actinomicetos estudiados (Tabla 3). presentaron un efecto solo contra hongos filamentosos y los DETERMINACION DE LA CMI Aunque los organismos estudiados mostraron diferente susceptibilidades a los extractos probados (Fig.3 a 7. . (14 a 16. lechuguilla mostraron serlos más potentes (raíz: 3.6 mg/ml. La de mayor efecto antimicrobiano fue A. glutinosa fué hecho utilizando la mayoría de los hongos analizados tanto actinomicetos p r o b a d o s (Tablas 2 y 3). pero no contra los hongos levaduriformes (Tabla 3).RESULTADOS ACTIVIDAD A N T I F U N G I C A DE LOS EXTRACTOS De las 20 plantas analizadas tres demostraron tener efecto inhibitorio sobre una o varias especies de hongos. lechuguilla (Tablas 2 y 3) de la que cual se analizaron los extractos de las hojas (lechuguilla) y de la raíz (amolé).6 mg/ml) y L.6 mg/ml). £1 un efecto sobre los las hojas y tallos y mostró hongos filamentosos y los actinomicetos. y fueron seguidos de B. y filamento sosos así como con los extracto de B. tridentata resumidos en la Tabla 4. Los eluentes que dieron mejores resultados fueron el cloroformo y el metan ol en una proporción de 9:1. Estos resultados se encuentran CROMATOGRAFIA. glutinosa (10 a 14. 1-6). a) Cromatografía preliminar.0 a 12. nuestros resultados indican que los extractos de A. Las hojas y tallos de L.0 mg/ml). Probamos tres grupos de sol\ entes con diferentes polaridades (no polares. intermedios y polares) contra los 4 extractos que mostraron actividad antimicrobiana (Tabla 5). Los resultados de la cromatografía en capa fina preliminar nos permitió elegir los mejores eluentes para separar los componentes de los extractos.

candidissimum T. R. E F E C T O D E E X T R A C T O S D E P L A N T A S S O B R E E L C R E C I M I E N T O LEVADURAS DE HALO DE INHIBICION EXTRACTO A. moUe S. krusei 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 C. vulgaris absinthium mexicana ludovicma glutinosa scordioides mexicana graveolens (raíz) (hoja) C. rugosa 17 ± 1 15 ± 2 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 C. silvestris P. A. . ¡aureníu 17 ±2 12 ± 3 0 0 0 0 0 1 C. C.T A B L A 2. dioica J. lechugilla A. filifolia V. cernva J. BC. albican 19 ± 2 14 ± 2 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 C. Carolina * Radio de inhibición en mm. B. lechuguilla A. A. A. juhflora officinalis S. L. astringens tridentafa ¡vi. a! b idus 15 ± 2 14 ± 3 0 0 0 0 Û 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 C ne of or 16 = 3 13 = 2 0 0 0 0 o 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 (T 0 0 1 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 F.

° i 0 o 0 0 0 0 n 0 0 0 0 0 0 ++ 0 0 0 0 0 0 ++ 0 0 0 0 0 0 -r 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 + 0 0 0 0 0 1 0 + " 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 —. 100% = — 60-40% = ++.. ludoviciana B. 90-60% ~ . vuigarts 4. gypseum T. graveolens F. lechugihoja) !. 4 0 . cernva /.füi folia 1' Carolina +++ H-++ 0 0 0 0 +++ 0 0 0 0 0 0 + +++ ++ +++ + -T + 0 0 0 0 ++ +++ +++ ++ H1 —— —h 0 0 0 0 ++ j i—h-r o 0 0 1-+ 0 0 0 0 ++ 0 0 0 0 ++ 0 0 0 0 + i . mexicana . absmlhium 4. ntoHc S. 0 = Efecto inhibitorio ausente. T.2 5 % = +. mexicana C.}.TABLA 3 EFECTO DE EXTRACTOS DE P L A N T A S SOBRE EL CRECIMIENTO DE H O N G O S FILAMENTOSOS Y ACTINOMICETOS INHIBICION EXTRACTO M. oj'ficmaiis S. (raiz) 1. inclentaia i\'L mívestris l'. can i s M.juh flora R. floccosuin s. schenckn N asteroides N brasihensvs .i lechug. candidissim. * Porcentaje de la inhibición micelial comparada con el control. dioica l aslnngens !. glutinosa B. tonsurans E.scordioitles C.

8 0.5 1 2 Extracto mg/ml é 4 Fig. 1.) 0. EFECTO DE Agave lechuguilla Torr.2 i 0.6 * 0.4 1 2- C • C a^jca/ijs o^ss • • • A 0. (RAIZ) S O B R E EL CRECIMIENTO DE HONGOS L E V A D U R I F O R M E S Crecimiento (%) Crecimiento(%) 1201 S schenckiN asteroide fJ brasinensis • A • 100.1 C 1 2 3 9 * Extracto m gim I ? 0 Extracte mg/ml 2 3 ^ 5 6 Fig.^ 1 80 120 M canisM gypseurrf lonswan£ floccosum 100 « . 2. E F E C T O DE A g a v e l e c h u g u i l l a T o r r .6 C• laisentC albi/lu£ neo'ct m • • 0.) 1. (RAIZ) SOBRE EL CRECIMIENTO DE HONGOS FILAMENTOSOS Y ACTINOMICETOS .5? 0.4- Absofbancia (600nm. \ i\ A V * 80 - 1 eo 40 20 60 40 20 C 2 3 4 0 — 0 - Extracto mg/ml C .4 | 0.2 0.30.Absofbancia (600nm.

1 - • • C 1 2 4 6 10 • 12 • • ' * ^ * Concentración mg/ml C 1 2 4 6 8 T O Concentración mg/ml Fig. taroiOofJ.2 C. »krussiC albicaniC rugosa * • 1.a. ira: ilion: ¡: A • • 100^ 100 I 80' 60 A 40 L 20 - Exiracto rngíml 0— 10 Extracto mg/ml 12 Fig.5 0. noofcrmani 0. EFECTO DE Agave lechuguilla Torr. (HOJAS) SOBRE EL CRECIMIENTO DE HONGOS FILAMENTOSOS Y ACTINOMICETOS .Absorbencia 0. EFECTO DE Agave l e c h u g u i l l a (HOJAS) S O B R E EL CRECIMIENTO DE HONGOS LEVADURIFORMES. 0. 3. 4.6 Absorbancia 2 C lauentiC albidusC. Crecfrniento (%) Crecimiento (%) 1201201 M cantjd gypseufiT ion$ui ai)E fiocco$urr\ $ ¡chenkiN.3 0.5 V .\ * \ 0.5 0.4.

n > 40 401 20L C 20 . SOBRE EL C R E C I M I E N T O DE HONGOS F I L A M E N T O S O S V A C T I N O M I C E T O S Crecimiento {%) 120 Crecimiento (%} 1 20 r 100 M.gypseuriT torisumn£. Fig.brasiliensis 801 •Cj60 80' R 60.C. tres iliemis 100 \ 1 • 80 60 40' 20 • — 10 12 • • 14 Extracto mg/ml Extracto mg/ml.c a nìM. 6.C r e c i m i e n t o (%) C r e c i m i e n m t o (%) 120 120 [M. SOBRE EL CRECIMIENTO DE HONGOS FILAMENTOSOS Y ACTINOMICETOS . 5.canisM. EFECTO DE Larrea tridentata D. floccosum • A • <1 1001« \\ S SGhenckiN asieroiaetJ. 6 " • I 14 * 16 8 10 12 Extracto mg/ml 6 8 10 12 Extracto mg/ml 14 * 16 Fig. a siero ¡OeíY. gyps eurrf tonstran£. EFECTO DE B a c c h a r i s g l u t i n o s a Pers. Hocco i un m • • a 100 S schenckìN.

0 ± 1.0 ± 3.3 12.2 . 9 fué la causante de la acción antimicrobiana.3 12.0 12.3 * 1.0 ± 3. En cuanto al extracto de L tridentata la separación cromatogràfica que produjo fué de 11 bandas (Fig.6 ± 1. ! e chug.4 10. 0)fué la que mostró tener efecto inhibitorio contra hongos y actinomicetos (Tabla 6 ). Se estableció que esta banda tiene un Rf de 0 % con los eluentes utilizados.6 1 1.2 4. CMI DE LOS EXTRACTOS DE PLANTAS SOBRE LOS MICROORGANISMOS PROBADOS MICROORGANISMO Candida Candida Candida krusei albicans rugosa neoformans laurenti albidus canis gypseum tonsurans floccosum A. L.0 X 1.0 4.3 ± 1. hoja NI 8. 3 J schenckii asteroides brasihensis MIC = Concentración mínima inhibitoria en mg/ml.0 ± 2 . El extracto de B.TABLA 4.0 14. 5 7. De las hojas de esta misma planta se separaron 4 bandas (Fig. 2 la que mostró el efecto inhibitorio sobre hongos y actinomicetos.0 ± 1.0 ± 2 .4 10.0 ± 0 .7 1 B.0 ± LO 8.6 ± 1.0 -± 1. siendo la No.2 5.0 ± 1. NI = No inhibición b) Cromatografía preparativa. esta fracción tuvo un Rf de 0%.2 13.2 14. esta banda tiene un Rf de 90 % (Tabla 8).3 ± 2.0 16. 9). lechugilla mostró 6 bandas de las cuales la primera (No.3 = 3.7 A.0 ± 0 .3 ± 1. 3 7.3 * 0 .0 ± 1.1 4.1 12.1 4. tridentata NI NI NI NI NI NI Criptococcus Criptococcus Criptococcus Microsporum Microspore ni Trichophyton Epidermophyton Sporothrix Nocardia Nocardia 14.3 ± 1. 0 ± 1.0 ± 1.6 * 2. ìechug. glutinosa mostró 10 bandas (Fig. El Rf establecido paia esta banda fué de 42 % (Tabla 9).0 i 1.6 ± 0. glutinosa NI NI NI NI NI NI 10. 0 14. (Tabla 7).4 12.1 1 0 .2 6.0 i 1.5 16.0 ± 0 .3 * 2.5 9.0 X 2.6 ± 3.6 X 1.3 ± 3.2 10.4 10.3 16. 5 8. 7 5. El extracto de la raíz de A. .0 16.6 ^ 4 . de ellas la No.0 -= 1. 0) poseía el efecto inhibitorio contra los organismos probados.0 3.5 ± 1.3 = 2. raíz NI 4.1 9. 7) y al igual que en el caso anterior la primera (No. 7 6. 8).

0 63.1 61.1 A.6 0 21.4 40.9 60. (raiz) NO P O L A R E S HEXANO ETER DE P E T R O L E O DÍCLORETANO T E T R A C L O R U R O DE CARBONO BENCENO INTERMEDIOS DICLOROMETANO CLOROFORMO 0 27.9 0 26.4 0 36. glutinosa L.1 74.5 S E P A R A C I O N P R E L I M I N A R M E D I A N T E C R O M A T O G R A F I A DE CAPA FINA C O N E X T R A C T O S DE P L A N T A S Rf ( % ) D E M A N C H A S D E S A R R O L L A D A S SOLVENTES U S A D O S A.6 0 63.3 53.4 0 0 27.4 0 45.5 38.0 47. tridentata j 0 0 27.4 0 0 67. lechug.0 0 .5 0 58.T A B L A No.0 80.6 53.2 49.0 58.9 13.9 26. lecliug (hojas) B.0 40.2 0 36.8 80.9 63.6 36.3 71.ó 24.9 78.2 0 0 76.8 0 28.8 35.5 0 29.8 1 i 1 3 _i__J ACETATO D E E T I L O POLARES ACETONA METANOL ACIDO ACETICO AGUA 0 = N o hubo corrimiento 0 51.

Fig 7. Cromatograma del extracto de Agave lechugilla (hojas) observada con luz ultravioleta. .

. 8. Cromatograma del extracto de Baccahris glutinosa observada con luz ultravioleta.Fig.

9. . C r o m a t o g r a f í a del extracto de Larrea tnclentata obseivada con luz ultravioleta.Fig.

lechuguilla ( H O J A S ) U S A N D O C O M O E L U E N T E UNA M E Z C L A DE CLOROFORMO-METANOL 9: I FRACCION 0 1 2 3 1 blanco rojo verde anaranjado café blanco amarillo claro amarillo 2 Rf (%) 0 24 77 96 J _ A R E A (mm 2 ) 7.0 INHIBICION* - 0 0 0 i 1: Color observado con luz ultravioleta.0 9. 2: Color observado con luz visible * Ensayos de inhibición contra los microorganismos en este estudio.0 INHIBICION* - 6.M E T A N O L 9:1 FRACCION 0 I 2 j 4 5 blanco lila rojo 1 2 café claro blanco blanco blanco blanco café claro Rf (0/o) 0 24 28 46 63 94 AREA (mnr) 12. S E P A R A C I O N P O R C R O M A T O G R A F I A EN C A P A FINA DE E X T R A C T O DE A.0 0 0 0 0 0 café claro verde claro anaranjado I: Color observado con luz ultravioleta.0 8.0 7.0 7.0 7.Color observado con luz visible. 2 . S E P A R A C I O N POR C R O M A T O G R A F I A EN C A P A FINA DEL EXTRACTO DE A.0 8.0 6.T A B L A 6. *Ensayos de inhibición contra los microorganismos en estudio TABLA 7. . lechuguilla (RAIZ) U S A N D O C O M O E L U E N T E UNA M E Z C L A DE C L O R O F O R M O .

2 : Color observado con luz visible * Ensayos de inhibición contra los microorganismos en este estudio. glutinosa U S A N D O C O M O E L U E N T E UNA M E Z C L A DE CLOROFORMO .0 5.T A B L A 8.0 9.METANOL 9 : 1 •RACCION 1 0 I 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1 Verde oscuro amarillo rosa lila amarillo rojo café oscuro amarillo café oscuro azul anaranjado 2 café claro crema crema rosa crema café claro café claro amarillo amarillo claro crema verde claro Rf (%) 0 7 22 39 44 51 66 77 81 90 96 A R E A (mm 2 ) 7.0 6.0 7.0 INHIBICION* 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 Cantidad de extracto = 0.0 8.0 7. S E P A R A C I O N POR C R O M A T O G R A F I A EN C A P A FINA DEL E X T R A C T O DE B.0 5.0 8.0 5.0 6. .5 mV placa 1: Color observado con luz ultravioleta.

0 INHIBICION* 0 0 - 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1: Color observado con luz ultravioleta.0 9. tridentata U S A N D O C O M O E L U E N T E I NA M E Z C L A DE C L O R O F O R M O .0 8.0 7.0 7.0 8.0 8.TABLA No.9 S E P A R A C I O N POR C R O M A T O G R A F I A EN C A P A FINA DEL EXTRACTO DE L. .0 5.0 9.M E T A N O L 9:1 FRACCION 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 I verde oscuro rosa rojo café oscuro café claro café verde claro café oscuro amarillo café oscuro azul anaranjado 2 verde crema amarillo mostaza café amarollo café claro rosa café claro mostaza café café oscuro Rf(%) 0 25 42 43 " 53 59 65 73 80 84 90 96 A R E A (mm 2 ) 7.0 10.0 7.0 6. * Ensayos de inhibición contra los microorganismos en estudio. 2 : Color observado con luz visible.

Ella reportó que el extracto acuoso de la raíz de esta planta en dosis hasta de 6 g/kg de peso administrado por vía oral no ocasionó efecto letal en ratas machos y hembras adultas del género Wistar.DISCUSION Las plantas han sido. tridentata a concentraciones muy altas. A u n q u e por otro lado ellos reportaron resistencia en S. son y continuarán siendo. una importante fuente de antimicrobianos. el extracto de A. se desarrollan o crecen en nuestro ambiente. Tal es el caso de A. glutinosa presentó actividad solo con organismos filamentosos. Tal vez el método de extracción o las partes de la planta utilizada trabajo con L. que a ciertas dosis no producen efectos nefro o hepatotóxico. por último L. quien reporta mayor sensibilidad sobre dermatofito. que presentó actividad . lechuguilla en donde sugieren la posibilidad que las saponinas esferoidales sean tal vez las portadoras de la actividad antifungica (13). Existen informes publicados referentes a la composición química de A. En el presente estudio se observaron resultados similares al trabajo de Disalvo que y registró efectos inhibitorios sobre también estudió la actividad antimicrobiana de R. por lo que se considera que tal requerimiento es fundamental para el desarrollo de una posible aplicación humana. tridentata establecieron esta diferencia. lechuguilla cuyo extracto acuoso es considerado tóxico por algunos autores. necesitó menor concentración \ además presentó un espectro más amplio. De las tres plantas. como se confirmó en el trabajo desarrollado p o r Velázquez (1093). pero no con levaduras. lechuguilla fué el más activo ya que por comparación de la CM1 como se observa en la Tabla 4. scheiifcii y nosotros pudimos observar sensibilidad en ese hongo. Los compuestos responsables de la actividad antifungica ya han caracterizados y la mayoría son derivados fenólicos del ácido nordihidroguayaretico (13). glutinosa dermatofitos. Los resillados obtenidos en este difieren de los de Campos. le sigue en orden decreciente el extracto de B. Sin embargo se ha podido establecer en modelos animales. Otro punto valorable de esta planta es la alta solubilidad del extracto en agua. Podemos decir que las encontradas en el presente trabajo con actividad antifungica.

con acción eficaz y menor toxicidad y efectos secundarios que los que actualmente existen.En la cromatografía desarrollada para cada extracto se detectó mejor separación con los extractos de B. tridentata (Fig. La separación de extractos fue preliminar y no excluye que las bandas estén compuestas de dos o más componentes. lechugilla y L. forman paite de nuestra flora regional. Consideramos que este trabajo y estudios posteriores abrirán más opciones para que en un futuro cercano sean utilizados fármacos de origen vegetal. De acuerdo a los resultados obtenidos p o d e m o s afirmar que sí existen posibles opciones o alternativas terápeuticas contra algunas de las enfermedades producidas por los microorganismos que probamos. en la separación fué muy pobre (Fig. 7) ya que la fracción 0 ftié donde se encontraba el efecto antifungico. glutinosa cambio con A. 8 y 9) por contener compuestos no polares. extraídos de plantas regionales. Además de que éstas serian accesibles ya que las 3 plantas cuyos extractos demostraron tener efectos antifüngicos. Sin embargo se ofrece una base para el análisis preparativ o de los compuestos de donde se deberá continuar con los análisis apropiados hasta ¡a caracterización de los compuestos activos. .

2 fue la inhibidora. La cromatografía en este trabajo nos permitió la separación de los compuestos que integraban los extractos y que fueron probados nuevamente con los organismos antes mecionados detectando como a la fracción responsable de la inhibición. la cual no emitía coloración con luz ultravioleta y con luz visible se observó café claro. krusei. su Rf fue de 0%. que presentó un color azul al observarse En el extracto de L. Las fracciones de las hojas de la misma planta mostraron un resultado similar. De los 20 extractos analizados fueron 3 los que mostraron tener efecto inhibitorio a las concentraciones usadas contra varios de los microorganismos estudiados. su Rf fue de 90%. tridentata presentaron un efecto inhibitorio contra todos los organismos filamentosos. . El de mayor efecto fué el extracto de la raíz de A. De efecto menos potente pero con el mismo patrón. con luz ultravioleta y un color crema con luz visible.0. con un Rf de 42%. En el caso de B. el color desarrollado con luz ultravioleta fue rojo (Fig. glutinosa la fracción inhibidora fue la No. tridentata se observó que la fracción No. en el caso del de la raíz de A. glutinosa y L. B. fué el que presentaron las hojas de la misma planta. lechuguilla que produjo inhibición de t o d o s los microorganismos estudiados excepto C. ó. lechuguilla No.CONCLUSIONES En este trabajo se estudió el efecto antimicrobiano de 20 extractos de plantas comúnmente usadas en la medicina tradicional para curar varias enfermedades causadas por hongos. Se determinó la actividad ñie la antimicrobiana de las fracciones de los extractos. 9) y color amarillo con luz visible. sin embargo las especies levaduriformes fueron resistentes.

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