CAPITULO

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Señales celulares: comunicación entre células y su ambiente
15-1 Algunas características básicas de los sistemas de señales celulares 15-2 Receptores acoplados a proteína G y segundos mensajeros La perspectiva humana: Trastornos relacionados con receptores acoplados a proteína G 15-3 Receptor de tirosincinasas {RTK}: un segundo tipo principal de sistemas de señales 15-4 Convergencia, divergencia e interferencia entre diferentes sistemas de señales 15-5 Otros sistemas de señales La vía experimental: Descubrimiento y caracterización de las proteínas enlazadas a GTP

l poeta inglés John Donne expresó su convicción respecto de la interdependencia del ser humano en la frase: "Ningún hombre es una isla." Lo mismo se puede decir de las células. Es evidente que las células dependen de su ambiente para obtener las materias primas necesarias que sostienen su vida. En el capítulo 4 vimos que la membrana plasmática de la célula contiene varios canales diferentes y transportadores que permiten a las células introducir selectivamente las sustancias inorgánicas y orgánicas necesarias para mantenerse y para liberar productos de desperdicio. Para su supervivencia también es esencial que las células se comuniquen con sus vecinas, vigilar las condiciones de su ambiente y responder de manera apropiada a diversos tipos de estímulos que inciden sobre su superficie. Las células llevan a cabo estas interacciones mediante un fenómeno conocido como emisión de señales celulares, en el cual se pasa información a través de la membrana plasmática al interior de la célula y con frecuencia al núcleo celular (ñg.> 15-1). En la mayor parte de los sistemas las señales celulares incluyen:

E

FIGURA 15-A. Corte a través del ojo compuesto de la mosca de la fruta teñido con anticuerpos fluorescentes para mostrar la distribución de la protema calmodulina enlazada a calcio. (Cortesía de Jeffrey A. Porter y Craig Montdl, Tlie Johns Hopkins Universíty.)

• Reconocimiento del estímulo en la superficie externa de la membrana plasmática mediante un receptor específico integrado a la membrana. • Transferencia de una señal a través de la membrana plasmática hacia la superficie citoplásmica de la misma.
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CAPITULO 15 • Señales celulares: comunicación entre las células y su ambiente Ligando extracelular

Sitio de contacto célula-célula

Activación de la actividad de la enzima Cambios en la organización del citoesqueleto Cambio en la permeabilidad a iones Activación de la síntesis de DNA Activación de la síntesis de RNA

Matriz extracelular FIGURA 1 5 - 1 . Perspectiva de algunas formas como se pueden iniciar las señales intercelulares y los tipos de respuesta que pueden generar. La membrana plasmática de una célula contiene receptores que se enlazan específicamente a ligandos solubles, matrices extraceiulares y componentes de la superficie de otras células. La estimulación que se origina a partir de estos contactos se puede convertir (transducir) por la membrana celular en señales ¡ntracelulares transmitidas a lo largo de diversas vías. Finalmente, estas señales pueden producir la activación de enzimas, cambios en la organización del citoesqueleto, cambios en la permeabilidad iónica, inicio de la síntesis de DNA, o la activación o represión de la expresión de genes.

plasmática en vez de actuar a nivel de la superficie celular. También hay casos en los cuales las sustancias que se enlazan a los receptores de la superficie celular evocan una respuesta directa sin iniciar la emisión de señales dentro de la célula. El neurotransmisor acetilcolma actúa por un mecanismo de este tipo cuando se enlaza a su receptor sobre la célula del músculo esquelético, abriendo un canal iónico situado entre el propio receptor (pág. 163). La emisión de señales puede afectar casi a todos los aspectos de la estructura y función celulares, y ésta es una de las principales razones por las cuales este capítulo aparece casi al final del libro. Por otra parte, el tema de la emisión de señales celulares puede servir para vincular varias actividades celulares, al parecer independientes. Ningún otro tema parece ilustrar el hecho de que las partes de una célula son elementos interdependientes e incapaces de funcionar en aislamiento. La emisión de señales celulares también está íntimamente relacionada con el proceso mediante el cual las células regulan su crecimiento y función, y este hecho confiere al estudio de las señales celulares importancia especial para comprender de qué manera una célula puede perder el control de su crecimiento y convertirse en tumor maligno.

15-1 Algunas características básicas de los sistemas de señales celulares
El término "emisión de señales celulares" lleva implícito el concepto de que la célula responde a un estímulo de su ambiente transmitiendo información al compartimiento interno de la célula. En la mayor parte de los casos, el estímulo es una molécula secretada en el espacio extracelular por otra célula, pero el estímulo también se origina como resultado del contacto con otra célula o con un sustrato no celular (fíg. 15-1). Cualquiera que sea su naturaleza, el agente que se enlaza al receptor en la superficie externa de la célula se conoce como ligando. A diferencia de la captación de nutrientes o de iones, las señales celulares no incluyen la transferencia del agente estimulante a través de la membrana; todo lo que se transmite a través de dicha membrana es la señal de que se ha recibido un estímulo. Otro término comúnmente empleado en relación con este proceso es transducción de señales, que indica que la naturaleza del estímulo recibido por el receptor de la superficie celular es totalmente diferente a la señal liberada en el interior de la célula. Como pronto veremos, la transducción de señales es un proceso complejo que implica el paso de información a lo largo de vías de transducción de señales, en general constituidas por una serie de diversas proteínas. En ciertos aspectos, el paso de información a través de la célula es análogo al paso de electrones a lo largo de una cadena de transporte de electrones. En ambos casos, cada componente de la vía es alterado por el elemento "antecedente" en ella, y a su vez altera al elemento "subsecuente" en dicha vía. En vez de pasar electrones o alguna otra sustancia específica, las proteínas de una vía de transducción de señales por lo general actúan alterando la conformación de la siguiente proteína en la serie, acontecimiento que activa o inhibe a dicha proteína (fig. 15-2).

• Transmisión de la señal a las moléculas efectoras específicas sobre la superficie interna de la membrana o dentro del citoplasma que desencadenan la respuesta celular, la cual puede implicar un cambio en la expresión de genes, alteración de la actividad en enzimas metabólicas, reconfiguración del citoesqueleto, cambio de permeabilidad a iones, activación de la síntesis de DNA o incluso la muerte de la célula. • Cese de la respuesta como resultado de la destrucción o inactivación de la molécula emisora de señales combinada con disminución del grado de estímulo extracelular. Antes de examinar estos pasos con mayor detalle debemos hacer notar que no toda la información se transmite desde el espacio extracelular al interior de la célula por medio de un receptor situado en la superficie de la misma. Por ejemplo, en el capítulo 12 vimos que las hormonas esferoides actúan sobre células específicas que atraviesan la membrana plasmática por difusión e interactúan con una proteína receptora dentro de la célula, a la cual convierten en factor de transcripción activo. En el presente capítulo describiremos otro ejemplo donde un mensajero intercelular, denominado óxido nítrico (NO), atraviesa la membrana

CAPITULO 15 • Señales celulares: comunicación entre las células \j su ambiente

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Proteincinasa 3 inactiva

Fosfato Proteincinasa 3 activa Fosfato
é

RESPUESTA
Proteinfosfatasa 3

Proteincinasa 1 inactiva

Fosfato Proteincinasa Sustrato de proteína 1 activa inactivo (p. ej., factor de transmisión)

Sustrato de proteína activa (p, ej., capaz de enlazar a la secuencia promotora en el DNA)

FIGURA 15-2, Las vías para transducción de señales constan principalmente de proteincinasas y proteinfosfatasas cuya acción catalítica cambia la conformación, y por lo tanto la actividad, de las proteínas que modifican. En el ejemplo aquí mostrado, la proteincinasa 1 es activada por la proteincinasa 2. Una vez activada, la proteincinasa 1 fosforila a la proteincinasa 3 activando la enzima. En seguida, la proteincinasa 3 fosforiia un factor de transcripción incrementando su afinidad por un sitio sobre el DNA que provoca la respuesta. Cada una de estas etapas de activación puede ser invertida por una fosfatasa.

No es sorprendente, luego de leer otros temas de biología celular, que los mecanismos más importantes para que una proteína de una vía de transducción de señales altere la actividad de la proteína siguiente en la serie sea añadir o eliminar grupos fosfato (fig. 15-2). Como veremos, la vía de transducción de señales de ordinario contiene proteincinasas y fosfatasas, que parecen ser los agentes favoritos para provocar cambios reversibles rápidos en la actividad celular. Algunas de estas cinasas y fosfatasas son proteínas citoplásmicas solubles; otras son proteínas integrales de membrana. Algunas de estas enzimas poseen gran número de proteínas como sustratos, en tanto que otras sólo fosforilan o desfosforilan un sustrato de proteína único. Gran parte de los sustratos de estas enzimas son otras enzimas, pero los sustratos de proteína pueden incluir canales iónicos, factores de transcripción y varios tipos de subunidades reguladoras. En general, añadir o eliminar grupos fosfato a partir del sustrato desencadena un cambio de conformación en la proteína que estimula o inhibe su actividad, y por lo tanto conduce a una respuesta específica. Otra característica prominente de las vías de señales celulares compartida por otros procesos celulares es el uso de proteínas enlazadas a GTP como interruptores que inician o concluyen la actividad. Las proteínas enlazadas a GTP se estudiaron en relación con el tráfico de vesículas en el capítulo 6, la dinámica de microtúbulos y microfilamentos en el capítulo 9, y la síntesis de proteínas en el capítulo 11. En el presente capítulo exploraremos su papel en la transmisión de mensajes a lo largo de "circuitos de información celular". El análisis de la emisión de señales celulares en este capítulo se centrará en dos tipos contrastantes de vías de transducción de señales (fig. 15-3). En uno de los tipos de vías, la fijación de un ligando a un receptor en la superficie celular se indica a través de la activación de una proteína enlazada a GTP (proteína G), en tanto que en el otro tipo de

respuesta, el enlace de ligandos se señala mediante activación directa de la actividad enzimática relacionada con el receptor.
Estímulo (ligando)

Receptor

Efector

Efector activado

Estímulo Receptor Receptor (ligando) cinasa activado (inactivo) FIGURA 15-3. Los dos tipos alternativos de vías para la transducción de señales. En la vía 1, el ligando enlazado activa una proteína G, que activa un efector, liberando una señal. En la vía 2, el ligando' enlazado activa una acción enzimática (cinasa) del receptor, que activa un efector liberando una señal.

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CAPITULO 15 • Señales celulares: comunicación entre las células y su ambiente

L5-2 Receptores acoplados a proteína G y segundos mensajeros
La oxidación de la glucosa por la vía catabólica de la glucólisis y del ciclo de Krebs suministra a la mayor parte de las células su fuente primaria de energía. Dada la importancia de la glucosa en el metabolismo, la comprensión del mecanismo que controla el aprovechamiento de este azúcar ha sido un objetivo importante de los bioquímicos y fisiólogos por más de 100 años. Como se estudió en el capítulo 3, la glucosa en los animales se almacena como glucógeno, un polímero insoluble de glucosa. La desintegración del glucógeno en subunidades ricas en energía es controlada en vertebrados por algunas hormonas, más notablemente el glucagon, secretado por el páncreas, y la epinefrina, secretada por la médula suprarrenal. Cada una de estas hormonas se enlaza a un receptor que sobresale en la membrana plasmática de la célula específica. El enlace inicia una serie de reacciones que estimulan la enzima fosforilasa, la cual cataliza la reacción para descomponer el glucógeno en glucosa fosfato, primer paso del catabolismo del azúcar (fig. 15-4). Al mismo tiempo, el enlace de ambas hormonas inhibe a la enzima glucógeno sintasa, que cataliza la reacción opuesta para polimerizar glucosa y formar glucógeno. Por lo tanto, los diferentes tipos de estímulo que inciden en la misma célula blanco pueden inducir la misma respuesta. En la siguiente sección veremos de qué manera es posible esto. Descubrimiento de un segundo mensajero: AMP cíclico La conexión entre el enlace de una hormona a la membrana plasmática y los cambios de actividad de la fosforilasa y la glucógeno sintasa fue dilucidado mediante estudios iniciados a mediados del decenio de 1950 por dos grupos de investigadores: Earl Sutherland y sus colegas, en la Case Western Reserve University, y Edwin Krebs y Edmond

Fischer, en la Universidad de Washington. El objetivo de Sutherland era desarrollar un sistema in vitro en el cual se pudiera lograr la respuesta fisiológica a una hormona. Luego de grandes esfuerzos, observó que se podía incubar epinefrina o glucagon con una preparación de células despedazadas y demostrar activación de la fosforilasa. Esta preparación de células despedazadas se podía dividir mediante centrifugación en una fracción con partículas y una fracción soluble. Aunque la fosforilasa sólo se encuentra en la fracción sobrenadante, se requieren las partículas materiales para la respuesta hormonal. Experimentos subsecuentes indicaron que la respuesta ocurre en dos pasos distintos cuando menos. Si se aisla la fracción de partículas de un homogenado de hígado y se incuba con la hormona, se produce alguna sustancia nueva que cuando se añade a la fracción sobrenadante puede activar a la molécula fosforilasa soluble. Sutherland identificó a la sustancia liberada por las membranas de la fracción dividida como monofosfato de adenosina cíclico (AMP cíclico, o simplemente AMPc). Como estudiaremos en detalle, el AMPc estimula la movilización de la glucosa al activar una proteincinasa que añade un fosfato a un residuo específico de serina del polipéptido fosforilasa. El AMP cíclico es un ejemplo de segundo mensajero, sustancia liberada dentro de la célula como resultado del enlace de un primer mensajero, una hormona u otro ligando, a un receptor situado en la superficie externa de la célula. Subsecuentes trabajos efectuados por otros investigadores demostraron que el AMP cíclico sólo es uno de un gran número de sustancias que actúan como segundos mensajeros en células eucariotas. En tanto que el primer mensajero se enlaza exclusivamente a una sola especie de receptor, el segundo mensajero generado en el citoplasma a menudo puede activar varias actividades celulares. Como resultado, el uso de segundos mensajeros permite a las células mostrar una respuesta coordinada a gran escala luego de la estimulación por un solo ligando extracelular. En un momento retornaremos al mecanismo mediante el cual la señal del ligando enlazado se transmite a través de la membrana,

CH2OH

CH2OH H]T—°vH

CH2OH HJ¡--~t\ Fosforilása

CH^OH H/ \ {GlucosaJn _ Glucógeno

H

OH

H

OH

H

OH

P(
PP;

H

OH

Glucógeno
(glucosa),,

Glucógeno sintetasa UDP-glucosa (Glucosa)n -

Glucosa 1-fosfato

UTP

\a 6-fosfato

/ \a Glucosa
FIGURA 15-4. Reacciones que conducen al almacenamiento o movilización de la glucosa. En estas reacciones, la actividad de dos enzimas claves, fosforilasa y glucógeno sintetasa, están controladas por hormonas que actúan a través de vías para la transducción de señales. 6-fosfato Glucólisis i [\ Sangre I

la fosforilación de la fosforilasa cinasa activa la enzima para catalizar la transferencia de grupos fosfato a moléculas de fosforilasa (paso 6). Otros aspectos de la vía de transducción de señales del AMPc Aunque los efectos más rápidos y mejor estudiados de la producción de AMPc se observan en el citoplasma. esta concentración baja constituye una señal de comunicación muy económica. 15-6). El enlace de una sola molécula de hormona en la superficie de la célula puede activar varias moléculas de adenililciclasa. denominada proteincinasa A (PKA) (paso 3). Una vez activada la adenililciclasa. H' OH VH / H H/H -C c OH OH I-'IGURA 15-5. La versión fosforilada del CREB se enlaza a diferentes sitios sobre el 0 0 0 ""^N II II II "OPOPOPOCH-j I I I ¿ 0~0~0 (T ^C. La desintegración del AMPc (no mostrado) se logra gracias a una fosfodiesterasa. Los sustratos específicos de PKA de una célula hepática incluyen dos enzimas que desempeñan un papel crucial en el metabolismo de la glucosa. Movilización de glucosa: ejemplo de respuesta inducida por AMPc Una proteína integral de membrana sintetiza el AMPc. pero una fracción de ellas se transloca al interior del núcleo donde fosforilan proteínas nucleares clave (paso 9. Cada molécula de AMPc puede entonces enlazarse a un sitio alostérico sobre la subunidad reguladora de una proteincinasa específica dependiente de AMPc.CAPITULO 15 • Señales celulares: comunicación entre las células y su ambiente 631 que es uno de los principales pasos en el proceso de emisión de señales. Uno de los grandes valores de la reacción en cascada. La mayor parte de las moléculas PKA activadas permanecen en el citoplasma. Cada molécula de AMPc puede entonces activar una sola molécula de PKA. una proteína integral de membrana cuyo sitio activo se localiza en la superficie interna de la membrana. que por su parte catalizan la formación de un número mucho mayor de fosfatos de glucosa. cada una de las cuales produce numerosos mensajeros AMPc en un breve periodo. según se describe más adelante. fig. la concentración de hormonas por lo general es muy baja: menos de 10~8 M. pero primero ilustraremos el mecanismo de acción de los sistemas con segundo mensajero para describir de qué manera se sintetiza el AMP cíclico y cómo puede desencadenar la movilización de glucosa. Krebsy Fischer descubrieron que la adición de un solo grupo fosfato a un residuo serina específico en la molécula de fosforilasa activa a esta enzima y estimula el desdoblamiento de glucógeno (paso 7). La formación de AMP cíclico a partir de ATP es catalizada por adenililciclasa. El enlace del AMPc provoca disociación de las subunidades inhibidoras liberando las subunidades catalíticas en su forma activa. la adenilciclasa se denomina ef ector. La fosforilación de la glucógeno sintasa inhibe su actividad catalítica y por lo tanto evita la conversión de glucosa a glucógeno. las cuales a su vez pueden fosforilar un número aún mayor de moléculas de fosforilasa. Las subunidades reguladoras normalmente inhiben la actividad enzimática de las subunidades catalíticas de la enzima. Considerando el volumen de sangre en el cuerpo de un vertebrado. fig. En la sangre. que difunde al interior de la sangre y alcanza los tejidos del cuerpo (paso 8). La actividad de la enzima es regulada por proteínas enlazadas a GTP. Así. como la mostrada en la figura 15-6. que puede fosforilar a un gran número de moléculas de PKA. Por lo contrario. varias de las cuales incluyen modificación por enlaces covalentes de una enzima por otra. activa la adenililciclasa en la superficie interna de la membrana. Esta reacción en cascada se ilustra en la figura 15-6. lo que comienza como un estímulo apenas perceptible en la superficie de la célula. cataliza la conversión de ATP en moléculas de AMPc que pueden difundir rápidamente al interior del citoplasma (fig. que convierte el nucleótido cíclico a 5' monofosfato. El AMPc provoca su respuesta iniciando una cadena de reacciones. El enlace de glucagon o de epinefrma a la superficie externa de una célula hepática provoca un cambio de conformación del receptor que es transmitido a través de la membrana plasmática y. 15-6). Esta proteína se denomina adenililciclasa y su dominio catalítico reside en la superficie interna de la membrana plasmática (fig. La glucosa 1-fosfato formada en la reacción de la fosforilasa se convierte a glucosa. Ya se describió el primer COOH paso en la cascada de reacciones que ocurre a medida que la hormona se enlaza al receptor y estimula la síntesis de AMPc (pasos 1 y 2. según se estudia más adelante en el texto y se ilustra en la figura 15-11. 15-5). es que amplifica ampliamente el mensaje original (indicado por las flechas azules en la figura 15-6). 15-5). en particular un factor de transcripción denominado CREB (siglas en inglés que significan elementa enlazado a proteínas que responde al AMPc). Puesto que provoca la respuesta celular (efectos) mediante la síntesis de AMPc. Por lo tanto. la glucógeno sintasa y la fosforilasa cinasa (pasos 4 y 5). el núcleo y sus genes también participan en la respuesta. la producción del segundo mensajero representa un importante paso de amplificación en el proceso. . rápidamente se transforma en una gran movilización de glucosa dentro de ella.

la fosfatasa-1. epinefrina. Muchos de los pasos de la reacción en cascada se acompañan de una amplificación espectacular de la señal. En las células del hígado. La fosforilación del inhibidor-1 es catalizada por la proteincinasa A. Membrana plasmática DNA (paso 10) que contienen una secuencia particular de nucleótidos (TGACGTCA) conocida como amplificador regulado de AMPc (ARA). Otra ventaja de una reacción en cascada. la fosfatasa-1 se inhibe. que elimina el fosfato de la fosforilasa y detiene la descomposición adicional de glucógeno. que también sufre un ciclo de activación y desactivación por fosforilación y desfosforilación. tan pronto como desciende la concentración de AMPc. es un sitio potencial donde la célula puede regular la respuesta celular. el inhibidor se desfosforila y por lo tanto activa a la fosfatasa-1. El AMPc se produce en muchas células diferentes en respuesta a una gran variedad de ligandos diferentes (es .632 CAPITULO 15 • Señales celulares: comunicación entre las células y su ambiente Glucagon.—^ /"•"*!? "f A Inactiva Inactiva Fosfatas a CH. 3-29). Por lo tanto. sino también conducen a la síntesis de enzimas anabólicas necesarias para formar glucosa a partir de precursores más pequeños. varias de las enzimas que participan en la gluconeogénesis. de otra manera. respectivamente (fig. recordemos que los amplificadores son sitios en el DNA donde los factores de transcripción enlazados actúan para incrementar la velocidad de inicio de la transcripción. debe haber un mecanismo para revertir los pasos mostrados en la figura 15-6. la misma cinasa dependiente de AMPc mencionada anteriormente. puede eliminar fosfatos de todas las enzimas fosforilables de la figura 15-6: fosforilasa cinasa. Los amplificadores regulados de AMPc se localizan específicamente en regiones reguladoras del DNA que controlan la expresión de genes que desempeñan un papel en la respuesta al AMPc. Etapas de la respuesta al estímulo hormonal que conducen a la movilización de la glucosa. sea cinasa o f osfatasa. Se cree que los factores de transcripción enlazados a los amplificadores actúan al enlazarse a las proteínas presentes en el complejo preinicial cerca del sitio de comienzo (fig. Ja tasa de actividad de fosfatasa-1 es controlada por una proteína denominada Ínhibidor-1. La activación de esta cinasa asegura que cuando los niveles de AMPc se elevan. además de la amplificación. por ejemplo. vía por la cual se forma la glucosa a partir de los intermediarios de la glucólisis (fig. son codificadas por genes que contienen ARA cercanos. Las células hepáticas contienen varias fosfatasas que catalizan la eliminación de los grupos fosfato añadidos por las cinasas.OPOf •O Activa O Glucosa O Torrente sanguíneo o i) Glucosa 1 -fosfato Glucógeno Glucosa 6-fosfato FIGURA 15-6. glucógeno sintasa y fosforilasa. La más importante de estas enzimas. -» Activa ^ © © Fosfatas a A s (0 Fosforilasa cinasa -. 15-7). otros Adenililciclasa Citoplasma ! Núcleo x^^ Inactiva w Activa Glucógenosintasa O Fosfodiesterasa • •} Proteincinasa A Inactiva . Sin embargo. 12-36). Respuesta de una célula hepática a glucagon o epinefrina. según se describe en el texto. O O Activa . Como sería de esperar. es que cada una de las enzimas a lo largo de la cadena. la célula permanecería en estado activado a partir de ese momento. epinefrina y glucagon no sólo activan enzimas catabólicas participantes en el desdoblamiento de glucógeno. De la página 518. Por ejemplo. Los pasos que conducen a [a amplificación se indican por flechas azules.—j-^ Activa Fosforilasa .

primeros mensajeros). en las células adiposas se desintegran tríacilgliceroles.CAPITULO 15 • Señales celulares: comunicación entre las células y su ambiente Hormona 633 AMPc Forma inactiva del inhibidor-1 Forma activa del inhibidor-1 Incremento del * nivel de fosforilación de proteína } Disminución del nivel de fosforilación de proteína FIGURA 15-7. síntesis de glucosa (gluconeogénesis). La misma hormona también puede producir respuestas muy diferentes en distintas células. decir. Ejemplos de respuestas inducidas por hormonas mediadas por AMPc Tejido Hígado Hormona Epinefrina y glucagon Respuesta Hidrólisis de glucógeno. que concluye la respuesta. En invertebrados también se emplea el AMPc como segundo mensajero. las respuestas son muy diferentes: en la célula hepática se desintegra glucógeno. que a su vez provoca inactivación de la fosfatasa-1. la epinefrina se enlaza a un receptor /?-adrenérgico similar en las células hepáticas. células adiposas y células del músculo liso del intestino. En todos los casos citados antes. ACTH y glucagon Vasopresina (ADH) TSH Hormona paratiroidea LH ACTH . según se ilustra por la elevación espectacular de la concentración de AMPc que ocurre en ciertas células nerviosas de la liebre marina en respuesta al neurotransmisor serotonina (fig. CUADRO 15-1. la producción de AMPc continúa sólo si se mantiene alta la concentración del mensajero primario en el espacio extracelular. Un descenso en la síntesis de AMPc conduce a la inversión de este estado. Cuando la concentración desciende y estas moléculas se disocian de los receptores de membrana de las células blanco. La formación de AMPc y la activación subsecuente de la proteincinasa dependiente de AMPc (PKA) provoca: 1) aumento del nivel de la fosforilación de proteína y 2) fosforilación y activación del inhíbidor-l. Aunque la activación del PKA en una célula hepática en respuesta a la epinefrina produce descomposición de glucógeno. Por ejemplo. aun cuando se enlace al mismo receptor. inhibición de la síntesis de glucógeno Hidrólisis de glucógeno. En el cuadro 15-1 se presentan algunas respuestas mediadas por AMPc en células de mamíferos. y en las células tiroideas en respuesta a TSH provoca la secreción de hormona tiroidea. y las células del músculo Usó se relajan. la fosfodiesterasa de nucleótido cíclica. 15-8). Las moléculas de AMPc ya presentes en el citoplasma se degradan por acción de una enzima. se desactiva la adenililciclasa y la síntesis de AMPc desciende de manera aguda (según se ilustra en la ultima fotografía de la secuencia en la figura 15-8). la activación de esta enzima en una célula del túbulo renal en respuesta a vasopresina provoca reducción de la permeabilidad de la membrana al agua. Sin embargo. provocando la síntesis de AMPc en los tres tipos de células. por lo que mantiene así el mayor nivel de fosforilación de proteína. inhibición de la síntesis de glucógeno Incremento de la contractilidad Catabolismo del triacilglicerol Incremento de la permeabilidad de las células epiteliales al agua Secreción de hormona tiroidea Incremento de la resorción de calcio Incremento de la secreción de hormonas esteroides Incremento de ¡a secreción de glucocorticoide Músculo esquelético Músculo cardiaco Adiposo Renal Tiroideo Hueso Ovario Corteza suprarrenal Epinefrina Epinefrina Epinefrina. Puesto que el AMPc ejerce su efecto por activación de PKA. el curso de los acontecimientos que ocurren en una célula dada en respuesta al AMPc será determinado por las proteínas específicas fosforiladas por dicha enzima (fig. 15-9 y cuadro 15-2). Papel como fosforilador y desfosforilador del inhibidor-1 en la acción hormonal.

que es específica para una u otra hormona. síntesis de RNA) FIGURA 15-'». La similitud de la respuesta al enlace de estas dos hormonas se puede atribuir a la semejanza de sus mecanismos de acción. diferenciación. La transmisión de la señal del receptor al efector se logra mediante un tercer elemento del sistema de transduc- \o Lipasa de triglicéridc (síntesis de lípidos Glucógeno sintasa (síntesis de glucógeno) Fosforilase cinasa endoplásmico (síntesis de Cinasa\) Fosforilasa (desintegración del glucógeno] Núcleo (síntesis de DNA. 15-10). también lo son las proteínas que transmiten la señal del receptor enlazado al ligando al efector de adenililciclasa. al final del capítulo. (Reimpreso con permiso de Brían }. 7993. la epinefrina es una pequeña amina hídrófila H H C-CH2-N-H ción. 15-10). y las siguientes cuatro imágenes muestran los efectos de la estimulación por el neurotransmisor serotonina (5-hidroxitriptamina) en los tiempos indicados. la concentración de AMPc retorna a las cifras presentes cuando no hay estimulación. copyright 1993 American Association for the Advancement of Science. una proteína G heterotrimérica (fig. Estas dos moléculas prácticamente no tienen nada en común desde el punto de vista estructural. cuyo descubrimiento y caracterización se analizan en La vía experimental.634 CAPITULO 15 • Señales celulares: comunicación entre las células y su ambiente FIGUliA 15-8.. Backsai y cois. Los segmentos transmembrana están conectados entre sí por asas extracelulares cortas sobre la superficie externa de la membrana.) Estructura y función de receptores acoplados a proteína G El glucagon es una pequeña proteína de 29 aminoácidos. Los receptores de estos dos ligandos muy diferentes son miembros de la misma familia de proteínas integrales de membrana. sea GDP o GTP. No sólo los dos receptores son muy similares en cuanto a estructura. Esta serie de fotografías muestran una célula nerviosa sensorial de la liebre marina Aplysia. Los dos receptores difieren entre sí sobre todo en la estructura de la bolsa que se enlaza al ligando sobre la superficie extracelular del receptor. Se describen como heterotriméricas porque Membrana plasmática (transporte) OH XCH3 Microtúbulos (ensamblado/ ^ desensamblado) sintetizada a partir del aminoácido ürosina. Ilustración esquemática de los diferentes procesos que se pueden afectar por los cambios de concentración del AMPc. que conduce a la síntesis de AMPc y la subsecuente fosforilación de la fosforilasa. y asas intracelulares cortas sobre la superficie interna de la misma. La imagen superior izquierda muestra la concentración intracelular de AMPc en la neurona no estimulada. caracterizadas por siete hélices a que atraviesan la membrana (fig. . Science 260:223. Demostración experimental de la síntesis de AMPc en respuesta a estimulación específica. Cuando las células se lavan para liberarlas de serotonina. pero ambas activan al mismo efector (adenililciclasa). Estas proteínas se conocen como proteínas G porque se enlazan al nucleótido de guanina. Todos estos efectos son mediados por la activación de una o varias proteincinasas. La concentración de AMPc libre (indicada en /íM por la barra de color en el lado derecho de la ilustración) se midió por mícroinyección de una molécula fluorescente cuyo espectro de emisión es sensible a la concentración de AMPc.

1 En tanto el complejo Ga-GTP permanezca enlazado a una molécula de adenililciclasa (de ordinario en cuestión de segundos). como la adenililciclasa. Como veremos en breve. como la adenililciclasa. contienen siete hélices que atraviesan la membrana. el receptor interactúa con una proteína G trimérica que a su vez sirve para activar a un efector. 15-12). 1. Estos receptores responden a una variada disposición de hormonas. según se indica en la figura 15-11 y se describe a continuación. las cuales permanecen juntas como un complejo G^ (paso 3. En el cuadro 15-3 se presenta una lista de algunos ligandos que operan por medio de esta vía y los efectores a través de los cuales actúan. pero estos casos no serán analizados. Como resultado del cambio de conformación.A. Cuando se enlaza a su ligando. Fosforilasa cinasa a Proteinfosfatasa-1 Piruvatocinasa CREE Tirosina hidroxilasa hepática Receptor 6 de acetilcolina Inhibidor-1 de la proteinfosfatasa Proteína ribosómica S6 Troponina de corazón de conejo Hormona sensible a lipasa Fosfofructocinasa Miosincinasa de cadena ligera Fructosa bisfosfatasa Fosforilasa cinasa /3 Sintasa de glucógeno muscular Acetil CoA carboxilasa FUENTE: D. que cambia a la proteína G para llevarla a su estado activo (fig. que pone en operación al sistema del segundo mensajero (paso 4). lo que provoca su disociación del receptor y de las otras dos subunidades de la proteína G. 15-11).$jy. Muestra de sustratos PKA conocidos Glucógeno sintasa muscular (la). fig. la enzima continúa produciendo todas ellas constan de tres subunidades distintas de polipéptido. incluyendo los que se enlazan a epinefrina y glucagon. La conexión funcional entre un receptor transmembrana de siete hélices y una proteína G heterotrimérica parece ser un mecanismo universal mediante el cual un estímulo extracelular inicia la movilización de un segundo mensajero en células eucariotas. Cada subunidad Ga disociada (con su GTP fijo) está libre para activar una molécula efectora. 1 Se conocen ejemplos en los cuales la subunidad a de la proteína G inhibe la actividad del efector en vez de estimularla. . FASEB /. El intercambio de nucleótidos de guanina modifica la conformación de la subunidad Ga. Transmisión de la señal de la proteína G al efector. y fotones (los receptores de la retina que detectan la luz son miembros de esta misma familia de moléculas receptoras). La interacción con el receptor provoca que la subunidad a de la proteína G libere su GDP enlazado y se enlace a un sustituto de GTP (paso 2). fig. Los receptores de este tipo.. Walsh y S. la estimulación de receptores acoplados a proteínas G sigue una secuencia similar de elementos. 1994. el receptor enlazado al ligando se enlaza a la proteína G sobre la superficie interna de la membrana formando un complejo de proteína G-receptor (paso 1.CAPITULO 15 • Señales celulares: comunicación entre las células y su ambiente CUADRO 15-2. La interacción entre el receptor y la proteína G es mediada por varias asas intracelulares en la superficie interna del receptor. Se han identificado más de 100 diferentes receptores acoplados a proteína G en organismos que van desde levaduras hasta plantas y animales evolutivamente elevadas.M. Activación de la proteína G por el receptor. Mecanismo enlazado a la membrana para la transducción de señales por medio de un receptor transmembrana de siete hélices y la proteína G heterotrimérica. Esta es la única función del ligando extracelular. El enlace de los ligandos a su receptor específico provoca un cambio de conformación del receptor que aumenta su actividad por la proteína G. f eromonas (sustancias químicas transmitidas de un miembro a otro de una especie). 2. En todos los casos examinados hasta la fecha. van Patten. 635 y adelante entre dos estados que dependen de las condiciones prevalecientes. 15-11). odorantes (moléculas detectadas por receptores olfatorios que despiertan el sentido del olfato). neurotransmísores. denominadas a. Esta propiedad las distingue de otro tipo de proteína G que estudiaremos más adelante en este capítulo y que consta de una sola subunidad. un solo receptor puede activar a varias moléculas sucesivas de proteína G. Cada proteína G puede existir en dos estados: un estado activo en el cual la subunidad a de la proteína G se enlaza a una molécula de GTP o un estado inactivo en el cual la subunidad a se enlaza a una molécula de GDP.H2 Proteína G FIGURA 15-10. las proteínas heterotriméricas G alternan hacia atrás Ligando Receptor | N. Mientras se encuentre en su estado activado. lo que suministra el primer paso en la amplificación de la vía. 8:1234.

R. Por ejemplo. un neurotransmisor potente liberado por las células nerviosas en determinadas porciones del cerebro que gobiernan las emociones.636 CAPITULO 15 • Señales celulares: comunicación entre las células y su ambiente CUADRO 15-3. El receptor /3-adrenérgico. Las señales se retroalimentan a través de la membrana. activa una proteína Gs. 2. Las isoformas de un receptor pueden coexistir en la misma membrana plasmática o a veces aparecen en las membranas de diferentes tipos de células específicas. Como resultado. la subunidad a es por lo tanto capaz de inactivarse a sí misma. Por ejemplo. Fin de la respuesta. por ejemplo. Por lo tanto. sino que también recibe una señal que pasa hacia afuera de la proteína G activada. 4. moléculas de AMPc (paso 5). Puede haber un receptor para un ligando determinado en diferentes versiones (¡soformas) que se cree tienen distinta afinidad con el ligando y también afinidad diversa para una proteína G particular. el receptor no sólo transmite una señal al interior del ligando de la proteína G. el complejo Ga-GDP puede reasociarse a las subunidades G/íy para reconstituir el complejo trimérico y retornar el sistema al estado de reposo (paso 7). Como se mencionó en la nota al pie de la página 635. que un solo receptor puede activar rnás de una vía de señales en la misma célula. que hidroliza la GTP enlazada formando GDP enlazada (paso 6. Puesto que la hidrólisis del GTP suprime la capacidad de la subunidad para activar moléculas efectoras adicionales. el AMP cíclico puede producir respuestas totalmente diferentes en distintas células debido a que este segundo mensajero activa una proteincinasa capaz de fosforilar varios conjuntos de proteínas presentes en distintos tipos de células. También puede haber considerable especificidad en el "extremo delantero" de la vía respecto de diferentes receptores y proteínas G. que estí- . vol. los investigadores han identificado nueve isoformas del receptor adrenérgico (el receptor que enlaza epinefrina) y 15 isoformas del receptor para serotonina. Ejemplo de procesos fisiológicos mediados por proteína G Estímulo Epinefrina Serotonina Luz Complejos IgE-antígeno Péptido f-Met Acetilcolina Receptor Receptor /í-adrenérgico Receptor a serotonína Rodopsina Receptor IgE de células cebadas Receptor quimiotáctico Receptor muscarínico Efector Adenilil ciclasa Adeniiil ciclasa Fosfodiesterasa GMPc Fosfolipasa C Fosfolipasa C Canal de potasio Respuesta fisiológica Desdoblamiento de glucógeno Conducta de sensibilización y aprendizaje en Aplisia Excitación visual Secreción Quimiotaxia Enlentecimiento de la actividad de marcapaso Adaptado de L. reproducido con permiso de Tlie Annual Reviews ofCell Biology. neurotransmisores y estímulos sensoriales. Srryery H. Cuando menos se han identificado 20 subunidades Ga. batiendo el AMPc. cuando la epinefrina se enlaza a un receptor /í-adrenérgico sobre una célula hepática. Que una proteína G sea estimuladora (proteína Gs) o inhibidora (proteína G¡) depende de la naturaleza de la subunidad alfa. Una vez que la GTP se hidroliza. La toxina del cólera (producida por la bacteria Vibrio cholerae) ejerce su efecto modificando la subunidad Ga e inhibiendo su actividad GTPasa en las células del epitelio intestinal. Se puede demostrar. Las proteínas G heterotriméricas que transmiten señales de receptor a efector también pueden existir en múltiples formas. las moléculas de adenililciclasa permanecen en la modalidad activada. la disociación de la subunidad Ga del receptor modifica la conformación del mismo de modo que pierde su afinidad por el ligando. por ejemplo. Se cree que la subunidad formada por el complejo G^y actúa independientemente de Ga activando otros efectores subsecuentes. 15-11). El mismo estímulo puede activar una proteína G¡ en una célula y una proteína Gs en otra célula. Se supone que diversas combinaciones de subunidades específicas sirven para construir proteínas G que muestran diferentes propiedades en sus reacciones. puede activar adenililciclasa y estimular la abertura de canales de Ca2+. cinco subunidades G^ y siete subunidades Gy diferentes. La pérdida de agua relacionada con esta respuesta inapropiada casi siempre provoca la muerte a causa de deshidratación. lo que provoca la secreción de grandes volúmenes de líquido intestinal al interior de la luz del intestino. 3. pueden usar mecanismos similares para transmitir información a través de la membrana plasmática y desencadenar una gran diversidad de respuestas celulares. Especificidad de las respuestas acopladas a proteína G Es evidente que una gran variedad de agentes. lo que conduce a un estado fisiológico en el cual se pueden producir respuestas por AMPc y Ca2+ activados. En algunos casos cuando menos. Por ejemplo. © 1986 por Annual Reviews Inc. La subunidad Ga disociada tiene su propia actividad catalítica. actúa como GTPasa. En La perspectiva humana de este capítulo se analizan los efectos de ciertas mutaciones en la función de receptores acoplados a proteína G. algunas proteínas G actúan inhibiendo a sus efectores. Bourne. el cual se disocia de su sitio de enlace. fig. y suministrando una vía para transmitir señales adicionales hacia una célula específica. tanto con receptores como con efectores. incluyendo hormonas.

CAPITULO 15 • Señales celulares: comunicación entre ¡as células y su ambiente -Ligando 637 FIGURA 15-11. Ga se vuelve a asociar a G^. muía la producción de AMPc. En el paso 2. Modelo para el cambio de conformación de una proteína G que estimula el intercambio GDP-GTP. la subunidad Gü intercambia GDP por GTP. En el paso 5. se activa una proteína G¡ que inhibe la producción de AMPc. desactivando a Ga. En el paso 6. el enlace del receptor a la subunidad a tic la proteína G afloja la red solidaria de enlaces hidrógeno (círculos amarillos). la subunidad Ga se enlaza a! efector {en este caso. (Según H. copyright 1993. reconstituyendo la proteína G trimérica. Algunas otras vías para transducción de señales pueden ser activadas por receptores acoplados a proteína G. una sustancia que puede desen- GDP o FIGURA 15-12. En las siguientes secciones exploraremos unos pocos ejemplos. p. En el paso 4. y todavía se están descubriendo las respuestas que desencadena. 1993. la adenililciclasa) activando el efector. En este modelo. Mecanismo de activación (o inhibición) mediado por receptor de los efectores a través de proteínas G heterotriméricas. Fosfatidilinositol derivado de segundos mensajeros Cuando el neurotransmisor acetilcolina se enlaza a superficies de una célula de músculo liso que reviste un vaso sanguíneo. Por lo contrario. y el efector cesa su actividad. la actividad GTPasa de Ga hidroliza el GTP enlazado. En el paso 7. 366. la subunidad G(. el ligando se enlaza al receptor alterando su conformación e incrementando su afinidad por la proteína G a la cual se enlaza. En el paso 3. Cuando un antígeno extraño se enlaza a la superficie de una célula cebada. MacmiHan Magazines Limited. la adenílilciclasa produce AMPc. Otros segundos mensajeros El AMPc fue el primer segundo mensajero que se descubrió. 628.) . estimula a la célula a secretar histamina. provocando que el dominio helicoidal (verde) gire alejándose del sitio de enlace del nucleótido guanina y permitiendo el libre intercambio de GDP por GTP. se disocia del complejo G^y. estimula a dicha célula muscular a contraerse estrechando el diámetro del vaso. Bourne. cuando la epinefrina se enlaza a un receptor c-adrenérgico sobre una célula de músculo liso. reimpreso con permiso de Nature vol.R. En el paso 1.

Representación bidimensional de siete receptores transmembrana "compuestos" que muestran los sitios aproximados de varias mutaciones causantes de enfermedades humanas. Aunque este receptor todavía puede enlazarse a la vasopresina en la superficie externa. pero otras (3 y 4) bloquean la capacidad del receptor para estimular el efector. Por consiguiente. el pigmento fotosensible de la retina. sólo participan en la respuesta a esta hormona particular. A diferencia de las células normales de tiroides que secretan hormona tiroidea sólo en respuesta a la estimulación por la hormona hipofisaria TSH. como el propio receptor. sería de esperar que sus efectos se propaguen ampliamente sobre las funciones corporales. Algunos de los componentes en la vía de señalamiento. en tanto que otros componentes de la cadena. 7 en el receptor de LH (hormona luteinizante) y 8 en la rodopsina. 6. hacen sentir su presencia en el cuerpo al enlazarse a receptores que transmiten señales por medio de proteínas G heterotriméricas. . efectos que pueden producir la muerte durante el desarrollo embrionario fetal. el polipéptido es anormalmente corto como resultado de una mutación que introduce un codón para detener la síntesis de polipéptido en el RNAm provocando la terminación prematura de dicha síntesis (pág. sitio 4 en el receptor de vasopresina. Numerosos estudios en lactantes con esta enfermedad indican que se puede originar a partir de anomalías en los receptores de vasopresina. 7 y 8) dan como resultado la estimulación constitutiva del efector. las mutaciones que afectan gravemente la actividad de las proteínas. 2. Una de las mutaciones estudiadas provoca cambio de un aminoácidos situado en la unión entre el tercer segmento transmembrana y la segunda asa intracelular del receptor de siete hélices (sitio 4. Si no se diagnostica oportunamente. algunas enfermedades hereditarias se han atribuido a defectos en receptores de la superficie celular (fig. desarrollo inadecuado e incluso la muerte. 5 y 6 en el receptor de TSH (hormona estimuladora de tiroides). la deshidratación crónica puede producir retraso mental. En los últimos años. PH15-1) o def ectos en sus proteínas G (cuadro PH 15-1). la superficie interna del receptor es incapaz de activar la proteína G y por lo tanto no puede pasar la señal hacia el efector. En la mayor parte de estos casos. Los estudios indican que en el receptor de TSH de estas células hay sustitución NHc Extra celular COOH FIGURA PH 15-1. sitio 3 en el receptor de ACTH.638 CAPITULO 15 • Señales celulares: comunicación entre ias células y su ambiente LA PERSPECTIVA HUMANA Trastornos relacionados con receptores acoplados a proteína G Algunos de los mensajeros químicos más importantes del cuerpo. 5. PH 15-1). como epinefrina. 475). Las mutaciones en los sitios 1 y 2 se observan en el receptor de MSH (hormona estimuladora de melanocítos). fig. Una mutación que provoca prácticamente el efecto opuesto sobre la interacción entre receptor y proteína G causa un tumor tiroideo benigno llamado adenoma. las células de estos adenomas tiroideos secretan grandes cantidades de hormona tiroidea sin ser estimuladas por TSH (se dice que el receptor actúa constitutivamente). hormona adrenocorticotrópica (ACTH) y las gonadotropinas. tal vez participen en las respuestas de células a muchos diferentes estímulos extracelulares. Por lo contrario/ las mutaciones que producen receptores defectuosos causarían trastornos con una gama más estrecha de anomalías. La mayor parte de las mutaciones (números 1. La enfermedad se debe a la incapacidad de las células del riñon para responder a la hormona vasopresina (hormona antidiurética). como la adenilüciclasa. como la adenililciclasa. La diabetes insípida nefrógena congénita (DINC) es una rara enfermedad hereditaria en la cual los lactantes sufren deshidratación grave como resultado de la incapacidad de sus riñones para producir orina concentrada.

las células de la glándula paratiroides no respondieron a los estímulos que normalmente causarían la secreción de hormona paratiroidea. provocando la síntesis prematura de testosterona y pubertad precoz. para distinguirla de una mutación hereditaria que ocurre en todas las células individuales. mutaciones en el sitio 5 o 6). sino también crecimiento y división excesiva de la célula que causa el tumor. Clapham. las células endocrinas de los testículos inician la producción de testosterona en el momento de la pubertad como respuesta a la hormona'hipofisaria LH. PH 15-1. a la temperatura normal del cuerpo. de enfermedad endocrina: pubertad precoz e hipoparatiroidismo. En contraste. lo que indica que la mutación no es hereditaria sino que se originó en alguna célula tiroidea. que se encuentran alojados fuera del centro del cuerpo. La alteración en la secuencia de aminoácidos causó dos efectos en la proteína G de la cual forman parte. inactivo a la proteína G. Como resultado de la mutación. Como resultado. variaciones en la sensibilidad al espectro de luz Deficiencia familiar de glucocorticoides y deficiencia aisiada de glucocorticoides Receptor humano análogo de BoPCARl Receptor humano análogo de BoPCARl (homocigoto) Receptor de tirotropina Receptor de hormona luteinizante (LH) Receptor de vasopresina V2 Receptor de rodopsina Receptor de opsina fusiforme Receptor de hormona adrenocorticotrópica (ACTH) * Según se describe en el texto. una proteína G con G^ actúa para estimular el efector. 109. FUENTE: D. que funcionan a una temperatura de 37°C. p. La mutación que provoca los adenomas tiroideos no se observa en la porción normal de la glándula tiroides del paciente. En el cuadro PH 15-1 se hace notar que las mutaciones en genes que codifican las subunidades de las proteínas G heterotriméricas también pueden conducir a trastornos hereditarios. tienen temperatura menor que los órganos viscerales del cuerpo (33°C en comparación a 37°C). la cual prolifera para dar lugar al tumor. el receptor de TSH activa constitutivamente una proteína G en su superficie interna y envía una señal continua a través de la vía que no sólo provoca secreción excesiva de hormona tiroidea. Como veremos en el capítulo 16. El hecho de que la mayor parte de los órganos del cuerpo funcionan de manera normal sugiere que esta subunidad Ga particular no es esencial en la actividad de la mayor parte de las otras células. Los testículos. las mutaciones somáticas son causa primaria de cáncer humano. . la proteína G mutante permaneció en estado activo. La LH circulante se enlaza a los receptores LH situados en la superficie de las células testiculares. aun en ausencia de un ligando enlazado. A temperaturas por debajo de la temperatura normal del cuerpo. como una célula tiroidea. como se ilustra en un trabajo recientemente publicado acerca de dos pacientes varones afectados de una combinación rara CUADRO PH 15-1. y desencadena la síntesis de AMPc y la producción subsecuente de la hormona sexual masculina. En contraste. 1994. tanto en presencia como en ausencia de un ligando enlazado. Una mutación en una célula del cuerpo. en tanto que una proteína G con una G\ inhibe al efector. vol. Enfermedades humanas vinculadas con la vía de la proteína G Enfermedad Proteína G defectuosa" Osteodistrofia hereditaria de Albright y seudohipoparatiroidismo Síndrome de McCune-Albright Tumores hípofisarios y tiroideos (encogen gsp) Tumores ováricos adrenocorticales {oncogen gip) Pubertad precoz mixta y seudohipoparatiroidismo Enfermedad Receptor de proteína C defectuoso Hipercalcemia hipocalciúrica familiar Hiperparatiroidismo grave neonatal Hipertiroidismo (adenoma tiroideo) Pubertad precoz masculina familiar Diabetes nefrógena insípida vinculada al cromosoma X Retinitis pigmentaria Ceguera a los colores. Se observó que ambos pacientes tienen una sola sustitución de un aminoácido en una de las isoformas Ga. Esta conclusión se comprobó introduciendo el gen mutante en células cultivadas que normalmente carecen de este receptor y demostrando que la síntesis de la proteína mutante y su incorporación a la membrana plasmática conduce a la producción continua de AMPc en células manipuladas genéticamente. 371. En condiciones normales. la mutación en la subunidad Ga de las células de las glándulas paratiroides. reimpreso con permiso de Nature. lo que condujo a la enfermedad hipoparatiroidismo.E. Copyright 1994 por Macmillan Magazines Limited. que se comienza a producir en ese momento. Las células testiculares del paciente portadoras de la mutación de la proteína G fueron estimuladas para sintetizar AMPc en ausencia del ligando LH. sino sólo en el sitio tumoral.CAPITULO 15 • Señales celulares: comunicación entre las células y su ambiente 639 de aminoácidos que afectan la estructura de la tercera asa de la proteína (fig. la proteína G mutante se mostró inactiva. se denomina mutación somática.

640 CAPITULO 15 • Señales celulares: comunicación entre las células y su ambiente cadenar los síntomas de un ataque de alergia. El 1P3 difunde al interior del citoplasma (paso 5) donde se enlaza a un receptor IPj en la membrana del retículo endoplásmico liso (paso 6).4. sino también es precursor de algunas moléculas reguladoras claves cuyas estructuras se muestran en la figura 15-13. y serina y treonina son capaces de fosforilar a una gran variedad de proteínas. Receptor IP3 RE liso o o . que activa la enzima fosfolipasa C fPLC). el metabolismo celular y la activación de transcripción. que también es un canal de Ca2+.5-trífosfato (IP^) y diacilglicerol (DAG) (paso 4). Ambas respuestas. 2 La fosfolipasa C activada por las proteínas G se identifica como PLQ3. una que produce secreción y la otra contracción. La adición de un solo grupo fosfato al inositol del azúcar de PI genera PI 4-fosfato (PIP). Igual que la proteincinasa A (la enzima activada por el AMPc). la proteincinasa C es una cinasa multifuncional.4. Cuando la acetilcolina se enlaza a una célula de músculo liso o un antígeno se enlaza a una célula cebada. Allí activa a un efector. el receptor enlazado al ügando activa una proteína G heterotrimérica (paso 3). En células hepáticas. Ambas formas catalizan la misma reacción pero muestran diferentes propiedades. algunas de las cuales son activadas sólo por segundos mensajeros lípidos.5-trifosfato de inositol (1P3) (paso 4}. la proteincinasa C actúa de manera sinérgica con la proteincinasa A. que fosforila residuos de serina y treonina sobre las proteínas específicas. inositol 1. 15-14). activada por un receptor de tirosincinasa (pág. como el DAG. la activación de la proteincinasa C conduce a la fosforilación de la proteína miogenina. llamado proteincinasa C (fig. células embrionarias que darán lugar a células musculares. la mayor parte de las cuales todavía no son bien comprendidas (cuadro 15-4).5-difosfato (PIPz) (pasos 1 y 2.2 La fosfolipasa C es una enzima que cataliza una reacción para separar PI?2 en dos moléculas. 12-41). ambas cinasas fosforilan la glucógeno sintasa inhibiendo la actividad de esta enzima polimerizadora de glucosa. para distinguirla de una isoforma llamada PLCy. Diacilglicerol (DAG). que se puede fosforilar una segunda vez para formar PI 4. En la siguiente figura se muestra la acción de diacilglicerol. El diacilglicerol (fig. En mioblastos. y por lo tanto impide la diferenciación de las células en fibras musculares. Ligando DAG F1GUKA 15-13. o sea. en tanto que otras requieren la presencia simultánea de iones Ca2+ (de allí la C en el nombre de la enzima) como coactivador. La fosforilación de miogenina inhibe su capacidad para enlazarse a DNA. son desencadenadas por el mismo mensajero celular. Recordemos del capítulo 4 que el fosfatidilinositol (PI) es uno de los componentes menores de la membrana celular (fig. La proteincinasa C tiene varios papeles importantes en el crecimiento y diferenciación celular. La aparente importancia de la proteincinasa C en el control del crecimiento se observa en estudios con un grupo de compuestos potentes de plantas llamados esteres deforbol. una sustancia derivada del compuesto fosfatidilinositol. 15-13) es una molécula lípida que permanece en la membrana plasmática después de ser sintetizada por fosfolipasa C. ambas reacciones desempeñan papeles importantes como segundos mensajeros en las señales celulares. factor de transcripción que desempeña un papel clave en la diferenciación de la célula muscular (fig. Cuando el receptor recibe un estímulo. El enlace de IP^ a su receptor conduce a la liberación de iones calcio dentro del citoplasma (paso 7). Generación de segundos mensajeros como resultado de la desintegración inducida por ligando del íosfatidilinocitol (PI) en la bicapa de lípidos. el cual (igual que la adenililciclasa) se sitúa en la superficie interna de la membrana (fig. 15-13). 4-22). En los pasos 1 y 2 se añaden grupos íosíñto al íosfatidilinocitol (PI) para formar PIPj. fig. 672). que a su vez activa al receptor fosfolipasa C. que cataliza la reacción en la cual PI?2 se separa en diacilglicerol (DAG) y 1. Examinaremos cada uno de estos segundos mensajeros por separado. 15-13). La proteincinasa C es en realidad miembro de una familia de enzimas relacionadas. El fosfatidilinositol no sólo es un componente estructural de la bicapa de lípidos. el receptor enlazado activa una proteína G heterotrimérica (paso 3).

endocitosis. Estas técnicas suministran imágenes espectaculares de los cambios de concentración del calcio citoplásmico libre que ocurre en respuesta a diferentes tipos de estímulo. 15-13). Kikkawa y Y. fig. Ejemplos de respuesta mediada por proteincinasa C Tejido Plaquetas sanguíneas Células cebadas Médula suprarrenal Páncreas Células de la hipófisis Tiroides Testículos Neuronas Músculo liso Hígado Tejido adiposo Respuesta Liberación de serotonina Liberación de histamina Secreción de epinefrina Secreción de insulina Secreción de GH y LH Secreción de calcitonina Síntesis de testosterona Liberación de dopa mina Incremento de la contractilidad Hidrólisis de glucógeno Síntesis de grasa FUENTE: U.CAPITULO 15 • Señales celulares: comunicación entre ¡as células y su ambiente 641 Inactiva Membrana Sustrato Activa FIGURA 15-14.4. Sci. Los iones Ca2+ también se pueden considerar como mensajeros celulares. Se han desarrollado técnicas de imágenes computadorizadas que emplean colorantes fluorescentes que se enlazan a calcio para revelar la concentración de iones libres de calcio en diferentes partes de una célula en distintos momentos. Modelo de la activación de una proteincinasa C (PKC). 15-13) y se enlazan a un receptor IPa específico localizado en la superficie del retículo endoplásmico Uso (paso 6. Cuando se elimina el éster de forbol del medio. Igual es la respuesta de una célula hepática a la hormona vasopresina (la misma hormona con actividad antidiurética en el riñon). puesto que difunden al citoplasma y se enlazan a diferentes moléculas específicas desencadenando respuestas específicas. impidiendo el acceso al verdadero sustrato. también es un canal tetramérico de Ca2+. según se muestra en la figura 15-15.) tran un fenotipo maligno permanente en cultivo de células y son capaces de producir tumores en ratones susceptibles. El incremento de [Ca2+] en el fagocito tal vez refleje su papel en la regulación de los cambios en la actividad del citoesqueleto necesarios para la fagocitosis. Los iones calcio desempeñan un papel clave en una notable variedad de actividades celulares importantes. y un motivo seudosustrato (P) que consta de una parte de la proteína que puede adaptarse sobre el sitio activo. En contraste. Trends in Biochem. (Según L.4. En la parte de arriba se muestra la molécula PKC en el estado inactivo. fig. secreción. Dependiendo del tipo de célula. El enlace de IP3 abre el canal y permite difundir a los iones Ca2+ hacia el citoplasma (paso 7. En la página 281. Ca2+ o ambos.5-trifosfato de inositol (IP3). En el cuadro 15-5 se presenta una lista de algunas respuestas mediadas por TP$. Nishízuka. 1. un estímulo particular puede inducir oscilaciones en la concentración de iones libres de calcio. El 1. Cuando DAG es activado por lípidos. comparte una propiedad importante con estos otros mensajeros citoplásmi- . fig. metabolismo y movimiento celular. tanto la contracción de una célula de músculo liso como la exocitosís de granulos secretorios que contienen histamina en una célula cebada son desencadenados por concentración elevada de calcio. las células recuperan sus propiedades de crecimiento normal. reproducido con permiso de Amiital Review ofCell Biology.V. © 1986 por Annual Revicws Inc.5-trifosfato de inositol (IPs) es un azúcar fosfato. La figura 15-16 muestra el espectacular incremento transitorio de la concentración de iones calcio en ciertas partes de una célula fagocitaria sanguínea cuando se pone en contacto con un objeto en su ambiente y se mueve para engullirlo. 15-13). la molécula sufre un cambio de conformación (abajo) que permite el acceso al sustrato del sitio activo de la enzima. las células manipuladas genéticamente para expresar en forma constitutiva la proteincinasa C mues- CUAURO 1 5-4. una bolsa para enlazar sustrato (S) que constituye el sitio activo. Aunque el ion calcio es muy diferente en estructura a un nucleótido cíclico o un fosfato de inositol y no es una sustancia sintetizada enzimáticamente. que aparecen como oscilaciones de la concentración de calcio libre ert el registro mostrado en la figura 15-15. La vasopresina se-une a su receptor a nivel de la superficie celular y genera una serie de descargas de liberación de Ca2+ mediada por IPs. vol 2. transmisión sináptica. Más acerca del calcio Estos compuestos activan la proteincinasa C en varias células normales cultivadas. producir una onda de liberación de Ca2+ que se puede propagar desde un extremo de la célula al otro. Parker. Su receptor IPs es más que un receptor. En este modelo. 19:73. El efecto de IPs de ordinario es transitorio debido a su rápida inactivación por medio de enzimas. un dominio regulador (R). una pequeña molécula hidrosoluble capaz de difundir con rapidez. la molécula PKC consta de varios dominios. en el cual P se une a S. o desencadenar liberación transitoria localizada de Ca2+ en una parte de la célula. En los dos ejemplos mencionados antes. Las moléculas I?3 formadas en la membrana difunden hacia el interior del citoplasma (paso 5. incluyendo división celular. 1994. se hizo notar que el REL es un sitio de almacenamiento de calcio en varias células. incluyendo un dominio catalítico (C). fertilización. Dekkery P.J. lo que provoca pérdida de control del crecimiento y comportamiento transitorio como células malignas.

En el cuadro 15-6 se muestran algunos objetivos específicos del [Ca2+] elevado. que van desde un espermatozoide fertilizante hasta un impulso nervioso que llega a la célula muscular. típicamente alrededor de 10~7 M. 1986. Macmiílan Magazines Limited. La exposición de la célula a vasopresina provoca varias ondas de calcio libre a intervalos periódicos.4 nM de vasopresina. A una célula hepática se le inyectó aecuorina. © 1987 por Annual Reviews Inc.) eos. La concentración citoplásmica de calcio se mantiene muy baja debido a la relativa impermeabilidad de las membranas a este ion y gracias a la presencia en la membrana plasmática y las membranas celulares de un sistema de transporte que bombea calcio hacia afuera del citoplasma. 628. Esta célula previamente se había expuesto a 0. reproducido con permiso de Annua! Rcview of Biochemistry.6 segundos. Copyright 1986. La intensidad de la luminiscencia es proporcional a la concentración de iones calcio libres. a saber. inducen su respuesta en una célula específica. Woods. 56. agregación Modulación de la respuesta a la luz Movilización de calcio. K. puede ser CUADRO 15-5. Cell Biol. (Según NM. (Según Takashi Hishikawa y cois. Demostración experimental de cambios en la concentración de calcio libre en respuesta a la estimulación hormonal.) (e) 5¡jin FIGURA 15-16.2 nM de vasopresina y no hubo respuesta. p. con permiso de Rockefeller University Press. vol.4 nM de vasopresina (a) 600 — 400 (C) 200 10 20 30 Tiempo (minutos) FIGURA 15-15. Muchos estímulos diferentes. despolarización de la membrana Despolarización de la membrana. y b) la correspondiente imagen con fluorescencia revela la [Ca2+] en diferentes regiones de la célula. como el REL o las mitocondrias.642 CAPITULO 15 • Señales celulares: comunicación entre las células y su ambiente 0. ]. Resumen de respuestas celulares producidas por adición de IPs a células permeabilizadas o íntegras Tipo de célula Músculo liso vascular Músculo liso del estómago Músculo esquelético Moho del fango Plaquetas sanguíneas Bastoncillos de salamandra Gocitos de Xenopus Huevos de erizo de mar Glándula lagrimal Respuesta Contracción Contracción Contracción Formación de GMP cíclico. la [Ca2+] retorna posteriormente a un nivel cercano a la basal (/) y las esférulas se mueven al interior de las células. Luego de 66. pero la [Ca2+] se eleva hasta un valor máximo (d). Demostración experimental de los cambios transitorios en la concentración de calcio intracelular en un macrófago durante la fagocitosis de una sola esterilla recubierta de IgG.S. 115:62. más de 10 000 veces mayor. Cuthbertson y P. Esta respuesta se obtuvo en una célula expuesta a 0. Cobboid. a) Se muestra un macrófago en una imagen de campo brillante luego de enlazarse a una sola esférula. val 366. Berridge.H. En contraste. pero se conocen diversos factores que abren transitoriamente los canales de calcio en el REL o en la membrana plasmática. . la esférula enlazada permanece en el mismo sitio y el mismo foco (c). la concentración de Ca2+~ se mantiene a niveles muy bajos dentro del citoplasma. que se encuentra en el extremo inferior del límite fisiológico. En circunstancias normales. 1991. La flecha indica el sitio de la esférula. proteína extraída de ciertas medusas que muestran luminiscencia cuando se enlazan a iones calcio. la concentración de este ion en el espacio extracelular o entre ciertos organelos citoplásmicos. polimerización de actina Cambio de forma. reacción cortical Incremento de la corriente de potasio Adaptado de MJ. Algunas de las respuestas inducidas por calcio son mediadas por el segundo mensajero IPs. su concentración en el citoplasma es determinada por acontecimientos que ocurren dentro de una membrana. Reimpreso con permiso de Nature. Los macrófagos fueron cargados previamente con un colorante fluorescente sensible a calcio y luego incubados con las esférulas recubiertas de IgG. lo que provoca un incremento súbito de la concentración de Ca2+ er el citoplasma.

Copyright 1993. 317.CAPITULO 15 • Señales celulares: comunicación entre las células y su ambiente CUADRO 15-6. Liberación de calcio inducida por calcio.) Canal Ca+ controlado por voltaje Receptor de rianodina o o Bomba de Ca2+ . Clapham. adenilciclasa I) Activador de guanililciclasa Fosfatasa Proteasa Generador de IPs y diacilglicerol Proteína formadora de haces de actina ¿Implicada en endocitosis y exocitosis. FIGURA 15-17. Berridge. 15-17). Macmillan Magazines Limited. denominado liberación de calcio inducida por calcio. vol. con permiso de Cell Press. 361. Los receptores de rianodina se observan principalmente en células excitables y son mejor estudiados en células de músculo esquelético. Este fenómeno.Entre los agentes que pueden abrir los canales de Ca2+ de rianodina se encuentra el propio calcio. lo que provoca la liberación de Ca2+ hacia el citoplasma (fig. Según el tipo de célula. El flujo hacia adentro de una cantidad limitada de calcio a través de los canales en la membrana plasmática induce la abertura de los receptores de rianodina en el REL. a los otros se les denomina receptores de rianodina porque son sensibles al alcaloide vegetal rianodina. retinina. Los receptores lP-¡ pertenecen a uno de dos tipos principales de canales intracelulares para Ca2+. 1993. puede generar con rapidez una onda transitoria de iones calcio que se propaga a través del citoplasma. una variedad de agentes puede abrir los receptores de rianodina. provocando la liberación del calcio almacenado (paso 3). donde se encargan de la liberación de Ca2+ del retículo sarcoplásmico luego de la llegada de un potencial de acción a lo largo del túbulo T (pág. pero al parecer no por IPs. Ejemplos de proteínas de mamífero desencadenadas por Ca2+ Proteína Función de ¡a proteína 643 Troponina C Calmodulina Calretinina. CaM cinasa I!. CeU.E. Los iones calcio se enlazan al receptor de rianodina en la membrana de! REL (paso 2). 365). vicinina Calcineurina B Calpain PLC específica de inositol fosfolípido cr-Actinina Anexina Fosfolipasa A2 Proteincinasa C Gelsolina Receptor I?3 Receptor de rianodina Intercambiador de Na+Ca 2+ Ca2+ ATPasa Antiportadores de Ca2+ Caldesmon Vilina Arrestina Calsecuestrina Modulador de la contracción muscular Modulador ubicuo de proteincinasas y otras enzimas (MLCK. 1995. p. reimpreso con permiso de Nature. Un cambio del voltaje de la membrana provoca la abertura de los canales de calcio gobernados por voltaje en la membrana plasmática. la cual ocurre en células excitables como las del músculo cardiaco. (Según MJ. A continuación los iones calcio se liberan del citoplasma por acción de una bomba de Ca2+ localizada en la membrana del REL (paso 4). 80:260. lo que permite la entrada de una pequeña cantidad de Ca2+ (paso 1). inhibición de PLA^ canal iónico? Productor de ácido araquidónico Proteincinasa ubicua Proteína seccionadora de actina Efector de liberación de Ca2+ intracelular Efector de liberación de Ca2+ intracelular Efector del intercambio de Ca2+ para Na2+ a través de la membrana plasmática Bombeo de Ca2+ a través de las membranas Intercambiador de Ca2+ para iones monovalentes Regulador de la contracción muscular Organizador de actina Finalizador de la respuesta fotorreceptora Amortiguador Ca2+ Adaptado de D.

animales y microorganismos eucaríotas. después de la fertilización y es indicada por el contacto del espermatozoide con la membrana plasmática del óvulo (fig. cambios en la permeabilidad iónica de membranas. 15-20. entre ellos a proteincinasas dependientes de calcio. donde produce secreción de la hormona insulina en respuesta a la elevación de la concentración de glucosa en sangre. 583) que impulsan al huevo fertilizado hacia su primera división mitótica. A diferencia de los nucleótidos cíclicos. incluyendo células beta pancreáticas. el enlace de uno o más iones Ca2+ modifica la conformación de la proteína incrementando su afinidad por muchas otras proteínas.644 CAPITULO 15 • Señales celulares: comunicación entre las células y su ambiente La elevación de la concentración del ion calcio es transitoria porque los iones rápidamente son bombeados hacia afuera del citoplasma y regresan al REL o al exterior de la célula en el espacio extracelular. a) contiene cuatro sitios de enlace para calcio. a). la concentración elevada de calcio puede producir activación o inhibición de varias enzimas y sistemas de transporte. figura 15-19. Según la célula. La calmodulina se encuentra en todas las plantas. fusión de membranas y alteraciones en la función contráctil del citoesqueleto. que a su vez despiertan la respuesta celular. incluyendo activación de cinasas dependiente de ciclinas (pág. Se ha considerado al ADPRc como un segundo mensajero que abre los canales de Ca2+ de rianodina en una gran variedad de células. El color azul indica concentración baja [Ca2+] libre. La liberación de Caz+ se propaga desde el punto de entrada del espermatozoide (flecha) a través de todo el óvulo. Stricker. En estado iónico libre. o incluso al sistema de transporte de calcio de la membrana plasmática. Sólo una de estas proteínas que se enlazan a calcio está extensamente distribuida. 15-19. un pequeño polipéptido descubierto en tejido cerebral a finales de los años 1960. la concentración elevada de calcio activa al sistema encargado de desembarazar a la célula de cantidades excesivas de este ion. constituyendo así un mecanismo autorregulador para conservar baja la concentración de calcio intracelular. es la calmodulina. Cada molécula de calmodulina (fig. (Cortesía de Stephen A. 15-18). En este último caso. b) con activación completa del óvulo. Se inyectó un colorante fluorescente sensible a calcio en el óvulo no fertilizado y en el óvulo fertilizado.) 15 nm . Se cree que esta onda de calcio se inicia por la síntesis en la superficie interna de la membrana celular de un segundo mensajero denominado ADPRc (ribosa de difosfato de adenosina cíclica. Las moléculas ADPRc se difunden al citoplasma donde provocan la abertura de los canales de Ca2+ receptores de rianodina en la membrana del retículo endoplásmico Uso. una nucleótido fosfodiesterasa cíclica. cuya acción invariablemente es mediada por estimulación de una pro- teincinasa. Una de las ondas más espectaculares de Ca2+ ocurre antes del primer minuto. sino que se enlaza a un pequeño número de proteínas que se enlazan a calcio. En la figura 15-20. y prácticamente tiene la misma secuencia de aminoácidos en toda la gama de eucariotes. se muestra la distribución de calmodulina en el ojo compuesto de la mosca de la fruta. b. el calcio de ordinario no actúa sobre estos diferentes efectores. Según la célula. La inyección de cantidades muy pequeñas de ADPRc a un huevo no fertilizado de erizo de mar puede desencadenar la liberación de Ca2+ de los almacenes de la membrana (fig. aproximadamente. La súbita elevación de la concentración de calcio en el citoplasma es un importante factor desencadenante para iniciar procesos del desarrollo embrionario temprano. el calcio puede afectar a diversos tipos de efectores celulares. Onda de calcio en el óvulo de una estrella de mar inducida por un espermatozoide fertilizante. FIGURA 15-18. y se tomaron fotografías cada cinco segundos con un microscopio confocal. en tanto que el color rojo indica concentración elevada de calcio. el complejo calcio-calmodulina puede unirse a una proteincinasa.

(b: Reimpreso con permiso de Antony Galione. 1993. como el ácido abscísico. a) Diagrama de la calmodulina en forma de listón con cuatro iones calcio enlazados. El cambio de color dentro del huevo refleja elevación de la concentración de calcio intracelular desde 100 nM (azul y verde) hasta 900 nM (rojo y amarillo) luego de la inyección. La ADP-ribosa cíclica tal vez sea un segundo mensajero para despertar la respuesta de fertilización. La concentración de calcio citoplásmico cambia de manera espectacular en ciertas células vegetales en respuesta a varios estímulos. cortesía de Craig Montell. (b: Reimpreso con permiso de feffrey A.) Regulación de la concentración de calcio en células vegetales Se cree que los iones calcio (que actúan junto con la calmodulina) son segundos mensajeros importantes para desen- C terminal cadenar respuestas en células vegetales. Como se analiza en la página 228. en tanto que las otras dos ocupan las porciones superior o inferior de una ommatidia. sólo siete células fotorreceptoras están presentes en cualquier sección transversal determinada (izquierda). copyright 1993 American Association for the Aduancement of Science. 1993. igual que en las células animales. y se debe controjar su diámetro de abertura para evitar la desecación. La concentración de Ca2+ en el citoplasma es regulada por la permeabilidad de los canales de Ca2+ localizados en la membrana plasmática y también por la disponibilidad del Ca2+ almacenado en la vacuola. El papel de la concentración cambiante de Ca2+ citoplásmico se puede observar más claramente en las células de defensa. Science 259:325. cuya función es regular el diámetro de los poros microscópicos (estomas) a través de los cuales el CÓ2 atmosférico alcanza las células de las hojas que contienen cloroplastos (fig. La distribución espacial de la proteína calmodulina enlazada a calcio es revelada por inmunofluorescencia (derecha) y se observa que ocupa una parte de cada uno de los fotorreceptores. b) El ojo compuesto de Drosophila consta de cientos de fotounidades individuales llamadas ommatidia. Portcr y cois. 15-21.* f -» ' -/^ - . a) Formación de ADPRc a partir de NAD + . Science 262:1039.-- •-1* FIGURA 15-2D Calmodulina. Seis de las ocho células fotorreceptoras se extienden a toda la profundidad de la ommatidia. copyright 1993 American Association for the Advancement of Science. los estomas son la vía principal para perder agua. . Se cree que la membrana (tonoplasto) que rodea la vacuola posee canales de Ca2+ que. Cada ommatidia contiene ocho células fotorreceptoras. a)..) . por consiguiente. presión. gravedad y la concentración de hormonas de la planta. son abiertos por moléculas de trifosfato de inositol (IPs) producidas por una fosfolipasa C enlazada a la membrana plasmática. b) Este huevo de erizo de mar fue cargado previamente con colorante sensible a calcio y luego se le aplicó una microinyección de una solución de ADPRc. incluyendo cambios de la iluminación.CAPITULO 15 • Señales celulares: comunicación entre las células \j su ambiente 645 ADP-ribosil cJclasa p HO NAD OH w HO OH (a) ADP-ríbosa cíclica (b) FIGURA 15-19.

La hormona insulina actúa sobre células hepáticas y musculares para iniciar una serie de reacciones opuestas en las cuales la glucosa se elimina del torrente sanguíneo y se polimeriza para formar glucógeno. El flujo hacia adentro de Ca2+ desencadena la liberación de Ca2+ adicional procedente de los almacenes intracelulares que actúan para cerrar los canales de ingreso de K+ en la membrana plasmática. (a: Jeremy Burgess/Photo Researchers. síntesis de proteínas. La insulina actúa por medio de una vía de señales diferente en muchos aspectos de la empleada por glucagon y epinefrina. también es una enzima: una proteincinasa de . Mecanismo de acción de la insulina! señales por un RTK Las células capaces de responder a la insulina poseen un receptor para insulina en su superficie. lo que conduce a un descenso de la concentración interna del soluto y la pérdida de agua por osmosis (paso 4). provocando que sobresalgan hacia afuera. como temperaturas altas y escasa humedad. cada uno flanqueado por un par de células guardián. La subsecuente elevación de [Ca2+] intracelular provoca el cierre de los canales de flujo hacia adentro de K+ (paso 3a) y la abertura de Jos canales de flujo hacia afuera de K + (paso 3b). Los estomas se conservan abiertos en tanto la presión por turgencia se mantenga elevada entre las células guardianes. en tanto que abre los canales de salida de K + . El mecanismo mediante el cual la insulina estimula estas diferentes respuestas ha eludido los esfuerzos de los investigadores durante muchos años. b) Uno de los factores que controla el tamaño del poro de los estomas es la hormona ácido abscísico (ABA). Pero en el último decenio se hicieron grandes avances para aclarar el mecanismo mediante el cual interactúa la insulina con la superficie externa de células específicas e indica su presencia a varios efectores dentro de la célula. Papel del calcio como segundo mensajero en el cierre de las células guardianes. El receptor para insulina es algo más que una simple proteína que se enlaza a un ligando. que desencadena la liberación de Ca2+ de los almacenes internos (paso 2). Estos cambios inducen flujo neto hacia afuera de iones potasio y disminución de la presión de líquido (turgencia) dentro de la célula. así como del crecimiento y proliferación de las células. estimulan la liberación de ácido abscísico. a) Fotografía de los poros estomáquicos.0 Membrana plasmática ABA \l de flujo Canal de flujo hacia adentro de K+ (cerrado) « © hacia afuera de K+ (abierto) Tonoplasto Vacuola FIGURA 15-21. dos hormonas que actúan para poner la glucosa a disponibilidad de los tejidos. los canales de ion calcio en la membrana plasmática se abren. que actúa sobre las células protectoras para incrementar la permeabilidad de los canales de calcio en la membrana plasmática (fig. Cuando la concentración de ABA se eleva. Además de sus efectos sobre la captación y metabolismo de la glucosa. lo que a su vez disminuye la abertura de los estomas.) Condiciones adversas. la insulina también es un potente estimulante de la síntesis de lípidos (en las células adiposas).646 CAPITULO 15 • Señaks celulares: comunicación entre las células y su ambiente Célula guardián A HjO H?0 Cierre del poro del estoma HjO H. como se observa aquí. 15-21. permitiendo el ingreso de Ca2+ (paso 1). b). 15-3 Receptor de tirosincinasas (RTK): un segundo tipo principal de sistemas de señales Iniciamos el análisis de la transducción de señales con el mecanismo de acción de glucagon y epinefrina.

Como resultado. En las vías de la proteína G. que es la de enlazar y activar a varios efectores "subsecuentes". la cual entonces añade fosfatos a: 1) residuos específicos de tirosina de la otra subunidad /? del complejo. en tanto que en la vía del RTK. Al parecer. Se han identificado más de 50 diferentes RTK y su número aumenta con rapidez. así como la adenüüciclasa o la fosf olipasa C son efectores para los receptores acoplados a proteína G. A diferencia de los receptores acoplados a proteína G. cada monómero de RTK atraviesa la membrana una sola vez. lo que denota que este dominio que se enlaza a fosfotirosina fue identificado por primera vez en la proteína codificada por el oncogen src. El receptor de tirosincinasa no fosforita toda la tirosina en una proteína del sustrato. que tienen siete segmentos transmembrana.CAPITULO 15 • Señales celulares: comunicación entre las células y su ambiente 647 tirosina. dependiendo de la proteína particular que contenga el SH2. la función de la tirosincinasa del receptor es inactiva. la fosforilación de la tirosina ejecuta una función similar. hay gran paralelismo entre la proteína G y las vías de señalamiento del receptor de tirosincinasa. 15-22). El receptor de insulina es una proteína tetramérica compuesta de dos cadenas de polipéptido a y dos cadenas de polipéptido/?. Cuando la insulina se enlaza a la subunidad a se produce un cambio de conformación en las subunidades j$. Las cadenas a residen en la superficie extracelular de la membrana y contienen los sitios para enlazar insulina. 15-24). se le conoce como receptor de tirosincinasa (o RTK). Puesto que el receptor para insulina tiene esta actividad enzimática. La tirosincinasa forma parte de una superfamilia distinta de la cinasas de serina y treonina que operan en la reacción en cascada analizada anteriormente en relación con la movilización de glucosa (fig. cada una de las cuales puede activar una vía separada para transmisión de señales (fig. El enlace a un motivo de fosfotirosina puede tener efectos diferentes. enzima que añade el grupo fosfato a residuos de tirosina específicos de otras proteínas. Respuesta del receptor de insulina para enlace de un ligando. 3 Dominio SH2 es un acrónimo de dominio Src de homología. Las proteínas con dominios SH2 se pueden considerar los efectores de RTK. El receptor de insulina es un tetrámero que consta de dos subunidades a y dos ¡5. Aunque operan por mecanismos diferentes. o causar la translocación de la proteína a una parte diferente de la célula. sólo fosforila a las que están presentes en cierta secuencia de aminoácidos conocidas como " motivos de f osf otirosina". En ausencia de insulina enlazada. aunque un pequeño número de tirosincinasas poseen una doble especificidad y también son capaces de fosforilar residuos de serina y treonina (un ejemplo es la PAMKK de la figura 15-27). Sólo después que una SRI ha sido fosforilada por el receptor de insulina puede actuar como "imán" para enlazar proteínas que posean dominios SH2 con estructura apropiada. 15-22). más bien que en el control del metabolismo intermediario. El enlace de insulina cambia la conformación del receptor activando su tirosincinasa. Retornemos a la respuesta de insulina. Sitio de enjace para insulina FIGURA 15-22. llamados dominios SH2. Las tirosincinasas participan principalmente en el control del crecimiento y la diferenciación celular. y 2) una docena o más de residuos de tirosina localizados estratégicamente en cuando menos dos sustratos de proteína llamados sustratos receptores de insulina (SRI) (fig. cambiar la conformación de la misma provocando su enlace a otras proteínas. las proteínas SRI fosforiladas sirven como "atracaderos" para numerosas proteínas con dominios SH2.3 Los dominios SH2 presentan afinidad escasa o ausente para proteínas cuyos residuos de tirosina no estén fosforilados. los cambios de conformación de una proteína G constituyen el interruptor molecular que transmite la señal al interior de la célula. Para comprender cómo ocurre esto se necesita un paréntesis en este momento. 15-23). con sitios de elevada afinidad para enlazarse a "motivos de fosfotirosína" (fig. La interacción puede poner en marcha una actividad enzimática de la proteína. lo que a su vez cataliza la transferencia de grupos fosfato hacia residuos de tirosina localizados en el dominio citopiásmico del receptor y también a varios sustratos del receptor de insulina (SRI). 15-6). el mismo ligando puede desencadenar respuestas muy diferentes en diversas células específicas. Puesto que diferentes células pueden contener distintos efectores con dominios SH2 similares. Estudios recientes han revelado que varias proteínas implicadas en las señales celulares contienen dominios. reacción llamada autofosforilación. que activa la acción de tirosincinasa de las subunidades /J. los SRI fosforüados sólo tienen una función. Una vez activado el receptor de insulina. el mensaje de que se ha enlazado insulina a la . en tanto que las cadenas/í atraviesan la membrana y transmiten la señal a través de la misma hasta su superficie interna (fig.

4. 1993. y se ha demostrado que son parte de la vía mediante la cual la insulina puede estimular el crecimiento y la proliferación celulares. todas analizadas en el capítulo.5>-P3 Señal Señal \ Señal superficie de la célula puede propagarse hasta el interior celular a lo largo de varias vías independientes. El heptapéptido que contiene fosfotirosina (Pro-Asn-pTirGlu-GIu-Ile-Pro) se muestra como un modelo de espacio lleno cuyas cadenas laterales se presentan en color verde y ?1 esqueleto en color amarillo. proteincinasa C y Ras. sirven como precursores para algunos mensajeros celulares que contienen inositol con diversas funciones en las células. incluyendo. Papel de los SRI fosforilados de tirosina para activar varias vías de emisión de señales. por ejemplo. interferones (INF) e interleucinas (IL). cortesía de John Kuriyan. PI(3. Cell 72:783. factores de crecimiento de origen sanguíneo.4)-P2. 147). Entre estos agentes. Papel del RTK en otras actividades celulares Una gran variedad de agentes extracelulares interactúan como con los RTK sobre la superficie de células específicas y regulan diversas funciones. PI(4.5-trifosfato PI (fig. y supervivencia de la célula. captación de partículas extrañas por fagocitosis. De mayor importancia es que la concentración de estos PI fosforilados se relaciona estrechamente con los cambios en el estado de crecimiento de las células específicas.) PK41-P. creando una interacción firmemente adaptada. 15-24). como el factor de crecimiento epidérmico (FCE). El residuo de tirosina fosforilado y el residuo de isoleucina (+3) se proyectan dentro de bolsas sobre la superficie del dominio SH2.4. otra el movimiento de transportadores de glucosa hacia la membrana celular donde pueden introducir moléculas adicionales de glucosa (pág. . Los productos de la enzima. El grupo fosfato se muestra en color blanco.. con permiso de Cell Press. el factor de crecimiento derivado de plaquetas (FCDP) y el factor de crecimiento de fibroblastos (FCF). Así. Se sabe que la fosforilación de SRI por el receptor activado de insulina activa las vías PI(3)K. Uno de los efectores mejor estudiados con un dominio SH2 que se sabe se enlaza a SRI fosforilado es la enzima fosfatidilinositol 3-hidroxicinasa [o PI(3) K]. En la siguiente sección hablaremos aún más de las vías para estimular el crecimiento. Interacción entre un dominio SH2 de una proteína y un péptido que contiene un residuo de f osf otirosina. FIGURA 15-2J. incluyendo crecimiento y proliferación celulares.5)-P2 PI(3. que incluyen 3. y las atocinas. curso de la diferenciación celular. los mejor estudiados son hormonas como la insulina y la hormona del crecimiento. otra puede activar factores de transcripción encargados de expresar un conjunto de genes específicos de insulina. pero sólo cuando el residuo de tirosina clave está fosforilado. y aun otra vía más puede conducir a la activación de la síntesis de proteínas (pág. 651). (Según Gabriel Wakstnan y cois.648 CAPITULO 15 • Señales celulares: comunicación entre las células y su ambiente Señal Señal Fosfato FIGURA 15-23.4-dífosfato PI y 3. una vía puede estimular la síntesis de DNA y la división celular. que son agentes secretados por un tipo de célula inmunológica que induce una respuesta en otro tipo de célula inmunológica. La PI(3)K cataliza una reacción en la cual se añade un grupo fosfato a la posición 3' del anillo de azúcar del fosfatidilinositol (PI). Otras vías menos bien definidas también son activadas por sustratos receptores de insulina. Todos estos agentes actúan por vías para transducción de señales que se inician con la activación de un receptor de tirosincinasa. Se muestra el dominio SH2 de un corte con la superficie accesible representada por puntos rojos y el esqueleto del polipéptido como un listón de color púrpura.

Importancia de la proteína Ras La proteína Ras se descubrió originalmente como un oncogen viral. En el estado no activado los receptores están presentes en la membrana como monómeros. En su papel mejor estudiado. 15-25). Ras muestra ciclos entre una forma inactiva enlazada a GDP y una forma activa enlazada a GTP. Como otras proteínas G. y sólo en los últimos años se ha logrado este objetivo. Se cree que Ras participa en varias vías diferentes para transmisión de señales. Ras es una pequeña proteína G monómera que reside en la superficie interna de la membrana plasmática. donde desempeña un papel clave en varias vías internas para transmisión de señales.CAPITULO 15 • Señales celulares: comunicación entre las células y su ambiente 649 A diferencia del receptor de insulina descrito antes. igual que otros oncogenes. Estudios subsecuentes han demostrado que una versión alterada del gen ras se encuentra en 30 a 40% de todos los tumores humanos. lo que sugiere que las alteraciones en este gen causan en la célula la pérdida de control del crecimiento normal. activados como consecuencia de su interacción con el receptor.4 Las mutaciones en el gen ras que conducen a la formación del tumor generalmente son aquellas que evitan que la proteína hidrolice la GTP enlazada para retornar a la forma GDP. Se han descubierto otras versiones. Ras es un elemento clave dentro de una vía que se extiende a través de la célula desde la superficie externa de la membrana plasmática hasta el material genético que reside en el núcleo. la versión mutante de Ras permanece en la posición "activada". un gen presente en ciertos virus tumorales que es capaz de malignizar células normales. Dada la importancia de este gen en el desarrollo del cáncer humano.o Señal de transmisión Domini SH2 ommio SH2 FIGURA 15-2. añadiendo grupos fosfato al dominio citoplásmico del receptor. que desempeñan un papel importante para concluir la respuesta. con permiso de Cell Press. Ras tiene actividad GTPasa intrínseca que hidroliza la GTP enlazada para formar GDP enlazada. Schlessinger y A. Neuron 9:384. se notó que esta versión mutada del gen ras transforma las células en células tumorales malignas. o sea. En su forma activa Ras estimula efectores situados hacia adelante en la vía de transmisión de señales. . los monómeros interactúan entre sí para formar dímeros (fig. la mayor parte de los RTK se presentan como monómeros en una célula no estimulada. mutantes de Ras que previenen el enlace de GTP y por lo tanto impiden la división celular. La fosforilación de grupos RTK pone en movimiento una cadena de reacciones que recuerda la reac- ción en cascada descrita en relación con la respuesta de una célula hepática al enlace de glucagon o de epinefrina. actuando quizá como uno de los puntos focales a partir del cual irradian varias vías (fig. 1992. Los hecho?.) 4 La actividad GTPasa intrínseca de Ras es relativamente débil comparada con la de la subunidad a de las proteínas G heterotriméricas analizadas anteriormente. Cuando se introdujo en ciertas células cultivadas. Un elemento clave de muchas reacciones RTK en cascada es la proteína Ras. Sólo después que un ligando se une al RTK. se -Ligandt Monómeros inactivos Dímeros activos Trans autofosforilación . Como resultado. La dimerización de los polipéptidos RTK activa su función de tirosincinasa y entonces una subunidad del dímero fosforila algunos residuos de tirosina situados en el dominio citoplásmico de la otra subunidad del dímero. Ulrich. 15-31). Igual que otras proteínas G. gran número de investigadores han enfocado su atención a dilucidar el mecanismo de operación del producto del gen ras. Investigaciones subsecuentes demostraron que. A principios del decenio de 1980 se observó que el DNA extraído de varios tumores humanos contenía una versión mutante de ras. ras siempre está presente como parte del genoma normal de animales y del hombre. El enlace del ligando conduce a la dimerización del receptor y activación de su actividad cinasa. la actividad GTPasa de Ras es estimulada por algunas proteínas activadoras de GTPasa (PAG). En la célula. Los residuos de fosfotirosina recién formados del receptor sirven como sitios de enlace para proteínas específicas que contienen dominios SH2. actuado así como interruptor que desactiva la proteína.i Pasos en la activación generalizada de un receptor de tirosincinasa (RTK). (Según J. enviando un mensaje continuo hacia adelante a lo largo de la vía de transmisión de señales que mantienen a la célula en la modalidad proliferativa.

porque son activados por señales provenientes de factores de crecimiento presentes en el suero. 7 En realidad. y quizá la única. en la membrana plasmática (fig. el núcleo no es el único objetivo de la cascada de proteincinasas activadas por mitógeno. Por ejemplo. que es reemplazada por GTP. En tanto PHAS-I permanezca enlazado al factor de inicio. dicho factor no puede realizar su papel en la síntesis de proteínas. 5 Grb2 es un acrónimo en inglés para receptor de factor de crecimiento que se enlaza a proteina. cambiando su conformación para desprenderlo de eFÍ4E. la respuesta al estrés osmótico y la respuesta a feromonas de apareamiento.7 La última proteincinasa en la cascada (cPAM) entra al núcleo y fosforila factores de transcripción específicos. Una vez localizada en la membrana plasmática. La. c). porque es una cinasa activada por factores de crecimiento que estimulan la mitosis {o sea. pero incluso más complicada (fig. En estado activado. Las células pueden tener varias vías cPAM distintas que constan de variantes en los diferentes elementos que constituyen la cascada. i?). Receptores inactivos Ras inactivo Activación n del receptor W En breve. al dominio extracelular de su respectivo receptor (corno en la figura 15-25). localizando así a esta proteína en la membrana plasmática donde desencadena la cascada cPAM detallada en la siguiente figura. cascada de proteincinasa activada por mitogaño En las figuras 15-26 y 15-27 se muestra la secuencia de sucesos que ocurren en la vía Ras para transmitir señales luego del enlace del factor de crecimiento al receptor de tirosincinasa. V) El enlace de un ligando desencadena la dimerización del receptor. 15-28). 15-6). Algunos receptores diferentes. como FCE o FCDP. y por lo tanto es inactivo. La función primaria. Al parecer. la proteína Sos se enlaza a Ras. que finalmente conduce a! inicio de la síntesis de DNA y después a la división celular. Cuando un ligando se enlaza a RTK y recluta a Grb2-Sos en la superficie interna de la membrana. . Raf se convierte en una proteincinasa activa que inicia una cadena ordenada de reacciones de fosforilación denominada cascada de proteincinasa activada por mitógeno (cPAM). que se denominan PRM y que en inglés también aparecen como MAP. Los residuos de fosfotirosina recién formados actúan como sitios para el enlace de Grb2-Sos. Estos factores de transcripción se enlazan a sitios sobre el DNA que contiene secuencias de nucleótidos conocidas como elementos séricos de respuesta (ESR). 472). 15-26. los receptores se presentan como monómeros y Ras se combina con GDP. La cascada cPAM es similar a la de reacciones desencadenadas por AMPc durante la movilización de la glucosa (ñg. que inducen la sustitución de GTP por GDP sobre Ras. que se enlaza a la superficie interna de la membrana junto con otra proteína denominada Sos (fig. activando de esta manera a Ras (fig. mitógenos). a) En el estado inactivo. que a su vez permite al factor de inicio rea- FIGURA 15-26. Ras permanece enlazada a GDP. y Sos corresponde a son of sevenless. actúan como se indica en esta figura. llamada Raf. causando la pérdida de su GDP. de Ras-GTP es reclutar otra proteína. 15-26.650 CAPITULO 15 • Señales celulares: comunicación entre las células y su ambiente inician con el enlace de varios factores de crecimiento. En estado no fosforilado. el cuadro es mucho más complejo de lo que se indica. 6 cPAM (en inglés MAP kinase) es un acrónimo para proteincinasa activada por mitógeno. a). En la célula no estimulada.6 detallada en la figura 15-27. donde sevenless es un gen identificado en Drosophila que participa en la diferenciación de fotorreceptores. las células de levadura tienen cuando menos tres distintas vías cPAM que controlan la construcción de la pared celular. las fosfotirosinas generadas en el dominio citoplásmico del RTK por autofosforilación actúan como sitios de enlace para una proteína SH2 específica llamada Grb2. cPAM añade un fosfato a PHAS-I. lo que conduce a la~ autofosforilación de los dominios citoplásmicos del dímero receptor. No debe confundirse con las cinasas que fosforilan proteínas relacionadas con microtúbulos. 15-26. Varios de los genes expresados codifican proteínas que se cree que participan en la activación del ciclo celular. Estudios recientes indican que otro objetivo es una proteína citoplásmica denominada PHAS-I (fig.5 En este punto es donde Ras entra en la descripción. c) El Gtp-Ras activado actúa como sitio de enlace para Raf. PHAS-I al parecer se enlaza a uno de los factores clave de inicio (eFI4E) requerido en células eucariotas para permitir que el ribosoma se fije al RNAm e inicie la traducción (pág. Etapas en la activación de Ras por RTK. 15-29). incluyendo los que se enlazan al factor de crecimiento epidérmico (FCE) y el factor de crecimiento derivado de plaquetas (FCDP).

Esto incluye Ras. también se identifican entre las diferentes docenas de genes conocidos como oncogenes. Este complejo activado provoca el intercambio GTP-GDP de Ras (4). La fosforilación de los factores de transcripción incrementa su afinidad por sitios reguladores sobre el DNA. De todos los oncogenes. Los genes de varios RTK situados al principio de la vía. ej. Raf y algunos factores de transcripción activados al final de la vía (p. PAMKK es una cinasa de doble especificidad.K. 3ci. activando por lo tanto su función cinasa (6). Ras parece desempeñar el papel más importante en el desarrollo del cáncer humano. Esta predicción se ha confirmado repetidas veces. Como su nombre implica. Como se analiza en el siguiente capítulo. A partir de estos datos parecería que la cascada cPAM desempeña un papel clave en la regulación de la transcripción y la traducción en la célula específica. en las levaduras. (Según H. El enlace del factor de crecimiento a su receptor (1) conduce a la autofosforilación de los residuos de tirosina del receptor (2) y el subsecuente reclutamiento de las proteínas Grb2-Sos (3). Por ejemplo. Se cree que cPAM activado fosforila cuando menos dos tipos de sustrato de proteína: factores de transcripción (FT. divergencia e interferencia entre diferentes sistemas de señales La vía para la transmisión de señales mitógenas descrita antes e ilustrada esquemáticamente en la figura 15-27 es una vía lineal que conduce directo desde un receptor en la superficie celular al DNA en el núcleo de la célula. Uno de los genes cuya expresión se estimula codifica una cPAM fosfatasa (MKP-1) (paso 10). Generalidad de la cascada cPAM. Tonks. provocando un incremento de los genes específicos de transcripción que participan en !a respuesta de crecimiento (paso 9). paso 8) y otra cinasa llamada Rsk (o p90rsk) (paso 8a). 19:484. En todos los eucariotes investigados. 15-4 Convergencia. La evolución adaptó la vía para satisfacer muchos fines diferentes. también conocida como MEK). incluyendo receptores para FCE y FCDP. Raf también se conoce como PAMKKK (PAM cinasa cinasa cinasa) porque fosforila a PAMKK (PAM cinasa cinasa. Sun y N. término que significa que es capaz de fosforilar residuos de tirosina y también residuos de serina y treonina. en tanto que en la mosca de la fruta la vía se utiliza durante la diferenciación de los receptores en el ojo compuesto. desde levaduras hasta moscas y de nematodos a mamíferos. El hecho de que tantas proteínas de esta vía sean codificadas por genes que pueden provocar cáncer cuando sufren mutación subraya la importancia de la vía en el control del crecimiento y proliferación celulares. Etapas de la cascada cPAM.) Transcripción MKP-1 lizar su papel en la traducción. que a continuación fosforila a un factor de transcripción (8b). Trends Biochem. Se espera que los conocimientos recientes en el papel de Ras en las actividades normales de la célula conduzcan a una mejor comprensión de los mecanismos encargados de la pérdida de control del crecimiento en las células cancerosas que contienen genes ras alterados y al desarrollo de mejores estrategias para el tratamiento del cáncer. los oncogenes pueden identificarse gracias a su capacidad para convertir a las células en células cancerosas cuando el gen sufre mu- tación o activación anormal.. y por lo tanto inactiva la :unción cinasa de cPAM y detiene una mayor actividad de emisión de señales a lo largo de la vía. no es la única vía disponible para transmitir . muchos de los elementos de la vía Ras para transmisión de señales son proteínas codificadas por genes descubiertos por primera vez como oncogenes causantes de cáncer. que recluta a la proteína Raf en la membrana activando su función serina-proteincinasa (5). c-fos). se observa la misma vía básica desde RTK a través de Ras para la activación de los factores de transcripción. Se cree que esta jnzima elimina grupos fosfato de cPAM (11). Por ejemplo.CAPITULO 15 • Señales celulares: comunicación entre las células y su ambiente Factor de crecimiento 651 PAMKKK (Raí) 0 O FIGURA 15-27. PAMKK fosforila a PAMK (cPAM) activando su función cinasa de serina y treonina (7). la cascada cPAM es necesaria para conservar la forma de la célula y responder a feromonas de apareamiento. Aunque esta es la única vía en la cual se ha identificado cada eslabón de la cadena. Cuando se descubrieron los oncogenes se pronosticó que codifican proteínas cuyas contrapartes normales participan en el control del crecimiento celular. 1994.

activando al factor y estimulando la síntesis de proteína. cada uno enlazado a su propio receptor. Factores de crecimiento. 19:469. pueden converger para activar a un efector común. Los datos de estudios recientes indican que los circuitos de información dentro de la célula son complejos. La activación de la actividad cinasa de cPAM conduce a la fosforilación de la proteína PHAS-1. (DiÍ!M. Trends Biochem Sci. por ejemplo: Señales procedentes de varios factores de crecimiento no relacionados. .o por Tony Bramley. lo cual causa que se disocie del factor de inicio de traducción eFI4E. I994. por ejemplo: FCE. Papel de la cascada cPAM para controlar la traducción.J señales desde la superficie celular por medio de un RTK activado. FCDP RNAm Síntesis de proteínas FIGURA 15-29. como Ras o proteincinasa activada por mitógeno.652 CAPITULO 15 • Señales celulares: comunicación entre ¡as células y su ambiente FIGURA 15-28.

val 363. La activación del receptor de tirosincinasa por el FCDP o por el FCE conduce a la transmisión de señales a lo largo de tres vías diferentes.CAPITULO 15 • Señales celulares: comunicación entre las células y su ambiente 653 • Señales del mismo ligando.. Vasopresina. La interferencia entre los dos tipos de vías se ilustra por los iones calcio liberados del REL por IPs y que entonces pueden actuar sobre diferentes proteínas. histomina NA. como FCE o insulina. Colecistocinina. Estas características de las vías para transmisión de señales se ilustran esquemáticamente en la figura 15-30. FCE. Se cree que muchas de las señales que llegan a través de estos receptores lo hacen a través de la vía Ras. Este dibujo muestra un esquema de las vías para transducción de señales iniciadas por receptores que actúan a través de proteínas G hcterotriméricas y receptores de tirosincinasa. En la figura 15-31 se muestra la vía donde ocurre esto. 315. PTH Odorantes. (Según M. Igual que los órganos de los sentidos sensibles a formas específicas de estímulos (p. Endotelina. Sustancia P. 15-24). En la página 648 se hizo notar que la insulina se enlaza a un receptor para insulina desencadenando la fosforilación de un sustrato del receptor para insulina y la activación de PI(3)K (fig. Berridge. La insulina también desencadena otras respuestas celulares. p. la célula al parecer es capaz de integrar la información que llega de diferentes fuentes y elaborar una respuesta integral apropiada. La dos vías convergen por activación de diferentes isoformas fosfolipasa C. en tanto que la célula recibe información acerca de su ambiente a través de la estimulación de diferentes receptores en su superficie. las vías para transmisión de señales iniciadas por el enlace de estos tres ligandos (FCE. TXA. cambie de forma. incluyendo activación de la síntesis de proteínas y estimulación del crecimiento. • Pueden pasar señales hacia atrás y hacia delante en diferentes vías. Copyright 1993 por Macmillan Magazines Limited. Ejemplos de convergencia.) . De esta manera. luz. reimpreso con permiso de Nature. Bradicinina. Glutamato.URA 15-30. Neuromedina. los receptores de la superficie celular sólo pueden enlazarse a ligandos específicos y no son afectados por la presencia de una gran variedad de moléculas no relacionadas. divergencia e interferencia entre diferentes sistemas de transducción de señales. Las señales que abandonan la vía Ras pueden entonces canalizarse hacia vías orientadas "hacia afuera" que pueden provocar que la célula se divida. ej. Por lo tanto.. Una sola célula puede tener docenas de receptores diferentes capaces de enviar señales simultáneas al interior de la célula. etc. GnRH. pueden divergir para activar varios efectores diferentes. Receptores unidos a proteína G Acetilcolma. active una vía metabólica particular o incluso causen el suicidio de la célula. A partir de la figura 15-27 es evidente que la vía Ras desempeña un papel central para dirigir la información a través de la célula. ATP. La fosforilación del sustrato del receptor de insulina genera un sitio de estacionamiento para Grb2. Angiotensina II. PI(3)K •• PIP_ celular V mitogénesis I KI<. y en ambas se producen los mismos segundos mensajeros (IPs y DAG). presión u ondas sonoras). Neuropéptido Y. Ejemplos de vías convergentes para transmisión de señales Uno de los ejemplos más interesantes de convergencia de vías para la transducción de señales surgió recientemente de estudios acerca de la respuesta a insulina. la misma proteína SH2 que se une al FCE fosforilado o al receptor del factor de crecimiento derivado de plaquetas. El sistema nervioso central recoge información acerca del ambiente a través de los diferentes órganos de los sentidos. TRH. como se analizará en la siguiente sección. incluyendo proteincinasa C (PKC) cuya actividad también es estimulada por diacilglicerol. 1993. lo que provoca respuestas celulares diversas. FCDP e insulina) convergen para activar a Ras y a la cascada cPAM.]. fenómeno conocido como interferencia. Bombesina. FAP. de manera parecida a la orientación de la información en el sistema nervioso central desde los diferentes órganos del cuerpo y hacia ellos. Trombina. lo que provoca la transcripción y traducción de un grupo similar de genes promotores de crecimiento en la célula específica. un ejemplo de divergencia. Luz "¿ i " y* \G -*• T PKC i Receptores unidos a tirosincinasa <^\ Actividad FCDP. 5-HT.

consideraremos un par de ejemplos que implican al AMPc para ilustrar la importancia en este tipo de interferencia. Ejemplos de vías divergentes para transmisión de señales En la sección previa vimos que el enlace del FCE o del FCDP a sus correspondientes receptores conduce a la autofosforilación del receptor y al reclutamiento de la proteína Grb2 SH2en la membrana plasmática (fig. Ras es una proteína específica. y por lo tanto el enlace de FCE o FCDP con sus correspondientes receptores no sólo envía una señal a lo largo de la vía Ras-cPAM. Por la otra. Ambas enzimas fueron estudiadas anteriormente en relación con otro tipo de estímulo. En vez de tratar de clasificar las vías que pasan información en una y otra dirección dentro de la célula. Los efectos de la inyección de una proteína Rho sobre la configuración del citoesqueleto de un fibroblasto activado se muestra en la figura 15-33. El AMP cíclico se estudió en la página 631 como iniciador de una reacción en cascada que conduce a la movilización de la glucosa. Datos recientes indican que el AMPc también puede inhibir el crecimiento de varias células. Por una parte. En realidad. ambos segundos mensajeros (pág. Grb2 no es la única proteína que contiene un dominio SH2 que se enlaza a fosfotirosina capaz de enlazarse a un receptor FCE fosforilado o a un factor de crecimiento derivado de plaquetas. Cuando menos otras dos proteínas SH2. el término "Ras" se usa para describir una superfamilia de pequeñas proteínas homologas enlazadas a GTP codificadas por cuando menos 50 genes diferentes. Cuanto más se conoce acerca de la información transmitida en las células. Las proteínas codificadas por varios de estos genes (princi- pálmente miembros de la subfamilia Rho) son elementos clave de las vías que transmiten señales desde los receptores de la membrana plasmática al citoesqueleto. ej. más se descubre acerca de interferencias entre las vías para transmitir señales. por bloqueo de las señales transmitidas a través de la cascada de la proteincinasa activada por rnitógeno.654 CAPITULO 15 • Señales celulares: comunicación entre las células y su ambiente Factores de crecimiento.: FCE. PI(3)K se describió como enzima que fosforila al fosfatidilinositol (pág. FIGURA 15-31. provocando cambios en la disposición de los filamentos de actina que afectan la forma. 15-32). 648). Se cree que el AMP cíclico realiza esto activando la cinasa dependiente de AMPc (PKA) capaz de fosforilar e inhibir a Raf. Estas dos enzimas permanecen a la cabeza de sus propias vías para transmisión de señales. la proteína que permanece a la . p. PI(3)K y fosfolipasa C. producto del gen ras. Interferencia entre las vías para transmisión de señales En las secciones previas examinamos algunas vías para transmisión de señales como si funcionaran de manera independiente siguiendo una cadena de sucesos lineales. los circuitos de información que operan en las células probablemente recuerden más una red interconectada en la cual les elementos producidos en una vía pueden participar en lo que ocurre en otras vías. y la fosfolipasa C como enzima que desdobla el fosfatidilinositol fosforilado en IPs y DAG. Las señales transmitidas desde el receptor de insulina y el receptor FCE o FCDP convergen sobre Ras y a continuación se transmiten a lo largo de la cascada de proteincinasa activada por mitógeno. El término "Ras" se usa en dos contextos diferentes. incluyendo fibroblastos y adipositos. Las señales transmitidas desde el receptor del factor de crecimiento epidérmico pueden divergir hacia distintas vías. 639). FCDP Insulina •\árv x^fe Sustratos DAG Cascada cPAM FIGURA 15-32. también se pueden enlazar a estos receptores (fig. 15-32) y activarse como resultado de esta interacción. sino también a lo largo de vías separadas generadas por la fosforilación del inositol (fig. la motilidad y las propiedades de adherencia de la célula. 15-26).

varias proteínas. 15-34). Los correspondientes efectos sobre el dtoesqueleto se observan comparando las imágenes por inmunofluorescencia. J. 1990. Resultados de un experimento en el cual se inyecta proteína de la familia Rho a un cultivo de fibroblastos. Pero estos dos mensajeros pueden tener efectos profundos sobre otras vías. El espectacular efecto sobre la forma de estas células se observa comparando las micrografías del contraste de fases a y b o de c y d. Es evidente que las vías para transmi- sión de señales de una célula son muy interdependientes. incluyendo el factor de transcripción CREB (pág. en tanto que las células en c y d se tiñeron con anticuerpos fluorescentes contra tubulina para revelar la distribución de los microtúbulos. Algunas de las vías más importantes se analizan en la siguiente sección. Las células en a y b fueron teñidas con faloidina fluorescente para revelar la distribución de filamentos de actina. Inversamente. 631). El aspecto de cada una de estas células en el microscopio de contraste de fases se muestra a la izquierda y la imagen inmunofluorescente de la célula correspondiente se muestra a la derecha. la glucógeno sintasa y la fosforilasa cinasa. las células inyectadas con Rho se muestran en b y d. Por ejemplo. pueden ser fosforiladas por cinasa dependiente del AMPc y la cinasa dependiente de Ca 2+ -calmodulina. con permiso de Rockefeller Uníversíty Press. 15-5 Otros sistemas de señales Las vías mejor estudiadas para transmitir señales se inician por el contacto entre ligandos extracelulares y receptores acoplados a proteína G o receptores de tirosincinasa. Cell Biol. pero también se han identificado muchos otros caminos que conducen desde el medio extracelular hasta el interior de la célula. y que descifrar los factores que controlan a las vías de transmisión de información a través de los diferentes tipos de célula todavía mantendrán ocupados a los investigadores durante muchos años. Pctterson y cois.) cabeza de la cascada cPAM (fig. Las células no inyectadas se muestran en a y c. (Segiín Hugh F. Además. En secciones previas se hizo notar en otro ejemplo que tanto Ca2+ como AMPc son segundos mensajeros que evocan respuestas distintas en células específicas.CAPITULO 15 • Señales celulares: comunicación entre las células y su ambiente 655 FIGURA 15-33. 111:1005. que desempeñan papeles importantes en el metabolismo de la glucosa. . la proteincinasa dependiente de AMPc puede fosforilar los canales del ion calcio alterando su capacidad para liberar Ca2+ hacia el citoplasma. Ca2+ (junto con calmodulina) puede activar a la adeniülcíclasa {que sintetiza AMPc) y la AMPc fosfodiesterasa (que descompone a AMPc).

Las pruebas sugieren que el AMP cíclico puede actuar en algunas células por medio de una PKA cinasa dependiente de AMPc para impedir la transmisión de señales desde Ras a Raf. en los miembros de esta cepa mutante no se observó esta respuesta. Trcnds Biochem Sci. resultó ser un mensajero fisiológico esencial. 1992. (Segím R. Moneada. en ausencia de este aminoácido. enzima que sintetiza GMP cíclico (GMPc). un segundo mensajero importante de estructura similar a AMPc.i KA 1 5-33. El enlace de acetilcolina a la superficie externa de la célula endotelial (paso 1. que produce dilatación de los vasos sanguíneos.G. Por ejemplo. que ¡ibera óxido nítrico (NO) como uno de los productos de oxidación de la arginina. las células endoteliales que revisten la superficie interna de los vasos sanguíneos producen NO en respuesta a la acetilcolina liberada por nervios autónomos que inervan a los vasos (fig. En tanto la inflamación resultante de la infección bacteriana se acompañó de incremento en la excreción de nitratos en la orina de ratones normales. El NO formado en las células endoteliales difunde a través de la membrana plasmática al interior de las células de músculo liso adyacentes (paso 4). los macrófagos eran incapaces de engullir materiales extraños.656 CAPITULO 15 • Señales celulares: comunicación entre las células y su ambiente Receptor Factor de de FCE crecimiento Receptorx Epinefrina I La desactivación metabólica del NO genera los nitratos que aparecen en la orina de animales cuyos macrófagos participan en actividad fagocitaria extensa durante la inflamación. 15-35). donde estimula a la guanililciclasa (paso 5). Kuowíes y S. que tiene el efecto de inhibir la activación de la cascada de proteincinasa activada por mitógeno. Estos ratones también mostraron anomalías en el metabolismo del nitrógeno. En aquel momento la relación entre inflamación y excreción de nitratos era totalmente confusa. 17:401. El descubrimiento de la dilatación de vasos sanguíneos mediada por NO explica la acción de la nitroglicerina. Sintasa de óxido nítrico 'Células de músculo liso Fl<. Célula endotelial ACh Papel del NO y del CO como mensajeros celulares En 1985 se aisló una cepa muíante de ratones cuyos macrófagos carecían de la capacidad habitual para fagocitar células anormales o bacterias. fig. El óxido nítrico resultó ser un mensajero en un número cada vez mayor de actividades biológicas. Vía para la transducción de señales que incluye NO y GMP cíclico. la sustancia NO. Ejemplo de interferencia entre dos vías principales para la emisión de señales. Posteriormente se descubrió que la actividad fagocitaria en los macrófagos normales en cultivo de células dependía de la presencia de arginina en el medio. empleada durante muchos años para tratar el dolor de la angina de pecho resultante de flujo sanguíneo inadecuado al miocardio. alguna vez considerada sólo como contaminante tóxico de la atmósfera. Los pasos ilustrados en la figura se describen en el bexto. 15-35) indica elevación de la concentración citoplásmica de Ca2+ (paso 2). que estimula la relaja- Actividad del gen FIGURA 15-34. Por lo tanto. Pronto se descubrió que la arginina es un sustrato de una enzima llamada sintasa de óxido nítrico. La nitroglicerina se desintegra en el cuerpo para formar óxido nítrico. que activa a la sintasa de óxido nítrico (paso 3). A continuación el NO actúa corno mensajero intracelular que estimula la actividad fagocitaria de la célula.) . El GMP cíclico desencadena la respuesta que conduce a la relajación de la célula muscular (paso 6) y la dilatación subsecuente del vaso sanguíneo.

Los filamentos de actina. Demostración experimental de la presencia de residuos de fosfotirosina en los sitios de adherencia focal en fibroblastos de rata. la GMPc ya no se eleva en las neuronas olfatorias. lo que puede afectar el curso del desarrollo y la conducta celulares. el cual. estos contactos son sitios donde ciertos tipos de proteínas de membrana se agrupan y actúan como puentes entre el objeto extracelular con el que hacen contacto y las disposiciones específicas de elementos citoesqueléticos situados en la superficie interna de la membrana plasmática. Los residuos de fosfotirosina se localizan mediante un anticuerpo fluorescente rojo. Cada vez se acumulan más pruebas de que el CO actúa como mensajero químico para estimular la producción de GMPc en células específicas. Cuando se trata a animales con un fármaco que inhibe la hem oxigenasa. Las células también pueden responder a contactos que hacen con objetos insolubles en su ambiente. a incremento del grado de fosforilación de tirosina de las proteínas celulares y a cambios en la expresión de genes. como el fibrinógeno (fig. La investigación acerca de la NO sintasa condujo a los investigadores a otra enzima. Se cree que el NO producido en las neuronas actúa como neurotransmisor para producir respuestas específicas en células blanco. Las áreas de color naranja son sitios donde los microfilamentos y los residuos de fosfotirosina coinciden en la adherencia focal. Numerosos datos indican que la interacción entre el dominio extracelular de una integrina con un ligando extracelular. las integrinas son los receptores de membrana constituidos FICUEtA 15-36. 7-15). que cataliza la destrucción del grupo hem de la hemoglobina eliminada de las células sanguíneas viejas y gastadas. Los datos indican que el enlace de fibrinógeno al dominio ción de los músculos lisos que revisten los vasos sanguíneos del corazón incrementando el flujo de sangre a ese órgano. Típicamente. la hem oxigenasa. Uno de los efectores causantes de dichos cambios es una proteína tirosincinasa llamada ánasa de adherencia foca! (CAF). Pero la hem oxigenasa también se encuentra en concentraciones relativamente altas en ciertas células nerviosas. o sea. los elementos no nucleados de la sangre encargados del cierre de las heridas en los vasos sanguíneos. Los filamentos de actina aparecen de color verde en la micrografía. es un contaminante tóxico de la atmósfera. El papel de la hem oxigenasa en las células nerviosas es más evidente que cuando se comprueba que uno de los productos de la reacción que cataliza es el monóxido de carbono (CO). Se cree que la cinasa de adherencia focal actúa como efector en las respuestas mediadas por integrina que requieren reorganización del citoesqueleto. incluyendo sustratos no celulares (como membranas básales) y las superficies de otras células. están teñidos con faioidina conjugada a fluoresceína (verde). en tanto que los residuos de fosfotirosina al parecer generados por CAF se tiñen de rojo. igual que el NO.CAPITULO 15 657 por proteínas diméricas que se encuentran en sitios de célula-sustrato y en contacto célula-célula. que normalmente responden a la presencia de moléculas odorantes estimulantes con elevación de la concentración de GMPc. las integrinas están sometidas a mayor investigación. genera señales en la célula que pueden conducir a la liberación de Ca2+ al interior del citoplasma. incluyendo las contracciones peristálticas de la capa de músculo liso del intestino y el llenado con sangre del pene durante la erección. La figura 15-36 muestra las adherencias focales presentes donde !a superficie subyacente de fibroblastos de rata entran en contacto con el plato de cultivo. Señales originadas por contactos en la superficie celular Todas las señales estudiadas antes se originan por interacción de la célula con sustancias disueltas en su ambiente. que se irradian a partir de las áreas de contacto en las adherencias focales. como una molécula de fibronectina de la matriz extracelular.) . a incremento de la síntesis de segundos mensajeros de inositol. 249). La cinasa de adherencia focal también se considera como un efector que desencadena la agregación de plaquetas. Muchos investigadores piensan que la producción de NO en el cuerpo es el determinante aislado más importante de la presión arterial de una persona. así denominada porque se concentra en adherencias focales. (Cortesía de Keitíi Burridge. sitios especializados en la membrana plasmática donde las células hacen contacto con el sustrato (pág. La demostración de un papel para el CO en la función nerviosa proviene del estudio de neuronas olfatorias. Los sitios de superposición de los filamentos de actina y residuos de fosfotirosina en las regiones de contacto focal aparecen de color naranja. Las concentraciones más elevadas de sintasa de óxido nítrico se encuentran en las células nerviosas localizadas en ciertas partes del cerebro y en los nervios raquídeos que inervan varios órganos periféricos. Se cree que estas proteínas de membrana y las regiones especializadas del citoesqueleto actúan en conjunto como conductos para transmitir señales desde el medio externo hasta el interior de la célula. La agregación de plaquetas se estimula por contacto de sus superficies con ciertas proteínas sanguíneas. Como se estudió con detalle en el capítulo 7. En el capítulo 7 se describió de qué manera las células desarrollan contactos altamente especializados con otras células y con la matriz extracelular. De los diversos tipos de proteínas de membrana que participan en la transmisión de señales celulares desde "el exterior al interior". donde es muy poco probable que participe en la degradación del hem.

y el rápido engullimiento de la célula muerta por fagocitosis. Papel de las fosí alagas en la transmisión de señales celulares En este capítulo se subraya el papel de las proteincinasas para estimular (e inhibir) la actividad de otras proteínas. S. la apoptosis es un tipo de muerte celular ordenada. algunas fosfatasas son multifuncionales y capaces de eliminar fosfatos de varias proteínas diferen- tes. se descubrió una nueva clase de fosfatasas que atraviesan la membrana plasmática y al parecer actúan como receptores de superficie celular que participan en la transmisión de señales celulares y en la adherencia entre células. Vías que conducen a la muerte celular Consideremos los siguientes acontecimientos. Por lo tanto. Recientemente. pero no de ambos. El papel de las FRPT como moléculas de adherencia celular fue sugerido por experimentos en los cuales un gen de una de estas proteínas (FRPTm) se introdujo en células de insectos normalmente no adherentes entre sí. pero también ocu- —Espectrina •actinina CAF FIGURA 15-37. La fosforilación de proteínas es una modificación reversible. de modo que cualquier fosfato añadido por una proteincinasa puede eliminarse mediante una proteinfosfatasa. 15-38) asociados por interacciones específicas entre las células FRPT con sus vecinas. 15-37). Trends Biochem Sci. como las cinasas que revierten. La mayor parte de las fosfatasas. la desfosforilación lo inactiva. Luego de captar al gen y expresar el producto en su superficie. pueden extraer fosfatos. lo que conduce a la fosforilación de proteínas citoplásmicas necesarias para la agregación. y viceversa. no se pueden activar por fibrinógeno. estas células transfectadas se agregaron para formar grumos (fig. las cinasas y las fosfatasas muestran efectos opuestos sobre su sustrato: cuando la fosforilación activa al sustrato. que es una tirosincinasa. A diferencia de la muerte de las células que se produce por lesiones tisulares (suceso denominado necrosis). La muerte por apoptosis se caracteriza por la compactación total de la célula y su núcleo (fig. Bruce. 1994. la apoptosis es un suceso común durante el desarrollo embrionario. y se cree que suministran un enlace directo entre los procesos de adherencia celular y la transmisión de señales a través de la membrana.) . en la cual la célula responde a ciertas señales iniciando una respuesta normal que conduce a su propia muerte. las formas más primitivas de la mano del ser humano recuerdan una paleta sin espacio alguno entre los tejidos que se convertirán en los dedos. Estas moléculas se denominan/os/fítesas parecidas a receptores de proteintirosina (FRPT). Estas acciones promueven la agregación de plaquetas. Como se ilustra en los ejemplos anteriores. Todas las proteinfosfatasas estudiadas hasta ahora son enzimas citoplásmicas solubles. o programada.J. en tanto que otras son muy específicas y sólo pueden eliminar fosfatos de uno o dos sustratos. En cada una de estas situaciones. Activación de la cinasa de adherencia focal (CAF) en las plaquetas sanguíneas. 15-39). activada para fosforilar varias proteínas de sustrato incluyendo Src. La porción extracelular de FRPT contiene dominios similares a los observados en otras moléculas para adherencia celular. Igual que las proteincinasas. Shattit y J. Se cree que la apoptosis requiere la activación de un conjunto específico de genes que ha evolucionado para destruir a la célula de manera que su muerte tenga el menor efecto sobre el ambiente que la rodea. La interacción del fibrinógeno en la superficie extracelular de la integrina «nbft conduce a la transmisión de una señal a través de varias proteínas relacionadas con la membrana {incluyendo talina y actina) hacia la CAF. Clark. 29:467. (Según E. se conocen unas pocas fosfatasas con doble especificidad capaces de eliminar fosfatos de los tres tipos de residuos aminoácidos. las células que ya no son necesarias (como las neuronas en exceso o las células situadas entre los dedos) o que poseen ta capacidad de dañar al individuo (como los linfocitos T) sufren un proceso llamado apoptosis.A. se producen linfocitos T (células inmunológicas encargadas de destruir células anormales o infectadas) que tienen capacidad de atacar a las propias células del cuerpo.S. los cuales ocurren durante el desarrollo embrionario: muchas más neuronas salen del sistema nervioso central en dirección a un órgano específico que las requeridas para inervar dicho órgano. la disección ordenada de la cromatina en pedazos por acción de una endonucleasa especial que separa DNA. incluyendo fibronectina (pág.658 CAPITULO 15 • Señales celulares: comunicación entre las células y su ambiente extracelular en la membrana plasmática de la plaqueta transmite una señal a través de la membrana que activa las moléculas de cinasa de adherencia focal citoplásmicas (fig. Sin embargo. 243). quienes carecen de esta integrina particular. Esto explicaría por qué las plaquetas de pacientes que padecen trombastenia de Glanzmann. sea de residuos de serina y treonina o de residuos de tirosina.

puesto que ahora la investigación se ha enfocado en la apoptosis. Creen. Science 261:633. reimpreso con permiso. las células manipuladas genéticamente se adhieren entre sí formando grumos. Muchas células cultivadas diferentes son estimuladas a entrar en apoptosis cuando se eliminan factores de crecimiento del medio. 1993. a-b) Micrografías con microscopio de luz de una célula cultivada HL-60 normal (a) y una apoptótica (b). 1994. Las pruebas sugieren que la apoptosis puede desencadenarse por algunas condiciones externas. Resultados de un experimento que sugieren que las fosfatasas parecidas a receptores de proteintirosina puede participar en la adherencia célula-célula. La célula apoptótica muestra muchas burbujas en su superficie que brotan desde el interior de la célula. a) Las células testigo muestran poca tendencia a adherirse entre sí. (Según M. según el tipo de célula. Las células epiteliales de la próstata entran FIGURA 15-39.R. Shi y D.CAPITULO 15 • Señales celulares: comunicación entre las células y su ambiente 659 (a) (b) FIGURA 15-38.) rre en tejidos adultos y puede ser un arma particularmente importante para la destrucción de células que potencialmente pueden desarrollarse para formar tumores malignos (comentado en la sección 16-3).artijn Gebbink y Gerben Zondag. quizá la disyuntiva sea crecer y dividirse o morir. b) Las células del mismo tipo mostradas en a fueron manipuladas por ingeniería genética para expresar una fosfatasa similar a receptor de proteintirosina sobre su superficie. Trends Biochem Sci. Martin. pero esto tal vez cambie en los siguientes años. Comparación de células normales y células apoptóticas. Cotter. En este momento se sabe muy poco acerca de las vías para transmitir señales que inducen a una célula a suicidarse.) (b) . El núcleo de la célula apoptótica está altamente condensado y fragmentado. A diferencia de las células testigo. Micrografía electrónica por Y. Douglas R. (Según Seamus J. Creen y Thomas G. 19:28. c-d) Micrografías electrónicas de una célula T hibridoma normal (c) y apoptótica (d).

sus efectos sobre la actividad de adenililciclasa no son aditivos. incluyendo el uso de Ca 2+ (pág. como la epinefrina. Como se muestra en el cuadro PH 15-1. pero que ciertas vías son peculiares de cada reino. al parecer el proceso es mediado principalmente por liberación de Ca2+ al interior del citoplasma y la activación de proteincinasas. Esta es la razón de que el cáncer prostático propagado a otros tejidos se pueda tratar con fármacos que interfieran con la síntesis de testosterona. En 1971. que pueden ser el mensajero celular más ubicuo en animales. pero se está efectuando un número cada vez mayor de estudios en plantas. Estos datos juntos condujeron a Rodbell y Birnbaumer a proponer que. comenzaron una serie de experimentos sobre membranas plasmáticas aisladas de adipocitos y células hepáticas. y sus membranas plasmáticas pueden aislarse como "fantasmas" mediante lisis osmótica. si es que tiene alguno. que responden a varias hormonas diferentes produciendo AMPc. responden a varias hormonas que causan rápido incremento en la concentración intracelular de AMPc (estimulando enzimas que participan en la descomposición de lípidos). En experimentos subsecuentes se demostró que las diferentes hormonas interactúan con receptores espacialmente distintos. 641) y de mensajeros f osfoinositídicos. las plantas contienen un tipo de proteincinasa ausente en células animales.3 Uno de los efectos observados de los trifosfatos de nucleósido fue que causan disociación del glucagon marcado enlaza- .660 CAPITULO 15 • Señales celulares: comunicación entre las células y su ambiente en apoptosis cuando se suprime la hormona sexual masculina testosterona. descubrieron que ciertas hormonas. y también los efectos de los otros tres trifosfatos de nucleósido comunes. en la Case Western Reserve University. se pudo vigilar el efecto de la presencia del ATP sobre e! enlace del glucagon marcado. Puesto que el ATP es un sustrato de la reacción adenililciclasa. Para conocer más acerca de la relación entre receptores hormonales y adenililciclasa. Por ejemplo. Desde hace mucho se sabe que las células bacterianas contienen una proteincinasa capaz de fosforilar residuos de histidina y desempeña un papel clave en la mediación de la LA VIA E X P E R I M E N T A L Descubrimiento y caracterización de las proteínas enlazadas a GTP A finales de los anos 1950 y 1960. pero poco se sabía acerca del mecanismo molecular preciso que permite a una hormona (u otro ligando) enlazada en el exterior de la membrana activar fa adenililcicíasa. AMP cíclico. Rodbell y sus colegas publicaron una serie de trabajos acerca de la actividad de glucagon y epinefrina sobre la estimulación de adenililciclasa en membranas plasmáticas aisladas de células hepáticas. En la figura VE 15-1 se muestran las curvas de dosis y respuesta de las primeras tres de estas hormonas actuando por separado. Durante estas investigaciones se notaron por primera vez los efectos especiales de GTP. glucagon. Sistemas para transmisión de señales en plantas La investigación acerca de las vías para transmitir señales en células vegetales ha permanecido muy por detrás de los estudios en células animales. lo que sugiere que cada una de estas hormonas estimula a la misma población de moléculas de adenililciclasa. de los National Institutes of Health. revisado en 1 A finales del decenio de 1960. actúan al enlazarse a un receptor específico en la superficie de la célula que activa a la enzima adenililciclasa sobre el lado interno de la membrana. CTP y GTP. Por otra parte. cuando estas hormonas se combinan en grupos de dos o tres. La activación de la adenililciclasa induce la producción de un segundo mensajero. que se difunde al citoplasma e inicia la respuesta celular. al parecer desempeñan un papel sin importancia. Los datos de estos estudios indican que las plantas y los animales comparten ciertos mecanismos básicos para transmitir señales. Una de las técnicas adoptadas en estos estudios fue vigilar la capacidad de las moléculas de glucagon marcadas con isótopos radiactivos para enlazarse a sus correspondientes receptores sobre las membranas plasmáticas aisladas. los receptores adenililcicíasa existen por separado en la membrana plasmática de las células adipesas. poseen una sola adenililciclasa activada por las diferentes hormonas o tienen diferentes adenililciclasas para cada una de las hormonas a las cuales responden. Se eligieron células adiposas para los estudios iniciales debido a que son fáciles de aislar y liberar de otros tipos de célula. Martin Rodbell y Lutz Birnbaumer. TSH. Earl Sutherland y sus colegas. Una posibilidad era que el sitio activo de la adenililciclasa fuera parte del propio receptor de la hormona. LH y proíactina) mostraron acción estimulante sobre la actividad de adenililciclasa en fantasmas de células adiposas aisladas. epinefrina. en la transmisión de señales en células vegetales. aunque los diferentes receptores hormonales estimulan una población común de moléculas de adenilifciclasa. Seis hormonas diferentes (ACTH. Cualesquiera que sean las señales externas que desencadenan la apoptosis.2 Una de las primeras preguntas que intentaron responder fue si estas células. el concepto de segundo mensajero estaba ya bien establecido. UTP. como se estudia a continuación. los nucleótidos cíclicos.

El ácido salicílico (AS) se propaga por toda la planta y es detectado por una proteína que se enlaza al AS. (Según M.4 Como se muestra en la figura VE 15-3. las enzimas son proteínas transmembrana que se cree poseen un dominio receptor extracelular y un dominio histídincinasa citoplásmico. se observó que las membranas de hígado poseen una actividad nucleotidasa capaz de hidrolizar GTP y que esta actividad GTPasa es inhibida por EDTA. En ambos tipos de eucariotes.05 f¿M. 199). Ninguno de los otros nucleótidos pose esta actividad. pero entonces se descubrieron tanto en levaduras como en plantas que producen flores. Los autores concluyeron que los nucleótidos de guaniío son necesarios para que el glucagon active la adenililciclasa. UTP y CTP no afecten la disociación del glucagon de las membranas en concentraciones menores de 100 fiM. Chem. que se cree está compuesto de ácido salicílico (un sucedáneo de la aspirina. La porción dañada de la planta responde a la amenaza produciendo un mensaje químico. epinefrina y glucagon sobre Ja actividad de adenililciclasa de fantasmas de células adiposas. La catalasa es una enzima protectora que destruye especies reactivas de oxígeno (pág. Cuando el AS se enlaza a la enzima.CAPITULO 15 • Señales celulares: comunicación entre ¡as células y su ambiente 661 respuesta celular a varias señales ambientales desencadenado cambios en la expresión de genes o modificando la conducta de la célula. inhibe su actividad catalítica conduciendo a ¡a formación de ciertas especies de oxígeno que pueden actuar como segundos mensajeros para generar una respuesta sistémica de defensa. En el último trabajo publicado de la serie. (Nótese que la concentración se gráfica en una escala logarítmica indicando diferencias muy grandes en la eficacia de los dos trifosfatos. En tanto ATP. J. hormona que regula el crecimiento e induce la maduración de las frutas. (Según L Birnbaumer \j M. Las señales generadas por estas enzimas al parecer alimentan a una cascada de proteincinasa activada por mitógeno.0 _ i. El porcentaje de glucagon marcado enlazado que se disocia durante la incubación con ATP o con GTP se calculó comparando la radiactividad de enlace presente al inicio y al final de los 15 minutos de incubación con el trifosfato de nucleósido. En este experimento las membranas se incubaron previamente durante 15 minutos en un medio que contenía glucagon marcado. Rodbell. intentaron responder la pregunta de si los efectos de los nucleótidos de guanilo sobre ef enlace de glucagon implica alguna relación con las acciones de glucagon sobre el sistema adenililciclasa de las membranas hepáticas. 1971.) Estos resultados sugirieron a los autores que los nucleótidos de guarnió inducen un cambio en el estado o las propiedades de los sitios de enlace del glucagon que disminu- yen su afinidad por glucagon.) FIGURA VE 15-2. el GTP estimula la actividad basal de adenililciclasa y lo hace a concentraciones tan bajas como 10 nM. se tomaron muestras para medir el glucagon marcado que permanecía enlazado. GTP estimula la disociación a concentraciones tan bajas como 0. Efecto de concentraciones variables de GT y ATP sobre la disociación de 125I-glucagon de las membranas plasmáticas de células hepáticas.o _J -9 L -8 -7 -6 -5 -4 GTP o ATP (log[MI) I I -3 -2 ~ -1 J 10' L. A continuación se añadió GTP o ATP en presencia de un gran exceso de gmcagon no marcado. do a las membranas plasmáticas aisladas. un compuesto que se enlaza a iones calcio y magnesio. Otra vía única para transmisión de señales de las plantas se inicia por el ataque de un microorganismo patógeno o de una plaga de insectos. Efecto de concentraciones variables de ACTH. En la figura VE 15-2 se comparan los efectos de ATP y GTP para provocar !a disociación del glucagon de las membranas. que es el ácido acetilsalicílico). Biol. Bio!. se pensaba que estas enzimas se restringían a células bacterianas. probablemente la enzima catalasa. Además. 1969. La iínea punteada representa la actividad en ausencia de hormonas añadidas (la adenililciclasa inicialmente se denominó adenilcidasa y posteriormente se le llamó adenilato ticlasa).L •L-t-L IO'T I0'€ IO'9 Concentración de la hormona (M) 10" FIGURA VE 15-1. Rodbel! y cois.0 m CTP ACTH Glucagon 60 ATP W i/ —A * — A- 2. J. 246:1873. Las pruebas indican que la hístidincinasa de plantas (codificada por el gen Efrí) desempeña un papel clave en la respuesta del organismo al gas etileno. Los nucleótidos se enlazan a sitios distintos de los sitios de enlace de glucagon y al parecer «X? Epinefrina 3. 244:3478. Hasta 1993. Luego de 15 minutos de incubación en uno u otro trifosfato de nucleósido. Chem.) .

06 0. el análogo GTP no hidrolizable fue capaz de activar la adenililciclasa incluso en ausencia de hormonas. Más aún.04 0. epinefrina. incluyendo el de Rodbell. 400/íg por mi.33 2. tanto individualmente como de manera combinada: ACTH. desempeña un papel importante en la activación de la estimulación mediada por hormona de la formación de AMP cíclico. se incuba con membranas plasmáticas de hígado.99 0. 244:3479. 1971.10 0.30 ± ± ± ± ± ± ± 0.06 0. sobre la actividad de adenililciclasa en fantasmas de células grasosas* Cambio de la actividad de adenililciclasa debido a hormonas Experimento 1 (37°) Adiciones ACTH Epinefrina Glucagon ACTH + epinefrina Epinefrina + glucagon ACTH + glucagon ACTH 4. y no su hidrólisis. 246:1879. Rodbell. ej. Estudios subsecuentes en otros laboratorios demostraron que GTP incrementa la respuesta de los sistemas adenililciclasa a otras hormonas. Estos resultados indican que el enlace de GTP. Se usaron las siguientes concentraciones de la hormona. glucagon y una combinación de glucagon y GTP sobre la síntesis de AMP cíclico con una preparación de membranas plasmáticas aisladas de células hepáticas. La principal diferencia entre las actividades de GTP y sus análogos GTP no hidrolizables es que el primero estimula la adenililciclasa de manera transitoria.98 2.11 0.12 0.36 1. se supone que actúan sobre el mismo sitio regulador.57 1.04 2.epinefrina + glucagon Encontrado 0.57 2.19 1. ATP y otros ingredientes necesarios para el sistema adenililciclasa. 5'-guanililÍmododifosfato. epinefrina) y prostagíandinas. incluyendo hormonas de péptidos. Efectos de las combinaciones de hormonas.00 0.57 1.76 3. identificaron una GTPasa localizada en las membranas plasmáticas de diferentes células. Biol.05 0.89 1.02 0. Estos datos condujeron a los investigadores a enfocarse en el mecanismo para la hidrólisis normal de GTP en el sistema adenililciclasa. Birnbaumer y M. También se encontró que el ion fluoruro es un activador eficaz cíe adenililciclasa y se empleó en un gran número de ensayos subsecuentes.85 ± ± ± ± ± ± ± 0. en tanto que los últimos estimulan la actividad por un periodo prolongado. Don Cassel y Zvi Selinger. J.5 Puesto que GTP inhibe de manera competitiva la activación de adenililciclasa por Gpp(NH)p. 400 ug por mi. Efecto del ion fluoruro. Gpp(NH)p imita los efectos estimuladores de GTP y lo hace de manera más eficiente. /.64 0.02 0.88 2.04 0. Rodbell y sus colegas observaron que Gpp(NH)p provoca notable estimulación de la actividad adenililciclasa en membranas aisladas de diferentes células eucariotas. (Según M. Rodbell y cois.26 0.662 CAPITULO 15 • Señales celulares: comunicación entre las células y su ambiente CUADRO VE 15-1. Cuando un análogo no hidrolizable de GTP. de la Universidad Hebrea . glucagon.. cualquiera que sea la naturaleza de los receptores acoplados a estos sistemas. 1969.79 0. Los valores son el medio de triplicar determinaciones ± desviación estándar. En un estudio clave.10 Experimento 2 (30°) Calculado si se añade 1. 60 ¿( g por mi. FUENTE: L.) regulan la respuesta de adenililciclasa a la hormona. a concentración supramáxima.55 * La actividad de la adenililciclasa se calculó a 37° en ausencia del sistema de regeneración de ATP o a 30° en presencia del mismo. Bíol.80 0.07 0. La notable estimulación del GTP aquí mostrada se logró con una concentración de GTP de 0.32 0. catecolarninas (p. o Gpp(NH)p.01 0.04 Calculado si se añade Encontrado 1. Chem.01 mM. varios laboratorios. A mediados de los años 1970.13 1. 1000 I- 5 ID MINUTOS FIGURA VE 15-3. glucagon. Los análogos no hidrolizables de los trifosfatos de núcleosido son útiles porque permiten a los investigadores distinguir entre los efectos del enlace de nucleótidos y la hidrólisis de nucleótidos. Chem.

Puesto que las células mantienen una concentración mucho más alta de GTP en comparación con GDP. El enlace de una molécula de hormona al receptor desencadena un cambio de conformación en el sitio nucleótido de guanilo. VE 15-4). provocó 98% de inhibición de adenililciclasa pero no tuvo efecto sobre la hidrólisis de GTP estimulada por catecolamina. ¿cuál es su estructura y de qué manera interactúa con los otros elementos principales del sistema. Curso temporal de la hidrólisis de GTP en presencia y en ausencia de la catecolamina isoproterenol por membranas de eritrocitos aisladas de pavo. La coenzima NAD+ está formada por un grupo ADPribosa unido a una fracción nicotinamida (fig. Experimentos subsecuentes revelaron que el efecto de la toxina no se confina a las células intestinales. encontraron que la adición de isoproterenol (una hormona catecolamina similar a epinefrina) a un sistema para ensayar GTPasa de la membrana plasmática provocó incremento de 30 a 70% en la hidrólisis de 32P-GTP estimado por la liberación de 32P¡ {fig. Todavía no se sabe si las actividades de GTPasa y de adenililciclasa residen en la misma proteína o en dos proteínas separadas. lo que sugiere que el nucleótido liberado por la hormona es reemplazado de manera concurrente por el nucleótido de guanilo presente en el medio. provocando la activación transitoria de la actividad adenililciclasa.6 La estimulación de la actividad GTPasa por la catecolamina fue independiente de la actividad adenililciclasa. Bioc. el GTP se enlazaba inicialmente por el sitio de enlace del nucíeótido de guanilo y luego era hidrolizado por actividad GTPasa con la liberación subsecuente del producto GDP. Selinger. (Según D. VE 15-5). la radiactividad se transfiere desde el NAD+ a una proteína de membrana que tiene un peso molecular de 42 kD determinado por electroforesis en gel de poliacrilamida con . El efecto de la hormona se observa en la curva inferior. La toxina del cólera inactiva a la proteína enlazada a GTP transfiriéndole un grupo ADP-ribosa desde el NAD + a la proteína. Cassel y Selinger demostraron que la toxina actúa inhibiendo la actividad GTPasa de la membrana. y 2) el tratamiento de la membrana con N-etilmaleimida. La proteína enlazada a GTP. El cólera es una enfermedad causada por una toxina bacteriana que provoca diarrea excesiva acompañada de pérdida de agua en los individuos afectados. Los resultados de los diferentes experimentos que acabamos de describir demuestran la existencia de un componente regulador del sistema hormona-adenililciclasa activado por el enlace de GTP y desactivado por la hidrólisis de GTP. en presencia de la hormona. Cassel y Selinger propusieron que la hidrólisis de GTP por la GTPasa sirve para desactivar la adenililciclasa activada y retornar la enzima aí estado basal inactivo. ¿es parte integral de la adenililciclasa o un elemento separado? Si la proteína enlazada a GTP es un elemento separado. En estas condiciones.7 Esta función de intercambio fue demostrada al incubar preparaciones de membranas de eritrocitos de pavo con una hormona de catecolaminas además de 3H-GTP. Cassel y Z. Acta 452:543. el acceso al sitio de enlace del nucleótido favorece que una molécula de GTP desplace al GDP enlazado. que equivale al efecto de mantener la adenililciclasa en estado de estimulación prolongada (fig. lo que permite su acceso al medio que lo rodea (fig. La liberación de GDP inducida por la hormona se estimula por la presencia de concentraciones bajas de GTP.CAPITULO 15 • Señales celulares: comunicación entre las células y su ambiente 663 de Jerusalén. Se hizo evidente que la toxina del cólera imitara la acción de las hormonas al actuar sobre uno de los elementos comúnmente presentes en el sistema adenililciclasa.8 Esta observación demostró ser una de las claves para purificar la proteína enlazada a GTP. 15-12). como se le llama. el receptor y la adenililciclasa? Para tomar el camino que conduce a responder estas cuestiones se requiere una breve disgresión. lavado de las membranas y luego incubación de la preparación con más hormona. Esta conclusión se basa en el hecho de que: 1) la adición de AMPc en el ensayo de GTPasa no tiene efecto sobre la tasa de hidrólisis de GTP. la hormona indujo la liberación de casi 25% del nucleótído radiactivo enlazado a la membrana. En 1977. varios laboratorios determinaron que la toxina del cólera actúa estimulando la adenililciclasa en las células del epitelio intestinal. un compuesto que inactiva ciertas proteínas atacando sus grupos sulfidrilo (-SH).) del nucleótido liberado por la hormona indicó que era 3HGDP. Se observó que cuando las membranas plasmáticas de los eritrocitos de pichón se incuban con la toxina del cólera en presencia de NAD + marcado con 32P. Según estos resultados. estos mismos investigadores demostraron que la activación del receptor por enlace de la hormona provoca la liberación de GDP enlazado formado por hidrólisis en intercambio de GTP que entra al sitio de enlace del nucleótido de guanilo de la proteína reguladora. El análisis 250 r 200 - 5 10 TIEMPO (minutos) 15 FIGURA VE 15-4. Se ha vuelto la atención a otras preguntas. sino que es eficaz para evocar varias respuestas mediadas por la estimulación hormonal de la adenililcicíasa. se propuso que la reacción GTPasa en el sitio de enlace de nucleótido de guanil (conocido como sitio regulador) produce un GDP fuertemente enlazado que inactiva la adenililciclasa. En un estudio subsecuente. 1976. De cualquier manera. reacción conocida como ADP-ribosilación. A principios del decenio de 1970. Estos estudios sugirieron que. en la cual se gráfica la diferencia en la hidrólisis de GTP entre las preparaciones tratadas con hormona y las preparaciones testigo. Biop. 3-26).

posee adeniíilciclasa activable.30 0. la actividad específica del extracto de detergente incrementa aproximadamente 2 000 veces durante el procedimiento de purificación. pero al parecer carece de algún otro componente necesario para la respuesta hormonal. como se le denominó en este estudio) se basó en la observación justamente descrita de que las células muíanles S49 cyc~ del linfoma carecen de esta proteína reguladora clave y por lo tanto no responden a la estimulación hormonal. La actividad se midió mediante reconstitución de la actividad de adenililciclasa activada por fluoruro en membrana cyc~. Sci.039 0 0.0 0 1 2 20 Hidroxiapatita GTP-sefarosa DEAE-sefacel FIGURA VE 15-5.A.) 350 290 150 dodecilsulfato de sodio (EGPA-DSS). las bandas marcadas por células nativas estaban ausentes o muy reducidas. i £ -3 < T í 50 G" o —- . de la Universidad de Virginia. En 1980.S. membranas plasmáticas aisladas de células cyc restituyó a las preparaciones su capacidad de responder a los estímulos (en este caso iones fluoruro. Alfred Gilman y sus colaboradores. Cuando la proteína purificada enlazada a GTP se sometió a EGPA-DSS. (Según D. La purificación se logró extrayendo proteínas de membranas plasmáticas de hígado en detergente y sometiendo la mezcla a seis procedimientos cromatográficos sucesivos (cuadro VE 15-2).c o '3 o. Cassel y Z. Estos resultados confirman fuertemente la idea de que: 1) los elementos reguladores del sistema de respuesta a adenililciclasa son física y genéticamente separables de la propia adenililciclasa. Conforme se efectuaban estos estudios. Como se indica en el cuadro.1 0Ott m E ta a £ O / l / ¡ / 0K . La actividad específica de la proteína enlazada a GTP en cada paso de la purificación (cuadro VE 15-2) se define como la cantidad de actividad de adenililciclasa restituida observada por cantidad de proteína añadida a las membranas. Nati. Acad. U. Posteriormente se descubrió un tercer polipéptido de 9 kD.664 CAPITULO 15 • Señales celulares: comunicación entre ¡as células y su ambiente 350r CH C 1 _ffl í^ • CUADRO VE 1 >-2.11 Igual que en cualquier procedimiento de purificación se requirió un ensayo para identificar la proteína buscada en las diferentes fracciones generadas por cada uno de los procedimientos cromatográficos. Proc. El polipéptido de 45 kD se conoció como subunidad a y el polipéptido de 35 kD como subunidad /3. en el laboratorio de Gilman se siguió otra línea de investigación enfocada sobre una proteína que inhibe la adenililciclasa mediante un proceso dependiente de GTP.18 0. se demostró que la subunidad a de 45 kD es el polipéptido que contiene el sitio de enlace del GTP y también es eí polipéptido ADP-ribosilado por la toxina del cólera. a 2 5 0/ •n a ai / "5 E / a^^"^ E •jj a. eran ADP ribosilado por la toxina del cólera cuando se ensayaron en una estirpe de células cultivadas de linfoma de ratón (llamadas células 549) . U. ^f^"^ (G/F) de la adenililciclasa del hígado de conejo" Unidades total (nmol/ min) 4380 2930 1820 740 Actividad específica (niño! min • mg) < c 250 o E o a a 200 . conocida como cyc~. 2977. o casi 100 000 veces de la proteína celular total./ ffl / Paso Extracto de colato de membranas DEAE-sefacel nlfrvilTíal A r A ^ í d Ljirrugci /ALrto**. Esta variante de la estirpe celular. Acad. 74:3309.K. y 2) uno o más de estos elementos reguladores separables (como parte de la proteína enlazada a GTP) es un sustrato de la toxina del cólera.5 1. La adición de fracciones purificadas de la proteína enlazada a GTP a *Se extrajeron membranas plasmáticas de hígado de conejo (8. —O D u f 1 1—ti—1— 114 9. lograron purificar la proteína enlazada a GTP luego de varios años de trabajo preliminar.2 26 190 1060 1200 1600 3800 £L 0 Q.70 0. Efecto de la toxina del cólera sobre las actividaclasa (derecha) con diferentes concentraciones de GTP.8 0. de 45 kD y de 52 a 53 kD. 77:6518. Proc. HeptilaminaBpfíirnRa Proteína (mg) 2020 Recuperación (%) 10 n i vi 0) (B . El ensayo para la proteína enlazada a GTP (o G/F. Se observó que la proteína inhibidora es inactivada por una toxina (llamada IAP) producida por la bac- .6 3. De los tres polipéptidos identificados en el estudio inicial. Sci. que corresponde a una purificación de 5 000 a 10 000 veces de las membranas plasmáticas. De las tres subunidades.S. 45 y 35 kD). La actividad específica se define como la cantidad de actividad reconstituida por cantidad de G/F añadida a la mezcla de reconstitución.9 Un estudio similar efectuado por otro grupo de investigadores demostró que cuando menos dos proteínas. Las recuperaciones son acumulativas a través de la preparación. Purificación del elemento regulador 1U - -—'G c "o É o o 0) *-> & n • u .A. Selinger. Cuando se incubaron células cyc~ con toxinas del cólera en presencia de 32P-NAD+.5 2. Northup y cois.10 Se emplearon estas células en particular porque se disponía de una estirpe muíante de ellas incapaz de producir AMPc en respuesta a diferentes hormonas que de otro modo habrían provocado dicha respuesta. 300 — . FUENTE: J.s ° »-~~ "* " |í c -I to 150 100 67 42 17 8. Nati. que imitan la acción de GTP} por activación de la adenililciclasa.f^ ^.6 g de proteína) y se purificaron. lo que indica que la projeína reguladora es un complejo de múltiples subunidades.0 6. el polipéptido de 52 kD estaba presente en cantidades mucho rnás pequeñas y más variables y finalmente se observó que no era un miembro de la proteína enlazada a GTP. 1980. se observó la presencia de tres polipéptidos distintos (pesos moleculares de 52. Las membranas tratadas previamente en ausencia (círculos abiertos) o presencia (círculos cerrados) de toxina se ensayaron para actividad GTPasa y adenililciclasa a las concentraciones indicadas de GTP.

D. Muchos estímulos extracelulares {primeros mensajeros) inician sus respuestas interactuando con un receptor acoplado a . y transmisión de la señal al interior de la célula. Estos investigadores concluyeron con la afirmación: "Es posible que la actividad catalítica de [adeniülciclasa] sea modulada de manera recíproca por un par de homólogos de proteínas reguladoras enlazadas a GTP. y cois.S.S. IV. J. 1978. Rev. /. H. activación de la síntesis del DNA. The glucagon-sensitive adenyl-cyclase system in plasma membranes of rat liver. Cuando las preparaciones plasmáticas de ciertas células que muestran control inhibidor sobre adeniülciclasa se tratan con la toxina IAP purificada. 244:3477-3482. 1971. Rodbelf. 246:187218764. SINOPSIS La transmisión de señales en una célula es un fenómeno mediante el cual se transmite información a través de la membrana plasmática al interior de la célula y con frecuencia al núcleo celular. transferencia de la señal a través de la membrana plasmática. M. Proc. 5'Guanylylimidodiphosphate.S. Purifícation of the regulatory component of adenylate cyclase. 71:3087-3090. 10. 258:2072-2075. U. 1978. Oían. y cois. Cyclic AMP. Genetic evidence that cholera toxin substrates are regulatory components of adenylate cyclase. 1978. Biol. puesto que el estímulo recibido en la superficie de la célula es totalmente diferente de la señal liberada en el interior de la misma. Identification of the predominan! substrate for ADP-ribosylation by islet activating protein. hormonas esteroides y óxido nítrico.S. Mechanisrn of adenylate cyclase activation by cholera toxin: Inhibition of GTP hydrolysis at the regulatory site. Proc.12 De las dos subunidades. la proteína inhibidora enlazada a GTP (mencionada en esas publicaciones como sustrato IAP) se disocia en sus dos subunidades de manera análoga a como lo hace la proteína estimuladora enlazada a GTP (mencionada como G/F}. el polipéptido de 41 kD es el sustrato aparente de la toxina. Las respuestas pueden incluir cambio en la expresión de genes. Además. Mechanism of adenylate cyclase activation íhrough the /?-adrenergic receptor: Catecholamine-induced displacement of bound GDP by GTP. Chem. y cois. Proc. /. 1983. Rodbell.L. 1980. Acta 452:538-551." BIBLIOGRAFÍA 1. G. y Bourne. o la muerte de la célula. M.. 9. una proteína reguladora enlazada al nucleótído guanina del segmento más externo de los bastones [de la retina] que interactúa con una fosfodiesterasa GMP cíclica activada por luz. Adenyl cyclase in fat cells. M. U. G. Effects of guanyl nucleotides on binding of 125l-glucagon. H.M. las subunidades más grandes de ambas proteínas (45 kD para G/F y 41 kD para IAP) contienen sitios para la ribosilación de ADP por toxinas específicas y sitios de enlace para GTP. Nati. y Meren. Ninguno de estos polipéptidos fue marcado por la toxina del cólera. y las subunidades menores de 35 kD fueron indistinguibles. /. R. sugiriendo que la toxina inactiva al inhibidor. 253:7120-7123. muestre notables semejanzas estructurales funcio- nales.A. Acad. 1971. y Sutherland. desencadenando una respuesta.CAPITULO 15 • Señales celulares: comunicación entre las células \j su ambiente 665 teria (BordeteUa pcrtussís) que causa la tos ferina. 37:149-174. C. U. Biop. Chem. R. del estímulo en la superficie externa de la membrana plasmática. U. 6. 628). la información pasa lo largo de vías para transducción de señales. G/F (Gs) y el sustrato IAP (G¡). D. Biochem. Johnson. Acad. Biol. se incrementa la actividad de adeniülciclasa. Una interesante familia de proteínas que parece estar surgiendo. Bokoch. Butcher. 2. 7. 77:6516-6520. Chem. 74:3307-3311. 11. 75:4155-4159. se encontró que la radiactividad se transfiere a una proteína compuesta de dos subunidades con pesos moleculares de 41 kD y 35 kD. 1977. Z.S. G. Cuando se incubaron membranas plasmáticas de hígado con la toxina IAP en presencia de 32P-NAD+. Biol. 1969. Ambas proteínas fueron purificadas siguiendo los mismos pasos. difunden a través de la membrana celular y actúan directamente en el interior de la célula (/'. a potent activator of adenylate cyclase systems in eukaryotic cells. 12.W. Birnbaumer. es intrigante el hecho de que la transducina. Con frecuencia este proceso se denomina transducción de señal. Sci. D. 5.A. Cassel. Cassel. ADP-ribosylation of membrane proteins catalyzed by cholera toxin: basis of the activation of adenylate cyclase.A. Biochem. y Rodbell. Nati. V. Nati Acad.A. U. reconfiguración de! citoesqueleto. Luego de incubación con un análogo GTP hidrolizable. y Selinger. Ann. E. The glucagon-sensitive adenyl cyclase system in plasma membranes of rat liver. y cois. 1974. Kasíow. 246:18771882. D. Hormone receptors. 2. y cois.W. Nati.R. 1969. por ejemplo. Sci. La información no siempre se transmite desde el espacio extracelular al interior de la célula mediante un receptor en la superficie celular. que con frecuencia incluyen varias proteincinasas y protemfosfatasas capaces de activar o inhibir sus sustratos mediante cambios de conformación. Gilí. y Selinger. 8. y Selinger.. cambio de la permeabilidad a iones. Dentro de la célula. Catecholamine-stimulated GTPase activity in turkey erythrocyte membranes. Northup. Cassei. 3. /. II. /. Otra característica prominente de las vías para emisión de señales es el uso de ¡as proteínas enlazadas a GTP que sirven como interruptores para activar o desactivar las actividades. Estudios adicionaíes indicaron que la toxina IAP puede inactivar al inhibidor dependiente de GTP por la misma reacción (ribosilación de ADP) empleada por la toxina del cólera para inactivar la proteína estimuladora enlazada a GTP.M. Z. Nati Acad. ambas respondieron de manera similar a los análogos GTP no hidrolizables y la activación por fluoruro.A. 75:3050-3054. An obligatory role of guanyl nucleotides in glucagon action. Sd. La emisión de señales celulares típicamente incluye reconocimiento.R. 1976. alteración de la actividad de enzimas metabóücas. Biol. Londos. Datos adicionales indican que el polipéptido de 41 kD contiene un sitio de enlace para GTP. L. Sci. Sci. Estos resultados apuntan a una fuerte homología entre G/F y el sustrato IAP. Proc. Biol Chem. Proc. Robison. Acad.A.

Cada subunidad Ga disociada con su GTP fijo puede activar moléculas aceptoras específicas. la cual fosforila fosforilasa cinasa y glucógeno sintasa. activando a esta última enzima. como la glucógeno sintasa. actúan por enlace a receptores que son proteínas integrales de membrana que contiene siete hélices a que atraviesan la membrana. y también muchos otros primeros mensajeros. provocar fusión de la membrana o alteraciones en el citoesqueleto. La captación y aprovechamiento de la glucosa son controlados por este tipo de vías para emisión de señales. que se disocia de las otras dos subunidades. dentro del citoplasma por acción de bombas de Ca2+ localizadas en la membrana plasmática y en el RE liso. 641). Tanto glucagon como epinefrina. presión. las cuales permanecen juntas como un complejo Gpy. El calcio no actúa sobre estos diferentes efectores en su estado iónico libre. incluyendo enzimas del metabolismo intermedio. donde se enlaza a receptores IPs localizados en la superficie del RE liso. El AMP cíclico induce su respuesta a través de una reacción en cascada en la cual se modifican una serie de enzimas por enlaces covalentes. La activación constitutiva de la proteincinasa C conduce a pérdida del control del crecimiento. incluyendo cambios en la luz. . La concentración de Ca2+ normalmente se conserva a 10~7 M. 631). Todos estos receptores actúan a través de un mecanismo similar. 634). como adenililciclasa. sino que se enlaza a algunas de las escasas proteínas enlazadas a calcio. Los receptores IPj son canales tetraméricos para el ion calcio. como el ácido abscísico (p. La señal se transmite desde el receptor al efector por medio de una proteína G enterotrimérica. se amplifica extensamente y se reduce mucho el tiempo de respuesta. Muchos estímulos diferentes. los canales de rianodina pueden abrirse por un potencial de acción que llega a la'célula. que actúan como primeros mensajeros al enlazarse a sus respectivos receptores sobre la superficie externa de células específicas. lo que conduce a desintegración del glucógeno para formar glucosa fosfato. como la rniogenina. Las moléculas de AMP cíclico se enlazan al sitio regulador de una proteincinasa dependiente de AMPc denominada PKA. 639). Las moléculas activadas de fosforilasa cinasa añaden fosfatos a la glucógeno fosforilasa. La fosfolipasa C es otro efector importante situado en la superficie interna de la membrana plasmática que puede ser activada por proteínas G enterotriméricas. que son un tipo diferente de receptor-canal de calcio localizado en la membrana del retículo endoplásmico liso. que se convierte a glucosa. El enlace de las hormonas activa un efector. receptores de IPs. gravedad y concentración de hormonas vegetales. El ion calcio es un segundo mensajero particularmente importante en células vegetales. 1. adenüilciclasa. El intercambio de nucleótidos de guanina modifica la conformación de la subunidad Ga. aproximadamente. que suprime la capaci- dad de la subunidad para activar moléculas efectoras adicionales. El curso de acontecimientos en la célula efectora depende de las proteínas específicas fosforiladas por la cinasa dependiente de AMPc (p. Entre las respuestas. o por el flujo hacia adentro de una pequeña cantidad de Ca2+ a través de la membrana plasmática. o funciones contráctiles. Como resultado de esta reacción en cascada. entregado por enlace de la hormona en la superficie celular. Como resultado. El AMP cíclico se introduce en muchas células diferentes como respuesta a una gran variedad de primeros mensajeros. o receptores de rianodina. el mensaje original.4. Según el tipo de célula. por la síntesis del segundo mensajero ribosa de difosfato de adenosina cíclica (ADPRc). a continuación la proteína G libera su GDP enlazado y se enlaza a un sustituto GTP. La más ampliamente difundida de estas proteínas es la calmoduÜna. La desintegración del glucógeno en glucosa es estimulada por las hormonas epinefrina y glucagon. Estas proteínas se conocen como enterotriméricas porque tienen tres subunidades (a. La rápida elevación del Ca2+ citoplásmico. Se han identificado más de 100 diferentes receptores acoplados a proteína G que responden a una gran variedad de estímulos diferentes. Diferentes combinaciones de subunidades específicas sirven para construir proteínas G con propiedades diferentes en sus interacciones con receptores y efectores (p. que fosforila residuos de serina y treonina sobre varias proteínas específicas. provocan elevación súbita del [Ca2+] citoplásmico. en la superficie externa de la membrana. Cada proteína G puede existir en dos estados: uno activo con una GTP enlazada o un estado activo con GDP enlazado.2-diacilglicerol (DAG). Cada una de las tres subunidades que constituyen una proteína G enterotrimérica pueden existir en diversas isoformas. La alteración de las funciones de la proteína como resultado de adición de grupos fosfato por las cinasas es revertida por fosfatasas que eliminan los fosfatos.666 CAPITULO 15 • Señales celulares: con unicaáón entre las células y su ambiente proteína G sobre la superficie externa de la célula y provocando la liberación de un segundo mensajero dentro de la misma. activando a la primera enzima e inhibiendo a la última. que contiene cuatro sitios para enlazar calcio. sea GDP o GTP. su enlace con IP^. que van desde el espermatozoide fertilizante hasta la llegada de un impulso nervioso en la célula muscular. el AMP cíclico (AMPc). que activa a la proteína G. el [Ca2+] elevado puede activar o inhibir varias enzimas y sistemas de transporte. El complejo Ga-GDP se asocia de nuevo con las subunidades G/ty para reconstituir el complejo trimérico y retornar el sistema a su estado de reposo. y factores de transcripción. el receptor enlazado al ligando se enlaza a la proteína G. La subunidad Ga disociada también es una GTPasa que actúa para hidrolizar GTP enlazado y formar GDP enlazado. lo que conduce a la producción de un segundo mensajero difusible. donde es mediador de la respuesta a varios estímulos. Otra ventaja de este tipo de reacción en cascada es la posibilidad de regulación en diferentes sitios. El IPs es una molécula pequeña hidrosoluble que puede difundir hacia el citoplasma.5-difosfato de fosfatidilinositol (PIP2) en dos segundos mensajeros diferentes. que a su vez despiertan la respuesta. desencadena una gran variedad de respuestas celulares. El DAG permanece en la membrana plasmática donde activa a la enzima proteincinasa C. que puede ocurrir después de la abertura de los canales del Ca2+ en la membrana plasmática. El enlace del ligando a su receptor específico provoca un cambio de conformación del receptor que incrementa su actividad por la proteína G.5-trisfosfato de inositol (IP3) y 1. La fosfolipasa C actúa para separar el 4. abre el canal iónico y libera Ca2+ en el citoplasma (p. sea provocado por la abertura de los canales iónicos en la membrana citoplásmica o de canales iónicos en la membrana plasmática. fi y y) y como proteína G porque se une a nucleótidos de guanina.

¿En qué se parece una vía para emisión de señales.CAPITULO 15 • Señales celulares: comunicación entre las células y su ambiente 667 Muchos estímulos extracelulares inician una respuesta celular porque se enlazan al dominio extracelular de un receptor de tirosincinasa (RTK). En tanto una vía pueda estimular la síntesis de DNA y la división de la célula. Los ligandos estimuladores del crecimiento mejor estudiados. Puesto que algunas proteínas diferentes que contienen dominios SH2 pueden enlazarse a SRI fosforilados. Los residuos de tirosina fosforilados en un SRI sirven como "atracaderos" para proteínas que poseen dominios SH2. a un sistema de transporte de electrones? ¿En qué es diferente? 4. Los SRI fosforilados entonces pueden enlazarse y activar a varios efectores por delante de la vía. todos los cuales activan Ras y la cascada cPAM. ¿Qué se entiende con el término transducdón de señal y por qué se utiliza? 3. las señales del mismo ligando pueden divergir para activar a varios efectores. FCDP e insulina. y se pueden pasar señales hacia atrás y hacia adelante entre distintas vías (interferencia). desde levaduras hasta mamíferos. La cinasa activada añade grupos fosfato a residuos de tirosína localizadas en el receptor y en sustratos selectivos (SRI). la autofosforilación del dominio citoplásmico del receptor conduce al reclutamiento de Ras en la superficie interna de la membrana y al intercambio de GDP enlazado por un GTP. En su forma activa. Ejemplos de apoptosis incluyen la muerte del exceso de células nerviosas. los pasos que ocurren durante la emisión de señales celulares desde la secreción de un factor de crecimiento u hormona por un tejido hasta la respuesta por una célula efectora. se pueden activar varias vías separadas para transmisión de señales. 648). muerte de linfocitos T capaces de reaccionar contra los propios tejidos del cuerpo y la muerte de células potencialmente cancerosas. modificando a sí misma su estado para desactivarse. que usa arginina como sustrato. Los efectores finales de la cascada cPAM son los factores de transcripción que estimulan la expresión de genes cuyos productos desempeñan un papel clave en la activación del ciclo celular que conduce al inicio de la síntesis de DNA y división de la célula. relajación de las células de músculo liso que reviste los vasos sanguíneos. reclutada en la membrana plasmática donde se convierte en una proteincinasa activa que inicia una cadena ordenada de reacciones de fosforilación. las cuales se activan al enlazarse al SRI. Diversos agentes extracelulares interactúan con los RTK sobre la superficie de células efectoras específicas y regulan diversas funciones. que inicia la actividad de tirosincinasa de la proteína localizada en la superficie interna de la membrana plasmática. Diferentes sistemas para emisión de señales a menudo se interconectan de modo que las señales de varios ligandos no relacionados puedan convergir para activar un ef ector común. La convergencia entre vías para emisión de señales se ilustra por el enlace de FCE. 2. Igual que otras proteínas G. Describir. como Ras. el curso de la diferenciación celular. Ras estimula efectores situados hacia adelante en la vía de emisión de señales. Ras oscila entre una forma inactiva enlazada a GDP y una forma activa enlazada a GTP. aunque ha sido adaptada por la evolución para despertar muchas respuestas diferentes en distintos tipos de células (p. activan la vía de transmisión de señales denominada cascada cPAM. Las vías estimuladas por AMPc y Ca2+ participan en la interferencia ejemplificada por la capacidad de los iones calcio para activar adenilciclasa y por la proteincinasa dependiente de AMPc (PKA) para fosforilar canales del ion Ca2+ (p. y otra más todavía pueda activar factores de transcripción que inicien la expresión de un grupo de genes específicos para insulina (p. la captación de partículas extrañas y la supervivencia de la célula. la apoptosis es mediada principalmente por la liberación de Ca2+ y la activación de ciertas proteincinasas. La muerte por apoptosis se caracteriza por compactación total de la célula y su núcleo y la disección ordenada de la cromatina por endonucleasas especiales. Ras tiene una actividad GTPasa intrínseca que hidroliza al GTP enlazado para formar GDP enlazado. otra quizá estimule el movimiento de los transportadores de glucosa hacia la membrana celular. como la cascada cPAM. 651). PREGUNTAS DE REPASO 1. El óxido nítrico (NO) actúa como mensajero intercelular capaz de difundir directamente a través de la membrana plasmática de la célula efectora. delineadas en la figura 15-27. y requiere la activación de un grupo específico de genes (p. que es un RTK. y la contracción peristáltica del músculo liso del intestino. La cascada cPAM también estimula la síntesis de proteínas liberando la inhibición ejercida por una proteína citoplásmica llamada PHAS-1 que se enlaza a uno de los factores clave de inicio (eFI4E). En la figura 15-2. en términos generales. Las vías para emisión de señales pueden terminar en apoptosis: muerte programada de la célula. La insulina inicia muchas de sus acciones sobre células receptoras mediante interacción con el receptor de insulina. 646). La cascada cPAM se observa en todos los eucariotes. NO actúa activando la guanilil ciclasa para producir el segundo mensajero GMPc (p. muerte de tejido embrionario no deseado. FCE y FCF. Describir los pasos de una vía en la cual sea fosforilado un factor de transcripción. . como FCDP. que incluye una pequeña proteína monomérica enlazada a GTP llamada Ras. activando así la proteína G. AI parecer. El Ras activado tiene mayor afinidad por otra proteína denominada Raf. 656). 658). el último elemento de la vía es un factor de transcripción. Cuando un ligando se enlaza a RTK. Entre las actividades estimuladas por NO se incluyen la fagocitosis por macrófagos. Igual que otras proteínas G. El NO se produce por acción de la enzima sintasa de óxido nítrico. los cuales después de enlazarse a sus respectivos RTK pueden activar varias vías además de la cascada de proteincinasa activada por mitógeno. La divergencia también se ilustra con estos mismos ligandos. incluyendo crecimiento y proliferación celular.

Describir los pasos en la vía para emisión de señales mediante la cual el óxido nítrico media la dilatación de los vasos sanguíneos. 13. Describir los pasos que conducen desde la síntesis del AMPc en la superficie interna de la membrana plasmática de una celdilla hepática hasta la liberación de glucosa en el torrente sanguíneo. como la desintegración de glucógeno. La figura 15-16 muestra los cambios localizados en Ca2+ dentro de un macrófago durante la fagocitosis. Describir la relación entre fosfatidilinositol. iones calcio y proteincinasa C. ¿De qué manera interfieren los esteres de forbol con las vías para emisión de señales en las cuales participa diacilglicerol? 12. ¿qué pasos conducen a la amplificación y cuáles no? 6. ¿De qué manera se atenúa normalmente la respuesta? 9. PREGUNTAS ANALÍTICAS 1. FCE? ¿Cómo se compararían los efectos de la toxina del cólera sobre estas mismas células? 9. como la epinefrina. Se esperaría que la íosfatidiicolina pudiera servir como precursor para un segundo mensajero que desencadena la sección de una hormona en un tipo de célula endocrina cultivada que usted estaba estudiando.668 CAPITULO 15 • Señales celulares: comunicación entre las células y su ambiente 5. ¿Qué resultados sería de esperar y cómo apoyan el papel de las uniones de abertura en la transmisión de señales entre las células? 8. ¿Qué tipos de experimentos podrían efectuarse para verificar su hipótesis? 10. ¿Qué se entiende por el término amplificación en relación con la transducción de señales? ¿De qué manera el uso de una reacción en cascada produce una amplificación de la señal? ¿Cómo incrementa las posibilidades de regulación metabólica? 8. ¿estaría de acuerdo o en desacuerdo con esta afirmación? Apoye sus conclusiones con ejemplos. ¿Qué determina si un estímulo que actúa a través de una proteína G heterotrimérica será estimulador o inhibidor para un efector? 10. Describir el papel del calcio en la mediación del diámetro de los estomas por las células guardianes. ¿Cómo se podría demostrar que los dos compuestos actúan enlazándose a! mismo receptor en la superficie de la célula? 7. diacilglicerol. como AMPc. Supongamos que la vía de emisión de señales de la figura 15-2 conduce a la activación de un gen que inhibe una cinasa dependiente de ciclina. A continuación los investigadores añadieron FSH a la mezcla del cultivo celular. Ahora que usted ha leído el capítulo. ¿Cómo es posible que el mismo primer mensajero. Supongamos que la epinefrina y la norepinefrina pueden iniciar una respuesta similar en una célula efectora particular. 2. ¿Cuál sería el efecto sobre la función hepática de una mutación en un gen que codifica AMPc fosfodiesterasa? ¿De una mutación en un gen que codifica un receptor para glucagon? ¿De una mutación en un gen que codifica fosforilasa cinasa? ¿De una mutación que altere el sitio activo de la subunidad GTPasa de una Gnl 4. ¿Cuál es el mecanismo de formación de este segundo mensajero? ¿Cuál es la relación entre la formación de IP3 y la elevación de [Ca2+] intracelular? 11. ¿En qué difiere la acción de la insulina de los otros ligandos que actúan por medio de un receptor de tirosincinasa? 14. I?3 y AMPc son segundos mensajeros muy diferentes. Describir los pasos entre el enlace y una molécula de insulina en la superficie de una célula específica y la activación del efector PI(3)K. Uno de los experimentos claves para demostrar que las uniones de abertura (pág. Describir los pasos que ocurren entre el enlace de un Hgando. ¿Cómo afectaría una mutación debilitante en la fosfatasa-2 al crecimiento de la célula? ¿Cómo afectaría una mutación similar en la proteincinasa-3 al crecimiento de la célula? 3. 215} permiten el paso de moléculas pequeñas se llevó a cabo permitiendo que las células de músculo cardiaco (que responden a la norepinefrina contrayéndose) formen uniones de abertura con células de la granulosa ovárica (que responden a la FSH al ser sometidas a varios cambios metabólicos). pueda inducir respuestas diferentes en distintas células efectoras? ¿Que el mismo segundo mensajero. En la reacción en cascada ilustrada en la figura 15-27. Mencione dos estímulos extracelulares que conduzcan a la formación de IPs. se pueda iniciar por diferentes estímulos? 6. ¿Gomo afectaría un análogo de GTP no hidrolizable a los sucesos de emisión de señales que tienen lugar durante la estimulación de una célula hepática con glucngon? ¿Cuáí sería el efecto del mismo análogo sobre la omisión de señales de una célula epitelial estimulada por el factor de crecimiento epidérmico. como glucagon. pueda también evocar respuestas diferentes en distinas células efectoras? ¿Que la misma respuesta. ¿Cuál es el papel de Ras en las vías para transducción de señales? ¿De qué manera promueve la divergencia y la convergencia en estas vías? 15. ¿Cómo altera la cascada cPAM la actividad de transcripción y de traducción en una célula? 16. como el inhibidor-1? ¿Mediante proteinfosfatasa? ¿Mediante AMPc fosfodiesterasa? 7. Hicimos notar que el terna de la emisión de señales celulares se colocó casi al fin del libro porque está íntimamente vinculado con muchos temas diferentes en biología celular. Los iones . se sospecharía que el segundo mensajero liberado por la membrana plasmática en respuesta a un estímulo fuera fosfato de colina. Ca2+. a un receptor de siete hélices y la activación de un efector. Además. ¿En qué se parecen sus mecanismos de acción? ¿En qué son diferentes? 5. ¿Cómo se puede controlar este proceso mediante inhibidores enzimáticos. corno ¡a adeniíilciclasa.

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(Una mutación dominante muestra su efecto cuando sólo uno de los alelos homólogos presenta la mutación. todos los cuales implican la función de la insulina. B. 1993. La diabetes es una enfermedad que puede ser resultado de varios efectos. y cois. Nature 359:273-274. Signaling by receptor tyrosine kinases. Sci. 60:653-688. Neer. Biochem. Stradcr. McCormick. Loa. D. 1992. Nature 372:220-221. Rev. Dohlman. Lefkowitz. C.J.F. H. Trends Biochem. Nature 365:781-783. W. Proc.. J. R. L. Nature 358:372. A turn-on and a surprise. H. An immunologist's look at the Rho and Rab GTP-binding proteins. Nature 369:611-612. 1993. Nature 372:128-129. 1992. Diabetes: Causes of insulinresistance. ¿Cómo una célula puede mantener concentraciones diferentes de este ion libre en diferentes regiones de su citoplasma? ¿Qué sospecharía usted que ocurriera si se inyecta un pequeño volumen de solución de cloruro de calcio en una célula inyectada previamente con una sonda de calcio fluorescente? 11.D. 1994. Nature 374:421-434.G. 1994. Clapham. Formular una hipótesis para explicar de qué manera el contacto de un espermatozoide fertilizante sobre 3a superficie exterior de un óvulo en un sitio determinado puede provocar una onda de liberación de Ca2+ que se propaga a través de todo el óvulo. 1994. Rae and Rho in time. 19947-The importante of being GTP. Sci.G. y Neer.R. 1993. B. K. 62:453-481. Today 14:440-444.E. Ras-mediated signaling: More than one way to skin a cat. incluyendo. 12. Bourne. . y Schaffhausen. Puesto que la calmodulina puede activar muchos efectores diferentes (p.J. 1994.R. 5:207-213. Especular acerca de un mecanismo mediante el cual la apoptosis pueda desempeñar un papel crucial para combatir el desarrollo del cáncer. The target sets the tempo. Respuestas mediadas por RTK Blumcr. Myers. BIBLIOGRAFÍA Respuestas mediadas por proteína G heterotriméFica Bourne. J. 19:289-293.E. según se muestra en la figura 15-18. The Holy Grail of Ras biology. y cois. Nature 369:361-362. 1992.CAPITULO 15 • Señales celulares: comunicación entre las células y su ambiente de calcio son agentes pequeños rápidamente difusibles. fosfodiesterasas. y Weinberg. R. F. F. Adenylyl cyclases. Life without the IRS. Rev. A puzzle: How similar signáis yield different effects.L. The subunit story thickens. C.J. una molécula de calmodulina debe tener muchos sitios de enlace sobre su superficie. Trcnds Cell Biol. Roy. Marshall. Acad. MAP kinase and the activation of qu¡oseent cells.L. Rev. Nature 358:541-543. Moving development research into the cliníc. Ruderman. D. Science 264:14131414. Regulation of Ras-mediated signaling: More tkají way to skin a cat. Biol. 1992. Turned on to ill effect. W. 1995. Describa tres diferentes anomalías moleculares en una célula hepática que podrían causar a diversos pacientes un cuadro clínico similar.E. Chavrier.

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